一種兔門靜脈血栓模型的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明模型制備，尤其涉及一種兔門靜脈血栓模型。其采用門靜脈結(jié)扎置管法建立兔門靜脈血栓模型；①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：新西蘭白兔；②實(shí)驗(yàn)過程：A、術(shù)前準(zhǔn)備：術(shù)前實(shí)驗(yàn)兔禁食過夜，自由飲水；B、麻醉；C、手術(shù)方法：麻醉后進(jìn)行施術(shù)區(qū)備皮、消毒等術(shù)前準(zhǔn)備，逐層進(jìn)腹，分離門靜脈，置管法插入2Fr的頸內(nèi)靜脈導(dǎo)管，以導(dǎo)管為內(nèi)支撐，結(jié)扎門靜脈，縫合固定，并引出體外，牢固固定。本發(fā)明模型通過結(jié)扎門靜脈，造成局部血液淤滯、血管內(nèi)皮環(huán)形壓迫損傷，同時(shí)置有導(dǎo)管刺激，啟動(dòng)內(nèi)、外源性凝血過程，提高了血栓形成率，為后期局部收集血液標(biāo)本、動(dòng)態(tài)靜脈造影、局部注藥等提供通道，經(jīng)門脈造影發(fā)現(xiàn)造模后PVT最早發(fā)生時(shí)間為30min左右，成模率為75%以上。
【專利說明】一種兔門靜脈血栓模型
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及模型制備，尤其涉及一種兔門靜脈血栓模型。
【背景技術(shù)】[0002]門靜脈血栓形成(portal vein thrombosis, PVT )是指發(fā)生于門靜脈主干、腸系膜上靜脈、腸系膜下靜脈或脾靜脈的血栓，是肝硬化門靜脈高壓癥患者針對(duì)脾臟功能亢進(jìn)及食管胃底靜脈曲張破裂出血行脾臟切除(或聯(lián)合血管斷流)術(shù)后嚴(yán)重并發(fā)癥之一 [I]。Okuda報(bào)道日本病理協(xié)會(huì)247728例患者的尸解結(jié)果，門靜脈栓塞的發(fā)生率為0.55%，肝硬化患者門靜脈栓塞率為6.59%，脾切除術(shù)后PVT發(fā)生率為37.5%~43.5%[2]。一旦PVT形成可導(dǎo)致肝臟血流灌注不足及胃腸淤血加重，若同時(shí)合并急性腸系膜靜脈血栓形成則可致腸壞死；廣泛的門脈血栓將嚴(yán)重影響后期肝移植成功率[3]。故如何防治手術(shù)后PVT是外科臨床極為關(guān)注的問題。
[0003]CN101961465A(2011-2-2)公開了一種治療門靜脈血栓的中藥，然而該中藥需要服用的時(shí)間長(zhǎng)，并且對(duì)預(yù)防門靜脈血栓的作用甚微。
[0004]靜脈血栓動(dòng)物模型是研究體內(nèi)靜脈血栓形成發(fā)病機(jī)制和評(píng)價(jià)各種治療方法療效的重要條件。Reyers等在1980年通過結(jié)扎大鼠下腔靜脈首先建立大鼠深靜脈血栓形成模型。此方法是通過結(jié)扎深靜脈，導(dǎo)致靜脈血液回流障礙，局部血流淤滯、缺氧，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，啟動(dòng)凝血過程。何曉凡采用單純下腔靜脈結(jié)扎法建立深靜脈血栓家兔模型。Knight等采用靜脈異物法建立犬、兔動(dòng)物模型。具體方法為暴露靜脈后，于其近端和遠(yuǎn)端分別上血管夾，向近心端插入自制的螺旋銅絲，縫合血管，確定血管再通后，逐層縫合。此方法暫時(shí)阻斷局部血管血流，然后插入異物(銅絲)，啟動(dòng)內(nèi)、外源性凝血過程，促發(fā)靜脈血栓形成。此外還有機(jī)械打擊損傷法、電流損傷法、血栓誘導(dǎo)劑致血栓形成法、球囊損傷法等諸多方法。文獻(xiàn)報(bào)道兔造模后靜脈血栓形成時(shí)間為22.3±2.5 min,成模率為65%。綜合文獻(xiàn)報(bào)道，制備兔靜脈血栓模型者遠(yuǎn)少于大鼠靜脈血栓模型，而兔門靜脈血栓模型的制作更加稀少，可能與其制作方法復(fù)雜、費(fèi)用高、造模術(shù)后管理困難等有關(guān)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種形成時(shí)間短、能夠有效觀察血栓形成大小的兔門靜脈血栓模型。
[0006]本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的:
兔門靜脈血栓模型，其采用門靜脈結(jié)扎置管法建立兔門靜脈血栓模型；
①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康，雌雄不限，清潔級(jí)新西蘭白兔50只，體重2-4kg；
②實(shí)驗(yàn)過程:
A、術(shù)前準(zhǔn)備:術(shù)前實(shí)驗(yàn)兔禁食過夜，自由飲水；
B、麻醉方法:氯胺酮(2ml /支，100 mg)和咪唑安定(5 ml /支，5mg)各2ml等體積混合液后，再以生理鹽水I倍稀釋，經(jīng)耳緣靜脈注射，并觀察兔反應(yīng)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)其頭部下垂時(shí)即停止注射，30 min后若發(fā)現(xiàn)兔有蘇醒躁動(dòng)征象，可在不超過安全用量(兩種藥物安全用量:氯胺酮50 mg / kg,咪唑安定5 mg / kg)情況下,追加上述藥物；
C、手術(shù)方法:麻醉后進(jìn)行施術(shù)區(qū)備皮、消毒等術(shù)前準(zhǔn)備，逐層進(jìn)腹，分離門靜脈，經(jīng)自制半套管式置管法插入2Fr的頸內(nèi)靜脈導(dǎo)管，以導(dǎo)管為內(nèi)支撐，3-0線結(jié)扎門靜脈，每間隔I分鐘結(jié)扎2分鐘，共3次，撤除結(jié)扎線，導(dǎo)管以6-0 Prolene線縫合固定，并引出體外，牢固固定。
[0007]兔門靜脈血栓模型評(píng)估藥物防治血栓作用的方法，其隨機(jī)分組后分別于血栓形成前及溶栓過程中應(yīng)用rPSLG-1g，并收集實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血栓形成時(shí)間、成栓率、血栓大小、溶栓后血管再通率及各時(shí)間點(diǎn)P-sel等觀察指標(biāo)，以此評(píng)價(jià)rPSLG-1g在預(yù)防PVT形成及溶栓過程中作用；
①門靜脈血栓數(shù)據(jù)的獲取:
A、通過實(shí)驗(yàn)兔動(dòng)態(tài)門靜脈造影獲取血栓形成時(shí)間、部位及血栓再通率:造?；蚓植咳芩ㄖ委熀蟾鲿r(shí)點(diǎn)將術(shù)后門靜脈血栓模型兔蒙眼后置于大小合適的紙板盒內(nèi)，將動(dòng)脈延長(zhǎng)管排氣后與導(dǎo)管連接，并引至盒外以備用，造影劑量為30%優(yōu)維顯5ml等量稀釋I倍后緩慢注入，以55KV、63mA及160mS為血管造影條件射片，動(dòng)態(tài)觀察門靜脈成栓時(shí)間、部位范圍及局部溶栓后血管栓塞再通情況，從而評(píng)價(jià)其藥物預(yù)防作用和溶栓療效；
B、通過實(shí)驗(yàn)兔門靜脈解剖獲取血栓大小:經(jīng)兔耳緣靜脈注射麻醉后，解剖顯露門靜脈，白熾燈光源透視照射下觀察，結(jié)合擠壓試驗(yàn)判定門靜脈系統(tǒng)血栓形成部位，完整切除門靜脈并縱向剖開血管，取出門脈血栓標(biāo)本，測(cè)量其大?。话创笮》譃?等級(jí):0級(jí)為無血栓，I級(jí)為縱徑長(zhǎng)小于等于0.5cm, 2級(jí)為縱徑長(zhǎng)0.6-1.5cm, 3級(jí)為縱徑長(zhǎng)1.6-2.0cm, 4級(jí)為縱徑長(zhǎng)大于等于2.1cm ；
C、通過實(shí)驗(yàn)兔門靜脈導(dǎo)管抽取血液檢測(cè)P-選擇素含量:按各時(shí)間點(diǎn)抽取造模后實(shí)驗(yàn)兔門靜脈血2ml，保存在裝有含檸檬酸鈉109 nmol / L的溶液0.3ml的試管中，即送實(shí)驗(yàn)室離心后，取血漿0.5ml置入-70°C冰箱，檢測(cè)方法為ELISA法，按照公司提供的試劑盒說明進(jìn)行操作。
[0008]一種穿刺置管器具，包括穿刺針、套設(shè)于穿刺針內(nèi)的軟管及與軟管套接并超出軟管尾端的支撐管，支撐管與穿刺針之間設(shè)有兩端分別與支撐管、穿刺針相抵觸的彈簧。
[0009]彈簧未被壓縮時(shí)，支撐管及軟管超出穿刺針前端；在穿刺過程中，受到人體組織的阻力，彈簧被壓縮，支撐管及軟管縮向穿刺針內(nèi)部，當(dāng)穿刺針進(jìn)入人體體腔(如胸腔、腹腔)阻力減小后，支撐管及軟管即被彈簧彈出，以此表明穿刺針針頭已達(dá)正確位置，解決了【背景技術(shù)】中的不足；軟管與支撐管貼合，且兩者之間應(yīng)略有張力，軟管與穿刺針內(nèi)壁之間留有間隙，以方便支撐管及軟管的伸縮動(dòng)作。
[0010]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述支撐管與軟管尾端交接處設(shè)有凸緣；所述穿刺針包括針頭及手柄，針頭尾部設(shè)有針帽，手柄與針帽為可拆卸連接；手柄靠近支撐管一端為限位緣，所述彈簧設(shè)于凸緣與限位緣之間。
[0011]手柄與針帽之間為可拆卸連接的優(yōu)選方式為手柄與針帽之間采用螺紋連接。
[0012]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述穿刺針還包括與手柄固定連接的伸縮袋；所述支撐管尾端穿出手柄位于伸縮袋中。
[0013]伸縮袋也可為具有 伸縮功能的管狀物體。[0014]作為優(yōu)選，伸縮袋與手柄一體連接；當(dāng)穿刺針到達(dá)正確位置后，捏壓伸縮袋尾部直至捏住支撐管，后慢慢退出穿刺針直至退出人體外；為方便退出穿刺針，支撐管超出手柄的長(zhǎng)度都應(yīng)大于針頭進(jìn)入人體的長(zhǎng)度。
[0015]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述伸縮袋、手柄及針頭三者之間密封相通連接；所述伸縮袋透明。
[0016]伸縮袋透明，使操作者能清楚的看到支撐管的伸縮動(dòng)作，以確定穿刺針是否已達(dá)正確的位置。
[0017]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述軟管頭部設(shè)有一個(gè)或多個(gè)細(xì)孔。
[0018]研究發(fā)現(xiàn)PSGL-1是P-sel高親和力配體，其主要表達(dá)于中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞。P-sel通過與PSGL-1結(jié)合，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞β 2-整合素活化，活化后的β 2-整合素可與細(xì)胞間黏附分子-1結(jié)合，促進(jìn)中性粒細(xì)胞酪氨酸磷酸化，誘導(dǎo)單核細(xì)胞釋放單核細(xì)胞趨化蛋白-1及腫瘤壞死因子_α及淋巴細(xì)胞上遲現(xiàn)抗原-4及⑶Ilb的表達(dá)，最終導(dǎo)致血栓形成。而 PSGL-1 免疫球蛋白重組體(recombinant PSGL-1 immunoglobulin, rPSLG-1g)作為PSGL-1抗體，能通過競(jìng)爭(zhēng)P-sel的天然配體的PSGL-1，以達(dá)到拮抗P_sel作用，從而抑制損傷動(dòng)脈表面循環(huán)中血小板的活化，并能抑制活化血小板與中性粒細(xì)胞結(jié)合。通過阻斷P-sel與其配體的相互作用對(duì)相關(guān)疾病的治療具有重要意義。
[0019]體內(nèi)血栓形成的凝血反應(yīng)均起始于血小板活化，而血小板活化標(biāo)志物是P選擇素(P-selectin, P_sel)，其存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞的WeibelPalade小體膜上及血小板A顆粒膜上，可通過介導(dǎo)血小板、內(nèi)皮細(xì)胞黏附及與白細(xì)胞的相互作用，參與啟動(dòng)血栓形成的病理生理起始過程，是血栓形成的重要介質(zhì)和靶分子。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)采用P-sel或P-選擇素糖蛋白配體-1 (PSGL-1)基因剔除技術(shù)后纖維蛋白形成和血栓塊可明顯減少。
[0020]此方法通過結(jié)扎門靜脈，造成局部血液淤滯、血管內(nèi)皮環(huán)形壓迫損傷，同時(shí)置有導(dǎo)管刺激，啟動(dòng)內(nèi)、外源性凝血過程，提高了血栓形成率，為后期局部收集血液標(biāo)本、動(dòng)態(tài)靜脈造影、局部注藥等提供通道。我們?cè)谠心Ｐ突A(chǔ)上做了進(jìn)一步改進(jìn)，并經(jīng)門脈造影發(fā)現(xiàn)造模后PVT最早發(fā)生時(shí)間為30 min左右，成模率為75%以上。
[0021]
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1是rPSLG-1g在預(yù)防PVT形成中作用研究路線圖；
圖2是rPSLG-1g在PVT溶栓過程中作用研究路線圖；
圖3是實(shí)施例1結(jié)構(gòu)剖示圖；
圖4是圖1中A部放大圖；
圖5是實(shí)施例1中記憶性彎曲軟管的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖6是實(shí)施例2中軟管示意圖。
[0023]圖中，1、穿刺針，2、軟管，3、支撐管，4、彈簧，31、凸緣，11、針頭，111、針帽，12、手柄，121、限位緣，13、伸縮袋，21、細(xì)孔，32、通孔，22、接口，23、槽孔，33、密封塞。
【具體實(shí)施方式】
[0024]以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。[0025]本實(shí)驗(yàn)旨在通過門靜脈置管結(jié)扎法建立穩(wěn)定的門靜脈血栓動(dòng)物模型，通過隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)方法，研究全身使用rPSLG-1g在PVT形成中預(yù)防作用，并采用局部給藥觀察其在PVT溶栓過程中作用及療效，為rPSLG-1g防治PVT提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[0026]1、工作基礎(chǔ)條件
(O人員組合及配備:本實(shí)驗(yàn)組人員配備及分工合理，共組建以下四小組:手術(shù)組、檢驗(yàn)組、數(shù)據(jù)收集統(tǒng)計(jì)組及影像組。
[0027](2)科研項(xiàng)目工作條件:本院是地區(qū)專病中心，肝膽胰外科是省重點(diǎn)扶植學(xué)科。資金配套方面，醫(yī)院以1:1配套。院中心實(shí)驗(yàn)室是本地區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，曾承擔(dān)過多項(xiàng)省、部級(jí)及國家級(jí)科研項(xiàng)目，有著豐富的科研基礎(chǔ)，已取得多項(xiàng)科研成果?，F(xiàn)已具備本實(shí)驗(yàn)的所需的儀器設(shè)備、器械及動(dòng)物試驗(yàn)條件，SAS9.1及SPSS17統(tǒng)計(jì)軟件已就緒，可保證實(shí)驗(yàn)的順利完成。
[0028](3)既往門靜脈血栓相關(guān)的研究:本實(shí)驗(yàn)組既往承擔(dān)過與本實(shí)驗(yàn)相關(guān)的市科技局科研項(xiàng)目:監(jiān)測(cè)P-sel、TpP、D-D對(duì)門脈高壓脾切后PVT早期預(yù)測(cè)研究(2010YSB08)，研究通過連續(xù)觀察手術(shù)前及術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)P-sel的變化，建立依時(shí)協(xié)變量COX風(fēng)險(xiǎn)模型，提示P-sel可作為門脈高壓癥脾切術(shù)后門脈血栓早期預(yù)測(cè)敏感指標(biāo)，可指導(dǎo)早期藥物預(yù)防。對(duì)于P-sel在脾切除術(shù)后PVT形成過程中表達(dá)規(guī)律及相關(guān)機(jī)理有了深入的研究，為進(jìn)一步藥物防治研究奠定了基礎(chǔ)。
[0029](4)實(shí)驗(yàn)前期預(yù)實(shí)驗(yàn):門靜脈結(jié)扎置管法建立兔門靜脈血栓模型的研制:我們已熟練掌握兔門靜脈血栓模型的成模方法。按標(biāo)書要求購得8只新西蘭兔(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SCXK (浙)2009-0039)，成功造模6只，成模率為75%，造模后經(jīng)門脈造影發(fā)現(xiàn)門靜脈血栓最早時(shí)間為30min左右，解剖兔門靜脈可正確評(píng)估血栓大小及范圍，有利于評(píng)估藥物的作用。
[0030]2、研究方法
(I)采用門靜脈結(jié)扎置管法建立兔門靜脈血栓模型。
[0031]①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康，雌雄不限，清潔級(jí)新西蘭白兔50只，體重2_4kg。
[0032]②實(shí)驗(yàn)過程:
A、術(shù)前準(zhǔn)備:術(shù)前實(shí)驗(yàn)兔禁食過夜，自由飲水。
[0033]B、麻醉方法:氯胺酮(2 ml /支，100 mg)和咪唑安定(5 ml /支，5mg)各2ml等體積混合液后，再以生理鹽水I倍稀釋，經(jīng)耳緣靜脈注射，并觀察兔反應(yīng)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)其頭部下垂時(shí)即停止注射，30 min后若發(fā)現(xiàn)兔有蘇醒躁動(dòng)征象，可在不超過安全用量(兩種藥物安全用量:氯胺酮50 mg / kg,咪唑安定5 mg / kg)情況下,追加上述藥物。
[0034]C、手術(shù)方法:麻醉后進(jìn)行施術(shù)區(qū)備皮、消毒等術(shù)前準(zhǔn)備，逐層進(jìn)腹，分離門靜脈，經(jīng)自制半套管式置管法插入2Fr的頸內(nèi)靜脈導(dǎo)管，以導(dǎo)管為內(nèi)支撐，3-0線結(jié)扎門靜脈，每間隔I分鐘結(jié)扎2分鐘，共3次，撤除結(jié)扎線，導(dǎo)管以6-0 Prolene線縫合固定，并引出體外，牢固固定。
[0035](2)研究數(shù)據(jù)收集:
隨機(jī)分組后分別于血栓形成前及溶栓過程中應(yīng)用rPSLG-1g，并收集實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血栓形成時(shí)間、成栓率、血栓大小、溶栓后血管再通率及各時(shí)間點(diǎn)P-sel等觀察指標(biāo)，以此評(píng)價(jià)rPSLG-1g在預(yù)防PVT形成及溶栓過程中作用。[0036]②門靜脈血栓數(shù)據(jù)的獲取:
A、通過實(shí)驗(yàn)兔動(dòng)態(tài)門靜脈造影獲取血栓形成時(shí)間、部位及血栓再通率:造?；蚓植咳芩ㄖ委熀蟾鲿r(shí)點(diǎn)將術(shù)后門靜脈血栓模型兔蒙眼后置于大小合適的紙板盒內(nèi)，將動(dòng)脈延長(zhǎng)管排氣后與導(dǎo)管連接，并引至盒外以備用，造影劑量為30%優(yōu)維顯5ml等量稀釋I倍后緩慢注入，以55KV、63mA及160mS為血管造影條件射片，動(dòng)態(tài)觀察門靜脈成栓時(shí)間、部位范圍及局部溶栓后血管栓塞再通情況，從而評(píng)價(jià)其藥物預(yù)防作用和溶栓療效。
[0037]B、通過實(shí)驗(yàn)兔門靜脈解剖獲取血栓大小:經(jīng)兔耳緣靜脈注射麻醉后，解剖顯露門靜脈，白熾燈光源透視照射下觀察，結(jié)合擠壓試驗(yàn)判定門靜脈系統(tǒng)血栓形成部位，完整切除門靜脈并縱向剖開血管，取出門脈血栓標(biāo)本，測(cè)量其大小。按大小分為4等級(jí):0級(jí)為無血栓，I級(jí)為縱徑長(zhǎng)小于等于0.5cm, 2級(jí)為縱徑長(zhǎng)0.6-1.5cm, 3級(jí)為縱徑長(zhǎng)1.6-2.0cm, 4級(jí)為縱徑長(zhǎng)大于等于2.1cm0
[0038]C、通過實(shí)驗(yàn)兔門靜脈導(dǎo)管抽取血液檢測(cè)P-選擇素含量:按各時(shí)間點(diǎn)抽取造模后實(shí)驗(yàn)兔門靜脈血2ml，保存在裝有含檸檬酸鈉109 nmol / L的溶液0.3ml的試管中，即送實(shí)驗(yàn)室離心后，取血漿0.5ml置人-70°C冰箱，檢測(cè)方法為ELISA法，按照公司提供的試劑盒說明進(jìn)行操作。
[0039](3)技術(shù)路線圖
①rPSLG-1g在預(yù)防PVT形成中作用研究(實(shí)驗(yàn)一)
具體實(shí)驗(yàn)路線見圖1。
[0040]③rPSLG-1g在PVT溶栓過程中作用研究(實(shí)驗(yàn)二)
具體實(shí)驗(yàn)路線見圖2。
[0041](4)統(tǒng)計(jì)分析，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論。
[0042]采用SAS9.1及SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，分別對(duì)全身預(yù)防性用藥(實(shí)驗(yàn)一)與局部溶栓性用藥(實(shí)驗(yàn)二)建立如下的統(tǒng)計(jì)模型，進(jìn)行相關(guān)的統(tǒng)計(jì)分析:
①針對(duì)實(shí)驗(yàn)一中PVT形成時(shí)間和實(shí)驗(yàn)二中溶栓時(shí)間的觀測(cè)值，建立上述兩種情形下實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組時(shí)間曲線的Kaplan-Meier估計(jì)，并利用1grank檢驗(yàn)比較其分布曲線的差
異；
②針對(duì)實(shí)驗(yàn)一和實(shí)驗(yàn)二，分別建立實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組樣本的P- s el隨時(shí)間變化的均值-方差模型與非參數(shù)模型，體現(xiàn)不同情形下P-sel分布及變化的規(guī)律與特征；
③在②的基礎(chǔ)上，分別以血栓形成率和血管再通率為響應(yīng)變量，以P-sel、實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組為協(xié)變量，建立兩個(gè)實(shí)驗(yàn)不同時(shí)間的logistic模型，定量描述rPSLG-1g使用對(duì)預(yù)防PVT形成和促使溶栓的整體效果；
④對(duì)實(shí)驗(yàn)一，在③的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步建立有序多分類的logistic模型，研究rPSLG-1g使用對(duì)形成血栓大小等級(jí)的影響；對(duì)實(shí)驗(yàn)二，可以分別通過溶栓時(shí)間曲線和優(yōu)勢(shì)比(OddsRatio)來比較單獨(dú)使用rPSLG-1g、尿激酶在PVT溶栓中的影響。
[0043]實(shí)施例一
一種穿刺置管器具，如圖3至5所示，包括穿刺針1，穿刺針1內(nèi)套設(shè)有軟管2，穿刺針1與軟管2之間略有間隙，軟管2套接有支撐管3，軟管2頭端與支撐管3頭端相貼，支撐管3尾端超出軟管2尾端。
[0044]支撐管3與軟管2尾端交接處設(shè)有凸緣31 ;穿刺針I(yè)包括針頭11，針頭11尾部設(shè)有針帽111，針帽111螺紋連接有手柄12,手柄12靠近支撐管3 —端為限位緣121,凸緣31與限位緣121之間設(shè)有彈簧4，在彈出支撐管3時(shí)，應(yīng)只能夠?qū)⒅喂?及軟管2的頭端略超出針頭11的針尖；限位緣121上設(shè)有三個(gè)卡扣，卡扣固定連接彈簧4，卡扣在圖中未示出。
[0045]手柄12 —體連接有伸縮袋13 ;支撐管3尾端穿過彈簧4且穿出手柄12伸入伸縮袋13中，針頭11到達(dá)正確位置后，針頭11進(jìn)入人體的長(zhǎng)度應(yīng)短于支撐管3超出手柄12的長(zhǎng)度。
[0046]伸縮袋13、手柄12及針頭11三者之間密封相通連接。
[0047]伸縮袋13透明，操作者可從伸縮袋13外清楚地看見支撐管3的伸縮動(dòng)作以確定針頭11是否已達(dá)正確的位置。
[0048]軟管2尾部為一接口 22,接口 22為與軟管2軟質(zhì)部分一體的硬管,硬管外壁設(shè)有螺紋，通過接口 22可將軟管22與其它醫(yī)療工具連接。
[0049]軟管2為記憶性彎曲軟管，記憶性彎曲軟管可定義為由一定柔韌性材料制成的呈向內(nèi)卷曲狀的彎曲管，當(dāng)該管子套在支撐管3外時(shí)彎曲的管子被支撐管3管體支撐成直管，但當(dāng)支撐管3脫離該管子后，該管子自動(dòng)恢復(fù)成原來的向內(nèi)卷曲狀，即為所述的記憶性彎曲軟管。
[0050]軟管2頭部設(shè)有多個(gè)細(xì)孔21。
[0051]支撐管3頭部設(shè)有多個(gè)通孔32，支撐管3頭端與軟管2頭端相貼時(shí)，軟管2上的部分細(xì)孔21與通孔32相通，通孔3`2的孔徑大于細(xì)孔21的孔徑。
[0052]支撐管3尾端設(shè)有密封塞33密封，當(dāng)針頭11到達(dá)正確位置時(shí)，一些積液會(huì)經(jīng)過細(xì)孔21及通孔32進(jìn)入支撐管3內(nèi)，支撐管3透明設(shè)置，由于伸縮袋13也透明，操作者可在伸縮袋13外看到上述情況。
[0053]在穿刺過程中，操作者若看到支撐管3向人體內(nèi)彈出，則表明針頭11已達(dá)正確位置；若不慎沒看見支撐管3的伸縮動(dòng)作，但看見支撐管3內(nèi)流入了積液，則也表明針頭11已達(dá)正確位置；此時(shí)停止穿刺，一手捏壓伸縮袋13直至捏住支撐管3，另一手捏住手柄12，將針頭11退出人體外，后捏住軟管2向外慢慢退支撐管3，當(dāng)支撐管3頭端退出人體外但仍位于軟管2內(nèi)時(shí)，用夾子夾住軟管2位于支撐管3頭端與人體之間的一段，再慢慢退出支撐管3直至脫離軟管2，此時(shí)再將其它醫(yī)療工具與接口 22連接，以抽出患者體內(nèi)積液(氣)或注入藥物治療。
[0054]實(shí)施例2:與實(shí)施例1的不同之處在于，如圖6所示，所述軟管2為一直管，直管頭部側(cè)面開有多個(gè)槽孔23。
[0055]本具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的解釋，其并不是對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀完本說明書后可以根據(jù)需要對(duì)本實(shí)施例做出沒有創(chuàng)造性貢獻(xiàn)的修改，但只要在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)都受到專利法的保護(hù)。
【權(quán)利要求】
1.一種兔門靜脈血栓模型，其特征在于:采用門靜脈結(jié)扎置管法建立兔門靜脈血栓模型； ①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康，雌雄不限，清潔級(jí)新西蘭白兔50只，體重2-4kg； ②實(shí)驗(yàn)過程: A、術(shù)前準(zhǔn)備:術(shù)前實(shí)驗(yàn)兔禁食過夜，自由飲水； B、麻醉方法:氯胺酮(2ml /支，100 mg)和咪唑安定(5 ml /支，5mg)各2ml等體積混合液后，再以生理鹽水I倍稀釋，經(jīng)耳緣靜脈注射，并觀察兔反應(yīng)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)其頭部下垂時(shí)即停止注射，30 min后若發(fā)現(xiàn)兔有蘇醒躁動(dòng)征象，可在不超過安全用量(兩種藥物安全用量:氯胺酮50 mg / kg,咪唑安定5 mg / kg)情況下,追加上述藥物； C、手術(shù)方法:麻醉后進(jìn)行施術(shù)區(qū)備皮、消毒等術(shù)前準(zhǔn)備，逐層進(jìn)腹，分離門靜脈，經(jīng)自制半套管式置管法插入2Fr的頸內(nèi)靜脈導(dǎo)管，以導(dǎo)管為內(nèi)支撐，3-0線結(jié)扎門靜脈，每間隔I分鐘結(jié)扎2分鐘，共3次，撤除結(jié)扎線，導(dǎo)管以6-0 Prolene線縫合固定，并引出體外，牢固固定。
2.一種利用權(quán)利要求1所述兔門靜脈血栓模型評(píng)估藥物防治血栓作用的方法，其特征在于:隨機(jī)分組后分別于血栓形成前及溶栓過程中應(yīng)用rPSLG-1g，并收集實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血栓形成時(shí)間、成栓率、血栓大小、溶栓后血管再通率及各時(shí)間點(diǎn)P-sel等觀察指標(biāo)，以此評(píng)價(jià)rPSLG-1g在預(yù)防PVT形成及溶栓過程中作用； 門靜脈血栓數(shù)據(jù)的獲取: A、通過實(shí)驗(yàn)兔動(dòng)態(tài)門靜脈造影獲取血栓形成時(shí)間、部位及血栓再通率:造?；蚓植咳芩ㄖ委熀蟾鲿r(shí)點(diǎn)將術(shù)后門靜脈血栓模型兔蒙眼后置于大小合適的紙板盒內(nèi)，將動(dòng)脈延長(zhǎng)管排氣后與導(dǎo)管連接，并引至盒外以備用，造影劑量為30%優(yōu)維顯5ml等量稀釋I倍后緩慢注入，以55KV、63mA及160mS為血管造影條件射片，動(dòng)態(tài)觀察門靜脈成栓時(shí)間、部位范圍及局部溶栓后血管栓塞再通情況，從而評(píng)價(jià)其藥物預(yù)防作用和溶栓療效； B、通過實(shí)驗(yàn)兔門靜脈解剖獲取血栓大小:經(jīng)兔耳緣靜脈注射麻醉后，解剖顯露門靜脈，白熾燈光源透視照射下觀察，結(jié)合擠壓試驗(yàn)判定門靜脈系統(tǒng)血栓形成部位，完整切除門靜脈并縱向剖開血管，取出門脈血栓標(biāo)本，測(cè)量其大?。话创笮》譃?等級(jí):0級(jí)為無血栓，I級(jí)為縱徑長(zhǎng)小于等于0.5cm, 2級(jí)為縱徑長(zhǎng)0.6-1.5cm, 3級(jí)為縱徑長(zhǎng)1.6-2.0cm, 4級(jí)為縱徑長(zhǎng)大于等于2.1cm ； C、通過實(shí)驗(yàn)兔門靜脈導(dǎo)管抽取血液檢測(cè)P-選擇素含量:按各時(shí)間點(diǎn)抽取造模后實(shí)驗(yàn)兔門靜脈血2ml，保存在裝有含檸檬酸鈉109 nmol / L的溶液0.3ml的試管中，即送實(shí)驗(yàn)室離心后，取血漿0.5ml置入-70°C冰箱，檢測(cè)方法為ELISA法，按照公司提供的試劑盒說明進(jìn)行操作。
3.一種用于制備權(quán)利要求1所述兔門靜脈血栓模型的一種穿刺置管器具，其特征在于，包括穿刺針(I)、套設(shè)于穿刺針(I)內(nèi)的軟管(2)及與軟管(2)套接并超出軟管(2)尾端的支撐管(3)，支撐管(3)與穿刺針(I)之間設(shè)有兩端分別與支撐管(3)、穿刺針(I)相抵觸的彈黃(4)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種穿刺置管器具，其特征在于，所述支撐管(3)與軟管(2)尾端交接處設(shè)有凸緣(31);所述穿刺針(I)包括針頭(11)及手柄(12)，針頭(11)尾部設(shè)有針帽(111),手柄(12 )與針帽(111)為可拆卸連接；手柄(12 )靠近支撐管(3 ) 一端為限位緣. (121)，所述彈簧(4)設(shè)于凸緣(31)與限位緣(121)之間。
【文檔編號(hào)】A61K49/00GK103637854SQ201310707588
【公開日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】魏云海, 張國雷, 戴利成, 慎華平, 吳萬波, 徐杰偉 申請(qǐng)人:魏云海