三七葉總皂苷的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種三七葉總皂苷的制備方法，屬于天然藥物提取【技術(shù)領(lǐng)域】。三七葉加溶劑超聲波逆流連續(xù)提取，過(guò)濾，收集濾液，濃縮成清膏，加天然澄清劑澄清，離心后澄清溶液加入乙醇使其的含乙醇量為30-50%，進(jìn)行醇沉；醇沉澄清液經(jīng)脫糖樹(shù)脂柱純化，用不同濃度乙醇洗脫，脫糖后再經(jīng)陰離子交換樹(shù)脂脫色，最后經(jīng)濃縮，微波干燥制備得到三七葉總皂苷。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于所得總皂苷產(chǎn)品顏色為類(lèi)白色，粉末質(zhì)地疏松，總苷收率為8%以上，含量不低于90%（UV）以上，主要含Rb3、Rc、Fc、Fa等成分，其中Rb3含量≥40%（HPLC）；工藝簡(jiǎn)單，利于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，產(chǎn)品質(zhì)量得到較大幅度的提高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】三七葉總皂苷的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及三七葉總皂苷的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]三Al{Panaxnotoginseng (Burk.) F.H.Chen)為著名中藥，通常以根入藥。三七葉性溫，味辛，民間常為茶飲。新鮮的嫩葉可作蔬菜食用?！侗静菥V目》稱(chēng)三七葉“治折傷跌撲出血，敷之即止，青腫經(jīng)夜即散，余功同根”?，F(xiàn)代研究表明三七葉有止血、消腫、定痛等作用。
[0003]上世紀(jì)80年代以來(lái)，對(duì)三七葉的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)三七葉富含達(dá)瑪燒型原人參二醇型(protopanxadiol type)(簡(jiǎn)稱(chēng)二醇組)阜苷，并含有微量的達(dá)瑪燒型原人參三醇型(protopanxatriol type)(簡(jiǎn)稱(chēng)三醇組)阜苷和黃酮類(lèi)化合物。從中先后分離得到20余個(gè)化合物,包括:人參阜苷(ginsenoside) Rb3, Rb1, Re, Rd,Rh1, Rh2, Rg3, Rg1, Re, F2, C-K, MC,三七皂苷(notoginsenoside) R1, Fa, Fb, Fe,七葉膽苷(gypenoside) XIII, IX, XVII,以及甘草素和芹糖甘草苷等(李海舟，張穎君，楊崇仁.三七葉化學(xué)成分的進(jìn)一步研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2006 (18):549-554)。
[0004]三七葉皂苷具有抑制血小板聚集、改善微循環(huán)、降低血脂、抗心律失常、抗心絞痛、抗腦缺血、抗炎、鎮(zhèn)靜安神和抗衰老作等作用。其中主要的活性物質(zhì)是Rb3，具有鎮(zhèn)靜催眠作用。目前葉苷在臨床上被用于改善神經(jīng)功能，治療失眠以及緩和焦慮等，早在上世紀(jì)80年代就以三七葉皂苷 為原料開(kāi)發(fā)了天然藥物“七葉神安片”，用于神經(jīng)衰弱、安神鎮(zhèn)靜和偏頭痛等病癥，有顯著的臨床療效，已收載于《中華人民共和國(guó)藥典》(2010)并列為國(guó)家中藥保護(hù)品種。近年來(lái)，三七葉的藥理活性在傳統(tǒng)應(yīng)用的基礎(chǔ)上開(kāi)展了深入的研究，又證明了三七葉總阜苷有抗憂(yōu)郁的作用(Hui Xiang, Yingxue Liu, Baibing Zhang, et al.Theantidepressant effects and mechanism of action of total saponins from thecaudexes and leaves of Panax notoginseng in animal models of depression[J].Phytomedicine，2011:731-738)。三七葉顯著的藥理活性提示我們要進(jìn)行深入研究，在原有技術(shù)層次較低的加工品基礎(chǔ)上進(jìn)一步開(kāi)發(fā)對(duì)其產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用，將會(huì)具有很大的意義。
[0005]目前三七葉總皂苷的提取工藝有:水提取法和醇提取法，其精制方法采用大孔樹(shù)脂純化，或者使用有機(jī)溶劑正丁醇萃取。2010版藥典規(guī)定三七葉總皂苷的含量以Rb3計(jì)不得低于10%。而已有報(bào)道的三七葉皂苷提取工藝所得產(chǎn)品沒(méi)有強(qiáng)調(diào)葉苷中的指標(biāo)性成分Rb3的含量，沒(méi)有針對(duì)性地富集Rb3，多以總皂苷的總含量做為質(zhì)量好壞的依據(jù)，不能保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性與質(zhì)量的可靠性。同時(shí)在使用樹(shù)脂純化時(shí)，樣品對(duì)樹(shù)脂的污染較為嚴(yán)重，樹(shù)脂使用壽命較短。因此如何克服現(xiàn)有技術(shù)的不足是目前天然藥物提取【技術(shù)領(lǐng)域】亟需解決的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種三七葉總皂苷的制備方法。[0007]本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種三七葉總皂苷的制備方法，包括如下步驟:
步驟(1):將三七葉粉碎，加入溶劑進(jìn)行提取，得到提取液；
步驟(2):用澄清劑將步驟(1)得到的提取液澄清后，醇沉，然后用大孔吸附樹(shù)脂柱層析脫糖，得到的洗脫液再用陰離子交換樹(shù)脂柱層析脫色，最后經(jīng)濃縮、干燥，即得三七葉總皂苷;
步驟(1)中所述的溶劑為乙醇；
所述的脫糖洗脫時(shí)，先用水沖洗至流出液為無(wú)色，再用2-3倍柱體積的20-30%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)不小于于80%的乙醇洗脫，得到洗脫液。
[0008]所述的三七的葉莖質(zhì)量比不低于3/7。
[0009]所述的步驟(1)中的溶劑為體積分?jǐn)?shù)為70-80%的乙醇溶液。
[0010]所述的步驟(1)中提取的方式為超聲波逆流連續(xù)提取。[0011]所述的步驟(2)中的澄清劑為天然澄清劑。
[0012]進(jìn)一步，優(yōu)選的是所述的步驟(2)中的澄清劑為ZTC 1+1、明膠或殼聚糖。
[0013]所述的醇沉加入乙醇的量為使澄清液的含乙醇量為30~50%。
[0014]所述的大孔吸附樹(shù)脂為聚苯乙烯型大孔吸附樹(shù)脂。
[0015]步驟(2)中所述的采用微波干燥。
[0016]所述的三七葉總皂苷的制備方法，包括如下步驟:
步驟(1):將三七葉粉碎，加入70-80%乙醇，超聲波逆流連續(xù)提取60min，收集提取液，過(guò)濾，濃縮至清膏；
步驟(2):向步驟(1)得到的清膏中加入水使其密度為1.08 (60°C)，加熱至75-78 °C，按ηιΞ?Ι^:v^--jB=1°00g:24~26ml加入天然澄清劑B,攪拌至混合均勻，再升溫至82_85°C時(shí)，加入天然澄清劑A，天然澄清劑A加入量為天然澄清劑B的一半，攪拌至混合均勻，降至室溫靜止過(guò)夜，離心，得到澄清溶液；將澄清溶液濃縮至密度為1.08 (60°C)，加入乙醇使其含乙醇量為30-50%，攪拌至混合均勻，室溫靜止過(guò)夜，離心，得到醇沉澄清液；醇沉澄清液經(jīng)濃縮至無(wú)醇味，按m
三七葉:V純化水=

1000g:6.5^7.5L加入純化水稀釋?zhuān)玫较♂屢?，將稀釋液?0-101、0六-201、01400、0六0-40、六05-5、冊(cè)0-500、011130、父六0-2、父六0-4、0131011或六8-8型大孔吸附樹(shù)脂柱，其中大孔吸附樹(shù)脂與稀釋液的重量比為1:10-20，柱徑與柱高比為1:8-10，先用水洗至流出液為無(wú)色，再用2-3倍柱體積的20-30%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)不小于80%的乙醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液上D941、D280、D296、D900、D396、D390、D311或D314型陰離子交換樹(shù)脂柱脫色，收集流出的脫色藥液，濃縮，微波干燥，即得三七葉總皂苷。
[0017]三七葉原料經(jīng)適當(dāng)粉碎，用一定濃度的乙醇作溶劑提取，提取液經(jīng)澄清，醇沉，脫糖，脫色、干燥等工藝制備而成。所制備的總皂苷收率為8%以上，總苷含量≥90%以上(UV)，主要含Rb3、Re、Fe、Fa等成分，其中Rb3含量≥40%(HPLC)。
[0018]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果為:(I)本發(fā)明經(jīng)過(guò)工藝研究，優(yōu)化出了一條三七葉總皂苷最優(yōu)工藝路線，該路線下三七葉總皂苷收率高，主要的藥理活性成分Rb3富集程度和含量也較高。；所制備得到的總皂苷產(chǎn)品類(lèi)白色，，粉末質(zhì)地疏松?？傑帐章蕿?%以上，含量不低于90% (UV)，主要含Rb3、Re、Fe、Fa等成分，其中Rb3含量≥40% (HPLC) ； (2)和已有制備方法相比，本發(fā)明工藝采用超聲波逆流連續(xù)提取，有別于傳統(tǒng)的熱回流提取，提取溫度低、效率高、耗時(shí)少，利于產(chǎn)業(yè)化低成本、高效率、高質(zhì)量生產(chǎn)；(3)和已有制備方法相比，該工藝中采用前處理加澄清劑澄清、醇沉除雜，之后進(jìn)樹(shù)脂柱用乙醇梯度洗脫，結(jié)合離子交換樹(shù)脂脫色的方法；工藝過(guò)程中因在上樹(shù)脂柱前進(jìn)行了相應(yīng)的澄清、醇沉除雜處理，極大程度地減少了含大量雜質(zhì)、顏色較深的藥液對(duì)樹(shù)脂柱的污染，延長(zhǎng)了樹(shù)脂的使用壽命；
(4)該工藝所制備得到的總皂苷制成制劑可用于改善神經(jīng)功能，治療失眠以及緩和焦慮等，用于神經(jīng)衰弱、安神鎮(zhèn)靜和偏頭痛等病癥。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1所制備的三七葉總皂苷HPLC圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0021]實(shí)施例1
三七葉總皂苷的制備方法，包括如下步驟:
步驟(1):將30kg三七葉粉碎，加質(zhì)量為三七葉4倍的70%乙醇，超聲波逆流連續(xù)提取60min，收集提取液，過(guò) 濾，濃縮至清膏，清膏相對(duì)密度為1.2 (60°C );其中，所述的三七的葉莖質(zhì)量比為3/7 ；
步驟(2):向步驟(1)得到的清膏中加入水使其密度為1.08 (60°0，加熱至75°〇，加入750 ml明膠，攪拌至混合均勻，再升溫至82°C時(shí)，加入375 ml殼聚糖，攪拌至混合均勻，降至室溫靜止過(guò)夜，離心，得到澄清溶液；
將澄清溶液濃縮至密度為1.08 (60°C)，加入乙醇使其的含乙醇量為30%，攪拌至混合均勻，室溫靜止過(guò)夜，離心，得到醇沉澄清液；
醇沉澄清液經(jīng)濃縮至無(wú)醇味，密度為1.08 (60°C)，按m三七葉:v純化水=1000g:6.5L加入純化水稀釋?zhuān)玫较♂屢?，將稀釋液上DM130型大孔吸附樹(shù)脂柱，其中大孔吸附樹(shù)脂與稀釋液的重量比為1:10，柱徑與柱高比為1: 8，先用水洗至流出液為無(wú)色，再用2倍柱體積的30%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇全部洗脫，收集洗脫液；將洗脫液上D941型陰離子交換樹(shù)脂柱脫色，調(diào)整流速至280ml/min，收集流出的脫色藥液，濃縮至密度為1.08 (60°C)，微波干燥，即得三七葉總皂苷2.60kg，總苷含量95.2% (UV), Rb3含量為42.3% (HPLC)0
[0022]實(shí)施例2
三七葉總皂苷的制備方法，包括如下步驟:
步驟(1):將15kg三七葉粉碎，加質(zhì)量為三七葉5倍的70%乙醇，超聲波逆流連續(xù)提取60min，收集提取液，過(guò)濾，濃縮至清膏，清膏相對(duì)密度為1.2 (60°C );其中，所述的三七的葉莖質(zhì)量比為1/2 ；
步驟(2):向步驟(1)得到的清膏中加入水使其密度為1.10 (60°0，加熱至78°〇，加入375 ml ZTC 1+1，攪拌至混合均勻，再升溫至85°C時(shí)，加入187.5 ml明膠，攪拌至混合均勻，降至室溫靜止過(guò)夜，離心，得到澄清溶液；
將澄清溶液濃縮至密度為1.08 (60°C)，加入乙醇使其的含乙醇量為40%，攪拌至混合均勻，室溫靜止過(guò)夜，離心，得到醇沉澄清液；
醇沉澄清液經(jīng)濃縮至無(wú)醇味，密度為1.08 (60°C)，按m三七葉:v純化水=1000g:7.5L加入純化水稀釋?zhuān)玫较♂屢?，將稀釋液上D-101型大孔吸附樹(shù)脂柱，其中大孔吸附樹(shù)脂與稀釋液的重量比為1:20，柱徑與柱高比為1:10，先用水洗至流出液為無(wú)色，再用3倍柱體積的30%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇全部洗脫，收集洗脫液；將洗脫液上D941型陰離子交換樹(shù)脂柱脫色，調(diào)整流速至250ml/min，收集流出的脫色藥液，濃縮至密度為1.08 (60°C)，微波干燥，即得三七葉總皂苷1.25kg，總苷含量92.6% (UV)，Rb3含量為43.2% (HPLC)0
[0023]實(shí)施例3
三七葉總皂苷的制備方法，包括如下步驟:
步驟(1):將20kg三七葉粉碎，加質(zhì)量為三七葉4.5倍的80%乙醇，超聲波逆流連續(xù)提取60min，收集提取液，過(guò)濾，濃縮至清膏，清膏相對(duì)密度為1.2 (60°C );其中，所述的三七的葉莖質(zhì)量比為2/3 ；
步驟(2):向步驟(1)得到的清膏中加入水使其密度為1.08 (60°0，加熱至78°〇，加入500 ml ZTC 1+1，攪拌至混合均勻，再升溫至85°C時(shí)，加入250ml殼聚糖，攪拌至混合均勻，降至室溫靜止過(guò)夜，離心，得到澄清溶液；
將澄清溶液濃縮至密度為1.08 (60°C)，加入乙醇使其的含乙醇量為50%，攪拌至混合均勻，室溫靜止過(guò)夜，離 心，得到醇沉澄清液；
醇沉澄清液經(jīng)濃縮至無(wú)醇味，密度為1.08 (60°C)，按m三七葉:v純化水=1000g:7L加入純化水稀釋?zhuān)玫较♂屢?，將稀釋液上DM130型大孔吸附樹(shù)脂柱，其中大孔吸附樹(shù)脂與稀釋液的重量比為1:15，柱徑與柱高比為1: 9，先用水洗至流出液為無(wú)色，再用2.5倍柱體積的30%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇全部洗脫，收集洗脫液；將洗脫液上D941型陰離子交換樹(shù)脂柱脫色，調(diào)整流速至200ml/min，收集流出的脫色藥液，濃縮至密度為1.08 (60°C)，微波干燥，即得三七葉總皂苷1.70kg，總苷含量96.6% (UV), Rb3含量為44.2% (HPLC)0
[0024]實(shí)施例4
三七葉總皂苷的制備方法，包括如下步驟:
步驟(1):將20kg三七葉粉碎，加質(zhì)量為三七葉4倍的75%乙醇，超聲波逆流連續(xù)提取60min，收集提取液，過(guò)濾，濃縮至清膏，清膏相對(duì)密度為1.2 (60°C );其中，所述的三七的葉莖質(zhì)量比為4/7 ；
步驟(2):向步驟(1)得到的清膏中加入水使其密度為1.08 (60°0，加熱至76°〇，加入480 ml ZTC 1+1，攪拌至混合均勻，再升溫至83°C時(shí)，加入240 ml ZTC 1+1，攪拌至混合均勻，降至室溫靜止過(guò)夜，離心，得到澄清溶液；
將澄清溶液濃縮至密度為1.08 (60°C)，加入乙醇使其的含乙醇量為45%，攪拌至混合均勻，室溫靜止過(guò)夜，離心，得到醇沉澄清液；
醇沉澄清液經(jīng)濃縮至無(wú)醇味，密度為1.08 (60°C)，按m三七葉:v純化水=1000g:7L加入純化水稀釋?zhuān)玫较♂屢?，將稀釋液上DA-201型大孔吸附樹(shù)脂柱，其中大孔吸附樹(shù)脂與稀釋液的重量比為1:13，柱徑與柱高比為1:9，先用水洗至流出液為無(wú)色，再用2.5倍柱體積的，20%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇全部洗脫，收集洗脫液；將洗脫液上D280型陰離子交換樹(shù)脂柱脫色，調(diào)整流速至240ml/min，收集流出的脫色藥液，濃縮至密度為1.08 (60°C)，微波干燥，即得三七葉總皂苷1.72kg，總苷含量96.2% (爪0，詘3含量為 44.3% (HPLC)0
[0025]實(shí)施例5
三七葉總皂苷的制備方法，包括如下步驟:
步驟(1):將20kg三七葉粉碎，加質(zhì)量為三七葉4.5倍的70%乙醇，超聲波逆流連續(xù)提取60min，收集提取液，過(guò)濾，濃縮至清膏，清膏相對(duì)密度為1.2 (60°C );其中，所述的三七的葉莖質(zhì)量比為5/7 ；
步驟(2):向步驟(1)得到的清膏中加入水使其密度為1.08 (60°0，加熱至77°〇，加入520 ml明膠，攪拌至混合均勻，再升溫至84°C時(shí)，加入260 ml明膠，攪拌至混合均勻，降至室溫靜止過(guò)夜，離心，得到澄清溶液；
將澄清溶液濃縮至密度為1.08 (60°C)，加入乙醇使其的含乙醇量為45%，攪拌至混合均勻，室溫靜止過(guò)夜，離心，得到醇沉澄清液；
醇沉澄清液經(jīng)濃縮至無(wú)醇味，密度為1.08 (60°C)，按m三七葉:v純化水=1000g:7.2L加入純化水稀釋?zhuān)玫较♂屢?，將稀釋液上D1400型大孔吸附樹(shù)脂柱，其中大孔吸附樹(shù)脂與稀釋液的重量比為1:18，柱徑與柱高比為1:9.5，先用水洗至流出液為無(wú)色，再用2.4倍柱體積的25%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)為88%的乙醇全部洗脫，收集洗脫液；將洗脫液上D296型陰離子交換樹(shù)脂柱脫色，調(diào)整流速至260ml/min，收集流出的脫色藥液，濃縮至密度為1.08 (60°C)， 微波干燥，即得三七葉總皂苷1.68kg，總苷含量95.7% (UV)，Rb3含量為 43.5% (HPLC)0
[0026]實(shí)施例6
三七葉總皂苷的制備方法，包括如下步驟:
步驟(1):將20kg三七葉粉碎，加質(zhì)量為三七葉4倍的80%乙醇，超聲波逆流連續(xù)提取60min，收集提取液，過(guò)濾，濃縮至清膏，清膏相對(duì)密度為1.2 (60°C );其中，所述的三七的葉莖質(zhì)量比為4/7 ；
步驟(2):向步驟(1)得到的清膏中加入水使其密度為1.08 (60°0，加熱至77°〇，加入500 ml明膠，攪拌至混合均勻，再升溫至84°C時(shí)，加入250 ml ZTC 1+1，攪拌至混合均勻，降至室溫靜止過(guò)夜，離心，得到澄清溶液；
將澄清溶液濃縮至密度為1.08 (60°C)，加入乙醇使其的含乙醇量為35%，攪拌至混合均勻，室溫靜止過(guò)夜，離心，得到醇沉澄清液；
醇沉澄清液經(jīng)濃縮至無(wú)醇味，密度為1.08 (60°C)，按m三七葉:v純化水=1000g:6.8L加入純化水稀釋?zhuān)玫较♂屢海瑢⑾♂屢荷螩AD-40型大孔吸附樹(shù)脂柱，其中大孔吸附樹(shù)脂與稀釋液的重量比為1:17，柱徑與柱高比為1:9，先用水洗至流出液為無(wú)色，再用2.7倍柱體積的26%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)為92%的乙醇全部洗脫，收集洗脫液；將洗脫液上D900型陰離子交換樹(shù)脂柱脫色，調(diào)整流速至270ml/min，收集流出的脫色藥液，濃縮至密度為1.08 (60°C)，微波干燥，即得三七葉總皂苷1.73kg，總苷含量94.8% (UV)，Rb3含量為 43.2% (HPLC)0
[0027]實(shí)施例7
本實(shí)施例的三七葉總皂苷的制備方法與實(shí)施例6的區(qū)別在于步驟(2)中天然澄清劑A為殼聚糖，天然澄清劑B為殼聚糖，脫糖采用ADS-5型大孔吸附樹(shù)脂柱，脫色采用D396型陰離子交換樹(shù)脂柱；
得三七葉總皂苷1.66kg，總苷含量94.3% (UV), Rb3含量為44.2% (HPLC)0
[0028]實(shí)施例8
本實(shí)施例的三七葉總皂苷的制備方法與實(shí)施例6的區(qū)別在于步驟(2)中天然澄清劑A為殼聚糖，天然澄清劑B為明膠，脫糖采用HPD-500型大孔吸附樹(shù)脂柱，脫色采用D390型陰離子交換樹(shù)脂柱；
得三七葉總皂苷1.71kg，總苷含量95.4% (UV), Rb3含量為43.8% (HPLC)0
[0029]實(shí)施例9 本實(shí)施例的三七葉總皂苷的制備方法與實(shí)施例6的區(qū)別在于步驟(2)中天然澄清劑A為殼聚糖，天然澄清劑B為ZTC 1+1，脫糖采用ADS-5型大孔吸附樹(shù)脂柱，脫色采用D396型陰離子交換樹(shù)脂柱；
得三七葉總皂苷1.69kg,總苷含量95.0% (UV), Rb3含量為43.6% (HPLC)0
[0030]實(shí)施例10
本實(shí)施例的三七葉總皂苷的制備方法與實(shí)施例9的區(qū)別在于步驟(2)中脫糖采用XAD-2型大孔吸附樹(shù)脂柱，脫色采用D311型陰離子交換樹(shù)脂柱；
得三七葉總皂苷1.67kg，總苷含量94.5% (UV), Rb3含量為45.1% (HPLC)0
[0031]實(shí)施例11
本實(shí)施例的三七葉總皂苷的制備方法與實(shí)施例9的區(qū)別在于步驟(2)中脫糖采用XAD-4型大孔吸附樹(shù)脂柱，脫色采用D314型陰離子交換樹(shù)脂柱；
得三七葉總皂苷1.74kg，總苷含量95.5% (UV), Rb3含量為45.4% (HPLC)0
[0032]實(shí)施例12
本實(shí)施例的三七葉總皂苷的制備方法與實(shí)施例9的區(qū)別在于步驟(2)中脫糖采用Diaion型大孔吸附樹(shù)脂柱，脫色采用D314型陰離子交換樹(shù)脂柱；
得三七葉總皂苷1.65kg，總苷含量94.4% (UV), Rb3含量為44.9% (HPLC)0
[0033]實(shí)施例13
本實(shí)施例的三七葉總皂苷的制備方法與實(shí)施例9的區(qū)別在于步驟(2)中脫糖采用AB-8型大孔吸附樹(shù)脂柱，脫色采用D314型陰離子交換樹(shù)脂柱；
得三七葉總皂苷1.72kg，總苷含量93.7% (UV), Rb3含量為43.9% (HPLC)0
【權(quán)利要求】
1.一種三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于包括如下步驟: 步驟(1):將三七葉粉碎，加入溶劑進(jìn)行提取，得到提取液； 步驟(2):用澄清劑將步驟(1)得到的提取液澄清后，醇沉，然后用大孔吸附樹(shù)脂柱層析脫糖，得到的洗脫液再用陰離子交換樹(shù)脂柱層析脫色，最后經(jīng)濃縮、干燥，即得三七葉總皂苷; 步驟(1)中所述的溶劑為乙醇； 所述的脫糖洗脫時(shí)，先用水沖洗至流出液為無(wú)色，再用2-3倍柱體積的20-30%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)不小于80%的乙醇洗脫，得到洗脫液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于所述的三七的葉莖質(zhì)量比不低于3/7。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)中的溶劑為體積分?jǐn)?shù)為70-80%的乙醇溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)中提取的方式為超聲波逆流連續(xù)提取。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中的澄清劑為天然澄清劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中的澄清劑為ZTC 1+1、明膠或殼聚糖。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于所述的醇沉加入乙醇的量為使澄清液的含乙醇量為30-50%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于所述的大孔吸附樹(shù)脂為聚苯乙烯型大孔吸附樹(shù)脂。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的采用微波干燥。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七葉總皂苷的制備方法，其特征在于包括如下步驟: 步驟(1):將三七葉粉碎，加入70-80%乙醇，超聲波逆流連續(xù)提取60min，收集提取液，過(guò)濾，濃縮至清膏； 步驟(2):向步驟(1)得到的清膏中加入水使其密度為1.08 (60°C)，加熱至75-78 °C，按πιΞ?Ι^:v^--jB=1°00g:24~26ml加入天然澄清劑B,攪拌至混合均勻，再升溫至82_85°C時(shí)，加入天然澄清劑A，天然澄清劑A加入量為天然澄清劑B的一半，攪拌至混合均勻，降至室溫靜止過(guò)夜，離心，得到澄清溶液；將澄清溶液濃縮至密度為1.08 (60°C)，加入乙醇使其含乙醇量為30-50%，攪拌至混合均勻，室溫靜止過(guò)夜，離心，得到醇沉澄清液；醇沉澄清液經(jīng)濃縮至無(wú)醇味，按m 三七葉:V純化水= 1000g:6.5^7.5L加入純化水稀釋?zhuān)玫较♂屢海瑢⑾♂屢荷?0-101、0六-201、01400、0六0-40、六05-5、冊(cè)0-500、011130、父六0-2、父六0-4、0131011或六8-8型大孔吸附樹(shù)脂柱，其中大孔吸附樹(shù)脂與稀釋液的重量比為1:10-20，柱徑與柱高比為1:8-10，先用水洗至流出液為無(wú)色，再用2-3倍柱體積的20-30%乙醇沖洗，棄去沖洗液，最后用體積分?jǐn)?shù)不小于80%的乙醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液上D941、D280、D296、D900、D396、D390、D311或D314型陰離子交換樹(shù)脂柱脫色，收集流出的脫色藥液，濃縮，微波干燥，即得三七葉總皂苷；所述的天然澄清劑A為ZTC 1+1、明膠或殼聚糖；所述的天然澄清劑B 為ZTC 1+1、明膠或殼聚糖。
【文檔編號(hào)】A61K36/258GK103948659SQ201410221017
【公開(kāi)日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月23日
【發(fā)明者】鄭立雄, 陳金東, 任楊帆, 邵艷紅 申請(qǐng)人:云南維和藥業(yè)股份有限公司