一種蝎毒多肽的分離純化方法及其用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種蝎毒多肽的分離純化方法及其用途，該方法通過對蝎毒溶液的預(yù)處理、蝎毒溶液分離純化前的蛋白濃度、緩沖液和洗脫流速合理選擇，獲得條件簡單可行，容易控制，易于工業(yè)化生產(chǎn)的一種蝎毒多肽的分離純化方法。通過該方法獲得了一種新的具鎮(zhèn)痛作用的蝎毒多肽。
【專利說明】一種蝎毒多肽的分離純化方法及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及利用一種蝎毒多肽的分離純化方法及其用 途。

【背景技術(shù)】
[0002] 蝎亦名全蟲，為鉗蝎科動(dòng)物東亞鉗蝎或稱馬氏鉗蝎（Buthus martensii Karsch) 的干燥全體，屬名貴動(dòng)物類藥材。氣微腥，味咸。全蝎性平，味辛，有小毒，具驅(qū)風(fēng)鎮(zhèn)驚之功 效。主要用于坐骨神經(jīng)痛、偏頭痛、蕁麻疹、百日咳、腮腺炎、小兒厭食癥、化膿性中耳炎、急、 慢性淚囊炎、淋巴結(jié)核、燒傷、肛門周圍炎、乳腺疾病、骨關(guān)節(jié)結(jié)核等病癥治療，取得良好療 效。
[0003] 現(xiàn)代研究表明蝎毒多肽具有明顯的鎮(zhèn)痛作用：蝎毒對內(nèi)臟痛、皮膚灼痛有明顯鎮(zhèn) 痛作用，效果隨劑量增加而加強(qiáng)。臨床應(yīng)用表明，蝎毒注射液用于治療神經(jīng)痛、手術(shù)后疼痛、 對于手術(shù)麻醉期過后出現(xiàn)中度疼痛患者和晚期腫瘤疼痛，療效顯著。身體依賴性研究結(jié)果 表明，蝎毒對小鼠、大鼠以及猴均不具備阿片類的身體依賴特性。由于其鎮(zhèn)痛作用的高效 性，且不存在身體依賴性，因此，人們開始對蝎毒有效成分進(jìn)行了大量的分析研究工作。
[0004] 現(xiàn)今，已經(jīng)從東亞鉗蝎中分離并鑒定了 20多種蝎毒毒素。王起振等采用離子交換 層析和凝膠過濾法從粗制蝎毒中分離出一種鎮(zhèn)痛活性肽，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用[王起振， 張景海，唐龍等.東亞鉗蝎（Buthus marthensii Karscch)毒鎮(zhèn)痛活性肽的分離純化及其 鎮(zhèn)痛作用研究[J].沈陽藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，11 (4) :273-276]。劉崇銘等從東亞鉗蝎毒中經(jīng) 過Cm-Sephaden G-50柱層析提取，再用Sephaden G-50凝膠過濾純化得到一種鎮(zhèn)痛活性 肽-蝎毒素 -III (TT- III )，小鼠扭體實(shí)驗(yàn)表明TT- III的鎮(zhèn)痛作用較粗制蝎毒強(qiáng)2倍（劉崇 銘，裴國強(qiáng).東亞鉗蝎毒的鎮(zhèn)痛作用研究[J].沈陽藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1989,6(3) :176-178)。韓 雪飛《蝎毒素 IV分離純化研究》等改進(jìn)傳統(tǒng)兩步層析法，成功地從粗制蝎毒中分離純化了 鎮(zhèn)痛活性肽IV (SVC-IV)，SVC-IV有很強(qiáng)的中樞鎮(zhèn)痛作用，作用強(qiáng)于嗎啡4倍以上，臨床驗(yàn) 證對多種急、慢性疼痛均有較強(qiáng)抑制作用，且具有較好的修復(fù)受損神經(jīng)的功效（韓雪飛，徐 霞，申慶紅，等.蝎毒素 IV分離純化研究[J].河南醫(yī)科大學(xué)報(bào)，1996, 31(3) : 1-4)。
[0005] 然而，上述研究的多肽分子量多在6?8KD左右，對其他分子量段的成份的研究則 未見報(bào)道。另外，由于生物制品需要的條件甚是苛刻，上述研究多數(shù)是在實(shí)驗(yàn)室完成的提取 工藝且該提取工藝無法在工廠再現(xiàn)，故至今沒有相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)上市。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] [要解決的技術(shù)問題]
[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種易于控制的蝎毒多肽的分離純化方法，獲得一種新的具 鎮(zhèn)痛效果的蝎毒多肽。
[0008] [技術(shù)方案]
[0009] 本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
[0010] 一種蝎毒多肽的分離純化方法，其特征在于該方法包括以下步驟：
[0011] A，樣品的預(yù)處理
[0012] 將蝎毒粉溶于適當(dāng)?shù)木彌_液中，接著在溫度4°C條件下離心，得到的上清液經(jīng) 0. 22 μ m微孔濾膜過濾，得到一種濾液；
[0013] B，分離純化
[0014] 將步驟A得到的濾液配制成蛋白濃度為0. 5?100mg/ml的溶液，然后將該溶液加 入SUPERDEX 75 10/300 GL預(yù)裝柱的層析柱中，用洗脫液以流速0. 1?50ml/min進(jìn)行洗脫， 并在UV280nm條件下檢測，按時(shí)間順序依次得到組分1、組分2、組分3、組分4和組分5的5 個(gè)組分。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述的洗脫液選自Tris-Hcl緩沖液、PBS緩沖 液或碳酸鹽緩沖液。
[0016] 根據(jù)所述分離純化方法制備得到的5個(gè)組分，其中，組分1、組分2、組分3和組分 4均為多種多肽成分的組合；組分5為單一成分的多肽；并且組分5的鎮(zhèn)痛作用明顯由于其 它四個(gè)組分。
[0017] 所述的組分5經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示為單一條帶，且它是分子量為10? 11KD的蝎毒多肽。本發(fā)明將組分5命名為XDT。
[0018] 所述的組分5用于制備治療中樞性疼痛以及外周性疼痛的鎮(zhèn)痛藥物的應(yīng)用。
[0019] 所述的藥物為注射劑、口服制劑或外用制劑。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述的注射劑包括靜脈注射劑、肌肉注射劑或 皮下注射劑。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述的口服制劑包括片劑、口服液、膠囊或顆 粒。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述的外用制劑包括貼劑、膜劑或乳劑。
[0023] 下面將詳細(xì)地說明本發(fā)明。
[0024] -種蝎毒多肽的分離純化方法，其特征在于該方法包括以下步驟：
[0025] A，樣品的預(yù)處理
[0026] 將蝎毒粉溶于適當(dāng)?shù)木彌_液中，接著在溫度4 °C條件下離心，得到的上清液經(jīng) 0. 22 μ m微孔濾膜過濾，得到一種濾液；
[0027] 本發(fā)明中適當(dāng)?shù)木彌_液是指能溶解蛋白質(zhì)，并穩(wěn)定蛋白質(zhì)作用的緩沖液。如 Tris-Hcl緩沖液、PBS緩沖液、碳酸鹽緩沖液等。
[0028] 將蝎毒粉溶于緩沖液中后，接著立即離心并進(jìn)行分離純化的原因是蝎毒容易分 解。
[0029] B，分離純化
[0030] 將步驟A得到的濾液配制成蛋白濃度為0. 5?100mg/ml的溶液，然后將該溶液加 入SUPERDEX 75 10/300 GL預(yù)裝柱的層析柱中，用洗脫液以流速0.1?50ml/min進(jìn)行洗脫， 并在UV280nm條件下檢測，按時(shí)間順序依次得到組分1、組分2、組分3、組分4和組分5的5 個(gè)組分。
[0031] 將蝎毒前處理后，在AKTA Purifier UPC 100蛋白純化系統(tǒng)中進(jìn)行分離純化并通過 其配套的的UNICORN 5. 20軟件進(jìn)行分析計(jì)算。
[0032] SUPERDEX 75 10/300 GL預(yù)裝柱是目前分辨率和選擇性最高的凝膠過濾層析柱。 凝膠過濾層析法又稱排阻層析或分子篩方法，主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀，即蛋白質(zhì) 的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化。層析柱中填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖 類物質(zhì)，使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進(jìn)行分離。小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部， 留下時(shí)路程較長，而大分子物質(zhì)卻被排出在外部，下來的路程短，因此大分子先流出來，小 分子后流出來。
[0033] 因?yàn)榈鞍踪|(zhì)中的氨基酸有共軛的雙鍵，會(huì)吸收280nm的紫外線（即UV280nm)，所以 蛋白質(zhì)在280nm的紫外線處，有特殊的吸收峰。因此，本發(fā)明中是在UV280nm下檢測。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟B中將所述的濾液配制為蛋白濃度為 5-20mg/ml 的溶液。
[0035] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟B中將所述的濾液配制為蛋白濃度為 10mg/ml的溶液。
[0036] 本發(fā)明實(shí)踐證明，本發(fā)明步驟B中的蛋白濃度優(yōu)選為10mg/ml。因?yàn)殡S著蛋白濃度 的減小，蝎毒中蛋白多肽的分離度增大；但是，蛋白濃度過低，分離獲得的各組分面積偏低， 蛋白量少。綜合考慮，樣品蛋白濃度為l〇mg/ml更為合適。
[0037] 通常，鹽溶液用作洗脫液。任何合適的鹽溶液都可以用于洗脫液。根據(jù)本發(fā)明的 另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述的洗脫液選自Tris-Hcl緩沖液、PBS緩沖液或碳酸鹽緩沖液。
[0038] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式方式，在步驟B中所述的洗脫液選自濃度為 0. 02M、PH值為6. 8的Tris-Hcl緩沖液或濃度為0. 05M、PH值為7. 2的PBS緩沖液。
[0039] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟B中將所述的洗脫液是濃度為0. 05M、 PH值為7. 2的PBS緩沖液。
[0040] 本發(fā)明實(shí)踐證明，在步驟B中所述的洗脫液優(yōu)選濃度為0. 05M、PH值為7. 2的PBS 緩沖液。選擇該洗脫液的原因是因?yàn)橄噍^于濃度為〇. 02M、PH值為6. 8的Tris-Hcl緩沖 液，該洗脫液的分離效果更好、且更穩(wěn)定。
[0041] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟B中所述的洗脫液選擇流速為1. 0ml/ min進(jìn)行洗脫。
[0042] 本發(fā)明實(shí)踐證明，不同的流速分離出的基本相同，因此，本發(fā)明選擇l.Oml/min的 流速進(jìn)行分離純化。
[0043] 根據(jù)所述分離純化方法制備得到的5個(gè)組分，其中，組分1、組分2、組分3和組分 4均為多種多肽成分的組合；組分5為單一成分的多肽；并且組分5的鎮(zhèn)痛作用明顯由于其 它四個(gè)組分。
[0044] 對本發(fā)明步驟B得到的5個(gè)組分進(jìn)行小鼠扭體實(shí)驗(yàn)和熱板法實(shí)驗(yàn)，通過設(shè)置陽性 對照組和陰性對照組實(shí)驗(yàn)，得到組分5為具有最好鎮(zhèn)痛作用的單一多肽成分。
[0045] 小鼠扭體實(shí)驗(yàn)是將實(shí)驗(yàn)小鼠分別經(jīng)尾靜脈注射5種組分0. 6mg/kg后，立即以醋酸 與小鼠0. lmg :10g的體重比腹腔注射醋酸，觀察小鼠15min內(nèi)的扭體次數(shù)。
[0046] 熱板法實(shí)驗(yàn)是首先用54. 5-55. 5°C的熱板篩選出實(shí)驗(yàn)小鼠；然后將實(shí)驗(yàn)小鼠分別 經(jīng)尾靜脈注射5種組分0. 6mg/kg，測試給藥前及給藥后5min、60min各動(dòng)物的痛閾值。
[0047] 所述的組分5經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示為單一條帶，且它是分子量為 10-11KD的蝎毒多肽。
[0048] 聚丙烯酰胺凝膠電泳即PAGE，用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。其為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分 子篩效應(yīng)。它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。變性 聚丙烯酰胺凝膠電泳是蛋白質(zhì)或多肽與SDS結(jié)合，經(jīng)熱變性和二硫鍵的還原，形成所帶負(fù) 電荷相對一致的非折疊衍生物，其泳動(dòng)速度主要由分子量決定。
[0049] 現(xiàn)有技術(shù)研究得到的具有鎮(zhèn)痛作用的蝎毒多肽分子量多為6?8KD，對其他分子 量段的成分的研究則未見報(bào)道。而本發(fā)明獲得的組分5與現(xiàn)有技術(shù)的蝎毒多肽分子量不 同。
[0050] 所述的組分5用于制備治療中樞性疼痛以及外周性疼痛的鎮(zhèn)痛藥物的應(yīng)用。
[0051] 所述的藥物為注射劑、口服制劑或外用制劑。
[0052] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述的注射劑包括靜脈注射劑、肌肉注射劑或 皮下注射劑。
[0053] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述的口服制劑包括片劑、口服液、膠囊或顆 粒。
[0054] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述的外用制劑包括貼劑、膜劑或乳劑。
[0055] [有益效果]
[0056] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下的有益效果：
[0057] 1、本發(fā)明提供了一種蝎毒多肽的分離純化方法；該方法通過對蝎毒溶液的預(yù)處 理、蝎毒溶液濾液的蛋白濃度、緩沖液和洗脫流速合理選擇，獲得條件簡單可行，容易控制， 易于工業(yè)化生產(chǎn)的一種蝎毒多肽的分離純化方法。
[0058] 2、本發(fā)明提供的分離純化方法獲得了一種新的具鎮(zhèn)痛作用的蝎毒多肽，該蝎毒多 膚是分子量10?11KD。
[0059] 3、本發(fā)明的分離純化方法獲得的蝎毒多肽，只需添加適當(dāng)輔料，即可制成治療中 樞性疼痛以及外周性疼痛的鎮(zhèn)痛藥物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0060] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例1樣品預(yù)處理方法一的分離結(jié)果圖；
[0061] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例1樣品預(yù)處理方法二的分離結(jié)果圖；
[0062] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例2洗脫液以流速0. 5ml/min洗脫樣品的分離結(jié)果圖；
[0063] 圖4是本發(fā)明實(shí)施例2洗脫液以流速1. Oml/min洗脫樣品的分離結(jié)果圖；
[0064] 圖5是本發(fā)明實(shí)施例3以水為洗脫液洗脫樣品的分離結(jié)果圖；
[0065] 圖6是本發(fā)明實(shí)施例3以濃度為0. 02M、PH值為6. 8的Tris-HCl緩沖液為洗脫液 洗脫樣品的分離結(jié)果圖；
[0066] 圖7是本發(fā)明實(shí)施例3以濃度為0. 05M、PH值為7. 2的PBS緩沖液為洗脫液洗脫 樣品的分離結(jié)果圖；
[0067] 圖8是本發(fā)明實(shí)施例4將溶液配制為上樣濃度為20mg/ml的分離結(jié)果圖；
[0068] 圖9是本發(fā)明實(shí)施例4將溶液配制為上樣濃度為10mg/ml的分離結(jié)果圖；
[0069] 圖10是本發(fā)明實(shí)施例4將溶液配制為上樣濃度為5mg/ml的分離結(jié)果圖；
[0070] 其中，圖1至圖10的分離結(jié)果圖中，橫坐標(biāo)是指洗脫液的用量；縱坐標(biāo)為UV280nm 檢測的蛋白吸收峰值。

【具體實(shí)施方式】
[0071] 下面結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述和說明。
[0072] 實(shí)施例1
[0073] 樣品預(yù)處理方法的確定實(shí)驗(yàn)：
[0074] 樣品前處理方法一：精密稱取100mg蝎毒凍干粉，溶于5ml的緩沖液中，冷藏過夜， 4°C離心（15000g，20min)，上清液經(jīng)0· 22 μ m微孔濾膜過濾，備用。
[0075] 樣品前處理方法二：精密稱取100mg蝎毒凍干粉，溶于5ml的緩沖液中，4°C離心 (15000g，20min)，上清液經(jīng)0· 22 μ m微孔濾膜過濾，備用。
[0076] 將方法一和方法二的樣品在AKTA Purifier UPC 100蛋白純化系統(tǒng)中分離純化，結(jié) 果如圖1和圖2所示，從圖2可見，蝎毒經(jīng)緩沖液溶解后,在洗脫體積為10、15以及18ml時(shí) 可得到3個(gè)峰面積較大的成分，以及在洗脫體積為23和28ml左右可得到兩個(gè)峰面積相對 較小的成分；從圖1可見，蝎毒經(jīng)緩沖液溶解后放置過夜進(jìn)行分離純化所得組分較多，與圖 2比較發(fā)現(xiàn)原洗脫體積為10、15ml時(shí)的峰面積變小，并在20?25ml之間增加了 1?2個(gè)成 分，以及在洗脫體積為23和28ml左右可得到兩個(gè)峰面積相對較小的成分。
[0077] 由此可知，蝎毒經(jīng)緩沖液溶解后放置過夜進(jìn)行分離純化所得組分較多，說明蝎毒 容易分解，所以蝎毒應(yīng)在溶解后立即離心并進(jìn)行分離純化。
[0078] 實(shí)施例2
[0079] 樣品分離純化洗脫液流速的確定實(shí)驗(yàn)：
[0080] 將樣品按方法二進(jìn)行前處理后，濾液配制成l〇mg/ml上樣濃度，加入SUPERDEX 75 預(yù)裝柱的層析柱中，并用濃度為〇. 02M、PH值為6. 8的Tris-HCl緩沖液分別以0. 5ml/min 和50. 0ml/min進(jìn)行洗脫，用UNICORN 5. 20軟件分析蛋白峰型。
[0081] 從圖3和圖4可見，在0. 5ml/min和50. 0ml/min這兩種流速下獲得的蛋白峰型基 本相同，分離出的組分也相同。因此，流速對蛋白質(zhì)的分離沒有什么影響。
[0082] 實(shí)施例3
[0083] 樣品分離純化洗脫液的確定實(shí)驗(yàn)：
[0084] 按照方法二進(jìn)行樣品前處理后，濾液配制成10mg/ml上樣濃度，加入SUPERDEX 75 預(yù)裝柱的層析柱中，并分別用水，濃度為〇. 02M、PH值為6. 8的Tris-HCl緩沖液和濃度為 0. 05M、PH值為7. 2的PBS緩沖液按流速lml/min的洗脫流速，用UNICORN 5. 20軟件計(jì)算 蛋白各峰面積。該實(shí)驗(yàn)的水作為空白對照實(shí)驗(yàn)，空白對照，即陰性對照，能明白地對比和襯 托出實(shí)驗(yàn)的變化和結(jié)果，增強(qiáng)說服力。
[0085] 結(jié)果如圖5、圖6和圖7所示，以水為洗脫液，在10ml、18ml左右有2個(gè)成分，但峰 面積均較小。洗脫體積為20ml之后還有多個(gè)未分開的成分；以濃度為0. 02M、PH值為6. 8 的Tris-HCl緩沖液為洗脫液，在10ml、15ml以及18ml時(shí)可得到3個(gè)峰面積較大的成分，在 23和28ml左右有2個(gè)峰面積較小的成分。與以水為洗脫液的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，以濃度 為0. 02M、PH值為6. 8的Tris-HCl緩沖液為洗脫液，洗脫體積為10ml時(shí)的峰面積變大，并 在15-20ml之間多了 1個(gè)成分，20-30ml之間的成分減少，但峰面積均較圖5中相應(yīng)位置的 大，提示以水為洗脫液蝎毒不能達(dá)到分離效果；從圖7可見，以濃度為0. 05M、PH值為7. 2的 PBS緩沖液為洗脫液，在10-15ml之間、15-20ml之間各有兩個(gè)峰面積較大的成分，并且較圖 6中相對應(yīng)的峰面積高，以及在20ml以后只有一個(gè)成分，相對于圖5和圖6中顯不的，小分 子成分減少，并且分離度亦較高。
[0086] 由此可見，用凝膠過濾層析分離蝎毒，應(yīng)當(dāng)以濃度為0. 05M、PH值為7. 2的PBS緩 沖液為洗脫液，其分離效果更好，并且更穩(wěn)定。
[0087] 實(shí)施例4
[0088] 分離純化前濾液蛋白濃度的確定實(shí)驗(yàn)：
[0089] 按照實(shí)施例1的方法二進(jìn)行樣品預(yù)處理后，濾液分別配制成20mg/ml、10mg/ml、 5mg/ml的蛋白濃度；加入SUPERDEX 75預(yù)裝柱的層析柱中，并以濃度為0. 05M、PH值為7. 2 的PBS緩沖液為洗脫液，在流速為lml/min的條件下進(jìn)行洗脫，用UNICORN 5. 20軟件計(jì)算 蛋白各峰的面積和分離度，結(jié)果如下：
[0090] 表1以不同的樣品蛋白濃度分離后各組分的分離度
[0091]

【權(quán)利要求】
1. 一種蝎毒多肽的分離純化方法，其特征在于該方法包括以下步驟： A，樣品的預(yù)處理 將蝎毒粉溶于適當(dāng)?shù)木彌_液中，接著在溫度4°C條件下離心，得到的上清液經(jīng)0. 22 μ m 微孔濾膜過濾，得到一種濾液； B，分離純化 將步驟A得到的濾液配制成蛋白濃度為0. 5?100mg/ml的溶液，然后將該溶液加入 SUPERDEX 75 10/300 GL預(yù)裝柱的層析柱中，用洗脫液以流速0. 1?50ml/min進(jìn)行洗脫， 并在UV280nm條件下檢測，按時(shí)間順序依次得到組分1、組分2、組分3、組分4和組分5的5 個(gè)組分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于在步驟B中，所述的洗脫液選自 Tris-Hcl緩沖液、PBS緩沖液或碳酸鹽緩沖液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離純化方法制備得到的5個(gè)組分，其特征在于組分1、 組分2、組分3和組分4均為多種多肽成分的組合；組分5為單一成分的多肽；并且組分5 的鎮(zhèn)痛作用明顯優(yōu)于其它四個(gè)組分。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離純化方法制備得到的組分5,它經(jīng)變性聚丙烯酰胺 凝膠電泳顯示為單一條帶，且它是分子量為10-11KD的蝎毒多肽。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的組分5用于制備治療中樞性疼痛以及外周性疼痛的鎮(zhèn)痛藥物 的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物為注射劑、口服制劑或外用制 劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述的注射劑包括靜脈注射劑、肌肉注射 劑或皮下注射劑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述的口服制劑包括片劑、口服液、膠囊或 顆粒。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述的外用制劑包括貼劑、膜劑或乳劑。
【文檔編號】A61P25/04GK104193813SQ201410454153
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月5日
【發(fā)明者】譚正懷, 張莉, 肖英, 唐大軒, 熊靜悅 申請人:四川省中醫(yī)藥科學(xué)院