蜈蚣三七提取物在制備痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用及其藥物的制作方法
【專利摘要】本申請(qǐng)公開了蜈蚣三七提取物在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用及其藥物組合物。所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七總皂苷。所述蜈蚣三七提取物用水煎法制備。經(jīng)藥理試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)證實(shí)其具有較好的治療痛風(fēng)作用，具備高效低毒的優(yōu)勢。蜈蚣三七提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠具有降低血清尿酸水平作用，且不是通過抑制黃嘌呤氧化酶的表達(dá)發(fā)揮治療效果的。蜈蚣三七提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠具有降低血清尿酸水平作用。
【專利說明】蜈蚣三七提取物在制備痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用及其藥物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及蜈蚣三七提取物的醫(yī)藥用途及其藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]痛風(fēng)(Gout)已成為嚴(yán)重威脅人類健康的代謝性疾病，近年的研究發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥(Hyperuricemia)不僅是痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)，同時(shí)與代謝紊亂綜合征密切相關(guān),是心血管疾病、高血壓、腎臟疾病等獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，聯(lián)合國將其列為21世紀(jì)的20大頑癥之一。隨著世界范圍內(nèi)痛風(fēng)發(fā)病率的不斷升高，對(duì)高尿酸血癥及痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制和防治途徑的越來越受到關(guān)注。
[0003]高尿血酸癥是痛風(fēng)主要的生化標(biāo)志，而痛風(fēng)是一組異質(zhì)性疾病，它是因長期的嘌呤代謝障礙而引起的血尿酸(UA)增高而導(dǎo)致的組織損傷性的遺傳或獲得性的代謝性疾病。臨床醫(yī)學(xué)上一般認(rèn)為當(dāng)機(jī)體內(nèi)服的血尿酸量高于416ttmol / L時(shí)便為高尿酸血癥，痛風(fēng)患者必然伴有著高尿血酸癥，且據(jù)研究發(fā)現(xiàn)高尿血酸癥與糖尿病、肥胖癥、高血壓病、高脂血癥等疾病呈正相關(guān)。而其中大約有5%~12%的聞尿酸血癥患者會(huì)最終發(fā)展成為痛風(fēng)。近年來，高尿血酸癥和痛風(fēng)的發(fā)病率日益盛高，而且，已經(jīng)成為現(xiàn)在的主要疾病之一，給社會(huì)帶來了巨大的壓力，成為現(xiàn)在科研研究的重要方向。
[0004]高尿酸血癥按形成的原因可以分為原發(fā)性和繼發(fā)性高尿酸血癥兩類，由此痛風(fēng)被分為原發(fā)性痛風(fēng)和繼發(fā)性痛風(fēng)，這是目前臨床上廣泛采用的一種簡單而又實(shí)用的初步分類方法。人和猿類缺乏尿酸酶(可使尿酸分解成尿囊素)，據(jù)推測是由于在進(jìn)化過程中經(jīng)基因突變而造成的自然選擇，失去了編碼尿酸酶的功能基因，尿酸是嘌呤在機(jī)體內(nèi)代謝的終產(chǎn)物。嘌呤合成代謝增強(qiáng)和/或尿酸排泄減少是痛風(fēng)患者血清尿酸增高的原發(fā)機(jī)制，血液中尿酸的濃度取決于尿酸的生成和排泄之間的平衡。人體內(nèi)尿酸有兩個(gè)來源，體內(nèi)氨基酸、磷酸核糖及其他小分子化合物合成或核酸分解代謝產(chǎn)生(內(nèi)源性)，約占體內(nèi)總尿酸的80%;從富含嘌呤或核蛋白的食物中核昔酸分解而來(外源性)，約占體內(nèi)總尿酸的20%。雖然高嘌呤飲食并非痛風(fēng)的原發(fā)病因， 但大量吸收嘌呤可使細(xì)胞外液尿酸水平迅速發(fā)生變化，這常常是痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性發(fā)作的誘因。
[0005]尿酸的生成包括主要途徑和補(bǔ)救途徑兩部分。主要途徑即機(jī)體利用非嘌呤的前體物質(zhì)合成尿酸的途徑。具體來說，即先由5-磷酸核糖在磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRPP合成酶)的作用下生成磷酸核糖焦磷酸(PRPP)，再與谷氨酞胺結(jié)合，通過谷氨酞胺轉(zhuǎn)移酶及腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(APRT)的作用生成1-氨基-5-磷酸核糖，然后陸續(xù)結(jié)合甘氨酸、天門冬氨酸等，經(jīng)過至少9個(gè)步驟，生成次黃嘌呤核苷酸(MP)。MP是一種重要的嘌呤核苷酸，它可以在酶的作用下繼續(xù)生成鳥嘌呤核苷酸(GMP)和腺嘌呤核苷酸(AMP)。最終均依靠黃嘌呤氧化酶(XOD)的作用生成尿酸。當(dāng)機(jī)體尿酸代謝的主要途徑受阻后，補(bǔ)救途徑就發(fā)揮主要作用，即依靠次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的作用，將次黃嘌呤、鳥嘌呤、腺嘌呤分別生成MP、GMP、AMP，繼續(xù)維持機(jī)體正常的尿酸代謝。XOD調(diào)控尿酸生成的最終環(huán)節(jié)，因此在高尿酸血癥的發(fā)病中占有重要的地位。有研究發(fā)現(xiàn)，無論是脂代謝的異常，還是尿酸代謝的異常都會(huì)伴有XOD的水平異常，這提示我們，由于XOD參與人體的核酸代謝，并可作用于多種底物，如嘌呤、嘧啶、蝶啶、雜環(huán)堿、醛類、脂肪酸和磷脂，因此，可以從XOD的變化入手探討體內(nèi)尿酸水平變化的原因。
[0006]目前臨床上治療痛風(fēng)和高尿血酸癥的西藥，有通過抑制黃嘌呤氧化酶活性達(dá)到降低血尿酸的效果的別嘌呤醇等，也有促進(jìn)血尿酸代謝的丙磺舒等。但是，以上藥物常出現(xiàn)過敏反應(yīng)、肝炎損害等不良反應(yīng)。而痛風(fēng)患者除伴有著高尿血酸癥外，還伴隨著關(guān)節(jié)處的炎癥，紅腫疼痛，也有古書言:“痛如虎嚙”，“痛風(fēng)痛有常處，其痛處渾身壯熱或赤腫灼熱”。因此痛風(fēng)患者在長期服用具有降低血尿酸藥物的同時(shí)也需要鎮(zhèn)痛，但是目前有效、經(jīng)濟(jì)、安全的降低UA且鎮(zhèn)痛的藥物較少。我國在運(yùn)用中草藥醫(yī)治痛風(fēng)病的方面有著悠久地歷史，但目前為止在臨床上能有效降低血尿酸的中藥制劑貧乏。所以，研究尋找新型的降血尿酸的藥物，特別是降血尿酸的中草藥的制劑，具有著深遠(yuǎn)的意義。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)部分中草藥不僅具有良好的鎮(zhèn)痛消炎的作用，也可以較好地降低血尿酸達(dá)到治療的效果。
[0007]蜈蟻三七(Anemone fiaccida Fr.Schmidt),又稱林蔭銀蓮花,系屬毛茛科銀蓮花屬多年生的植物，多以根莖入藥，其藥理作用有抗炎鎮(zhèn)痛、解熱祛風(fēng)濕等作用，其有效成分為三萜皂苷類。因此，本研究中從蜈蚣三七根莖中提取分離出總皂苷，進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)，觀察蜈蚣三七提取物對(duì)大鼠高尿酸血癥的影響，探究其治療意義和可能的作用機(jī)理。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的旨在提供蜈蚣三七提取物在醫(yī)療領(lǐng)域的新應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明的一個(gè)方面提供了蜈蚣三七提取物在制備預(yù)防或治療預(yù)防或治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，包含蜈蚣三七提取物或由蜈蚣三七提取物制得。
[0011]所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七總皂苷。
[0012]優(yōu)選地，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制備，水煎法可提取足以預(yù)防或治療痛風(fēng)的成分。
[0013]優(yōu)選地，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍質(zhì)量的水煎煮水蜈蚣三七藥材3~5次，每次I~4h ;然后過濾，濃縮濾液，放冷；加乙醇使含醇容量為40~80 %，攪勻后靜置；然后過濾，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，再用50~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，于真空下干燥，粉碎、過篩即得。
[0014]所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物的劑型可為口服制劑。
[0015]本發(fā)明所述蜈蚣三七提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠具有降低血清尿酸水平作用，且不是通過抑制黃嘌呤氧化酶的表達(dá)發(fā)揮治療效果的。此外，本發(fā)明所述蜈蚣三七提取物顯著地減少高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，而對(duì)正常小鼠的血清尿酸水平無顯著性影響。
【具體實(shí)施方式】
[0016]發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)了蜈蚣三七提取物在預(yù)防或治療痛風(fēng)中的應(yīng)用效果。
[0017]為了更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，本發(fā)明通過實(shí)施例的方式說明本發(fā)明藥物對(duì)痛風(fēng)抑制作用的藥理試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)結(jié)果。本發(fā)明的這些實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0018]一、蜈蚣三七提取物對(duì)大鼠高尿酸血癥的影響
[0019]痛風(fēng)在近年來隨著飲食水平的提高，環(huán)境質(zhì)量的降低等多種原因，逐漸成為一種常見的危害人們健康的一種代謝性疾病。高尿血酸癥是痛風(fēng)發(fā)病的重要的生化標(biāo)志，所以防治痛風(fēng)必須控制高尿血酸癥，在實(shí)驗(yàn)中建立高尿血酸動(dòng)物模型是很重要的。本實(shí)驗(yàn)中采用大鼠來進(jìn)行高尿血酸癥的模型，雖然除了人類以外的哺乳動(dòng)物，包括大鼠在內(nèi)體內(nèi)都存在著尿酸氧化酶(urateoxidase),尿酸在體內(nèi)進(jìn)一步分解為尿囊素,具有水溶性,不會(huì)在體內(nèi)蓄積產(chǎn)生結(jié)晶，不會(huì)造成高尿血酸癥，所以造模并不容易，可是大鼠是平時(shí)藥理實(shí)驗(yàn)最常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，容易獲得，便于飼養(yǎng)，品種穩(wěn)定，所以用大鼠通過生化的方法建立高尿血酸癥的模型，目前在國內(nèi)外依舊是相當(dāng)普遍的，所以在本實(shí)驗(yàn)中采用大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
[0020]I實(shí)驗(yàn)材料
[0021]1.1 動(dòng)物
[0022]健康Wistar大鼠，雄性,體重150~180g,由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，合格證號(hào):SCXK(魯)2008-0002。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，除實(shí)驗(yàn)中造模的特殊要求外，動(dòng)物均處于自由飲水和飲食的狀態(tài)，飼養(yǎng)室溫22 ± I °C，飼養(yǎng)濕度55 ± 5°C。
[0023]1.2藥品和試劑
[0024]蜈蚣三七提取物(總皂苷含量約60% ):常規(guī)水煎法制備，取蜈蚣三七藥材，加2~8倍質(zhì)量的水煎煮3~5次，每次I~4h，濾過，合并濾液，將濾液濃縮成60°C相對(duì)密度1.04~~1.1的液體，放冷，加乙醇使含醇容量為40~80%，攪勻，靜置12h，濾過，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏，加水溶解，澄清，上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，棄去,再用50~80 %乙醇洗脫， 收集洗脫液，回收乙醇，濃縮、于真空下干燥12h，粉碎、過60目篩，即得蜈蚣三七提取物。所述蜈蚣三七提取物為棕黃色粉末，用蒸餾水配成所需濃度。
[0025]羧甲基纖維素鈉(CMC-Na):分析純，由中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑站提供。
[0026]別嘌呤醇(Allopurinol):批號(hào)11M1681V,由 Sigma-AIdrich 公司提供，用 0.5%CMC-Na配成所需濃度。
[0027]氧嗪酸鉀鹽(Oxonicacid potassium salt,純度 97%):批號(hào):STBC1486V,由Sigma-Aldrich公司提供，用0.5% CMC-Na配成適當(dāng)濃度。
[0028]尿酸試劑盒(尿酸酶法):購自上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司。
[0029]黃嘌呤氧化酶試劑盒(xanthine oxidase, X0D):購自南京建成生物工程研究所。
[0030]考馬斯亮藍(lán)蛋白定量測試盒:購自南京建成生物工程研究所。
[0031]1.3實(shí)驗(yàn)儀器
[0032]CJ-2F醫(yī)用凈化工作臺(tái):蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司；
[0033]AU400全自動(dòng)生化分析儀:日本奧林巴斯公司；
[0034]DY89-1型電動(dòng)勻漿機(jī):寧波新之生物科技股份有限公司；
[0035]KDC-160HR型高速冷凍離心機(jī):科大創(chuàng)新股份有限公司；
[0036]分析天平，恒溫水浴鍋，分光光度計(jì)。
[0037]2實(shí)驗(yàn)方法
[0038]2.1蜈蚣三七提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠尿酸的影響[0039]2.1.1分組與給藥
[0040]雄性大鼠41只，按體重隨機(jī)分組:正常組、模型組、蜈蚣三七提取物高、中、低劑量組(分別為288mg / kg、144mg / kg和72mg/kg)、陽性對(duì)照組(別嘌呤醇IOmg / kg),共6組,每組6-7只。灌胃給藥,每天I次,連續(xù)14天。給藥體積按20mL / kg,給藥前均稱量大鼠體重一次，正常組和模型組均給予等體積蒸餾水。
[0041]灌胃給藥10天后，各組大鼠開始每天腹腔注射氧嗪酸鉀鹽200mg / kg，正常組腹腔注射等體積的0.5% CMC-Na。末次給藥Ih后，除正常組外，各組大鼠腹腔注射氧嗪酸鉀鹽200mg / kg。注射后2h各組均摘眼球取血(取血前12h禁食不禁水)，室溫下靜置lh，在3000r / min離心10min，取血清置于4°C保存。取血后的大鼠脫頸椎處死，用眼科剪摘取部分心臟，稱重，在冰水浴的生理鹽水中漂洗除去血液，濾紙拭干，置于_20°C保存。
[0042]2.1.2測試指標(biāo)
[0043]2.1.2.1血清尿酸:取血清200ul，按尿酸試劑盒說明書操作，用奧林巴斯AU400全自動(dòng)生化分析儀測定血尿酸水平。
[0044]2.1.2.2肝臟黃嘌呤氧化酶(XOD):取肝臟，稱量，在倒置玻璃勻漿器中，加入精確體積(15倍)的冰浴生理鹽水，在冰水浴中用電動(dòng)勻漿機(jī)研磨勻漿，在低溫高速離心機(jī)中4000r / min離心15min,再取上清液,按蛋白定量試劑盒說明書操作，分光光度計(jì)595nm
處，測量計(jì)算出肝臟蛋白濃度，計(jì)算公式:
[0045]
【權(quán)利要求】
1.蜈蚣三七提取物在制備預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七總皂苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制備。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍質(zhì)量的水煎煮水蜈蚣三七藥材3~5次，每次I~4h ;然后過濾，濃縮濾液，放冷；加乙醇使含醇容量為40~80%，攪勻后靜置；然后過濾，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，再用50~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，于真空下干燥，粉碎、過篩即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述蜈蚣三七提取物的劑型為口服劑型。
6.一種預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，包含蜈蚣三七提取物或由蜈蚣三七提取物制得。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，其中，所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七總皂苷。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，其中，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制備。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，其中，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍質(zhì)量的水煎煮水蜈蚣三七藥材3~5次，每次I~4h ;然后過濾，濃縮濾液，放冷；加乙醇使含醇容量為40~80%，攪勻后靜置；然后過濾，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，再用50~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，于真空下干燥，粉碎、過篩即得。`
10.根據(jù)權(quán)利要求6~9的任一項(xiàng)所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，其特征在于劑型為口服制劑。
【文檔編號(hào)】A61P19/06GK103877177SQ201410084518
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2014年3月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月10日
【發(fā)明者】邴飛虹, 廖一帆, 江哲遒, 李婧 申請(qǐng)人:武漢道一堂中醫(yī)醫(yī)院有限公司