用于治療聽(tīng)力和平衡障礙的組合療法
【專利摘要】本申請(qǐng)涉及抑制劑的組合，所述抑制劑涉及使與聽(tīng)力損失相關(guān)的基因包括HES1、HES5、HEY2、CDKN1B和NOTCH1下調(diào)，表現(xiàn)出有益效果，并可用于治療或減輕聽(tīng)力損失、治療平衡障礙、促進(jìn)內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞的替換、再生或保護(hù)和或?qū)崿F(xiàn)聽(tīng)力恢復(fù)/再生。
【專利說(shuō)明】用于治療聽(tīng)力和平衡障礙的組合療法
[0001]相關(guān)申請(qǐng)
[0002]本申請(qǐng)要求2012年I月12日提交的名稱為“Compounds, Composit1ns andMethods For Treating Hearing Loss” 的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?61/585，672 以及 2012 年 8 月
3日提交的名稱為 “Double-Stranded Oligonucleotide Compounds and Methods of UseThereof for Treating Hearing and Balance Disorders”的 PCT 申請(qǐng)?zhí)?PCT/US12/49616的權(quán)益，這些專利申請(qǐng)整體且出于所有目的以引用方式并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申請(qǐng)以引用方式包括核苷酸和/或氨基酸序列，這些序列存在于大小為
5.044MB并在2013年I月9日以IBM-PC機(jī)格式(操作系統(tǒng)與MS-Windows兼容)創(chuàng)建的且與此一同提交的名稱為“237-PCT2.ST25.txt”的文件中。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0005]本公開(kāi)涉及可用于治療聽(tīng)力損失，治療平衡障礙，促進(jìn)內(nèi)耳耳毛(感覺(jué))細(xì)胞的替換、再生或保護(hù)，或?qū)崿F(xiàn)聽(tīng)力恢復(fù)/再生的組合療法，包括組合物和方法。
[0006]發(fā)明背景
[0007]授予本申請(qǐng)的受讓人的PCT申請(qǐng)?zhí)朠CT/US12/49616涉及雙鏈RNA化合物、包含所述化合物的藥物組合物及其在下調(diào)與聽(tīng)力損失和平衡障礙相關(guān)的靶基因(包括HES1、HES5、HEY1、HEY2、ID1、ID2、ID3、CDKN1B和N0TCH1)方面的使用方法，所述基因的抑制可用于治療聽(tīng)力損失，治療平衡障礙，促進(jìn)內(nèi)耳耳毛(感覺(jué))細(xì)胞的替換、再生或保護(hù)，或?qū)崿F(xiàn)聽(tīng)力恢復(fù)/再生。
發(fā)明概要
[0008]現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，涉及使與聽(tīng)力和平衡障礙相關(guān)的某些靶基因下調(diào)的抑制劑的某些三聯(lián)組合有益于治療或減輕聽(tīng)力損失、治療平衡障礙、促進(jìn)內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞的替換、再生或保護(hù)和/或?qū)崿F(xiàn)聽(tīng)力恢復(fù)/再生。具體地講，該組合包含靶向HESl的第一藥劑、靶向HES5的第二藥劑和靶向HEY2的第三藥劑，或包含靶向⑶KNlB的第一藥劑、靶向N0TCH1的第二藥劑和靶向HEY2的第三藥劑。
[0009]在一個(gè)方面，本文提供一種用于療法的HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑的組合。在一些實(shí)施方案中，該療法包括預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。在另一方面，本文提供一種組合物，其包含HESl抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥、HES5抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥和HEY2抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥的組合；以及藥學(xué)上可接受的載體。在又一方面，本文提供一種預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的方法，包括向受試者施用HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑。在另一方面，本文提供一種產(chǎn)品、試劑盒或商業(yè)包裝，其包含如上文所公開(kāi)的HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑或其組合物。
[0010]在又一方面，本文提供一種用于療法的⑶KNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑的組合。在一些實(shí)施方案中，該療法包括預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。在另一方面，本文提供一種組合物，其包含至少一種⑶KNlB抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥、至少一種NOTCHl抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥和至少一種HEY2抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥；以及藥學(xué)上可接受的載體。在又一方面，本文提供一種預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的方法，包括向受試者施用CDKNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑。在另一方面，本文提供一種產(chǎn)品、試劑盒或商業(yè)包裝，其包含如上文所公開(kāi)的⑶KNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑或其組合物。
[0011]在本文所提供的組合和方法的多個(gè)方面和實(shí)施方案中，將治療有效量的每種抑制劑基本上同時(shí)地、單獨(dú)地或按順序且以任何順序施用，并將這些組分單獨(dú)地或作為固定的組合(例如，在單個(gè)劑型中)施用。在本文所提供的組合和方法的一些實(shí)施方案中，將每種抑制劑基本上同時(shí)地或按順序且以任何順序施用。在本文所提供的組合和方法的其他實(shí)施方案中，將治療有效量的兩種抑制劑同時(shí)地或基本上同時(shí)地施用，并將第三種抑制劑單獨(dú)地施用。
[0012]在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供一種HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑的組合，供基本上同時(shí)地或按順序用于預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。
[0013]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供一種CDKNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑的組合，供基本上同時(shí)地或按順序用于預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。
[0014]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供用于治療(包括預(yù)防)受試者聽(tīng)力損失的發(fā)生或嚴(yán)重性的方法，在受試者中HES1、HES5和HEY2基因的表達(dá)與聽(tīng)力障礙/聽(tīng)力損失的病因?qū)W或進(jìn)展相關(guān)。
[0015]在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供用于治療(包括預(yù)防)受試者聽(tīng)力障礙的發(fā)生或嚴(yán)重性的方法，在受試者中HES1、HES5和HEY2基因的表達(dá)與聽(tīng)力障礙的病因?qū)W或進(jìn)展相關(guān)。
[0016]在又一個(gè)實(shí)施方案中，提供用于治療(包括預(yù)防)受試者內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的發(fā)生或嚴(yán)重性的方法，在受試者中HES1、HES5和HEY2基因的表達(dá)與耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的病因?qū)W或進(jìn)展相關(guān)。
[0017]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供用于治療(包括預(yù)防)受試者聽(tīng)力損失的發(fā)生或嚴(yán)重性的方法，在受試者中，CDKN1B、NOTCHl和HEY2基因的表達(dá)與聽(tīng)力障礙/聽(tīng)力損失的病因?qū)W或進(jìn)展相關(guān)。
[0018]在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供用于治療(包括預(yù)防)受試者聽(tīng)力障礙的發(fā)生或嚴(yán)重性的方法，在受試者中，CDKN1B、NOTCHl和HEY2基因的表達(dá)與聽(tīng)力障礙的病因?qū)W或進(jìn)展相關(guān)。
[0019]在又一個(gè)實(shí)施方案中，提供用于治療(包括預(yù)防)受試者內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的發(fā)生或嚴(yán)重性的方法，在受試者中，⑶KN1B、NOTCHl和HEY2基因的表達(dá)與耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的病因?qū)W或進(jìn)展相關(guān)。
[0020]在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供一種預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的方法，包括向受試者施用HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑。
[0021]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供一種預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的方法，包括向受試者施用CDKNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑。
[0022]在一些實(shí)施方案中，受試者為哺乳動(dòng)物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，受試者為人類受試者。
[0023]還提供預(yù)防受試者聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)退化的方法，包括向受試者施用本文所公開(kāi)的組合。
[0024]此類方法涉及向?qū)Υ酥委熡行枰牟溉閯?dòng)物施用包含預(yù)防或治療有效量的HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑的組合或組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，此類方法涉及向?qū)Υ酥委熡行枰牟溉閯?dòng)物施用包含預(yù)防或治療有效量的CDKNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑的組合或組合物。
[0025]在多種實(shí)施方案中，每種抑制劑(HES1抑制劑、HES5抑制劑、HEY2抑制劑、CDKNlB抑制劑和NOTCHl抑制劑)獨(dú)立地選自由小有機(jī)分子、蛋白、抗體或其片段、肽、擬肽和核酸分子組成的組。
[0026]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，每種抑制劑包括治療性核酸分子或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施方案中，將核酸化合物直接施加到耳蝸的圓窗膜，或通過(guò)經(jīng)鼓室注射或經(jīng)由經(jīng)鼓室裝置(諸如插管或植入物)施用。方法包括持續(xù)遞送和控制遞送以局部或全身性遞送，包括使用例如泵、緩釋或持續(xù)釋放組合物或包含藥物儲(chǔ)庫(kù)的植入物遞送抑制劑。
[0027]在本文所提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的優(yōu)選實(shí)施方案中，每種抑制劑包括單獨(dú)的核酸分子或其藥學(xué)上可接受的鹽。在本文所提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的一些實(shí)施方案中，核酸分子彼此連接。在本文所提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的一些實(shí)施方案中，核酸分子在多臂形成(RNAistar)中退火并共價(jià)連接。
[0028]在本文所提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的優(yōu)選實(shí)施方案中，每種抑制劑包括核酸化合物。優(yōu)選地，將核酸化合物直接施加到耳蝸的圓窗膜，或通過(guò)經(jīng)鼓室注射或經(jīng)由經(jīng)鼓室裝置(諸如插管)施用。
[0029]因此，本文所提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒優(yōu)選地涉及使用結(jié)合核苷酸序列(諸如mRNA序列)或其部分的核酸分子(例如短干擾核酸(SiNA)、短干擾RNA (siRNA)、雙鏈RNA (dsRNA)、微RNA (miRNA)或短發(fā)夾RNA (shRNA))，所述核苷酸序列或其部分編碼 HES1、HES5、HEY2、CDKN1B 或 N0TCH1，例如分別為人類 HES1、HES5、HEY2、CDKN1B 或NOTCHlmRNA 的mRNA編碼序列(SEQ ID NO: 1、2、10、7和 11)，它們分別編碼如 SEQ ID NO: 12、
13、21、18和22所示例的一種或多種蛋白或蛋白亞基。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文所公開(kāi)的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒下調(diào)或抑制HES1、HES5和HEY2，或⑶KN1B、NOTCHl和HEY2基因的表達(dá)。在多種實(shí)施方案中，每個(gè)核酸分子選自下調(diào)HES1、HES5、HEY2、CDKNlB或NOTCHl表達(dá)的未修飾的或化學(xué)修飾的dsRNA化合物，諸如化學(xué)修飾的siRNA或ShRNA0
[0030] 在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，HESl抑制劑是下調(diào)HESl表達(dá)的合成的、化學(xué)修飾的雙鏈RNA (dsRNA)化合物。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，“HES1”是指人類HESl基因。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，HES5抑制劑是下調(diào)HES5表達(dá)的合成的、化學(xué)修飾的雙鏈RNA(dsRNA)化合物。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，“HES5”是指人類HES5基因。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，HEY2抑制劑是下調(diào)HEY2表達(dá)的合成的、化學(xué)修飾的雙鏈RNA(dsRNA)化合物。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，“HEY2”是指人類HEY2基因。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，⑶KNlB抑制劑是下調(diào)⑶KNlB表達(dá)的合成的、化學(xué)修飾的雙鏈RNA(dsRNA)化合物。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，“⑶KN1B”是指人類⑶KNlB基因。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，NOTCHl抑制劑是下調(diào)NOTCHl表達(dá)的合成的、化學(xué)修飾的雙鏈RNA(dsRNA)化合物。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，“N0TCH1”是指人類NOTCHl基因。
[0031]在本文提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，第一核酸分子是結(jié)合編碼HESl基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸，第二核酸分子是結(jié)合編碼HES5基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸，并且第三核酸是結(jié)合編碼HEY2基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸。
[0032]在本文提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，第一核酸分子是結(jié)合編碼CDKNlB基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸，第二核酸分子是結(jié)合編碼NOTCHl基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸，并且第三核酸是結(jié)合編碼HEY2基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸。
[0033]在本文提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的多種實(shí)施方案中，雙鏈寡核苷酸(例如雙鏈RNA(dsRNA))的每一種包含有義鏈和反義鏈。
[0034]在本文提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，雙鏈寡核苷酸的每一種包含有義鏈和反義鏈，其中(a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)；
(b)反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼靶基因的mRNA的序列互補(bǔ)；并且(c)有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與反義鏈互補(bǔ)。在多種實(shí)施方案中，編碼靶基因的mRNA選自哺乳動(dòng)物 HESl (SEQ ID NO:1)、HES5 (SEQ ID NO: 2)、HEY2 (SEQ ID NO: 10)、CDKNlB (SEQID NO: 7)或NOTCHl (例如SEQ ID NO: 11或其部分)；并且有義鏈和反義鏈包含SEQ IDNO:23-1495 或 26667-26706(HESl)、SEQ ID NO:1496-2703 或 26707-26732(HES5)、SEQ IDNO:13004-16621 或 26779-26788(HEY2)、 SEQ ID NO:7444-10533 或 26867-26900(CDKNlB)或 SEQ ID NO: 16622-26666 或 26901-26912 (NOTCHl)任一者所示的序列對(duì)。
[0035]在本文提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，第一雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中:
[0036](a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)；
[0037](b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼HESl的mRNA的序列互補(bǔ)；并且
[0038](c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)；
[0039]第二雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中:
[0040](a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)；
[0041](b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼HES5的mRNA的序列互補(bǔ)；并且
[0042] (c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)；并且
[0043]第三雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中:
[0044](a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)；
[0045](b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼HEY2的mRNA的序列互補(bǔ)；并且
[0046](c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)。
[0047]在本文提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒的其他優(yōu)選實(shí)施方案中，第一雙鏈寡核苷酸為包含有義鏈和反義鏈的dsRNA分子，其中:
[0048](a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)；
[0049](b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼⑶KNlB的mRNA的序列互補(bǔ)；并且
[0050](c)有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與反義鏈互補(bǔ)；第二雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中:
[0051](a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)；
[0052](b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼NOTCHl的mRNA的序列互補(bǔ)；并且
[0053](c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)；并且
[0054]第三雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中:
[0055](a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)；
[0056](b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼HEY2的mRNA的序列互補(bǔ)；并且
[0057](c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)。
[0058]在一些實(shí)施方案中，dsRNA分子具有如本文所公開(kāi)的結(jié)構(gòu)(Al)或結(jié)構(gòu)(A2)所示的結(jié)構(gòu)。
[0059]在特定實(shí)施方案中，本文提供的組合物、組合、方法、商業(yè)包裝和試劑盒可用于治療耳部(耳、聽(tīng)覺(jué))病癥或病變，尤其是涉及內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞死亡的病變。
[0060]在另一方面，提供了 HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑的組合的用途，供制備用于治療內(nèi)耳或中耳疾病或障礙的藥劑。在另一方面，提供了 CDKNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑的組合的用途，供制備用于治療內(nèi)耳或中耳疾病或障礙的藥劑。
[0061]在特定實(shí)施方案中，本文提供了組合、組合物及其在治療聽(tīng)覺(jué)和前庭疾病、障礙、損傷和病癥方面的使用方法，包括但不限于耳毒素引起的聽(tīng)力損失、年齡相關(guān)性聽(tīng)力損失、由于涉及內(nèi)耳毛細(xì)胞的終末器官損害導(dǎo)致的聽(tīng)力障礙，例如聽(tīng)覺(jué)創(chuàng)傷、病毒性內(nèi)淋巴迷路炎、梅尼埃??；可以為間歇性或持續(xù)性的耳鳴，其中診斷有感音性聽(tīng)覺(jué)障礙；由于細(xì)菌或病毒感染導(dǎo)致的聽(tīng)力損失，諸如在耳帶狀皰疹中；由急性中耳炎、化膿性腦膜炎、慢性中耳炎引起的化膿性迷路炎，突發(fā)性聾(包括病毒起源的)，例如由病毒引起的病毒性內(nèi)淋巴迷路炎，包括腮腺炎、麻疹、流感、水痘、單核細(xì)胞增多癥和腺病毒；先天性聽(tīng)力損失，諸如由風(fēng)疹、出生時(shí)缺氧、因向母體施用耳毒性藥物期間的創(chuàng)傷導(dǎo)致的流血進(jìn)內(nèi)耳、胎兒成紅細(xì)胞增多病和遺傳性病癥(瓦爾登布爾氏綜合征和赫爾勒綜合征)導(dǎo)致的。
[0062]在另一方面，本文提供包含本文所公開(kāi)的任何組合物或組合的商業(yè)包裝或試劑盒。在一些實(shí)施方案中，該商業(yè)包裝或試劑盒包含標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)，其提供關(guān)于可如何使用本文所公開(kāi)的組合物或組合的某些信息。在商業(yè)包裝或試劑盒的一些實(shí)施方案中，標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)包括給藥信息。在商業(yè)包裝或試劑盒的一些實(shí)施方案中，標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)包括使用指示。在商業(yè)包裝或試劑盒的一些實(shí)施方案中，標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)指明組合物或組合適用于治療。在商業(yè)包裝或試劑盒的一些實(shí)施方案中，其中標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)指明組合物或組合適用于預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，和/或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。
[0063]現(xiàn)在將進(jìn)行描述的優(yōu)選方法、材料和實(shí)例僅為示例性的，并非意圖進(jìn)行限制；與本文所述的那些相似或等同的材料和方法可用于實(shí)踐或檢驗(yàn)本發(fā)明。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)通過(guò)以下附圖、【具體實(shí)施方式】和權(quán)利要求書(shū)將顯而易見(jiàn)。
[0064]附圖簡(jiǎn)述
[0065]圖1A-1E顯不了在本研究中在弟O天、3周后、5周后、7周后和9周后犾得的ABR響應(yīng)。
[0066]圖1A顯不了在本研究中在弟O天、IKHz刺激3周后、5周后、7周后和9周后犾得的ABR響應(yīng)。
[0067]圖1B顯不了在本研究中在弟O天、4KHz刺激3周后、5周后、7周后和9周后犾得的ABR響應(yīng)。
[0068]圖1C顯不了在本研究中在弟O天、8KHz刺激3周后、5周后、7周后和9周后犾得的ABR響應(yīng)。
[0069]圖1D顯不了在本研究中在弟O天、16KHz刺激3周后、5周后、7周后和9周后犾得的ABR響應(yīng)。
[0070]圖1E顯不了在本研究中在弟O天、32KHz刺激3周后、5周后、7周后和9周后犾得的ABR響應(yīng)。
[0071]圖1F提供了圖1A-1E的圖注。
[0072]詳述
[0073]本文提供下調(diào)與聽(tīng)力損失相關(guān)的某些基因的表達(dá)的組合物和組合及其在治療患有聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的受試者中的用途，以促進(jìn)內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞替換、再生或保護(hù)和/或?qū)崿F(xiàn)聽(tīng)力恢復(fù)/再生。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該方法包括部分或完全聽(tīng)力再生。已表明，抑制HES1、HES5和HEY2基因的組合或CDKN1B、NOTCHl和HEY2基因的組合的表達(dá)有益于聽(tīng)力再生。本申請(qǐng)尤其涉及抑制HESl、HES5、CDKNlB、HEY2和NOTCHl表達(dá)的治療劑例如雙鏈寡核苷酸分子(包括dsRNA/小干擾RNA(SiRNA)化合物)的用途并涉及這些dsRNA分子在治療聽(tīng)力損失中的用途?？捎糜谏扇绫疚乃峁┑膁sRNA分子的組合物和組合的有義鏈和互補(bǔ)反義鏈在SEQ ID NO: 23-1495或26667-26706 (HESl)、SEQ IDNO:1496-2703 或 26707-26732(HES5)、 SEQ ID NO:13004-16621 或 26779-26788(HEY2)、SEQ ID NO:7444-10533 或 26867-26900 (CDKNlB)或 SEQ ID NO:16622-26666 或26901-26912(NOTCHl)中示出。某些目前優(yōu)選的有義鏈和反義鏈對(duì)在下表1_V中示出。
[0074] 本文提供用于在體內(nèi)抑制HESl、HES5和HEY2基因表達(dá)或用于抑制CDKNlB、NOTCHl和HEY2基因表達(dá)的方法、組合和組合物。一般來(lái)講，該方法包括以足以通過(guò)RNA干擾機(jī)理下調(diào)靶基因表達(dá)的量施用寡核糖核苷酸的組合/組合物，諸如dsRNA分子(包括小干擾RNA (即dsRNA))的組合/組合物，所述組合/組合物靶向靶mRNA并在生物條件(在細(xì)胞內(nèi))與mRNA雜交或相互作用，或施用可在細(xì)胞中產(chǎn)生siRNA的核酸物質(zhì)。靶基因的詳細(xì)信息在下表A中不出。
[0075]表A:靶基因
[0076]
【權(quán)利要求】
1.一種HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑的組合，用于同時(shí)、單獨(dú)或按順序用于受試者以預(yù)防、治療或延遲聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止所述受試者內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。
2.一種預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，和/或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的方法，包括使用HESl抑制劑、HES5抑制劑和HEY2抑制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合或方法，其中所述HESl抑制劑、所述HES5抑制劑和所述HEY2抑制劑將基本上同時(shí)地或按順序施用。
4.一種組合物，包含HESl抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥、HES5抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥和HEY2抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥的組合；以及藥學(xué)上可接受的載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中每種抑制劑獨(dú)立地選自由小有機(jī)分子、蛋白、抗體或其片段、肽、擬肽和核酸分子組成的組。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合、方法或組合物，其中每種抑制劑包括核酸分子或其藥學(xué)上可接受的鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合、方法或組合物，其中第一核酸分子為結(jié)合編碼HESl基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸，第二核酸分子為結(jié)合編碼HES5基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸，以及第三核酸分子為結(jié)合編碼HEY2基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合、方法或組合物，其中所述雙鏈寡核苷酸的每一種包括具有有義鏈和反義鏈的dsRNA分子。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的組合、方法或組合物，其中連接所述核酸分子，或其中在RNAistar形成中對(duì)所述核酸分子退火。
10.根據(jù)權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中: 第一雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中: (a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)； (b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼HESl的mRNA的序列互補(bǔ)；并且 (c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)； 第二雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中: (a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)； (b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼HES5的mRNA的序列互補(bǔ)；并且 (c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)；并且 第三雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中: (a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)； (b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼HEY2的mRNA的序列互補(bǔ)；并且 (c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)。
11.根據(jù)權(quán)利要求ι-?ο中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中將所述抑制劑在同一制劑中共同施用給所述受試者。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-3和5-10中任一項(xiàng)所述的組合或方法，其中將所述抑制劑在不同制劑中共同施用給所述受試者。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中將所述抑制劑通過(guò)同一途徑共同施用給所述受試者。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-3或5-10中任一項(xiàng)所述的組合或方法，其中將所述抑制劑通過(guò)不同的途徑共同施用給所述受試者。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合、方法或組合物，其中將所述抑制劑通過(guò)經(jīng)鼓室注射共同施用給所述受試者。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合、方法或組合物，其中將所述抑制劑經(jīng)局部共同施用。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合、方法或組合物，其中所述局部施用包括向耳膜施加滴耳劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的組合或方法，其中所述施用基本上同時(shí)進(jìn)行。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的組合或方法，其中所述施用按順序進(jìn)行。
20.根據(jù)權(quán)利要求7至19中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中至少一種雙鏈寡核苷酸獨(dú)立地包括結(jié)構(gòu)(Al): (Al) 5’(N)x-Z 3’(反義鏈)
3’ V -(N’)y_z”5’(有義鏈) 其中N和N’的每一個(gè)為 可未修飾的或被修飾的核糖核苷酸，或?yàn)榉浅Ｒ?guī)部分； 其中(N) X和(N’)y的每一個(gè)均為其中每個(gè)連續(xù)的N或N’通過(guò)共價(jià)鍵接合到下一個(gè)N或N’的寡核苷酸； 其中Z和V的每一個(gè)獨(dú)立地存在或不存在，但是如果存在時(shí)，獨(dú)立地為共價(jià)連接在其所存在的鏈的3’末端的1-5個(gè)連續(xù)核苷酸、1-5個(gè)連續(xù)非核苷酸部分或其組合， 其中z”可以存在或不存在，但是如果存在時(shí)，則為共價(jià)連接在(N’)y的5’末端的封端部分； 其中X和y的每一個(gè)獨(dú)立地為18與40之間的整數(shù)； 其中(N’ )y的序列與(N)x的序列互補(bǔ)；并且 其中(N) X包含與選自編碼HESl的mRNA、編碼HES5的mRNA和編碼HEY2的mRNA的mRNA互補(bǔ)的反義序列。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的組合、方法或組合物,其中在所述雙鏈寡核苷酸中X= y =19。
22.根據(jù)權(quán)利要求7至19中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中至少一種雙鏈寡核苷酸獨(dú)立地包括結(jié)構(gòu)(A2): (A2)5’ N1-(N)x-Z 3’(反義鏈)
3’ V -N2-(NJ )y_z”5’(有義鏈) 其中N2、N和N’的每一個(gè)獨(dú)立地為未修飾的或修飾的核糖核苷酸，或非常規(guī)部分；其中(N)X和(N’)y的每一個(gè)均為其中每個(gè)連續(xù)的N或N’通過(guò)共價(jià)鍵接合到相鄰N或N’的寡核苷酸； 其中X和y的每一個(gè)獨(dú)立地為17與39之間的整數(shù)； 其中N2共價(jià)鍵合到(N’)y ; 其中N1共價(jià)鍵合到(N) X并與選自HESImRNA、HES5mRNA和HEY2mRNA的靶mRNA錯(cuò)配或?yàn)檫x自HESlmRNA、HES5mRNA和HEY2mRNA的mRNA的互補(bǔ)脫氧核糖核苷酸部分；其中N1為選自由天然或修飾的尿苷、脫氧尿苷、核糖胸苷、脫氧核糖胸苷、腺苷或脫氧腺苷、脫堿基核糖部分和脫堿基脫氧核糖部分組成的組的部分； 其中z”可以存在或不存在，但是如果存在時(shí)，則為共價(jià)連接在N2-(N’ )y的5’末端的封端部分；并且 其中Z和V的每一個(gè)獨(dú)立地存在或不存在，但是如果存在時(shí)，獨(dú)立地為共價(jià)連接在其所存在的鏈的3’末端的1-5個(gè)連續(xù)核苷酸、1-5個(gè)連續(xù)非核苷酸部分或其組合； 其中(N’ )y的序列與(N)X的序列具有互補(bǔ)性；并且其中(N)X的序列與選自HESlmRNA(SEQ ID NO:1)、HES5mRNA(SEQ ID NO: 2)和 HEY2mRNA(SEQ ID NO: 10)中的序列的連續(xù)序列具有互補(bǔ)性。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的組合、方法或組合物,其中在所述雙鏈寡核苷酸中X= y =18。
24.—種商業(yè)包裝，包含根據(jù)權(quán)利要求1或3至23中任一項(xiàng)所述的組合或組合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的商業(yè)包裝，其中所述包裝包含標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)，其提供關(guān)于使用權(quán)利要求1或3至23中任一項(xiàng)所述的組合或組合物的方法的某些信息。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的商業(yè)包裝，其中所述標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)包括給藥信息。
27.根據(jù)權(quán)利要 求26所述的商業(yè)包裝，其中所述標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)包括使用指示。
28.根據(jù)權(quán)利要求25至27中任一項(xiàng)所述的商業(yè)包裝，其中所述標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)指明根據(jù)權(quán)利要求1或3至15中任一項(xiàng)所述的組合適用于治療。
29.根據(jù)權(quán)利要求25至27中任一項(xiàng)所述的商業(yè)包裝，其中所述標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)指明根據(jù)權(quán)利要求1或3至15中任一項(xiàng)所述的組合或組合物適用于預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。
30.一種⑶KNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑的組合，用于同時(shí)、單獨(dú)或按順序用于預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。
31.一種預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失的方法，包括使用⑶KNlB抑制劑、NOTCHl抑制劑和HEY2抑制劑。
32.根據(jù)權(quán)利要求30或31所述的組合或方法，其中所述CDKNlB抑制劑、所述NOTCHl抑制劑和所述HEY2抑制劑將基本上同時(shí)地或按順序施用。
33.一種組合物，包含至少一種⑶KNlB抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥、至少一種NOTCHl抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥和至少一種HEY2抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥；以及藥學(xué)上可接受的載體。
34.根據(jù)權(quán)利要求30至33任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中每種抑制劑獨(dú)立地選自由小有機(jī)分子、蛋白、抗體或其片段、肽、擬肽和核酸分子組成的組。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的組合、方法或組合物，其中每種抑制劑包括核酸分子或其藥學(xué)上可接受的鹽。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的組合、方法或組合物，其中第一核酸分子為結(jié)合編碼CDKNlB基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸，第二核酸分子為結(jié)合編碼NOTCHl基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸，以及第三核酸分子為結(jié)合編碼HEY2基因的核苷酸序列的雙鏈寡核苷酸。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的組合、方法或組合物，其中所述雙鏈寡核苷酸的每一種包括具有有義鏈和反義鏈的dsRNA分子。
38.根據(jù)權(quán)利要求36或37所述的組合、方法或組合物，其中連接所述核酸分子，或其中在RNAistar形成中對(duì)所述核酸分子退火。
39.根據(jù)權(quán)利要求35-38中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中: 第一雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中: (a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)； (b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼CDKNlB的mRNA的序列互補(bǔ)；并且 (c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)； 第二雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中: (a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)； (b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼NOTCHl的mRNA的序列互補(bǔ)；并且 (c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)；并且 第三雙鏈寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，其中: (a)每條鏈獨(dú)立地為18至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)； (b)所述反義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與編碼HEY2的mRNA的序列互補(bǔ)；并且 (c)所述有義鏈的18至49個(gè)核苷酸的序列與所述反義鏈互補(bǔ)。
40.根據(jù)權(quán)利要求30-39中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中將所述抑制劑在同一制劑中共同施用給所述受試者。
41.根據(jù)權(quán)利要求30-32和34-39中任一項(xiàng)所述的組合或方法，其中將所述抑制劑在不同制劑中共同施用給所述受試者。
42.根據(jù)權(quán)利要求30-39中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中將所述抑制劑通過(guò)同一途徑共同施用給所述受試者。
43.根據(jù)權(quán)利要求30-32和34-39中任一項(xiàng)所述的組合或方法，其中將所述抑制劑通過(guò)不同的途徑共同施用給所述受試者。
44.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合或方法，其中將所述抑制劑通過(guò)經(jīng)鼓室注射共同施用給所述受試者。
45.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合或方法，其中將所述抑制劑經(jīng)局部共同施用。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的組合或方法，其中所述局部施用包括向耳膜施加滴耳劑。
47.根據(jù)權(quán)利要求30-32中任一項(xiàng)所述的組合或方法，其中所述施用基本上同時(shí)進(jìn)行。
48.根據(jù)權(quán)利要求30-32任一項(xiàng)所述的組合或方法，其中所述施用按順序進(jìn)行。
49.根據(jù)權(quán)利要求36至48任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中至少一種雙鏈寡核苷酸獨(dú)立地包括結(jié)構(gòu)(Al): (Al) 5’(N)x-Z 3’(反義鏈)
3’ V -(N’)y_z”5’(有義鏈) 其中N和N’的每一個(gè)為可未修飾的或被修飾的核糖核苷酸，或?yàn)榉浅Ｒ?guī)部分； 其中(N) X和(N’) y的每一個(gè)均為其中每個(gè)連續(xù)的N或N’通過(guò)共價(jià)鍵接合到下一個(gè)N或N’的寡核苷酸；其中Z和V的每一個(gè)獨(dú)立地存在或不存在，但是如果存在時(shí)，獨(dú)立地為共價(jià)連接在其所存在的鏈的3’末端的1-5個(gè)連續(xù)核苷酸、1-5個(gè)連續(xù)非核苷酸部分或其組合， 其中z”可以存在或不存在，但是如果存在時(shí)，則為共價(jià)連接在(N’)y的5’末端的封端部分； 其中X和y的每一個(gè)獨(dú)立地為18與40之間的整數(shù)； 其中(N’)y的序列與(N)X的序列互補(bǔ)；并且其中(N) X包含選自編碼⑶KNlB的mRNA、編碼NOTCHl的mRNA和編碼HEY2的mRNA的mRNA的反義序列。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的組合、方法或組合物,其中在所述雙鏈寡核苷酸中X= y =19。
51.根據(jù)權(quán)利要求36至48中任一項(xiàng)所述的組合、方法或組合物，其中至少一種雙鏈寡核苷酸獨(dú)立地包括結(jié)構(gòu)(A2): (A2)5’ N1-(N)x-Z 3’(反義鏈)
3’ V -N2-(NJ )y_z”5’(有義鏈) 其中N2、N和N’的每一個(gè)獨(dú)立地為未修飾的或修飾的核糖核苷酸，或非常規(guī)部分；其中(N)X和(N’)y的每一個(gè)均為其中每個(gè)連續(xù)的N或N’通過(guò)共價(jià)鍵接合到相鄰N或N’的寡核苷酸； 其中X和y的每一個(gè)獨(dú)立地為17與39之間的整數(shù)； 其中N2共價(jià)鍵合到(N’)y ; 其中N1共價(jià)鍵合到(N) X并與選自CDKNlB mRNA,NOTCHlmRNA和HEY2mRNA的靶mRNA錯(cuò)配或?yàn)檫x自CDKNlB mRNA、NOTCHlmRNA和HEY2mRNA的mRNA的互補(bǔ)脫氧核糖核苷酸部分；其中N1為選自由天然或修飾的尿苷、脫氧尿苷、核糖胸苷、脫氧核糖胸苷、腺苷或脫氧腺苷、脫堿基核糖部分和脫堿基脫氧核糖部分組成的組的部分； 其中z”可以存在或不存在，但是如果存在時(shí)，則為共價(jià)連接在N2-(N’ )y的5’末端的封端部分；并且 其中Z和V的每一個(gè)獨(dú)立地存在或不存在，但是如果存在時(shí)，獨(dú)立地為共價(jià)連接在其所存在的鏈的3’末端的1-5個(gè)連續(xù)核苷酸、1-5個(gè)連續(xù)非核苷酸部分或其組合； 其中(N’ )y的序列與(N)X的序列具有互補(bǔ)性；并且其中(N)X的序列與選自CDKNlBmRNA (SEQ ID NO: 7)、NOTCHlmRNA (SEQ ID NO: 11)和 HEY2mRNA (SEQ ID NO: 10)中的序列的連續(xù)序列具有互補(bǔ)性。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的組合、方法或組合物,其中在所述雙鏈寡核苷酸中X= y =18。
53.一種商業(yè)包裝，包含根據(jù)權(quán)利要求30至32或34至52中任一項(xiàng)所述的組合物或組口 ο
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的商業(yè)包裝，其中所述標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)指明根據(jù)權(quán)利要求30至32或34至52中任一項(xiàng)所述的組合物或組合適用于治療。
55.根據(jù)權(quán)利要求53或54所述的商業(yè)包裝，其中所述標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)指明根據(jù)權(quán)利要求30至32或34至52中任一項(xiàng)所述的組合物或組合適用于預(yù)防、治療或延遲受試者聽(tīng)力障礙、聽(tīng)力損失和/或平衡障礙的進(jìn)展，或防止內(nèi)耳的耳(感覺(jué))毛細(xì)胞損失。
【文檔編號(hào)】A61P27/16GK104080912SQ201380007519
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2013年1月10日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月12日
【發(fā)明者】斯維特拉娜·亞當(dāng)斯基, 埃琳娜·費(fèi)因斯坦 申請(qǐng)人:夸克制藥公司