一種中藥組合物、其提取物及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明一種中藥組合物、其提取物及應(yīng)用,屬于中醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。所述中藥組合物由青龍衣和淫羊藿按重量比1:1組成。中藥組合物的提取物是通過將重量比1:1的青龍衣與淫羊藿加水浸泡后回流提取2次,合并濾液后減壓濃縮干燥即得浸膏粉末。本發(fā)明還公開了所述中藥組合物及其提取物在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明具有配制簡(jiǎn)單,療效好,無副作用,安全性高,有利于患者及時(shí)減輕病狀,并且優(yōu)于青龍衣與刺五加藥材組合對(duì)肝癌的治療,具有良好的開發(fā)前景及社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種中藥組合物、其提取物及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】,具體涉及一種中藥組合物、其提取物及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著環(huán)境污染的日益嚴(yán)重,人們受病毒、化學(xué)因素(亞硝酸、黃曲霉素、農(nóng)藥)、物 理因素(電離輻射、紫外線)等的影響,癌癥的發(fā)病率和死亡率都呈逐漸增加趨勢(shì)。其中, 原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma, PHC)簡(jiǎn)稱肝癌(hepatoma),是指原發(fā)于肝細(xì)胞 或肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤,是最常見的惡性腫瘤之一,被稱為"腫瘤之王"。我國(guó)為原 發(fā)性肝癌高發(fā)區(qū),起病隱匿,潛伏期長(zhǎng),惡性度高,生存期短,生存質(zhì)量差,且治療棘手。若不 能早期發(fā)現(xiàn)并徹底手術(shù)切除,肝癌患者的總體5年生存率不超過5%。目前,肝癌的治療方 法有手術(shù)、放療、化療和介入治療。這些治療手段不僅價(jià)格昂貴,而且治療過程常給患者帶 來巨大的痛苦。因此,尋找高效、安全、經(jīng)濟(jì)的抗腫瘤藥物也成為醫(yī)藥學(xué)者的重要課題。
[0003] 近年來,中醫(yī)藥在肝癌的治療中發(fā)揮著不可替代的作用。大量藥理實(shí)驗(yàn)證明,中 藥復(fù)方如活血軟堅(jiān)解毒方、"晚癌康2號(hào)"、仙蘆抗癌膠囊、蟾酥膠等,及單味中藥如龍葵、三 棱、姜黃、莪術(shù)等,具有直接抗肝癌作用。同時(shí),已有臨床療效觀察研究表明,中醫(yī)藥治療肝 癌的優(yōu)勢(shì)一方面在于能有效穩(wěn)定病情,減輕毒副作用,改善臨床癥狀,延長(zhǎng)患者帶瘤生存時(shí) 間,使部分患者腫瘤縮小;另一方面治療費(fèi)用相對(duì)低廉。因此,中醫(yī)藥治療成為肝癌治療中 不可或缺的重要組成部分。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 青龍衣(Pericarpium Juglandis)為胡桃科胡桃屬植物核桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)和核桃(Juglans regia L.)未成熟的外果皮。該藥始載于《開寶本 草》,稱其為胡桃青龍,《救急方》中則稱之為青胡桃皮,自《山東中草藥手冊(cè)》稱之為"青龍 衣"后,現(xiàn)多延用此名稱。主產(chǎn)于河北、山東、東北等地,為民間常用中藥。古代諸家多以其 清熱解毒、祛風(fēng)療癬、止痛止痢等功效入藥?,F(xiàn)代研究表明,青龍衣在臨床應(yīng)用廣泛,可用于 治療足部臭汗證、銀屑病以及多種癌癥等。
[0005] 淫羊藿又名仙靈脾、羊藿葉等,為小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭葉淫羊藿 Epimedium sagittatum(Sieb. et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿 Epimedium pubescens. Maxim.或朝鮮淫羊藿 Epimedium koreanum Nakai 的干燥葉。李時(shí) 珍在《本草綱目》中稱其"益精氣、堅(jiān)筋骨、補(bǔ)腰膝、強(qiáng)心力"之功效。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究表 明,淫羊藿能增加心腦血管血流量,促進(jìn)造血功能、免疫功能及骨代謝,具有抗衰老、抗腫瘤 等功效。
[0006] 本發(fā)明的目的在于公開了一種中藥組合物。
[0007] 本發(fā)明的第二個(gè)目的在于公開了上述中藥組合物的提取物。
[0008] 本發(fā)明的第三個(gè)目的在于公開了上述中藥組合物和提取物的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0010] 一種中藥組合物,其中,所述中藥組合物由青龍衣和淫羊藿組成,其中青龍衣與淫 羊藿的重量比為1:1。
[0011] 上述技術(shù)方案所述的中藥組合物,其中,青龍衣為30g,淫羊藿為30g。
[0012] 上述技術(shù)方案所述的中藥組合物,其中,所述中藥組合物用于制備治療肝癌的藥 物。
[0013] 一種中藥組合物的提取物,其中,所述提取物通過下述步驟制備所得:
[0014] (1)、按照重量比1:1稱取青龍衣與淫羊藿藥材;
[0015] ⑵、加水浸泡30min后回流提取2次,加水量分別為藥材總重量的8倍、6倍,每次 提取1小時(shí),趁熱傾出上清液,濾過,合并濾液;
[0016] ⑶、減壓濃縮干燥即得浸膏粉末。
[0017] 上述技術(shù)方案所述的中藥組合物,其中,青龍衣為30g,淫羊藿為30g。
[0018] 上述技術(shù)方案所述的提取物,其中,所述提取物用于制備治療肝癌的藥物。
[0019] 上述技術(shù)方案所述的中藥組合物或上述技術(shù)方案所述的提取物在制備治療肝癌 藥物中的應(yīng)用。
[0020] 上述技術(shù)方案所述的應(yīng)用,其中,中藥組合物或提取物具有下調(diào)Bcl-2的表達(dá)和 上調(diào)Bax的表達(dá)的作用。
[0021] 上述技術(shù)方案所述的應(yīng)用,其中,中藥組合物或提取物的劑型為醫(yī)學(xué)上可接受的 劑型。
[0022] 上述技術(shù)方案所述的應(yīng)用,其中,中藥組合物或提取物的劑型為粉劑、注射液、膠 囊、片劑或口服液中的一種。
[0023] 本發(fā)明具有以下有益效果:
[0024] 1、本發(fā)明中藥組合物及其提取物不僅配制簡(jiǎn)單,療效好,無副作用,安全性高,有 利于患者及時(shí)減輕病狀,并且優(yōu)于青龍衣與刺五加藥材組合對(duì)肝癌的治療,具有良好的開 發(fā)前景及社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。
[0025] 2、本發(fā)明中藥組合物及其提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞株Η印G2和鼠肝癌細(xì)胞株H22的抑 瘤效果明顯強(qiáng)于青龍衣與刺五加組合、單獨(dú)使用青龍衣和單獨(dú)使用淫羊藿。
[0026] 3、本發(fā)明中藥組合物及其提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞株Η印G2移植性腫瘤生長(zhǎng)和鼠肝 癌細(xì)胞株Η 22移植性腫瘤生長(zhǎng)的抑瘤效果明顯強(qiáng)于青龍衣與刺五加組合、單獨(dú)使用青龍衣 和單獨(dú)使用淫羊藿。
【專利附圖】
【附圖說明】:
[0027] 1、圖1是各給藥組對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響;
[0028] 2、圖2是各給藥組對(duì)H22肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響;
[0029] 3、圖3是各給藥組對(duì)小鼠 HepG2移植性腫瘤平均瘤重的影響;
[0030] 4、圖4是各給藥組對(duì)小鼠 H22移植性腫瘤平均瘤重的影響;
[0031] 5、圖5是各組Η印G2細(xì)胞中Bcl-2的表達(dá);
[0032] 6、圖6是各組!fepG2細(xì)胞中Bax的表達(dá)。
【具體實(shí)施方式】:
[0033] 為使本發(fā)明的技術(shù)方案便于理解,以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明中藥組合物及其 提取物作進(jìn)一步的說明。
[0034] 實(shí)施例1 : 一種中藥纟目合物:
[0035] -種中藥組合物,由重量比1:1的青龍衣與淫羊藿組成。
[0036] 實(shí)施例2 :-種中藥纟目合物:
[0037] -種中藥組合物,由30g的青龍衣和30g淫羊藿組成。
[0038] 實(shí)施例3 :中藥纟目合物提取物的制各:
[0039] (1)、按照重量比1:1稱取青龍衣與淫羊藿藥材;
[0040] (2)、加水浸泡30min后回流提取2次,加水量分別為藥材總重量的8倍、6倍,每次 提取1小時(shí),趁熱傾出上清液,濾過,合并濾液,即得中藥組合物提取物。
[0041] 實(shí)施例4 :中藥纟目合物提取物的制各:
[0042] 本實(shí)施例與實(shí)施例3相同,區(qū)別在于:步驟(1)中青龍衣為30g,淫羊藿為30g。
[0043] 實(shí)施例5 :中藥組合物提取物浸膏粉末的制備:
[0044] 將實(shí)施例3或4得到的中藥組合物提取物減壓濃縮干燥即得中藥組合物提取物浸 膏粉末。
[0045] 以下結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明中藥組合物(青龍衣與淫羊藿組合物)及其提取物 在肝癌治療中的有益效果作進(jìn)一步說明。
[0046] 一、實(shí)驗(yàn)材料:
[0047] 1、藥物及試劑:
[0048] 青龍衣、淫羊藿、刺五加均購(gòu)自河北省安國(guó)中藥材市場(chǎng),生產(chǎn)批號(hào)為20130322。環(huán) 磷酰胺片由天津金世制藥有限公司提供,生產(chǎn)批號(hào)20130613。生理鹽水、MTT(四甲基偶氮 唑鹽)、苦味酸均由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司提供,生產(chǎn)批號(hào)為20131012。胎牛血清 購(gòu)置于四季青公司,生產(chǎn)批號(hào)20130623。DMS0購(gòu)置于Sigma公司,生產(chǎn)批號(hào)20130215。Bax 及Bcl-2鼠抗人單抗、內(nèi)參一抗(β-actin)購(gòu)置Santa Cruz公司,生產(chǎn)批號(hào)20130808。
[0049] 2、細(xì)胞及動(dòng)物:
[0050] (1)細(xì)胞株:HepG2細(xì)胞系,H22肝癌瘤株,RH-35細(xì)胞系,BRL細(xì)胞系,均由軍事醫(yī) 學(xué)科學(xué)院提供。
[0051] ⑵動(dòng)物:BALB/c小鼠,清潔級(jí),雄性,6-8周齡,體重(20±2)g,購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué) 院,動(dòng)物合格證號(hào)SCXK-(軍)2007-004。
[0052] 3、材料及儀器:
[0053] Costar96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(美國(guó)Corning公司);一次性0· 22 μ m針筒式微孔濾膜 (上海興亞凈化材料廠);RAK-2001耐高溫塑料染色架(福州邁新);Forma恒溫C02培養(yǎng) 箱(Thermo Electron Shanghai Instruments Co. , Ltd.) ;BioTek 多功會(huì)泛酶標(biāo)儀(Thermo Electron Shanghai Instruments Co·, Ltd.) ;ABI7500 突光定量 PCR 儀(美國(guó) CY-TECH); FA2004分析天平(上海天平儀器廠);ALC4239低溫高速離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品); 725型超低溫冰箱(美國(guó)Forma公司);SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公 司)。
[0054] 二、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
[0055] 所有處理數(shù)據(jù)均以S±s表示,使用SPSS19. 0統(tǒng)計(jì)軟件中的單因素方差分析處理數(shù) 據(jù),用LSD法進(jìn)行組間比較;否則采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn),P < 0. 05表示有差異,P < 0. 01表 示有顯著性差異。
[0056] 實(shí)驗(yàn)例1 :以下實(shí)驗(yàn)例2?6中的各實(shí)驗(yàn)樣品的提取制備:
[0057] (1)、本發(fā)明中藥組合物(青龍衣與淫羊藿)的提取物浸膏粉末的制備:
[0058] 精密稱取青龍衣與淫羊藿藥材各30g置圓底燒瓶中,加水浸泡30min后回流提取 2次,加水量分別為藥材總重量的8倍、6倍,每次提取1小時(shí),趁熱傾出上清液,濾過,合并 濾液,減壓濃縮干燥即得浸膏粉末。
[0059] (2)、青龍衣與刺五加提取物浸膏粉末的制備:
[0060] 精密稱取青龍衣與刺五加藥材各30g置圓底燒瓶中,其余提取步驟同上。
[0061] (3)、青龍衣提取物浸膏粉末的制備:
[0062] 精密稱取青龍衣藥材30g置圓底燒瓶中,其余提取步驟同上。
[0063] (4)、淫羊藿提取物浸膏粉末的制備:
[0064] 精密稱取青淫羊藿藥材30g置圓底燒瓶中,其余提取步驟同上。
[0065] (5)、刺五加提取物浸膏粉末的制備:
[0066] 精密稱取刺五加藥材30g置圓底燒瓶中,其余提取步驟同上。
[0067] 實(shí)駘例2 :MTT法檢測(cè)各給藥組對(duì)人肝癌細(xì)胞株IfepG2的影響:
[0068] 將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌細(xì)胞株Η印G2用0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血 清的RPMI1640培養(yǎng)液稀釋成濃度為5 X 104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液,接種于96孔培養(yǎng)板中,每 孔100 μ 1,在37°C、C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)Η印G2細(xì)胞系至細(xì)胞生長(zhǎng)到50-60%融合時(shí), 對(duì)照組培養(yǎng)液中加入溶解化合物所用的DMS0 (二甲基亞砜)培養(yǎng)液,陽性組加入0. 005g/ mL環(huán)磷酰胺,青龍衣+淫羊藿組加入相當(dāng)于原藥材2g/mL本發(fā)明中藥組合物提取物浸膏粉 末,青龍衣+刺五加組加入相當(dāng)于原藥材2g/mL青龍衣與刺五加提取物浸膏粉末,青龍衣組 加入相當(dāng)于原藥材2g/mL青龍衣提取物浸膏粉末,淫羊藿組加入相當(dāng)于原藥材2g/mL淫羊 藿提取物浸膏粉末,刺五加組加入相當(dāng)于原藥材2g/mL刺五加提取物浸膏粉末,各100μ 1, 每孔總液體量為200 μ 1。培養(yǎng)24h后,棄上清,加入0. 5mg/ml的ΜΤΤ檢測(cè)細(xì)胞活性。方法 如下:去上清,磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2遍,MTT、37°C孵育4小時(shí),PBS洗2遍,DMS0溶解結(jié) 晶,490nm測(cè)定吸光度。
[0069]
【權(quán)利要求】
1. 一種中藥組合物,其特征在于:所述中藥組合物由青龍衣和淫羊藿組成,其中青龍 衣與淫羊藿的重量比為1:1。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物,其特征在于:青龍衣為30g,淫羊藿為30g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物,其特征在于:所述中藥組合物用于制備治 療肝癌的藥物。
4. 一種中藥組合物的提取物,其特征在于,所述提取物通過下述步驟制備所得: (1) 、按照重量比1:1稱取青龍衣與淫羊藿藥材; (2) 、加水浸泡30min后回流提取2次,加水量分別為藥材總重量的8倍、6倍,每次提取 1小時(shí),趁熱傾出上清液,濾過,合并濾液; (3) 、減壓濃縮干燥即得浸膏粉末。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物,其特征在于:青龍衣為30g,淫羊藿為30g。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的提取物,其特征在于:所述提取物用于制備治療肝癌的 藥物。
7. 權(quán)利要求1?3所述的中藥組合物或權(quán)利要求4?6所述的提取物在制備治療肝癌 藥物中的應(yīng)用。
8. 權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于:中藥組合物或提取物具有下調(diào)Bcl-2的表達(dá) 和上調(diào)Bax的表達(dá)的作用。
9. 權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用,其特征在于:中藥組合物或提取物的劑型為醫(yī)學(xué)上可 接受的劑型。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于:中藥組合物或提取物的劑型為粉劑、注 射液、膠囊、片劑或口服液中的一種。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK104116778SQ201410361010
【公開日】2014年10月29日 申請(qǐng)日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】趙艷玲, 肖小河, 王伽伯, 陳哲, 鄭全福 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三0二醫(yī)院