具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物及其制備方法，所述中藥組合物由下述重量份的原料制備而成：西洋參1-40份、邊條參1-40份、田七1-40份、紅花1-30份、何首烏1-30份、當(dāng)歸1-30份、玉蓯蓉1-30份和烏桕1-30份；制備方法：何首烏超臨界CO2萃取，加45-55%乙醇溶液，得何首烏活性溶液；將其余原料干燥粉碎，加45-55%乙醇溶液，真空減壓回流，經(jīng)陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備和濾布過濾，得澄清液；將何首烏活性溶液與澄清液混勻，即可。中藥組合物可祛風(fēng)補(bǔ)益活血，促進(jìn)頭皮血液循環(huán)，使頭皮、頭發(fā)和毛囊得到充足營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)發(fā)根黑素細(xì)胞分裂、激活酪氨酸酶活性及黑色素生成，從根源實(shí)現(xiàn)黑發(fā)養(yǎng)發(fā)功效。
【專利說明】具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，特別是涉及一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著社會(huì)的發(fā)展，工作和學(xué)習(xí)節(jié)奏的加快，人們承受的心理壓力日益加重，越來越多的人被白發(fā)癥所困擾。古今中外對(duì)于白發(fā)轉(zhuǎn)黑發(fā)進(jìn)行了大量的研究，但還沒有完全成功的辦法和藥劑方案，效果不佳。由于白發(fā)嚴(yán)重影響人體形象和顏面的美，很多白發(fā)者在無奈和失望中不斷染發(fā)，然而大部分的染發(fā)劑都含有對(duì)苯二胺，對(duì)苯二胺是染發(fā)劑中的有效成分，對(duì)人體健康具有潛在危害，該物質(zhì)可以引起皮膚過敏，發(fā)生接觸性或過敏性皮炎。另外，對(duì)苯二胺是國(guó)際公認(rèn)的一種致癌物質(zhì)，有增加膀胱癌等癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。
[0003]因此，亟需一種能夠使白發(fā)轉(zhuǎn)黑發(fā)的安全產(chǎn)品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于此，本發(fā)明目的在于提供 一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物及其制備方法。
[0005]解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下:
[0006]一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，所述中藥組合物由下述重量份的原料制備而成:西洋參1-40份、邊條參1-40份、田七1-40份、紅花1-30份、何首烏1-30份、當(dāng)歸1-30份、玉灰蓉1-30份和烏桕1-30份。
[0007]在其中一些實(shí)施例中，所述中藥組合物由下述重量份的原料制備而成:西洋參10-20份、邊條參10-20份，田七5-10份、紅花10-20份、何首烏15-20份、當(dāng)歸10-20份、玉蓯蓉10-20份和烏桕15-20份。
[0008]在其中一些實(shí)施例中，所述中藥組合物由下述重量份的原料制備而成:西洋參15份、邊條參20份，田七5份、紅花15份、何首烏20份、當(dāng)歸10份、玉蓯蓉15份、烏桕20份。
[0009]本發(fā)明還提供一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0010](I)按上述重量份，將何首烏干燥，粉碎，進(jìn)行超臨界CO2萃取，得何首烏活性物；所述超臨界CO2萃取的工藝參數(shù)為:在萃取釜中的萃取時(shí)間為5-6h，萃取釜的壓力為20-22Mpa，夾帶劑乙醇占萃取劑CO2的重量百分比為11_13% ;分離釜的壓力為5_8Mpa，溫度為 30-35 °C，CO2 的流量為 20-22kg/h ；
[0011](2)于步驟(1)所得的何首烏活性物中加入體積分?jǐn)?shù)為45-55%的乙醇水溶液至何首烏原藥的重量，得何首烏活性溶液；
[0012](3)按上述重量份，將西洋參、邊條參、田七、紅花、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕，干燥，混合，粉碎，得中藥混合物，按中藥混合物的重量加入10-15倍重量的體積分?jǐn)?shù)為45-55%的乙醇水溶液，冷浸后，在80-90°C條件下，于真空減壓回流罐中提取，得提取液，將提取液經(jīng)陶瓷復(fù)合膜過濾，得濾液，將濾液低溫保存2-3天后，濾布過濾，得澄清液；[0013](4)將步驟(2)所得的何首烏活性溶液與步驟(3)所得的澄清液混勻，即可。
[0014]在其中一些實(shí)施例中，所述陶瓷復(fù)合膜的管孔徑為100_200nm，所述濾布的孔徑為400-1000 目。
[0015]在其中一些實(shí)施例中，所述陶瓷復(fù)合膜的管孔徑為lOOnm，所述濾布的孔徑為1000 目。
[0016]在其中一些實(shí)施例中，步驟(1)和步驟(3)中所述粉碎的粒徑為40目以上。
[0017]在其中一些實(shí)施例中，步驟(1)中在分離釜中分離的時(shí)間為3_5h。
[0018]在其中一些實(shí)施例中，步驟(3)中所述冷浸的時(shí)間為l_2h。
[0019]在其中一些實(shí)施例中，步驟(3)中所述低溫為4-6°C。
[0020]本發(fā)明所述中藥組合物中各原料的藥效說明如下:
[0021]西洋參:又名花旗參，五加科植物，原產(chǎn)于美洲，在我國(guó)東三省、福建、云南都有栽種。西洋參性味甘微苦，涼。《藥性考》:“補(bǔ)陰退熱。姜制益氣，扶正氣”。《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》:“能補(bǔ)助氣分，并能補(bǔ)益血分”。
[0022]邊條參:人參的一 種，氣香，味微苦，歸脾、肺、心經(jīng)。是中國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥，具有補(bǔ)脾益肺、大補(bǔ)元?dú)?、?qiáng)心安神、生津止渴、復(fù)脈固脫等功效?！侗静菥V目》認(rèn)為能夠治療“男婦一切虛癥”。
[0023]田七:又名三七，屬五加科人參屬多年草本植物，我國(guó)特有名貴中藥材。味甘，微苦，性溫，歸肝經(jīng)，胃經(jīng)。清朝藥學(xué)著作《本草綱目拾遺》中記載:“人參補(bǔ)氣第一，三七補(bǔ)血第一，味同而功亦等，故稱人參二七，為中藥中之最珍貴者。
[0024]紅花:菊科紅花屬植物，紅花的功效主要是活血通經(jīng)，用于血瘀經(jīng)閉。
[0025]何首烏:寥科何首烏屬植物，味苦、甘；澀，性微溫。歸肝，腎經(jīng)?！侗静萸笳妗分^其“滋水補(bǔ)腎，黑發(fā)輕身”。
[0026]當(dāng)歸:傘形科當(dāng)歸屬植物，味甘、辛、苦，性溫，歸肝、心、脾經(jīng)。《日華子本草》載其“治一切風(fēng)，一切血，補(bǔ)一切勞，破惡血，養(yǎng)新血”。
[0027]玉蓯蓉:列當(dāng)科肉蓯蓉屬植物，莖入藥(中藥名:肉蓯蓉)，采后涼干后為生大蕓，鹽潰為鹽大蕓，在西北地區(qū)有“沙漠人參”之稱，有補(bǔ)精血、益腎壯陽(yáng)、潤(rùn)腸通便之功效。
[0028]烏桕:大戟科烏桕屬落葉喬木，性苦，微溫，入肺、脾、腎、大腸經(jīng)。有殺蟲解毒，利尿通便的功效。外用治疔瘡，雞眼，乳腺炎，跌打損傷，濕疹，皮炎。
[0029]本發(fā)明所述一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物及其制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果:
[0030](I)本發(fā)明所述中藥組合物經(jīng)發(fā)明人大量的實(shí)驗(yàn)和研究，精選西洋參、邊條參、田七、紅花、何首烏、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕，并得出其最佳配方組分，獲得的該種組合物安全無毒，并具有祛風(fēng)、補(bǔ)益、活血作用，且眾藥合用，可共同起到促進(jìn)頭皮血液循環(huán)，使頭皮、頭發(fā)和毛囊得到充足的營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)能促進(jìn)發(fā)根黑素細(xì)胞分裂、激活酪氨酸酶活性及黑色素生成，從根源實(shí)現(xiàn)黑發(fā)養(yǎng)發(fā)的功效。
[0031](2)本發(fā)明所述中藥組合的制備方法采用超臨界CO2萃取設(shè)備和陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備獲得有效成分，該種方法萃取有效成分的效率高，且工藝簡(jiǎn)單易操作，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
[0032](3)本發(fā)明所述制備方法中通過嚴(yán)格控制超臨界CO2萃取設(shè)備中的壓力和溫度，并結(jié)合常溫提取，可有效防止熱敏物質(zhì)的氧化和逸散，陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備可有效截留蛋白質(zhì)、脂肪等大分子物質(zhì)，避免產(chǎn)品長(zhǎng)期放置時(shí)大分子物質(zhì)的締合作用產(chǎn)生沉淀。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0033]圖1為實(shí)施例8中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞增殖的測(cè)定結(jié)果圖；
[0034]圖2為實(shí)施例8中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組酪氨酸酶活性測(cè)定結(jié)果圖；
[0035]圖3為實(shí)施例8中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組黑色素含量測(cè)定結(jié)果圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0036]本發(fā)明中，所列舉的植物原料，其中部分植物原料以其特定的利用部位為原料，具體為:何首烏的塊根、西洋參的根、邊條參的根、紅花的花、田七的根、當(dāng)歸的根、玉蓯蓉的莖、烏桕的樹皮。
[0037]以下將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0038]實(shí)施例1
[0039]一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，由下述原料制備而成:
[0040]何首烏20g、西洋參15g、邊條參20g、田七5g、紅花15g、當(dāng)歸10g、玉蓯蓉15g、烏桕20g；
[0041]上述中藥組合物的制備方法，包括如下步驟:
[0042]( I)稱取何首烏20g，干燥，粉碎至40目以上，將粉碎的何首烏粉置于萃取釜并浸泡在CO2液體中萃取5小時(shí)，CO2浸泡液中夾帶劑乙醇重量為萃取劑CO2重量的12%，控制萃取釜中壓力為20Mpa ;浸泡后在分離釜中進(jìn)行分離，控制分離釜中分離壓力值為5Mpa，加溫至30°C，保持3小時(shí)，CO2的流量維持在20Kg/h ;分離所得的何首烏提取物即為何首烏活性成分；
[0043](2)將步驟(1)制得的何首烏提取物加入體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液至總重量為20g，攪拌溶解，制得何首烏活性溶液；
[0044](3)按上述重量稱取西洋參、邊條參、田七、紅花、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕混合，干燥，粉碎至40目以上，得混合物，按混合物的重量，加入1000g的50%乙醇水溶液，冷浸I小時(shí)后，加熱，在溫度為80°C的條件下，用真空減壓回流罐中提取I小時(shí)；將提取液通過陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備，其中陶瓷復(fù)合膜管孔徑為IOOnm;將提取液降溫至5°C，保存2天，再用1000目濾布過濾為澄清液；
[0045](4)將步驟(2)制得的何首烏活性溶液加入到步驟(3)制得的澄清液中，攪拌均勻即可。
[0046]使用方法:洗凈頭發(fā)后處理到七成干，取適量本品揉搓脫發(fā)根部，再輕輕按摩3-5分鐘，用牛角梳梳理即可。
[0047]實(shí)施例2
[0048]一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，由下述原料制備而成:
[0049]何首烏20g、西洋參20g、邊條參10g，田七10g、紅花10g、當(dāng)歸10g、玉蓯蓉20g、烏桕 15g ；
[0050]上述中藥組合物的制備方法，包括如下步驟:[0051](I)何首烏提取物即為何首烏活性成分的制備方法參照實(shí)施例1步驟(1)；
[0052](2)何首烏活性溶液的制備方法參照實(shí)施例1步驟(2)；
[0053](3)按上述重量稱取西洋參、邊條參、田七、紅花、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕混合，干燥，粉碎至40目以上，得混合物，按混合物的重量，加入950g的50%乙醇，冷浸I小時(shí)后，加熱，在溫度為80°C的條件下，用真空減壓回流罐中提取I小時(shí)；將提取液通過陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備，其中陶瓷復(fù)合膜管孔徑為IOOnm ;將提取液降溫至5°C，保存2天，再用1000目濾布過濾為澄清液體；
[0054](4)將步驟(2)制得的何首烏活性溶液加入到步驟(3)制得的澄清液中，攪拌均勻即可。
[0055]使用方法:參照實(shí)施例1所述使用方法。
[0056]實(shí)施例3
[0057]—種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，由下述原料制備而成:
[0058]何首烏lg、西洋參lg、邊條參40g,田七lg、紅花30g、當(dāng)歸30g、玉灰蓉lg、烏桕30g ；
[0059]上述中藥組合物的制備方法，包括如下步驟:
[0060](I)取實(shí)施例1步驟(2)制得的何首烏活性溶液Ig ；
[0061](2)按上述重量稱取西洋參、邊條參、田七、紅花、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕混合，干燥，粉碎至40目以上，得混合物， 按混合物的重量，加入1995g的50%乙醇冷浸2小時(shí)后，加熱，在溫度為90°C的條件下，用真空減壓回流罐中提取2小時(shí)；將提取液通過陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備，其中陶瓷復(fù)合膜管孔徑為IOOnm ;將提取液降溫至5°C，保存3天，再用1000目濾布過濾為澄清液；
[0062](3)將步驟(1)所述Ig何首烏活性溶液加入到步驟(2)制得的澄清液中，攪拌均勻即可。
[0063]使用方法:參照實(shí)施例1所述使用方法。
[0064]實(shí)施例4
[0065]一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，由下述原料制備而成:
[0066]何首烏15g、西洋參10g、邊條參20g，田七5g、紅花20g、當(dāng)歸20g、玉蓯蓉10g、烏桕20g；
[0067]上述中藥組合物的制備方法，包括如下步驟:
[0068](I)稱取何首烏干燥，粉碎至40目以上，將粉碎的何首烏粉置于萃取釜并浸泡在CO2液體中萃取6小時(shí)，CO2浸泡液中夾帶劑乙醇重量為萃取劑CO2重量的11%，控制萃取釜中壓力為21Mpa ;浸泡后在分離釜中進(jìn)行分離，控制分離釜中分離壓力值為6Mpa，加溫至32°C，保持4小時(shí)，CO2的流量維持在21kg/h ;分離所得的何首烏提取物即為何首烏活性成分；
[0069](2)將步驟(1)制得的何首烏提取物加入體積分?jǐn)?shù)為45%的乙醇水溶液至總重量為15g，攪拌溶解，制得何首烏活性溶液；
[0070](3)按上述重量稱取西洋參、邊條參、田七、紅花、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕混合，干燥，粉碎至40目以上，得混合物，按混合物的重量，加入1320g的45%乙醇冷浸1.5小時(shí)后，加熱，在溫度為87°C的條件下，用真空減壓回流罐中提取1.5小時(shí)；將提取液通過陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備，其中陶瓷復(fù)合膜管孔徑為200nm ;將提取液降溫至4°C，保存2.5天，再用400目濾布過濾為澄清液；
[0071](4)將步驟(2)制得的何首烏活性溶液加入到步驟(3)制得的澄清液中，攪拌均勻即可。
[0072]使用方法:參照實(shí)施例1所述使用方法。
[0073]實(shí)施例5
[0074]一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，由下述原料制備而成:
[0075]何首烏15g、西洋參15g、邊條參15g，田七7g、紅花15g、當(dāng)歸15g、玉蓯蓉15g、烏桕17g；
[0076]上述中藥組合物的制備方法，包括如下步驟:
[0077](I)稱取何首烏干燥，粉碎至40目以上，將粉碎的何首烏粉置于萃取釜并浸泡在CO2液體中萃取6小時(shí)，CO2浸泡液中夾帶劑乙醇重量為萃取劑C02重量的13%，控制萃取釜中壓力為22Mpa ;浸泡后在分離釜中進(jìn)行分離，控制分離釜中分離壓力值為8Mpa，加溫至35°C，保持5小時(shí)，CO2的流量維持在22kg/h ;分離所得的何首烏提取物即為何首烏活性成分；
[0078](2)將步驟(1) 制得的何首烏提取物加入體積分?jǐn)?shù)為55%的乙醇水溶液至總重量為15g，攪拌溶解，制得何首烏活性溶液；
[0079](3)按上述重量稱取西洋參、邊條參、田七、紅花、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕混合，干燥，粉碎至40目以上，得混合物，按混合物的重量，給混合藥材粉末中加入1390g的55%乙醇冷浸I小時(shí)后，加熱，在溫度為90°C的條件下，用真空減壓回流罐中提取2小時(shí)；將提取液通過陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備，其中陶瓷復(fù)合膜管孔徑為IOOnm ;將提取液降溫至6°C，保存2天，再用1000目濾布過濾為澄清液；
[0080](4)將步驟(2)制得的何首烏活性溶液加入到步驟(3)制得的澄清液中，攪拌均勻即可。
[0081 ] 使用方法:參照實(shí)施例1所述使用方法。
[0082]實(shí)施例6
[0083]一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，由下述原料制備而成:
[0084]何首烏10g、西洋參10g、邊條參IOg,田七10g、紅花10g、當(dāng)歸10g、玉灰蓉10g、烏桕 IOg ；
[0085]上述中藥組合物的制備方法，具體參照實(shí)施例4。
[0086]實(shí)施例7
[0087]一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，由下述原料制備而成:
[0088]何首烏30g、西洋參40g、邊條參40g，田七40g、紅花30g、當(dāng)歸30g、玉蓯蓉30g、烏桕 30g ；
[0089]上述中藥組合物的制備方法，具體參照實(shí)施例4。
[0090]實(shí)施例8評(píng)價(jià)中藥組合物的黑發(fā)養(yǎng)發(fā)功效
[0091]一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br> [0092]通過測(cè)定實(shí)施例1-7所制得的中藥組合物對(duì)B16F1黑素瘤細(xì)胞增殖，酪氨酸酶活性以及黑色素合成的影響，評(píng)價(jià)其黑發(fā)養(yǎng)發(fā)功效。[0093]二、實(shí)驗(yàn)方法
[0094]1、實(shí)驗(yàn)材料
[0095]小鼠黑素瘤B16F1細(xì)胞(武漢大學(xué)典型培養(yǎng)物保藏中心)、RPM1-1640培養(yǎng)基(購(gòu)自美國(guó)Gibico公司)、DMEM高糖培養(yǎng)基(購(gòu)自美國(guó)Gibico公司)、胎牛血清FBS (購(gòu)自Hyclone公司)、HEPES (購(gòu)自Promega公司)、胰蛋白酶(Typsin)(購(gòu)自Ameresco公司)、L-多巴(購(gòu)自美國(guó)Sigma公司)、TritonX-1OO (購(gòu)自美國(guó)Sigma公司)、青霉素、硫酸鏈霉素、二甲基亞砜、NaOH (分析純)、MTT (噻唑藍(lán))等試劑。
[0096]2、細(xì)胞培養(yǎng)和藥物刺激
[0097]2.1分組:分為實(shí)驗(yàn)組——實(shí)施例1-7和對(duì)照組——對(duì)比例I ;
[0098]其中，上述對(duì)比例I所述具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，由下述原料制備而成:
[0099]何首烏0.lg、西洋參50g、邊條參0.1g,田七50g、紅花0.2g、當(dāng)歸5g、玉灰蓉25g、烏桕5g ；
[0100]上述對(duì)比例I中藥組合物的制備方法，包括如下步驟: [0101](I)取實(shí)施例1步驟(2)制得的何首烏活性溶液0.1g ；
[0102](2)按上述重量稱取西洋參、邊條參、田七、紅花、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕混合，干燥，粉碎至40目以上，得混合物，按混合物的重量,給混合藥材粉末中加入2031g的50%乙醇冷浸2小時(shí)后，加熱，在溫度為80°C的條件下，用真空減壓回流罐中提取I小時(shí)；將提取液通過陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備，其中陶瓷復(fù)合膜管孔徑為IOOnm ;將提取液降溫至5°C，保存2天，再用1000目濾布過濾為澄清液；
[0103](3)將步驟(1)所述0.1g何首烏活性溶液加入到步驟(2)制得的澄清液中，攪拌均勻即可。
[0104]2.2細(xì)胞培養(yǎng)
[0105]用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基37°C、5%C02條件下常規(guī)培養(yǎng)小鼠黑素瘤B16F1細(xì)胞，傳代24小時(shí)后，用實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組制得的中藥組合物對(duì)細(xì)胞分別進(jìn)行加藥刺激，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加藥處理適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，具體參見2.3-2.5。
[0106]2.3細(xì)胞增殖的測(cè)定
[0107]將傳代細(xì)胞的濃度調(diào)至I X IO5個(gè)/mL加入96孔培養(yǎng)板，每孔0.lmL。孵育24小時(shí)，待細(xì)胞貼壁厚，吸去舊培養(yǎng)液，加入實(shí)施例1-7和對(duì)比例I所制得的中藥組合物的新鮮培養(yǎng)液0.1mL,置于37°C、5%C02條件下繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，采用經(jīng)典的MTT比色法(具體方法可參見馬慧軍，朱文元，王大光，等。中藥單體胡椒堿促進(jìn)表皮黑素瘤細(xì)胞黑素合成的實(shí)驗(yàn)研究，臨床皮膚科雜志，2005，34 (1):14-17)測(cè)定細(xì)胞增值率。每一實(shí)施例設(shè)立3個(gè)復(fù)孔，取平均值，并設(shè)置培養(yǎng)基為空白對(duì)照。
[0108]細(xì)胞增殖率(％)=各濃度平均吸光度值/空白對(duì)照組平均吸光度值X 100%。
[0109]2.4酪氨酸酶活性測(cè)定
[0110]取0.1mL實(shí)施例1-7和對(duì)比例I所制得的中藥組合物作用小鼠黑素瘤B16F1細(xì)胞2天后，測(cè)定酪氨酸酶活性(具體參見:馬慧軍，朱文元，岳學(xué)狀，等。甲氧沙林對(duì)培養(yǎng)人表皮黑素瘤細(xì)胞黑素合成的影響信號(hào)傳導(dǎo)的研究，臨床皮膚科雜志，2004, (33):526-528)。每一實(shí)施例設(shè)立3個(gè)復(fù)孔，取平均值，并設(shè)置培養(yǎng)基為空白對(duì)照。
[0111]酪氨酸酶的激活率(％) =各實(shí)施例平均吸光度值/空白對(duì)照組平均吸光度值 X 100%O
[0112]2.5黑色素含量測(cè)定
[0113]將配置的細(xì)胞懸液以IX IO5個(gè)/mL密度接種于6孔板，孵育I天后加入0.1mL實(shí)施例1-7和對(duì)比例I所制得的中藥組合物繼續(xù)培養(yǎng)2天，測(cè)定黑素含量(具體參見:姜澤群，吳瓊，徐繼敏，何光源，等。中藥何首烏促進(jìn)黑色素生成的作用機(jī)理研究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，(26):190-192)。每一實(shí)施例設(shè)立3個(gè)復(fù)孔，取平均值，并設(shè)置培養(yǎng)基為空白對(duì)照。
[0114]黑素含量(％)=各實(shí)施例A4qq值/空白對(duì)照組A4qq值X 100%。
[0115]三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0116]細(xì)胞增殖的測(cè)定結(jié)果，請(qǐng)參見圖1 ;從圖1可看出:與對(duì)比例I所制得的中藥組合物相比，實(shí)施例1-7所制備的中藥組合物對(duì)小鼠黑色瘤細(xì)胞有促進(jìn)作用，且實(shí)施例1-7的效果明顯優(yōu)于對(duì)比例I ;實(shí)施例7與實(shí)施例1-6相比說明中藥組合物各原料的添加重量份達(dá)到一定程度后繼續(xù)添加原料對(duì)產(chǎn)品功效沒有促進(jìn)作用。
[0117]酪氨酸酶活性測(cè)定結(jié)果，請(qǐng)參見圖2 ;從圖2中可看出:與對(duì)比例I所制得的中藥組合物相比，實(shí)施例1-7所制備的中藥組合物可明顯促進(jìn)B16F1小鼠黑色素瘤細(xì)胞酪氨酸酶的活性，其效果明顯優(yōu)于對(duì)比例I ;實(shí)施例7與實(shí)施例1-6相比說明中藥組合物各原料的添加重量份達(dá)到一定程度后繼續(xù)添加原料對(duì)產(chǎn)品功效沒有促進(jìn)作用。
[0118]黑色素含量測(cè)定結(jié)果，請(qǐng)參見圖3 ;從圖3中可看出:與對(duì)比例I所制得的中藥組合物相比，實(shí)施例1-7所 制備的中藥組合物可明顯促進(jìn)黑色素含量的增多，且效果明顯優(yōu)于對(duì)比例I。實(shí)施例7與實(shí)施例1-6相比說明中藥組合物各原料的添加重量份達(dá)到一定程度后繼續(xù)添加原料對(duì)產(chǎn)品功效沒有促進(jìn)作用。
[0119]實(shí)施例9穩(wěn)定性測(cè)試
[0120]一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br> [0121 ] 評(píng)價(jià)實(shí)施例1所制得的中藥組合物的穩(wěn)定性。
[0122]二、實(shí)驗(yàn)方法
[0123]按實(shí)施例1所述配方和方法，制得的中藥組合物600g，分別裝入6個(gè)100g容量的透明測(cè)試瓶中，于(20±1) °C、(45±1) °C、(5±1) °C做穩(wěn)定性測(cè)試。
[0124]三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0125]結(jié)果參見表1。
[0126]表1穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果表
[0127]
I ? ^ ^*測(cè)試時(shí)間
樣印?測(cè)試、狐度~ 2周I 3周~~
細(xì)TT ( 20士I )無明顯性無明顯性無明顯性無明顯性
& ν狀差異狀差異狀差異狀差異
?細(xì)TT ( 45士I )無明顯性無明顯性無明顯性無明顯性
耐… V狀差異狀差異狀差異狀差異
^堂如 -J, ( Von無明顯性無明顯性無明顯性無明顯性耐寒組2支(5 士 1)C|狀差狀差異狀差異狀差異[0128]從表1可看出實(shí)施例1的中藥組合物在常規(guī)的耐熱耐寒穩(wěn)定性測(cè)試中保持了良好的穩(wěn)定性，沒有沉淀析出、變色、渾濁等異常狀況，表明本發(fā)明中藥組合物具有良好的穩(wěn)定性。
[0129]實(shí)施例10
[0130]一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br> [0131]評(píng)價(jià)實(shí)施例1實(shí)際應(yīng)用中的黑發(fā)功效。
[0132]二、實(shí)驗(yàn)方法
[0133]用實(shí)施例1所制得的中藥組合物經(jīng)20個(gè)白發(fā)患者施用，進(jìn)行了長(zhǎng)期觀察。20例患者中，男10人，女10人，年齡最小26歲，最大45歲，平均年齡35歲。每日I次，治療時(shí)間為I年。
[0134]使用方法:洗凈頭發(fā)后處理到七成干，取適量本品揉搓脫發(fā)根部，再輕輕按摩3-5分鐘，用牛角梳梳理即可。
[0135]療效評(píng)定:白發(fā)全部變黑為痊愈，白發(fā)變黑大于80%為顯效，白發(fā)變黑大于30%為有效，治療變化前后變化不大為無效。
[0136]三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0137]20例患者使用實(shí)施例1的中藥組合物進(jìn)行治療，收到了比較滿意的療效，其中痊愈6例，顯效10例，有效I例，無效3例，治療總顯效率達(dá)到80%，說明實(shí)施例1所制得的中藥組合物具有良好的黑發(fā)功效，同時(shí)也可表明本發(fā)明中藥組合物具有良好的黑發(fā)功效。
[0138]以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，其特征在于，所述中藥組合物由下述重量份的原料制備而成:西洋參1-40份、邊條參1-40份、田七1-40份、紅花1-30份、何首烏1_30份、當(dāng)歸1_30份、玉灰蓉1-30份和烏桕1-30份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，其特征在于，所述中藥組合物由下述重量份的原料制備而成:西洋參10-20份、邊條參10-20份，田七5-10份、紅花10-20份、何首烏15-20份、當(dāng)歸10-20份、玉蓯蓉10-20份和烏桕15-20份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物，其特征在于，所述中藥組合物由下述重量份的原料制備而成:西洋參15份、邊條參20份，田七5份、紅花15份、何首烏20份、當(dāng)歸10份、玉蓯蓉15份、烏桕20份。
4.一種權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (O按權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述重量份，將何首烏干燥，粉碎，進(jìn)行超臨界CO2萃取，得何首烏活性物；所述超臨界CO2萃取的工藝參數(shù)為:在萃取爸中的萃取時(shí)間為5-6h,萃取釜的壓力為20-22Mpa，夾帶劑乙醇占萃取劑CO2的重量百分比為11_13% ;分離釜的壓力為5-8Mpa，溫度為 30-35°C，CO2 的流量為 20_22kg/h ； (2)于步驟(1)所得的何首烏活性物中加入體積分?jǐn)?shù)為45-55%的乙醇水溶液至何首烏原藥的重量，得何首烏活性溶液； (3)按權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述重量份，將西洋參、邊條參、田七、紅花、當(dāng)歸、玉蓯蓉和烏桕，干燥，混合，粉碎，得中藥混合物，按中藥混合物的重量加入10-15倍重量的體積分?jǐn)?shù)為45-55%的乙醇水溶液，冷浸后，在80-90°C條件下，于真空減壓回流罐中提取，得提取液，將提取液經(jīng)陶瓷復(fù)合膜微濾設(shè)備過濾，得濾液，再將濾液低溫保存2-3天后，濾布過濾，得澄清液； (4)將步驟(2)所得的何首烏活性溶液與步驟(3)所得的澄清液混勻，即可。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述陶瓷復(fù)合膜的管孔徑為100-200nm，所述濾布的孔徑為400-1000目。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述陶瓷復(fù)合膜的管孔徑為lOOnm，所述濾布的孔徑為1000目。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物的制備方法，其特征在于，步驟(1)和步驟(3)中所述粉碎的粒徑為40目以上。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物的制備方法，其特征在于，步驟(1)中在分離釜中分離的時(shí)間為3-5h。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述冷浸的時(shí)間為l_2h。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有黑發(fā)養(yǎng)發(fā)作用的中藥組合物的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述低溫為4-6°C。
【文檔編號(hào)】A61K36/704GK103735634SQ201410009493
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月8日
【發(fā)明者】張麗萍, 蔡義文, 楊廣群, 黎思結(jié) 申請(qǐng)人:廣州發(fā)元生物科技有限公司