乳鐵蛋白對(duì)急性肺損傷保護(hù)作用的一種治療方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及乳鐵蛋白對(duì)急性肺損傷保護(hù)作用的一種治療方法。主要用于治療臨床上引起肺的急性損傷，從形態(tài)學(xué)特征、生化檢測(cè)指標(biāo)等證實(shí)，在發(fā)生急性肺損傷的初期階段，及時(shí)有效地應(yīng)用乳鐵蛋白，可以有效地緩解和治療急性肺損傷的進(jìn)一步發(fā)展，乳鐵蛋白能夠明顯減輕急性肺損傷的炎癥反應(yīng)，減少肺組織內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、減輕肺毛細(xì)血管通透性；對(duì)肺損傷具有保護(hù)作用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】乳鐵蛋白對(duì)急性肺損傷保護(hù)作用的一種治療方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開(kāi)了乳鐵蛋白對(duì)急性肺損傷保護(hù)作用的一種治療方法，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]急性肺損傷0^111:6 111118^1)是臨床上常見(jiàn)的危重病之一，其本質(zhì)是多種炎細(xì)胞及炎癥介質(zhì)共同參與的肺內(nèi)失控性炎癥反應(yīng)，中性粒細(xì)胞
？1⑷在其發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用。在八II時(shí)，大量的聚集、扣押于肺組織，釋放活性氧、膠原酶、彈性蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶及促炎因子等多種有害物質(zhì)加重八II。正常情況下？麗通過(guò)自身凋亡從炎癥部位消除，而在從I中存在？麗凋亡延遲的現(xiàn)象，延長(zhǎng)了 ？麗存活的時(shí)間。急性肺損傷0^111:6 111118是在嚴(yán)重感染、休克、創(chuàng)傷及燒傷等非心源性疾病過(guò)程中，肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞損傷造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水月中，導(dǎo)致的急性低氧性呼吸功能不全或衰竭。以肺容積減少、肺順應(yīng)性降低、嚴(yán)重的通氣丨血流比例失調(diào)為病理生理特征，臨床上表現(xiàn)為進(jìn)行性低氧血癥和呼吸窘迫臨床多種疾病可以引起肺損傷。？麗的增多、激活以及釋放的多種炎癥介質(zhì)是從1的主要發(fā)生機(jī)制。
[0003]乳鐵蛋？3屬轉(zhuǎn)鐵蛋自家族，是體內(nèi)一種重要的非血紅素鐵結(jié)合蛋白，它主要存在于乳汁及眼淚、鼻分泌物、唾液、腸粘膜等分泌物中，另外，還存在于中性粒細(xì)胞內(nèi)。血漿中的I？主要來(lái)源于激活的中性粒細(xì)胞。當(dāng)機(jī)體受到感染時(shí)，存在于中性粒細(xì)胞二級(jí)顆粒中的…大量釋放，通過(guò)螯合致病菌的鐵離子使其死亡。重癥肺炎患者肺部中性粒細(xì)胞釋放的I？增加，肺炎的嚴(yán)重程度與血液中中性粒細(xì)胞釋放的I？成負(fù)相關(guān)，說(shuō)明I？的釋放是機(jī)體的重要防御反應(yīng)之一。⑶是人體第一道防御系統(tǒng)的組成部分，能夠抵抗多種微生物的感染及預(yù)防全身炎癥的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，…可以通過(guò)抑制粒細(xì)胞的迀移，抑制局部炎癥因子的產(chǎn)生。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明公開(kāi)了乳鐵蛋白對(duì)急性肺損傷保護(hù)作用的一種治療方法，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，用于治療急性肺損傷。本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)驗(yàn)證明乳鐵蛋白對(duì)急性肺損傷保護(hù)作用的一種治療方法:健康雄性昆明小鼠60只，清潔級(jí)，體重26±29 ；隨機(jī)分為對(duì)照組
、乳鐵蛋白組(…、膿毒癥組^0111))、乳鐵蛋白預(yù)處理組、乳鐵蛋白治療組(…分…取^即)、地塞米松治療組仏？分0狀取^即)，每組10只。實(shí)驗(yàn)證明乳鐵蛋白在急性肺損傷中具有潛在的抗炎作用:明顯減輕引起的肺泡水腫、出血、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡間隔增寬及肺間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞的浸潤(rùn)；明顯減少肺組織中即0的含量；說(shuō)明了乳鐵蛋白在急性肺損傷中具有保護(hù)作用。
[0005]具體實(shí)施方法
[0006]下面的實(shí)例將具體說(shuō)明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對(duì)本發(fā)明的限定。
[0007]健康雄性昆明小鼠60只，清潔級(jí)，體重26±29 ；按隨機(jī)數(shù)字化分為對(duì)照組(￠0111:1-01邑抓即)、乳鐵蛋白組(…邑抓即)、膿毒癥組邑抓即)、乳鐵蛋白預(yù)處理組、乳鐵蛋白治療組(…分…取^即)、地塞米松治療組仏？分0狀取^即)，每組10只。對(duì)照組(￠0111:1-01聊即):腹腔注射吧0.21111，乳鐵蛋白組(…聊即):腹腔注射I？
膿毒癥組仏?3狀0即):腹腔注射1^3 5呢八8，乳鐵蛋白預(yù)處理組:(1^+1^3狀0即):腹腔注射1^5呢/化辦，111后腹腔注射1？3 5呢八8，乳鐵蛋白治療組仏?3+1^？狀。即):腹腔注射1？33呢八8，111后腹腔注射…〖呢/—辦，地塞米松治療組(1^3+0?狀0卯):腹腔注射1？35呢八8，111后腹腔注射01? 2呢八8。
[0008]將小鼠麻醉、固定后，消毒胸部皮膚，打開(kāi)胸腔暴露肺野，分別取下右肺上、中、下三葉，用冰的生理鹽水進(jìn)行左肺泡灌洗，回收率達(dá)90%左右；肺泡灌洗液離心后(41,500呢，10111111),取上清儲(chǔ)存于-80X:，用于檢測(cè)蛋白及細(xì)胞因子的含量，沉淀重懸后用于總細(xì)胞計(jì)數(shù)。并進(jìn)行肺組織病理學(xué)觀(guān)察和即0等檢測(cè)。
[0009]1肺組織病理學(xué)觀(guān)察:將取下的右肺下葉浸泡于10%中性甲醛溶液中固定2處，然后脫水、透明、包埋、切片，冊(cè)染色觀(guān)察肺損傷程度，采用&111訪(fǎng)評(píng)分方法對(duì)肺水腫、肺泡及間質(zhì)炎癥、肺泡及問(wèn)質(zhì)出血、肺不張和透明膜形成，分別進(jìn)行0?4分半定量分析，無(wú)損傷為0分；病變范圍? 25%為1分；25%?病變范圍? 50%為2分；50%?病變范圍? 75%為3分；病變范圍多75%為4分。每張切片觀(guān)察10個(gè)高倍視野進(jìn)行評(píng)分。在光鏡下(^200)觀(guān)察發(fā)現(xiàn)4011廿01組及…組肺泡腔清晰，結(jié)構(gòu)完整，肺間隔均勻，肺泡壁光滑，肺泡腔及間質(zhì)內(nèi)無(wú)滲出物。1？3組可見(jiàn)肺泡間隔增寬，間質(zhì)水腫、毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血、炎細(xì)胞浸潤(rùn)，部分肺泡斷裂、內(nèi)有水腫液聚集。I？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組肺損傷明顯減輕，表現(xiàn)為肺泡間隔增厚不明顯，肺泡內(nèi)滲出減少，間質(zhì)出血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，與￠011廿01及I？組比較，1？8組肺組織病理學(xué)評(píng)分增加1^0.05)；給予…、0?后肺組織病理學(xué)評(píng)分降低1)^0.05) ；0011^01組與…組之間相互比較，肺組織病理學(xué)表現(xiàn)及肺組織病理學(xué)評(píng)分無(wú)明顯差異(9)0.05)組、…分…組、1？3—0狀組之間相互比較，肺組織病理學(xué)表現(xiàn)及肺組織病理學(xué)評(píng)分也無(wú)明顯差異。正常肺組織中，肺泡上皮細(xì)胞通過(guò)鈉通道和水通道蛋白調(diào)節(jié)肺泡腔內(nèi)的水平衡，是防止肺水腫的重要屏障。八11/八即3發(fā)病早期，由于肺泡上皮細(xì)胞凋亡增加及由其損傷造成的肺問(wèn)質(zhì)壓力增高可破壞該屏障，造成肺水腫。另外，水腫也是炎癥的表現(xiàn)形式之一，在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中I？明顯減輕1/0，說(shuō)明I？可以減輕1？3導(dǎo)致肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺泡上皮通透性的損傷。灌洗液中的蛋白濃度是顯示肺通透性的另一指標(biāo)，在本實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)模型組與對(duì)照組比較，肺泡灌洗液中蛋白濃度明顯增加，給予I？后蛋白明顯降低?？傊?，…可以減輕引起的肺通透性的增加，明顯減輕引起的肺泡水腫、出血、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡間隔增寬及肺間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞的浸潤(rùn)。
[0010]2即0活性測(cè)定:采用肺組織勻漿，分別設(shè)定試劑空白、對(duì)照管、測(cè)定管，于460=1??！處，測(cè)各管00值。在0)11^01組、…組、1？8組、I？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組中，各組1？0 的活性分別是(0.45±0丨 16)晌、(0.38±0丨 12)晌、(12.50±2丨 16)晌、(5.21±0丨 31)晌、(4.53±1 14)晌、(4.13±1 53)晌；與0011^01組及I？組比較，1？8組1？0活性增加(1^0.05)；與1？3組比較，…預(yù)處理組、…治療組及0?治療組即0活性減弱(1^0.05)；與0011廿01組及…組比較，I？預(yù)處理組、…治療組及0?治療組即0活性增加(9(0.05)；〇011廿01組與…組之間相互比較，即0活性無(wú)明顯差異(9)0.05)山？預(yù)處理組、…治療組及0?治療組之涮相互比較即0活性也無(wú)明顯差異(9)0.05)；肺組織即0活性的高低反應(yīng)了肺間質(zhì)內(nèi)活化中性粒細(xì)胞的數(shù)目的多少，正常情況下，1？0具有殺害病原微生物的作用，急性肺損傷時(shí)會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的1？0，可以引起組織損傷。在本實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，I？可以減輕1？3弓丨起肺組織中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，降低1？0的活性，預(yù)防性與治療性給予⑶具有相似的功能。
[0011]3灌洗液中總細(xì)胞計(jì)數(shù):肺泡灌洗液離心后的沉淀加入101吧重懸，取少許滴加在蓋玻片邊緣，使懸液充滿(mǎn)蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間，靜置3分鐘，注意蓋玻片下不要有氣泡，不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢蹆?nèi)。計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)，0011^1-01組、I？組、1？8組、I？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組肺泡灌洗液中總細(xì)胞數(shù)分別為(24^5^1(^ (28^4)父104、(202 + 24)XI。4、(90^7)父104、(92^5)父104、(69^8) X 104，與(^^01 組比較，組肺泡灌洗液中細(xì)胞含量增加⑴切.05)；與組比較，I？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組肺泡灌洗液中總細(xì)胞數(shù)減少⑴切.05)；與0)11廿01組及…組比較，I？預(yù)處理組、…治療組及0?治療組肺泡灌洗液中總細(xì)胞數(shù)增加⑴切.05) ；00！1^01組與…組之間相互比較，肺泡灌洗液中總細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯差異$)0.05) ；1？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組之間肺泡灌洗液中總細(xì)胞數(shù)也無(wú)明顯差別$)0.051
[0012]4肺濕/干比值檢測(cè):取右肺中葉，用吸水紙吸干表面水分及血液，稱(chēng)量肺濕重(胃)。置于801:烤箱721！后，稱(chēng)量肺干重(0)，計(jì)算濕/干重比0^/0)=肺濕重/肺干重。與〇011 釷01 組(4.07^0.51)及⑶組(4.32^0.48)比較，組(6.39±0^ 20)8 組織濕 / 干比值升高(戶(hù)⑶.05)山？預(yù)處理組、…治療組及0?治療組肺濕/干比值分別是(4.88^0.30)、(4.96^0.71)及(4.51^0.19)，與組相比肺濕干比值降低0^0.05)；與0)11廿01組及I？組比較，I？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組肺濕/干比值升高(9(0.05) ；0011^01組與I？組相互比較，肺濕/干比值無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義$)0.05)山？預(yù)處理組、…治療組及0?治療組肺濕/干比值也無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(9)0.05)。
[0013]5灌洗液中總蛋白含量的檢測(cè):在0)11廿01組、I？組、1？8組、I？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組中，各組蛋白含量分別為(0.48 ±0^ 03)1^/1111、(0.39 ±0^ 03)呢加1、

(0.75^0.06)11^/1111 (0.80^0.03)11^/1111^ (0.64^0.05)11^/1111,與0011^1-01組及…組比較，1？8組總蛋白含量增加？〈0丨05)；與組比較，I？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組總蛋白含量減少1^0.05)；與0)11廿01組及…組比較，I？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組總蛋白含量增/邛(1^0.05) ；0011^01組與…組相互比較，總蛋白含量無(wú)明顯差別00.05) ；1？預(yù)處理組、I？治療組及0?治療組之間相互比較總蛋白含量也無(wú)明顯差異00.05)。給予I？后肺泡灌洗液中細(xì)胞含量及蛋白含量也明顯減少，說(shuō)明肺組織中滲出減少，炎癥表現(xiàn)較輕。
[0014]6肺泡灌洗液中1,-0、幾-10含量組、…組、組、…預(yù)處理組、…治療組及0?治療組肺泡灌洗液中I'即-(1含量分別為:(38.42^1.(36.98^3.62)肫加1、(168.15^5.91)^^/1111, (69.32±8丨 08)1^/1111、(62.22±7丨 38)^/1111、(55.62^1.73)呢/…，11-10 含量分別是(63.58±10^ 25)^/^1, (63.32±19^ 42)^/1111、(100.52±24 35)呢/…、(147.46^20.62)1^/1111、(145.04^28.73)^/1111、(158.54^17.46)1^/1111° 與0011^01及I？組相比較，1？8組1, 0、11-10含量升高(戶(hù)⑶.05)，給予I？后1,- 0值含量降低，而11-10含量升高⑴切.05),提示…可以降低，增加11-10等抗炎因子含量。
[0015]實(shí)例一
[0016]臨床上引起肺的急性損傷的疾病很多，在急性肺損傷的初期階段，及時(shí)有效地應(yīng)用乳鐵蛋白，可以有效地緩解和治療急性肺損傷的進(jìn)一步發(fā)展；其特征在于:發(fā)現(xiàn)有急性肺損傷可能時(shí)應(yīng)及時(shí)應(yīng)用乳鐵蛋白，乳鐵蛋白能夠明顯減輕急性肺損傷的炎癥反應(yīng)，減少肺組織內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、減輕肺毛細(xì)血管通透性；用量為208/次；應(yīng)用方法為溫水沖服，
三次/天。
【權(quán)利要求】
1.乳鐵蛋白對(duì)急性肺損傷保護(hù)作用的一種治療方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳鐵蛋白對(duì)急性肺損傷保護(hù)作用的一種治療方法，其特征在于:在急性肺損傷的初期階段，及時(shí)有效地應(yīng)用乳鐵蛋白，可以有效地緩解和治療急性肺損傷的進(jìn)一步發(fā)展，能夠明顯減輕急性肺損傷的炎癥反應(yīng)，減少肺組織內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、減輕肺毛細(xì)血管通透性；用量為20g/次；應(yīng)用方法為溫水沖服，三次/天。
【文檔編號(hào)】A61K38/40GK104491847SQ201410768846
【公開(kāi)日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月12日
【發(fā)明者】龐慶豐, 范紅斌, 杜斌, 陳俊良 申請(qǐng)人:江南大學(xué)