本申請根據(jù)U.S.C.§119(a)-119(d)中的一條或多條要求2014年4月3日提交的印度專利申請?zhí)?75/DEL/2014的權(quán)益，所述專利申請的內(nèi)容通過引用以其全部并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開一般地涉及超分子組合治療藥物、包括所述超分子組合治療藥物的組合物，及其用途。具體地，本公開提供了在脂雙層和膠束內(nèi)產(chǎn)生超分子組裝體體的疏水性紫杉烷-脂質(zhì)共價綴合物，以提供額外的穩(wěn)定性，使得增加瘤內(nèi)濃度以及因此增加功效。本公開還提供了超分子組合治療藥物，其中紫杉烷-脂質(zhì)綴合物與鉑化合物、激酶抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的一種或更多種組合，所述鉑化合物、激酶抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的每個任選地與脂質(zhì)綴合。

背景技術(shù)：

根據(jù)世界衛(wèi)生組織的預期，到2030年，由于癌癥的死亡率，死亡人數(shù)將由2008年的760萬增加至1200萬。為了解決該增長問題，推動更新的治療策略的進展的兩個新興范例是：(i)更深入地理解致癌驅(qū)動因素，從而開發(fā)分子“靶向”治療藥物；以及(ii)使用納米技術(shù)，將藥物特異性遞送至腫瘤，從而提高治療指數(shù)。然而，這兩個范例之間可以為改善癌癥化療提供獨特機會的連接，目前大部分仍處在開發(fā)階段。

紫杉醇、多西他賽和卡巴他賽是熟知的通常用于治療轉(zhuǎn)移性卵巢癌和乳腺癌的紫杉烷。它們獨特的抗增殖行為機制和較寬的活性范圍吸引著科學界。在分裂細胞中，紫杉烷促進微管的超穩(wěn)定化，并且由此阻止細胞分裂所必需的微管解體。因為高效力，以及非特異性針對癌細胞，所述紫杉烷顯示出嚴重的不期望的副作用，如惡心、嘔吐、腹瀉、頭暈或困倦等。在水性介質(zhì)中的極端不溶性是另一個缺點，而在施用之前使用有效的溶劑如聚氧乙基化蓖麻油/乙醇和用適合的緩沖液稀釋，還會另外引起嚴重的過敏免疫反應(yīng)。為了克服施用的挑戰(zhàn)，在文獻中已經(jīng)報道了多種方法。膠束、脂質(zhì)體和乳劑形式的改進的紫杉醇劑型^1,2可以克服一些藥代動力學特性，但是在體內(nèi)系統(tǒng)中藥物分布迅速從載體出來。在一些方法中，通過合成具有改進水溶性的新紫杉烷類似物，藥代動力學已經(jīng)得到了改善²。因此，已經(jīng)合成了一些紫杉烷類似物³來克服這些挑戰(zhàn)，但溶解性問題仍然是主要問題，效力急劇降低而選擇性并沒有得到顯著改善。

為了解決劑型挑戰(zhàn)和改進的功效，已經(jīng)合成了一些疏水性⁴、親脂性紫杉烷⁵前藥，其中增強滲透性和保留(EPR)現(xiàn)象被認為是針對腫瘤的有效的藥物累積方法，并且因此具有更好的體內(nèi)功效。在這些前藥中使用的脂質(zhì)包括磷脂、膽固醇、脂肪酸等。

在超過70％的所有癌癥中，基于鉑的化學治療劑被用作一線療法。順鉑快速形成產(chǎn)生腎毒性的順式-[Pt(NH₃)₂Cl(OH₂)]⁺和順式-[Pt(NH₃)₂(OH₂)]²⁺。此外，卡鉑和奧沙利鉑兩者的水合作用都顯著更慢，使得效力降低。在最近過去的幾年間已經(jīng)取得了相當大的進展，其中Dhar等(PNAS,2008,105,17356)產(chǎn)生了對于包封到PLGA-b-PEG納米顆粒中足夠疏水的鉑(IV)復合物(c,t,c-[Pt(NH₃)₂(O₂CCH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)₂Cl₂]。然而，在這個例子中，前藥必須在細胞內(nèi)被加工為順鉑。此外，與游離的順鉑相比，基于鉑綴合到聚合物(例如，聚酰胺-胺樹狀高分子-鉑復合物)的替代策略導致細胞毒性降低200-550倍。這是由于在聚合物和鉑之間形成了強鍵(J Pharm Sci,2009,98,2299)。另一個實例是效力不如卡鉑的AP5280，N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺共聚物-鍵合的鉑。這里，通過與四肽間隔物的COOH末端甘氨酸連接的氨基丙二酸螯合試劑保持鉑(Clin Can Res,2004,10,3386；Eur J Can,2004,40,291)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明描述了紫杉烷的前藥可以組裝成超分子結(jié)構(gòu)，其具有改進的藥代動力學特性，如長的循環(huán)時間、增強的吸收和藥物在腫瘤內(nèi)的緩慢釋放。通過在水性緩沖液中制作超分子組裝體，以及添加一些輔助脂質(zhì)形成平均顆粒尺寸低于300nm的納米顆粒，可以實現(xiàn)更大量的紫杉烷吸收到腫瘤中。超分子組裝體以及前藥的降解在細胞內(nèi)釋放有效的藥物。紫杉烷的前藥的藥物組成包括接頭，其中紫杉烷通過酯、醚、酰胺或其他的共價綴合與接頭結(jié)合在一起。脂質(zhì)分子可以是通過適合的接頭/間隔物綴合到藥物分子的膽固醇、α-生育酚、脂肪酸或其他天然存在的脂質(zhì)分子。間隔物可以由琥珀酸、富馬酸、丙炔酸、乙二醇、二甘醇、天然或非天然氨基酸單獨或組合構(gòu)成。

本公開提供了一種超分子組合治療藥物(SCT)。本公開還提供了包括所述超分子組合治療藥物的組合物，例如藥物組合物。在本文中使用時，術(shù)語“超分子組合治療藥物”或“SCT”指納米或微米尺寸的結(jié)構(gòu)，在所述結(jié)構(gòu)中或在所述結(jié)構(gòu)上，要遞送的活性劑不是共價地(或者另外以化學方式)與所述結(jié)構(gòu)連接，而是以物理方式或機械方式包含在該結(jié)構(gòu)中或被該結(jié)構(gòu)所保持。這些結(jié)構(gòu)可以被范德華力或者其他形式的非共價鍵穩(wěn)定。超分子組合治療藥物可以是但不限于顆粒、脂質(zhì)體、膠束、乳劑的形式。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物是納米或微米顆粒的形式。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物是顆粒的形式，其中顆粒具有形成內(nèi)腔的脂質(zhì)層，其中紫杉烷綴合物出現(xiàn)在脂質(zhì)層中或脂質(zhì)層的外表面上。

某些示例性實施方式提供了超分子組合治療藥物，其中紫杉烷-脂質(zhì)綴合物與鉑化合物、激酶抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的一種或更多種組合，所述鉑化合物、激酶抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的每個任選地與脂質(zhì)綴合。

在另一個方面，本文描述了一種治療癌癥的方法，所述方法包括向需要治療癌癥的患者施用如本文描述的超分子組合治療藥物。在一些實施方式中，所述癌癥選自由以下組成的組：乳腺癌；卵巢癌；膠質(zhì)瘤；胃腸癌；前列腺癌；惡性腫瘤、肺惡性腫瘤、肝細胞惡性腫瘤、睪丸癌；宮頸癌；子宮內(nèi)膜癌；膀胱癌；頭頸癌；肺癌；胃-食道癌，以及婦科癌癥。在一些實施方式中，所述方法進一步包括向所述患者共同施用一種或更多種另外的抗癌療法。在一些實施方式中，所述另外的療法選自由以下組成的組：外科手術(shù)、化學療法、放射療法、溫熱療法、免疫療法、激素療法、激光療法、抗血管生成療法，及其任何組合。在一些實施方式中，所述另外的療法包括向所述患者施用抗癌劑。

本公開還提供了一種用于預測癌癥患者對自組裝的超分子顆粒表現(xiàn)出比對鉑酸鹽和紫杉烷增強的應(yīng)答的似然度的方法。一般來說，所述方法包括測定CAV1、CAV2、CAV3、LDLR、SMAD7、SMURF2、NEDD4和PRKCA中的一個或更多個的表達水平，并且其中CAV1、CAV2、CAV3、LDLR、SMAD7、SMURF2、NEDD4、PRKCA中的至少一個的表達水平的增加指示對包括自組裝的超分子顆粒的治療的陽性應(yīng)答。在一些實施方式中，樣品可以是腫瘤樣品。進一步，樣品可以是活檢樣品，或者來自腹水的細胞，或者來自胸膜積液的細胞。要測定的樣品可以是經(jīng)固定、石蠟包埋的組織樣品。

附圖簡述

圖1示出了根據(jù)本公開的實施方式，新的超分子紫杉烷2的體外表征。

圖2示出了根據(jù)本公開的實施方式，新的超分子紫杉烷16的體外表征。

圖3示出了通過qPCR，CAV1mRNA在應(yīng)答(非陰影)和未應(yīng)答(陰影)的細胞系中的表達。

圖4示出了根據(jù)本公開的實施方式，超分子組合治療藥物(SCT)的體外表征，其中新的超分子紫杉烷被連接到結(jié)合癌細胞的表面上表達的蛋白、受體或標志物的抗體。

圖5示出了IO-125和抗PD-L1針對4T1(TNBC)腫瘤的治療效果。

具體實施方式

一般來說，超分子組合治療藥物包括紫杉烷-脂質(zhì)綴合物。要認識到，超分子組合治療藥物可以包括僅一種類型的紫杉烷綴合物，或者兩種或更多種不同類型的紫杉烷綴合物。因此，在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括僅一種類型的紫杉烷綴合物。在一些其他實施方式中，超分子組合治療藥物包括至少兩種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的紫杉烷綴合物。不同類型的紫杉烷綴合物意思是綴合物中的至少一種元素彼此不同。例如，不同類型的綴合物的不同可以在于綴合物中具體的紫杉烷、綴合物中具體的脂質(zhì)，或者紫杉烷和脂質(zhì)綴合在一起的方式，即接頭。在一些實施方式中，紫杉烷-脂質(zhì)綴合物是卡巴他賽-膽固醇綴合物。

除紫杉烷綴合物之外，超分子組合治療藥物可以進一步包括脂質(zhì)綴合的激酶抑制劑。因此，在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括紫杉烷-脂質(zhì)綴合物和激酶-抑制劑綴合物。包括紫杉烷綴合物和激酶抑制劑綴合物的超分子組合治療藥物可以具有以任何期望的組合或比例的綴合物。例如，超分子組合治療藥物可以包括兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的紫杉烷綴合物和一種類型的激酶抑制劑綴合物。在一些其他實施例中，超分子組合治療藥物可以包括一種類型的紫杉烷綴合物和兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的激酶抑制劑綴合物。在仍然一些其他實施例中，超分子組合治療藥物可以包括兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的紫杉烷綴合物和兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的激酶抑制劑綴合物。在某些示例性實施方式中，激酶抑制劑是PI3K抑制劑。在仍然一些其他實施方式中，超分子組合治療藥物可以包括兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的鉑綴合物、兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的紫杉烷綴合物，以及兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的激酶抑制劑綴合物。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物進一步包括任選地與脂質(zhì)綴合的抗PD-L1抗體(或者其抗原結(jié)合片段)。

超分子組合治療藥物還可以包括與脂質(zhì)綴合的鉑化合物。因此，在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括紫杉烷-脂質(zhì)綴合物和鉑綴合物。包括紫杉烷綴合物和鉑綴合物的超分子組合治療藥物可具有以任何期望的組合或比例的綴合物。例如，超分子組合治療藥物可以包括兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的紫杉烷綴合物和一種類型的鉑綴合物。在一些其他實施例中，超分子組合治療藥物可以包括一種類型的紫杉烷綴合物和兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的鉑綴合物。在仍然一些其他實施例中，超分子組合治療藥物可以包括兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的紫杉烷綴合物和兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的鉑綴合物。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物進一步包括任選地與脂質(zhì)綴合的抗PD-L1抗體(或者其抗原結(jié)合片段)。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物進一步包括與脂質(zhì)綴合的抗體(或者其抗原結(jié)合片段)。不受限制地，抗體可以用于治療目的(即，治療抗體)或用于使超分子組合治療藥物靶向期望的位點(即，靶向抗體)。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物進一步包括免疫調(diào)節(jié)劑。免疫調(diào)節(jié)劑是免疫療法的活性劑，并且可以或者激活或者抑制免疫應(yīng)答。在某些實施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑激活和刺激針對癌細胞的免疫應(yīng)答，所述免疫調(diào)節(jié)劑的非限制例子包括免疫細胞(例如，自然殺傷細胞、淋巴因子激活的殺傷細胞、細胞毒性T細胞和樹突細胞)、抗體(例如，抗PD-L1和抗PD-1抗體、抗CD52、抗VEGF-A、抗CD30、抗EGFR、抗CD33、抗CD20、抗CTLA4和抗HER-2抗體)，和細胞因子(例如，干擾素和白介素)。在某些示例性實施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑與脂質(zhì)綴合。

調(diào)控T細胞激活的重要的負共刺激信號是由程序性死亡-1受體(PD-1)(CD279)以及它的配體結(jié)合伴侶PD-L1(B7-H1，CD274)和PD-L2(B7-DC，CD273)提供的。PD-1的負調(diào)控作用是由傾向于自身免疫性的PD-1敲除(Pdcdl”')揭示的(Nishimura等,Immunity JJ.:141-51(1999)；Nishimura等,Science 291:319-22(2001))。PD-1可以在T細胞、B細胞、自然殺傷T細胞、激活的單核細胞和樹突細胞(DC)上表達。激活的而非未受刺激的人CD4⁺和CD8⁺T細胞、B細胞和骨髓細胞表達PD-1。這與CD28和CTLA-4的更受限制的表達形成鮮明對比(Nishimura等,Int.Immunol.8:773-80(1996)；Boettler等,J.Virol.80:3532-40(2006))。在小鼠T和B細胞、CD、巨噬細胞、間充質(zhì)干細胞和骨髓源性肥大細胞上組成性表達PD-L1(Yamazaki等,J.Immunol.169:5538-45(2002))。PD-L1被表達在較寬范圍的非造血細胞(例如，角膜、肺、血管上皮、肝非實質(zhì)細胞、間充質(zhì)干細胞、胰島、胎盤合胞體滋養(yǎng)層、角質(zhì)細胞等)上(Keir等,Annu.Rev.Immunol.26:677-704(2008))，并且在激活之后的一些細胞類型上的表達被上調(diào)。PD-L2的表達比PD-L1更受限制。PD-L2被誘導性地表達在DC、巨噬細胞和骨髓源性肥大細胞上。約一半至三分之二的靜止腹膜B1細胞表達PD-L2，而常規(guī)的B2B細胞不表達PD-L2(Zhong等,Eur.J.Immunol.37:2405-10(2007))。

通常，PD-1信號轉(zhuǎn)導具有對細胞因子產(chǎn)生比對細胞增殖具有更大的影響，其中對IFN-γ、TNF-α和IL-2產(chǎn)生具有顯著影響。PD-1介導的抑制性信號轉(zhuǎn)導也依賴于TCR信號轉(zhuǎn)導的強度，其中在低水平的TCR刺激下產(chǎn)生更大的抑制?？梢酝ㄟ^CD28的共刺激(Freeman等,J.Exp.Med.192:1027-34(2000))或IL-2的存在(Carter等,Eur.J.Immunol.32:634-43(2002))來克服這種降低。越來越多的證據(jù)表明，通過PD-L1和PD-L2的信號轉(zhuǎn)導可能是雙向的。即，除修飾TCR或BCR信號轉(zhuǎn)導之外，信號轉(zhuǎn)導還可能被遞送回到表達PD-L1和PD-L2的細胞。盡管并未發(fā)現(xiàn)用從患有瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥(Waldenstrom's macroglobulinemia)的患者分離的抗PD-L2抗體對樹突細胞的處理能上調(diào)MHC II或B7共刺激分子，但是這樣的細胞確實生成了更大量的促炎細胞因子，特別是TNF-a和IL-6，并且刺激T細胞增殖(Nguyen等,J.Exp.Med.196:1393-98(2002))。用該抗體對小鼠的治療也(1)增強對移植的Bl6黑素瘤的抗性并且迅速誘導腫瘤特異性CTL[Radhakrishnan等,J.Immunol.170:1830-38(2003)；Radhakrishnan等,Cancer Res.64:4965-72(2004)；Heckman等,Eur.J.Immunol.37:1827-35(2007)]；(2)阻斷過敏性哮喘的鼠模型中氣道炎性疾病的發(fā)展[Radhakrishnan等,J.Immunol.173:1360-65(2004)；Radhakrishnan等,J.Allergy Clin.Immunol.UJy.668-74(2005)]。信號反向轉(zhuǎn)導到樹突細胞(“DC”)的進一步的證據(jù)來自對用可溶的PD-1(融合到Ig恒定區(qū)的PD-1EC結(jié)構(gòu)域—“s-PD-1”)培養(yǎng)的骨髓源性DC的研究(Kuipers等,Eur.J.Immunol.36:2472-82(2006))。該sPD-1通過施用抗PD-1，以可逆的方式抑制DC激活并且增加IL-10產(chǎn)生。此外，一些研究示出不依賴于PD-1的PD-L1或PD-L2的受體B7.1已經(jīng)被鑒定為PD-L1的結(jié)合伴侶[Butte等,Immunity 27:111-22(2007)]?；瘜W交聯(lián)研究表明PD-L1和B7.1可以通過它們的IgV樣結(jié)構(gòu)域相互作用。B7.1:PD-L1相互作用可以誘導抑制信號進入T細胞。

本發(fā)明的某些方面描述了化學治療藥物與抗PD-1或抗PD-L1抗體的組合的前藥，所述前藥可以組裝成具有改進的腫瘤負荷和上調(diào)的T細胞介導的免疫應(yīng)答的超分子結(jié)構(gòu)，以及這些超分子在癌癥治療中的用途。

根據(jù)本發(fā)明的抗PD-L1抗體——其具有抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)活性——通過誘導腫瘤細胞溶解直接作用于攜帶PD-L1的腫瘤細胞。而且，抗體阻斷人PD-L1和人PD-1之間的相互作用，并且增強T細胞功能，以使細胞介導的免疫應(yīng)答上調(diào)，而用于治療癌癥。

在另一方面中，本文描述了一種治療癌癥的方法，所述方法包括向需要治療癌癥的患者施用如本文描述的超分子組合治療藥物。在一些實施方式中，癌癥選自由以下組成的組：乳腺癌；卵巢癌；膠質(zhì)瘤；胃腸癌；前列腺癌；惡性腫瘤、肺惡性腫瘤、肝細胞惡性腫瘤、睪丸癌；宮頸癌；子宮內(nèi)膜癌；膀胱癌；頭頸癌；肺癌；胃-食道癌，以及婦科癌癥。

在一些實施方式中，所述方法進一步包括向所述患者共同施用一種或更多種另外的抗癌療法。在一些實施方式中，所述另外的療法選自由以下組成的組：外科手術(shù)、化學療法、放射療法、溫熱療法、免疫療法、激素療法、激光療法、抗血管生成療法，及其任何組合。在一些實施方式中，另外的療法包括向患者施用抗癌劑。在一些實施方式中，所述方法進一步包括向受試者共同施用一種或更多種免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑是抗PD-L1或抗PD-1抗體。

通過在水性緩沖液中的超分子組裝體，以及添加一些輔助脂質(zhì)形成平均顆粒尺寸低于300nm的納米顆粒，可以實現(xiàn)更大量的鉑/紫杉烷/抗PD-L1吸收到腫瘤中。超分子組裝體以及前藥的降解在細胞內(nèi)釋放有效的藥物。鉑/紫杉烷的前藥的藥物組成包括接頭，其中鉑/紫杉烷通過酯、醚、酰胺或其他的共價綴合與接頭結(jié)合在一起。脂質(zhì)分子可以是通過適合的接頭/間隔物綴合到藥物分子的膽固醇、α-生育酚、脂肪酸或其他天然存在的脂質(zhì)分子。間隔物可以由琥珀酸、富馬酸、丙炔酸、乙二醇、二甘醇、天然或非天然氨基酸單獨或組合構(gòu)成。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物是顆粒的形式，其中顆粒具有形成內(nèi)腔的脂質(zhì)層，其中鉑/紫杉烷/抗PD-L1綴合物出現(xiàn)在脂質(zhì)層中或所述脂質(zhì)層的外表面上。

在一個方面中，本公開提供了一種包括紫杉烷綴合物，例如，疏水性紫杉烷-脂質(zhì)綴合物的超分子組合治療藥物。超分子組合治療藥物中綴合物的含量的范圍可以為約1％至約99％(w/w)。例如，超分子組合治療藥物中綴合物的含量可以為約5％至約95％、約10％至約90％、約15％至約85％、約20％至約75％或者約25％至約50％。

在一些實施方式中，組合物可以包括兩種或更多種(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種)不同類型的紫杉烷綴合物。不同的綴合物可以以任何期望的比例存在。例如，不同綴合物的比例范圍可以為約100:1至1:100。在一些實施方式中，不同綴合物的比例范圍可以為約50:1至1:50、25:1至1:25、10:1至1:10、5:1至1:5或2.5:1至1:2.5。在一些實施方式中，不同綴合物的比例可以為約1:1。

不受限制地，超分子組合治療藥物可以是任何形狀、尺寸或形式。例如，超分子組合治療藥物可以是納米或微米結(jié)構(gòu)的形式。這樣的結(jié)構(gòu)可以包括但不限于脂質(zhì)體、乳劑和膠束。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物可以是脂質(zhì)體的形式。在本文中使用時，術(shù)語“脂質(zhì)體”涵蓋由脂質(zhì)層包圍的任何區(qū)室。脂質(zhì)體可以具有一個或更多個脂質(zhì)膜。脂質(zhì)體可以由膜類型和尺寸來表征。小單層囊泡(SUV)具有單層膜，并且通常直徑范圍在0.02μm和0.05μm之間；大單層囊泡(LUV)通常大于0.05μm。寡層(Oligolamellar)大囊泡和多層囊泡具有多個通常為同心的膜層，并且通常大于0.1μm。將具有若干個非同心的膜(即，包含在較大囊泡內(nèi)的若干個較小囊泡)的脂質(zhì)體稱為多泡(multivesicular)囊泡。

為了形成脂質(zhì)體，脂質(zhì)分子包括細長的非極性(疏水性)部分和極性(親水性)部分。分子的疏水性和親水性部分優(yōu)選地位于細長分子結(jié)構(gòu)的兩端。當這樣的脂質(zhì)分散在水中時，它們自發(fā)地形成稱為片層(lamellae)的雙層膜。該片層是由脂質(zhì)分子的兩個單層片構(gòu)成的，它們的非極性(疏水性)表面彼此面對，并且它們的極性(親水性)表面面向水性介質(zhì)。由脂質(zhì)形成的膜以類似于包圍細胞內(nèi)容物的細胞膜的方式包圍一部分水相。因此，脂質(zhì)體的雙層與細胞膜不存在蛋白組分的細胞膜具有相似之處。

脂質(zhì)體組合物可以通過本領(lǐng)域已知的各種方法來制備。參見例如美國專利號4,235,871、號4,897,355和號5,171,678；公開的PCT申請WO 96/14057和WO 96/37194；Felgner,P.L.等,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA(1987)8:7413-7417；Bangham等,M.Mol.Biol.(1965)23:238；Olson等,Biochim.Biophys.Acta(1979)557:9；Szoka等,Proc.Natl.Acad.Sci.(1978)75:4194；Mayhew等,Biochim.Biophys.Acta(1984)775:169；Kim等,Biochim.Biophys.Acta(1983)728:339，以及Fukunaga等,Endocrinol.(1984)115:757，上述所有文獻的內(nèi)容均通過引用以其全部并入本文。

可以將脂質(zhì)體制備成在選定的尺寸范圍內(nèi)具有大體上均勻的尺寸。一種有效確定尺寸(sizing)的方法涉及將脂質(zhì)體的水性懸浮液擠出通過一系列具有選定的均一孔徑的聚碳酸酯膜；膜的孔徑將大致對應(yīng)于通過經(jīng)由該膜的擠出而產(chǎn)生的脂質(zhì)體的最大尺寸。參見例如美國專利號4,737,323，所述專利的內(nèi)容通過引用以其全部并入本文。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物的脂質(zhì)綴合的組分存在于脂質(zhì)層中或脂質(zhì)層的表面上。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物是脂質(zhì)體的形式，其中脂質(zhì)綴合的組分的脂質(zhì)非脂質(zhì)部分(例如，綴合物的紫杉烷、PI3K抑制劑、鉑、抗體部分)在脂質(zhì)層的外表面上。

超分子組合治療藥物還可以是乳劑的形式。乳劑通常是一種液體以液滴形式分散在另一種液體中的非均相體系(Idson,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger和Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,199頁；Rosoff,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger和Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,245頁；Block in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger和Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第2卷,335頁；Higuchi等,in Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1985,301頁)。乳劑通常為包含彼此充分混合并且分散的兩種不混溶液相的雙相體系。一般地，乳劑可以是油包水(w/o)或水包油(o/w)類型。當將水相細分為細小液滴并且分散在大量的油相中時，所得到的組合物稱為油包水(w/o)乳劑?？蛇x地，當將油相細分為細小液滴并且分散在大量的水相中時，所得到的組合物稱為水包油(o/w)乳劑。除分散相之外，乳劑還可以包含另外的組分，并且本文公開的綴合物可以作為水相或油相中的溶液存在，或者其本身作為單獨的相。藥物賦形劑(如乳化劑、穩(wěn)定劑、染料和抗氧化劑)也可以根據(jù)需要存在于乳劑中。藥物乳劑也可以是由多于兩個相構(gòu)成的多重乳劑，如例如在油包水包油(o/w/o)和水包油包水(w/o/w)乳劑的情況中。這樣的復雜劑型通常提供簡單的二元乳劑所沒有的某些優(yōu)點。其中o/w乳劑的單個油滴包圍小水滴的多重乳劑構(gòu)成w/o/w乳劑。同樣地，油滴被包圍在穩(wěn)定于油連續(xù)相中的水珠中的體系提供o/w/o乳劑。

乳劑的特點是幾乎沒有熱力學穩(wěn)定性。通常，乳劑的分散相或不連續(xù)相充分分散在外部相或連續(xù)相中，并且通過乳化劑或制劑的粘性保持該形式。如同乳劑式軟膏基質(zhì)(ointment bases)和霜劑(creams)的情況，乳劑的任一相可以是半固體或固體的。穩(wěn)定乳劑的其他手段需要使用可以并入到乳劑任一相中的乳化劑。乳化劑可以大致分為四類：合成表面活性劑、天然存在的乳化劑、吸收基質(zhì)(absorption bases)，以及精細分散的固體(Idson,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger和Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,199頁)。

合成表面活性劑又稱為表面活化劑，已廣泛應(yīng)用在乳劑制劑中并且已在文獻中進行了綜述(Rieger,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger和Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,285頁；Idson,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger和Banker(編),Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,1988,第1卷,199頁)。表面活性劑是通常兩親性的，并且包括親水性部分和疏水性部分。表面活性劑的親水性與疏水性之比被稱為親水/親脂平衡(HLB)，它是在制劑制備中對表面活性劑進行分類和選擇的重要工具。基于親水基團的性質(zhì)表面活性劑可以分為不同的類別：非離子、陰離子、陽離子和兩性(Rieger,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger和Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,285頁)。

乳劑制劑中使用的天然存在的乳化劑包括羊毛脂、蜂蠟、磷脂、卵磷脂和阿拉伯膠。吸收基質(zhì)擁有親水性能，使得它們可以吸收水以形成w/o乳劑，同時保持它們的半固體稠度，如無水羊毛脂和親水礦脂。細分的固體也被用作良好的乳化劑，特別是與表面活性劑組合使用和在粘性制品的情況下。這些細分的固體包括極性無機固體如重金屬氫氧化物，不溶脹粘土如膨潤土、綠坡縷石、鋰蒙脫石、高嶺土、蒙脫石、膠體硅酸鋁和膠體硅酸鎂鋁、顏料，以及非極性固體如碳或甘油三硬脂酸酯。

多種非乳化材料也可以包括在乳劑制劑中并且有助于乳劑的性能。這些非乳化材料包括但不限于脂肪、油、蠟、脂肪酸、脂肪醇、脂肪酯、濕潤劑、親水性膠體、防腐劑和抗氧化劑(Block,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger和Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,335頁；Idson,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger and Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,199頁)。

親水性膠體或水膠體包括天然存在的樹膠和合成聚合物，如多糖(例如，阿拉伯膠、瓊脂、海藻酸、角叉菜膠、瓜爾膠、刺梧桐樹膠和黃蓍膠)、纖維素衍生物(例如，羧甲基纖維素和縮丙基纖維素)和合成聚合物(例如，卡波姆、纖維素醚、和聚羧乙烯基聚合物)。這些膠體在水中分散或溶脹而形成膠體溶液，所述膠體溶液通過在分散相液滴周圍形成強界面膜并增加外部相的粘度來穩(wěn)定乳劑。

由于乳劑通常包含多種成分，如可以容易地支持微生物生長的碳水化合物、蛋白、固醇和磷脂，所以這些制劑通常并入防腐劑。乳劑制劑中包括的常用防腐劑包括羥苯甲酯、羥苯丙酯、季銨鹽、苯扎氯銨、對羥基苯甲酸的酯和硼酸。通常還將抗氧化劑加入到乳劑制劑中以防止制劑劣化。使用的抗氧化劑可以是自由基清除劑，如生育酚、烷基沒食子酸鹽、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯；或還原劑，如抗壞血酸和焦亞硫酸鈉；以及抗氧化劑增效劑，如檸檬酸、酒石酸和卵磷脂。

乳劑制劑經(jīng)由皮膚、口服和胃腸外途徑的應(yīng)用及其制造方法已在文獻中進行了綜述(Idson,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger and Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,199頁)。用于口服遞送的乳劑制劑已得到非常廣泛的使用，因為配制容易并且從吸收和生物利用度的角度來看是有利的(Rosoff,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger and Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,245頁；Idson,in Pharmaceutical Dosage Forms,Lieberman,Rieger and Banker(編),1988,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,第1卷,199頁)。

超分子組合治療藥物可以是顆粒的形式。在本文中使用時，術(shù)語“顆?！焙w脂質(zhì)體、乳劑、囊泡和脂質(zhì)顆粒。一般來說，顆?？梢跃哂腥魏涡螤罨蛐问剑缜蛐?、棒狀、橢圓形、圓柱形、膠囊形或盤狀；并且這些顆?？梢允蔷W(wǎng)狀物或聚集體的一部分。不受限制地，顆粒可以具有從nm到微米的任何尺寸。在一些實施方式中，顆粒是微粒或納米顆粒。在本文中使用時，術(shù)語“微粒(microparticle)”指具有約1μm至約1000μm的粒徑的顆粒。在本文中使用時，術(shù)語“納米顆粒(nanoparticle)”指具有約0.1nm至約1000nm的粒徑的顆粒。一般來說，本文公開的顆粒是納米顆粒并且具有約5nm至約500nm的平均直徑。在一些實施方式中，所述顆粒具有約75nm至約500nm、約25nm至約250nm、約50nm至約150nm、約75nm至約125nm、約50nm至約500nm、約75nm至約200nm、約100nm至約175nm、約125nm至約175nm、約40nm至約90nm，或者約50nm至約80nm的平均直徑。

在一些實施方式中，納米顆粒的直徑可以小于約1μm，例如直徑為約1μm或更小，直徑為約500nm或更小，直徑為約400nm或更小，直徑為約300nm或更小，直徑為約200nm或更小，直徑為約100nm或更小，直徑為約50nm或更小，或者直徑為約10nm或更小。在一些實施方式中，納米顆粒的直徑可以小于約1μm，例如直徑為約1μm或更小，直徑為約500nm或更小，直徑為約400nm或更小，直徑為約300nm或更小，直徑為約200nm或更小，直徑為約100nm或更小，直徑為約50nm或更小，或者直徑為約10nm或更小。在一些實施方式中，組合物中的納米顆粒的直徑可以為約1nm至約1μm，例如直徑為約1nm至約500nm，直徑為約1nm至約200nm，直徑為約10nm至約200nm，直徑為約100nm至約200nm，或者直徑為約10nm至約100nm。在一些實施方式中，組合物中的納米顆粒的直徑可以為約1nm至約1μm，例如直徑為約1nm至約500nm，直徑為約1nm至約200nm，直徑為約10nm至約200nm，直徑為約100nm至約200nm，或者直徑為約10nm至約100nm。

在一些實施方式中，可以選擇具有特定的尺寸，例如，直徑小于約200nm的納米顆粒。選擇具有特定尺寸和/或尺寸范圍的納米顆粒的方法是本領(lǐng)域已知的，并且可以包括但不限于過濾、沉降、離心和/或?qū)游龇?，例如SEC。

本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解的是，顆粒通常顯示出在所指定的“尺寸”周圍的粒徑分布。除非另有說明，在本文中使用時，術(shù)語“粒徑”指顆粒的尺寸分布模式，即尺寸分布中最常出現(xiàn)的值。用于測量粒徑的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如，通過動態(tài)光散射(如光子相關(guān)光譜、激光衍射、小角激光光散射(LALLS)以及中等角激光光散射(MALLS))、光阻法(light obscuration methods)(如Coulter分析法)或其他技術(shù)(如流變學以及光學顯微鏡或電子顯微鏡)來進行。

在一些實施方式中，顆粒可大體上是球形的?！按篌w上球形的”意思是顆粒橫截面的最長軸與最短垂直軸的長度之比小于或等于約1.5。大體上為球形不要求對稱線。進一步，顆?？梢跃哂斜砻婕y理，如線條或凹陷或突起，與顆粒的總體尺寸相比，這些表面紋理尺寸較小，并且顆粒仍然是大體上球形的。在一些實施方式中，顆粒的最長軸和最短軸之間的長度之比小于或等于約1.5、小于或等于約1.45、小于或等于約1.4、小于或等于約1.35、小于或等于約1.30、小于或等于約1.25、小于或等于約1.20、小于或等于約1.15、小于或等于約1.1。不希望受理論的束縛，大體上球形的顆粒中的表面接觸被最小化，從而使儲存時不期望的顆粒聚集最小化。許多晶體或薄片具有可以允許大的表面接觸面積的平坦表面，其中可以通過例子或非離子相互作用而發(fā)生聚集。球體允許以小得多的面積接觸。

顆?？墒抢纾瑔畏稚⒌幕蚨喾稚⒌?，并且給定分散體的顆粒直徑的變化可以不同。在一些實施方式中，顆粒具有大體上相同的粒徑。具有寬尺寸分布的顆粒(其中既有相對大的顆粒，也有相對小的顆粒)允許較小的顆粒填充在較大的顆粒之間，從而產(chǎn)生新的接觸表面。寬尺寸分布可以通過創(chuàng)造許多用于結(jié)合聚集的接觸機會而產(chǎn)生較大的球體。本文描述的顆粒在窄的尺寸分布內(nèi)，從而使接觸聚集的機會最小化?！罢叽绶植肌币馑际侨缦碌念w粒尺寸分布：小球顆粒的第90百分位的體積直徑(volume diameter)與小球顆粒的第10百分位的體積直徑之比小于或等于5。在一些實施方式中，小球顆粒的第90百分位的體積直徑與小球顆粒的第10百分位的體積直徑之比小于或等于4.5、小于或等于4、小于或等于3.5、小于或等于3、小于或等于2.5、小于或等于2、小于或等于1.5、小于或等于1.45、小于或等于1.40、小于或等于1.35、小于或等于1.3、小于或等于1.25、小于或等于1.20、小于或等于1.15，或者小于或等于1.1。

也可使用幾何標準差(GSD)來表示窄尺寸分布。GSD計算涉及在累積小于15.9％和84.1％的百分比下確定有效截止直徑(ECD)。GSD等于小于84.17％的ECD與小于15.9％的ECD之比的平方根。當GSD<2.5時，GSD具有窄尺寸分布。在一些實施方式中，GSD小于2、小于1.75，或者小于1.5。在一個實施方式中，GSD小于1.8。

除紫杉烷綴合物之外，超分子組合治療藥物可以進一步包括一種或更多種另外的脂質(zhì)和/或其他組分。不希望受理論的束縛，出于各種目的其他脂質(zhì)可以被包括在超分子組合治療藥物中，如防止脂質(zhì)氧化、穩(wěn)定雙層、減少形成期間的聚集，或者將配體連接到顆粒表面上?？梢源嬖谌魏螖?shù)量的脂質(zhì)，包括但不限于兩親性脂質(zhì)、中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)、陰離子脂質(zhì)、固醇和磷脂。進一步，這樣的脂質(zhì)可以單獨使用或彼此任意組合使用。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物進一步包括脂蛋白顆粒，例如，HDL或LDL。超分子組合治療藥物可以包括約1％至約99％(w/w)另外的脂質(zhì)或組分。進一步，存在的另外的脂質(zhì)或組分與綴合物的比例可以為10:1至1:10。如果兩種或更多種不同的另外的脂質(zhì)存在于超分子組合治療藥物中，則每種脂質(zhì)與綴合物的比例可以獨立地為10:1至1:10。進一步，如果兩種或更多種不同的另外的脂質(zhì)存在于超分子組合治療藥物中，則這兩種脂質(zhì)的比例可以為10:1至1:10。不受限制地，超分子組合治療藥物的兩種不同的組分(綴合物和脂質(zhì)或兩種不同的脂質(zhì))的比例可以為10:1至1:10、5:1至1:5，或2.5:1至1:2.5。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物的兩種不同的組分的比例可以為約1:1、約1:1.2、約1:1.5、約1:1.7、約1:2、約1:2.5、約1:3、約1:3.5、約1:4、約1:4.5、約1:5、約1:5.5、約1:6、約1:6.5、約1:7、約1:7.5、約1:8、約1:8.5、約1:9、約1:9.5或約1:10。如果超分子組合治療藥物包括多于兩種組分，那么任何兩種組分之間的比例可以獨立于任何其他兩種組分之間的比例。

在一些實施方式中，除綴合物之外，組合物進一步包括第一脂質(zhì)。

在本文中使用時，“脂質(zhì)”意思是可溶于有機溶劑的物質(zhì)并且包括但不限于油、脂肪、固醇、甘油三酯、脂肪酸、磷脂等。不受限制地，脂質(zhì)可以選自由以下組成的組：固醇脂質(zhì)、脂肪酸、脂肪醇、甘油脂(例如，甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯)、磷脂、甘油磷脂、鞘脂、異戊烯醇脂、糖脂、聚酮，及其任何組合。脂質(zhì)可以是多不飽和脂肪酸或多不飽和脂肪醇。在本文中使用時，術(shù)語“多不飽和脂肪酸”或“多不飽和脂肪醇”意思是在烴鏈中具有兩個或更多個碳-碳雙鍵的脂肪酸或脂肪醇。脂質(zhì)也可以是高度不飽和脂肪酸或高度不飽和脂肪醇。在本文中使用時，術(shù)語“高度不飽和脂肪酸”或“高度不飽和脂肪醇”意思是具有至少18個碳原子和至少3個雙鍵的脂肪酸或脂肪醇。脂質(zhì)可以是ω-3脂肪酸。在本文中使用時，術(shù)語“ω-3脂肪酸”意思是其第一個雙鍵出現(xiàn)在從酸基團相對的末端開始第三個碳-碳鍵處的多不飽和脂肪酸。

在一些實施方式中，脂質(zhì)可以選自由以下組成的組：膽固醇；1,3-丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯；10-十一碳烯酸；1-三十二烷醇；1-二十七烷醇；1-二十九烷醇；2-乙基己醇；雄烷；花生酸；花生四烯酸；花生醇；山萮酸；山萮醇；Capmul MCM C10；癸酸；癸醇；辛醇；辛酸；飽和脂肪醇C12-18的辛酸酯/癸酸酯；辛酸/癸酸甘油三酯；辛酸/癸酸甘油三酯；神經(jīng)酰胺磷酰膽堿(鞘磷脂，SPH)；神經(jīng)酰胺磷酰乙醇胺(鞘磷脂，Cer-PE)；神經(jīng)酰胺磷酰甘油；蠟塑酸(Ceroplastic acid)；蠟酸(Cerotic acid)；蠟醇；鯨蠟硬脂醇；鯨蠟醇聚醚-10；鯨蠟醇；膽烷；膽甾烷；膽固醇；順式-11-二十碳烯酸；順式-11-十八碳烯酸；順式-13-二十二碳烯酸；二十八烷醇(cluytyl alcohol)；二均-γ-亞麻酸；二十二碳六烯酸；蛋黃卵磷脂；二十碳五烯酸；二十碳烯酸；反式油酸；反式亞麻醇(elaidolinolenyl alcohol)；反式亞麻醇(elaidolinoleyl alcohol)；反式油醇(elaidyl alcohol)；芥酸；芥醇；雌烷；乙二醇二硬脂酸酯(EGDS)；格地酸(Geddic acid)；格地醇(geddyl alcohol)；甘油二硬脂酸酯(I型)EP(Precirol ATO 5)；甘油三辛酸酯/癸酸酯；甘油三辛酸酯/癸酸酯(355EP/NF)；甘油單辛酸酯(Capmul MCM C8EP)；甘油三乙酸酯；甘油三辛酸酯；三辛酸/癸酸/月桂酸甘油酯；甘油三辛酸酯/三癸酸酯；甘油三棕櫚酸酯(三棕櫚精)；三十一烷酸(Henatriacontylic acid)；二十一烷醇；二十一烷酸；二十七烷酸；十七烷酸；十七烷醇；三十六烷酸(Hexatriacontylic acid)；異硬脂酸；異硬脂醇；紫膠蟲酸；月桂酸；月桂醇；二十四烷酸；二十四烷醇；反式亞油酸(Linoelaidic acid)；亞油酸；亞麻醇(linolenyl alcohol)；亞麻醇(linoleyl alcohol)；十七烷酸；順5,8,11-二十碳三烯酸(Mead)；蜂花酸(Melissic acid)；蜂花醇(melissyl alcohol)；褐煤酸；褐煤醇；三十烷醇(myricyl alcohol)；肉豆蔻酸；肉豆蔻腦酸；肉豆蔻醇；新癸酸；新庚酸；新壬酸；神經(jīng)酸(Nervonic)；二十九烷酸(Nonacosylic acid)；十九烷醇；十九烷酸；十九烷酸；油酸；油醇；棕櫚酸；棕櫚油酸；棕櫚油醇；壬酸；壬醇；二十五烷酸；十五烷醇；十五烷酸；磷脂酸(磷脂酸鹽，PA)；磷脂酰膽堿(卵磷脂，PC)；磷脂酰乙醇胺(腦磷脂，PE)；磷脂酰肌醇(PI)；磷脂酰肌醇二磷酸酯(PIP2)；磷脂酰肌醇磷酸酯(PIP)；磷脂酰肌醇三磷酸酯(PIP3)；磷脂酰絲氨酸(PS)；聚甘油基-6-二硬脂酸酯；孕烷(Pregnanes)；丙二醇二癸酸酯；丙二醇二辛基癸酸酯；丙二醇二辛基癸酸酯；三十三烷酸；蓖麻油酸(recinoleaic acid)；蓖麻油醇(recinoleyl alcohol)；十六碳烯酸(Sapienic acid)；大豆卵磷脂；硬脂酸；十八碳四烯酸(Stearidonic)；硬酯醇；三十三烷酸；十三烷醇；十三烷酸；三油精；十一烷醇；十一碳烯酸；十一烷酸；異油酸；α-亞麻酸；以及γ-亞麻酸。

在一些實施方式中，第一脂質(zhì)是磷脂。

不受限制地，磷脂可以是天然來源的，如卵磷脂或大豆磷脂，或者合成或半合成來源的。磷脂可以被部分純化或分離，以包括如下物質(zhì)的純的餾分或混合物：磷脂酰膽堿、具有6至22個碳原子的確定的?；鶊F的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂或磷脂酰甘油。適合的磷脂包括但不限于磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、卵磷脂、β,γ-二棕櫚酰-α-卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、N-(2,3-二(9-(Z)-十八碳烯基氧基))-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化銨、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、腦磷脂、心磷脂、腦苷脂、磷酸二鯨蠟酯、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、棕櫚酰-油酰-磷脂酰膽堿、二-硬脂酰-磷脂酰膽堿、硬脂酰-棕櫚酰-磷脂酰膽堿、二-棕櫚酰-磷脂酰乙醇胺、二-硬脂酰-磷脂酰乙醇胺、二-肉豆蔻酰-磷脂酰絲氨酸、二-油烯基-磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)、卵磷脂酰膽堿(EPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺4-(N-馬來酰亞胺甲基)-環(huán)己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)、1-硬脂酰-2-油酰磷脂酰膽堿(SOPC)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)，及其任何組合等。還可以使用不含磷的脂質(zhì)。這些脂質(zhì)包括，例如，硬脂酰胺、十二烷胺、乙酰棕櫚酸酯、脂肪酸酰胺等。還可以使用其他不含磷的化合物，如鞘脂、鞘糖脂家族、二?；视秃挺?酰氧基酸。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物中的磷脂選自由以下組成的組：1,2-二癸酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1,2-二芥酰-sn-甘油-3-磷酸鹽(鈉鹽)；1,2-二芥酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1,2-二芥酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；1,2-二芥酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](鈉鹽)；1,2-二亞油酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸鹽(鈉鹽)；1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；1,2-二月桂酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](鈉鹽)；1,2-二月桂酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](銨鹽)；1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸(鈉鹽)；1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸鹽(鈉鹽)；1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](鈉鹽)；1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](銨鹽)；1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](鈉鹽/銨鹽)；1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸(鈉鹽)；1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸鹽(鈉鹽)；1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；1,2-二油酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](鈉鹽)；1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸(鈉鹽)；1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸鹽(鈉鹽)；1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](鈉鹽)；1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](銨鹽)；1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸(鈉鹽)；1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸鹽(鈉鹽)；1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](鈉鹽)；1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](銨鹽)；1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸(鈉鹽)；卵磷脂酰膽堿；氫化卵磷脂酰膽堿；氫化大豆PC；1-肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-肉豆蔻酰-2-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3[磷酸-rac-(1-甘油)](鈉鹽)；1-棕櫚酰-2-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-硬脂酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；以及1-硬脂酰-2-棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿。

在一些實施方式中，磷脂是SPOC、卵磷脂酰膽堿或氫化大豆PC(HSPC)。在一個實施方式中，組合物中的磷脂是SOPC。

在一些實施方式中，除綴合物和第一脂質(zhì)之外，超分子組合治療藥物進一步包括第二脂質(zhì)。在一些進一步的實施方式中，第二脂質(zhì)是磷脂。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物進一步包括聚乙二醇(PEG)。PEG可以通過其本身被包括在組合物中，或者與超分子組合治療藥物的組分綴合。例如，PEG可以與超分子組合治療藥物的綴合物或脂質(zhì)組分綴合。在一些實施方式中，PEG與超分子組合治療藥物的脂質(zhì)組分綴合。不受限制地，PEG可以與任何脂質(zhì)或磷脂綴合。例如，PEG綴合的脂質(zhì)可以選自由以下組成的組：PEG綴合的二?；视秃蚉EG綴合的二烷基甘油、PEG綴合的磷脂酰乙醇胺、PEG綴合的磷脂酸、PEG綴合的神經(jīng)酰胺(參見美國專利號5,885,613)、PEG綴合的二烷基胺、PEG綴合的1,2-二酰基氧基丙烷-3-胺，以及PEG綴合的1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)，及其任何組合。在一些實施方式中，PEG綴合的脂質(zhì)是1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)-2000](DSPE-PEG2000)。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物進一步包括靶向配體。在本文中使用時，術(shù)語“靶向部分”或“靶向配體”指為選定的靶標，例如，身體的細胞、細胞類型、組織、器官、部位或區(qū)室(例如，細胞區(qū)室、組織區(qū)室或器官區(qū)室)提供增強的親和性的任何分子。靶向部分或配體可以包括多種多樣的實體。這樣的配體可以包括天然存在的分子，或者重組分子或合成分子。示例性靶向配體包括但不限于抗體(多克隆或單克隆)、抗體的抗原結(jié)合片段、抗原、葉酸、EGFR、白蛋白、受體配體、碳水化合物、適配體、整聯(lián)蛋白受體配體、趨化因子受體配體、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生物素、5-羥色胺受體配體、PSMA、內(nèi)皮素、GCPII、生長抑素、LDL和HDL配體。另外的示例性配體包括但不限于聚賴氨酸(PLL)、聚L-天冬氨酸、聚L-谷氨酸、苯乙烯-馬來酸酐共聚物、聚(L-丙交酯-共聚-乙交酯)共聚物、二乙烯醚-馬來酸酐共聚物、N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺共聚物(HMPA)、聚乙二醇(例如，PEG-2K、PEG-5K、PEG-10K、PEG-12K、PEG-15K、PEG-20K、PEG-40K)、MPEG、[MPEG]₂、聚乙烯醇(PVA)、聚氨酯、聚(2-乙基丙烯酸)、N-異丙基丙烯酰胺聚合物、聚膦嗪、聚乙烯亞胺、陽離子基團、精胺、亞精胺、聚胺、假肽-聚胺、擬肽聚胺、樹狀高分子聚胺、精氨酸、脒、魚精蛋白、陽離子脂質(zhì)、陽離子卟啉、聚胺的季鹽、促甲狀腺激素、向黑素、凝集素、糖蛋白、表面活化蛋白A、粘蛋白、糖基化聚氨基酸、轉(zhuǎn)鐵蛋白、二磷酸酯、聚谷氨酸酯、局天冬氨酸鹽、適配體、去唾液酸糖蛋白、透明質(zhì)酸、原骨膠原、免疫球蛋白(例如，抗體)、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白、糖-白蛋白綴合物、嵌入劑(例如，吖啶)、交聯(lián)劑(例如，補骨脂素、絲裂霉素C)、卟啉(例如，TPPC4、泰克薩菲瑞(texaphyrin)、Sapphyrin)、多環(huán)芳烴(例如，吩嗪、二氫吩嗪)、人工內(nèi)切酶(例如，EDTA)、親脂性分子(例如，類固醇、膽汁酸、膽固醇、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睪酮、1,3-雙-O(十六烷基)甘油、香葉草氧基己基(geranyloxyhexyl)基團、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七烷基基團、棕櫚酸、肉豆蔻酸、O3-(油酰)石膽酸、O3-(油酰)膽烯酸、二甲氧三苯甲基或吩惡嗪)、肽(例如，α螺旋肽、兩親性肽、RGD肽、細胞滲透肽、內(nèi)涵體溶解(endosomolytic)/融合肽)、烷基化劑、磷酸鹽、氨基、巰基、聚氨基、烷基、取代的烷基、放射性標記的標志物、酶、半抗原(例如生物素)、轉(zhuǎn)運/吸收輔助劑(例如，萘普生、阿司匹林、維生素E、葉酸)、合成核糖核酸酶(例如，咪唑、雙咪唑、組胺、咪唑集群、吖啶-咪唑綴合物、四氮雜大環(huán)的Eu3+復合物)、二硝基苯基、HRP、AP、抗體、激素和激素受體、凝集素、碳水化合物、多價碳水化合物、維生素(例如，維生素A、維生素E、維生素K、維生素B(例如，葉酸、B12、核黃素、生物素和吡哆醛))、維生素輔酶因子、脂多糖、p38MAP激酶的激活劑、NF-κB的激活劑、taxon、長春新堿、長春花堿、細胞松弛素、諾考達唑、海綿生物肽(japlakinolide)、拉春庫林A(latrunculin A)、鬼筆環(huán)肽、海洋苔蘚素A(swinholide A)、茚達諾辛(indanocine)、肌基質(zhì)蛋白(myoservin)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β、γ干擾素、天然或重組低密度脂蛋白(LDL)、天然或重組高密度蛋白(HDL)，以及細胞滲透劑(例如，α螺旋細胞滲透劑)。

肽和擬肽配體包括具有下述天然存在的肽或修飾肽的那些的配體，例如，D或L肽；α、β或γ肽；N-甲基肽；氮雜肽；具有一個或更多個酰胺的肽，即，以一個或更多個脲、硫脲、氨基甲酸酯或磺酰脲連接鍵代替連接鍵的肽；或者環(huán)肽。擬肽(本文也稱為寡擬肽)是能夠折疊成類似于天然肽的確定的三維結(jié)構(gòu)的分子。肽或擬肽配體可以為約5-50個氨基酸長，例如，約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個氨基酸長。

基于碳水化合物的靶向配體包括但不限于D-半乳糖、多價半乳糖、N-乙酰-D-半乳糖(GalNAc)、多價GalNAc(例如GalNAc2和GalNAc3)；D-甘露糖、多價甘露糖、多價乳糖、N-乙酰-氨基半乳糖、N-乙酰-氨基葡萄糖、多價巖藻糖、糖基化聚氨基酸和凝集素。術(shù)語多價指存在多于一個單糖單元。這樣的單糖亞單元可以通過糖苷鍵彼此連接，或者連接到支架分子。

適合作為本發(fā)明配體的一些葉酸鹽和葉酸鹽類似物描述在美國專利號2,816,110、5,552,545、6,335,434和7,128,893中，所述所有專利的內(nèi)容均通過引用以其全部被并入本文。

已經(jīng)提出了靶向具有用于靶向的親水性聚合物鏈(如聚乙二醇(PEG)鏈)的表面涂層的顆粒(Allen等,Biochimica et Biophysica Acta 1237:99-108(1995)；DeFrees等,Journal of the American Chemistry Society 118:6101-6104(1996)；Blume等,Biochimica et Biophysica Acta 1149:180-184(1993)；Klibanov等,Journal of Liposome Research 2:321-334(1992)；美國專利號5,013556；Zalipsky,Bioconjugate Chemistry 4:296-299(1993)；Zalipsky,FEBS Letters 353:71-74(1994)；Zalipsky,in Stealth Liposomes 9章(Lasic和Martin,編)CRC Press,Boca Raton Fl(1995))。也可以使用其他靶向部分，如配體、細胞表面受體、糖蛋白、維生素(例如，核黃素)、適配體和單克隆抗體。靶向部分可以包括整個蛋白或其片段。靶向機制一般需要靶向劑以這樣的方式位于脂質(zhì)體的表面上，使得靶向部分可用于與靶(例如，細胞表面受體)相互作用。

在一些實施方式中，靶向配體結(jié)合癌細胞的表面上表達的蛋白、受體或標志物。優(yōu)選地結(jié)合到和/或跨越癌細胞的膜的靶向配體是本領(lǐng)域已知的，例如iRGD、RGD、Lyp-1肽(CGNKRTRGC)、NGR肽、iNGR、RGR肽、CAR肽、tCAR肽(CARSKNK)；FSH-33、咽側(cè)體抑制素1、五肽CREKA、肝細胞惡性腫瘤靶向肽、肽GFE、抗EGFR抗體和/或抗體片段，特別是西妥昔單抗、CendR、iRGD肽(RGD-CendR雜交肽)、小分子、結(jié)合癌癥特異性表位例如CEA的抗體和/或抗體片段、促胃液素釋放肽受體、生長抑素受體、甘丙肽受體、促卵泡激素受體、p32蛋白、纖維母細胞生長因子受體、HepG2、表皮生長因子受體、整聯(lián)蛋白ανβ6、神經(jīng)纖毛蛋白-1受體和VEGF受體，及其變異或組合。在一些實施方式中，靶向劑可以是iRGD，例如，具有序列CRGDKGPDC的肽。在一些實施方式中，靶向配體結(jié)合EGFR。

在一些實施方式中，靶向配體是多克隆或單克隆抗體或其保持表位結(jié)合活性或基于抗體的結(jié)合部分的片段。

在一些實施方式中，靶向配體是能夠結(jié)合癌細胞的表面上表達的蛋白受體的多克隆或單克隆抗體、抗體片段、肽或分子。

在一些實施方式中，靶向配體是選自由以下組成的組的抗體：C242抗體(CanAg)、利妥昔單抗(CD20)、曲妥珠單抗(Her2)、西妥昔單抗(EGFR)、貝伐單抗(VEGF)、帕尼單抗、阿來組單抗、奧法木單抗、吉妥單抗(CD33)、伊諾妥珠單抗(CD22)、Lorvotuzumab(CD56)、貝倫妥單抗(CD30)、格列姆巴妥木單抗(GPNMB)，其表位結(jié)合片段，及其任何組合。

靶向配體可以存在于，例如本文描述的超分子組合治療藥物的表面上，和/或部分嵌入本文描述的超分子組合治療藥物的膜或脂質(zhì)層中。并入靶向劑的方法是本領(lǐng)域已知的，并且本文其他地方描述了非限制性實例。在一些實施方式中，本文描述的超分子組合治療藥物可以包括兩種或更多種靶向劑，例如超分子組合治療藥物可以包括納米顆粒的組合，每個納米顆粒包括不同的靶向劑，和/或組合物可以包括其中每個納米顆粒包括多種靶向劑的納米顆粒。在一些實施方式中，本文描述的超分子組合治療藥物可以包括一種靶向劑、兩種靶向劑、三種靶向劑或更多種靶向劑。

在一個方法中，靶向配體可以被連接到超分子組合治療藥物的組分(例如，脂質(zhì))。在一些實施方式中，靶向配體可以與脂質(zhì)綴合。各種不同的靶向配體和方法是本領(lǐng)域已知并且可用的，包括例如在Sapra,P.和Allen,TM,Prog.Lipid Res.42(5):439-62(2003)；以及Abra,RM等,J.Liposome Res.12:1-3,(2002)中描述的那些靶向配體和方法。與靶向部分綴合的其他脂質(zhì)描述在美國專利申請公開號US2009/0247608和號US2012/0046478中，所述兩篇公開的內(nèi)容均通過引用以其全部并入本文。

在一些實施方式中，除紫杉烷綴合物之外，組合物可以進一步包括治療劑。不受限制地，當存在于超分子組合治療藥物中時，治療劑可以被包封在超分子組合治療藥物中；存在于超分子組合治療藥物的脂質(zhì)層中；或者存在于超分子組合治療藥物的表面上。

在本文中使用時，術(shù)語“治療劑”意思是為診斷性、治療性、預防性醫(yī)療或獸醫(yī)目的向生物體施用的分子、分子基團、復合物或物質(zhì)。在本文中使用時，術(shù)語“治療劑”包括“藥物”或“疫苗”。該術(shù)語包括外部和內(nèi)部施用的局部(topical)、局部(localized)或全身性人和動物藥物、治療、救濟方法、保健品、藥妝品、生物制劑、設(shè)備、診斷學和避孕藥，包括用于臨床和獸醫(yī)篩查、防范(prevention)、預防、治愈、身心健康、檢測、成像、診斷、療法、外科手術(shù)、監(jiān)測、化妝品、修復學、法醫(yī)學等的制品。該術(shù)語還可以關(guān)于農(nóng)業(yè)藥物(agriceutical)、工作場所、軍隊、工業(yè)和環(huán)境治療藥物或救濟方法使用，所述治療藥物或救濟方法包括能夠識別細胞受體、膜受體、激素受體、治療藥物受體、微生物、病毒的選定的分子或選定的核酸序列，或者包括或能夠接觸植物、動物和/或人的選定的靶。具體地，該術(shù)語還可以包括產(chǎn)生治療效果的核酸和包括核酸的化合物，例如脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)或其混合物或組合，包括，例如，DNA納米復合物。

術(shù)語“治療劑”還包括能夠在施加了所述治療劑的生物系統(tǒng)中提供局部或全身性生物效果、生理效果或治療效果的試劑。例如，治療劑可以作用以控制感染或炎癥，增強細胞生長和組織再生，控制腫瘤生長，作為鎮(zhèn)痛劑、促進抗細胞附著，并且增強骨生長，以及其他功能。其他適合的治療劑可以包括抗病毒劑、激素、抗體或治療蛋白。其他治療劑包括前藥，所述前藥是在施用時沒有生物活性，但是在施用受試者后通過代謝或一些其他機制轉(zhuǎn)化為生物活性劑的試劑。另外，基于基于絲的藥物遞送組合物可以包含兩種或更多種治療劑的組合。

治療劑可以包括多種多樣的不同化合物，包括化學化合物以及化學化合物的混合物，例如，小的有機或無機分子；糖精；寡糖；多糖；生物大分子，例如，肽、蛋白，以及肽類似物和衍生物；擬肽；抗體(多克隆和單克隆)及其抗原結(jié)合片段；核酸；核酸類似物和衍生物；由生物材料(如細菌、植物、真菌或動物細胞)制得的提取物；動物組織；天然存在的或合成組合物；及其任何組合。在一些實施方式中，治療劑是小分子。

在本文中使用時，術(shù)語“小分子”可以指“類似于天然產(chǎn)物”的化合物，然而，術(shù)語“小分子”不限于“類似于天然產(chǎn)物”的化合物。而是，小分子的特征通常在于包含若干個碳-碳鍵，并且具有小于5000道爾頓(5kDa)、優(yōu)選地小于3kDa、再更優(yōu)選地小于2kDa，并且最優(yōu)選地小于1kDa的分子量。在一些情況中，優(yōu)選地小分子具有等于或小于700道爾頓的分子量。

示例性治療劑包括但不限于在以下文獻中發(fā)現(xiàn)的那些治療劑：Harrison’s Principles of Internal Medicine,第13版,T.R.Harrison等編著,McGraw-Hill N.Y.,NY；Physicians’Desk Reference,第50版,1997,Oradell New Jersey,Medical Economics Co.；Pharmacological Basis of Therapeutics,第8版,Goodman and Gilman,1990；United States Pharmacopeia,The National Formulary,USP XII NF XVII,1990；Goodman和Oilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics的現(xiàn)行版本；以及The Merck Index的現(xiàn)行版本，所有文獻的全部內(nèi)容均通過引用并入本文。

治療劑可以被連接到超分子組合治療藥物的組分。例如，治療劑可以被連接到超分子組合治療藥物的脂質(zhì)或磷脂組分。治療劑和超分子組合治療藥物的組分可以通過鍵或經(jīng)由接頭連接在一起。取決于應(yīng)用，該接頭可以是可裂解的或不可裂解的。在某些實施方式中，可裂解接頭可以用來在轉(zhuǎn)運到期望的靶標之后釋放治療劑。想要的綴合或結(jié)合相互作用性質(zhì)，或者期望的生物效果，將決定接頭基團的選擇。在一些實施方式中，脂質(zhì)綴合的治療劑中的脂質(zhì)是膽固醇。

超分子組合治療藥物可以包括約1％至約99％(w/w)的治療劑或其綴合物。進一步，治療劑或其綴合物可以與紫杉烷綴合物以10:1至1:10的比例存在。不受限制地，超分子組合治療藥物中的紫杉烷綴合物和治療劑(或其綴合物)的比例可以為約1:1、約1:1.2、約1:1.5、約1:1.7、約1:2、約1:2.5、約1:3、約1:3.5、約1:4、約1:4.5、約1:5、約1:5.5、約1:6、約1:6.5、約1:7、約1:7.5、約1:8、約1:8.5、約1:9、約1:9.5或約1:10。

在一些實施方式中，治療劑是抗體(例如，多克隆或單克隆抗體)或其抗原結(jié)合片段。在一個實施方式中，治療劑是與脂質(zhì)(例如，膽固醇)綴合的抗體(例如，多克隆或單克隆抗體)或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方式中，抗體是包括抗PD-1抗體、抗PD-L1或其組合的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑與脂質(zhì)(例如膽固醇或本文公開的其他脂質(zhì))綴合。

在一些實施方式中，治療劑是化學治療劑或抗癌劑。在本文中使用時，術(shù)語“化學治療劑”指在以異常的細胞生長為特征的疾病的治療中具有治療作用的化學試劑或生物試劑。這樣的疾病包括腫瘤、贅生物和癌癥，以及以過度生長為特征的疾病。這些試劑可以用于抑制癌細胞持續(xù)增殖所依賴的細胞活性。在所有實施方式的一些方面中，化學治療劑是細胞周期抑制劑或細胞分裂抑制劑。用于本發(fā)明的方法中的化學治療劑的類別包括烷化劑/生物堿劑、抗代謝物、激素或激素類似物，以及各種各樣的抗腫瘤藥物。這些試劑中的大部分對于癌細胞是有直接或間接毒性的。在一個實施方式中，化學治療劑是放射性分子。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地識別所使用的化學治療劑(例如，參見Slapak和Kufe,Principles of Cancer Therapy,Harrison's Principles of Internal Medicine的第86章,第14版；Perry等,Chemotherapy,Abeloff,Clinical Oncology第2版2000的第17章Churchill Livingstone,Inc；Baltzer L,Berkery R(編):Oncology Pocket Guide to Chemotherapy,第2版St.Louis,Mosby-Year Book,1995；Fischer D S,Knobf M F,Durivage H J(編):The Cancer Chemotherapy Handbook,第4版St.Louis,Mosby-Year Book,1993)。在一些實施方式中，化學治療劑可以是細胞毒性化學治療藥物。在本文中使用時，術(shù)語“細胞毒性劑”指抑制或阻止細胞的功能和/或?qū)е录毎輾У奈镔|(zhì)。該術(shù)語旨在包括放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素)、化學治療劑和毒素，如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶促活性毒素，包括所述毒素的片段和/或變體。

術(shù)語化學治療劑是涵蓋具有不同作用機制的許多化學治療劑的較寬范圍的化學治療劑。一般來說，根據(jù)作用機制對化學治療劑進行分類?？色@得的試劑中的許多是各種腫瘤的發(fā)展路徑中的抗代謝物，或者與腫瘤細胞的DNA反應(yīng)。也存在抑制酶(如拓撲異構(gòu)酶I和拓撲異構(gòu)酶II)的試劑，或者存在作為抗有絲分裂的試劑。

化學治療劑包括但不限于芳香酶抑制劑；抗雌激素、抗雄激素(特別是在前列腺癌的情況下)或戈那瑞林激動劑；拓撲異構(gòu)酶I抑制劑或拓撲異構(gòu)酶II抑制劑；微管活性劑、烷化劑、抗腫瘤抗代謝物或鉑化合物；靶向/減小蛋白或脂質(zhì)激酶活性或者蛋白或脂質(zhì)磷酸酶活性的化合物，其他抗血管生成化合物或誘導細胞分化過程的化合物；緩激肽1受體或血管緊張素II拮抗劑；環(huán)加氧酶抑制劑、二磷酸酯、肝素酶抑制劑(防止硫酸乙酰肝素降解)，例如，PI-88、生物應(yīng)答修飾劑，優(yōu)選地淋巴因子或干擾素，例如干擾素γ、泛素化抑制劑或阻斷抗細胞凋亡通路的抑制劑；Ras致癌亞型抑制劑或法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑；端粒酶抑制劑，例如，端粒抑素(telomestatin)；蛋白酶抑制劑、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、蛋氨酸氨基肽酶抑制劑，例如，泵阿米德(bengamide)或其衍生物；蛋白酶體抑制劑，例如，PS-341(硼替佐米/萬珂)；用于治療血液惡性病的藥物或FMS樣酪氨酸激酶抑制劑；HSP90抑制劑；組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑；mTOR抑制劑；生長抑素受體拮抗劑；整聯(lián)蛋白拮抗劑；抗白血病的化合物；破壞腫瘤細胞的方法，如電離輻射；EDG結(jié)合劑；鄰氨基苯甲酸酰胺類激酶抑制劑；核糖核苷酸還原酶抑制劑；S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶抑制劑；抗VEGF或VEGFR的抗體；光動力療法；抑制血管的類固醇；AT1受體拮抗劑；ACE抑制劑；等。

其他化學治療劑包括但不限于植物生物堿、激素試劑和拮抗劑、生物應(yīng)答修飾物，優(yōu)選地淋巴因子或干擾素、反義寡核苷酸或寡核苷酸衍生物；或者各種各種的試劑，或具有其他作用機制或未知作用機制的試劑。

化學治療劑可以被連接到超分子組合治療藥物的組分。例如，化學治療劑可以被連接到超分子組合治療藥物的脂質(zhì)或磷脂組分。化學治療劑和超分子組合治療藥物的組分可以通過鍵或經(jīng)由接頭連接在一起。取決于應(yīng)用，該接頭可以是可裂解的或不可裂解的。在某些實施方式中，可裂解接頭可以用來在轉(zhuǎn)運到期望的靶標之后釋放化學治療劑。想要的綴合或結(jié)合相互作用性質(zhì)，或者期望的生物效果，將決定接頭基團的選擇。在一些實施方式中，脂質(zhì)綴合的化學治療劑中的脂質(zhì)是膽固醇。

超分子組合治療藥物可以包括約1％至約99％(w/w)的化學治療劑或其綴合物。進一步，化學治療劑或其綴合物可以與紫杉烷綴合物以10:1至1:10的比例存在。不受限制地，超分子組合治療藥物中的紫杉烷綴合物和化學治療劑(或其綴合物)的比例可以為10:1至1:10、5:1至1:5或2.5:1至1:2.5。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物中的紫杉烷綴合物和化學治療劑(或其綴合物)的比例可以為約1:1、約1:1.2、約1:1.5、約1:1.7、約1:2、約1:2.5、約1:3、約1:3.5、約1:4、約1:4.5、約1:5、約1:5.5、約1:6、約1:6.5、約1:7、約1:7.5、約1:8、約1:8.5、約1:9、約1:9.5或約1:10。

在一些實施方式中，化學治療劑可以是激酶抑制劑，例如磷脂酰肌醇3-激酶(PI 3-激酶或PI3K)。磷脂酰肌醇3-激酶是能夠使磷脂酰肌醇的肌醇環(huán)中的3號位羥基磷酸化的相關(guān)酶的家族。它們也稱為磷脂酰肌醇-3-激酶。PI3K與IRS(胰島素受體底物)相互作用，以便通過一系列磷酸化事件調(diào)節(jié)葡萄糖攝取。磷酸肌醇-3-激酶家族由I類、II類和III類構(gòu)成，其中I類是唯一能夠在質(zhì)膜內(nèi)葉上將PI(4,5)P2轉(zhuǎn)化為PI(3,4,5)P3的一類。

I類PI3K是由調(diào)節(jié)和催化亞單元構(gòu)成的異二聚體分子；根據(jù)序列相似性將它們進一步分為IA和IB亞單元。IA類PI3K由連接到p110α、β或δ催化亞單元的五個調(diào)節(jié)亞單元p85α、p55α、p50α、p85β或p55γ中的一個構(gòu)成。前三個調(diào)節(jié)亞單元都是相同基因(Pik3r1)的剪接變體，其他兩個由其他基因(分別為Pik3r2和Pik3r3、p85β和p55γ)表達。最高度表達的調(diào)節(jié)亞單元是p85α，所有三個催化亞單元都由單獨的基因表達(p110α、p110β和p110δ分別由Pik3ca、Pik3cb和Pik3cd表達)。前兩個p110亞型(α和β)在所有細胞中都表達，而p110δ主要在表細胞中表達，并且已有人提出它會與適應(yīng)新免疫系統(tǒng)并行地進化。調(diào)節(jié)亞單元p101和催化亞單元p110γ包括IB型PI3K，并且各自由單個基因表達。

II類包括三個催化亞型(C2α、C2β和C2γ)，但是不像I類和III類，II類沒有調(diào)節(jié)蛋白。這些酶催化由PI生成PI(3)(也可以由PI(4)P生成PI(3,4)P2)。全身表達C2α和C2β，然而C2γ的表達被限于干細胞。II類PI3K的顯著特征是C末端的C2結(jié)構(gòu)域。該結(jié)構(gòu)域缺少關(guān)鍵的Asp殘基來協(xié)調(diào)Ca²⁺的結(jié)合，這表明II類PI3K以不依賴Ca²⁺的方式結(jié)合脂質(zhì)。III類與II類的相似之處在于它們都偏好由PI生成PI(3)，但是在結(jié)構(gòu)上與I類更相似，因為它們作為催化(Vps34)亞單元和調(diào)節(jié)亞單元(p150)的異二聚體存在。III似乎主要參與蛋白和囊泡的運輸。

在本文中使用時，“PI3K抑制劑”指當通過磷脂酰肌醇的肌醇環(huán)中的3號位羥基的磷酸化水平測量時，或者當通過PI3K下游的分子的活性和/或磷酸化(其中增加的磷酸化指示PI3K活性)測量時，抑制PI3K的活性的試劑。這樣的下游分子的實例是本領(lǐng)域已知的并且可以包括但不限于AKT、SGK、mTOR、GSK3β、PSD-95、S6和4EBP1。直接地或間接地，測量PI3K的活性的方法是本領(lǐng)域已知的，并且通過非限制性實例的方式包括：使用可商購的含磷亞型特異性的抗體(例如，抗磷酸-AKT抗體，Cat No.ab66138Abcam,Cambridge,MA)來確定PI3K下游的分子的磷酸化水平。

在一些實施方式中，PI3K抑制劑可以是LY294002、PI103和PI828。進一步，PI3K抑制劑的非限制性的實例可以包括渥曼青霉素(wortmannin)；脫甲綠膠酶素(demethoxyviridin)、IC486068、IC87114、GDC-0941、哌立福辛(perifosine)、CAL101、PX-866、IPI-145、BAY 80-6946、BEZ235、P6503、TGR1202、SF1126、INK1117、BKM120、IL147、XL765、Palomid 529、GSK1059615、ZSTK474、PWT33597、TG100-115、CAL263、GNE-447、CUDC-907和AEZS-136。

在一些實施方式中，綴合物包括與脂質(zhì)共價連接的PI3K抑制劑。在一些實施方式中，脂質(zhì)綴合的PI3K抑制劑是

與脂質(zhì)共價連接的另外的PI3K抑制劑描述在，例如，PCT專利公開號WO2013188763中，所述公開的內(nèi)容通過引用以其全部被并入本文。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括至少一種(例如，一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同類型的)紫杉烷綴合物和至少一種紫杉烷綴合物(例如，一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同類型的脂質(zhì)綴合的PI3K抑制劑)。超分子組合治療藥物可以包括約1％至約99％(w/w)的PI3K抑制劑綴合物。進一步，PI3K抑制劑綴合物可以與紫杉烷綴合物以10:1至1:10的比例存在。如果兩種或更多種不同的PI3K抑制劑綴合物存在于組合物中，則每種PI3K抑制劑綴合物與綴合物的比例可以獨立地為10:1至1:10。進一步，如果兩種或更多種不同的PI3K抑制劑綴合物存在于組合物中，這兩種PI3K抑制劑綴合物的比例可以為10:1至1:10。不受限制地，超分子組合治療藥物的兩種不同的組分(綴合物和PI3K抑制劑綴合物)的比例可以為10:1至1:10、5:1至1:5，或2.5:1至1:2.5。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物的兩種不同的組分的比例可以為約1:1、約1:1.2、約1:1.5、約1:1.7、約1:2、約1:2.5、約1:3、約1:3.5、約1:4、約1:4.5、約1:5、約1:5.5、約1:6、約1:6.5、約1:7、約1:7.5、約1:8、約1:8.5、約1:9、約1:9.5或約1:10。如果超分子組合治療藥物包括多于兩種組分，那么任何兩種組分之間的比例可以獨立于任何其他兩種組分之間的比例。

在一些實施方式中，化學治療劑是鉑酸鹽。在本文描述的方法和組合物中可以使用任何鉑化合物。在一些實施方式中，鉑化合物是鉑(II)化合物或鉑(IV)化合物。在一些實施方式中，鉑(II)化合物選自由以下組成的組：順鉑、奧沙利鉑、卡鉑、鉑爾定、沙鉑(sartraplatin)及其組合。在優(yōu)選實施方式中，鉑酸鹽是順鉑或奧沙利鉑。順鉑(順式-二氯二氨鉑(II))(CDDP)已經(jīng)作為一類重要的抗腫瘤劑出現(xiàn)，并且廣泛用于許多惡性腫瘤(malignancies)的治療，包括睪丸癌、卵巢癌、宮頸癌、頭頸癌和非小細胞肺癌(Jamieson等,Chem.Rev.(1999),99(9):2467-2498)。它在三陰性乳腺癌中也表現(xiàn)為有活性的(Leong等,J.Clin.Invest.(2007),117(5):1370-80)。然而，它的使用是劑量限制性的，主要是因為腎毒性或?qū)δI的毒性(Madias,NE和Harrington,JT,Am.J.(1978),65(2):307-14)。

在一些實施方式中，鉑可以經(jīng)由至少一個配位鍵被可分離地連接到脂質(zhì)。在一些實施方式中，配位鍵是Pt->O。在一些其他實施方式中，配位鍵是Pt->N。在一些實施方式中，綴合物包括經(jīng)由至少一個配位鍵與膽固醇可分離地連接的鉑。在一些實施方式中，脂質(zhì)綴合的鉑化合物是

包括鉑酸鹽的另外的綴合物(或包含鉑的化學治療劑)描述在例如，美國專利公開2012/0189571和國際專利公開WO 2010/091192中；所述每篇公開通過引用以其全部并入本文。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括至少一種(例如，一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同類型的)紫杉烷綴合物和至少一種鉑綴合物(例如，一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同類型的脂質(zhì)綴合的鉑)。超分子組合治療藥物可以包括約1％至約99％(w/w)的鉑綴合物。進一步，鉑綴合物可以以與紫杉烷綴合物以10:1至1:10的比例存在。如果兩種或更多種不同的鉑綴合物存在于組合物中，每種鉑綴合物與紫杉烷綴合物的比例可以獨立地為10:1至1:10。進一步，如果兩種或更多種不同的鉑綴合物存在于組合物中，這兩種鉑綴合物的比例可以為10:1至1:10。不受限制地，超分子組合治療藥物的兩種不同的組分(紫杉烷綴合物和鉑綴合物)的比例可以為10:1至1:10、5:1至1:5，或2.5:1至1:2.5。在一些實施方式中，超分子組合治療藥物的兩種不同的組分的比例可以為約1:1、約1:1.2、約1:1.5、約1:1.7、約1:2、約1:2.5、約1:3、約1:3.5、約1:4、約1:4.5、約1:5、約1:5.5、約1:6、約1:6.5、約1:7、約1:7.5、約1:8、約1:8.5、約1:9、約1:9.5或約1:10。如果超分子組合治療藥物包括多于兩種組分，那么任何兩種組分之間的比例可以獨立于任何其他兩種組分之間的比例。

超分子組合治療藥物還可以包括被選擇來在形成期間減少顆粒聚集的組分，這可以由顆粒的空間位阻穩(wěn)定造成，而所述顆粒的空間位阻穩(wěn)定在形成期間防止電荷誘導的聚集。減少聚集的適合的組分包括但不限于聚乙二醇(PEG)修飾的脂質(zhì)(即，PEG綴合的脂質(zhì))、單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂Gm1，以及聚酰胺低聚物(“PAO”)，如(美國專利號6,320,017中描述的)。示例性適合的PEG修飾的脂質(zhì)包括但不限于PEG修飾的二?；视秃蚉EG修飾的二烷基甘油、PEG修飾的磷脂酰乙醇胺和PEG修飾的磷脂酸、PEG-神經(jīng)酰胺綴合物(例如，PEG-CerC14或PEG-CerC20)、PEG修飾的二烷基胺、PEG修飾的1,2-二?；趸?3-胺，以及PEG綴合的DSPE(例如，DSPE-PEG2000)。具有不帶電荷的、親水性、空間位阻屏障(steric-barrier)部分的其他化合物，在形成期間防止聚集，如PEG、Gm1或ATTA，還可以被結(jié)合到脂質(zhì)以在形成期間減少聚集。ATTA-脂質(zhì)描述在，例如，美國專利號6,320,017中；并且PEG-脂質(zhì)綴合物描述在，例如，美國專利號5,820,873、5,534,499和5,885,613中。通常，被選擇來減少聚集的脂質(zhì)組分的濃度為約0.1％至15％(按脂質(zhì)的摩爾百分比)。應(yīng)該注意到，防止聚集的化合物不一定需要脂質(zhì)綴合來發(fā)揮正常功能。溶液中游離的PEG和游離的ATTA可以是足夠來防止聚集的。如果脂質(zhì)體在形成之后是穩(wěn)定的，那么可以在向受試者施用之前將PEG或ATTA透析掉。

當存在于組合物中時，中性脂質(zhì)可以是在生理pH下以不帶電荷的形式或中性的兩性離子形式存在的一些脂質(zhì)種類中的任一種。這樣的脂質(zhì)包括但不限于二?；字Ｄ憠A、二酰基磷脂酰乙醇胺、神經(jīng)酰胺、鞘磷脂、二氫鞘磷脂、腦磷脂和腦苷脂。對于使用在本文描述的脂質(zhì)體中的中性脂質(zhì)的選擇通常由，例如，對脂質(zhì)體的尺寸和脂質(zhì)體在血流中的穩(wěn)定性的考量來指導。優(yōu)選地，中性脂質(zhì)組分是具有兩個?；鶊F的脂質(zhì)，(即，二?；字Ｄ憠A和二酰基磷脂酰乙醇胺)。具有擁有不同的鏈長度和飽和度的各種?；溁鶊F的脂質(zhì)是可獲得的，或者可以通過公知的技術(shù)來分離或合成。在一組實施方式中，優(yōu)選包含具有范圍為C₆至C₂₂(例如，C₆、C₈、C₁₀、C₁₂、C₁₄、C₁₆、C₁₈、C₂₂或C₂₂)的碳鏈長度的飽和或不飽和脂肪酸的脂質(zhì)。另外，可以使用具有飽和和不飽和脂肪酸鏈的混合物的脂質(zhì)。在一些實施方式中，中性脂質(zhì)可以是磷脂酰膽堿、DOPE、DSPC、POPC、DMPC、DPPC或任何相關(guān)的磷脂酰膽堿?？捎糜诒景l(fā)明中的中性脂質(zhì)還可以由鞘磷脂、二氫鞘磷脂，或者具有其他首基(head group)(如絲氨酸和肌醇)的磷脂構(gòu)成。

當存在于超分子組合治療藥物中時，固醇組分可以是脂質(zhì)體、脂質(zhì)囊泡或脂質(zhì)顆粒制品領(lǐng)域常規(guī)使用的那些固醇中的任一種。優(yōu)選的固醇是膽固醇。

當存在于超分子組合治療藥物中時，陽離子脂質(zhì)可以是在約生理pH下攜帶凈正電荷的一些脂質(zhì)種類中的任一種。這樣的脂質(zhì)包括但不限于N,N-二油烯基-N,N-二甲基氯化銨(“DODAC”)；N-(2,3-二油烯基氧基)丙基-N,N-N-三乙基氯化銨(“DOTMA”)；N,N-二硬脂酰-N,N-二甲基溴化銨(“DDAB”)；N-(2,3-二油烯基氧基)丙基)-N,N,N-三甲基氯化銨(“DOTAP”)；1,2-二油烯基氧基-3-三甲基氨基丙烷氯鹽(“DOTAP.Cl”)；3β-(N-(N',N'-二甲基氨基乙烷)-氨甲酰基)膽固醇(“DC-Chol”)；N-(1-(2,3-二油烯基氧基)丙基)-N-2-(精胺酸基酰胺)乙基)-N,N-二甲基三氟乙酸銨(“DOSPA”)；雙十八烷基酰氨基甘氨酰羧基精胺(“DOGS”)；1,2-二油酰-sn-3-磷酸乙醇胺(“DOPE”)；1,2-二油酰-3-二甲基氨基丙烷(“DODAP”)；N,N-二甲基-2,3-二烯基氧基)丙胺(“DODMA”)；N-(1,2-二肉豆蔻基氧基丙-3-基)-N,N-二甲基-N-羥乙基溴化銨(“DMRIE”)；5-羧基精胺基二十八烷基酰胺(“DOGS”)；以及二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺5-羧基鯨蠟基-酰胺(“DPPES”)。另外，可以使用陽離子脂質(zhì)的一些商業(yè)制品，如，例如，LIPOFECTIN(包括可從GIBCO/BRL獲得的DOTMA和DOPE)和LIPOFECTAMINE(包括可從GIBCO/BRL獲得的DOSPA和DOPE)。適合于脂質(zhì)顆粒形成的其他陽離子脂質(zhì)描述在WO98/39359、WO96/37194中。其他適合的陽離子脂質(zhì)描述在，例如，美國專利申請公開號2011/0997720和PCT專利申請公開號WO 2009/132131和號WO 2009/132131中，所述所有公開的內(nèi)容均通過引用以其全部并入本文。

當存在于超分子組合治療藥物中時，陰離子脂質(zhì)可以是在約生理pH下攜帶凈負電荷的一些脂質(zhì)種類中的任一種。這樣的脂質(zhì)包括但不限于磷脂酰甘油、心磷脂、二?；字＝z氨酸、二酰基磷脂酸、N-十二酰磷脂酰乙醇胺、N-琥珀酰磷脂酰乙醇胺、N-戊二酰磷脂酰乙醇胺、賴氨酰磷脂酰甘油，以及連接到中性脂質(zhì)的其他陰離子修飾基團。

在本文中使用時，術(shù)語“兩親性脂質(zhì)”指任何適合的材料，其中脂質(zhì)材料的疏水性部分朝向疏水相，而親水性部分朝向水相。這樣的化合物包括但不限于磷脂、氨脂和鞘脂。

同樣適合于包含在本文描述的超分子組合治療藥物中的是可編程融合脂質(zhì)。在給定的信號事件出現(xiàn)以前，包含可編程融合脂質(zhì)的顆粒幾乎沒有與細胞膜融合并且遞送其有效負荷的傾向。這允許超分子組合治療藥物在施用生物體或疾病位點中之后、在它開始與細胞融合之前更均勻地分布。信號事件可以是，例如，pH、溫度、離子環(huán)境或時間的變化。在后者情況中，融合延遲或“隱身(cloaking)”組分，如ATTA-脂質(zhì)綴合物或PEG-脂質(zhì)綴合物，可以隨著時間的推移而簡單地交換出顆粒膜。等到顆粒適合地分布在身體中時，它已經(jīng)失去了足夠的隱身劑，從而為可融合的。對于其他的信號事件，期望選擇與疾病位點或靶細胞相關(guān)的信號，如腫瘤位點處的低pH。

可以將一種或更多種補充性表面活化劑添加到超分子組合治療藥物，例如作為兩親性試劑特征的補充物，或者提高顆粒穩(wěn)定能力或確保改善的溶解。這樣的補充劑可以是藥學上可接受的非離子表面活性劑，優(yōu)選地為包含一個或更多個羥基的有機化合物的烯化氧衍生物。例如乙氧基和/或丙氧基醇或酯化合物或其混合物是通?？色@得的，并且作為這樣的補充物是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。這樣的化合物的實例是山梨糖醇的酯和脂肪酸的酯，如失水山梨糖醇單棕櫚酸酯、油性蔗糖酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯固醇醚、聚氧乙烯-聚丙氧基烷基醚、嵌段聚合物和十六烷基醚，以及聚氧乙基化蓖麻油或氫化蓖麻油衍生物和聚甘油脂肪酸酯。適合的非離子表面活性劑包括，但不限于各種等級的或等。補充性表面活化劑還可以具有離子性質(zhì)，如膽道試劑、膽酸或去氧膽酸及其鹽和衍生物；或者脂肪酸，如油酸、亞油酸及其他。其他的離子表面活化劑被發(fā)現(xiàn)在陽離子脂質(zhì)(如C₆-C₂₄烷基胺或烷醇胺)和陽離子膽固醇酯中。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括PEG綴合的脂質(zhì)和磷脂。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括紫杉烷-脂質(zhì)綴合物和PI3K抑制劑-脂質(zhì)綴合物。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括紫杉烷-脂質(zhì)綴合物和鉑-脂質(zhì)綴合物。

在一些實施方式中，超分子組合治療藥物包括紫杉烷-脂質(zhì)綴合物和抗體(或其抗原結(jié)合片段)脂質(zhì)綴合物。I抗體或其抗原結(jié)合片段可以是治療劑或靶向配體。

在一個方面，本公開提供包括與脂質(zhì)綴合的紫杉烷的綴合物。術(shù)語“紫杉烷”一般地指由紅豆杉屬的植物(例如，紫衫樹(yews)，如但不限于歐洲紅豆杉(Taxus baccata)、太平洋紫衫(Taxus brevifolia)、加拿大紫衫(Taxus canadensis)、中國紅豆杉(Taxus chinensis)、東北紅豆杉(Taxus cuspidata)、佛羅里達紅豆杉(Taxus floridana)、墨西哥紅豆杉(Taxus globosa)、南洋紅豆杉(Taxus sumatrana)、西藏紅豆杉(Taxus walUchiana))產(chǎn)生的包含二萜的化合物，及其合成和半合成形式。所述術(shù)語表示包含核心結(jié)構(gòu)的化合物?；镜淖仙纪楹诵慕Y(jié)構(gòu)可以進一步被取代或者

可以在環(huán)中包含不飽和部分，以產(chǎn)生一般被稱為紫杉烷的一些化合物。一般來說，這樣的化合物可以通過干擾微管來停止有絲分裂，從而阻斷細胞生長。在本文中使用時，術(shù)語“二萜(diterpene)”意思是具有來自四個異戊二烯單元的碳骨架的化學化合物。紫杉烷組的化合物包括紫杉醇、多西他賽和卡巴他賽。

紫杉烷可以從天然來源分離，或者也可以以合成方式從天然存在的前體制備。例如，可以從漿果赤霉素制備紫杉醇(Bnstol-Myers Squibb)，將保護基團連接到要成為紫杉醇的羥基的漿果赤霉素的羥基，使前體漿果赤霉素轉(zhuǎn)化為紫杉醇，并且隨后從羥基去除保護基團以獲得紫杉醇(參見，例如，WO93/10076，國際公開日1993年05月27日；K.V.Rao,美國專利號5,200.534；R.A.Holton,美國專利號5,015,744；PCT US92/07990；V.J.Stella和A.E.Mathew,美國專利號4.960,790；K.C.Nicolau,Nature3j54(1993),464-466頁；Nicolau,K.C.等.Nature 367(1994)630-634頁；Holton,R.A.等.J.Am.Chem.Soc.H6(1994)1597-1600頁；WO93/16059，國際公開日1993年08月19日；EP 528.729，1993年02月24日公開；EP 522,958，1993年01月13日公開；WO91/13053，國際公開日1991年09月05日；EP 414,610，國際公開日1991年02月27日；這些文件的內(nèi)容均通過引用并入本文)。紫杉烷的非限制性實例可以包括紫杉醇和多西他賽、其衍生物，及其混合物。

可以有效地使用紫杉烷來治療各種癌癥。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)紫杉醇具有針對卵巢癌和乳腺癌的活性，以及針對惡性黑素瘤、結(jié)腸癌、白血病和肺癌的活性(參見，例如，Borman,Chemical&Engineering News,1991年9月2日,11-18頁；The Pharmacological Basis of Therapeutics(Goodman Gilman等編),Pergamon Press,New York(1990),1239頁；Suffness,Antrtumor Alkaloids,在：“The Alkaloids,Vol.XXV,”Academic Press,Inc.(1985),第1章,6-18頁中；Rizzo等,J.Pharm.&Biomed.Anal.§(2):159-164(1990)；以及Biotechnology 9:933-938(1991年10月))。紫杉醇通過結(jié)合細胞核中的微管蛋白，由此阻斷微管分解并且因此抑制細胞分裂，從而針對癌細胞起作用(Schiff等,Nature277:665(1979))。

術(shù)語紫杉烷還包括漿果赤霉素(bactins)和漿果赤霉素衍生物。術(shù)語“漿果赤霉素(baccatin)”或“漿果赤霉素衍生物”指其中紫杉烷骨架的13號位處的側(cè)鏈為羥基的紫杉烷衍生物。取決于紫杉烷骨架的三環(huán)上的取代基的性質(zhì)，這些化合物在文獻中通常指漿果赤霉素或“漿果赤霉素I-VII”等。在本文中使用時，術(shù)語紫杉烷還包括abeo-紫杉烷(abeo-taxane)。Abeo-紫杉烷具有分成5元A環(huán)。紫杉烷可以來自天然來源，可以以合成方式制備，或者可以從半合成方法獲得，或其組合。示例性紫杉烷包括，但不限于紫杉醇(TAXOL^TM)、多西他賽(泰索帝(taxotere))卡巴他賽、白蛋白結(jié)合型紫杉醇(abretaxane)、taxoprexin、聚谷氨酸紫杉醇(xyotax)、三尖杉寧堿(cephalomannine)、10-去乙?；馍紝帀A、漿果赤霉素、紫杉堿(taxine)、短葉醇(brevifoliol)、10-去乙?；鶟{果赤霉素、hongdoushan A、hongdoushan B、hongdoushan C、表紫杉醇(7-epitaxol)、7-表漿果赤霉素III(7-epibaccatin III)，以及10-去乙?；碜仙即?10-deacetyl-7-epitaxol)。

在一些實施方式中，綴合物中的紫杉烷是卡巴他賽。

在一些實施方式中，紫杉烷和脂質(zhì)可以經(jīng)由接頭共價綴合。術(shù)語“接頭(linker)”意思是連接化合物的兩個部分的有機部分。接頭通常包括直接鍵；或原子，如氧或硫；單元，如NR¹、C(O)、C(O)O、C(O)NR¹、SO、SO₂、SO₂NH；或者原子鏈，如取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基烯基、雜環(huán)基炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、烷基芳基烷基、烷基芳基烯基、烷基芳基炔基、烯基芳基烷基、烯基芳基烯基、烯基芳基炔基、炔基芳基烷基、炔基芳基烯基、炔基芳基炔基、烷基雜芳基烷基、烷基雜芳基烯基、烷基雜芳基炔基、烯基雜芳基烷基、烯基雜芳基烯基、烯基雜芳基炔基、炔基雜芳基烷基、炔基雜芳基烯基、炔基雜芳基炔基、烷基雜環(huán)基烷基、烷基雜環(huán)基烯基、烷基雜環(huán)基炔基、烯基雜環(huán)基烷基、烯基雜環(huán)基烯基、烯基雜環(huán)基炔基、炔基雜環(huán)基烷基、炔基雜環(huán)基烯基、炔基雜環(huán)基炔基、烷基芳基、烯基芳基、炔基芳基、烷基雜芳基、烯基雜芳基、炔基雜芳基，其中一個或更多個亞甲基可以被O、S、S(O)、SO₂、N(R¹)₂、C(O)、可裂解連接基團、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)中斷或終止；其中，R¹是氫、?；?、脂肪族基團或取代的脂肪族基團。

在一些實施方式中，接頭可以是支鏈接頭。支鏈接頭的分支點可以為至少三價原子，但是可以為四價、五價或六價原子，或者呈現(xiàn)這樣的多化合價的基團。在某些實施方式中，分支點可以是-N、-N(Q)-C、-O-C、-S-C、-SS-C、-C(O)N(Q)-C、-OC(O)N(Q)-C、-N(Q)C(O)-C或-N(Q)C(O)O-C；其中Q在每次出現(xiàn)時獨立地為H或任選地取代的烷基。在其他實施方式中，分支點可以是甘油或甘油衍生物。

在一些實施方式中，接頭包括至少一個可裂解連接基團。可裂解連接基團是在細胞外足夠穩(wěn)定，但是進入到靶細胞中時被裂解以釋放由接頭保持在一起的兩個部分的基團。在優(yōu)選實施方式中，與在受試者的血液或血清中或者在第二參照條件(例如，可將其選擇為模擬或代表在血液或也請中發(fā)現(xiàn)的條件)下的情況相比，可裂解連接基團在靶細胞中或者在第一參照條件(例如，可將其選擇為模擬或代表胞內(nèi)條件)下以更快至少10倍或以上、優(yōu)選地至少100倍的速度裂解。

可裂解連接基團容易受裂解劑(例如，pH、氧化還原電位或降解分子的存在)的影響。一般來說，裂解劑在細胞內(nèi)比在血清或血液中更普遍或者水平或活性更高。這樣的降解劑的實例包括：選擇用于特定底物或沒有底物特異性的氧化還原劑，包括例如存在于細胞中的氧化酶或還原酶或還原劑(如硫醇)，其可以通過還原作用降解可由氧化還原裂解的連接基團；酯酶；酰胺酶；可以創(chuàng)建酸性環(huán)境的核內(nèi)體或劑，例如，導致pH為五或以下的核內(nèi)體或劑；可以作為廣義酸水解或降解可由酸裂解的連接基團的酶，肽酶(其可以是底物特異性的)和蛋白酶，以及磷酸酶。

接頭可以包括可由特定酶裂解的可裂解連接基團。并入到接頭中的可裂解連接基團的類型可以取決于待靶向的細胞。在一些實施方式中，與血液或血清(或者在選擇為模擬胞外條件的體外條件下)相比，可裂解連接基團在細胞中(或者在選擇為模擬胞內(nèi)條件的體外條件下)以至少1.25倍、1.5倍、1.75倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、25倍、50倍或100倍更快的速度裂解。在一些實施方式中，與在細胞中(或者在選擇為模擬胞內(nèi)條件的體外條件下)相比，可裂解連接基團在血液中(或者在選擇為模擬胞外條件的體外條件下)以90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％或1％更小的比例裂解。

示例性可裂解連接基團包括但不限于可由氧化還原裂解的連接基團(例如，-S-S-和-C(R)₂-S-S-，其中R是H或C₁-C₆烷基，并且至少一個R是C₁-C₆烷基，如CH₃或CH₂CH₃)；基于磷酸根的可裂解連接基團(例如，-O-P(O)(OR)-O-、-O-P(S)(OR)-O-、-O-P(S)(SR)-O-、-S-P(O)(OR)-O-、-O-P(O)(OR)-S-、-S-P(O)(OR)-S-、-O-P(S)(ORk)-S-、-S-P(S)(OR)-O-、-O-P(O)(R)-O-、-O-P(S)(R)-O-、-S-P(O)(R)-O-、-S-P(S)(R)-O-、-S-P(O)(R)-S-、-O-P(S)(R)-S-、-O-P(O)(OH)-O-、-O-P(S)(OH)-O-、-O-P(S)(SH)-O-、-S-P(O)(OH)-O-、-O-P(O)(OH)-S-、-S-P(O)(OH)-S-、-O-P(S)(OH)-S-、-S-P(S)(OH)-O-、-O-P(O)(H)-O-、-O-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-O-、-S-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-S-和-O-P(S)(H)-S-，其中R是任選地取代的直鏈或支鏈C₁-C₁₀烷基)；可由酸裂解的連接基團(例如，腙、酯和氨基酸的酯、-C＝NN-以及-OC(O)-)；基于酯的可裂解連接基團(例如，-C(O)O-)；基于肽的可裂解連接基團(例如，由酶，如細胞中的肽酶和蛋白酶裂解的連接基團，例如-NHCHR^AC(O)NHCHR^BC(O)-，其中R^A和R^B是兩個相鄰氨基酸的R基團)。基于肽的可裂解連接基團包括兩個或更多個氨基酸。在一些實施方式中，基于肽的裂解連接鍵包括作為細胞中發(fā)現(xiàn)的肽酶或蛋白酶的底物的氨基酸序列。

在一些實施方式中，接頭包括酸不穩(wěn)定的基團。一般來說，可由酸裂解的連接基團在pH為約6.5或以下(例如，約6.5、6.0、5.5、5.0、4.5、4.0、3.5、3.0或以下)的酸性環(huán)境中是可裂解的，或者由可以作為廣義酸的試劑(如酶)裂解。

在一些實施方式中，接頭包括以下中的一個或更多個：琥珀酸、富馬酸、丙烯酸、乙二醇、二甘醇，以及天然或非天然氨基酸。

在一些實施方式中，接頭包括草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、琥珀酸、乙二胺、天然或非天然氨基酸、乙二醇、二甘醇、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、丙烯酸、丁-2-烯酸、戊-2-烯酸、己-2-烯酸、丙-2-炔酸、丁-2-炔酸、戊-2-炔酸、己-2-炔酸、乙烯、丙烯、1-丁烯、1-戊烯、1-己烯、乙炔、丙炔、丁-1-炔、戊-1-炔，或其任何組合。

在一些實施方式中，接頭包括琥珀酸和乙二胺；琥珀酸和天然或非天然氨基酸；乙二醇和乙酸；乙二醇和丙烯酸；二甘醇和乙酸；疏水性氨基酸和乙醇酸；疏水性氨基酸和丙二酸；疏水性氨基酸和琥珀酸；疏水性氨基酸和戊二酸；及其任何組合。

在一些實施方式中，接頭選自由以下組成的組：-C(O)CH₂CH₂C(O)NHCH₂CH₂NHC(O)-；-C(O)CH₂CH₂C(O)NHCH₂NHC(O)-；-C(O)CH₂OCH₂CH₂-；-C(O)CH₂CH₂OCH₂CH₂-；-C(O)CH₂OCH₂CH₂OCH₂CH₂-；-C(O)CH(R)NHC(O)CH₂-，其中R是H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)CH₂CH₃或CH₂-苯基；-C(O)CH(R)NHC(O)CH₂CH₂-，其中R是H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)CH₂CH₃或CH₂-苯基；-C(O)CH(R)NHC(O)(CH₂)_nC(O)-，其中R是H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)CH₂CH₃或CH₂-苯基，并且n是1、2或3；-C(O)CH(R)NHC(O)CH₂OCH₂CH_2-，其中R是H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)CH₂CH₃或CH₂-苯基；-C(O)C≡C(CH₂)_n-C(O)-，其中n是1、2或3；-C(O)C≡C(CH₂)_n-，其中n是0、1或2；-C(O)CH＝CH(CH₂)_nC(O)-，其中n是0、1、2或3；-C(O)CH＝CH(CH₂)_n-，其中n是1、2或3；以及-C(O)CH₂CH₂C(O)NHCH₂C(O)-。

在一些實施方式中，紫杉烷-脂質(zhì)綴合物中的脂質(zhì)是膽固醇、α-生育酚或脂肪酸。在一個實施方式中，紫杉烷-脂質(zhì)綴合物中的脂質(zhì)是膽固醇。

紫杉烷和脂質(zhì)可以使用存在于它們各自結(jié)構(gòu)中的反應(yīng)性官能團彼此(或與接頭)共價綴合。術(shù)語“反應(yīng)性官能團”指能夠與另一個官能團反應(yīng)的官能團。示例性反應(yīng)性官能團包括但不限于羥基、胺、硫醇、硫醛、亞磺基、羧酸、酰胺等。脂質(zhì)、紫杉烷和接頭上的反應(yīng)性官能團可以相同或不同。在一些實施方式中，脂質(zhì)上的反應(yīng)性基團是羥基、胺、硫醇或羧酸。在一些實施方式中，紫杉烷上的反應(yīng)性基團是羥基、胺、硫醇或羧酸。

在一些實施方式中，紫杉烷-脂質(zhì)綴合物可以選自由紫杉烷綴合物1-33組成的組，羧酸紫杉烷綴合物1-33的結(jié)構(gòu)示出于實施例部分。

在一些實施方式中，本文描述的方法涉及對患有或診斷患有癌癥的受試者進行治療?；加邪┌Y的受試者可以通過使用現(xiàn)有的診斷癌癥的方法由醫(yī)師來確認。表征這些病癥并且有助于診斷的癌癥的癥狀和/或并發(fā)癥是本領(lǐng)域公知的，所述癥狀和/或并發(fā)癥包括但不限于腫瘤生長、包藏癌細胞的器官或組織的功能受損等。可以有助于例如癌癥的診斷的試驗包括，但不限于組織活檢和組織學檢查。癌癥的家族史或暴露于癌癥危險因素(例如煙草制品、輻射等)也可以有助于確定受試者是否可能患有癌癥或者有助于癌癥的診斷。

癌癥可以包括但不限于惡性腫瘤，包括腺癌、淋巴瘤、母細胞瘤、黑素瘤、肉瘤、白血病、鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、膠質(zhì)母細胞瘤、基底細胞癌、膽道癌、膀胱癌、腦癌(包括膠質(zhì)母細胞瘤和髓母細胞瘤)；乳腺癌、宮頸癌、絨毛膜癌；結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜癌；食道癌、胃癌；各種類型的頭頸癌、上皮內(nèi)腫瘤(包括Bowen病和佩吉特氏病)；血液腫瘤，包括急性淋巴細胞性白血病和粒細胞性白血?。籏aposi肉瘤、毛細胞性白血?。宦粤＜毎园籽?、AIDS相關(guān)的白血病和成人T細胞白血病淋巴瘤；腎癌(如腎細胞癌)、T細胞急性成淋巴細胞性白血病/淋巴瘤、淋巴瘤(包括霍奇金氏病和淋巴細胞性淋巴瘤)；肝癌(如肝惡性瘤(hepatic carcinoma)和肝細胞瘤(hepatoma))、Merkel細胞癌、黑素瘤、多發(fā)性骨髓瘤；神經(jīng)母細胞瘤；口腔癌(包括鱗狀細胞癌)；卵巢癌(包括來自上皮細胞的卵巢癌)、肉瘤(包括平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤、纖維肉瘤(fibROS1arcoma)和骨肉瘤)；胰腺癌；皮膚癌(包括黑素瘤)、基質(zhì)細胞、生殖細胞和間充質(zhì)細胞；前列腺癌(pROS1tate cancer)；直腸癌；外陰癌、腎癌(包括腺癌)；睪丸癌(包括生殖細胞瘤，如精原細胞瘤、非精原細胞瘤(畸胎瘤、絨毛膜癌)、間質(zhì)瘤和生殖細胞瘤)；甲狀腺癌(包括甲狀腺腺癌和髓樣癌)；食道癌、唾液腺癌和Wilms腫瘤。

可以向患有或診斷患有癌癥的受試者施用本文描述的組合物和方法。在一些實施方式中，本文描述的方法包括向受試者施用有效量的本文描述的組合物，以便緩解癌癥癥狀。在本文中使用時，“緩解癌癥癥狀”是改善與癌癥相關(guān)的任何病癥或癥狀。與相同的未經(jīng)治療的對照相比，通過任何標準技術(shù)測定，這樣的減少是通為至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、99％或更多。用于向受試者施用本文描述的組合物的各種手段是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。這樣的方法可以包括但不限于口服施用、胃腸外施用、靜脈內(nèi)施用、肌肉施用、皮下施用、經(jīng)皮施用、氣道(氣溶膠(aerosol))施用、肺施用、皮膚施用、局部施用、注射施用或瘤內(nèi)施用。施用可以是局部或全身性的。

在本文中使用時，術(shù)語“有效量”指本文描述的組合物緩解疾病或紊亂的至少一種或更多種癥狀所需要的量，并且指提供期望效果的藥理組合物的有效量。因此，術(shù)語“治療有效量”指本文描述的組合物在施用至典型的受試者時足以提供特定的抗腫瘤效果的量。在各種上下文中使用時，本文描述的有效量也包括足以延遲疾病的癥狀發(fā)展、改變疾病的癥狀的進程(例如但不限于減慢疾病的癥狀的進展)，或者逆轉(zhuǎn)疾病的癥狀的量。因此，規(guī)定準確的“有效量”一般是不可行。然而，對于任何給定的情況，適合的“有效量”可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員僅使用常規(guī)實驗來確定。

有效量、毒性和治療功效可以通過細胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游镏械臉藴仕帉W程序(例如，用于確定LD50(使50％的群體致死的劑量)和ED50(在50％的群體中治療有效的劑量))來確定。取決于所使用的劑量形式和所利用的施用途徑，劑量可以不同。毒性和治療效果之間的劑量比為治療指數(shù)，并且可以表示為LD50/ED50之比。優(yōu)選表現(xiàn)出大治療指數(shù)的組合物和方法。初始可以由細胞培養(yǎng)試驗來估計治療有效劑量。還可以在動物模型中配制劑量，以達到包括如細胞培養(yǎng)物中或者在適合的動物模型中所確定的IC50(即，本文描述的組合物達到癥狀的半數(shù)最大抑制的濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。例如，通過高效液相色譜法，可以對血漿中的水平進行測定。通過適合的生物測定法(例如，特別是用于腫瘤尺寸和/或生長的測定)，可以對任何特定劑量的效果進行監(jiān)測。劑量可以由醫(yī)師確定，并且在必要時進行調(diào)整，以與所觀察到的治療效果相稱。

在一些實施方式中，本文描述的技術(shù)涉及包括超分子組合治療藥物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。藥學上可接受的載體和稀釋劑包括鹽水、水性緩沖溶液、溶劑和/或分散介質(zhì)。這樣的載體和稀釋劑的使用時本領(lǐng)域公知的?？梢宰鳛樗帉W上可接受的載體的材料的一些非限制性實例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素和乙酸纖維素；(4)粉狀黃蓍膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)潤滑劑，如硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉和滑石；(8)賦形劑，如可可脂和栓劑蠟；(9)油，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇，如聚丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇(PEG)；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格式溶液；(19)乙醇；(20)pH緩沖溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；(22)填充劑，如多肽和氨基酸；(23)血清組分，如血清白蛋白、HDL和LDL；(22)C₂-C₁₂醇，如乙醇；以及(23)藥物制劑中采用的其他無毒相容性物質(zhì)。濕潤劑、著色劑、釋放及、包衣劑、甜味劑、風味劑、芳香劑、防腐劑和抗氧化劑也可以存在于制劑中。如“賦形劑”、“載體”、“藥學上可接受的載體”等的術(shù)語在本文中可互換使用。在一些實施方式中，載體抑制活性劑(例如本文描述的組合物)的降解。

在一些實施方式中，包括超分子組合治療藥物的藥物組合物可以是胃腸外劑型。由于胃腸外劑型的施用通常繞開患者對污染物的天然防御，所以胃腸外劑型優(yōu)選地是無菌的或者能夠在施用至患者之前滅菌。胃腸外劑型的實例包括但不限于注射用的溶液、準備要溶解或懸浮在注射用的藥學上可接受的賦形劑中的干燥產(chǎn)物、準備用于注射的懸液，以及乳劑。另外，可以制備受控釋放的胃腸外劑型，以用于對患者進行施用，所述劑型包括但不限于型劑型和藥物突釋劑型。

可以用于提供本文描述的組合物的胃腸外劑型的適合的媒介是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知。實例包括但不限于無菌水；USP注射用水；鹽水溶液；葡萄糖溶液；水性媒介，如但不限于氯化鈉注射液、林格式注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化鈉注射液，以及乳酸鹽林格式注射液；與水混溶的媒介，如但不限于乙醇、聚乙二醇和丙二醇；以及非水性媒介，如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸芐酯。也可以將改變或修飾藥學上可接受的鹽的溶解度的化合物并入到本公開的胃腸外劑型中，包括常規(guī)的和受控釋放的胃腸外劑型。

還可以將藥物組合物配制成適合于口服施用，例如作為離散劑型，比如但不限于片劑(包括但不限于刻痕片劑或包衣片劑)、丸劑、囊片劑、膠囊劑、咀嚼片劑、粉狀產(chǎn)品袋劑、扁囊劑、糖錠劑、糯米紙囊劑、氣溶膠噴霧劑；或者液體劑，如但不限于糖漿劑，酏劑，處于水性液體、非水性液體、水包油乳劑或油包水乳劑中的溶液劑或懸液。這樣的組合物包含預定量的所公開的化合物的藥學上可接受的鹽，并且可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的藥學方法制備。一般地參見Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版,Lippincott,Williams和Wilkins,Philadelphia PA.(2005)。

常規(guī)的劑型一般提供從制劑快速或立即的藥物釋放。根據(jù)藥物的藥理學和藥代動力學，常規(guī)劑型的使用可以導致所述藥物在患者血液和其他組織中的濃度大范圍波動。這些波動可以影響一些參數(shù)，如給藥頻率、效果的出現(xiàn)、功效持續(xù)時間、治療藥物血液水平的保持、毒性、副作用等。有利地，受控釋放的制劑可以用于控制藥物的效果的出現(xiàn)、作用持續(xù)時間、治療窗內(nèi)的血漿水平，以及峰值血液水平。特別是，受控釋放或延長釋放的劑型或制劑可以用于確保實現(xiàn)藥物的最大效果，同時使?jié)撛诘牟涣挤磻?yīng)和安全隱患最小化，這可能在藥物給藥不足(即，低于最低治療水平)以及超過藥物的毒性水平時發(fā)生。在一些實施方式中，本文描述的組合物可以以持續(xù)釋放的制劑施用。

受控釋放的藥物產(chǎn)品的普遍目標在于改善藥物療法，使其高于它們的非受控釋放對應(yīng)物所能達到的治療。理想的是，在醫(yī)學治療中使用優(yōu)化設(shè)計的受控釋放的制品的特征在于使用最少的藥物物質(zhì)在最短的時間內(nèi)治愈或控制病癥。受控釋放的制劑的優(yōu)點包括：1)延長藥物活性；2)降低劑量頻率；3)提高患者依從性；4)使用較少的總藥物；5)減少局部或全身性副作用；6)使藥物積累最小化；7)減少血液水平波動；8)改善治療功效；9)減少增毒作用或藥物活性損失；以及10)改善疾病或病癥的控制速度。Kim,Cherng-ju,Controlled Release Dosage Form Design,2(Technomic Publishing,Lancaster,Pa.:2000)。

大多數(shù)受控釋放的制劑被設(shè)計為初始即釋放迅速產(chǎn)生期望治療效果的量的藥物(活性成分)，并且逐漸且連續(xù)地釋放其他量的藥物，以在延長的時間段內(nèi)保持這一水平的治療或預防效果。為了保持藥物在體內(nèi)的這一恒定水平，藥物必須以取代被代謝和從體內(nèi)排出的藥物的量的速率從劑型中釋放。可以通過各種條件對活性成分的受控釋放進行刺激，包括但不限于pH、離子強度、滲透壓、溫度、酶、水，以及其他生理條件或化合物。

各種已知的受控釋放或延長釋放的劑型、制劑和裝置可以適合于與本公開的鹽和組合物一起使用。實例包括但不限于在以下中描述的：美國專利號3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123、4,008,719、5674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556、5,733,566以及6,365,185B1；所述每篇專利均通過引用并入本文。使用例如羥丙基甲基纖維素、其他聚合物基質(zhì)、凝膠、可透膜、滲透系統(tǒng)(如(Alza Corporation,Mountain View,Calif.USA))或其組合，這些劑型可以用于提供一種或更多種活性成分的緩慢釋放或受控釋放，從而提供期望的不同比例的釋放曲線。

在一些實施方式中，除施用綴合物或包括所述綴合物的組合物之外，本文公開的治療方法包括向患者施用一種或更多種另外的抗癌療法。示例性抗癌療法包括但不限于外科手術(shù)、化學療法、放射療法、溫熱療法、免疫療法、激素療法、激光療法、抗血管生成療法，及其任何組合。

在一些實施方式中，所述方法包括向受試者共同施用綴合物和抗癌劑或化學治療劑。在本文中使用時，術(shù)語“共同施用”指向受試者施用兩種或更多種治療劑，其中所述兩種或更多種治療劑可以以相同或不同的藥物組合物，使用相同或不同的劑型(例如，口服施用、胃腸外施用、靜脈內(nèi)施用、肌內(nèi)施用、皮下施用、經(jīng)皮施用、氣道(氣溶膠)施用、肺施用、皮膚施用、局部施用、注射或瘤內(nèi)施用)施用，并且其中所述兩種或更多種治療劑可以在治療過程中同時或在不同時間(例如，同一小時內(nèi)的不同時間、同一天內(nèi)的不同時間、同一周內(nèi)的不同時間、同一月內(nèi)的不同時間)施用。在本文中使用時，術(shù)語“抗癌劑”指可以用于治療癌癥的任何化合物(包括它的類似物、衍生物、前藥和藥學上的鹽)或組合物。用于使用在本發(fā)明中的抗癌化合物包括但不限于拓撲異構(gòu)酶I和II抑制劑、烷化劑、微管抑制劑(例如，紫杉醇(taxol))和血管生成抑制劑。示例性抗癌化合物包括但不限于紫杉醇(紫杉醇(taxol))；多西他賽；吉西他濱；阿地白介素；阿侖單抗；阿利維甲酸；別嘌呤醇；六甲蜜胺；氨磷??；阿那曲唑；三氧化二砷；天冬酰胺酶；注射用卡介苗(BCG Live)；貝沙羅汀膠囊；貝沙羅汀凝膠；博來霉素；靜脈用白消安；口服白消安；卡普睪酮；卡倍他濱；鉑酸鹽；卡莫司??；具有卡莫司汀植入劑的聚苯丙生(carmustine with Polifeprosan Implant)；塞來昔布；苯丁酸氮芥；克拉屈濱；環(huán)磷酰胺；阿糖胞苷；阿糖胞苷脂質(zhì)體；達卡巴嗪；更生霉素；放線菌素D；阿法達貝泊?。蝗峒t霉素脂質(zhì)體；柔紅霉素、道諾霉素；地尼白介素(Denileukin diftitox)、右雷佐生；多西他賽；多柔比星；多柔比星脂質(zhì)體；屈他雄酮丙酸酯；Elliott’s B溶液；表柔比星；阿法依泊汀雌莫司??；磷酸依托泊苷；依托泊苷(VP-16)；依西美坦；非格司亭；氟尿苷(動脈內(nèi))；氟達拉濱；氟尿嘧啶(5-FU)；氟維司群；吉妥單抗奧唑米星；乙酸戈舍瑞林；羥基脲；替伊莫單抗；伊達比星；異環(huán)磷酰胺；甲磺酸伊馬替尼；干擾素α-2a；干擾素α-2b；伊立替康；來曲唑；甲酰四氫葉酸；左旋咪唑；洛莫司汀(CCNU)；二氯甲基二乙胺(氮芥)；乙酸甲地孕酮；美法侖(L-PAM)；巰基嘌呤(6-MP)；美司鈉；氨甲喋呤；甲氧沙林；絲裂霉素C；米托坦；米托蒽醌；苯丙酸諾龍；若莫單抗(Nofetumomab)；LOddC；奧普瑞白介素；帕米膦酸鹽(pamidronate)；培加酶；培門冬梅；乙二醇化非格司亭(Pegfilgrastim)；噴司他丁；哌泊溴烷；普卡霉素；光神霉素；卟吩姆鈉；丙卡巴肼；阿的平；拉布立酶；利妥昔單抗；沙格司亭；鏈脲菌素；替比夫定(talbuvidine)(LDT)；滑石；他莫昔芬；替莫唑胺；替尼泊苷(VM-26)；睪內(nèi)酯；硫鳥嘌呤(6-TG)；噻替派；拓撲替康；托瑞米芬；托西莫單抗；曲妥珠單抗；維A酸(ATRA)；烏拉莫司汀；戊柔比星；伐托他濱(monoval LDC)；長春花堿；長春瑞濱；唑來膦酸鹽；及其任何混合物。在一些實施方式中，抗癌劑是紫杉醇-碳水化合物綴合物，例如，紫杉醇-葡萄糖綴合物，如在美國專利號6,218,367中描述的，所述專利的內(nèi)容通過引用以其全部并入本文。

在一些實施方式中，抗癌劑是選自由以下組成的組的鉑酸鹽：順鉑、奧沙利鉑、卡鉑、鉑爾定、沙鉑及其任何組合。

在一些實施方式中，抗癌劑是免疫調(diào)節(jié)劑。這些實施方式的方法包括向受試者共同施用綴合物和免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方式中，在單獨的藥物組合物中并且在不同時間共同施用綴合物和免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方式中，在相同的藥物組合物中同時共同施用綴合物和免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑激活并且刺激針對癌細胞的免疫應(yīng)答。免疫調(diào)節(jié)劑可以使免疫應(yīng)答提高大于5％、10％、25％、50％、75％、90％、100％或更多。免疫調(diào)節(jié)劑可以使癌細胞數(shù)目和/或生長減少大于5％、10％、25％、50％、75％、90％、100％或更多。示例性免疫調(diào)節(jié)劑包括但不限于免疫細胞(例如，自然殺傷細胞、淋巴因子激活的殺傷細胞、細胞毒性T細胞和樹突細胞)、抗體(例如，抗PD-L1和抗PD-1抗體，抗CD52、抗VEGF-A、抗CD30、抗EGFR、抗CD33、抗CD20、抗CTLA4和抗HER-2抗體)，以及細胞因子(例如，干擾素和白介素)。在某些實施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑為抗PD-L1抗體、抗PD-1抗體，或其混合物。在某些示例性實施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑與脂質(zhì)綴合。

另外，所述治療方法可以進一步包括使用放射或放射療法。進一步，所述治療方法可以進一步包括使用外科手術(shù)治療。

在某些實施方式中，可以向患者施用有效劑量的本文描述的組合物一次。在某些實施方式中，可以向患者施用有效劑量的本文描述的組合物多次。對于全身性施用，可以施用受試者治療量的本文描述的組合物，如，例如0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg或更多。

在一些實施方式中，在初始治療方案之后，可以以較小的頻率基礎(chǔ)施用治療。例如，在兩周一次地治療三個月之后，可以每月一次重復治療，持續(xù)六個月或一年或更長的時間。根據(jù)本文描述的方法的治療可以使病癥的標志物或癥狀(例如腫瘤尺寸和/或生長)的水平減少至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％或更多。

本文描述的組合物的劑量可以由醫(yī)師確定，并且在必要時進行調(diào)整，以與觀察到的治療效果相稱。關(guān)于治療的持續(xù)時間和頻率，通常由熟練的臨床醫(yī)生來監(jiān)測受試者，以便確定所述治療何時提供治療益處，并且確定是否增加或減少劑量、增加或減少施用頻率、中止治療恢復治療，或者對治療方案進行其他改動。取決于一些臨床因素，給藥安排可以由每周一次至每天一次變化，所述臨床因素如受試者對本文描述的組合物的敏感性。期望的激活的劑量或量可以一次施用，或者分為亞劑量(例如，2-4個亞劑量)并且在一段時間內(nèi)施用(例如，以適合的時間間隔在一天內(nèi)施用或者根據(jù)其他適合的時間安排)。在一些實施方式中，施用可以是長期的(chronic)，例如，在數(shù)周或數(shù)月的時間段內(nèi)，每天一次或更多次給藥和/或治療。給藥和/或治療安排的實例是在1周、2周、3周、4周、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月或6個月，或更長的一段時間內(nèi)，每天一次、每天兩次、每天三次，或者每天四次或更多次施用。本文描述的組合物可以在一段時間內(nèi)施用，如在5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘或25分鐘的時間段內(nèi)施用。

根據(jù)本文描述的方法，用于施用本文描述的組合物的劑量范圍取決于例如本文描述的組合物的形式、它的效力，以及本文描述的病癥的癥狀、標志物或指標期望減小的程度(例如期望的腫瘤生長的減少百分率)。劑量不應(yīng)該太大而導致不良副作用。一般來說，劑量將隨著患者的年齡、病癥和性別而變化，并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。劑量還可以在發(fā)生任何并發(fā)癥時由醫(yī)生個人進行調(diào)整。

本文描述的組合物在例如本文描述的病癥或者誘導本文描述的應(yīng)答的治療中的功效可以由熟練的臨床醫(yī)生來確定。然而，在本文中使用術(shù)語“有效的治療”時，如果根據(jù)本文描述的方法在治療后，本文描述的病癥的體征或癥狀中的一個或更多個被以有益的方式改變，其他臨床上接受的癥狀有所改進(improved)或者甚至得到改善(ameliorated)，或者誘導至少10％的期望的應(yīng)答，治療才被認為是“有效的治療”。例如，通過測量根據(jù)本文描述的方法治療的病癥的標志物、指標、癥狀和/或發(fā)病率，或者任何其他可測量的適合的參數(shù)，例如腫瘤尺寸和/或生長，可以對功效進行評估。也可以通過經(jīng)住院治療評估為惡化，或者需要醫(yī)療干預(即，疾病的進展停頓)的個體的失敗來測量功效。測量這些指標的方法時本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的和/或在本文中進行描述。治療包括任何對個體或動物(一些非限制性實例包括人或動物)中的疾病的治療，并且包括：(1)抑制疾病，例如，阻止癥狀(例如，疼痛或炎癥)惡化；或者(2)減輕疾病的嚴重程度，例如，導致癥狀衰退(regression)。在本文中使用該術(shù)語時，用于治療疾病的有效量意思是當基于需要治療疾病的受試者時，足以導致對所述疾病有效的治療的量。試劑的功效可以通過評估病癥的物理指標或者期望的應(yīng)答(例如腫瘤尺寸和/或生長)來確定。通過測量這樣的參數(shù)中的任何一個或者參數(shù)的任何組合來監(jiān)測施用和/或治療的功效在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。可以在罹患本文描述的病癥的動物模型中評估(例如治療癌癥的)功效。當使用實驗動物模型時，在觀察到統(tǒng)計學上顯著的標志物變化(例如腫瘤尺寸和/生長下降)時，治療的功效即得到證實。

本文提供允許對本文描述的給定劑量的組合物進行評估的體外和動物模型試驗。通過非限制性實例方式，可以通過體外細胞活力試驗來評估某劑量的組合物的效果。用于這樣的試驗的實驗流程的非限制性實例如下：使細胞(例如癌細胞系)與本文描述的組合物接觸，并且使用細胞活力試劑，例如CellTiter 96Aqueous One Solution reagents(PROMEGA,WI)在一個或更多個時間點測定活力。

也可以在動物模型，例如，在本文的實施例中描述的卵巢癌的小鼠模型中評估給定劑量的功效。簡單地說，可以經(jīng)由囊內(nèi)遞送攜帶腺病毒的Cre重組酶在K-Ras ^LSL/+/Pten^fl/fl小鼠中誘導卵巢惡性腺瘤。一旦小鼠形成中等腫瘤至大腫瘤時，可以例如經(jīng)由尾靜脈注射向它們施用本文描述的組合物?？梢赃M行腫瘤成像和/或處死小鼠。

細胞攝取分子到細胞中通常通過內(nèi)吞作用，所述內(nèi)吞作用是由網(wǎng)格蛋白小窩或細胞膜穴樣內(nèi)陷(caveolae)介導的。細胞膜穴樣內(nèi)陷是質(zhì)膜的特化內(nèi)陷(invaginations)，主要由稱為小窩蛋白的蛋白組成，在許多生化和細胞過程中具有關(guān)鍵作用。小窩蛋白1(CAV1)是細胞膜穴樣內(nèi)陷的重要成分，參與內(nèi)吞轉(zhuǎn)運。細胞膜穴樣內(nèi)陷也與藥物攝取到細胞相關(guān)。自組裝的超分子顆粒與細胞膜穴樣內(nèi)陷的相關(guān)性可以輔助它們攝取到細胞，促進在癌細胞中的治療性干預。本發(fā)明提供了用于預測癌癥患者對自組裝的超分子顆粒表現(xiàn)出比對鉑酸鹽和紫杉烷更好的應(yīng)答的似然度的方法。所述方法涉及確定基因產(chǎn)物的表達水平，所述基因產(chǎn)物與對用自組裝的超分子顆粒的治療的應(yīng)答能力，預測對于自組裝的超分子顆粒更高的有效負荷藥物的內(nèi)部化以及更好的治療功效相關(guān)聯(lián)。

因此，本公開還提供了一種預測癌癥患者對自組裝的超分子顆粒表現(xiàn)出比對鉑酸鹽和紫杉烷更好的應(yīng)答的似然度的方法。通常，所述方法包括：(a)測定從患者獲得的腫瘤樣品中EEA1、SRSF5、SMAD2、SNX3、PLCD1、OSBP、DNM1、DNM2、DNM3、SGK3、FAPP1、SMAD7、SMURF2、NEDD4、PRKCA、CDH-1、LDLR、CP、CD36、LYN、FLOT-1、FLOT-2、CA4、APOE、CAV1、CAV2、CAV3、LMAN2、LAT和STOM的表達水平；以及(b)預測患者會表現(xiàn)出陽性應(yīng)答的似然度，其中：選自CAV1、CAV2、CAV3、LDLR、SMAD7、SMURF2、NEDD4、PRKCA的一個或更多個基因的增加的表達水平與對包括自組裝的超分子顆粒的治療的陽性應(yīng)答的似然度正相關(guān)。一個或更多個基因的增加的表達水平可以與參照或?qū)φ粘杀壤?。例如，在非癌細胞中的表達水平。

在本文中使用時，術(shù)語“測定(assay)”或“測定(assaying)”指對樣品中的組分進行定量或定性分析。所述術(shù)語包括實驗室或臨床觀察，和/或測量樣品中組分的水平。

在本文中使用時，術(shù)語“表達水平”指對表達產(chǎn)物或基因產(chǎn)物的定性或定量測定。表達水平可以針對基因的RNA表達水平或針對基因的多肽表達水平來測定。在本文中使用時，術(shù)語“歸一化的(normalized)”表達水平指應(yīng)答指示基因的表達水平相對于一個或多個參照基因的表達產(chǎn)物(可能是樣品中所有經(jīng)測量的表達產(chǎn)物、單個參照表達產(chǎn)物，或者特定組的表達產(chǎn)物)的水平。當表達產(chǎn)物的表達水平在第一樣品中(如在腫瘤中)比在第二樣品(如正常細胞或非腫瘤細胞)中更高時，基因表現(xiàn)出“增加的表達水平”。類似地，當表達產(chǎn)物的正?；磉_水平在第一樣品中比在第二樣品中高時，基因表現(xiàn)出“增加的正?；磉_水平”。

在本文中使用時，術(shù)語“參照基因”指可以使用其表達水平來比較基因產(chǎn)物在待測樣品中的表達水平的基因。在本發(fā)明的實施方式中，參照基因包括管家基因，如β-球蛋白、乙醇脫氫酶或任何其他基因，其表達水平不會跟著包含該基因的細胞的疾病狀態(tài)而改變。在另一個實施方式中，所有的測定基因或其大子集可以作為參照基因。

在本文中使用時，術(shù)語“表達產(chǎn)物”或“基因產(chǎn)物”指基因的RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(轉(zhuǎn)錄物)，包括mRNA，以及這樣的RNA轉(zhuǎn)錄物的多肽翻譯產(chǎn)物。表達產(chǎn)物可以是，例如，未剪接的RNA、mRNA、剪接變體mRNA、微小RNA、片段RNA、多肽、翻譯后修飾多肽、剪接變體多肽等。

在本文中使用時，術(shù)語“測量(measuring)”指進行確定樣品中組分的尺寸、數(shù)量或能力的物理行為。

在本文中使用時，術(shù)語“微陣列”指雜交陣列要素，例如，寡核苷酸或多核苷酸探針在底物上的有序排列。

術(shù)語“多核苷酸”一般指可以是任何未修飾的RNA或DNA或者修飾的RNA或DNA的多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸。因此，例如，在本文中使用時，多核苷酸包括但不限于單鏈和雙鏈DNA、包括單鏈和雙鏈區(qū)域的DNA、單鏈和雙鏈RNA，以及包括單鏈和雙鏈區(qū)域的RNA；包括DNA和RNA的雜交分子，所述雜交分子可以為單鏈或更通常為雙鏈DNA和RNA，或者包括單鏈和雙鏈區(qū)域。另外，在本文中使用時，術(shù)語“多核苷酸”指包括RNA或DNA或者RNA和DNA兩者的三鏈區(qū)域。這樣的區(qū)域中的鏈可以來自同一分子或者來自不同分子。所述區(qū)域可以包括一個或更多個所述分子中的所有，但是更通常僅包含所述分子中的一些區(qū)域。具有三螺旋區(qū)域的分子中的一個通常為寡核苷酸。術(shù)語“多核苷酸”還包括DNA(包括cDNA)和RNA，以及包含一個或更多個修飾堿基的那些DNA和RNA。因此，其中為了穩(wěn)定或出于其他原因，具有修飾骨架的DNA或RNA為在本文中使用的術(shù)語“多核苷酸”。而且，包括不常見堿基(如肌苷)或修飾堿基(如含氚堿基)的DNA或RNA包括在本文中使用的術(shù)語“多核苷酸”的范圍內(nèi)。通常，術(shù)語“多核苷酸”涵蓋所有化學、酶促和/或代謝方式修飾形式的或未修飾的多核苷酸，以及病毒和細胞(包括簡單和復雜細胞)特性的DNA和RNA的化學形式。

術(shù)語“寡核苷酸”指相對短的多核苷酸，包括但不限于單鏈脫氧核苷酸、單鏈或雙鏈核糖核苷酸、RNA/DNA雜交以及雙鏈DNA。寡核苷酸(如單鏈DNA探針寡核苷酸)通常通過化學方法合成，例如使用可商購的自動化寡核苷酸合成儀。然而，寡核苷酸可以通過各種其他方法來制成，包括體外重組DNA-介導的技術(shù)，以及通過在細胞和生物體中表達DNA。

在本文中使用時，術(shù)語“引物”或“寡核苷酸引物”指當置于誘導引物延伸產(chǎn)物合成的條件下時，例如，在核苷酸和聚合誘導劑(如DNA或RNA聚合酶)的存在下并且在適合的溫度、pH、金屬離子濃度和鹽濃度下，用于啟動互補的核酸鏈的合成的寡核苷酸。引物一般具有與它們在引物延伸產(chǎn)物的合成中的用途相匹配的長度，并且長度可以在約8個核苷酸和約100個核苷酸之間的范圍內(nèi)，如約10nt至約75nt、約15nt至約60nt、約15nt至約40nt、約18nt至約30nt、約20nt至約40nt、約21nt至約50nt、約22nt至約45nt、約25nt至約40nt等，例如，長度在約18nt和約40nt之間，在約20nt和約35nt之間，在約21和約30nt之間的范圍內(nèi)，包括兩端，以及在所敘述的范圍之間的任何長度。引物長度可以在約10-50個核苷酸之間的范圍內(nèi)，如約15-45nt、約18-40nt、約20-30nt、約21-25nt等，以及在所敘述的范圍之間的任何長度。在一些實施方式中，引物長度不超過約10、12、15、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65或70個核苷酸。在該上下文中，術(shù)語“約”可以解釋為意思是在5′或3′從任一個終點或從兩個終點多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個核苷酸。

為了擴增的最大效率，在許多實施方式中，引物是單鏈的，但是也可以可選地為雙鏈的。如果為雙鏈的，在許多實施方式中，引物在用于制備延伸產(chǎn)物之前首先被處理以分開它的鏈。該變性步驟通常是通過加熱來實現(xiàn)的，但是可以可選地使用堿，接著中和來實施。因此，“引物”與模板互補，并且通過氫鍵與模板復合或與模板雜交，以產(chǎn)生用于啟動由聚合酶進行的合成的引物/模板復合物，這是通過在其3′端共價添加堿基來延伸的。

在本文中使用時，“引物對”指具有適合于對靶核酸進行基于核酸的擴增的核酸序列的第一和第二引物。這樣的引物對一般包括第一引物和第二引物，所述第一引物具有的序列與靶核酸的第一部分的序列相同或類似，所述第二引物具有的序列與靶核酸的第二部分的序列互補，以提供靶核酸或其片段的擴增。本文對于“第一”和“第二”引物的提及是任意的，除非另外明確指出。例如，第一引物可以被指定為“正向引物”(其從靶核酸的5′端啟動的核酸合成)或者被指定為“反向引物”(其從由正向引物啟動的合成生成的延伸引物的5′端啟動核酸合成)。同樣，第二引物可以被指定為正向引物或反向引物。

在本文中使用時，術(shù)語“探針”或“寡核苷酸探針”在本文中可互換地使用，指包括如上文定義的多核苷酸的結(jié)構(gòu)，其包含與靶核酸分析物(例如，核酸擴增產(chǎn)物)中存在的核酸序列互補的核酸序列。探針的多核苷酸區(qū)域可以由DNA和/或RNA，和/或合成寡核苷酸類似物。探針一般具有與它們在對靶核酸的靶序列的全長或一部分的特異性檢測中的用途相匹配的長度，并且在許多實施方式中在約8nt和約100nt之間的范圍內(nèi)，如長度為約8至約75nt、約10至約74nt、約12至約72nt、約15至約60nt、約15至約40nt、約18至約30nt、約20至約40nt、約21至約50nt、約22至約45nt、約25至約40nt等，例如，長度在約18-40nt、約20-35nt或約21-30之間的范圍內(nèi)，以及在所敘述的范圍之間的任何長度。在一些實施方式中，探針長度在約10-50個核苷酸之間的范圍內(nèi)，如約15-45、約18-40、約20-30、約21-28、約22-25等，以及在所敘述的范圍之間的任何長度。在一些實施方式中，探針長度不超過約10、12、15、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65或70個核苷酸。在該上下文中，術(shù)語“約”可以解釋為意思是在5′或3′從任一個終點或從兩個終點多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個核苷酸。

在一些實施方式中，人們可以測定基因產(chǎn)物，以用于測量基因的表達水平。在一些實施方式中，一個或更多個基因的表達水平是對應(yīng)的一個或多個基因的RNA轉(zhuǎn)錄物的水平。在本文中使用時，術(shù)語“RNA轉(zhuǎn)錄物”指基因的RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，包括，例如，mRNA、未剪接的RNA、剪接變體mRNA、微小RNA和片段RNA。

用于測定基因表達水平的樣品可以是來自受試者的任何期望的生物樣品。在本文中使用時，術(shù)語“生物樣品”指從生物機體取得或分離的樣品，例如，細胞裂解產(chǎn)物、來自受試者的組織樣品勻漿。術(shù)語“生物樣品”還包括未處理或預處理(pre-treated)(或預加工(pre-processed))的生物樣品。在一些實施方式中，生物樣品可以是組織樣品、生物體液，包括但不限于血液(包括全血、血漿、臍帶血和血清)、泌乳產(chǎn)物(例如，乳汁)、羊水、痰、唾液、尿、精液、腦脊液、支氣管吸出物(bronchial aspirate)、汗液、粘液、液化糞便、滑液、淋巴液、眼淚、氣管吸出物，及其部分。在其他實施方式中，生物樣品可以包括細胞裂解產(chǎn)物或其部分。例如，可以收集細胞并裂解以獲得細胞裂解產(chǎn)物。在一些實施方式中，樣品來自切除、活檢或芯針活檢。另外，可以使用細針吸出物樣品。樣品可以是石蠟包埋的或者冷凍組織。在一些實施方式中，樣品是經(jīng)固定、石蠟包埋的組織樣品。

在一些實施方式中，樣品可以是腫瘤樣品。例如，腫瘤樣品可以是活檢樣品，或來自腹液的細胞，或來自胸膜積液的細胞。

在本文中使用時，術(shù)語“腫瘤”指所有的贅生性細胞生長和增殖，無論是惡性的還是良性的，以及所有的癌前細胞和癌細胞以及癌前組織和癌組織。在本文中使用時，術(shù)語“腫瘤細胞”指從癌細胞系或癌癥患者獲得的癌細胞。該術(shù)語包含從腫瘤組織樣品(例如，從外科手術(shù)切除獲得的組織以及從活檢(如例如，芯活檢或細針活檢)獲得的組織)獲得的腫瘤細胞。術(shù)語“腫瘤細胞”還包含從原發(fā)性腫瘤之外的位點獲得的腫瘤細胞，例如循環(huán)腫瘤細胞。該術(shù)語進一步包含為患者腫瘤細胞的子代的細胞，例如，來自原發(fā)性腫瘤細胞或循環(huán)腫瘤細胞的細胞培養(yǎng)物樣品。該術(shù)語進一步包含可以包括從體內(nèi)腫瘤細胞流出(shed)的蛋白或核酸材料的樣品，例如，骨髓、血液、血漿、血清等。該術(shù)語還包含在其獲得步驟之后已針對腫瘤細胞濃縮或進行其他操作的樣品，以及包括從患者腫瘤材料獲得的多核苷酸和/或多肽的樣品。

生物樣品可以是臨床樣品。“臨床樣品”是來自人類受試者的樣品。生物樣品也可以被稱為“受試者樣品”。待測生物樣品是已成為分析、檢測或觀察對象的樣品。對照生物樣品可以是用于待測生物樣品的陽性或陰性對照。通常，對照生物樣品包含與待測生物樣品的組織、細胞和生物體液相同類型的組織、細胞和生物體液。樣品可以是通過除去來自受試者的細胞樣品來獲得，但是也可以通過使用先前分離的細胞來完成。另外，生物樣品可以是新鮮收集的或者先前收集的樣品。

在一些實施方式中，待測樣品或生物樣品可以是冷凍生物樣品，例如，冷凍組織或細胞。冷凍樣品可以在使用本發(fā)明的方法、試驗和系統(tǒng)之前進行解凍。在解凍之后，冷凍樣品可以在進行本文公開的試驗之前進行離心。

在一些實施方式中，生物樣品可以是在聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)之后擴增的核酸產(chǎn)物。核酸產(chǎn)物(如DNA、RNA和mRNA)可以是使用本領(lǐng)域公知的一些步驟中的任一種從特定生物樣品分離的，所選擇的特定分離步驟適合于所述特定生物樣品。分離和分析如上文描述的核酸變體的方法時本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且可以在例如Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第3版,Sambrook和Russel,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001中找到。

在一些實施方式中，可以用化學和/或生物試劑來處理待測樣品或生物樣品?？梢允褂没瘜W和/或生物試劑來在處理期間保護和/或保持樣品包括其中的生物分子(例如，核酸和蛋白)的穩(wěn)定性。一種示例性試劑是蛋白酶抑制劑，所述蛋白酶抑制劑一般用于在處理期間保護或保持蛋白的穩(wěn)定性。另外，或可選地，可以使用化學和/或生物試劑來從樣品釋放核酸或蛋白。

在一些實施方式中，測定或測量腫瘤細胞或腫瘤樣品的一種或多種指示基因產(chǎn)物的表達水平。腫瘤樣品可以例如經(jīng)由活檢從實體瘤獲得，或者從實施的去除腫瘤的外科手術(shù)中獲得；或者從包含癌細胞的組織或體液獲得。在本發(fā)明的實施方式中，腫瘤細胞或腫瘤樣品是從上皮來源的腫瘤獲得的。在本發(fā)明的另一個實施方式中，腫瘤細胞是乳腺、結(jié)腸、非小細胞肺、腎、卵巢、前列腺或黑素瘤腫瘤細胞。在另一個實施方式中，腫瘤樣品是從患有乳腺癌、結(jié)腸癌、非小細胞肺癌、腎癌、卵巢癌、前列腺癌或黑素瘤的患者獲得的。

基因表達譜分析方法包括基因?qū)Χ嗪塑账岬碾s交分析的方法，基因?qū)Χ嗪塑账釡y序的方法，以及基于蛋白質(zhì)組學的方法。本領(lǐng)域已知的用于對樣品中mRNA表達進行定量的示例性方法包括RNA雜交和原位雜交(Parker和Barnes,Methods in Molecular Biology 106:247-283(1999))；核糖核酸酶保護測定法(Hod,Biotechniques 13:852-854(1992))；以及基于PCR的方法，如逆轉(zhuǎn)錄PCT(RT-PCR)(Weis等,Trends in Genetics8:263-264(1992))?？梢允褂每贵w，所述抗體可以識別序列特異性的雙鏈體，包括DNA雙鏈體、RNA雙鏈體，以及DNA-RNA雜交雙鏈體或DNA-蛋白雙鏈體。用于基于測序的基因表達分析的代表性方法包括基因表達系列分析(SAGE)，以及通過大規(guī)模平行測序技術(shù)(MPSS)進行的基因表達分析。

在一些實施方式中，使用定量的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR或qPCR)來測定一個或更多個基因的RNA轉(zhuǎn)錄物的水平?；谧铎`敏且最靈活的定量PCR的基因表達譜分析方法中的一種是RT-PCR，其可以用于比較在正常和腫瘤組織中不同樣品群體中的mRNA水平，以表征基因表達的模式，從而區(qū)別緊密相關(guān)的mRNA，并且分析RNA結(jié)構(gòu)。

第一步是從靶樣品分離mRNA。起始材料通常是分別從腫瘤或腫瘤細胞系以及對應(yīng)的正常組織或細胞系分離的總RNA。因此，RNA可以從各種原發(fā)性腫瘤，包括乳腺、肺、結(jié)腸直腸、前列腺、腦、肝、腎、胰腺、脾、胸腺、睪丸、卵巢、子宮等、腫瘤、或腫瘤細胞系，與來自健康供體的庫DNA分離。如果mRNA的來源是原發(fā)性腫瘤，則可以例如從冷凍或保存的石蠟包埋和固定(例如福爾馬林固定)的組織樣品提取mRNA。

用于mRNA提取的一般方法時本領(lǐng)域公知的，并且公開在分子生物學標準教材中，包括Ausubel等,Current Protocols of Molecular Biology,John Wiley and Sons(1997)。用于從石蠟包埋的組織中提取RNA的方法公開在，例如，Rupp和Locker,Lab Invest.56:A67(1987)，以及De Andres等,BioTechniques 18:42044(1995)中。特別是，可以使用來自商業(yè)制造商(如Qiagen)的純化試劑盒、緩沖液組和蛋白酶，根據(jù)制造商的說明書來進行RNA分離。例如，來自培養(yǎng)物中的細胞的總RNA是使用Qiagen RNeasy微型柱(mini-column)來分離的。其他可商購的RNA分離試劑盒包括MasterPure^TMRNA純化試劑盒(Madison,WT)，以及石蠟塊RNA分離試劑盒(Paraffin Block RNA Isolation Kit)(Ambion,Inc.)。來自組織樣品的總RNA可以使用RNA Stat-60(Tel-Test)來分離。從腫瘤制備的RNA可以，例如，通過氯化銫密度梯度離心來分離。

因為RNA不能用作PCR的模板，所以通過RT-PCR進行的基因表達譜分析中的第一步是將RNA目標逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，接著是它在PCR反應(yīng)中的指數(shù)式擴增。兩種最常使用逆轉(zhuǎn)錄酶是avilo成髓細胞瘤病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(AMV-RT)和莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(MMLV-RT)。逆轉(zhuǎn)錄步驟通常是使用特異性引物、隨機六聚體或oligo-dT引物作為引物的，這取決于表達譜分析的環(huán)境和目標。例如，可以使用GeneAmp RNA PCR試劑盒(Perkin Elmer,CA,USA)，根據(jù)制造商的說明書對提取RNA進行逆轉(zhuǎn)錄。然后，可以在隨后的PCR反應(yīng)中使用所得到的cDNA作為模板。

盡管PCR步驟可以使用各種熱穩(wěn)定的DNA依賴性DNA聚合酶，但是所述PCR步驟通常使用Taq DNA聚合酶，其具有5'-3'核酸酶活性但是沒有3'-5'校正核酸內(nèi)切酶活性。因此，PCR通常使用Taq或Tth聚合酶的5'-核酸酶活性，以雜交結(jié)合到其靶擴增子的雜交探針，但是可以使用具有同等5'核酸酶活性的任何酶。使用兩個寡核苷酸引物來生成PCR反應(yīng)特有的擴增子。第三個寡核苷酸或探針被設(shè)計來檢測位于兩個PCR引物之間的核苷酸序列。該探針是不能由Taq聚合酶延伸的，并且標記有報告熒光染料和淬滅熒光染料。當它們在探針上時，如果兩個染料緊密定位在一起，則激光誘導的從報告染料的發(fā)射被淬滅染料淬滅。在擴增反應(yīng)期間，Taq DNA聚合酶以模板依賴性方式裂解探針。所得到的探針片段在溶液中分離，并且來自釋放的報告染料的信號不受第二個熒光團的淬滅作用的影響。針對每個合成的新分子放出報告染料的一個分子，并且對未淬滅的報告染料的檢測提供了對數(shù)據(jù)定量解釋的基礎(chǔ)。

RT-PCR可以使用可商購的設(shè)備來進行，如例如，ABI PRISM 7700^TM序列檢測系統(tǒng)^TM(Perkin-Elmer-Applied Biosystems,Foster City,CA,USA)，或者Lightcycler(Roche Molecular Biochemicals,Mannheim,Germany)。在優(yōu)選實施方式中，5'核酸酶程序是在實時定量PCR裝置(如ABI PRISM 7700^TM序列檢測系統(tǒng)^TM)上運行的。該系統(tǒng)由熱循環(huán)儀、激光、電荷耦合裝置(CCD)、照相機和計算機組成。該系統(tǒng)以96孔格式在熱循環(huán)儀上擴增樣品。在擴增期間，通過光纖電纜對所有的96孔實時收集激光誘導的熒光信號，并且在CCD上檢測。該系統(tǒng)包括用于運行儀器并且用于分析數(shù)據(jù)的軟件。

5'-核酸酶試驗數(shù)據(jù)初始被表達為Ct，或者閾值循環(huán)。如上文討論的，在每個循環(huán)期間記錄熒光值，并且所述熒光值代表擴增反應(yīng)中那一時點所擴增的產(chǎn)物的量。當熒光信號最初被記錄為統(tǒng)計學上顯著的時，該點為閾值循環(huán)(C_t)。為了最小化誤差和樣品-與-樣品變化效應(yīng)，通常使用內(nèi)參來進行RT-PCR。理想的內(nèi)參在不同組織間以恒定水平上表達，并且不受實驗處理的影響。最常使用來歸一化基因表達模式的RNA是管家基因甘油醛-3-磷酸-脫氫酶(GAPDH)和β-肌動蛋白的mRNA。

RT-PCR技術(shù)的較新的變化是實時定量PCR，其通過雙標記的熒光生成探針(即，探針)來測量PCR產(chǎn)物積累。實時PCR與其中為歸一化使用用于每個靶序列的內(nèi)部競爭劑(competitor)的定量競爭PCR，以及使用包含在樣品內(nèi)的歸一化基因或用于RT-PCR的管家基因的定量競爭PCR都相容。對于進一步的細節(jié)，參見，例如，Held等,Genome Research 6:986-994(1996).b.Mass ARRA Y System。

在由Sequenom,Inc.(San Diego,CA)開發(fā)的基于MassARRAY的基因表達譜分析方法中，在RNA分離和逆轉(zhuǎn)錄之后，所獲得的cDNA中摻入(spiked)合成DNA分子(競爭劑)，除了單個堿基，所述合成DNA分子在所有位置中均與靶cDNA區(qū)域匹配，并且用作內(nèi)參。cDNA/競爭劑混合物是PCR擴增的并且經(jīng)受PCR后的蝦堿性磷酸酶(SAP)酶處理，這導致其余的核苷酸的脫磷酸作用。在堿性磷酸酶失活之后，來自競爭劑和cDNA的PCR產(chǎn)物進行引物延伸，這針對競爭劑-和cDNA-來源的PCR產(chǎn)物生成不同的質(zhì)量信號。在純化之后，將這些產(chǎn)物分發(fā)在芯片陣列上，所述芯片陣列于裝載有用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)分析進行分析所需要的組分。然后，通過分析所生成的質(zhì)譜中的峰面積之比來對反應(yīng)中存在的cDNA進行定量。對于進一步的細節(jié)，參見，例如，Ding和Cantor,Proc.Natl.Acad.Sd.USA 100:3059-3064(2003)。c.其他的基于PCR的方法(進一步的基于PCR的技術(shù))包括，例如，差別顯示(Liang和Pardee,Science 257:967-971(1992))；擴增片段長度多態(tài)性(iAFLP)(Kawamoto等,Genome Res.12:1305-1312(1999))；BeadArray^TM技術(shù)(Illumina,San Diego,CA；Oliphant等,Discovery of Markers for Disease(Supplement to Biotechniques),2002年6月；Ferguson等,Analytical Chemistry 72:5618(2000))；用于檢測基因表達的BeadsArray(BADGE)，在對基因的快速測定中使用可商購的Luminex¹⁰⁰LabMAP系統(tǒng)和多個顏色編碼的微球(Luminex Corp.,Austin,TX)(Yang等,Genome Res.11:1888-1898(2001))；以及高覆蓋表達譜分析(HiCEP)分析法(Fukumura等,Nucl Acids.Res.31(16)e94(2003))。

也可以使用微陣列技術(shù)來識別或確認差別基因表達。因此，可以使用微陣列技術(shù)在新鮮的或石蠟包埋的腫瘤組織中測量乳腺癌相關(guān)的基因的表達譜，通過該方法，感興趣的多核苷酸序列(包括cDNA和寡核苷酸)被電鍍或排列在微芯片底物上。然后，排列好的序列與來自感興趣的細胞或組織的特異性DNA探針雜交。正如在RT-PCR方法中一樣，niRNA的來源通常是從人腫瘤或腫瘤細胞系，以及對應(yīng)的正常組織或細胞系分離的全RNA。因此，可以從各種原發(fā)性腫瘤或腫瘤細胞系分離RNA。如果mRNA的來源為原發(fā)性腫瘤，則可以例如從在日常臨床實踐中例行制備和保存的冷凍或存檔的石蠟包埋和固定(例如福爾馬林固定)的組織樣品提取mRNA。

在微陣列技術(shù)的具體實施方式中，向密集陣列中的底物施加PCR擴增的cDNA克隆插入物。優(yōu)選地，向底物施加至少10,000個核苷酸序列。微陣列基因(每個陣列以10,000個要素固定在微陣列上)適合于在嚴格條件下的雜交?？梢酝ㄟ^并入熒光核標定苷酸，通過對從感興趣的組織提取的RNA的逆轉(zhuǎn)錄來生成熒光標記的cDNA探針。施加到芯片的標記的cDNA以特異性雜交到陣列上的每個DNA斑點(spot)。在嚴格洗滌以除去非特異性結(jié)合的探針之后，通過共聚焦激光顯微或者通過另一種檢測方法(如CCD照相機)來掃描該芯片。對每個排列好的要素的雜交的定量允許對對應(yīng)的mRNA豐度的評估。對于雙色熒光，由兩種來源的RNA生成的單獨標記的cDAN探針成對地雜交到陣列。因此，同時確定來自對應(yīng)于每個指定基因的兩個來源的轉(zhuǎn)錄物的相對豐度。小型化規(guī)模的雜交提供對大量基因的表達模式的方便和快速的評估。這樣的方法已被示出為具有檢測以每個細胞幾個副本的水平表達的稀有轉(zhuǎn)錄物所需要的靈敏度，以及以可再生產(chǎn)地方式檢測表達水平的至少大約兩倍區(qū)別(Schena等,Proc.Natl.Acad.ScL USA 93(2):106-149(1996))?？梢酝ㄟ^可商購的設(shè)備，根據(jù)制造商的實驗流程來進行微陣列分析，如通過使用Affymetrix GenChip技術(shù)，或者Incyte's微陣列技術(shù)。

用于基因表達的大規(guī)模分析的微陣列技術(shù)的發(fā)展使得系統(tǒng)地搜索癌癥分類的分子標志物以及在各種腫瘤類型中進行結(jié)果預測成為可能。4.基因表達系列分析(SAGE)。

基因表達系列分析(SAGE)是允許對大量基因轉(zhuǎn)錄物進行同時的和定量的分析，而不需要針對每個轉(zhuǎn)錄物提供各個雜交探針的方法。首先，生成包含唯一地識別轉(zhuǎn)錄物的足夠的信息短序列標簽(約10-14bp)，條件是所述標簽從每個轉(zhuǎn)錄物內(nèi)的唯一位置獲得。然后，將許多轉(zhuǎn)錄物連接在一起以形成可以進行測序的長系列分子，從而同時揭示多個標簽的身份?？梢酝ㄟ^確定各個標簽的豐度，并且識別對應(yīng)于每個標簽的基因來定量評估任何轉(zhuǎn)錄物群體的表達模式。對于更多細節(jié)，參見，例如，Velculescu等,Science 270:484-487(1995)；以及Velculescu等,Cell 88:243-51(1997)。

在Brenner等,Nature Biotechnology 18:630-634(2000)中描述了通過大規(guī)模平行測序技術(shù)(MPSS)進行基因表達分析。該方法是結(jié)合了基于非凝膠的特征測序技術(shù)的測序方法，其中在單獨的5μm直徑的微珠上對數(shù)百萬模板的體外進行克隆。首先，通過體外克隆構(gòu)建DNA模板的微珠文庫。之后接著在流動池中以高密度(通常超過3x 10⁶個微珠/cm²)對包含模板的微珠的平面陣列的進行組裝。使用不需要DNA片段分離的基于熒光的特征測序方法，同時對每個微珠上的克隆模板的自由端進行分析。該方法已被示出在單次操作中同時并且準確地提供來自酵母cDNA文庫的數(shù)十萬基因特征序列。

免疫組織化學方法也適合于檢測基因的表達水平。因此，使用對每個標志物特異的抗體或抗血清，優(yōu)選地多克隆抗血清，以及最優(yōu)選地單克隆抗體來檢測表達。可以通過，例如，用放射性標記、熒光標記、半抗原標記(如生物素)或酶(如辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)直接標記抗體自身來檢測抗體?？蛇x地，未標記的一級抗體連同包括對所述一級抗體特異的抗血清、多克隆抗血清或單克隆抗體的標記的二級抗體一起使用。免疫組織化學實驗流程和試劑盒是本領(lǐng)域公知的并且是可商購的。

為了使由于樣品中的非生物變化的表達測量變化，例如，要測量的表達產(chǎn)物的量和質(zhì)量最小化，可以相對于針對一個或更多個參照基因獲得的平均表達水平數(shù)據(jù)，對針對基因產(chǎn)物測量的原始表達水平數(shù)據(jù)(例如，由qRT-PCR獲得的循環(huán)閾值(Ct)測量)進行歸一化。參照基因的實例包括管家基因，如GAPDH?？蛇x地，所有的測定基因或其大子集也可以同時用作參照基因，并且可以基于所有的測定基因或其大子集的平均或中值信號(Ct)進行歸一化(通常稱為“整體歸一化”方法)。在一個基因一個基因(gene-by-gene)的基礎(chǔ)上，所測量的歸一化的患者腫瘤mRNA的量可以與癌組織參照組中發(fā)現(xiàn)的量相比較。參見例如Cronin,M.等,Am.Soc.Investigative Pathology 164:35-42(2004)。歸一化可以這樣進行，從而在歸一化的基因產(chǎn)物表達水平方面一個單位的增加一般反映在樣品中存在的表達產(chǎn)物中的數(shù)量方面2倍的增加。對于有關(guān)適用于來自腫瘤組織的qRT-PCR數(shù)據(jù)的歸一化技術(shù)的進一步的信息，參見例如Silva,S.等(2006)BMC Cancer 6,200；deKok,J.等(2005)Laboratory Investigation 85,154-159。

用于使用在本文公開的方法中的材料適合于根據(jù)公知的步驟生產(chǎn)的試劑盒的制備。因此，本公開提供包括如下試劑的試劑盒，所述試劑可以包括用于定量所公開的基因的表達的基因特異性或基因選擇性探針和/或引物。這樣的試劑盒可以任選地包含用于從腫瘤樣品，特別是經(jīng)固定的石蠟包埋的組織樣品中提取RNA的試劑，和/或用于RNA擴增的試劑。另外，所述試劑盒可以任選地包括如下一種或多種試劑，所述一種或多種試劑具有標識性描述或標記，或者涉及它們在本發(fā)明的方法中的效用的說明書。所述試劑盒可以包括容器(包括適合于使用在所述方法的自動化實施中的微升板)，每個具有所述方法中使用的各種試劑(通常以濃縮形式)中的一種或更多種，包括，例如，預先裝配的微陣列、緩沖液、適合的核苷酸三磷酸(例如，dATP、dCTP、dGTP和dTTP；或rATP、rCTP、rGTP和UTP)、逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶，以及本發(fā)明的一個或更多個探針和引物(例如，連接到與RNA聚合酶反應(yīng)的啟動子的適合長度的poly(T)或隨機引物)。適合地，用來估算或量化預后或預測信息的數(shù)學算法也是試劑盒的潛在組成部分。

本文描述的方法和系統(tǒng)可以以許多方式實施。在一個實施方式中，所述方法涉及通信基礎(chǔ)設(shè)施(例如，互聯(lián)網(wǎng))的使用。下文討論本發(fā)明的若干實施方式。本發(fā)明也可以以各種形式的硬件、軟件、固件、處理器或其組合來實施。本文描述的方法和系統(tǒng)可以實施為硬件和軟件的組合。軟件可以實施為可觸知地呈現(xiàn)在程序儲存裝置上的應(yīng)用程序，或者在用戶計算環(huán)境中(例如，作為小應(yīng)用程序(applet))以及在審閱者計算環(huán)境上實施的軟件的不同部分，其中審閱者可以位于遠程位置(例如，在服務(wù)器供應(yīng)商設(shè)備上)。

在本發(fā)明的實施方式中，在由用戶進行數(shù)據(jù)輸入期間或之后，部分數(shù)據(jù)處理可以在用戶側(cè)計算環(huán)境中進行。例如，可以對用戶側(cè)計算環(huán)境進行編程以提供所定義的測試代碼，從而表示似然度“得分”，其中所述得分作為經(jīng)處理或部分處理的應(yīng)答以測試代碼的形式被傳輸給審閱者計算環(huán)境，所述測試代碼用于隨后執(zhí)行一種或更多種算法，從而在審閱者計算環(huán)境中提供結(jié)果和/或生成報告。所述得分可以是數(shù)字得分(代表數(shù)值)，或者代表數(shù)值或數(shù)值范圍的非數(shù)字得分(例如，“A”：代表對PI3K抑制劑的90-95％的似然度的靈敏度；“高”：代表大于50％的機會的靈敏度(或者一些其他的所選擇的似然度閾值)；“低”：代表小于50％的機會的靈敏度(或者一些其他的所選擇的似然度閾值))等。

作為計算機系統(tǒng)，所述系統(tǒng)一般包括處理器單元。處理器單元操作來接收信息，所述信息可以包括測試數(shù)據(jù)(例如，預測基因產(chǎn)物的水平；參照基因產(chǎn)物的水平；預測基因產(chǎn)物的歸一化水平；并且還可以包括其他數(shù)據(jù)如患者數(shù)據(jù))。所接收的該信息可以至少暫時儲存在數(shù)據(jù)庫中，并且對數(shù)據(jù)進行分析以生成如上文描述的報告。

也可以以電子方式發(fā)送部分或所有的輸入和輸出數(shù)據(jù)。某些輸出數(shù)據(jù)(例如，報告)可以以電子方式或電話方式(例如，使用如回傳(fax back)的裝置通過傳真)發(fā)送。示例性輸出接收裝置可以包括顯示元件、打印機、傳真裝置等。電子形式的傳輸和/或顯示可以包括電子郵件、交互式電視等。在本發(fā)明的實施方式中，將所有或部分的輸入數(shù)據(jù)和/或輸出數(shù)據(jù)(例如，通常至少最終報告)保持在網(wǎng)頁服務(wù)器上，以用于用典型的瀏覽器進行訪問，優(yōu)選地加密訪問?？梢园凑招枰L問數(shù)據(jù)或者將數(shù)據(jù)發(fā)送給健康專業(yè)人員。輸入和輸出數(shù)據(jù)，包括所有或部分的最終報告，可以用來構(gòu)成可能作為醫(yī)療保健服務(wù)(facility)存在于加密數(shù)據(jù)庫的患者的醫(yī)療記錄。

本公開還提供了其上儲存有如下程序的計算機可讀的儲存介質(zhì)(例如，CD-ROM、存儲秘鑰、閃存卡、磁盤等)，當在計算環(huán)境中執(zhí)行時，所述程序提供算法實施，以實施如本文描述所有或部分應(yīng)答似然度評估結(jié)果。在計算機可讀介質(zhì)包含用于實施本文描述的方法的完整程序的情況中，所述程序包括用于收集、分析和生成輸出的程序指令，并且一般包括用于與本文描述的用于交互的計算機可讀編碼裝置，連同分析信息一起處理該數(shù)據(jù)，并且為該用戶生成唯一的打印或電子媒介。

在儲存介質(zhì)包括提供實施本文描述的方法的一部分的程序的情況中(例如，所述方法的用戶側(cè)方面(例如，數(shù)據(jù)輸入、報告接收能力等))，所述程序提供由用戶向遠程位置處的計算環(huán)境進行的數(shù)據(jù)輸入傳輸(例如，經(jīng)由互聯(lián)網(wǎng)，經(jīng)由內(nèi)聯(lián)網(wǎng)等)。對數(shù)據(jù)的處理或完整處理是在遠程位置實施的，以生成報告。在審閱報告之后，并且在完成任何需要的手動干預之后，為了提供完整的報告，之后將所述完整的報告作為電子文檔或打印文檔(例如，傳真或郵寄紙質(zhì)報告)回傳給用戶。包含根據(jù)本發(fā)明的程序的儲存介質(zhì)可以打包有記錄在適合的基底上的說明書(例如用于程序安裝、使用等)，或者可以獲得這樣的說明書的網(wǎng)站地址。計算機可讀的儲存介質(zhì)也可以與一種或更多種試劑組合提供，所述一種或更多種試劑用于實施應(yīng)答似然度評估(例如，引物、底物、陣列，或這樣的其他的試劑盒組分)。

為方便起見，下文提供在說明書、實施例和所附的權(quán)利要求書中使用的一些術(shù)語的含義。除非另有說明或者上下文中有所暗示，以下術(shù)語和短語包括下文提供的含義。提供定義來幫助對具體實施方式進行描述，而非旨在限制要求保護的發(fā)明，因為本發(fā)明的范圍僅由權(quán)利要求書限定。除非另外限定，本文使用的所有技術(shù)和科學術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員通常理解的術(shù)語相同的含義。如果術(shù)語在本領(lǐng)域中使用時與本文提供的它的定義之間存在明顯的矛盾，應(yīng)該說明書中提供的定義為準。

為方便起見，將本文在說明書、實施例和所附的權(quán)利要求書中使用的某些術(shù)語收集于此。

術(shù)語“降低(decrease)”、“減少的(reduced)”、“減少(reduction)”或“抑制(inhibit)”在本文中都用于表示統(tǒng)計學上顯著量的降低。在一些實施方式中，“減少(reduce)”、“減少(reduction)”或“降低(decrease)”或“抑制(inhibit)”通常意思是與參照水平(例如沒有施用治療)相比降低至少10％，并且可以包括，例如，降低至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、至少約99％，或更多。在本文中使用時，“減少(reduction)”或“抑制(inhibition)”不涵蓋與參照水平相比的全部抑制或減少。“全部抑制”為與參照水平相比100％的抑制。降低可以優(yōu)選地低至接受為對于沒有給定紊亂的個體而言正常范圍內(nèi)的水平。

術(shù)語“增加的(increased)”、“增加(increase)”、增強(enhance)或“激活(activate)”在本文中都用于表示統(tǒng)計學上顯著量的增加。在一些實施方式中，術(shù)語“增加的(increased)”、“增加(increase)”、增強(enhance)或“激活(activate)”可以意思是與參照水平相比增加至少10％，例如與參照水平相比增加至少約20％、或至少約30％、或至少約40％、或至少約50％、或至少約60％、或至少約70％、或至少約80％、或至少約90％，或增加至100％并且包括100％的增加或者在10％-100％之間的任何增加，或者與參照水平相比至少約2倍、或至少約3倍、或至少約4倍、或至少約5倍、或至少約10倍，或者在2倍和10倍之間的任何增加或更高的增加。在標志物或癥狀的上下文中，“增加(increase)”是以這樣的水平的統(tǒng)計學上顯著的增加。

在本文中使用時，“受試者”意為人或動物。通常，動物為脊椎動物，如靈長類動物、嚙齒動物、家養(yǎng)動物或狩獵動物(game animal)。靈長類動物包括黑猩猩、食蟹猴、蜘蛛猴和獼猴(例如，恒河猴)。嚙齒動物包括小時、大鼠、旱獺、雪貂、兔和倉鼠。家養(yǎng)動物和狩獵動物包括牛、馬、豬、鹿、野牛、水牛、貓科物種(例如，家貓)、犬科物種(例如，狗、狐貍、狼)、鳥類物種(例如，雞、鴯鹋(emu)、鴕鳥)，以及魚(例如，鱒魚(trout)、鯰魚和鮭魚)。在一些實施方式中，受試者為哺乳動物，例如，靈長類動物，例如人類。術(shù)語“個體(individual)”、“患者(patient)”和“受試者(subject)”在本文中可互換使用。

優(yōu)選地，受試者時哺乳動物。哺乳動物可以是人、非人靈長類動物、小鼠、大鼠、狗、貓、馬或牛，但是不被限制有這些實例。除人以外的哺乳動物可以有利地用作代表癌癥動物模型的受試者。受試者可以是雄性或雌性。

受試者可以是先前被診斷為具有或者鑒定為罹患或患有需要治療的病癥(例如癌癥)或與這樣的病癥相關(guān)的一種或更多種并發(fā)癥，并且任選地，已經(jīng)經(jīng)受了針對癌癥或與癌癥相關(guān)的一種或更多種并發(fā)癥的治療的受試者?？蛇x地，受試者也可以是先前被診斷為患有癌癥或與癌癥相關(guān)的一種或更多種并發(fā)癥的受試者。例如，受試者可以是對癌癥或與癌癥相關(guān)的一種或更多種并發(fā)癥表現(xiàn)出一種或更多種風險因素的受試者，或者沒有表現(xiàn)出風險因素的受試者。

“需要治療特定病癥的受試者”可以是患有該病癥、被診斷為患有該病癥，或者有風險發(fā)展該病癥的受試者。

在本文中使用時，術(shù)語“蛋白”和“多肽”可以在本文中互換使用，以指定通過α-氨基和相鄰殘基的羧基之間的肽鍵彼此相連的一系列氨基酸殘基。術(shù)語“蛋白”和“多肽”指氨基酸，包括經(jīng)修飾的氨基酸(例如，磷酸化的、糖化的、糖基化的等)和氨基酸類似物，而不管其尺寸或功能。“蛋白”和“多肽”通常關(guān)于相對大的多肽使用，其中術(shù)語“肽”通常關(guān)于小的多肽使用，但是這些術(shù)語在本領(lǐng)域的使用重疊。當指基因產(chǎn)物或其片段時，術(shù)語“蛋白”和“多肽”在本文中可互換使用。因此，示例性多肽或蛋白包括基因產(chǎn)物、天然存在的蛋白、同系物、直系同源物(orthologs)、旁系同源物(paralogs)，前述物質(zhì)的片段或其他等同物、變體、片段和類似物。

在本文中使用時，術(shù)語“核酸”或“核酸序列”指并入核糖核酸、脫氧核糖核酸或其類似物的任何分子，優(yōu)選地聚合物分子。核酸可以是單鏈的或者雙鏈的。單鏈核酸可以是變性的雙鏈DNA的一條核酸鏈。可選地，它可以是并非來自于任何雙鏈DNA的單鏈核酸。在一個方面，核酸可以是DNA。在另一個方面，核酸可以是RNA。適合的核酸分子為DNA，包括基因組DNA或cDNA。其他適合的核酸分子為RNA，包括mRNA。

術(shù)語“試劑”一般指通常在細胞、組織或受試者中存在，或者不會以施用至細胞、組織或受試者的水平出現(xiàn)的任何實體。試劑可以選自包括但不限于以下的組：多核苷酸；多肽；小分子；以及抗體或其抗原結(jié)合片段。多核苷酸可以是RNA或DNA，并且可以是單鏈或雙鏈的，并且可以選自包括，例如，編碼多肽的核酸和核酸類似物的組。多肽可以是，但不限于天然存在的多肽、突變的多肽，或者其保留感興趣的功能的片段。試劑的進一步的實例包括但不限于核酸適配體、肽-核酸(PNA)、鎖核酸(LNA)、小的有機或無機分子；糖類；寡糖；多糖；生物大分子、擬肽；核酸類似物和衍生物；由生物材料(如細菌、植物、真菌，或者哺乳動物細胞或組織)制得的提取物；以及天然存在的或合成組合物?？梢詫⒃噭┦┘拥脚囵B(yǎng)基，在培養(yǎng)基中所述試劑接觸細胞并且誘導其作用。可選地，由于將編碼所述試劑的核酸序列引入到細胞中，并且其轉(zhuǎn)錄導致在細胞內(nèi)產(chǎn)生核酸和/或蛋白環(huán)境刺激，試劑可以是在細胞內(nèi)的。在一些實施方式中，試劑為任何化學實體或部分，包括但不限于合成和天然存在的非蛋白質(zhì)實體。在某些實施方式中，試劑為具有例如選自以下的化學部分的小分子：未取代或取代的烷基、芳香族、或包括大環(huán)內(nèi)酯類的雜環(huán)基部分、輕肌蛋白及其相關(guān)天然產(chǎn)品或類似物。試劑可以已知為具有期望的活性和/或性能，或者可以選自具有不同化合物的文庫。在本文中使用時，術(shù)語“小分子”可以指為“像天然產(chǎn)物”的化合物，然而，術(shù)語“小分子”不限于“像天然產(chǎn)物”的化合物。而是，小分子的特征通常在于它包含若干碳-碳鍵，并且具有大于約50但是小于約5000道爾頓(5kD)的分子量。優(yōu)選地，小分子具有小于3kD、再更優(yōu)選地小于2kD，并且最優(yōu)選地小于1kD的分子量。在一些情況中，優(yōu)選的是，小分子具有等于或小于700道爾頓的分子質(zhì)量。

在本文中使用時，術(shù)語“抑制劑”指可以使靶表達產(chǎn)物(例如，編碼靶或靶多肽的mRNA)的表達和/或活性降低，例如至少10％或更多、例如10％或更多、50％或更多、70％或更多、80％或更多、90％或更多、95％或更多，或者98％或更多?？梢岳缤ㄟ^測量PI3K多肽(和/或編碼這樣的多肽的mRNA)和/或PI3K的活性來確定，例如，PI3K的抑制劑的功效，例如它降低PI3K的水平和/或活性的能力。用于測量給定的mRNA和/或多肽的水平的方法時本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如，可以使用以引物進行的RTPCR來確定RNA的水平，并且可以使用以抗體進行的蛋白質(zhì)印跡來確定多肽的水平?？梢允鞘褂帽绢I(lǐng)域已知并且本文上面描述的方法來確定例如PI3K的活性。

在本文中使用時，術(shù)語“治療(treat)”、“治療(treatment)”、“治療(treating)”或“改善(amelioration)”指治療性處理，其中目標為逆轉(zhuǎn)、緩解、改善、抑制、減緩或停止與疾病或紊亂(例如癌癥)相關(guān)的病癥的進展或嚴重程度。術(shù)語“治療”包括減少或減輕與癌癥相關(guān)的病癥、疾病或紊亂的至少一種不良反應(yīng)或癥狀。如果一種或更多種癥狀或臨床標志物減少，則治療一般為“有效的”?？蛇x地，如果疾病的進展減輕或停頓，則治療為“有效的”。即，與未進行治療所預期的相比，“治療”不僅包括癥狀或標志物的改善，而且還包括癥狀進展或惡化停滯或至少減慢。有益或期望的臨床結(jié)果包括但不限于(無論是否可檢測)：減輕一種或更多種癥狀、減輕疾病程度、穩(wěn)定(即，不惡化)疾病狀態(tài)、延遲或減慢疾病進展、改善或緩和疾病狀態(tài)、緩解(無論是部分還是全部)和/或降低死亡率。術(shù)語“治療”疾病還包括提供緩解疾病的癥狀或副作用(包括姑息治療)。

在本文中使用時，術(shù)語“藥物組合物”指與藥學上可接受的載體(例如通常使用在制藥工業(yè)中的載體)組合的活性劑。本文中使用的短語“藥學上可接受的”指如下化合物、材料、組合物和/或劑型：在合理的醫(yī)學判斷范圍內(nèi)，適合用于接觸人類和動物組織而沒有過度的毒性、刺激、過敏反應(yīng)，或其他問題或并發(fā)癥，具有相稱的合理的收益/風險比。

在本文中使用時，術(shù)語“施用(administering)”指通過將至少部分試劑遞送至期望位點的方法或途徑將本文公開的組合物置于受試者中。包括本文描述的化合物的藥物組合物可以通過在受試者中產(chǎn)生有效治療的任何適合的途徑來施用。

在本文中使用時，術(shù)語“兩親性”指具有疏水性部分和疏脂性部分兩者的分子，即至少一個極性、水溶性基團和至少一個非極性、水不溶性基團。通常，在具有極性水相和至少一個非極性非水相的兩相系統(tǒng)中，兩親性分子將分開兩相的接觸面。在較簡單的非限制性的角度，兩親物是可溶于水性環(huán)境和非水性環(huán)境兩者中的分子。術(shù)語“兩親物(amphiphile)”指兩親性分子。

術(shù)語“統(tǒng)計學上顯著的”或“顯著地”指統(tǒng)計顯著性，并且一般意思是兩個標準差(2SD)或更大的差異。

除了在操作實施例中，或者另有說明的情況中，表示本文中使用的成分的數(shù)量或反應(yīng)條件的所有數(shù)字在所有情況中均應(yīng)被理解為由術(shù)語“約”修飾。當與百分比相連使用時，術(shù)語“約”可以意思是±1％。

在本文中使用時，術(shù)語“包括(comprising)”或“包括(comprises)”關(guān)于組合物、方法，以及對所述方法或組合物必要的它們相應(yīng)組分使用，并且為開放性的，包含未指定的要素，無論是否必要。

術(shù)語“由……組成”意思是如本文描述的組合物、方法及各自的組分，不包括在對實施方式的描述中沒有述及的任何要素。

在本文中使用時，術(shù)語“主要由……組成”指給定的實施方式所需要的那些要素。該術(shù)語允許存在不會實質(zhì)地影響該實施方式的一個或多個基礎(chǔ)性和新穎的或功能性特征的要素。

除非上下文明確地另有說明，單數(shù)術(shù)語“一個(a)”、“一個(an)”和“所述(the)”包括復數(shù)的所指物。類似地，除非上下文明確地另有說明，單詞“或”旨在包括“和”。盡管類似或等同于本文描述的那些方法和材料的方法和材料可以用于本公開的實踐或測試中，下文對適合的方法和材料進行了描述?？s寫“e.g.”源自于拉丁語exempli gratia(例如)，并且在本文中用于指代非限制性實例。因此，縮寫“e.g.”與術(shù)語“例如”同義。

在本文中使用時，術(shù)語“芳香酶抑制劑”指抑制雌激素生成，即底物雄烯二酮和睪酮分別轉(zhuǎn)化為雌激素酮和雌二醇的化合物。該術(shù)語包括但不限于類固醇，特別是阿他美坦、依西美坦和福美司坦；以及特別地非類固醇，特別是氨基格魯米特、羅利米特(roglethimide)、吡魯米特(pyridoglutethimide)、曲洛司坦、睪內(nèi)酯、酮康唑(ketokonazole)、伏氯唑、法倔咗、阿那曲唑和來曲唑。

在本文中使用時，術(shù)語“抗雌激素(anti-estrogen)”指在雌激素受體水平上拮抗雌激素的作用的化合物。該術(shù)語包括但不限于他莫昔芬、氟維司群、雷洛昔芬和鹽酸雷洛昔芬。

在本文中使用時，術(shù)語“抗雄激素(anti-androgen)”指能夠抑制雄激素的生物學作用的任何物質(zhì)，并且包括但不限于比卡魯胺。

在本文中使用時，術(shù)語“戈那瑞林激動劑”包括但不限于阿巴瑞克、戈舍瑞林和乙酸戈舍瑞林。戈舍瑞林公開在美國專利號4,100,274中，并且作為ZOLADEX市售?？梢?，例如，如美國專利號5,843,901中公開的那樣配制阿巴瑞克。在本文中使用時，術(shù)語“拓撲異構(gòu)酶I抑制劑”包括但不限于拓撲替康、伊立替康、吉馬替康、喜樹堿及其類似物、9-硝基喜樹堿，以及大分子喜樹堿綴合物PNU-166148(WO 99/17804中的化合物A1)。

在本文中使用時，術(shù)語“拓撲異構(gòu)酶II抑制劑”包括但不限于蒽環(huán)類藥物，如多柔比星、道諾霉素、表柔比星、伊達比星和奈莫柔比星；蒽醌類米托蒽醌和洛索蒽醌；以及鬼臼乙叉甙類(podophillotoxines)依托泊苷和替尼泊苷。

術(shù)語“微管活性劑”指微管穩(wěn)定劑、微管去穩(wěn)定劑和微管聚合抑制劑，包括但不限于紫杉烷，例如，紫杉醇和多西他賽；長春花生物堿，例如，長春花堿，特別是硫酸長春花堿；長春新堿，特別是硫酸長春新堿和長春瑞濱；海綿內(nèi)酯類(discodermolides)；秋水仙堿；以及埃坡霉素及其衍生物，例如，埃坡霉素B或D或其衍生物。也包括美國專利號6,194,181、WO 98/10121、WO 98/25929、WO 98/08849、WO 99/43653、WO 98/22461和WO 00/31247中公開的Epotholine衍生物。特別優(yōu)選地是Epotholine A和/或B。

烷化劑是具有用烷基取代氫離子的能力的多官能化合物。烷化劑的實例包括但不限于雙氯乙胺(氮芥，例如苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、二氯甲基二乙胺、美法侖、烏拉莫司汀)、氮雜環(huán)丙烷(例如噻替派)、烷基酮磺酸酯(例如白消安)、亞硝基脲(例如卡莫司汀、洛莫司汀、鏈脲菌素、BCNU、Gliadel)、替莫唑胺、非經(jīng)典型烷化劑(六甲蜜胺、達卡巴嗪和丙卡巴肼)、鉑化合物(卡鉑和順鉑)。這些化合物與磷酸根、氨基、羥基、巰基、羧基和咪唑基反應(yīng)。在生理條件下，這些藥物離子化并且生成帶正電的離子，所述離子連接到易受影響的核酸和蛋白，導致細胞周期停滯和/或細胞死亡。

術(shù)語“抗腫瘤(anti-neoplastic)”和“抗代謝物(metabolite)”試劑指干擾對癌細胞的生理和增殖至關(guān)重要的代謝過程的一組化合物?；钴S增殖的癌細胞需要連續(xù)不斷地合成打量的核酸、蛋白、脂質(zhì)和其他至關(guān)重要的細胞成分?？勾x物中的許多抑制嘌呤或嘧啶核苷的合成，或者抑制DNA復制酶。一些抗代謝物還干擾核糖核苷的合成，RNA和/或氨基酸代謝，以及蛋白合成。通過干擾至關(guān)重要的細胞成分的合成，抗代謝物可以使癌細胞的生長延遲或停滯。抗代謝試劑的實例包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-FU)；天冬酰胺酶；卡倍他濱；克拉屈濱(2-CDA)；阿糖胞苷；DNA去甲基化試劑，如5-氮雜胞苷和地西他濱；依達曲沙；氟尿苷(5-FUdR)；磷酸氟達拉濱；葉酸拮抗劑如培美曲塞；吉西他濱；羥基脲；甲酰四氫葉酸；巰基嘌呤(6-MP)；氨甲喋呤；噴司他丁；以及硫鳥嘌呤(6-TG)。

在本文中使用時，術(shù)語“靶向/降低蛋白或脂質(zhì)激酶活性的化合物”包括但不限于蛋白酪氨酸激酶和/或絲氨酸和/或蘇氨酸激酶抑制劑或脂質(zhì)激酶抑制劑，例如，i)靶向、降低或抑制血小板源性生長因子受體(PDGFR)的活性的化合物，特別是抑制PDGF受體的化合物，例如，/V-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如，伊馬替尼、SU101、SU6668和GFB-111；ii)靶向、降低或抑制纖維母細胞生長因子受體(FGFR)的活性的化合物；iii)靶向、降低或抑制胰島生長因子I受體(IGF-IR)的活性的化合物，特別是抑制IGF-IR的化合物，如WO 02/092599中公開的那些化合物，特別是反式-5-(3-芐氧基-苯基)-7-(3-吡咯烷-1-甲撐-環(huán)丁基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺，以及順式-7-(3-氮雜環(huán)丁烷-1-甲撐-環(huán)丁基)-5-(3-芐氧基-苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺，或者這些化合物的藥學上可接受的鹽；iv)靶向、降低或抑制Trk受體酪氨酸激酶家族的活性的化合物；v)靶向、降低或抑制Axl受體酪氨酸激酶家族的活性的化合物；vi)靶向、降低或抑制RET受體酪氨酸激酶的活性的化合物；vii)靶向、降低或抑制c-kit受體酪氨酸激酶的活性的化合物，特別是抑制c-kit受體的化合物，例如，伊馬替尼；viii)靶向、降低或抑制c-Abl家族成員及其基因融合產(chǎn)物(例如Bcr-Abl激酶)的活性的化合物，如特別是抑制c-Abl家族成員及其基因融合產(chǎn)物的活性的化合物，例如，/V-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如，來自ParkeDavis的伊馬替尼、PD180970、AG957、NSC 680410或PD173955；ix)靶向、降低或抑制如下家族成員的活性的化合物：絲氨酸/蘇氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)和Raf家族成員，MEK、SRC、JAK、FAK、PDK和Ras/MAPK家族成員中的成員，或PI3激酶(PI3K)家族成員，或PI3激酶相關(guān)激酶家族成員，和/或周期蛋白依賴性激酶家族(CDK)成員，并且特別是美國專利號5,093,330中公開的那些十字孢堿(staurosporine)，例如，米哚妥林(midostaurin)；另外的化合物的實例包括，例如，UCN-01；沙芬戈；BAY 43-9006；苔蘚抑素1；哌立福辛；llmofosine；RO 318220和RO 320432；GO 6976；Isis 3521；LY333531/LY379196；異喹啉化合物，如WO 00/09495中公開的那些；FTIs；PD184352或QAN697(PI3K抑制劑)；x)靶向、降低或抑制蛋白酪氨酸集酶抑制劑的活性的化合物，包括甲磺酸伊馬替尼(GLEEVEC/GLIVEC)或酪氨酸磷酸化抑制劑(tyrphostin)。酪氨酸磷酸化抑制劑優(yōu)選地為低分子量(M_r<1500)的化合物，或其藥學上可接受的鹽，特別是選自化合物的亞芐基丙二腈(benzylidenemalonitrile)類別或S-芳基苯并二腈(S-arylbenzenemalonirile)或雙底物喹啉類別的化合物，更特別地選自由以下組成的組的任何化合物：酪氨酸磷酸化抑制劑A23/RG-50810、AG 99、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 213、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 1748、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 490、酪氨酸磷酸化抑制劑B44、酪氨酸磷酸化抑制劑B44(+)對映異構(gòu)體(enantiomer)、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 555、AG 494、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 556和AG957，以及adaphostin(4-{[(2,5-二羥苯基)甲基]氨基}-苯甲酸adamantyl酯，NSC 680410)；以及xi)靶向、降低或抑制受體酪氨酸激酶的表皮生長因子(作為同二聚體或異二聚體的EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4)的活性的化合物，如靶向、降低或抑制表皮生長因子受體家族的活性的化合物，特別是抑制EGF受體酪氨酸激酶家族成員的化合物、蛋白或抗體，例如，EFG受體、ErbB2、ErbB3和ErbB4或結(jié)合到EGF或EGF相關(guān)配體的，并且特別是WO 97/02266中一般并且具體地公開的那些化合物、蛋白或抗體(例如，實施例39的化合物)，或者EP 0 564409、WO 99/03854、EP 0520722、EP 0 566 226、EP 0 787 722、EP 0 837 063、美國專利號5,747,498、WO 98/10767、WO 97/30034、WO 97/49688、WO 97/38983以及特別地WO 96/30347中一般并且具體地公開的那些化合物、蛋白或抗體，例如，已知為CP 358774的化合物(WO 96/33980)，例如化合物ZD 1839；以及WO 95/03283，例如化合物ZM105180，例如WO 03/013541中公開的曲妥單抗西妥昔單抗、吉非替尼(Iressa)、埃羅替尼(Tarceva^TM)、7H-吡咯并-[2,3]-嘧啶衍生物。

進一步的抗血管生成化合物包括針對其活性具有另一種機制(例如，與蛋白或脂質(zhì)激酶抑制無關(guān))的化合物，例如，沙利度胺(THALOMID)和TNP-470。

在本文中使用時，術(shù)語“環(huán)加氧酶抑制劑”包括但不限于例如，Cox-2抑制劑、5-烷基取代的2-芳基氨基苯乙酸及衍生物，如塞來昔布(CELEBREX)、羅非昔布(VIOXX)、依托昔布、伐地昔布(BEXTRA)、或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸，例如，5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯氨基)苯乙酸(lumiracoxib,PREXIGE)。

在本文中使用時，術(shù)語“二磷酸酯”包括但不限于依替膦酸(etridonic acid)、氯膦酸、替魯膦酸、帕米膦酸、阿侖膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑來膦酸鹽。

在本文中使用時，術(shù)語“肝素酶抑制劑”指靶向、降低或抑制硫酸乙酰肝素酶降解的化合物。該術(shù)語包括但不限于PI-88。

在本文中使用時，術(shù)語“端粒酶抑制劑”指靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物。靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物特別地為抑制端粒酶受體的化合物，例如，端粒抑素。

在本文中使用時，術(shù)語“甲硫氨酸氨基肽酶抑制劑”指靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨基肽酶的活性的化合物。靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨基肽酶的活性的化合物為，例如，bengamide或其衍生物。

在本文中使用時，術(shù)語“蛋白酶體抑制劑”指靶向、降低或抑制蛋白酶體的活性的化合物。靶向、降低或抑制蛋白酶體的活性的化合物包括，例如，PS-341和MLN 341。

在本文中使用時，術(shù)語“基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑”或“MMP抑制劑”包括但不限于膠原蛋白擬肽或非擬肽抑制劑；四環(huán)素衍生物，例如，異羥肟酸擬肽抑制劑巴馬司他；及其口服生物可利用的類似物馬馬司他(BB-2516)、普馬司他(AG3340)、美他司他(NSC683551)BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B或AAJ996。

在本文中使用時，術(shù)語“用于治療血液惡性病的試劑”包括但不限于FMS樣酪氨酸激酶抑制劑，例如，靶向、降低或抑制Flt-3的活性的化合物；干擾素；胞嘧啶阿拉伯糖苷(Ara-C)；bisulfan；以及ALK抑制劑，即靶向、降低或特別是抑制間變性淋巴瘤激酶(ALK)的化合物。

在本文中使用時，術(shù)語“FMS樣酪氨酸激酶抑制劑”包括但不限于靶向、降低或抑制FMS樣酪氨酸激酶受體的化合物，如特別是抑制Flt-3的化合物、蛋白或抗體，例如，PKC412、米哚妥林、十字孢堿衍生物、SU 11248和MLN518。

在本文中使用時，術(shù)語“HSP90抑制劑”包括但不限于靶向、降低或抑制HSP90的固有ATP酶活性的化合物；經(jīng)由泛素蛋白酶體通路降解、靶向、降低或抑制HSP90下游蛋白(client proteins)。靶向、降低或抑制HSP90的固有ATP酶活性的化合物特別地為抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白或抗體，例如，17-烯丙基氨基、17-去甲氧格爾德霉素(17-AAG)、格爾德霉素衍生物；其他格爾德霉素相關(guān)化合物；根赤殼菌素和HDAC抑制劑。

術(shù)語“組蛋白脫乙酰酶抑制劑”或“HDAC抑制劑”涉及靶向、降低或特別是抑制組蛋白脫乙酰酶(HDAC)的活性的化合物，如丁酸鈉和辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)。具體的HDAC抑制劑包括MS275、SAHA、FK228(原來的FR901228)、Trichostatin A，以及美國專利號6,552,065中公開的化合物，特別是，N-羥基-3-[4-[[[2-(2-甲基-7H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，或其藥學上可接受的鹽，以及/V-羥基-3-[4-[(2-羥乙基){2-(7H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，或其藥學上可接受的鹽，特別是乳酸鹽。

術(shù)語“mTOR抑制劑”涉及靶向、降低或抑制絲氨酸/蘇氨酸mTOR激酶家族的活性/功能的化合物，并且特別地為抑制mTOR激酶家族成員的化合物、蛋白或抗體，例如，CCI-779、ABT578、SAR543、雷帕霉素及其衍生物/類似物、來自Ariad的AP23573和AP23841、依維莫司(CERTICAN,RAD001)和西羅莫司(RAPAMUNE)。

在本文中使用時，“生長抑素受體拮抗劑”指靶向、治療或抑制生長抑素受體的試劑，如奧曲肽和SOM230。在本文中使用時，術(shù)語“整聯(lián)蛋白拮抗劑”包括但不限于例如αvβ3拮抗劑和αvβ5拮抗劑。

“腫瘤細胞損傷方法”指如電離輻射的方法。上文和下文中提到的術(shù)語“電離輻射”意思是以電磁射線(如X射線和γ射線)或者顆粒(如α和β顆粒)的形式出現(xiàn)的電離輻射。電離輻射被提供為但不限于放射治療，并且是本領(lǐng)域已知的。參見Hellman,Cancer,第4版,第1卷,Devita等編,248-275頁(1993)。

術(shù)語“抗白血病化合物”包括，例如，Ara-C，一種嘧啶類似物，為脫氧胞苷的2'-α-羥基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。

在本文中使用時，術(shù)語“EDG結(jié)合劑”指調(diào)節(jié)淋巴細胞再循環(huán)的一類免疫抑制劑，如FTY720。

術(shù)語“核糖核苷酸還原酶抑制劑”指嘧啶或嘌呤核苷類似物，包括但不限于氟達拉濱和/或Ara-C；6-硫鳥嘌呤；5-FU；克拉屈濱；6-巰基嘌呤，特別是針對ALL與Ara-C組合；和/或噴司他丁。核糖核苷酸還原酶抑制劑特別地為羥基脲或2-羥基-7H-異吲哚-1,3-二酮衍生物，如PL-1、PL-2、PL-3、PL-4、PL-5、PL-6、PL-7或PL-8。參見Nandy等,Ada Oncologica,第33卷,第8號,953-961頁(1994)。

在本文中使用時，術(shù)語“S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶抑制劑”包括但不限于美國專利號5,461,076中公開的化合物。

ACE抑制劑包括苯那普利(CIBACEN)、enazepril(LOTENSIN)、卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、莫昔普利、喹那普利、雷米普利、培哚普利和群多普利。

在細胞生物學和分子生物學中常用術(shù)語的定義可以在以下文獻中找到：“The Merck Manual of Diagnosis and Therapy”,第19版,Merck Research Laboratories出版,2006(ISBN 0-911910-19-0)；Robert S.Porter等(編),The Encyclopedia of Molecular Biology,Blackwell Science Ltd.出版,1994(ISBN 0-632-02182-9)；Benjamin Lewin,Genes X,Jones&Bartlett Publishing出版,2009(ISBN-10:0763766321)；Kendrew等(編),Molecular Biology and Biotechnology:a Comprehensive Desk Reference,VCH Publishers,Inc.出版,1995(ISBN 1-56081-569-8)；以及Current Protocols in Protein Sciences 2009,Wiley Intersciences,Coligan等編。

除非另外說明，本發(fā)明使用如以下文獻中描述的標準程序進行：例如Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版),Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,USA(2001)；Davis等,Basic Methods in Molecular Biology,Elsevier Science Publishing,Inc.,New York,USA(1995)；Current Protocols in Cell Biology(CPCB)(Juan S.Bonifacino等編,John Wiley and Sons,Inc.)，以及R.Ian Freshney的Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique,出版人:Wiley-Liss；第5版(2005),Animal Cell Culture Methods(Methods in Cell Biology,第57卷,Jennie P.Mather和David Barnes編輯,Academic Press,第1版,1998)，所述文獻均通過引用以其全部并入本文。

在對本發(fā)明的各個方面的描述內(nèi)限定本文的其他術(shù)語。

可以通過編號段中的一個或更多個來描述本文公開的各個方面的一些實例性實施方式：

1.一種超分子組合治療藥物(SCT)，所述超分子組合治療藥物包括紫杉烷-脂質(zhì)綴合物。

2.如第1段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物是脂質(zhì)體、乳劑、膠束或顆粒。

3.如第1或2段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括約1％至約99％(w/w)的所述紫杉烷綴合物。

4.如第1-3段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述紫杉烷綴合物是卡巴他賽-脂質(zhì)綴合物、紫杉醇-脂質(zhì)綴合物或多西他賽-脂質(zhì)綴合物。

5.如第1-4段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述紫杉烷綴合物選自由綴合物1-33組成的組。

6.如第1-5段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物進一步包括脂質(zhì)綴合的PI3K抑制劑。

7.如第6段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括約1％至約99％(w/w)的所述PI3K抑制劑綴合物。

8.如第6或7段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物以約10:1至約1:10的比例包括所述紫杉烷綴合物和所述PI3K抑制劑綴合物。

9.如第1-8段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物進一步包括脂質(zhì)綴合的鉑化合物。

10.如第9段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括約1％至約99％(w/w)的所述鉑綴合物。

11.如第9或10段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物以約10:1至約1:10的比例包括所述紫杉烷綴合物和所述鉑綴合物。

12.如第1-11段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物進一步包括脂質(zhì)綴合的抗體。

13.如第12段所述的超分子組合治療藥物，其中所述抗體是治療劑或靶向配體。

14.如第12或13段所述的超分子組合治療藥物，其中所述抗體是包括抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體或其組合的免疫調(diào)節(jié)劑。

15.如第12-14段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括約1％至約99％(w/w)的所述抗體綴合物。

16.如第12-15段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物以約10:1至約1:10的比例包括所述紫杉烷綴合物和所述抗體綴合物。

17.如第1-16段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述脂質(zhì)選自由以下組成的組：膽固醇；1,3-丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯；10-十一碳烯酸；1-三十二烷醇；1-二十七烷醇；1-二十九烷醇；2-乙基己醇；雄烷；花生酸；花生四烯酸；花生醇；山萮酸；山萮醇；Capmul MCM C10；癸酸；癸醇；辛醇；辛酸；飽和脂肪醇C12-18的辛酸酯/癸酸酯；辛酸/癸酸甘油三酯；辛酸/癸酸甘油三酯；神經(jīng)酰胺磷酰膽堿(鞘磷脂，SPH)；神經(jīng)酰胺磷酰乙醇胺(鞘磷脂，Cer-PE)；神經(jīng)酰胺磷酰甘油；蠟塑酸；蠟酸；蠟醇；鯨蠟硬脂醇；鯨蠟醇聚醚-10；鯨蠟醇；膽烷；膽甾烷；膽固醇；順式-11-二十烯酸；順式-11-十八烯酸；順式-13-二十二碳烯酸；二十八烷醇；二均-γ-亞麻酸；二十二碳六烯酸；蛋黃卵磷脂；二十碳五烯酸；二十碳烯酸；反式油酸；反式亞麻醇；反式亞麻醇；反式油醇；芥酸；芥醇；雌烷；乙二醇二硬脂酸酯(EGDS)；格地酸；格地醇；甘油二硬脂酸酯(I型)EP(Precirol ATO 5)；甘油三辛酸酯/癸酸酯；甘油三辛酸酯/癸酸酯(355EP/NF)；甘油單辛酸酯(Capmul MCM C8EP)；甘油三乙酸酯；甘油三辛酸酯；甘油三辛酸酯/癸酸酯/月癸酸酯；甘油三辛酸酯/三癸酸酯；甘油三棕櫚酸酯(三棕櫚精)；三十一烷酸；二十一烷醇；二十一烷酸；二十七烷酸；十七烷酸；十七烷醇；三十六燒酸；異硬脂酸；異硬脂醇；紫膠蟲酸；月桂酸；月桂醇；二十四烷酸；二十四烷醇；反式亞油酸；亞油酸；亞麻醇；亞麻醇；十七烷酸；順5,8,11-二十碳三烯酸；蜂花酸；蜂花醇；褐煤酸；褐煤醇；三十烷醇；肉豆蔻酸；肉豆蔻腦酸；肉豆蔻醇；新癸酸；新庚酸；新壬酸；神經(jīng)酸；二十九烷酸；十九烷醇；十九烷酸；十九烷酸；油酸；油醇；棕櫚酸；棕櫚油酸；棕櫚油醇；壬酸；壬醇；二十五烷酸；十五烷醇；十五烷酸；磷脂酸(磷脂酸酯，PA)；磷脂酰膽堿(卵磷脂；PC)；磷脂酰乙醇胺(腦磷脂，PE)；磷脂酰肌醇(PI)；磷脂酰肌醇二磷酸酯(PIP2)；磷脂酰肌醇磷酸酯(PIP)；磷脂酰肌醇三磷酸酯(PIP3)；磷脂酰絲氨酸(PS)；聚甘油基-6-二硬脂酸酯；孕烷；丙二醇二癸酸酯；丙二醇二辛基癸酸酯；丙二醇二辛基癸酸酯；三十三烷酸；蓖麻油酸；蓖麻油醇；十六碳烯酸；大豆卵磷脂；硬脂酸；十八碳四烯酸；硬酯醇；三十三烷酸；十三烷醇；十三烷酸；三油精；十一烷醇；十一碳烯酸；十一烷酸；異油酸；α-亞麻酸；以及γ-亞麻酸。

18.如第1-17段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述脂質(zhì)是膽固醇、α-生育酚或脂肪酸。

19.如第1-18段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述PI3K抑制劑綴合物是

20.如第1-19段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述鉑綴合物是

21.如第1-20段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中除所述紫杉烷綴合物之外，所述超分子組合治療藥物進一步包括第一脂質(zhì)。

22.如第21段所述的超分子組合治療藥物，其中所述第一脂質(zhì)是磷脂。

23.如第21或22段所述的超分子組合治療藥物，其中所述組合物進一步包括第二脂質(zhì)。

24.如第23段所述的超分子組合治療藥物，其中所述第二脂質(zhì)是磷脂。

25.如第22-24段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述磷脂選自由以下組成的組：磷脂酰膽堿、?；哂?至22個碳原子的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂、磷脂酰甘油，及其任何組合。

26.如第25段所述的超分子組合治療藥物，其中所述磷脂選自由以下組成的組：磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、卵磷脂、β,γ-二棕櫚酰-α-卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、N-(2,3-二(9-(Z)-十八碳烯基氧基))-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化銨、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、腦磷脂、心磷脂、腦苷脂、磷酸二鯨蠟酯、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、棕櫚酰-油酰-磷脂酰膽堿、二-硬脂酰-磷脂酰膽堿、硬脂酰-棕櫚酰-磷脂酰膽堿、二-棕櫚酰-磷脂酰乙醇胺、二-硬脂酰-磷脂酰乙醇胺、二-肉豆蔻酰-磷脂酰絲氨酸、二-油烯基-磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)、卵磷脂酰膽堿(EPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(N-馬來酰亞胺甲基)-環(huán)己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)、1-硬脂酰-2-油酰磷脂酰膽堿(SOPC)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE)，及其任何組合。

27.如第26段所述的超分子組合治療藥物，其中所述磷脂是SOPC。

28.如第24-27段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述第一和第二脂質(zhì)的比例為約10:1至約1:10。

29.如第21-28段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括約1％至約99％的總脂質(zhì)。

30.如第21-29段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物以約10:1至約1:10的比例包括所述綴合物和總脂質(zhì)。

31.如第1-30段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物進一步包括聚乙二醇(PEG)。

32.如第31段所述的超分子組合治療藥物，其中所述PEG與所述超分子組合治療藥物的組分綴合。

33.如第31或32段所述的超分子組合治療藥物，其中所述PEG綴合到脂質(zhì)。

34.如第33段所述的超分子組合治療藥物，其中所述PEG綴合的脂質(zhì)選自由以下組成的組：PEG綴合的二?；视秃投轷ジ视?、PEG綴合的磷脂酰乙醇胺和磷脂酸、PEG綴合的神經(jīng)酰胺、PEG綴合的二烷基胺、PEG綴合的1,2-二酰氧基丙烷-3-胺，及其任何組合。

35.如第34段所述的超分子組合治療藥物，其中所述PEG綴合的脂質(zhì)是1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)-2000](DSPE-PEG2000)。

36.如第1-35段中任一段所述的超分子組合治療藥物，進一步包括靶向配體。

37.如第36段所述的超分子組合治療藥物，其中所述靶向配體選自由以下組成的組：肽、多肽、蛋白、酶、擬肽、糖蛋白、抗體(單克隆抗體或多克隆抗體)及其部分或片段、凝集素、核苷、核苷酸、核苷和核苷酸類似物、核酸、單糖、二糖、三糖、寡糖、多糖、脂多糖、維生素、類固醇、激素、輔酶因子、受體、受體配體，及其類似物和衍生物。

38.如第37段所述的超分子組合治療藥物，其中所述靶向配體結(jié)合癌細胞的表面上表達的蛋白、受體或標志物。

39.如第36-38段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述靶向配體與所述組合物的組分綴合。

40.如第39段所述的超分子組合治療藥物，其中所述靶向配體與脂質(zhì)或PEG綴合。

41.如第1-40段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中除所述紫杉烷綴合物之外，所述超分子組合治療藥物進一步包括化學治療劑。

42.如第41段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括約1％至約99％(w/w)的所述化學治療劑。

43.如第41或42段所述的超分子組合治療藥物，其中所述化學治療劑選自由以下組成的組：PI3K抑制劑；鉑化合物；拓撲異構(gòu)酶I和II抑制劑；烷化劑；微管抑制劑；血管生成抑制劑；及其任何組合。

44.如第41-43段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述化學治療劑選自由以下組成的組：PI3K抑制劑、鉑化合物、吉西他濱；阿地白介素；阿侖單抗；阿利維甲酸；別嘌呤醇；六甲蜜胺；氨磷汀；阿那曲唑；三氧化二砷；天冬酰胺酶；注射用卡介苗；貝沙羅汀膠囊；貝沙羅汀凝膠；博來霉素；靜脈用白消安；口服白消安；卡普睪酮；卡倍他濱；鉑酸鹽；卡莫司汀；具有卡莫司汀植入劑的聚苯丙生；塞來昔布；苯丁酸氮芥；克拉屈濱；環(huán)磷酰胺；阿糖胞苷；阿糖胞苷脂質(zhì)體；達卡巴嗪；更生霉素；放線菌素D；阿法達貝泊??；柔紅霉素脂質(zhì)體；柔紅霉素、道諾霉素；地尼白介素、右雷佐生；多西他賽；多柔比星；多柔比星脂質(zhì)體；屈他雄酮丙酸酯；Elliott’sB溶液；表柔比星；阿法依泊汀雌莫司??；磷酸依托泊苷；依托泊苷(VP-16)；依西美坦；非格司亭；氟尿苷(動脈內(nèi))；氟達拉濱；氟尿嘧啶(5-FU)；氟維司群；吉妥單抗奧唑米星；乙酸戈舍瑞林；羥基脲；替伊莫單抗；伊達比星；異環(huán)磷酰胺；甲磺酸伊馬替尼；干擾素α-2a；干擾素α-2b；伊立替康；來曲唑；甲酰四氫葉酸；左旋咪唑；洛莫司汀(CCNU)；二氯甲基二乙胺(氮芥)；乙酸甲地孕酮；美法侖(L-PAM)；巰基嘌呤(6-MP)；美司鈉；氨甲喋呤；甲氧沙林；絲裂霉素C；米托坦；米托蒽醌；苯丙酸諾龍；若莫單抗；LOddC；奧普瑞白介素；帕米膦酸鹽；培加酶；培門冬梅；乙二醇化非格司亭；噴司他?。贿卟翠逋?；普卡霉素；光神霉素；卟吩姆鈉；丙卡巴肼；阿的平；拉布立酶；利妥昔單抗；沙格司亭；鏈脲菌素；替比夫定(LDT)；滑石；他莫昔芬；替莫唑胺；替尼泊苷(VM-26)；睪內(nèi)酯；硫鳥嘌呤(6-TG)；噻替派；拓撲替康；托瑞米芬；托西莫單抗；曲妥珠單抗；維A酸(ATRA)；烏拉莫司汀；戊柔比星；伐托他濱(monoval LDC)；長春花堿；長春瑞濱；唑來膦酸鹽；及其任何混合物。

45.如第43或44段所述的超分子組合治療藥物，其中所述PI3K抑制劑選自由以下組成的組：PI103；P1828；LY294002；渥曼青霉素；脫甲綠膠酶素；IC486068；IC87114；GDC-0941；哌立福辛；CAL101；PX-866；IPI-145；BAY 80-6946；BEZ235；P6503；TGR1202；SF1126；INK1117；BKM120；IL147；XL765；Palomid 529；GSK1059615；ZSTK474；PWT33597；TG100-115；CAL263；GNE-447；CUDC-907；和AEZS-136，及其任何組合。

46.如第41-45段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述化學治療劑與所述組合物的組分綴合。

47.如第46段所述的超分子組合治療藥物，其中所述化學治療劑與脂質(zhì)或PEG綴合。

48.如第47段所述的超分子組合治療藥物，其中所述化學治療劑與膽固醇綴合。

49.如第1-48段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物進一步包括中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)、陰離子脂質(zhì)、兩親性脂質(zhì)、類固醇、可編程融合脂質(zhì)，或其任何組合。

50.如第1-49段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括至少一種(例如，一種、兩種、三種、四種、物種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同的)紫杉烷綴合物和至少一種(例如，一種、兩種、三種、四種、物種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同的)PI3K抑制劑-脂質(zhì)綴合物。

51.如第1-50段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括至少一種紫杉烷綴合物和至少一種(例如，一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同的)鉑-脂質(zhì)綴合物。

52.如第1-51段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括至少一種(例如，一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同的)紫杉烷綴合物和至少一種(例如，一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種不同的)抗體-脂質(zhì)綴合物。

53.如第1-52段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物包括：(i)至少一種紫杉烷綴合物；以及(ii)磷脂和PEG綴合的脂質(zhì)。

54.如第53段所述的超分子組合治療藥物，其中所述組合物以約10-0.1:10-0.1:10-0.1的比例包括所述綴合物、所述磷脂和所述PEG綴合的脂質(zhì)。

55.如第53或54段所述的超分子組合治療藥物，其中所述磷脂是磷脂酰膽堿，并且所述PEG綴合的脂質(zhì)是DSPE-PEG₂₀₀₀。

56.如第53-55段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述磷脂是磷脂酰膽堿。

57.如第56段所述的超分子組合治療藥物，其中所述磷脂酰膽堿選自由SOPC、POPC、卵磷脂酰膽堿、HSPC及其任何組合組成的組。

58.如第1-57段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述超分子組合治療藥物是納米顆粒。

59.如第58段所述的超分子組合治療藥物，其中所述納米顆粒的直徑為約5nm至約500nm。

60.如第59段所述的超分子組合治療藥物，其中所述納米顆粒的直徑為約5nm至約200nm。

61.如第1-60段中任一段所述的超分子組合治療藥物，其中所述組合物進一步包括藥學上可接受的載體。

62.一種治療癌癥的方法，所述方法包括向需要治療癌癥的受試者施用第1-61段中任一段的超分子組合治療藥物。

63.如第62段所述的方法，其中所述癌癥選自由以下組成的組：乳腺癌；卵巢癌；膠質(zhì)瘤；胃腸癌；前列腺癌；惡性腫瘤、肺惡性腫瘤、肝細胞惡性腫瘤、睪丸癌；宮頸癌；子宮內(nèi)膜癌；膀胱癌；頭頸癌；肺癌；胃-食道癌，以及婦科癌癥。

64.如第63段所述的方法，進一步包括向所述受試者共同施用一種或更多種另外的抗癌療法。

65.如第64段所述的方法，其中所述另外的療法選自由以下組成的組：外科手術(shù)、化學療法、放射療法、溫熱療法、免疫療法、激素療法、激光療法、抗血管生成療法，及其任何組合。

66.如第65段所述的方法，其中所述另外的療法包括向所述患者施用化學治療劑。

67.如第62-66段中任一段所述的方法，進一步包括向所述受試者共同施用免疫調(diào)節(jié)劑。

68.如第67段所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑激活針對癌癥細胞的免疫應(yīng)答。

69.如第68段所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑選自由以下組成的組：自然殺傷細胞、淋巴因子激活的殺傷細胞、細胞毒性T細胞和樹突細胞、抗PD-L1抗體、抗PD-1抗體、抗CD52抗體、抗VEGF-A抗體、抗CD30抗體、抗EGFR抗體、抗CD33抗體、抗CD20抗體、抗CTLA4抗體、抗HER-2抗體、干擾素和白介素。

可以通過編號段中的一個或更多個來描述另外的實例性實施方式：

1.一種用于預測癌癥患者對自組裝的超分子顆粒表現(xiàn)出比對鉑酸鹽和紫杉烷增強的應(yīng)答的似然度的方法，所述方法包括測定一個或更多個基因在從所述患者得到的樣品中的表達水平；以及預測所述患者會表現(xiàn)出陽性應(yīng)答的似然度，其中：選自CAV1、CAV2、CAV3、LDLR、SMAD7、SMURF2、NEDD4或PRKCA的所述一個或更多個基因相對于參照或?qū)φ盏脑黾拥谋磉_水平與對包括自組裝的超分子顆粒的治療的陽性應(yīng)答的似然度正相關(guān)。

2.如第1段所述的方法，其中所述一種或更多種基因選自由以下組成的組：EEA1、SRSF5、SMAD2、SNX3、PLCD1、OSBP、DNM1、DNM2、DNM3、SGK3、FAPP1、SMAD7、SMURF2、NEDD4、PRKCA、CDH-1、LDLR、CP、CD36、LYN、FLOT-1、FLOT-2、CA4、APOE、CAV1、CAV2、CAV3、LMAN2、LAT和STOM。

3.如第1或2段所述的方法，其中將所述一個或更多個基因的所述表達水平針對一個或更多個參照基因的表達水平歸一化，以獲得所述一個或更多個基因的歸一化的表達水平。

4.如第1-3段中任一段所述的方法，其中所述一個或更多個基因的所述表達水平是所述一個或更多個基因的RNA轉(zhuǎn)錄物的水平。

5.如第1-4段中任一段所述的方法，其中所述一個或更多個基因的所述表達水平是所述一個或更多個基因的多肽水平。

6.如第1-5段中任一段所述的方法，其中使用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)來測定所述一個或更多個基因的所述RNA轉(zhuǎn)錄物的水平。

7.如第1-6段中任一段所述的方法，其中所述樣品是活檢樣品。

8.如第1-7段中任一段所述的方法，其中所述樣品是腫瘤細胞。

9.如第1-8段中任一段所述的方法，其中所述是經(jīng)固定、石蠟包埋的組織樣品。

10.如第1-9段中任一段所述的方法，進一步包括向所述受試者施用超分子組合治療藥物。

可以通過編號段中的一個或更多個來描述本文公開的各個方面的一些另外的實例性實施方式：

1.一種包括綴合到脂質(zhì)的紫杉烷的綴合物，優(yōu)選地所述紫杉烷為卡巴他賽、紫杉醇或多西他賽，更優(yōu)選地所述紫杉烷為卡巴他賽。

2.如第1段所述的綴合物，其中所述紫杉烷是經(jīng)由接頭綴合到所述脂質(zhì)的。

3.如第2段所述的綴合物，其中所述接頭選自由以下組成的組：直接鍵合或者原子如氧或硫，單元如NR¹、C(O)、C(O)O、C(O)NR¹、SO、SO₂、SO₂NH或者原子鏈，如取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、雜芳烷基、雜芳烯基、雜芳炔基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烯基、雜環(huán)炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、烷基芳基烷基、烷基芳基烯基、烷基芳基炔基、烯基芳基烷基、烯基芳基烯基、烯基芳基炔基、炔基芳基烷基、炔基芳基烯基、炔基芳基炔基、烷基雜芳烷基、烷基雜芳烯基、烷基雜炔烯基、烯基雜芳烷基、烯基雜芳烯基、烯基雜芳炔基、炔基雜芳烷基、炔基雜芳烯基、炔基雜芳炔基、烷基雜環(huán)烷基、烷基雜環(huán)烯基、烷基雜環(huán)炔基、烯基雜環(huán)烷基、烯基雜環(huán)烯基、烯基雜環(huán)炔基、炔基雜環(huán)烷基、炔基雜環(huán)烯基、炔基雜環(huán)炔基、烷基芳基、烯基芳基、炔基芳基、烷基雜芳基、烯基雜芳基、炔基雜芳基，其中一個或更多個亞甲基可以被O、S、S(O)、SO₂、N(R¹)₂、C(O)、可裂解的連接基團、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)打斷或終止；其中R¹是氫、酰基、脂肪族或取代的脂肪族。

4.如第2或3段所述的綴合物，其中所述接頭包括至少一種可裂解的基團。

5.如第2-4段中任一段所述的綴合物，其中所述接頭包括以下中的一種或更多種：琥珀酸、富馬酸、丙炔酸、乙二醇、二甘醇，以及天然或非天然氨基酸。

6.如第2-5段中任一段所述的綴合物，其中所述接頭包括以下中的至少一種：草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、琥珀酸、乙二胺、天然或非天然氨基酸、乙二醇、二甘醇、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、丙烯酸、丁-2-烯酸、戊-2-烯酸、己-2-烯酸、丙-2-炔酸、丁-2-炔酸、戊-2-炔酸、己-2-炔酸、乙烯、丙烯、1-丁烯、1-戊烯、1-己烯、乙炔、丙炔、丁-1-炔、戊-1-炔，及其任何組合。

7.如第2-6段中任一段段所述的綴合物，其中所述接頭選自由以下組成的組：-C(O)CH₂CH₂C(O)NHCH₂CH₂NHC(O)-；-C(O)CH₂CH₂C(O)NHCH₂NHC(O)-；-C(O)CH₂OCH₂CH₂-；-C(O)CH₂CH₂OCH₂CH₂-；-C(O)CH₂OCH₂CH₂OCH₂CH₂-；-C(O)CH(R)NHC(O)CH₂-，其中R是H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)CH₂CH₃或CH₂-苯基；-C(O)CH(R)NHC(O)CH₂CH₂-，其中R是H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)CH₂CH₃或CH₂-苯基；-C(O)CH(R)NHC(O)(CH₂)_nC(O)-，其中R是H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)CH₂CH₃或CH₂-苯基，并且n是1、2或3；-C(O)CH(R)NHC(O)CH₂OCH₂CH₂-，其中R是H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)CH₂CH₃或CH₂-苯基；-C(O)C≡C(CH₂)_n-C(O)-，其中n是1、2或3；-C(O)C≡C(CH₂)_n-，其中n是0、1或2；-C(O)CH＝CH(CH₂)_nC(O)-，其中n是0、1、2或3；-C(O)CH＝CH(CH₂)_n-，其中n是1、2或3；以及-C(O)CH₂CH₂C(O)NHCH₂C(O)-。

8.如第1-7段中任一段所述的綴合物，其中所述脂質(zhì)選自由以下組成的組：膽固醇；1,3-丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯；10-十一碳烯酸；1-三十二烷醇；1-二十七烷醇；1-二十九烷醇；2-乙基己醇；雄烷；花生酸；花生四烯酸；花生醇；山萮酸；山萮醇；Capmul MCM C10；癸酸；癸醇；辛醇；辛酸；飽和脂肪醇C12-18的辛酸酯/癸酸酯；辛酸/癸酸甘油三酯；辛酸/癸酸甘油三酯；神經(jīng)酰胺磷酰膽堿(鞘磷脂，SPH)；神經(jīng)酰胺磷酰乙醇胺(鞘磷脂，Cer-PE)；神經(jīng)酰胺磷酰甘油；蠟塑酸；蠟酸；蠟酸；蠟醇；鯨蠟硬脂醇；鯨蠟醇聚醚-10；鯨蠟醇；膽烷；膽甾烷；膽固醇；順式-11-二十烯酸；順式-11-十八烯酸；順式-13-二十二碳烯酸；二十八烷醇；二均-γ-亞麻酸；二十二碳六烯酸；蛋黃卵磷脂；二十碳五烯酸；二十碳烯酸；反式油酸；反式亞麻醇；反式亞麻醇；反式油醇；芥酸；芥醇；雌烷；乙二醇二硬脂酸酯(EGDS)；格地酸；格地醇；甘油二硬脂酸酯(I型)EP(Precirol ATO 5)；甘油三辛酸酯/癸酸酯；甘油三辛酸酯/癸酸酯(355EP/NF)；甘油單辛酸酯(Capmul MCM C8EP)；甘油三乙酸酯；甘油三辛酸酯；甘油三辛酸酯/癸酸酯/月癸酸酯；甘油三辛酸酯/三癸酸酯；甘油三棕櫚酸酯(三棕櫚精)；三十一烷酸；二十一烷醇；二十一烷酸；二十七烷酸；十七烷酸；十七烷醇；三十六燒酸；異硬脂酸；異硬脂醇；紫膠蟲酸；月桂酸；月桂醇；二十四烷酸；二十四烷醇；反式亞油酸；亞油酸；亞麻醇；亞麻醇；十七烷酸；順5,8,11-二十碳三烯酸；蜂花酸；蜂花醇；褐煤酸；褐煤醇；三十烷醇；肉豆蔻酸；肉豆蔻腦酸；肉豆蔻醇；新癸酸；新庚酸；新壬酸；神經(jīng)酸；二十九烷酸；十九烷醇；十九烷酸；十九烷酸；油酸；油醇；棕櫚酸；棕櫚油酸；棕櫚油醇；壬酸；壬醇；二十五烷酸；十五烷醇；十五烷酸；磷脂酸(磷脂酸酯，PA)；磷脂酰膽堿(卵磷脂；PC)；磷脂酰乙醇胺(腦磷脂，PE)；磷脂酰肌醇(PI)；磷脂酰肌醇二磷酸酯(PIP2)；磷脂酰肌醇磷酸酯(PIP)；磷脂酰肌醇三磷酸酯(PIP3)；磷脂酰絲氨酸(PS)；聚甘油基-6-二硬脂酸酯；孕烷；丙二醇二癸酸酯；丙二醇二辛基癸酸酯；丙二醇二辛基癸酸酯；三十三烷酸；蓖麻油酸；蓖麻油醇；十六碳烯酸；大豆卵磷脂；硬脂酸；十八碳四烯酸；硬酯醇；三十三烷酸；十三烷醇；十三烷酸；三油精；十一烷醇；十一碳烯酸；十一烷酸；異油酸；α-亞麻酸；以及γ-亞麻酸。

9.如第1-8中任一段所述的綴合物，其中所述脂質(zhì)是膽固醇、α-生育酚或脂肪酸。

10.如第1-9中任一段所述的綴合物，其中所述綴合物選自由綴合物1-15和21-32組成的組。

11.一種包括第1-10中任一段的綴合物的組合物。

12.如第11段所述的組合物，其中所述組合物包括約1％至約99％(w/w)的所述綴合物。

13.如第11或12段所述的組合物，其中除所述綴合物之外，所述組合物進一步包括第一脂質(zhì)。

14.如第13段所述的組合物，其中所述第一脂質(zhì)是磷脂。

15.如第13或14段所述的組合物，其中所述組合物進一步包括第二脂質(zhì)。

16.如第15段所述的組合物，其中所述第二脂質(zhì)是磷脂。

17.如第14-16段中任一段所述的組合物，其中所述磷脂選自由以下組成的組：磷脂酰膽堿、酰基具有6至22個碳原子的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂、磷脂酰甘油，及其任何組合。

18.如第17段所述的組合物，其中所述磷脂選自由以下組成的組：磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、卵磷脂、β,γ-二棕櫚酰-α-卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、N-(2,3-二(9-(Z)-十八碳烯基氧基))-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化銨、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、腦磷脂、心磷脂、腦苷脂、磷酸二鯨蠟酯、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、棕櫚酰-油酰-磷脂酰膽堿、二-硬脂酰-磷脂酰膽堿、硬脂酰-棕櫚酰-磷脂酰膽堿、二-棕櫚酰-磷脂酰乙醇胺、二-硬脂酰-磷脂酰乙醇胺、二-肉豆蔻酰-磷脂酰絲氨酸、二-油烯基-磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)、卵磷脂酰膽堿(EPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(N-馬來酰亞胺甲基)-環(huán)己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)、1-硬脂酰-2-油酰磷脂酰膽堿(SOPC)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE)，及其任何組合。

19.如第18段所述的組合物，其中所述磷脂是SOPC。

20.如第16-18段中任一段所述的組合物，其中所述第一和第二脂質(zhì)的比例為約10:1至約1:10。

21.如第13-20段中任一段所述的組合物，其中所述組合物包括約1％至約99％的總脂質(zhì)。

22.如第13-21段中任一段所述的組合物，其中所述組合物以約10:1至約1:10的比例包括所述綴合物和總脂質(zhì)。

23.如第11-22段中任一段所述的組合物，其中所述組合物進一步包括聚乙二醇(PEG)。

24.如第23所述的組合物，其中所述PEG與所述組合物的組分綴合。

25.如第23或24段所述的組合物，其中所述PEG綴合到脂質(zhì)。

26.如第25段所述的組合物，其中所述PEG綴合的脂質(zhì)選自由以下組成的組：PEG綴合的二?；视秃投轷ジ视汀EG綴合的磷脂酰乙醇胺和磷脂酸、PEG綴合的神經(jīng)酰胺、PEG綴合的二烷基胺、PEG綴合的1,2-二酰氧基丙烷-3-胺，及其任何組合。

27.如第26段所述的組合物，其中所述PEG綴合的脂質(zhì)是1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)-2000](DSPE-PEG2000)。

28.如第11-27段中任一段所述的組合物，進一步包括靶向配體。

29.如第28段所述的組合物，其中所述靶向配體選自由以下組成的組：肽、多肽、蛋白、酶、擬肽、糖蛋白、抗體(單克隆抗體或多克隆抗體)及其部分或片段、凝集素、核苷、核苷酸、核苷和核苷酸類似物、核酸、單糖、二糖、三糖、寡糖、多糖、脂多糖、維生素、類固醇、激素、輔酶因子、受體、受體配體，及其類似物和衍生物。

30.如第29段所述的組合物，其中所述靶向配體結(jié)合癌細胞的表面上表達的蛋白、受體或標志物。

31.如第28或29段所述的組合物，其中所述靶向配體與所述組合物的組分綴合。

32.如第31所述的組合物，其中所述靶向配體與脂質(zhì)或PEG綴合。

33.如第11-32段中任一段所述的組合物，其中除所述綴合物之外，所述組合物進一步包括化學治療劑。

34.如第33段所述的組合物，其中所述組合物包括約1％至約99％(w/w)的所述化學治療劑。

35.如第34段所述的組合物，其中所述化學治療劑選自由以下組成的組：PI3K抑制劑；鉑化合物；拓撲異構(gòu)酶I和II抑制劑；烷化劑；微管抑制劑；血管生成抑制劑；及其任何組合。

36.如第33-35段中任一段所述的組合物，其中所述化學治療劑選自由以下組成的組：PI3K抑制劑、鉑化合物、吉西他濱；阿地白介素；阿侖單抗；阿利維甲酸；別嘌呤醇；六甲蜜胺；氨磷??；阿那曲唑；三氧化二砷；天冬酰胺酶；注射用卡介苗；貝沙羅汀膠囊；貝沙羅汀凝膠；博來霉素；靜脈用白消安；口服白消安；卡普睪酮；卡倍他濱；鉑酸鹽；卡莫司??；具有卡莫司汀植入劑的聚苯丙生；塞來昔布；苯丁酸氮芥；克拉屈濱；環(huán)磷酰胺；阿糖胞苷；阿糖胞苷脂質(zhì)體；達卡巴嗪；更生霉素；放線菌素D；阿法達貝泊汀；柔紅霉素脂質(zhì)體；柔紅霉素、道諾霉素；地尼白介素、右雷佐生；多西他賽；多柔比星；多柔比星脂質(zhì)體；屈他雄酮丙酸酯；Elliott’s B溶液；表柔比星；阿法依泊汀雌莫司?。涣姿嵋劳胁窜?；依托泊苷(VP-16)；依西美坦；非格司亭；氟尿苷(動脈內(nèi))；氟達拉濱；氟尿嘧啶(5-FU)；氟維司群；吉妥單抗奧唑米星；乙酸戈舍瑞林；羥基脲；替伊莫單抗；伊達比星；異環(huán)磷酰胺；甲磺酸伊馬替尼；干擾素α-2a；干擾素α-2b；伊立替康；來曲唑；甲酰四氫葉酸；左旋咪唑；洛莫司汀(CCNU)；二氯甲基二乙胺(氮芥)；乙酸甲地孕酮；美法侖(L-PAM)；巰基嘌呤(6-MP)；美司鈉；氨甲喋呤；甲氧沙林；絲裂霉素C；米托坦；米托蒽醌；苯丙酸諾龍；若莫單抗；LOddC；奧普瑞白介素；帕米膦酸鹽；培加酶；培門冬梅；乙二醇化非格司亭；噴司他?。贿卟翠逋?；普卡霉素；光神霉素；卟吩姆鈉；丙卡巴肼；阿的平；拉布立酶；利妥昔單抗；沙格司亭；鏈脲菌素；替比夫定(LDT)；滑石；他莫昔芬；替莫唑胺；替尼泊苷(VM-26)；睪內(nèi)酯；硫鳥嘌呤(6-TG)；噻替派；拓撲替康；托瑞米芬；托西莫單抗；曲妥珠單抗；維A酸(ATRA)；烏拉莫司?。晃烊岜刃?；伐托他濱(monoval LDC)；長春花堿；長春瑞濱；唑來膦酸鹽；及其任何混合物。

37.如第35或36段所述的組合物，其中所述PI3K抑制劑選自由以下組成的組：PI103；P1828；LY294002；渥曼青霉素；脫甲綠膠酶素；IC486068；IC87114；GDC-0941；哌立福辛；CAL101；PX-866；IPI-145；BAY 80-6946；BEZ235；P6503；TGR1202；SF1126；INK1117；BKM120；IL147；XL765；Palomid 529；GSK1059615；ZSTK474；PWT33597；TG100-115；CAL263；GNE-447；CUDC-907；和AEZS-136，及其任何組合。

38.如第33-37段中任一段所述的組合物，其中所述化學治療劑與所述組合物的組分綴合。

39.如第38段所述的組合物，其中所述化學治療劑與脂質(zhì)或PEG綴合。

40.如第39段所述的組合物，其中所述化學治療劑與膽固醇綴合。

41.如第40段所述的組合物，其中所述脂質(zhì)綴合的化學治療劑是

42.如第11-41段中任一段所述的組合物，其中所述組合物進一步包括這樣的免疫調(diào)節(jié)劑，所述免疫調(diào)節(jié)劑包括抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體，及其組合。

43.如第42段所述的組合物，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑與脂質(zhì)綴合。

44.如第43所述的組合物，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑與膽固醇綴合。

45.如第11-44段中任一段所述的組合物，其中所述其中組合物進一步包括中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)、陰離子脂質(zhì)、兩親性脂質(zhì)、類固醇、可編程融合脂質(zhì)，或其任何組合。

46.如第11-45段中任一段所述的組合物，其中所述組合物包括所述綴合物、磷脂和PEG綴合的脂質(zhì)。

47.如第46段所述的組合物，其中所述組合物包括比例為約10-0.1:10-0.1:10-0.1的所述綴合物、所述磷脂和所述PEG綴合的脂質(zhì)。

48.如第46-47段中任一段所述的組合物，其中所述磷脂是磷脂酰膽堿，并且所述PEG綴合的脂質(zhì)是DSPE-PEG2000。

49.如第46-48段中任一段所述的組合物，其中所述磷脂是磷脂酰膽堿。

50.如第49所述的組合物，其中所述磷脂酰膽堿選自由SOPC、POPC、卵磷脂酰膽堿、HSPC及其任何組合組成的組。

51.如第11-50段中任一段所述的組合物，其中所述組合物是脂質(zhì)體、乳劑或膠束。

52.如第11-51中任一段所述的組合物，其中所述組合物是納米顆粒。

53.如第52所述的組合物，其中所述納米顆粒的直徑為約5nm至約500nm。

54.如第53段所述的組合物，其中所述納米顆粒的直徑為約5nm至約200nm。

55.如第11-54段中任一段所述的組合物，其中所述組合物進一步包括藥學上可接受的載體。

56.一種治療癌癥的方法，所述方法包括向需要治療癌癥的受試者施用第11-55段中任一段的組合物。

57.如第56段所述的方法，其中所述癌癥選自由以下組成的組：乳腺癌；卵巢癌；膠質(zhì)瘤；胃腸癌；前列腺癌；惡性腫瘤、肺惡性腫瘤、肝細胞惡性腫瘤、睪丸癌；宮頸癌；子宮內(nèi)膜癌；膀胱癌；頭頸癌；肺癌；胃-食道癌，以及婦科癌癥。

58.如第56段所述的方法，進一步包括向所述受試者共同施用一種或更多種另外的抗癌療法。

59.如第58段所述的方法，其中所述另外的療法選自由以下組成的組：外科手術(shù)、化學療法、放射療法、溫熱療法、免疫療法、激素療法、激光療法、抗血管生成療法，及其任何組合。

60.如第59段所述的方法，其中所述另外的療法包括向所述患者施用化學治療劑。

61.如第56-60中任一段所述的方法，進一步包括向所述受試者共同施用免疫調(diào)節(jié)劑。

62.如第61段所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑激活針對癌癥細胞的免疫應(yīng)答。

63.如第62段所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑選自由以下組成的組：自然殺傷細胞、淋巴因子激活的殺傷細胞、細胞毒性T細胞和樹突細胞、抗PD-L1抗體、抗PD-1抗體、抗CD52抗體、抗VEGF-A抗體、抗CD30抗體、抗EGFR抗體、抗CD33抗體、抗CD20抗體、抗CTLA4抗體、抗HER-2抗體、干擾素和白介素。

對本公開的實施方式的描述并非旨在窮舉或?qū)⒈竟_限制到所公開的確切形式。盡管處于說明目的在本文中對本公開的具體實施方式和實施例進行了描述，但是如本領(lǐng)域技術(shù)人員將會意識到的，各種等同修改均有可能落入本公開的范圍內(nèi)。例如，雖然方法的步驟或功能以給定順序示出，但是其他實施方式可以以不同的順序來執(zhí)行功能，或者可以大體上同時執(zhí)行功能。本文提供的本公開的教導可以以適合的方式應(yīng)用至其他程序或方法?？梢詫⒈疚乃枋龅母鞣N實施方式組合以提供進一步的實施方式。如有需要，可以對本公開的方面進行修改，從而利用上述參考可應(yīng)用的組合、功能和概念，以提供本公開的再進一步的實施方式?？梢愿鶕?jù)詳細描述對本公開進行這些或其他改變。所有這樣的修改都旨在被包括在所附的權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。

任何前述實施方式中的具體要素均可以進行組合或替代其他實施方式中的要素。此外，盡管與本公開的某些實施方式相關(guān)的優(yōu)點已在這些實施方式的上下文中描述，其他實施方式也可以表現(xiàn)出這樣的優(yōu)點，但不是所有實施方式都必須展現(xiàn)出這樣的優(yōu)點才能落在本公開的范圍內(nèi)。

實施例

以下實施例對本發(fā)明的一些實施方式和方面進行說明。對相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員將顯而易見的是，可以在不改變本發(fā)明的精神或范圍的情況下進行各種修改、增加和替換等，并且這樣的修改和變化均涵蓋在隨后的權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的范圍內(nèi)。以下實施例不以任何方式限制本發(fā)明。

實施例1

在紫杉烷-脂質(zhì)綴合物1中，藥物卡巴他賽通過接頭綴合到膽固醇，所述接頭由琥珀酸和乙二胺組成。膽固醇和乙二胺的一個端通過氨基甲酸酯連接鍵共價結(jié)合，而另一個端通過酰胺連接鍵與琥珀酸結(jié)合。琥珀酸和卡巴他賽的C-2'羥基通過酯鍵結(jié)合。

在紫杉烷-脂質(zhì)綴合物2中，藥物卡巴他賽通過接頭綴合到膽固醇，所述接頭由琥珀酸和天然或非天然氨基酸組成。氨基酸的酸基團通過酯鍵連接到膽固醇，而氨基通過酰胺鍵連接到琥珀酸?？ò退惖腃-2'羥基經(jīng)由酯鍵連接到琥珀酸。

在紫杉烷-脂質(zhì)綴合物3中，藥物卡巴他賽通過接頭綴合到α-生育酚，所述接頭由琥珀酸和天然或非天然氨基酸組成。氨基酸的酸基團通過酯鍵連接到α-生育酚，而氨基通過酰胺鍵連接到琥珀酸。卡巴他賽的C-2'羥基經(jīng)由酯鍵連接到琥珀酸。

在紫杉烷-脂質(zhì)綴合物4中，藥物卡巴他賽通過接頭綴合到膽固醇，所述接頭由乙二醇和乙酸組成。乙二醇的一個端經(jīng)由酯鍵連接到膽固醇，而另一個羥基經(jīng)由亞甲基間隔區(qū)連接到酸基團。酸基團連接到卡巴他賽的C-2'羥基是通過酯鍵結(jié)合的。

在紫杉烷-脂質(zhì)綴合物5中，藥物卡巴他賽通過接頭綴合到膽固醇，所述接頭由乙二醇和丙烯酸組成。乙二醇的一個端經(jīng)由酯鍵連接到膽固醇，而另一個羥基經(jīng)由兩個亞甲基單元連接到酸基團。酸基團連接到卡巴他賽的C-2'羥基是通過酯鍵結(jié)合的。

在紫杉烷-脂質(zhì)綴合物6中，藥物卡巴他賽通過接頭綴合到膽固醇，所述接頭由二甘醇和乙酸組成。二甘醇的一個端經(jīng)由酯鍵連接到膽固醇，而另一個羥基經(jīng)由亞甲基間隔區(qū)連接到酸基團。酸基團連接到卡巴他賽的C-2'羥基是通過酯鍵結(jié)合的。

在紫杉烷-脂質(zhì)綴合物7中，藥物卡巴他賽通過接頭綴合到膽固醇，所述接頭由疏水性氨基酸和乙醇酸組成。乙醇酸的羥基經(jīng)由酯鍵連接到膽固醇，而酸端經(jīng)由酰胺鍵與氨基酸的氨基連接。卡巴他賽的C-2'羥基通過酯鍵連接到氨基酸的酸基。

另外的紫杉烷-脂質(zhì)綴合物：

紫杉醇-脂質(zhì)綴合物(16和17)

多西他賽-脂質(zhì)綴合物(18-20和33)和卡巴他賽-脂質(zhì)綴合物(21-32)

實施例2：膽固醇卡巴他賽綴合物1的合成

步驟a：向經(jīng)冰冷卻的處于二氯甲烷(40mL)中的乙二胺(22.2mL)溶液中逐滴添加處于二氯甲烷(50mL)中的膽固醇氯甲酸酯1.01(5g，11.13mmol)，添加持續(xù)45min的時間段，并在相同溫度下攪拌1h。移走冰浴，并將反應(yīng)混合物在室溫下另外攪拌20h。在完成(通過TLC核驗)之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅并用二氯甲烷(4x50mL)萃取，有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并在減壓下濃縮。利用甲醇-氯仿作為流動相，通過硅膠層析純化殘留物，從而以80％的產(chǎn)率獲得中間產(chǎn)物1.02。1.02的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ:5.30(s,1H),5.05(s,1H),4.42(s,1H),3.18(s,2H),2.79(s,2H),2.35-2.05(m,4H),2.0-1.85(m,2H),1.85-1.7(m,3H),1.67-0.78(m,膽固醇主鏈的33H),0.70(bs,3H)。1.02的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：156.48,139.84,122.46,77.23,76.98,76.73,74.41,56.71,56.20,50.04,43.02,42.32,41.51,39.76,39.51,38.56,37.01,36.56,36.19,35.78,31.89,28.20,28.17,27.98,24.27,23.85,22.80,22.76,22.54,22.52,21.05,19.31,18.71,11.84。1.02的IR(KBr)ν：1363.9,1338.8,2945.3,2891.3,2868.2,2850.8,1716.7,1697.4,1546.9,1535.3,1460.1,1369.5,1247.9,1018.4cm^-1。對[C₃₀H₅₂N₂O₂Na]，ESIMS m/z＝472[M+Na]⁺。熔點：163℃。

步驟b：向經(jīng)冰冷卻的處于干燥的二氯甲烷(20mL)中的中間產(chǎn)物1.02(10g，2.12mmol)溶液中添加吡啶(3.41mL，42.3mmol)，并且在氮氣氣氛中攪拌20分鐘。向反應(yīng)混合物中添加琥珀酸酐(1.06g，10.6mmol)，并且在室溫下另外攪拌12h。在完成之后，將反應(yīng)混合物用氯仿(50mL)稀釋，依次用0.1N HCl(3x 100mL)和鹽水(1x 100mL)洗滌。有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，在減壓下濃縮，并且通過硅膠層析純化殘留物，從而以良好的產(chǎn)率(1.06g，87％)提供中間產(chǎn)物1.03。1.03的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：6.79(s,1H),6.23(s,1H),5.39(s,1H),5.17(s,1H),4.50(bs,1H),3.38-3.23(m,4H),2.72(bs,2H),2.56(bs,2H),2.41-2.25(m,2H),2.08-1.94(m,2H),1.94-1.80(m,3H),1.67-0.78(m,33H),0.70(bs,3H)。1.03的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：173.63,166.59,157.03,139.55,122.30,74.49,56.50,55.93,49.84,49.03,48.87,48.71,42.11,39.53,39.31,38.31,36.77,36.36,35.98,35.60,31.69,31.66,30.38,29.06,28.02,27.91,27.80,24.07,23.61,22.56,22.30,20.83,19.07,18.47,11.62。1.03的IR(KBr)ν：3313.7,3267.4,3107.3,3080.3,2953.0,2935.6,2906.7,2889.4,2866.2,2850.8,1707.0,1649.1,1550.8,1533.4,1467.8,1415.8,1338.6,1246.0,1193.9 1149.6,1103.3,1031.9cm^-1。對[C₃₅H₅₆N₂O₅Na]⁺，ESIMS m/z＝595.4[M+Na]⁺。熔點：(160-170)℃。

步驟c：在0℃下，在氮氣氣氛中，在10mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物1.03(68mg，0,1196mmol)置于無水CH₂Cl₂(3mL)中。向該冷卻溶液先后加入DIPC(18μL，0.1196mmol)和DMAP(14.6mg，0.1196mmol)，并且在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液添加卡巴他賽(50mg，0.1196mmol)并在室溫下另外攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CH2Cl2萃取，有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，在減壓下濃縮，并且通過硅膠層析純化殘留物，從而以92％的產(chǎn)率獲得新的紫杉烷1。1的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：8.05(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(t,J＝7.2Hz,1H),7.45(t,J＝7.6Hz,2H),7.38-7.17(m,5H),6.34(s,1H),6.14(bs,1H),5.66-5.57(bs,1H),5.57(d,J＝6.5Hz,1H),5.41(bs,1H),5.34(s,1H),5.25(s,1H),5.16(s,1H),4.93(d,J＝9.2Hz,1H),4.75(s,1H),4.42(m,1H),4.24(d,J＝8.2Hz,1H),4.10(d,J＝8.3Hz,1H),3.88-3.68(m,3H),3.37(s,3H),3.35-3.14(m,5H),3.23(s,3H),2.75-2.57(m,4H),2.48-2.10(m,9H),2.00-0.73(m,57H),0.64(s,3H)；1的¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：205.04,171.82,171.48,169.72,168.43,166.97,155.26,139.65,139.54,134.88,133.58,130.15,129.24,128.87,128.59,128.29,126.56,122.60,84.14,82.44,81.45,80.61,80.36,78.82,76.40,74.69,72.07,57.06,56.76,56.64,56.08,49.97,47.26,43.27,42.38,42.26,40.63,40.52,39.67,39.47,38.49,36.92,36.52,36.13,35.75,34.80,31.96,31.86,31.81,30.92,29.40,28.14,27.98,26.63,24.25,23.78,23.36,22.79,22.74,22.53,20.99,19.29,18.67,14.42,11.82,10.35.1的IR(KBr)ν：3342.7,2965.6,2959.9,2939.6,2905.8,2869.2,2853.8,2825.8,1714.7,1660.78,1643.4,1529.6,1493.9,1466.9,1453.4,1367.5,1266.3,1247.0,1168.9,1103.3,1071.5,1060.8,1027.1,998.2cm^-1。對[C₇₉H₁₁₁N₃O₁₈Na]⁺，ESIMS m/z＝1412.6[M+Na]⁺。熔點：143℃。比旋度＝-14(C＝0.1，甲醇)。

實施例3：膽固醇卡巴他賽綴合物2的合成

步驟a：在250mL的單頸圓底燒瓶中，在氮氣氣氛中，將BocHNCH2COOH(2g，11.417mmol)、膽固醇2.01(4.414g，11.417mmol)和DMAP(697mg，5.708mmol)置于無水二氯甲烷(75mL)中，并在0℃下攪拌20分鐘。向該冷卻溶液中添加DCC(2.591g，12.558mmol)并在室溫下另外攪拌24h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而以60％的產(chǎn)率獲得中間產(chǎn)物2.02。2.02的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：5.36(d,J＝4.3Hz,1H),4.98(s,1H),4.72-4.59(m,1H),3.86(d,J＝5.3Hz,2H),2.36-0.65(m,膽固醇骨架的52H)。2.02的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：169.72,155.67,139.35,122.90,79.86,75.15,56.68,56.14,50.01,42.66,42.30,39.71,39.51,38.01,36.91,36.55,36.18,35.77,31.88,31.84,28.31,28.20,27.99,27.69,24.26,23.82,22.79,22.54,21.02,19.26,18.70,11.84。2.02的IR(KBr)ν：3384.1,2938.7,2868.7,1754.2,1726.7,1696.4,1677.9,1538.3,1519.4,1467.3,1424.3,1366.9,1283.9,1270.1,1202.3,1171.9,1055.6,1028.8,1007.4cm^-1。對[C₃₄H₅₇NO₄Na]⁺，ESIMS m/z＝566.2[M+Na]⁺；并且對2[C₃₄H₅₇NO₄]Na⁺，ESIMS m/z＝1109.5[2M+Na]⁺。熔點：84℃。

步驟b：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將中間產(chǎn)物2.02(1g粗提物，1.838mmol)置于無水CH₂Cl₂(5mL)中。向該反應(yīng)混合物中緩慢加入TFA(2mL)，持續(xù)5分鐘的時間段，并在室溫下攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，在減壓下除去溶劑，并且粗提的胺化合物2.03無需進一步純化而用于下一反應(yīng)。

步驟c：將從前一反應(yīng)中獲得的粗提的胺化合物2.03用二氯甲烷(20mL)稀釋并冷卻至0℃。向該經(jīng)冰冷卻的溶液中緩慢加入DIPEA(3mL，17.12mmol)，接著加入琥珀酸酐(856mg，8.56mmol)，并在室溫下攪拌12h。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水(10mL)猝滅，用1％的HCl溶液洗滌，用CH₂Cl₂(3X 10mL)萃取，經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，并通過硅膠純化，從而以88％的產(chǎn)率獲得純的酸中間產(chǎn)物2.04。2.04的¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ：6.47(t,J＝5Hz,1H),5.35(d,J＝4.8Hz,1H),4.65(m,1H),3.99(d,J＝5.1Hz,2H),2.68(t,J＝6.6Hz,2H),2.56(t,J＝6.7Hz,2H),2.37-0.57(m,膽固醇骨架的43H)。2.04的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：176.67,172.28,169.49,139.18,122.99,75.57,56.61,56.07,49.91,42.24,41.68,39.64,39.45,37.89,36.82,36.49,36.12,35.76,31.84,31.75,30.29,29.66,29.30,28.19,27.97,27.59,24.23,23.80,22.80,22.53,20.97,19.24,18.67,11.81。2.04的IR(KBr)ν：3311.1,2935.7,2902.8,2850.8,1751.4,1748.5,1745.5,1637.6,1544.9,1203.6cm^-1。對[C₃₃H₅₃NO₅Na]⁺，MALDI-TOF MS m/z＝566.29[M+Na]⁺；并且對[C₃₃H₅₃NO₅K]⁺，MALDI-TOF MS m/z＝582.27[M+K]⁺。熔點：(170-180)℃。

步驟d：在0℃下，在氮氣氣氛中，在10mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物2.04(137mg，0.2392mmol)置于無水CH₂Cl₂(10mL)中。向該冷卻溶液中先后添加DMAP(29mg，0.2392mmol)和DIPC(37μL，0.2392mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中添加卡巴他賽(100mg，0.1196mmol)并在室溫下另外攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化以獲得綴合物2，所述綴合物2在丙酮-己烷中進一步沉淀，從而76％的產(chǎn)率獲得純的產(chǎn)物。2的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.10(d,J＝7.6Hz,2H),7.61(t,J＝7.3Hz,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.39(t,J＝7.5Hz,2H),7.31(d,J＝7.5Hz,3H),6.19(bs,2H),5.62(m,2H),5.44(bs,1H),5.38(d,J＝4.1Hz,1H),5.30(s,1H),4.98(d,J＝9.3Hz,1H),4.81(s,1H),4.72-4.61(m,1H),4.29(d,J＝8.0Hz,1H),4.15(d,J＝8.3Hz,1H),3.99(m,2H),3.92-3.77(m,5H),3.42(s,3H),3.29(s,3H),2.85-2.63(m,3H),2.58-2.50(m,2H),2.45-2.30(m,5H),2.29-0.77(m,60H),0.67(s,3H)。2的¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：204.98,171.64,170.95,169.67,168.43,166.98,155.24,139.55,139.23,137.28,134.93,133.56,130.16,129.29,128.86,128.59,128.26,126.56,123.05,84.17,82.48,81.49,80.63,80.40,78.84,76.42,75.58,74.74,72.07,57.12,57.06,56.78,56.67,56.10,54.23,50.04,47.31,43.28,42.28,41.67,39.69,39.48,37.97,36.90,36.55,36.14,35.75,34.86,31.98,31.87,31.80,30.69,29.36,28.17,27.99,27.68,26.64,24.24,23.79,22.79,22.74,22.54,21.01,19.27,18.69,14.45,11.83,10.35。IO-502_01的IR(KBr)ν：3341.8,2967.6,2959.9,2938.6,2905.8,2870.2,2825.8,1724.4,1673.5,166.5,1661.7,1615.4,1573.9,1563.3,1523.8,1519.0,1497.7,1494.9,1464.0,1455.3,1440.8,1384.9,1326.1,1316.4,1267.2,1247.0,1224.8,1194.9,1169.8,1130.3,1103.3,1071.5,1060.8,1027.1,1018.4,997.2,94 9.0,920.0cm^-1。對[C₇₈H₁₀₈N₂O₁₈Na]⁺，ESIMS m/z＝1383.6[M+Na]⁺。熔點：141℃。比旋度＝-16(C＝0.1，甲醇)。

實施例4：膽固醇卡巴他賽綴合物6的合成

步驟b：向處于二氧六環(huán)(30mL)中的中間產(chǎn)物6.02(粗提物6g，0.011mol)溶液中添加二甘醇，并且允許回流6h。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水(20mL)猝滅，并用乙酸乙酯萃取。將有機層依次用水(3X 50mL)和鹽水(20mL)洗滌，并經(jīng)無水Na₂SO₄干燥。將有機層在減壓下濃縮，并利用甲醇-氯仿作為流動相，使用硅膠層析純化，從而獲得作為粘性液體的中間產(chǎn)物6.03(經(jīng)兩步后為52％)。6.03的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：5.34-5.31(m,1H),3.73-3.69(m,2H),3.67-3.58(m,6H),3.18(tt,J＝11.3,4.5H,1H),2.42-0.61(m,43H,膽固醇骨架)；

6.03的¹³CNMR(125MHz，CDCl₃)δ：140.69,121.73,79.62,72.50,70.72,67.38,61.81,56.73,56.11,50.13,42.29,39.74,39.48,38.91,37.15,36.83,36.15,35.76,31.91,31.84,28.26,28.21,27.99,24.26,23.79,22.80,22.54,21.03,19.35,18.69,11.83；對[C₃₁H₅₄O₃Na]，ESIMS m/z＝497.1[M+Na]⁺。

步驟c：在氮氣氣氛中，在100mL的單頸圓底燒瓶中，將NaH(594mg，14.84mmol)置于THF(10mL)中。反應(yīng)在0℃冰浴中冷卻，并緩慢加入處于THF(15mL)中的中間產(chǎn)物6.03(2.35g，4.95mmol)溶液。將所得到的溶液攪拌1h，而后緩慢加入溴乙酸乙酯并在室溫下攪拌6h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，用水猝滅并用乙酸乙酯(3X 15mL)萃取。將有機層用水洗滌并經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，濃縮并且通過硅膠層析純化殘留物，從而以46％的產(chǎn)率獲得中間產(chǎn)物6.04。6.04的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：5.34-5.29(m,1H),4.19(q,J＝7.1Hz,2H),4.14(s,2H),3.73-3.66(m,4H),3.62(s,4H),3.16(tt,J＝11.3,4.4H,1H),2.41-0.58(m,46H,Cholesterol backbone)；6.04的¹³CNMR(125MHz，CDCl₃)δ：170.49,140.93,121.53,79.48,70.87,70.84,70.66,68.72,67.23,60.78,56.74,56.11,50.14,42.28,39.74,39.48,39.01,37.20,36.83,36.15,35.76,31.91,31.85,28.31,28.21,27.98,24.26,23.79,22.80,22.53,21.03,19.35,18.68,14.19,11.82。對[C₃₅H₆₀O₅Na]，ESIMS m/z＝583.2[M+Na]。

步驟d：在100mL的單頸圓底燒瓶中，將酯中間產(chǎn)物6.04(1.272g，2.27mmol)置于20mL的THF/H₂O(3:1)中，并在冰浴中冷卻至0℃。向該經(jīng)冰冷卻的溶液中添加LiOH(136mg，5.67mmol)并在室溫下攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用Na2HSO4酸化，用乙酸乙酯萃取。有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮，并進行柱層析，從而以50％的產(chǎn)率獲得純的酸中間產(chǎn)物6.05。酸6.05的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：5.31(dd,J＝13.6,10.7Hz,1H),4.15(s,2H),3.77-3.59(m,8H),3.17(tt,J＝11.3,4.4Hz,1H),2.45-0.85(m,41H,來自膽固醇骨架),070(s,3H)；酸6.05的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：172.25,140.82,121.70,79.68,71.49,71.04,70.13,68.87,67.06,56.80,56.19,50.20,42.35,39.81,39.54,38.97,37.22,36.88,36.21,35.80,31.96,31.91,28.28,28.25,28.03,24.31,23.85,22.82,22.57,21.09,19.39,18.74,11.87。對[C₃₃H₅₆O₃Na]，ESIMS m/z＝555.366[M+Na]⁺。

步驟e：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將酸6.05(25.46mg，0.047mmol)置于無水CH₂Cl₂(5mL)中。向該冷卻溶液中先后加入DIPC(7μL，0.0478mmol)和DMAP(5.84mg，0.0478mmol)，并在相同溫度下攪拌2h。向該活化的酸溶液中添加卡巴他賽(20mg，0.0239mmol)并在室溫下另外攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而以95％的產(chǎn)率獲得綴合物6。6的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.09(d,J＝7.8Hz,2H),7.58(t,J＝7.3Hz,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,2H),7.37(t,J＝7.6Hz,2H),7.33-7.26(m,3H),6.24(t,J＝8.9Hz,1H),5.73(bs,1H),5.63(d,J＝7.0Hz,1H),5.47(bs,1H),5.35(d,J＝2.6Hz,1H),5.29(d,J＝5.1Hz,1H),4.97(d,J＝9.1Hz,1H),4.80(s,1H),4.33-4.24(m,1H),4.22(s,1H),4.18-4.09(m,2H),3.92-3.79(m,2H),3.79-3.54(m,8H),3.41(s,3H),3.28(s,3H),3.17-3.05(m,1H),2.74-2.62(m,1H),2.42(s,3H),2.37-0.73(m,來自膽固醇骨架的66H),0.64(s,3H)；6的¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ：204.97,169.84,169.66,168.00,167.00,155.30,140.86,139.50,137.22,134.99,133.54,130.16,129.27,128.89,128.61,128.21,126.52,121.58,84.17,82.50,81.58,80.66,80.29,79.51,78.82,77.32,76.46,74.69,72.28,70.88,70.62,68.16,67.16,57.07,56.81,56.75,56.13,54.11,50.16,47.33,43.33,42.29,39.75,39.49,38.98,37.19,36.83,36.16,35.75,34.95,32.01,31.92,31.86,28.29,28.19,28.15,27.98,26.63,24.26,23.79,22.78,22.53,21.03,20.99,19.34,18.69,14.41,11.82,10.35。6的熔點：138-142℃。對[C₇₈H₁₁₁NO₁₈Na]⁺，ESIMS m/z＝1372.5[M+Na]⁺。比旋度＝-15(C＝0.1，甲醇)。

實施例5：膽固醇卡巴他賽綴合物7的合成

步驟a：向經(jīng)冰冷卻的處于二氯甲烷(45mL)中的膽固醇2.01(10g，0.026mol)溶液中添加吡啶(15mL)，并攪拌15分鐘。向該溶液中添加對甲苯磺酰氯(9.8g，0.052mol)并在0℃下攪拌6h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用CHCl₃(20mL)稀釋，并依次用1N HCl(3X 50mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮，從而提供中間產(chǎn)物7.01，并且無需進一步純化而直接移走用于下一反應(yīng)。

步驟b：向處于二氧六環(huán)(45mL)中的粗提的中間產(chǎn)物7.01(10g，0.018mol)溶液中添加乙二醇(15mL)并回流4h。在完成之后，將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取，并依次用水(3X 50mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，在真空下濃縮，經(jīng)柱層析純化，從而經(jīng)兩步后以55％的產(chǎn)率提供中間產(chǎn)物7.02。7.02的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：5.33(d,J＝4Hz,1H),3.70(t,J＝4Hz,2H),3.57(t,J＝4Hz,2H),3.23-3.12(m,1H),2.42-0.56(m,44H,膽固醇骨架)；7.02的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：140.71,121.73,79.45,68.95,62.07,56.77,56.17,50.18,42.32,39.78,39.51,39.10,37.17,36.85,36.18,35.77,31.93,31.56,28.41,28.21,27.99,24.27,23.82,22.79,22.54,21.06,19.35,18.70,11.84。7.02的IR(KBr)ν：3452.2,2932.9,2862.7,1632.5,1466.2,1365.8,1275.5,1110.6,1062.8cm^-1。對[C₂₉H₅₀O₂Na]⁺，ESIMS m/z＝453.1[M+Na]⁺；并且對2[C₂₉H₅₀O₂]Na⁺，ESIMS m/z＝883.4[2M+Na]⁺。7.02的熔點：91℃。

步驟c：在室溫下，邊大力攪拌邊向處于丙酮-TFH混合物(30+5mL)中的中間產(chǎn)物7.02(1g，2.322mmol)溶液逐滴添加鉻酸(4mL)，添加持續(xù)1h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物通過薄的硅膠墊過濾，用丙酮洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并在減壓下濃縮，而后用水(10mL)稀釋并用EtOAc(2X 10mL)萃取。有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，濃縮并經(jīng)柱層析純化，從而以83％的產(chǎn)率提供中間產(chǎn)物7.03。7.03的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：5.42-5.36(m,1H),4.18(s,2H),3.38-3.29(m,1H),2.43-0.65(m,43H,來自膽固醇骨架)。7.03的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：173.95,139.98,122.33,80.33,65.14,56.69,56.10,50.06,42.27,39.70,39.48,38.62,36.95,36.73,36.14,35.75,31.88,31.81,29.67,28.19,28.03,27.98,24.25,23.79,22.80,22.53,21.02,19.30,18.68,11.82。對[C₂₉H₄₈O₃]，ESIMS m/z＝443.3[M-1]⁺。

步驟d：在0℃下，在氮氣氣氛中，在50mL的單頸圓底燒瓶中，將中間產(chǎn)物7.03(500mg，1.124mmol)置于無水CH₂Cl₂(15mL)中。向該冷卻溶液中先后加入EDCI(430mg，2.248mmol)和HOBT(303mg，2.248mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中先后添加DIPEA(0.8mL，4.497)和甘氨酸甲酯(282mg，2.248mmol)并在室溫下另外攪拌5h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而以92％的產(chǎn)率獲得中間產(chǎn)物7.04。7.04的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：7.11(s,1H),5.34(s,1H),4.07(s,2H),4.01(s,1H),3.75(s,3H),3.27-3.17(m,1H),2.40-0.57(m,43H,膽固醇骨架)。7.04的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：170.66,170.10,140.05,122.27,80.29,67.40,56.69,56.10,52.38,50.07,42.29,40.51,39.71,39.49,38.87,36.97,36.76,36.15,35.76,31.89,31.83,28.26,28.21,27.99,24.26,23.79,22.80,22.54,21.04,19.34,18.69,11.83。對[C₃₃H₅₇NO₄Na]，ESIMS m/z＝538.1[M+Na]⁺；并且對2[C₃₃H₅₇NO₄]Na，ESIMS m/z＝1053.3[2M+Na]⁺。

步驟e：在50mL的單頸圓底燒瓶中，將酯中間產(chǎn)物7.04(560mg，1.086mmol)置于THF/水(12mL，3:1)中，并冷卻至0℃。向該冷卻溶液中添加LiOH(136mg，3.258mmol)并在室溫下攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用飽和的NaHSO₄酸化直至pH為3，并用乙酸乙酯(3X 10mL)萃取。合起來的有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并經(jīng)柱層析純化，從而以良好的產(chǎn)率(390mg，65％)獲得純的酸7.05。7.05的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：7.20(s,1H),5.34(s,1H),4.10(s,1H),4.03(s,1H),3.29-3.17(m,1H),2.39-0.61(m,43H,來自膽固醇骨架)。7.05的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃+5μL CD3OD)δ：170.89,170.82,170.06,139.97,122.25,80.28,67.28,56.64,56.05,50.02,42.24,40.47,40.37,39.66,39.44,38.80,36.91,36.71,36.10,35.72,31.84,31.78,28.19,28.16,27.95,24.21,23.74,22.75,22.49,20.99,19.28,18.64,11.78。7.05的IR(KBr)ν：3388.9,2900.9,2868.1,2850.8,2632.8,1724.4,1710.8,1629.8,1544.9,1438.9,1350.2,1240.2,1226.7,1116.8cm^-1。對[C₃₁H₅₁NO₄]，ESIMS m/z＝500.3[M]⁺。

步驟f：在0℃下，在氮氣氣氛中，在10mL的單頸圓底燒瓶中，將酯中間產(chǎn)物7.05(23.9mg，0.0478mmol)置于無水CH₂Cl₂(2mL)中。向該冷卻溶液中先后加入DIPC(7μL，0.0478mmol)和DMAP(5.84mg，0.0478mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中添加卡巴他賽(20mg，0.0239mmol)，并在室溫下另外攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而以75％的產(chǎn)率獲得新的紫杉烷7。7的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.11(d,J＝7.8Hz,2H),7.61(t,J＝7.5Hz,1H),7.50(t,J＝7.7Hz,2H),7.40(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(d,J＝7Hz,1H),7.28(d,J＝7.4Hz,2H),7.05(t,J＝5.5Hz,1H),6.25(t,J＝7Hz,1H),5.64(d,J＝7.0Hz,1H),5.48(bs,1H),5.35(s,3H),4.99(d,J＝9.4Hz,1H),4.82(s,1H),4.31(d,J＝8.4Hz,1H),4.21-4.10(m,3H),4.00(s,2H),4.03-3.93(m,1H),3.89(dd,J＝10.6,6.5Hz,1H),3.83(t,J＝9.2Hz,2H),3.44(s,3H),3.30(s,3H),3.30-3.17(m,1H),2.70(m,1H),2.47-0.74(m,66H),0.68(d,J＝8.8Hz,2H)。7的¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ：205.02,170.73,169.76,169.01,167.94,167.12,155.17,140.08,139.44,135.18,133.67,130.25,129.32,129.11,128.72,128.48,126.40,122.43,84.24,82.59,81.68,80.75,80.67,80.38,78.95,75.22,74.81,72.45,67.40,57.25,57.16,56.91,56.78,56.21,50.16,47.42,43.43,42.38,40.39,39.79,39.58,38.97,37.04,36.85,36.24,35.84,35.01,32.10,31.99,31.93,28.29,28.21,28.08,26.75,24.35,23.89,23.05,22.88,22.63,22.41,21.13,21.08,19.43,18.78,14.52,11.92,10.45。7的IR(KBr)ν：1723.5,1677.2,1617.4,1573.0,1568.2,1464.0,1384.9,1365.6,1265.4,1247.0,1104.3cm^-1。7的熔點：155-160℃。對C76H106N2O17Na，ESIMS m/z＝1341.6[M+Na]⁺。比旋度＝-27(C＝0.1，甲醇)。

實施例6：膽固醇紫杉烷綴合物8的合成

步驟a：在℃下，在氮氣氣氛中，在250mL的單頸圓底燒瓶中，將膽固醇(10g，25.862mmol)置于THF(60mL)中。將氫化鈉(2.068g，51.724mmol)一點一點添加到反應(yīng)混合物中，添加持續(xù)10分鐘的一段時間。將所得到的溶液攪拌20分鐘，并且添加處于THF(20mL)中的丙烯酸甲酯(11.6mL，129.31mmol)中并在0℃下攪拌2h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，而后用水猝滅并用乙酸乙酯萃取，經(jīng)無水Na2SO4干燥，濃縮并通過硅膠層析經(jīng)柱層析純化，從而以20％的產(chǎn)率獲得產(chǎn)物8.01。

步驟b：在℃下，在氮氣氣氛中，在50mL的單頸圓底燒瓶中，將酯中間產(chǎn)物8.01(1g，4.231mmol)置于THF/水(12mL，3:1)中并冷卻至0℃。向該經(jīng)冰冷卻的溶液中添加LiOH(355mg，8.462mmol)并在室溫下攪拌2h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用飽和的NaHSO₄酸化直至pH為3，并用乙酸乙酯(3X 10mL)萃取。合起來的有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，并經(jīng)柱層析純化，從而以良好的產(chǎn)率(80％)獲得純的化合物8.02。8.02的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：5.36-5.29(m,1H),3.74(t,J＝8Hz,2H),3.23-3.13(m,1H),2.60(td,J＝8Hz,J＝4Hz,2H),2.39-0.56(m,43H,膽固醇骨架)。8.02的¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ：176.80,140.71,121.88,79.66,63.11,56.84,56.24,50.24,42.39,39.85,39.59,38.98,37.23,36.91,36.27,35.86,35.30,32.01,31.95,28.31,28.08,24.36,23.91,22.89,22.64,21.14,19.44,18.79,11.93。8.02的IR(KBr)ν：3784.1,2939.7,1713.8,1600.0,1444.3,1230.7,1107.5cm^-1。對[C₃₀H₅₀O₃Na]⁺，ESIMS m/z＝481[M+Na]⁺。

步驟c：在℃下，在氮氣氣氛中，在100mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物8.02(1g，2.179mmol)置于無水二氯甲烷(15mL)中。向該經(jīng)冷卻溶液中先后添加DIPC(0.67ml，4.359mmol)和DMAP(133mg，1.089mmol)并在室溫下攪拌0.5h。向該活化的酸溶液中先后加入DIPEA(1.5mL，8.716mmol)和甘氨酸甲酯(547mg，4.359mmol)并在室溫下另外攪拌6h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl3(2X 10mL)萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而獲得作為膠粘性固體的中間產(chǎn)物8.03(92％的產(chǎn)率)。8.03的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：7.02(bs,1H),5.31-5.25(m,1H),3.99(d,J＝5Hz,2H),3.69(s,3H),3.71-3.62(m,2H),3.21-3.10(m,1H),2.49(t,J＝5.6Hz,2H),2.37-0.55(m,43H,膽固醇骨架)。8.03的¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ：172.05,170.41,140.60,121.96,79.56,63.72,56.82,56.22,52.34,50.22,42.39,42.30,41.31,39.83,39.58,38.95,37.21,36.99,36.93,36.25,35.85,32.00,31.95,28.33,28.30,28.08,24.35,23.89,23.51,22.88,22.62,21.13,19.42,18.78,11.92。8.03的IR(KBr)ν：3787.1,3338.9,2934.0,1742.6,1643.4,1451.7,1208.4,1104.9cm^-1。對[C₃₃H₅₅NO₄Na]⁺，ESIMS m/z＝552[M+Na]⁺。

步驟d：在50mL的單頸圓底燒瓶中，將酯中間產(chǎn)物8.03(1g，1.887mmol)置于THF/水(21mL，3:1)中并冷卻至0℃。向該經(jīng)冰冷卻的溶液中添加LiOH(230mg，5.662mmol)并在室溫下攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用飽和的NaHSO₄酸化直至pH為3，并用乙酸乙酯(3X 10mL)萃取。合起來的有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，并經(jīng)柱層析純化，從而獲得作為白色固體的化合物8.04(800mg，82％)。8.04的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：5.32(d,J＝4.8Hz,1H),4.03(d,J＝4.8Hz,2H),3.72(dd,J＝12.4,7.9Hz,2H),3.25-3.14(m,1H),2.51(t,J＝5.5Hz,2H),2.37-0.55(m,43H,膽固醇骨架)。8.04的¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ：172.76,172.49,140.54,121.98,79.67,63.68,56.82,56.24,50.22,42.71,42.39,41.67,39.84,39.59,38.89,37.20,36.90,36.77,36.26,35.86,32.00,31.95,28.30,28.26,28.08,24.36,23.91,23.28,22.89,22.63,21.14,19.43,18.79,11.94。8.04的IR(KBr)ν；3366.9,3309.0,2954.1,2907.8,2868.3,2849.9,1933.7,1718.6,1601.9,1536.4,1465.9,1443.7,1365.6,1331.9,1280.8,1224.8,1202.7,1104.3cm^-1。熔點：146℃。對[C₃₂H₅₃NO₄Na]⁺，ESIMS m/z＝538.2[M+Na]⁺；并且對2[C₃₂H₅₃NO₄]Na⁺，ESIMS m/z＝1053.6[2M+Na]⁺。

步驟e：在0℃下，在氮氣氣氛中，在10mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物8.04(184mg，0.3588mmol)置于無水CH₂Cl₂(10mL)中。向該冷卻溶液中先后加入DIPC(111μL，0.7176mmol)和DMAP(58.4mg，0.4758mmol)，并在相同溫度下攪拌0.5h。向該活化的酸溶液中添加卡巴他賽(200mg，0.2392mmol)，并在室溫下另外攪拌5h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，以獲得作為白色固體的紫杉烷8，所述紫杉烷8進一步參與丙酮-己烷，從而以91％的產(chǎn)率獲得純的產(chǎn)物。8的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.09(d,J＝7.6Hz,4H),7.58(t,J＝7.4Hz,2H),7.47(t,J＝7.6Hz,4H),7.38(t,J＝7.4Hz,4H),7.29(dd,J＝16.6,7.4Hz,6H),7.05(t,J＝5.0Hz,2H),6.23(t,J＝8.8Hz,2H),5.62(d,J＝7.0Hz,2H),5.50-5.29(m,8H),4.97(d,J＝8.8Hz,2H),4.78(s,2H),4.29(d,J＝8.4Hz,2H),4.18-4.08(m,6H),3.91-3.78(m,4H),3.73-3.61(m,4H),3.41(s,6H),3.28(s,6H),3.17(dt,J＝15.6,5.6Hz,2H),2.74-2.62(m,2H),2.61(s,1H),2.46(t,J＝5.5Hz,4H),2.43-0.75(m,153H),0.64(d,J＝6.7Hz,6H)。of 8的¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ：204.95,172.02,169.70,169.25,167.87,167.02,155.12,140.43,139.34,136.96,135.12,133.57,130.16,129.25,129.00,128.63,128.37,126.35,121.93,84.14,82.51,81.59,80.71,80.54,79.50,78.82,77.20,76.45,75.08,74.73,72.27,63.51,57.17,57.05,56.80,56.69,56.12,54.02,53.77,50.12,47.32,43.34,42.28,41.04,39.72,39.48,38.82,37.12,36.82,36.76,36.15,35.74,34.95,32.01,31.91,31.86,31.71,29.24,28.21,28.18,28.13,27.99,26.67,24.27,23.79,22.80,22.54,21.06,21.01,19.39,18.70,14.31,11.82,10.36,-0.03。8的IR(KBr)ν：3334.6,2934.2,1716.9,1520.0,1454.5,1367.8,1264.3,1245.7,1172.5,1102.6,1068.5cm^-1。熔點：143℃。對[C₇₇H₁₀₈N₂O₁₇Na]⁺，ESIMS m/z＝1355.2[M+Na]⁺。比旋度＝-26(C＝0.1，甲醇)。

實施例7：膽固醇紫杉烷綴合物14的合成

步驟a：向經(jīng)冰冷卻的處于CH₂Cl₂(45mL)中的膽固醇(10g，0.026mol)溶液中添加吡啶(15mL)，并攪拌15分鐘。向該溶液中添加對甲苯磺酰氯(9.8g，0.052mol)并在0℃下攪拌6h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用CHCl₃(20mL)稀釋，而后依次用1N HCl(3X 50mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮，從而提供中間產(chǎn)物14.01，并且無需進一步純化而直接移走用于下一反應(yīng)。

步驟b：向處于二氧六環(huán)(45mL)中的粗提的中間產(chǎn)物14.01(0.026mol)溶液中添加乙二醇(15mL)，并且允許回流4h。核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取，并依次用水(3X 50mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并在減壓下濃縮，并經(jīng)柱層析純化，從而提供作為白色固體的中間產(chǎn)物14.02(經(jīng)兩步后產(chǎn)率為55％)。14.02的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：5.33(d,J＝4Hz,1H),3.70(t,J＝4Hz,2H),3.57(t,J＝4Hz,2H),3.23-3.12(m,1H),2.42-0.56(m,44H,膽固醇骨架)；14.02的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：140.71,121.73,79.45,68.95,62.07,56.77,56.17,50.18,42.32,39.78,39.51,39.10,37.17,36.85,36.18,35.77,31.93,31.89,31.56,28.41,28.21,27.99,24.27,23.82,22.79,22.54,21.06,19.35,18.70,14.08,11.84。14.02的IR(KBr)ν：3452.2,2932.9,2862.7,1632.5,1466.2,1365.8,1275.5,1110.6,1062.8,cm^-1。對[C₂₉H₅₀O₂Na]⁺，ESIMS m/z＝453.1[M+Na]⁺。14.02的熔點：91℃。

步驟c：在氮氣中，在50ml的圓底燒瓶中，將計算量的IBX(650mg，2.322mmol)置于DMSO(1.5ml)中，并且允許在室溫下攪拌15分鐘。將處于干燥THF(10ml)中的乙醇中間產(chǎn)物14.02(500mg，1.160mmol)添加到反應(yīng)混合物中，并允許在室溫下另外攪拌1.5小時，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用過量的乙醚猝滅，并通過薄的硅藻土(celite)墊過濾。合起來的有機層在真空中濃縮，并通過柱層析純化，從而以78％的產(chǎn)率獲得乙醛中間產(chǎn)物14.03。因為乙醛中間產(chǎn)物14.03經(jīng)過儲存后較不穩(wěn)定，無需進一步表征而將乙醛中間產(chǎn)物14.03用于下一反應(yīng)。

步驟d：在50ml的單頸圓底燒瓶中，將Wittig鹽(1g，2.733mmol)置于甲苯(7ml)中并在80℃下加熱。向該溶液中添加處于甲苯(5mL)中的乙醛中間產(chǎn)物14.03(390mg，0.911mmol)，并允許在相同溫度下攪拌過夜，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)物用己烷猝滅，以沉淀出未反應(yīng)的Wittig試劑，并通過薄的硅藻土墊過濾掉，并用己烷(15mL)洗滌。合起來的有機層在真空中濃縮，并通過柱層析純化，從而以良好的產(chǎn)率(85％)獲得酯中間產(chǎn)物14.04。14.04的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：6.84(dt,J＝16,4.4Hz,1H),5.97(dd,J＝16,1.5Hz,1H),5.33(d,J＝4.4Hz,1H),4.18-4.09(m,2H),3.24-3.13(m,1H),2.40-0.76(m,49H膽固醇骨架),0.66(s,3H)。14.04的¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：165.72,143.80,140.69,122.96,121.79,80.28,79.18,66.61,56.77,56.15,50.18,42.32,39.77,39.51,39.01,37.15,36.86,36.19,35.77,31.93,31.88,28.33,28.22,28.12,28.00,24.28,23.82,22.80,22.55,21.06,19.36,18.71,11.85。14.04的IR(KBr)ν：2934.4,1714.7,1448.9,1303.4,1278.3,1250.3,1153.4,1124.5,990.2,959.4cm^-1。對[C₃₅H₅₈O₃Na]⁺，ESIMS m/z＝549[M+Na]⁺。14.04的熔點：108℃。

步驟e：在50ml的單頸圓底燒瓶中，將酯中間產(chǎn)物14.04(380mg，0.722mmol)置于干燥DCM(7ml)中并冷卻至0℃。向該溶液中添加TFA(1mL)，在室溫下攪拌2.5小時，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物在真空中濃縮以除去TFA(在rota蒸氣上使用NaOH陷阱)。通過硅膠層析純化固體殘留物，從而以良好的產(chǎn)率獲得酸中間產(chǎn)物14.05。14.05的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：7.07(dt,J＝15.8,3.9Hz,1H),6.14-6.03(m,2H),5.37-5.28(m,1H),4.22-4.17(m,2H),3.19(dt,J＝15.4,5.4Hz,1H),2.42-0.73(m,42H膽固醇骨架),0.64(s,3H)。14.05的¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：171.50,148.06,140.53,121.90,120.09,79.46,66.47,56.76,56.16,50.17,42.31,39.77,39.51,38.98,37.13,36.85,36.18,35.77,31.92,31.87,28.32,28.22,28.00,24.27,23.82,22.80,22.55,21.06,19.35,18.71,11.85。14.05的IR(KBr)ν：2935.4,1694.1,1448.9,1302.0,1194.4,959.4cm^-1。對[C₃₁H₅₀O₃]⁺，ESIMS m/z＝469.2[M-1]⁺。14.05的熔點：180℃。

步驟f：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將酸14.05(112mg，0.2393mmol)置于無水CH₂Cl₂(10mL)中。向該冷卻溶液先后加入DMAP(14mg，0.1196mmol)和DIPC(37μL，0.2393mmol)，并且在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液添加卡巴他賽(100mg，0.1196mmol)并在室溫下另外攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl₃萃取，有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，以獲得作為白色固體的新的紫杉烷14，所述紫杉烷14在丙酮-己烷中進一步沉淀，從而以68％的產(chǎn)率獲得純的產(chǎn)物。14的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.08(d,J＝7.2Hz,2H),7.59(t,J＝7.5Hz,1H),7.48(t,J＝7.6Hz,2H),7.40-7.33(m,2H),7.32-7.25(m,2H),7.02(d,J＝15.8Hz,1H),6.32(t,J＝8Hz,1H),6.14(d,J＝15.8Hz,1H),5.62(d,J＝7Hz,1H),5.44(bs,1H),5.39-5.29(m,3H),4.97(d,J＝9.5Hz,1H),4.81(s,1H),4.29(d,J＝8.4Hz,1H),4.21-4.11(m,1H),3.88(dd,J＝10.5Hz,6.4Hz,1H),3.83(d,J＝6.9Hz,1H),3.40(s,3H),3.28(s,3H),3.24-3.13(m,1H),2.74-2.62(m,1H),2.41(s,3H),2.37-0.74(m,66H,膽固醇骨架),0.66(s,3H)。14的¹³CNMR(125MHz，CDCl₃)δ：204.97,169.68,168.32,167.01,165.30,155.19,147.97,140.45,139.68,137.38,134.87,133.55,130.15,129.30,128.87,128.61,128.18,126.41,121.99,118.84,84.18,82.50,81.54,80.65,80.43,79.52,78.88,76.44,74.77,74.36,71.99,66.47,57.07,56.81,56.74,56.14,50.16,47.35,43.30,42.31,42.22,39.75,39.49,38.96,37.10,36.84,36.17,35.76,34.94,32.00,31.92,31.86,31.56,28.31,28.20,28.14,27.99,26.63,24.26,23.80,23.47,22.79,22.75,22.53,21.06,20.99,19.35,18.70,14.44,14.09,11.84,10.36。14的IR(KBr)ν：3809.5,3518.2,2924.3,1728.7,1608.4,1474.1,1267.1,1172.0cm^-1。對[C₇₆H₁₀₅NO₁₆Na]⁺，ESIMS m/zof 14＝1310.3[M+Na]⁺。14的熔點：142℃。比旋度＝-8(C＝0.1，甲醇)。

實施例8：膽固醇紫杉烷綴合物16的合成

步驟a：在250mL的單頸圓底燒瓶中，在氮氣氣氛中，將BocHNCH2COOH(2g，11.417mmol)、膽固醇2.01(4.414g，11.417mmol)和DMAP(697mg，5.708mmol)置于無水二氯甲烷(75mL)中，并在0℃下攪拌20分鐘。向該冷卻溶液中添加DCC(2.591g，12.558mmol)并在室溫下另外攪拌24h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而以60％的產(chǎn)率獲得中間產(chǎn)物2.02。2.02的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：5.36(d,J＝4.3Hz,1H),4.98(s,1H),4.72-4.59(m,1H),3.86(d,J＝5.3Hz,2H),2.36-0.65(m,膽固醇骨架的52H)。2.02的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：169.72,155.67,139.35,122.90,79.86,75.15,56.68,56.14,50.01,42.66,42.30,39.71,39.51,38.01,36.91,36.55,36.18,35.77,31.88,31.84,28.31,28.20,27.99,27.69,24.26,23.82,22.79,22.54,21.02,19.26,18.70,11.84。2.02的IR(KBr)ν：3384.1,2938.7,2868.7,1754.2,1726.7,1696.4,1677.9,1538.3,1519.4,1467.3,1424.3,1366.9,1283.9,1270.1,1202.3,1171.9,1055.6,1028.8,1007.4cm^-1。對[C₃₄H₅₇NO₄Na]⁺，ESIMS m/z＝566.2[M+Na]⁺；并且2[C₃₄H₅₇NO₄]Na⁺對，ESIMS m/z＝1109.5[2M+Na]⁺。熔點：84℃。

步驟b：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將中間產(chǎn)物2.02(1g粗提物，1.838mmol)置于無水CH₂Cl₂(5mL)中。向該反應(yīng)混合物中緩慢加入TFA(2mL)，持續(xù)5分鐘的時間段，并在室溫下攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，在減壓下除去溶劑，并且粗提的胺化合物2.03無需進一步純化而用于下一反應(yīng)。

步驟c：將從前一反應(yīng)中獲得的粗提的胺化合物2.03用二氯甲烷(20mL)稀釋并冷卻至0℃。向該經(jīng)冰冷卻的溶液中緩慢加入DIPEA(3mL，17.12mmol)，接著加入琥珀酸酐(856mg，8.56mmol)，并在室溫下攪拌12h。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水(10mL)猝滅，用1％的HCl溶液洗滌，用CH₂Cl₂(3X 10mL)萃取，經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，并通過硅膠純化，從而以88％的產(chǎn)率獲得純的酸中間產(chǎn)物2.04。2.04的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：6.47(t,J＝5Hz,1H),5.35(d,J＝4.8Hz,1H),4.65(m,1H),3.99(d,J＝5.1Hz,2H),2.68(t,J＝6.6Hz,2H),2.56(t,J＝6.7Hz,2H),2.37-0.57(m,43H of膽固醇骨架)。2.04的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：176.67,172.28,169.49,139.18,122.99,75.57,56.61,56.07,49.91,42.24,41.68,39.64,39.45,37.89,36.82,36.49,36.12,35.76,31.84,31.75,30.29,29.66,29.30,28.19,27.97,27.59,24.23,23.80,22.80,22.53,20.97,19.24,18.67,11.81。2.04的IR(KBr)ν：3311.1,2935.7,2902.8,2850.8,1751.4,1748.5,1745.5,1637.6,1544.9,1203.6cm^-1。對[C₃₃H₅₃NO₅Na]，MALDI-TOF MS m/z＝566.29[M+Na]⁺；并且對[C₃₃H₅₃NO₅K]，MALDI-TOF MS m/z＝582.27[M+K]⁺。熔點：(170-180)℃。

步驟d：在0℃下，在氮氣氣氛中，在10mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物2.04(286mg，0.5269mmol)置于無水CH₂Cl₂(10mL)中。向該冷卻溶液中先后添加DMAP(85mg，0.7026mmol)和DIPC(109μL,0.7026mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中添加卡巴他賽(300mg，0.3513mmol)并在室溫下另外攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析(使用乙酸乙酯-己烷作為流動相)純化，從而獲得作為固體的新的紫杉烷16。16的¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：8.13-8.08(m,2H),7.79-7.73(m,2H),7.59(t,J＝7.4Hz,1H),7.53-7.25(m,10H),6.26(s,1H),6.17(t,J＝8.7Hz,1H),6.08(bs,1H),5.89(dd,J＝8.7,4.1Hz,1H),5.64(d,J＝7.1Hz,1H),5.44(d,J＝4.1Hz,1H),5.35(d,J＝4.9Hz,1H),4.94(d,J＝7.9Hz,1H),4.62-4.55(m,1H),4.41(dd,J＝10.9,6.7Hz,1H),4.28(d,J＝8.5Hz,1H),4.16(d,J＝8.4Hz,1H),3.85(qd,J＝18.4,5.1Hz,2H),3.77(d,J＝7.0Hz,1H),2.75(t,J＝7.0Hz,2H),2.58-2.46(m,3H),2.38(s,3H),2.20(s,3H),1.89(s,3H),1.65(s,3H),1.20(s,3H),1.10(s,3H),2.34-0.63(m,35H,來自紫杉醇和膽固醇骨架的脂肪族質(zhì)子)。16的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：203.81,171.66,171.19,171.01,169.81,169.38,168.11,167.26,166.97,142.79,139.22,137.06,133.74,133.65,132.72,131.87,130.20,129.22,129.00,128.68,128.59,128.45,127.28,126.75,123.04,84.42,81.00,79.09,76.39,75.58,75.08,74.36,72.07,71.77,58.46,56.66,56.11,53.13,49.99,45.56,43.12,42.29,41.59,39.68,39.48,37.96,36.83,36.54,36.15,35.75,35.50,35.44,31.88,31.81,30.62,29.34,28.18,27.98,27.63,26.77,24.25,23.79,22.78,22.62,22.53,22.08,21.00,20.79,19.25,18.69,14.79,11.83,9.57。對[C₈₀H₁₀₂N₂O₁₈Na]⁺，ESIMS m/z＝1403.1[M+Na]⁺。CHN分析(所得到的百分比)：C＝69.45,H＝7.74,N＝2.21(計算出的百分比：C＝69.64,H＝7.45,N＝2.03)。

實施例9：新的MEK抑制劑34的合成

步驟a：在250mL的單頸圓底燒瓶中，在氮氣氣氛中，將BocHNCH2COOH(2g，11.417mmol)、膽固醇2.01(4.414g，11.417mmol)和DMAP(697mg，5.708mmol)置于無水二氯甲烷(75mL)中，并在0℃下攪拌20分鐘。向該冷卻溶液中添加DCC(2.591g，12.558mmol)并在室溫下另外攪拌24h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而以60％的產(chǎn)率獲得中間產(chǎn)物2.02。2.02的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：5.36(d,J＝4.3Hz,1H),4.98(s,1H),4.72-4.59(m,1H),3.86(d,J＝5.3Hz,2H),2.36-0.65(m,膽固醇骨架的52H)。2.02的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：169.72,155.67,139.35,122.90,79.86,75.15,56.68,56.14,50.01,42.66,42.30,39.71,39.51,38.01,36.91,36.55,36.18,35.77,31.88,31.84,28.31,28.20,27.99,27.69,24.26,23.82,22.79,22.54,21.02,19.26,18.70,11.84.2.02的IR(KBr)ν：3384.1,2938.7,2868.7,1754.2,1726.7,1696.4,1677.9,1538.3,1519.4,1467.3,1424.3,1366.9,1283.9,1270.1,1202.3,1171.9,1055.6,1028.8,1007.4cm^-1。對[C₃₄H₅₇NO₄Na]⁺，ESIMS m/z＝566.2[M+Na]⁺；并且對2[C₃₄H₅₇NO₄]Na⁺，ESIMS m/z＝1109.5[2M+Na]⁺。熔點：84℃。

步驟b：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將中間產(chǎn)物2.02(1g粗提物，1.838mmol)置于無水CH₂Cl₂(5mL)中。向該反應(yīng)混合物中緩慢加入TFA(2mL)，持續(xù)5分鐘的時間段，并在室溫下攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，在減壓下除去溶劑，并且粗提的胺化合物2.03無需進一步純化而用于下一反應(yīng)。

步驟c：將從前一反應(yīng)中獲得的粗提的胺化合物2.03用二氯甲烷(20mL)稀釋并冷卻至0℃。向該經(jīng)冰冷卻的溶液中緩慢加入DIPEA(3mL，17.12mmol)，接著加入琥珀酸酐(856mg，8.56mmol)，并在室溫下攪拌12h。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水(10mL)猝滅，用1％的HCl溶液洗滌，用CH₂Cl₂(3X 10mL)萃取，經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，并通過硅膠純化，從而以88％的產(chǎn)率獲得純的酸中間產(chǎn)物2.04。2.04¹H NMR的(500MHz，CDCl₃)δ：6.47(t,J＝5Hz,1H),5.35(d,J＝4.8Hz,1H),4.65(m,1H),3.99(d,J＝5.1Hz,2H),2.68(t,J＝6.6Hz,2H),2.56(t,J＝6.7Hz,2H),2.37-0.57(m,膽固醇骨架的43H)。2.04的¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ：176.67,172.28,169.49,139.18,122.99,75.57,56.61,56.07,49.91,42.24,41.68,39.64,39.45,37.89,36.82,36.49,36.12,35.76,31.84,31.75,30.29,29.66,29.30,28.19,27.97,27.59,24.23,23.80,22.80,22.53,20.97,19.24,18.67,11.81。2.04的IR(KBr)ν：3311.1,2935.7,2902.8,2850.8,1751.4,1748.5,1745.5,1637.6,1544.9,1203.6cm^-1。對[C₃₃H₅₃NO₅Na]，MALDI-TOF MS m/z＝566.29[M+Na]⁺；并且對[C₃₃H₅₃NO₅K]，MALDI-TOF MS m/z＝582.27[M+K]⁺。熔點：(170-180)℃。

步驟d：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物2.04(137mg，0.2392mmol)置于無水CH₂Cl₂(10mL)中。向該冷卻溶液中先后添加DMAP(29mg，0.2392mmol)和DIPC(37μL，0.2392mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中添加GDC 0623(100mg，0.1196mmol)并在室溫下另外攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而獲得新的MEK抑制劑33。

實施例10：新的紫杉烷28的合成

步驟a：在0℃下，在用明火烘干的雙頸圓底燒瓶中，將三氯氧化磷(1.3mL，13.930mmol)置于無水THF(50mL)中。邊大力攪拌邊將處于THF(100mL)中的膽固醇(Cholesteryl alcohol)7.02(5g，11.609mmol)和三乙胺(1.78mL，24.18mmol)緩慢滴入反應(yīng)混合物中。鹽酸三乙胺緩慢地從反應(yīng)混合物中沉淀。反應(yīng)在氬氣保護下另外持續(xù)5小時，并且無需任何處理將中間產(chǎn)物28.01直接用于下一步。

步驟b：在0℃下，強力攪拌下將處于THF(50mL)中的三乙胺(3.88mL，34.825mmol)和乙醇胺(0.834mL，13.93mmol)緩慢添加到上述反應(yīng)混合物中。鹽酸三乙胺緩慢地從溶液中沉淀，并且反應(yīng)在氮氣保護下另外持續(xù)5小時。在完成之后，通過抽濾除去鹽酸三乙胺，并蒸發(fā)掉溶劑，以獲得作為白色膠體(gum)的中間產(chǎn)物28.02，所述中間產(chǎn)物28.02無需進一步純化直接用于下一步。

步驟c：在室溫下將中間產(chǎn)物28.02溶解于THF(50mL)中。一次性加入乙酸-水溶液(處于40mL水中的15g乙酸)，并在氮氣氣氛保護下，在70℃下加熱5h。然后，通過與乙醇進行共沸蒸餾濃縮混合物，并且通過邊大力攪拌邊將溶液緩慢滴入到丙酮中，沉淀出開環(huán)產(chǎn)物28.03。沉淀通過抽濾收集，經(jīng)高真空干燥，而后直接用于下一步。

步驟d：在室溫下，將白色膠粘性中間產(chǎn)物28.03置于二氯甲烷(50mL)中，并將吡啶(10mL)添加到反應(yīng)混合物中。向該溶液中一次性加入琥珀酸氫化物(succinic hydride)(5.5g，55.6mmol)，并在氮氣保護下，在室溫下攪拌12h。在完成之后，將反應(yīng)物用CHCl3(20mL)稀釋，并用HCl溶液((1N，250mL)洗滌，而后在減壓下濃縮。使黏糊物(slurry)在丙酮中沉淀，以獲得中間產(chǎn)物28.04(1.5g，從28.01開始的經(jīng)四步后為19.7％)。

步驟e：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物28.04(152mg，0.2392mmol)置于無水二氯甲烷(5mL)中。向該冷卻溶液中先后添加DIPC(37μL，0.2392mmol)和DMAP(29mg，0.2392mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中添加卡巴他賽(100mg，0.1196mmol)并在室溫下另外攪拌5h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用氯仿(10mL)稀釋，并用0.1N HCl(10mL)溶液洗滌。在減壓下蒸發(fā)有機層，并在硅上純化殘留物以獲得新的紫杉烷28。

實施例11：新的紫杉烷29的合成

步驟a：在100mL的單頸圓底燒瓶中，將溴代十八烷29.01(31.122g，93.632mmol)和NBoc乙二胺29.02(5g，31.211mmol)置于乙腈(100mL)中，并在氮氣氣氛中，在無水(17.253g，124.844mmol)存在下回流24h。在完成之后，將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮并用乙酸乙酯(100mL)稀釋。將有機層用水(100mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥并濃縮。在硅膠上純化殘留物，以提供中間產(chǎn)物29.03。

步驟b：在250mL的單頸圓底燒瓶中，將中間產(chǎn)物29.03(5g，82.685mmol)和碘甲烷(7.72mL，124.028mmol)置于丙酮(100mL)中，并在氮氣氣氛中回流24h。在完成之后，將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并用己烷(10mL X 2)洗滌固體殘留物，以獲得作為白色粉末的中間產(chǎn)物29.04。

步驟c：在0℃下，在氮氣氣氛中，在100mL的單頸圓底燒瓶中，將中間產(chǎn)物29.04(2g，2.477mmol)置于無水二氯甲烷(12mL)中。向該溶液中添加TFA(3mL)，并在相同溫度下攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并且無需進一步純化而將固體殘留物29.05用于下一反應(yīng)。

步驟d：將從前一反應(yīng)中獲得的粗提的胺中間產(chǎn)物29.05用二氯甲烷(20mL)稀釋并冷卻至0℃。向該經(jīng)冰冷卻的溶液中緩慢添加DIPEA(2.21mL，12.385mmol)，接著加入琥珀酸酐(495mg，4.954mmol)，并在室溫下攪拌12h。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水(10mL)猝滅，用1％的HCl溶液洗滌，用CH₂Cl₂(3X 10mL)萃取，經(jīng)無水Na₂SO₄干燥，并通過硅膠純化，從而獲得純的酸中間產(chǎn)物29.06。

步驟e：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物29.06(193mg，0.2392mmol)置于無水二氯甲烷(5mL)中。向該冷卻溶液中先后添加DIPC(37μL，0.2392mmol)和DMAP(29mg，0.2392mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中添加卡巴他賽(100mg，0.1196mmol)并在室溫下另外攪拌5h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用氯仿(10mL)稀釋，并用0.1N HCl(10mL)溶液洗滌。在減壓下蒸發(fā)有機層，并在硅上純化殘留物，以獲得新的紫杉烷29。

實施例12：脂質(zhì)官能化的吉西他濱的合成

已知，作為針對各種范圍的腫瘤起作用的抗癌劑，吉西他濱由于其非常短的血漿半衰期而以非常高的劑量(1000mg/m²)施用。吉西他濱本身是水溶性的。由疏水性脂質(zhì)通過接頭對該分子進行官能化將賦予該分子兩親性。這些化合物生成超分子組裝體的劑型可以針對其短的血漿半衰期提供保護，并且也可以有助于增強滲透性和保留性(EPR)作用。在本文中我們描述了用不同的接頭由脂質(zhì)對吉西他濱進行N(方案11)和O(方案12)末端官能化，以產(chǎn)生一些列兩親物(化合物35至41)。由這些分子形成超分子組裝體(劑型)也在本申請的其他部分進行了描述。

用于脂質(zhì)官能化的吉西他濱化合物35、37、39和41的合成方案

實施例13：膽固醇紫杉烷綴合物7的替代合成

步驟a：在0℃下，在氮氣氣氛中，在100mL的雙頸圓底燒瓶中，將膽固醇2.01(2g，5.172mmol)置于無水THF(20mL)中。將NaH(2.859mg，20.690mmol)一點一點添加到反應(yīng)混合物中，添加持續(xù)5分鐘的時間段。將所得到的溶液攪拌20分鐘，并且緩慢添加溴乙酸乙酯(1.191mL，10.354mmol)并在室溫下另外攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并將化合物用乙酸乙酯(2X 20mL)萃取。合起來的有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析經(jīng)柱層析純化，從而以10％的產(chǎn)率獲得中間產(chǎn)物7.01。

步驟b：在100mL的單頸圓底燒瓶中，將酯中間產(chǎn)物7.01(200mg，0.432mmol)置于8mL的THF/H₂O(3:1)中，并在冰浴中冷卻至0℃。向該經(jīng)冰冷卻的溶液中添加LiOH(35mg，0.846mmol)并在室溫下攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用Na2HSO4酸化，用乙酸乙酯萃取。有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮，而后進行柱層析，從而以60％的產(chǎn)率獲得純的酸中間產(chǎn)物7.02。

步驟c：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將中間產(chǎn)物7.02(100mg，0.2248mmol)置于無水CH₂Cl₂(5mL)中。向該冷卻溶液中先后加入EDCI(86.2mg，0.4497mmol)和HOBT(60mg，0.4497mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中先后添加DIPEA(0.15mL，0.8995)和甘氨酸甲酯(56mg，0.4497mmol)，并在室溫下另外攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而以82％的產(chǎn)率獲得結(jié)合產(chǎn)物7.03。

步驟d：在50mL的單頸圓底燒瓶中，將酯中間產(chǎn)物7.03(96mg，0.186mmo)置于THF/水(4mL，3:1)中，并冷卻至0℃。向該冷卻溶液中添加LiOH(23.4mg，0.558mmol)并在室溫下攪拌2h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用飽和的NaHSO₄酸化直至pH為3，并用乙酸乙酯(3X 10mL)萃取。合起來的有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并經(jīng)柱層析純化，從而以80％的產(chǎn)率獲得純的化合物7.04。

步驟e：在0℃下，在氮氣氣氛中，在10mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物7.04(23.9mg，0.0478mmol)置于無水CH₂Cl₂(2mL)中。向該冷卻溶液中先后加入DIPC(7微升，0.0478mmol)和DMAP(5.84mg，0.0478mmol)，并在相同溫度下攪拌1h。向該活化的酸溶液中添加卡巴他賽(20mg，0.0239mmol)，并在室溫下另外攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，用CHCl3萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，從而以79％的產(chǎn)率獲得綴合物7。7的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.11(d,J＝7.8Hz,2H),7.61(t,J＝7.5Hz,1H),7.50(t,J＝7.7Hz,2H),7.40(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(d,J＝7Hz,1H),7.28(d,J＝7.4Hz,2H),7.05(t,J＝5.5Hz,1H),6.25(t,J＝7Hz,1H),5.64(d,J＝7.0Hz,1H),5.48(bs,1H),5.35(s,3H),4.99(d,J＝9.4Hz,1H),4.82(s,1H),4.31(d,J＝8.4Hz,1H),4.21-4.10(m,3H),4.00(s,2H),4.03-3.93(m,1H),3.89(dd,J＝10.6,6.5Hz,1H),3.83(t,J＝9.2Hz,2H),3.44(s,3H),3.30(s,3H),3.30-3.17(m,1H),2.70(m,1H),2.47-0.74(m,66H),0.68(d,J＝8.8Hz,2H)。對C76H106N2O17，ESIMS m/z＝1341.6[M+Na]⁺。

實施例14：膽固醇紫杉烷綴合物14的合成

步驟a：向經(jīng)冰冷卻的處于CH₂Cl₂(20mL)中的膽固醇2.01(5g，0.013mol)溶液中添加吡啶(5mL)，并攪拌15分鐘。向該溶液中添加對甲苯磺酰氯(4.9g，0.026mol)并在0℃下另外攪拌4h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用CHCl₃(20mL)稀釋，而后依次用1N HCl(3X 50mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮，從而提供中間產(chǎn)物6.02，所述中間產(chǎn)物6.02無需進一步純化而直接用于下一反應(yīng)。

步驟b：向處于二氧六環(huán)(30mL)中的中間產(chǎn)物6.02(粗提物6g，0.011mol)溶液中添加乙二醇(20mL)，并且允許回流12h。在完成之后，在真空中除去二氧六環(huán)，并用水(20mL)猝滅。將化合物用乙酸乙酯萃取，并依次用水(3X 50mL)和鹽水(20mL)洗滌。合起來的有機層經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并在減壓下濃縮。利用甲醇-氯仿作為流動相，在硅膠上純化殘留物，從而獲得中間產(chǎn)物14.01。

步驟c：在50ml的圓底燒瓶中，將IBX(1.301g，4.647mmol)置于無水二甲基亞砜(3ml)中，并且允許在室溫下攪拌30分鐘以得到澄清的溶液。將處于無水THF(10ml)中的乙醇中間產(chǎn)物14.01(1g，2.323mmol)添加到該溶液中，添加持續(xù)10分鐘的時間段。將所得到的溶液在室溫下另外攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用乙醚稀釋，并將白色固體通過薄的硅藻土墊過濾并用水(2X 15mL)洗滌。有機層經(jīng)無水Na2SO4干燥，在真空中濃縮，并通過柱層析純化，從而獲得乙醛中間產(chǎn)物14.02。

步驟d：在50ml的單頸圓底燒瓶中，將膦葉立德(ylide)Ph3P＝CH2COOBu^t(1.404g，3.732mmol)置于甲苯(20mL)中并加熱至40℃。向該溶液中添加處于甲苯(2mL)中的乙醛中間產(chǎn)物14.02(800mg，1.866mmol)。油浴溫度被提高至80℃，并攪拌2h，而后核驗TLC。在完成之后，在減壓下除去有機溶劑，并通過柱層析純化殘留物，從而獲得中間產(chǎn)物14.03。

步驟e：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25ml的單頸圓底燒瓶中，將中間產(chǎn)物14.03(500mg，0.949mmol)置于無水CH₂Cl₂(5ml)中。向該反應(yīng)混合物中緩慢添加TFA(1mL)，添加持續(xù)5分鐘的時間段，并在室溫下攪拌3小時，而后核驗TLC。在完成之后，在減壓下除去溶劑，并用己烷(5mL)洗滌。通過硅膠層析純化殘留物，從而獲得酸中間產(chǎn)物14.04。

步驟f：在0℃下，在氮氣氣氛中，在25mL的單頸圓底燒瓶中，將酸中間產(chǎn)物14.04(112mg，0.2393mmol)置于無水CH₂Cl₂(7mL)中。向該冷卻溶液先后添加DIPC(37μL，0.2393mmol)和DMAP(29mg，0.2392mmol)，并且在相同溫度下攪拌2h。向該活化的酸溶液添加卡巴他賽(100mg，0.1196mmol)并在室溫下另外攪拌3h，而后核驗TLC。在完成之后，將反應(yīng)混合物用水猝滅，并用CHCl₃萃取，有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮并通過硅膠層析純化，以獲得綴合物14。

實施例15：超分子組合治療藥物

使用不同摩爾比的磷脂(如POPC、SOPC、卵磷脂酰膽堿和HSPC)、紫杉烷超分子和PEG化的磷脂(如DSPE-PEG)來配制超分子納米結(jié)構(gòu)。

將POPC、新的紫杉烷2和DSPE-PEG，取34:16:50mol％的比例，溶解在氯仿中。在圓底燒瓶中均勻地混合所有脂質(zhì)溶液，并且通過旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器蒸發(fā)有機溶劑，并將脂質(zhì)膜保持在高真空中，持續(xù)3-4小時。然后在70℃熱水浴中對薄膜進行水合(通過向薄膜添加5％的乳糖溶液)1.0h。接下來，使用支撐在熱板上的Avanti擠出機，在70℃的溫度下，使水合的脂質(zhì)體依次通過由過濾器支架支持的400nm和200nm的孔徑膜擠出11次。UV測量顯示該配制的包封效率百分比為紫杉烷超分子的14mol％。將所得到的溶液凍干并儲存于-20℃。該系統(tǒng)減少的重量(總脂質(zhì)與紫杉烷超分子的最終質(zhì)量比)確定為～8.66:1。

不同脂質(zhì)的組合變化表明前述的超分子配制需要最優(yōu)量的脂雙層硬度和流動性。這導致POPC/SOPC的使用(因為這兩者在一條鏈中都只包含一個雙鍵，而POPC中的另一條鏈為16個碳的長度，SOPC中的另一條鏈18個碳的長度)，與DOPC(在兩條尾鏈(tails)中具有兩個雙鍵)相比，所述POPC/SOPC可以為雙層提供稍微更多的硬度。也已證明，較高mol％的HSPC(18-尾鏈均為飽和的)不適合于超分子配制。DSPE-PEG在該超分子自組裝中具有叉狀分枝作用；為較高mol％API負荷平衡所需要的初始重量，以及防止API從雙層沉淀。

將該超分子凍干(使用5％的乳糖溶液作為冷凍保護劑)超過16-20小時。通過添加需要體積的水對其后形成的白色固體粉末進行重制。對該重制的超分子制劑的DLS研究揭示超分子具有與它凍干之前相似的尺寸、PDI、表面電勢。

為了闡明本發(fā)明的特點，用不同mol％的DSPE-PEG和可變mol％的紫杉烷超分子來對本發(fā)明實施的一些實施例進行描述。

實施例15.1

以34:16:50mol％的比例將POPC、新的紫杉烷2和DSPE-PEG溶解在氯仿中。在圓底燒瓶中均勻地混合所有脂質(zhì)溶液，并且通過旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器蒸發(fā)有機溶劑，并將脂質(zhì)膜保持在高真空中，持續(xù)3-4小時。然后在70℃熱水浴中對薄膜進行水合(通過向薄膜添加5％的乳糖溶液)1.0h。接下來，使用支撐在熱板上的Avanti擠出機，在70℃的溫度下，使水合的脂質(zhì)體依次通過由過濾器支架支持的400nm和200nm的孔徑膜擠出11次。UV測量顯示該配制的包封效率百分比為紫杉烷超分子的14mol％。將所得到的溶液凍干并儲存于-20℃。該系統(tǒng)減少的重量(總脂質(zhì)與紫杉烷超分子的最終質(zhì)量比)確定為～8.66:1。

將該溶液凍干(使用5％的乳糖溶液作為冷凍保護劑)超過16-20小時，并且通過添加需要體積的水對其后形成的白色固體粉末進行重制。對該重制的超分子制劑的DLS研究揭示超分子具有與它凍干之前相似的尺寸、PDI、表面電勢。

實施例15.2

將POPC、新的紫杉烷2和DSPE-PEG，取30:20:50mol％的比例，溶解在氯仿中。在圓底燒瓶中均勻地混合所有脂質(zhì)溶液，并且通過旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器蒸發(fā)有機溶劑，并將脂質(zhì)膜保持在高真空中，持續(xù)3-4小時。然后在70℃熱水浴中對薄膜進行水合(通過向薄膜添加5％的乳糖溶液)1.0h。接下來，使用支撐在熱板上的Avanti擠出機，在70℃的溫度下，使水合的脂質(zhì)體依次通過由過濾器支架支持的400nm和200nm的孔徑膜擠出11次。UV測量顯示該配制的包封效率百分比為紫杉烷超分子的14mol％。將所得到的溶液凍干并儲存于-20℃。該系統(tǒng)減少的重量(總脂質(zhì)與紫杉烷超分子的最終質(zhì)量比)確定為～8.5:1。

將該溶液凍干(使用5％的乳糖溶液作為冷凍保護劑)超過16-20小時，并且通過添加需要體積的水對其后形成的白色固體粉末進行重制。對該重制的超分子制劑的DLS研究揭示超分子具有與它凍干之前相似的尺寸、PDI、表面電勢。

實施例15.3

將POPC、新的紫杉烷2和DSPE-PEG，取40:10:50mol％的比例，溶解在氯仿中。在圓底燒瓶中均勻地混合所有脂質(zhì)溶液，并且通過旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器蒸發(fā)有機溶劑，并將脂質(zhì)膜保持在高真空中，持續(xù)3-4小時。然后在70℃熱水浴中對薄膜進行水合(通過向薄膜添加5％的乳糖溶液)1.0h。接下來，使用支撐在熱板上的Avanti擠出機，在70℃的溫度下，使水合的脂質(zhì)體依次通過由過濾器支架支持的400nm和200nm的孔徑膜擠出11次。UV測量顯示該配制的包封效率百分比為紫杉烷超分子的9.7mol％。該系統(tǒng)的總脂質(zhì)與紫杉烷超分子的最終質(zhì)量比確定為～12.9:1。

實施例15.4

將POPC、HSPC、新的紫杉烷2和DSPE-PEG，取55:34:10:1mol％的比例，溶解在氯仿中。在圓底燒瓶中均勻地混合所有脂質(zhì)溶液，并且通過旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器蒸發(fā)有機溶劑，并將脂質(zhì)膜保持在高真空中，持續(xù)3-4小時。然后在60℃熱水浴中對薄膜進行水合1.0h。接下來，使用支撐在熱板上的Avanti擠出機，在70℃的溫度下，使水合的脂質(zhì)體依次通過由過濾器支架支持的400nm和200nm的孔徑膜擠出11次。UV測量顯示該配制的包封效率百分比為紫杉烷超分子的5.7mol％。該系統(tǒng)的總脂質(zhì)與紫杉烷超分子的最終質(zhì)量比確定為～9.1:1。

實施例15.5

將POPC、HSPC、新的紫杉烷2和DSPE-PEG，取55:34:10:1mol％的比例，溶解在氯仿中。在圓底燒瓶中均勻地混合所有脂質(zhì)溶液，并且通過旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器蒸發(fā)有機溶劑，并將脂質(zhì)膜保持在高真空中，持續(xù)3-4小時。然后在70℃熱水浴中對薄膜進行水合(通過向薄膜添加5％的乳糖溶液)1.0h。接下來，使用支撐在熱板上的Avanti擠出機，在70℃的溫度下，使水合的脂質(zhì)體依次通過由過濾器支架支持的400nm和200nm的孔徑膜擠出11次。UV測量顯示該配制的包封效率百分比為紫杉烷超分子的5.7mol％。將所得到的溶液凍干并儲存于-20℃。該系統(tǒng)的總脂質(zhì)與紫杉烷超分子的最終質(zhì)量比確定為～9.1:1。

將該溶液凍干(使用5％的乳糖溶液作為冷凍保護劑)超過16-20小時，并且通過添加需要體積的水對其后形成的白色固體粉末進行重制。對該重制的超分子制劑的DLS研究揭示超分子具有與它凍干之前相似的尺寸、PDI、表面電勢。

生物測定

細胞培養(yǎng)：在37℃下，在包含5％的CO₂的濕潤環(huán)境中，使哺乳動物細胞在用10％的胎牛血清(FBS)和抗生素補充的特定培養(yǎng)基中生長。

細胞活力測定：使用MTT比色法(^6,7,8)測量超分子紫杉烷綴合物對癌細胞活力的效果。將100μl培養(yǎng)基中的細胞涂在96孔板中(3000-5000個細胞/孔)，并且允許在37℃下，在包含5％的CO₂的濕潤環(huán)境中連接過夜。將包含不同濃度的化合物的新鮮培養(yǎng)基(100μL)添加到細胞中，并孵育48、72和96小時。在孵育之后，使用MTT比色法確定細胞活力。在與針對癌細胞所使用的相同的孵育時間和化合物劑量條件下，對正常的人上皮細胞進行類似的測定，將100μl培養(yǎng)基中的所述人上皮細胞細胞接種在96孔板中(每孔5000-10,000個細胞)，從而確定該靶向療法對正常細胞的效果。使用曲線擬合將細胞活力標繪為劑量應(yīng)答曲線。

在乳腺癌(MDA-MB-231)、卵巢癌(SKOV-3)、肺癌(A549)、前列腺癌(DU-145)和結(jié)腸直腸癌(HCT-116)細胞系中與標準紫杉烷進行比較，體外評估化合物(新的紫杉烷2和16)的效果。超分子紫杉烷綴合物在所有細胞系中都表現(xiàn)出與標準紫杉烷可比較的功效(參見圖1、2和4)。

實施例16：包括免疫治療劑的超分子組合治療藥物

細胞培養(yǎng)：在37℃下，在包含5％的CO2的濕潤環(huán)境中，使哺乳動物細胞在用10％的胎牛血清(FBS)和抗生素補充的特定培養(yǎng)基中生長。

組合療法：在黑素瘤、乳腺癌和肺癌模型中檢驗超分子和PD-L1或PD-1的治療效果。用細胞(黑素瘤(B16F10)：3x 10⁵個細胞；乳腺癌(4T1)：5x 10⁵個細胞；肺癌(LLC)：5x 10⁵個細胞)對小鼠(每組4-6只)進行皮下接種。在荷瘤小鼠中，一旦平均腫瘤體積達到60-90mm³之間，施用由以下組成的藥物療法：鹽水(對對照組)，鉑藥物(5mg/kg)；鉑藥物(5mg/kg)加抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)；鉑藥物(10mg/kg)；鉑藥物(10mg/kg)加抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)；抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)；鉑-超分子(5mg/kg)；鉑-超分子(5mg/kg)加抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)；鉑-超分子(10mg/kg)；鉑-超分子(10mg/kg)加抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)；紫杉烷(5mg/kg)；紫杉烷(5mg/kg)加抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)；紫杉烷(10mg/kg)；紫杉烷(10mg/kg)加抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)；紫杉烷-超分子(5mg/kg)；紫杉烷-超分子(5mg/kg)加抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)；紫杉烷-超分子(10mg/kg)；紫杉烷-超分子(10mg/kg)加抗PD-1或PD-L1的抗體(2mg/kg)。

所述化合物經(jīng)由尾靜脈施用，其中鉑/紫杉烷化合物以q2d的劑量施用，而抗PD-1或PD-L1的抗體在之后幾天以相同劑量方案施用。隔日記錄腫瘤體積和體重，持續(xù)2周。通過測量兩個相對的直徑確定各個小鼠的腫瘤體積并表示為mm³。當平均腫瘤體積超過2000mm³時，對動物進行處死。在處死之后立即收集腫瘤病儲存在10％的福爾馬林中或進行急速冷凍，以用于進一步分析。

實施例17：包括免疫治療劑的超分子組合治療藥物

組合療法：在TNBC模型中檢驗鉑超分子和PD-L1的治療效果。用TNBC細胞(4x 10⁵個細胞)對小鼠(每組6只)進行皮下接種。在荷瘤小鼠中，一旦平均腫瘤體積達到60-80mm³之間，施用由以下組成的藥物療法：鹽水(對對照組)，卡鉑(5mg/kg)；抗PD-L1抗體(2mg/kg)；IO-125(5mg/kg)；IO-125(5mg/kg)加抗PD-L1抗體(2mg/kg)。

所述化合物經(jīng)由尾靜脈施用，其中鉑化合物以q2d的劑量施用，而抗PD-L1抗體在之后幾天以相同劑量方案施用。隔日記錄腫瘤體積和體重，持續(xù)1周。通過測量兩個相對的直徑確定各個小鼠的腫瘤體積并表示為mm³。在處死之后立即收集腫瘤病儲存在10％的福爾馬林中或進行急速冷凍，以用于進一步分析。圖5示出IO-125和抗PD-L1針對4T1(TNBC)腫瘤的治療效果。荷瘤小鼠接受鉑藥物(灰色箭頭)或者用抗PD-L1(橙色箭頭)免疫。當使用IO-125和抗PD-L1的組合治療TNBC時，在上述施用5天時，腫瘤尺寸減小35％。通過使用公式(LxWxW)/2來計算腫瘤體積，其中所測量的最長直徑被認為是“L”，而最短直徑為“W”。

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