一種含瑪咖的植物組合物提取方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含瑪咖的植物組合物提取方法，由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】一種含瑪咖的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種含瑪咖的植物組合物提取方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]含瑪咖的植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時，合并煎液，濾過，濃縮成稠膏，制粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得，能抗疲勞。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含瑪咖的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報道，而采用水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含瑪咖的植物組合物提取方法。
[0005]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的:
[0007]一種含瑪咖的植物組合物提取方法，植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W,萃取2次,每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0008]上述一種含瑪咖的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0009]一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖藥物中的應(yīng)用，含瑪咖的植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010]上述一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖藥物中的應(yīng)用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011 ] 現(xiàn)有技術(shù)中，含瑪咖的植物組合物每片0.25g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明制備成的含瑪咖的植物組 合物每片0.25g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2片，一日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量?！揪唧w實施方式】
[0012]以下通過實施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0013]實施例1
[0014]取瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每片0.25g。
[0015]實施例2
[0016]取瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。 [0017]實施例3
[0018]取瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019]本發(fā)明中瑪咖為十字花科植物瑪卡獨行菜的地下部分根，其余為藥典品種。
[0020]實施例4:含瑪咖的植物組合物抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖的實驗研究資料I實驗材料
[0021]1.1實驗用細胞株
[0022]大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞，南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0023]1.2實驗藥物
[0024]研究藥物:本發(fā)明含瑪咖的植物組合物:按實施例1方法制備。
[0025]藥液儲液:稱取IOOmg含瑪咖的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500μ1 doff管分裝，-20°c存儲，同時0.2μπι濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。1.3實驗試劑
[0026]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號:2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批號:2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號:080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ; PBS (實驗室自配)；1.4實驗器材
[0027]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRA MAX190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號:3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實驗設(shè)備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠型號:ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIPORE型號:SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0028]2實驗方法
[0029]I)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進行常規(guī)培養(yǎng)(10cm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細胞生長至對數(shù)期時，收集細胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細胞懸液濃度3X 104個/ml。2)將細胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細胞培養(yǎng)箱中(37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0030]3)根據(jù)細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入含瑪咖的植物組合物溶液，繼續(xù)培養(yǎng) 24h。
[0031]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0032]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設(shè)置本底(不加細胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。
[0033]7)結(jié)果以藥物對 細胞的抑制率表示:
[0034]細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復(fù)3次。
[0035]3統(tǒng)計處理
[0036]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0037]4實驗結(jié)果
[0038]MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達到5mg/ml時，對大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0.01)，當(dāng)劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0039]表1含瑪咖的植物組合物對大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖抑制影響研究
[0040]這土 SI〕)[0041]
【權(quán)利要求】
1.一種含瑪咖的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g,丹參50g作為原料藥制成,制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥,粉碎,加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含瑪咖的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
3.一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于含瑪咖的植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提 取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【文檔編號】A61K36/8969GK103784738SQ201410084330
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年3月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月10日
【發(fā)明者】李正梅 申請人:李正梅