本發(fā)明屬植物提取領(lǐng)域，具體涉及的是一種辣椒葉多酚的提取方法。
背景技術(shù)：
植物多酚是廣泛存在于植物體內(nèi)的重要次生代謝產(chǎn)物，廣泛分布于植物體的根、葉、皮、果肉和殼中，具有抗氧化、抗腫瘤、保護(hù)肝臟等多種生理功能，是人體每天必須從食物中攝取的抗氧化物質(zhì)，被稱為繼膳食纖維之后的第七營養(yǎng)素。按結(jié)構(gòu)將多酚分為以下幾類：簡單酚類、木脂素類、香豆素類、芪類、黃酮類、酚酸類和鞣質(zhì)類等化合物。
辣椒（Capsicum annuum L.）是一種藥食兩用的植物，在我國廣泛種植，產(chǎn)量居世界第一位。辣椒葉作為辣椒種植的副產(chǎn)品，不僅具有很高的營養(yǎng)和食用價值，也可作藥材用于強(qiáng)健脾胃、活血消腫、殺蟲止癢等。辣椒葉中含有豐富的多酚類化合物，具有抗氧化、抗過敏和抗腫瘤等多種活性，廣泛應(yīng)用于食品保鮮，化妝品添加和腫瘤輔助治療等多方面。目前尚未有高效的方法從辣椒葉中提取多酚類化合物，使得辣椒葉資源長期未得到合理的利用。
現(xiàn)有技術(shù)中，植物多酚的提取方法主要有溶液浸提法、超聲提取法、微波法等，但是單一的提取方法產(chǎn)率低。
酶是活細(xì)胞產(chǎn)生的，并能在細(xì)胞內(nèi)或者細(xì)胞外起催化作用的蛋白質(zhì)。具有高效性、專一性和催化條件溫和等特點(diǎn)，可以在常溫、常壓下分解植物細(xì)菌壁，大幅度提高多紛得率，可以最大限度保存多酚的活性，分解或除去雜質(zhì)，無污染，簡化后續(xù)的純化工藝。
而超聲波輔助提取法已廣泛應(yīng)用于植物活性成分開發(fā)利用中，與傳統(tǒng)的回流提取相比，具有提高提取率﹑降低溶劑用量﹑節(jié)約能源等優(yōu)勢，更加環(huán)保高效。
利用超聲波福射可以產(chǎn)生空化效應(yīng)、機(jī)械效應(yīng)、加熱作用、乳化、爐散和攪拌等多種作用，使植物細(xì)胞壁發(fā)生穿孔，增加分子運(yùn)動的頻率和速度，加強(qiáng)溶劑的穿透力，可快速高效的提取細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)。與傳統(tǒng)的水煮、醇沉及回流提取相比，超聲可以在較低溫度下，避免對多酚的熱破壞，預(yù)防其水解和氧化，最大限度的保持多盼的生物活性，而且提取工藝簡單，縮短提取時間以及有針對性的提高提取量、減少溶刻的用量，節(jié)約能源，更加的環(huán)保、高效和節(jié)能，在多酚提取領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明以水取代傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑，同時采用改進(jìn)的酶解并超聲波提取工藝，破壞辣椒葉細(xì)胞，促使其中的多酚物質(zhì)溶出并向外擴(kuò)散，可以減少溶劑的用量，提高提取率，提高純度。
本發(fā)明的目的是提供一種辣椒葉多酚的提取方法，該方法可以減少溶劑的用量，提高提取率，提高純度。
為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的一種辣椒葉多酚的提取方法，步驟如下：
（1）預(yù)處理：將辣椒葉洗凈，瀝干水后，在60-80℃溫度下烘干，然后切剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，過40目篩得到辣椒葉粉末備用；
（2）提?。?/p>
酶處理：取步驟（1）中的辣椒葉粉末，按辣椒葉粉末與水(g/ml)1：4-8 的比例加入水，調(diào)節(jié)其溫度至35-55℃，pH 至3.5-4.5，加入纖維素酶、酸性蛋白酶組成的復(fù)合酶，酶解2h，得酶解液；所述的纖維素酶、酸性蛋白酶的重量比例為：1-4 ：1；所述的復(fù)合酶的總重占辣椒葉粉末的0.8-1.2%；
超聲處理：取酶解液用無機(jī)酸調(diào)PH為0.8-1.2，升溫至40-50℃，200W 的功率下超聲波處理35-45min；
過濾，收集濾液，減壓濃縮除酒精，再真空干燥得辣椒葉多酚粗提物；
(3) 純化：
a)將所述多酚粗提物加水配成10mg/mL 的溶液，流過HP-20 型大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為4BV/h，吸附時間為3h，然后水浴振蕩24h，水浴溫度為25℃，振蕩頻率為120r/min ；
b)將吸附后的樹脂過濾，蒸餾水洗兩次后濾干，用乙醇進(jìn)行動態(tài)洗脫，洗脫速率為2BV/h，乙醇濃度為70%，減壓濃縮，真空干燥，得到辣椒葉總多酚。
優(yōu)選的，所述無機(jī)酸為鹽酸。
進(jìn)一步優(yōu)選的，所述減壓濃縮的溫度為70～75℃。
更進(jìn)一步優(yōu)選的，所述真空干燥是真空度控制在一0.08Mpa，溫度控制在60～70℃。
本發(fā)明的有益效果為：
（1）通過復(fù)合酶和超聲波共同作用于原料，從原料中提取多酚，酶作用條件溫和，而且還起到破壁的作用，使原料中的多酚徹底的溶出的作用；超聲波提取過程是一個物理過程，提取過程中無化學(xué)變化，被浸提的生物活性物質(zhì)在短時間內(nèi)保持不變，縮短了破碎時間；
（2）利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動、高的加速度、攪拌作用等可加速植物有效成分的溶出，從而提高了提取率，節(jié)約了溶劑。
（3）以水取代傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑，同時采用改進(jìn)的酶解并超聲波提取工藝處理提取辣椒葉中多酚，耗時短；超聲功率、提取時間、提取劑及其濃度、料液比等提取工藝條件均采取最優(yōu)，提取率高且有效保護(hù)提取物的功能成分；可以減少溶劑的用量，提高提取率，提高純度。
具體實(shí)施方式
下面以實(shí)施例作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明不局限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1
（1）預(yù)處理：將辣椒葉洗凈，瀝干水后，在60-80℃溫度下烘干，然后切剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，過40目篩得到辣椒葉粉末備用。
（2）提?。?/p>
酶處理：取步驟（1）中的辣椒葉粉末100g，加入800ml 的純凈水，調(diào)節(jié)其溫度至30℃，pH 至3.5，加入0.8g由纖維素酶、酸性蛋白酶（1:1）組成的復(fù)合酶，酶解2h，得酶解液；
超聲處理：取酶解液用鹽酸調(diào)PH為0.8，升溫至40℃，200W 的功率下超聲波處理35min；
過濾，收集濾液，70～75℃減壓濃縮除酒精，再在真空度控制在一0.08Mpa，溫度控制在60～70℃真空干燥得辣椒葉多酚粗提物。
(3) 純化：
a)將所述多酚粗提物加水配成10mg/mL 的溶液，流過HP-20 型大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為4BV/h，吸附時間為3h，然后水浴振蕩24h，水浴溫度為25℃，振蕩頻率為120r/min ；
b)將吸附后的樹脂過濾，蒸餾水洗兩次后濾干，用乙醇進(jìn)行動態(tài)洗脫，洗脫速率為2BV/h，乙醇濃度為70%，收集洗脫液，70～75℃減壓濃縮除酒精，再在真空度控制在一0.08Mpa，溫度控制在60～70℃，得到辣椒葉總多酚。
經(jīng)以上步驟得到辣椒葉多酚的純度為78.4%。
實(shí)例2
（1）預(yù)處理：將辣椒葉洗凈，瀝干水后，在60-80℃溫度下烘干，然后切剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，過40目篩得到辣椒葉粉末備用。
（2）提?。?/p>
酶處理：取步驟（1）中的辣椒葉粉末100g，加入800ml 的純凈水，調(diào)節(jié)其溫度至30℃，pH 至4.5，加入1.2g由纖維素酶、酸性蛋白酶（4:1）組成的復(fù)合酶，酶解2h，得酶解液；
超聲處理：取酶解液用鹽酸調(diào)PH為1.2，升溫至50℃，200W 的功率下超聲波處理45min；
過濾，收集濾液，70～75℃減壓濃縮除酒精，再在真空度控制在一0.08Mpa，溫度控制在60～70℃真空干燥得辣椒葉多酚粗提物。
(3) 純化：
a)將所述多酚粗提物加水配成10mg/mL 的溶液，流過HP-20 型大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為4BV/h，吸附時間為3h，然后水浴振蕩24h，水浴溫度為25℃，振蕩頻率為120r/min ；
b)將吸附后的樹脂過濾，蒸餾水洗兩次后濾干，用乙醇進(jìn)行動態(tài)洗脫，洗脫速率為2BV/h，乙醇濃度為70%，收集洗脫液，70～75℃減壓濃縮除酒精，再在真空度控制在一0.08Mpa，溫度控制在60～70℃，得到辣椒葉總多酚。
經(jīng)以上步驟得到辣椒葉多酚的純度為77.5%。
實(shí)施例3
（1）預(yù)處理：將辣椒葉洗凈，瀝干水后，在60-80℃溫度下烘干，然后切剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，過40目篩得到辣椒葉粉末備用。
（2）提?。?/p>
酶處理：取步驟（1）中的辣椒葉粉末100g，加入600ml 的純凈水，調(diào)節(jié)其溫度至45℃，pH 至4.0，加入1g由纖維素酶、酸性蛋白酶（2.5:1）組成的復(fù)合酶，酶解2h，得酶解液；
超聲處理：取酶解液用鹽酸調(diào)PH為1.0，升溫至45℃，200W 的功率下超聲波處理40min；
過濾，收集濾液，70～75℃減壓濃縮除酒精，再在真空度控制在一0.08Mpa，溫度控制在60～70℃真空干燥得辣椒葉多酚粗提物。
(3) 純化：
a)將所述多酚粗提物加水配成10mg/mL 的溶液，流過HP-20 型大孔樹脂進(jìn)行吸附，流速為4BV/h，吸附時間為3h，然后水浴振蕩24h，水浴溫度為25℃，振蕩頻率為120r/min ；
b)將吸附后的樹脂過濾，蒸餾水洗兩次后濾干，用乙醇進(jìn)行動態(tài)洗脫，洗脫速率為2BV/h，乙醇濃度為70%，收集洗脫液，70～75℃減壓濃縮除酒精，再在真空度控制在一0.08Mpa，溫度控制在60～70℃，得到辣椒葉總多酚。
經(jīng)以上步驟得到辣椒葉多酚的純度為79.2%。