背景技術：

本

技術實現(xiàn)要素：
一般涉及治療與異常脂質蓄積相關的疾病和病癥。例如，本發(fā)明內容提供使用至少一種氧化膽固醇硫酸酯(oxygenatedcholesterolsulfate)(ocs)治療患有減弱的瘦蛋白活性(例如瘦蛋白缺乏和瘦蛋白抗性(leptinresistance))和脂質貯積障礙的個體的方法。

發(fā)明背景

儲脂(脂質)為一種重要的身體能量來源，其不斷地被分解并且重新組裝以便與可利用的食物平衡身體的能量需求。然而，在一些先天性和獲得性病癥中，這些過程存在缺陷并且有害的、不需要的脂質沉積發(fā)生。隨時間的推移，異常脂質蓄積對于身體器官有害并且可能威脅生命。

激素瘦蛋白在調節(jié)能量攝取和消耗的幾個方面，包括食欲和饑餓、代謝以及尋求食物的行為起關鍵作用。瘦蛋白通過結合和激活其長型(longform)受體(lepr-b)起作用，所述受體在許多身體器官和組織，包括下丘腦中的細胞表面上發(fā)現(xiàn)。瘦蛋白活性能夠使得中樞神經系統(tǒng)(cns)感覺到能量貯積，且照此對于維持正常能量平衡而言是必不可少的。例如，在健康個體中，在食物攝入后，瘦蛋白活性觸發(fā)一系列化學信號，它們產生發(fā)脹感覺(飽滿感)并且增加能量消耗。然而，在具有不足瘦蛋白活性的個體中，所述化學信號傳導受損。

瘦蛋白活性缺乏可以因幾個不同因素導致。例如，一些遺傳異常導致無或低瘦蛋白水平或由個體產生的缺陷性瘦蛋白(本文稱作“瘦蛋白缺乏”或“l(fā)d”)。瘦蛋白活性缺乏還可能因細胞對瘦蛋白產生抗性或變得對瘦蛋白產生抗性即所謂的“瘦蛋白抗性”(lr)而導致。通常將lr定義為促進營養(yǎng)過度或肥胖狀態(tài)中的預期的有益于健康的代謝結果的內源性或外源性瘦蛋白衰失效(failure)。在瘦蛋白抗性中，細胞和/或組織不能使瘦蛋白信號傳導擴散作為對細胞和/或組織接觸瘦蛋白的響應。因此，可能存在足夠乃至升高水平的循環(huán)瘦蛋白，但lr個體仍然經歷瘦蛋白活性缺乏。lr因許多因素導致，包括遺傳素質(例如因lepr基因中的突變導致的瘦蛋白受體缺乏)、肥胖、生活方式等及其組合。

瘦蛋白活性缺乏與幾種難以應對的醫(yī)學病癥相關，例如肝中血清甘油三酯和脂質蓄積的水平升高，它們兩者均可以導致高水平的損傷和死亡率。

仍然需要用于預防、治療或逆轉瘦蛋白活性缺乏的效應和與之相關的疾病的改進的藥劑和方法。

脂質貯積障礙(lipidstoragedisorder)(或脂質貯積病)是一組遺傳性代謝障礙，其中有害量的脂質(脂肪)蓄積在一些身體細胞和組織中。具有這些障礙的人無法產生代謝脂質所需的足夠的酶之一，或它們產生無法適當起作用的酶。隨時間的推移，這種過度的脂肪貯積可以導致廣泛的持久性細胞和組織損傷，特別是腦、外周神經系統(tǒng)、肝、脾和骨髓。

令人遺憾地，這些疾病可能是致命性的，且不存在治療選擇或極其受限。目前可利用的治療選擇僅用于兩種脂質貯積疾?。悍ú既R病(fabrydisease)和戈謝病(gaucher’sdisease)。這兩種疾病均因缺失或缺陷酶導致(對于法布萊病是α-半乳糖苷酶a，而對于戈謝病是葡糖腦苷酯酶)。兩種疾病均通過酶替代輸注療法治療。令人遺憾地，這類療法相對是侵害性的，且對于兩種疾病均報告了威脅生命的嚴重過敏(過敏性)反應發(fā)病率。近來，葡糖腦苷酯酶的口服劑型已經可利用于治療戈謝病。然而，仍然存在涉及這種治療方法的長期效力的無反應的問題，且存在改進空間。

在治療減弱的瘦蛋白活性和脂質貯積疾病方面確實存在未得到滿足的需求。

發(fā)明內容

本發(fā)明內容提供用于預防、逆轉或治療與脂質蓄積障礙相關的癥狀和/或病癥/疾病(包括特征在于減弱的瘦蛋白活性的那些(例如與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積(ldla))和與瘦蛋白-抗性相關的脂質蓄積(lrla))和脂質貯積障礙(lsds))的方法。該方法包括對受試者施用治療有效量的氧化膽固醇硫酸酯，其用量足以預防、逆轉或治療脂質蓄積障礙(例如ldla、lrla或lsd)中的至少一種癥狀。這類癥狀包括、但不限于高脂血癥、脂肪肝病和細胞和組織例如中樞和外周神經系統(tǒng)組織中的異常脂質蓄積。

本文提供了在有此需要的受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法。該方法包括在受試者中升高至少一種下式的ocs例如5-膽甾烯,3-,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)或其藥學上可接受的鹽的量

還提供了包含至少一種ocs例如5-膽甾烯,3-,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)或例如其藥學上可接受的鹽的物質(substance)，其用于治療受試者的與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法中，作為這類物質，其包含至少一種ocs，例如25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽，它們用于治療受試者的與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法中。

還提供了物質，其用于治療受試者(例如器官，例如肝或神經系統(tǒng)的組織)中具有減弱的瘦蛋白活性或脂質貯積障礙的與脂質蓄積相關的障礙的方法中。所述物質包含如下成分之一或它們兩者：i)編碼酶并且能夠在受試者中產生酶的核酸，所述酶能夠在受試者中促進至少一種內源性ocs、例如25hc3s產生；和ii)能夠在受試者中促進至少一種內源性ocs、例如25hc3s產生的酶。

還提供了至少一種ocs、例如5-膽甾烯,3-,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途，所述藥物用于在受試者中治療具有減弱的瘦蛋白活性或脂質貯積障礙的與脂質蓄積相關的障礙的方法中。

還提供了至少一種ocs、例如25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途，所述藥物用于在受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積、例如受試者肝中的脂質蓄積的方法中。

還提供了如下之一或它們兩者：i)編碼酶并且能夠在受試者中產生酶的核酸，所述酶能夠在受試者中促進至少一種內源性ocs、例如25hc3s產生；和ii)能夠在受試者中促進至少一種內源性ocs、例如25hc3s產生的酶；其用于制備藥物，該藥物用于在受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積、例如受試者肝中的脂質蓄積的方法中。

本發(fā)明內容另外的方面包括：

1.在有此需要的受試者中治療i)減弱的瘦蛋白活性和ii)脂質貯積障礙中的至少一種的方法，

該方法包括在所述受試者中升高至少一種氧化膽固醇硫酸酯(ocs)或其藥學上可接受的鹽的量，其中所述升高足以治療或緩解減弱的瘦蛋白活性和脂質貯積障礙中的至少一種的癥狀。

2.1的方法，其中至少一種ocs選自5-膽甾烯-3,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)；5-膽甾烯,3b,25-二醇,二硫酸酯(25hcds)；(5-膽甾烯,3,27-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,27-二醇,3,27-二硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,7-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,7-二醇,3,7-二硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,24-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,24-二醇,3,24-二硫酸酯)；和(5-膽甾烯,3-醇,24,25-環(huán)氧(epoxy)3-硫酸酯)。

3.1的方法，其中所述升高導致在受試者中在受試者的循環(huán)系統(tǒng)、血液或內臟器官的一種或多種中具有減少的脂質和/或脂質沉積。

4.1的方法，其中所述升高導致在受試者的肝臟中脂質和/或脂質沉積減少。

5.1的方法，其中所述升高包括對受試者施用至少一種ocs或其藥學上可接受的鹽。

6.5的方法，其中將至少一種ocs或其藥學上可接受的鹽以0.1mg/kg至100mg/kg的量施用，以受試者的體重為基準。

7.6的方法，其中將至少一種ocs或其藥學上可接受的鹽以10mg/kg至30mg/kg的量施用，以受試者的體重為基準。

8.5-7任一項的方法，其中所述施用包括口服施用、腸施用、舌下施用、透皮施用、靜脈內施用、腹膜施用、胃腸外施用、注射施用、皮下注射和肌肉內注射中的至少一種。

9.1的方法，其中所述升高包括在受試者中促進至少一種ocs的內源性產生。

10.編碼酶并且能夠在受試者中產生酶的方法，所述酶能夠在受試者中促進至少一種ocs的內源性產生，以及編碼酶和能夠產生酶的方法，所述酶能夠在受試者中促進至少一種ocs的內源性產生的酶。

11.10的方法，其中至少一種ocs是25hc3s，且所述酶是sult2b1b。

12.10或11的方法，還包括對受試者施用酶的底物，該底物能夠在受試者中內源性產生至少一種ocs。

13.12的方法，其中所述底物是25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽。

14.上述任一項的方法，包括治療因減弱的瘦蛋白活性導致的脂質蓄積中的一種或多種癥狀。

15.14的方法，其中所述減弱的瘦蛋白活性是瘦蛋白缺乏或瘦蛋白抗性或因其所致。

16.上述任一項的方法，包括降低受試者中的血清甘油三酯和肝中性脂質(hepaticneutrallipids)之一或它們兩者。

17.16的方法，其中血清甘油三酯被降低至少20％。

18.16或17的方法，其中肝中性脂質被降低至少20％。

19.上述任一項的方法，其中因減弱的瘦蛋白活性導致的脂質蓄積是肥胖或遺傳素質的結果。

20.上述任一項的方法，其中因減弱的瘦蛋白活性導致的脂質蓄積是因受試者中編碼瘦蛋白受體的基因中的突變導致的瘦蛋白抗性。

21.20的方法，其中所述受試者具有因所述突變導致的瘦蛋白與瘦蛋白受體結合受損。

22.上述任一項的方法，還包括：

在所述升高前，測量受試者中減弱的瘦蛋白活性的一種或多種標記(indicia)值；

比較該值與來自不具有減弱的瘦蛋白活性的對照個體人群的一種或多種標記的至少一種陰性對照值或陰性對照范圍；和

如果該值與陰性對照值不同或沒有落入陰性對照范圍，則

結論為該受試者具有減弱的瘦蛋白活性。

23.上述任一項的方法，還包括：

在所述升高前，測量受試者中減弱的瘦蛋白活性的一種或多種標記值；

比較該值與來自具有減弱的瘦蛋白活性的對照個體人群的一種或多種標記的至少一種陽性對照值或陽性對照范圍；和

如果該值與陽性對照值相同或落入陽性對照范圍，則

結論為該受試者具有減弱的瘦蛋白活性。

24.22或23的方法，其中減弱的瘦蛋白活性的一種或多種標記選自血清瘦蛋白水平、人體質量指數(shù)和血清甘油三酯水平。

25.22或23的方法，還包括：

在所述升高后，監(jiān)測受試者中減弱的瘦蛋白活性的一種或多種癥狀。

26.物質，包含至少一種氧化膽固醇硫酸酯(ocs)或其藥學上可接受的鹽，該物質用于治療i)減弱的瘦蛋白活性和ii)脂質貯積障礙中的至少一種的方法中。

27.26的物質，其中至少一種ocs選自5-膽甾烯-3,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)；5-膽甾烯,3b,25-二醇,二硫酸酯(25hcds)；(5-膽甾烯,3,27-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,27-二醇,3,27-二硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,7-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,7-二醇,3,7-二硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,24-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,24-二醇,3,24-二硫酸酯)；和(5-膽甾烯,3-醇,24,25-環(huán)氧3-硫酸酯)。

28.26使用的物質，其中所述方法包括對所述受試者施用至少一種ocs或其藥學上可接受的鹽，其用量范圍在0.01mg/kg至100mg/kg，以所述受試者體重為基準。

29.28使用的物質，其中所述方法包括對所述受試者施用至少一種ocs或其藥學上可接受的鹽，其用量范圍在10mg/kg至30mg/kg，以所述受試者體重為基準。

30.26-29的任一項使用的物質，其中所述方法包括口服施用、腸施用、舌下施用、透皮施用、靜脈內施用、腹膜施用、胃腸外施用、注射施用、皮下注射和肌肉內注射中的至少一種。

31.26-30任一項的物質，其中減弱的瘦蛋白活性是瘦蛋白缺乏或瘦蛋白-抗性或由其導致。

32.物質，包含25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽，該物質用于治療i)減弱的瘦蛋白活性和ii)脂質貯積障礙中的至少一種的方法中。

33.32使用的物質，其中所述方法包括在所述受試者體內使25-羥基膽固醇或其藥學上可接受的鹽轉化成25hc3s或其藥學上可接受的鹽。

34.32和33任一項的物質，其中減弱的瘦蛋白活性是瘦蛋白缺乏或瘦蛋白-抗性或由其導致。

35.用于在受試者中治療i)減弱的瘦蛋白活性和ii)脂質貯積障礙中的至少一種的方法中的物質，該物質包含如下之一或它們兩者：

-編碼酶并且能夠在受試者中產生酶的核酸，所述酶能夠在受試者中促進至少一種氧化膽固醇硫酸酯(ocs)的內源性產生；和

-能夠在受試者中促進至少一種ocs的內源性產生的酶。

36.35的物質，其中至少一種ocs選自5-膽甾烯-3,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)；5-膽甾烯,3b,25-二醇,二硫酸酯(25hcds)；(5-膽甾烯,3,27-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,27-二醇,3,27-二硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,7-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,7-二醇,3,7-二硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,24-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,24-二醇,3,24-二硫酸酯)；和(5-膽甾烯,3-醇,24,25-環(huán)氧3-硫酸酯)。

37.36使用的物質，其中所述ocs是25hc3s，且所述酶是sult2b1b。

38.26-37任一項使用的物質，其中所述方法包括治療脂質蓄積的一種或多種癥狀。

39.26-38任一項使用的物質，其中所述方法包括減少受試者中血清甘油三酯和肝中性脂質之一或它們兩者。

40.39使用的物質，其中血清甘油三酯被減少至少20％。

41.39或40使用的物質，其中肝中性脂質被減少至少35％。

42.權利要求27-40任一項使用的物質，其中減弱的瘦蛋白活性是肥胖或遺傳素質的結果。

43.26-42任一項使用的物質，其中減弱的瘦蛋白活性是編碼受試者中瘦蛋白受體的基因突變的結果。

44.43使用的物質，其中是受試者具有因所述突變導致的瘦蛋白與瘦蛋白受體結合受損。

45.氧化膽固醇硫酸酯(ocs)或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途，所述藥物用于在受試者中治療i)減弱的瘦蛋白活性和ii)脂質貯積障礙中的至少一種的方法中。

46.45的用途，其中減弱的瘦蛋白活性是瘦蛋白缺乏或瘦蛋白-抗性或由其導致。

47.25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途，所述藥物用于在受試者中治療i)減弱的瘦蛋白活性和ii)脂質貯積障礙中的至少一種的方法中。

48.47的用途，其中減弱的瘦蛋白活性是瘦蛋白缺乏或瘦蛋白-抗性或由其導致。

49.如下之一或它們兩者在制備藥物中的用途：

-編碼酶并且能夠在受試者中產生酶的核酸，所述酶能夠在受試者中促進至少一種ocs的內源性產生；和

-能夠在受試者中促進至少一種ocs的內源性產生的酶；

所述藥物用于在受試者中治療i)減弱的瘦蛋白活性和ii)脂質貯積障礙中的至少一種的方法中。

50.49的用途，其中減弱的瘦蛋白活性是瘦蛋白缺乏或瘦蛋白-抗性或由其導致。

51.1的方法，其中所述脂質貯積障礙選自：戈謝病、尼皮二氏病(niemann-pickdisease)、法布萊病、法伯病(farber’sdisease)、gm1神經節(jié)苷脂質貯積癥、gm2神經節(jié)苷脂質貯積癥、克拉貝病(krabbédisease)、異染性腦白質營養(yǎng)不良(mld)和酸性脂酶缺乏癥。

52.51的方法，其中所述gm2神經節(jié)苷脂質貯積癥是泰-薩二氏病(tay-sachsdisease)或sandhoff病。

53.51的方法，其中所述mld是嬰幼兒mld、青少年mld或成年人mld。

54.51的方法，其中所述酸性脂酶缺乏癥是沃爾曼氏病(wolman’sdisease)或膽固醇酯貯積病。

55.在有需要的受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法，

該方法包括使所述受試者中下式的5-膽甾烯,3-,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)或其藥學上可接受的鹽的量升高，

56.55的方法，其中所述升高所述受試者中25hc3s或其藥學上可接受的鹽的量包括：給所述受試者施用25hc3s或其藥學上可接受的鹽。

57.56的方法，其中以0.1mg/kg至100mg/kg的量施用25hc3s或其藥學上可接受的鹽，以所述受試者體重為基準。

58.57的方法，其中以10mg/kg至30mg/kg的量施用25hc3s或其藥學上可接受的鹽，以所述受試者體重為基準。

59.56-58任一項的方法，其中所述施用包括口服施用、腸施用、舌下施用、透皮施用、靜脈內施用、腹膜施用、胃腸外施用、注射施用、皮下注射和肌肉內注射中的至少一種。

60.55的方法，其中所述升高所述受試者中25hc3s或其藥學上可接受的鹽的量包含給所述受試者施用25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽。

61.60的方法，其中以0.1mg/kg至100mg/kg的量施用25-羥基膽固醇或其藥學上可接受的鹽，以所述受試者體重為基準。

62.61的方法，其中以10mg/kg至30mg/kg的量施用25-羥基膽固醇或其藥學上可接受的鹽，以所述受試者體重為基準。

63.60-62任一項的方法，其中所述施用包括口服施用、腸施用、舌下施用、透皮施用、靜脈內施用、腹膜施用、胃腸外施用、注射施用、皮下注射和肌肉內注射中的至少一種。

64.55的方法，其中所述升高所述受試者中25hc3s或其藥學上可接受的鹽的量包括在所述受試者中促進內源性25hc3s產生。

65.64的方法，包括對所述受試者施用如下之一或它們兩者：

-編碼酶并且能夠在受試者中產生酶的核酸，所述酶能夠在所述受試者中促進內源性25hc3s的產生；和

-能夠在所述受試者中促進內源性25hc3s產生的酶。

66.64的方法，其中所述酶是sult2b1b。

67.65或66的方法，還包括對所述受試者施用酶的底物，該底物能夠在所述受試者中產生內源性25hc3s。

68.67的方法，其中所述底物是25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽。

69.上述任一項的方法，該方法包括治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的一種或多種癥狀。

70.上述任一項的方法，該方法包括減少所述受試者中血清甘油三酯和肝中性脂質之一或它們兩者。

71.權利要求70的方法，其中所述血清甘油三酯被減少至少20％。

72.權利要求70或71的方法，其中所述肝中性脂質被減少至少20％。

73.上述任一項的方法，其中所述與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積是肥胖或對瘦蛋白缺乏的遺傳素質的結果。

74.上述任一項的方法，其中所述與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積是所述受試者中編碼瘦蛋白受體的基因突變的結果。

75.權利要求74的方法，其中所述受試者具有因所述突變導致的瘦蛋白與瘦蛋白受體結合受損。

76.上述任一項的方法，還包括：

在所述升高前，測量受試者中瘦蛋白缺乏的一種或多種標記值；

比較該值與來自不具有瘦蛋白缺乏的對照個體人群的所述一種或多種標記的至少一種陰性對照值或陰性對照范圍；和

如果該值與陰性對照值不同或未落入所述陰性對照范圍，則

結論為所述受試者具有瘦蛋白缺乏。

77.上述任一項的方法，還包括：

在所述升高前，測量受試者中瘦蛋白缺乏的一種或多種標記值；

比較該值與來自具有瘦蛋白缺乏的對照個體人群的所述一種或多種標記的至少一種陽性對照值或陽性對照范圍；和

如果該值與所述陽性對照值相同或落入所述陽性對照范圍，則

結論為所述受試者具有瘦蛋白缺乏。

78.76或77的方法，其中所述瘦蛋白缺乏的一種或多種標記選自血清瘦蛋白水平、人體質量指數(shù)和血清甘油三酯水平。

79.69或70的方法，還包括：

在所述升高后，監(jiān)測所述受試者中與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的所述一種或多種癥狀。

80.55-79任一項的方法，其中與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積包括與瘦蛋白-抗性相關的脂質蓄積。

81.物質，包含下式的5-膽甾烯,3-,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)或其藥學上可接受的鹽

其用于在受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法中。

82.81使用的物質，其中所述方法包括對所述受試者施用25hc3s或其藥學上可接受的鹽，其用量范圍在0.01mg/kg至100mg/kg，以所述受試者體重為基準。

83.82使用的物質，其中所述方法包括對所述受試者施用25hc3s或其藥學上可接受的鹽，其用量范圍在10mg/kg至30mg/kg，以所述受試者體重為基準。

84.權利要求80-83任一項使用的物質，其中所述方法包括口服施用、腸施用、舌下施用、透皮施用、靜脈內施用、腹膜施用、胃腸外施用、注射施用、皮下注射和肌肉內注射中的至少一種。

85.81-84任一項的物質，其中與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積包括與瘦蛋白-抗性相關的脂質蓄積。

86.物質，包含25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽，該物質用于在受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法中。

87.86使用的物質，其中所述方法包括使所述25-羥基膽固醇或其藥學上可接受的鹽在受試者體內轉化成25hc3s或其藥學上可接受的鹽。

88.86和87任一項的物質，其中與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積包括與瘦蛋白-抗性相關的脂質蓄積。

89.物質，用于在受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法中，該物質包含如下之一或它們兩者：

-編碼酶并且能夠在受試者中產生酶的核酸，所述酶能夠在所述受試者中促進內源性25hc3s的產生；和

-能夠在所述受試者中促進內源性25hc3s產生的酶。

90.89使用的物質，其中所述酶是sult2b1b。

91.81-90任一項使用的物質，其中所述方法包括治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的一種或多種癥狀。

92.81-91任一項使用的物質，其中所述方法包括減少所述受試者中的血清甘油三酯和肝中性脂質之一或它們兩者。

93.92使用的物質，其中所述血清甘油三酯被減少至少20％。

94.92或93使用的物質，其中所述肝中性脂質被減少至少35％。

95.81-94任一項使用的物質，其中所述與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積是肥胖或對瘦蛋白缺乏的遺傳素質的結果。

96.81-95任一項使用的物質，其中所述與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積是所述受試者中編碼瘦蛋白受體的基因突變的結果。

97.96使用的物質，其中所述受試者具有因所述突變導致的瘦蛋白與瘦蛋白受體結合受損。

98.下式的5-膽甾烯,3-,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途

所述藥物用于在受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法中。

99.98的用途，其中與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積包括與瘦蛋白-抗性相關的脂質蓄積。

100.25-羥基膽固醇(25hc)或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途，所述藥物用于在受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法中。

101.100的用途，其中與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積包括與瘦蛋白-抗性相關的脂質蓄積。

102.如下之一或它們兩者在制備藥物中的用途：

-編碼酶并且能夠在受試者中產生酶的核酸，所述酶能夠在所述受試者中促進內源性25hc3s的產生；和

-能夠在所述受試者中促進內源性25hc3s產生的酶；

所述藥物用于在受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法中。

103.102的用途，其中與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積包括與瘦蛋白-抗性相關的脂質蓄積。

本發(fā)明另外的特征和優(yōu)點在如下本發(fā)明的描述中舉出，且部分從該描述中顯而易見，或可以通過實施本發(fā)明知曉。本發(fā)明通過特別地以書面描述形式及其權利要求中列出的組合物和方法得以實現(xiàn)和得到。

附圖簡述

本發(fā)明進一步描述在如下本發(fā)明的說明書中，并且參照關注的多張非限制性附圖，其中：

圖1a-d.用所示水平25hc3s處理21天后的雄性zucker瘦蛋白-缺乏(肥胖fa/fa)動物的血清脂質水平。a，hdl膽固醇；b，ldl膽固醇；c，總血清膽固醇；d，甘油三酯類。全部值表示為平均值+/-sd。與媒介物-處理的動物相比*p<0.05和**p<0.01。

圖2a-d.用所示水平25hc3s處理21天后的雄性zucker瘦蛋白-缺乏(肥胖fa/fa)動物的肝脂質水平。a，甘油三酯類；b，總膽固醇；c，游離脂肪酸；d，游離膽固醇。根據肝重標準化每個個體，全部值表示為平均值+/-sd。與媒介物-處理的動物相比*p<0.05和**p<0.01。

圖3a-e.肝形態(tài)研究。來自用如下處理的動物的蘇木精和伊紅(he)染色的肝切片：a，媒介物；b，10mg/kg/天25hc3spo；c，30mg/kg/天25hc3spo；d，100mg/kgpo；e,50mg/kgip。

圖4a-e.肝形態(tài)研究。來自用如下處理的動物的油紅o染色的肝切片：a，媒介物；b，10mg/kg/天25hc3spo；c，30mg/kg/天25hc3spo；d，100mg/kgpo；e,50mg/kgip。

發(fā)明詳細

本發(fā)明內容提供用于治療以異常脂質蓄積(la)為特征的障礙的方法。該方法基于令人驚奇的發(fā)現(xiàn)：對具有存在的脂質異常、有害沉積物(deposits)(例如肝或其它器官或組織中的脂質小球，其中沉積是不適合的)的哺乳動物施用ocs導致脂質沉積物減少或消除并且預防額外的脂質蓄積。因此，當治療開始時，施用ocs預防異常脂質沉積并且逆轉現(xiàn)存的脂質沉積(蓄積)。如此治療的障礙在本文中稱作措詞，例如“脂質蓄積障礙”、“脂質沉積障礙”等，并且包括、但不限于：

i.因瘦蛋白活性缺乏或減弱導致的障礙，所述瘦蛋白活性缺乏或減弱因如下情形導致，例如，

i)遺傳突變，其導致瘦蛋白產生低水平或無功能性或功能性差的瘦蛋白分子產生，例如發(fā)生在瘦蛋白缺乏(ld)中；或

ii)瘦蛋白信號傳導缺陷，其因例如瘦蛋白受體的功能作用的先天性或獲得性異常或缺乏導致，例如歸因于瘦蛋白受體的遺傳突變或歸因于對瘦蛋白結合的受體敏感性獲得性缺失，例如其發(fā)生在瘦蛋白抗性(lr)中；和

ii.脂質貯積障礙，其通常為先天性的。

本文所用的術語“減弱的瘦蛋白活性”由此涵蓋如上述i)和ii)所表征的瘦蛋白缺乏(ld)和瘦蛋白抗性(lr)。類似地，本文所用的術語“與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積”涵蓋與如上述i)和ii)所表征的瘦蛋白缺乏(ld)和瘦蛋白抗性(lr)相關的脂質蓄積。

所述方法包括對所述受試者施用治療有效量的至少一種氧化膽固醇硫酸酯(ocs)。適當?shù)闹|動態(tài)平衡由此得以維持或恢復，且疾病的效果(例如脂質蓄積，la)得到預防、逆轉、減輕或根除。本文所用的“治療(treatment)”或“治療(treating)”涵蓋治療現(xiàn)存的疾病、預防施用以便預防或預防疾病復發(fā)以及處置疾病。

認為對用于治療脂質蓄積障礙(例如ldla、lrla和脂質貯積障礙)的效果的改進的藥劑和方法仍然存在需求，本發(fā)明內容的結果果是令人驚奇的。

用于本文所述的方法和組合物中的ocss的實例包括、但不限于5-膽甾烯-3,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)；5-膽甾烯,3b,25-二醇,二硫酸酯(25hcds)；(5-膽甾烯,3,27-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,27-二醇,3,27-二硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,7-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,7-二醇,3,7-二硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,24-二醇,3-硫酸酯)；(5-膽甾烯,3,24-二醇,3,24-二硫酸酯)；和(5-膽甾烯,3-醇,24,25-環(huán)氧3-硫酸酯)。25hc3s在例如美國專利us8,399,441中找到，其公開內容以完整的形式并入本文參考。25hcds在例如wo2013/154752中找到，其公開內容以完整的形式并入本文參考。在一些方面，ocs選自5-膽甾烯-3,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)和5-膽甾烯,3b,25-二醇,二硫酸酯(25hcds)(單獨地或以組合方式)。在另外的方面，ocs是5-膽甾烯-3,25-二醇,3-硫酸酯(25hc3s)。

所謂“25-羥基膽固醇-3-硫酸酯(25hc3s)”我們意旨如下結構的化合物：

例如，公布的美國專利申請us-2010-0273761(ren等人)中描述了25hc3s，其全部內容以完整的形式并入本文參考。然而，us-2010-0273761未教導25hc3s可以有效地用于治療、預防或處置因患者中的瘦蛋白活性缺乏或減弱或脂質貯積障礙導致的障礙。

所謂“5-膽甾烯,3b,25-二醇,二硫酸酯(25hcds)”我們意旨如下結構的化合物：

例如，公布的美國專利申請us-20150072962(ren等人)中描述了25hcds，其全部內容以完整的形式并入本文參考。然而，us-20150072962未教導25hc3s可以有效地用于治療、預防或處置因患者中的瘦蛋白活性缺乏或減弱或脂質貯積障礙導致的障礙。

ocs(例如25hc3s或25hcds)可以是藥學上可接受的鹽的形式。所述藥學上可接受的鹽可以是通過使母體ocs分子的硫酸酯基團上的氫原子缺失形成的鹽。

例如，藥學上可接受的鹽可以是堿金屬鹽(例如鋰、鈉或鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如鈣鹽)或銨鹽。例如，藥學上可接受的鹽可以是鈉、鉀、鈣、鋰或銨鹽。

這類鹽的一個實例是25hc3s的鈉鹽，例如，25hc3s的單加成(mono-addition)鈉鹽(例如，通過使25hc3s的硫酸酯基團上的氫原子缺失形成的單加成鈉鹽)，即，具有下式的化合物：

這類鹽的另一個實例是25hcds的鈉鹽，例如二加成(di-addition)鹽或單加成鹽。通過使25hcds分子的兩個硫酸酯基團各自上的氫原子缺失形成二加成鹽。通過使25hcds分子的兩個硫酸酯基團的僅一個上的氫原子(該分子的3β或25-位上)缺失形成單加成鹽，所述25hcds分子即具有下式的化合物：

為避免疑慮，強調本說明書至始至終涉及的“25hc3s”或“25hcds”或另外的ocss包括藥學上可接受的鹽，另有清楚表示的除外。

本文所用的措詞“包含…物質”在其范圍內包括該化合物自身(即該物質“是”特定的化合物)和包含特定化合物與另外的化合物的組合物。例如，包含ocs或其藥學上可接受的鹽的物質可以是：(a)ocs，例如25hc3s或25hcds；(b)ocs的藥學上可接受的鹽，例如25hc3s或25hcds；(c)包含ocs，例如25hc3s或25hcds的組合物；和(d)包含ocs，例如25hc3s或25hcds的藥學上可接受的鹽的組合物。

所施用的至少一種ocs的量可以根據它所施用的受試者特征(例如，種類、性別、年齡、基因構成、一般健康狀況等)的不同而改變。然而，臨床有效量(治療有效劑量)通常在約0.01mg/kg-約100mg/kg的范圍，以受試者的體重為基準。例如，所述劑量可以約0.1mg/kg-約50mg/kg或約1-30mg/kg或約3-20mg/kg的范圍，包括約0.5-約40mg/kg、約1-約10mg/kg、約10-約30mg/kg的范圍等。例如，所述劑量可以約為0.01、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95,1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、15.5、16.0、16.5、17.0、17.5、18.0、18.5、19.0、20.5、21.0、21.5、22.0、22.5、23.0、23.5、24.0、24.5、25.0、25.5、26.0、26.5、27.0、27.5、28.0、28.5、29.0、29.5或30.0mg/kg(包括每個值之間的所有十進分數(shù)，例如0.01mg/kg間隔)或更多，例如約30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100mg/kg(包括每個值之間的所有整數(shù)和所有十進分數(shù)，例如0.01mg/kg間隔)。

施用時機或頻率根據如下情形的不同而改變：例如，待治療的疾病或障礙、疾病/障礙的嚴重性、待治療的個體(例如年齡、性別、總體健康狀況、存在或不存在另外的疾病情況和/或同時進行的另外的治療等)。例如，施用通?？梢约s1-4次/天進行(例如每天1、2、3、4次或更多次)或可以僅每隔1天1次或每隔3-6天1次或每周或10天1次或每2或3周1次或每個月1次，乃至更低的頻率，例如每2、3、4或5個月1次或例如每年1次或每年2次。可供選擇地或另外，施用可以連續(xù)進行，例如通過iv施用。

通常，當存在嚴重或急性癥狀時和/或在診斷給系統(tǒng)“裝載”ocs后即刻，更頻繁或連續(xù)地施藥(并且可能是更高用量的ocs)。相反，一旦癥狀減退至期望的水平，則可以以更低的頻率給受試者施藥和/或ocs的用量可以降低，例如降至維持劑量。例如，負荷劑量可以在3-20mg/kg/天的范圍，持續(xù)1至10天期限，然后是0.1-10mg/kg/天的維持劑量。

因此，一旦診斷被證實則通常開始施用，并且持續(xù)至觀察到期望的有益于健康的結果，例如脂肪沉積物消失。在一些方面，施用以持續(xù)為基礎進行，以便預防疾病復發(fā)，或如果疾病被視為可以通過另外的方式控制，則可以停止施用，例如在一些情況中，通過膳食改變(低熱量攝取、膳食中的脂肪用量和類型改變等)和生活方式(例如增加鍛煉)預防lr復發(fā)。然而，尤其是針對歸因于遺傳突變的先天性病癥，治療通常在個體的整個生命周期中進行。此外，這類個體得益于更頻繁的施藥和/或更高劑量和/或以定時或緩釋方式進行的施藥，使得ocs施用相對恒定。

在一些方面，將治療有效量的至少一種ocs或其藥學上可接受的鹽直接施用于有此需要的受試者，例如，將包含所述藥劑的制劑或組合物直接施用于受試者，以便解決受試者的相關身體部分(例如循環(huán)系統(tǒng)、血液、內臟器官、肝、中樞神經系統(tǒng)和外周神經系統(tǒng)細胞等)中的ld、lr、ldla、lrla和/或脂質貯積障礙的效果。在一個方面，所述組合物包括至少一種基本上純的ocs和藥理學適合的(生理學相容性)載體。適合于施用的組合物的制備是本領域和技術人員公知的。典型地，將這類組合物制備成液體溶液或懸浮液，不過，還關注固體形式，例如片劑、丸劑、粉末等。還可以制備施用前適合于液體形式的溶液或懸浮液的固體形式。還可以使制劑乳化?？梢詫⒒钚猿煞峙c賦形劑混合，所述賦形劑是藥學上可接受的并且與活性成分相容。適合的賦形劑是，例如水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等或其組合。此外，所述組合物可以包含少量輔助物質，例如濕潤劑或乳化劑、ph緩沖劑等。用于口服遞送的組合物中可以包括各種增稠劑、矯味劑、稀釋劑、乳化劑、分散助劑或粘合劑等。本發(fā)明內容的組合物可以包含任意另外的成分，以便提供適合于施用的形式的組合物?；钚詣┰谥苿┲械淖罱K用量可變。然而，通常，制劑中的用量約為1-99％。例如，如公布的美國專利申請20070275939和20100273761(ren等人)中所述，可以合成25hc3s，兩篇文獻的全部內容以其完整的形式并入本文參考。

可供選擇地或另外，將ocs例如25hc3s的前體施用于受試者，且該前體通過體內被轉化成例如25hc3s。示例性的25hc3s前體包括、但不限于25-羥基膽固醇(25hc)。在所有方面，生物可利用的ocs水平在體內或在身體的相關部分內(循環(huán)系統(tǒng)、血液、內臟器官、肝等)增加(升高、增強等)，作為前體轉化的結果和ocs的升高水平的有益效果產生。

本發(fā)明內容的其它方面包括施用編碼酶的核酸，所述酶產生ocs、例如25hc3s或25hcds或在產生ocs、例如25hc3s或25hcds的生物合成途徑中具有活性，以便增加生物可利用的ocs的水平?？梢栽谟写诵枰氖茉囌咧邪凑者@種方式超表達的示例性酶包括、但不限于羥基固醇磺基轉移酶sult2b1b。超表達的sult2b1b催化受試者內天然存在的內源性底物25hc的硫酸化，從而將其轉化成25hc3s，由此增加受試者中25hc3s的濃度。施用核酸例如在適合的載體中的核酸可以使用本領域公知的適合的方法進行。本發(fā)明內容的該方面任選地包括共同施用ocs，例如25hc3s的外源性前體(例如25hc)與所述核酸。本發(fā)明內容還涵蓋治療方法，其中施用ocs，例如25hc3s和編碼相關酶的核酸，所述酶例如為sult2b1b或其酶活性形式(使用或不使用底物，例如25hc)。例如，在如下文獻中描述了用于這類基因療法的技術和指導原則：“presentandfutureofadenoassociatedvirusbasedgenetherapyapproaches.”recentpatendocrmetabimmunedrugdiscov.2012年1月；6(1),47-66.“genedeliverysystem：adevelopingarenaofstudyfortheneweraofmedicine”recentpatdnageneseq.2010年1月2日[刊印前的電子版].“nanoparticlesingenetherapyprinciples,prospects,andchallenges”.progmolbioltranslsci.2011；104:509-62。

可以通過本領域技術人員公知的許多適合方式的任意種施用25hc3s組合物(制劑)，包括、但不限于通過注射(例如全身或通過靶向注射例如進入肝或肝附近)、靜脈內、吸入、口服、陰道內、鼻內、通過攝取包含活性劑的食物、局部、通過直接施用于肝組織等。在一些方面，通過注射或靜脈內實施施用模式。此外，可以將所述組合物與另外的治療方式例如降低血清脂質的物質、提高對胰島素的敏感性的藥劑等結合施用。

所施用本發(fā)明內容的組合物的受試者通常為哺乳動物，且可以是人。然而，上述受試者也可以是非人的哺乳動物，例如伴侶寵物或另外的可以得益于所述療法的非人的動物。

還提供在有此需要的受試者中治療與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的方法，包括：

選擇具有與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的受試者；和

用有效量的ocs或其藥學上可接受的鹽治療受試者。

在一些實施方案中，通過一種方法篩選具有與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積的受試者，該方法包括：測量受試者中瘦蛋白缺乏的一種或多種標記值；比較該值與來自不具有瘦蛋白缺乏的對照個體人群的一種或多種標記的至少一種陰性對照值或陰性對照范圍；和如果該值與陰性對照值不同或落入陰性對照范圍，則結論為該受試者具有與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積。

在一些方面，本發(fā)明內容的方法包括鑒定需要本文所述治療方法的受試者，例如具有瘦蛋白缺乏(ld)、瘦蛋白抗性(lr)或脂質貯積病(lsd)且由此可能傾向于發(fā)生與瘦蛋白缺乏相關的脂質蓄積(ldla)、與瘦蛋白-抗性相關的脂質蓄積(lrla)、與脂質貯積病相關的脂質蓄積(lsdla)或具有或表現(xiàn)出與ld、lr、ldla、lrla或lsd相關的一種或多種標記或征候或處于發(fā)生ld、lr、ldla、lrla或lsd的風險中或與ld、lr、ldla、lrla或lsd相關或因其所致的疾病或病癥的受試者。例如，可以通過下列步驟鑒定這類受試者：測量指標，例如血清瘦蛋白的量；和比較該水平與在適合的健康對照受試者人群和/或已知具有l(wèi)d、lr和/或具有l(wèi)dla、lrla或脂質貯積障礙的對照受試者和/或治療這些適應證之一的對照受試者中測量的預定水平(范圍)和/或一種或多種預先在受試者中測量的對照水平。例如，通常，仍然表現(xiàn)出瘦蛋白水平缺乏的患者中大于約10ng/ml血清和通常大于約20ng/ml且更通常大于約25ng/ml的瘦蛋白水平被解釋為與瘦蛋白缺乏一致或顯示為或診斷為瘦蛋白缺乏?？崭寡窃囼灱碼c1檢驗(在3個月期間測量的血糖水平平均值)、pai-1(纖溶酶原激活物抑制因子-1)、crp試驗(c-反應蛋白)、尿檢驗、tsh(甲狀腺激素)檢驗、測量膽固醇水平、雄激素水平、脂肪沉積的肝超聲檢查等的異常值可以用于診斷瘦蛋白抗性。脂肪球(例如非脂肪細胞的細胞類型內部的胞內脂肪沉積物，例如甘油三酯或一些另外的脂質的空泡或小滴)也是疾病的指示物。脂質貯積障礙的診斷通常包括證實外周血白細胞或培養(yǎng)的成纖維細胞中的特異性酶缺乏，且還可以使用遺傳分析。此外，可觀察到的癥狀、例如具有肌肉控制困難等可以是疾病的最初指示物。

在另外的方面，本發(fā)明內容的方法包括鑒定需要本文所述治療方法的受試者，例如具有異常脂質蓄積，例如歸因于不足的瘦蛋白活性(ld、lr等)或脂質貯積障礙的受試者。

診斷可以通過臨床檢查、活組織檢查、基因測定(用于預測障礙的突變)、細胞或組織的分子分析和酶測定(測試各種細胞或體液的酶缺乏)來進行?；加袦p弱的瘦蛋白活性或脂質貯積障礙的受試者還可以基于呈現(xiàn)的癥狀進行篩選。例如，被診斷為患有戈謝病的受試者可以基于存在擴大的脾和肝、肝功能障礙、骨骼疾患和可能導致疼痛和骨折的骨損害、嚴重的神經系統(tǒng)并發(fā)癥、淋巴結和(偶然的)相鄰關節(jié)腫大、腹脹、皮膚呈褐色、貧血、低血小板和眼內黃斑和/或存在酶葡糖腦苷酯酶的缺乏。

對脂質貯積病的活組織檢查包括從受試者中取出肝或其它組織的小樣品并且在顯微鏡下研究或對上述組織樣品進行定量/定性分析。在該方法中，臨床醫(yī)師施用局部麻醉劑且然后通過手術方式或通過針吸活組織檢查取出小片組織(通過經皮膚插入細的空心針取出小片組織)。分析該組織樣品的例如脂質沉積或酶活性。此外，或任選地，可以對受試者的脂質/糖原貯積病進行基因測定，以便確定該受試者是否攜帶導致所述障礙的突變基因。

通過施用本文描述的活性劑發(fā)揮的有益效果包括：ld、lr、ldla、lrla或脂質貯積障礙的一種或多種癥狀減少，這種減少以比不存在ocs施用時發(fā)生的更快的速率或更顯著的程度發(fā)生。示例性的有益效果包括、但不限于例如受試者的細胞(例如肝細胞)的血清中的脂質水平減少和/或肝中的脂肪減少，例如比適當?shù)膶φ战M例如尚未施用本文所述活性劑的匹配的一個對照受試者或多個對照受試者減少至少約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或甚至100％。重量減輕和/或重量保持穩(wěn)定也可以發(fā)生。

在一些方面，所述方法還包括監(jiān)測受試者中ocs施用的效果。因此，在開始ocs施用方案后，可以觀察到、追蹤到、測定到或監(jiān)測到本文討論的疾病/障礙的一種或多種癥狀，且注意到癥狀的程度、存在或發(fā)展水平，并且與在先(預先治療或治療期間的早期)水平進行比較。此外，按照這種方式監(jiān)測ld或lr或脂質貯積障礙的一種或多種標記。例如，在一些情況中，施用ocs減少細胞、組織或器官例如肝中脂質蓄積，由此減小治療前存在的脂質沉積物的大小和/或數(shù)量；和/或預防脂質沉積物大小和/或數(shù)量的進一步增加；減少血清膽固醇；減少血漿甘油三酯類；和/或減少游離脂肪酸。在評價結果時，本領域技術人員可以評價治療進展且例如由此調整ocs的劑量。例如，該劑量通常增加，如果癥狀沒有得到有效治療或減輕(或終止)(如果癥狀被根除或減輕至預定期望的或目標水平等)。對于具有針對牽涉不需要的、異常的和有害的脂質蓄積的疾病的遺傳素質的患者而言，治療可以在其壽命的至始至終進行。

可以得益于施用ocs、例如25hc3s的受試者是經歷或可能經歷與ld、lr或脂質貯積病相關的癥狀或病癥的那些?！芭c…相關”例如意旨不需要的損害健康的癥狀。典型地是發(fā)生在被診斷為ld、lr、ldla、lrla或脂質貯積障礙的個體中的那些。在一些方面，所述癥狀因缺陷性瘦蛋白活性或脂質貯積障礙導致，其可能與缺陷性瘦蛋白活性或脂質貯積障礙一起發(fā)生，或甚至可能導致缺陷性瘦蛋白活性或脂質貯積障礙。在一些方面，相關病癥是與ld-或lr-相關的高脂血癥?！芭cld-或lr相關的高脂血癥”意旨具有l(wèi)d或lr的受試者血液中任意或所有脂質和/或脂蛋白異常升高水平的病癥。在另外的方面，相關的病癥是與脂質貯積病(lsd)相關的異常脂質沉積，例如在中樞神經組織或外周神經組織中?？梢栽谑茉囌咧猩卟⑶彝ㄟ^本文所述治療減少的脂質和脂質復合物包括、但不限于乳糜微粒、極低密度脂蛋白、中密度脂蛋白、低密度脂蛋白(ldl)、高密度脂蛋白(hdl)和鞘脂類以及它們的沉積物或小球。具體地，已知升高的膽固醇(高膽固醇血癥)和甘油三酯(高甘油三酯血癥)是血管和心血管疾病的危險因素，因為它們會影響動脈粥樣硬化。脂質升高也可能使受試者易患其它病癥例如急性胰腺炎。因此，本發(fā)明內容的方法也可以用在升高的脂質與升高的脂質有關的病癥的治療或預防中，這樣的病癥包括，例如，但不限于：高脂血癥、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、脂肪肝(肝臟皮質腺病(hepaticsteatosis))和代謝綜合征心血管疾病、冠心病、動脈粥樣硬化、急性胰腺炎、各種代謝障礙，例如胰島素抗性綜合征、糖尿病、多囊卵巢綜合征、脂肪肝病、惡病質、肥胖、動脈粥樣硬化、動脈硬化、中風、膽結石、炎性腸病等。另外，與高脂血癥有關的各種病癥包括在授權的美國專利us8,003,795(liu,等人)和us8,044,243(sharma,等人)中描述的那些，它們二者的整個內容通過引用整體并入本文。

通常，“預防性的”或“預防”涉及減少患者發(fā)生與ld例如ldla相關或與lr例如lrla相關或與脂質貯積病相關的障礙或癥狀的可能性。例如，所述方法可以以預防方式用作為保護健康和預防患者疾病的擴散或成熟而設計的措施(measure)。還可以理解，疾病的不同治療或預防模式可以意旨"實質上"治療或預防，包括整體(total)，但也低于整體治療或預防，且其中實現(xiàn)一些生物學或醫(yī)學相關結果，例如，改善和/或處置疾病癥狀，生活質量改善等。此外，治療(treatment)或治療(treating)和緩解可以意旨治療性治療和預防性或預防的措施，其中目標在于預防或緩解(減輕)疾病狀態(tài)、病癥或疾病進展(malady)。例如，在施用有效量或治療量的25hc3s后，治療是成功的，如果所治療的受試者顯示與ld相關的疾病或病癥的一種或多種征候和癥狀、與lr相關的疾病或病癥或脂質貯積障礙的可觀察到的和/或可測定的減輕或不存在和/或發(fā)病率和死亡率降低和/或生活質量改善。

在一個方面，所治療的受試者是具有因一種或多種遺傳異常導致的瘦蛋白活性缺乏的個體。例如，可以通過本文所述的方法治療在編碼瘦蛋白受體的ob(lep)基因中具有一種或多種突變或編碼瘦蛋白的lep基因中的突變的個體。瘦蛋白受體存在于下丘腦和具有該受體中突變的個體中，尤其是對突變具有純合型的那些，他們通?；加蟹逝趾推渌鼜纳钤缙陂_始的嚴重損害生命和威脅生命的異常。相關癥狀包括長期進食過量(攝食過度)；肥胖；異常進食行為(例如與另外的兒童對食品(overfood)爭斗、積蓄食物、秘密進食等)；低促性腺素功能減退癥(指導性發(fā)育的激素產生減少，其可以延遲或阻止青春期并且可能導致不育)；對溶組織內阿米巴(entamoebahistolytica)感染的易感性增加等。具有l(wèi)ep基因中的突變的個體可能表現(xiàn)出類似癥狀。

在一個方面，為了治療、預防或逆轉這些癥狀，可以使用本文所述方法治療的受試者是兒童(甚至是極為幼小的兒童，例如新生兒或嬰兒)，他們已經被測試為編碼瘦蛋白的基因或瘦蛋白受體中的突變陽性和/或表現(xiàn)出瘦蛋白活性缺乏的一種或多種另外的癥狀。用于瘦蛋白受體突變的檢驗可以在出生時或出生前進行，例如在子宮中通過羊膜腔穿刺術或其它適合的技術或產后采用公知的基因測定方法進行?？晒┻x擇地，雙親之一或他們兩者的基因測定還可以顯示施用ocs、例如25hc3s的適當性，所述基因測定的結果顯示胎兒/嬰兒具有使用或不使用對嬰兒/胎兒自身測試擁有瘦蛋白或瘦蛋白受體突變的高度可能性。施用ocs可以即刻開始，例如在出生后或甚至出生前。例如，可以將ocs施用于妊娠女性，其胎兒已經被診斷為攜帶瘦蛋白受體突變，使得胎兒在妊娠期間暴露于或接觸所述藥劑?？晒┻x擇地或另外，可以將ocs施用于這類個體的乳養(yǎng)母親以升高ocs在母乳中的水平，其被嬰兒攝入或通過一些另外適合的方式攝入。

本文的“胎兒”意旨未出生的哺乳動物后代；“新生兒”意旨新出生的兒童或后代，尤其是低于一個月的兒童或后代；“嬰兒”意旨年齡在1個月與2歲之間的人類兒童；“兒童”意旨低于青春期(明顯的性發(fā)育開始)的年齡的人體受試者；“青少年”意旨從青春期到成人期的人體受試者；“成年人”意旨完全能夠生殖的性成熟個體(或能夠生殖、但因異?；蛏眢w病癥而預防它們，例如遺傳誘導的ld、lr或lsd發(fā)生的個體)，例如對于人，至少約13歲年齡。本領域技術人員認為相同或相似的術語可以適用于通過本文所述方法治療的非人的種類。

在另一個方面，所治療的受試者是患有先天性脂質貯積障礙的個體。這類障礙典型地特征在于細胞或組織中脂質的不需要的或異常的累積(蓄積)。脂質貯積障礙包括，例如，中性脂質貯積病、戈謝病、尼皮二氏病、法布萊病、法伯病、神經節(jié)苷脂累積病例如神經節(jié)苷脂gm1沉積癥和神經節(jié)苷脂gm2沉積癥(例如泰-薩二氏病和sandhoff病)、克拉貝病、異染性腦白質營養(yǎng)不良(mld，包括完后期嬰幼兒、青少年和成人mld)和酸性脂酶缺乏癥，例如沃爾曼氏病和膽固醇酯貯積病。這些疾病各自因至少一種遺傳突變導致，所述遺傳突變產生牽涉脂質沉積的無功能性或功能性差的酶。例如：

戈謝病，即一種溶酶體貯積病，因酶葡糖腦苷酯酶(葡糖苷酰鞘氨醇酶)缺乏導致且特征在于鞘脂類的細胞和器官累積。

法伯病，即一種溶酶體貯積病，因引起脂肪物質脂質蓄積的酶神經鞘氨醇酶缺乏導致關節(jié)、肝、咽喉、組織和中樞神經系統(tǒng)的異常。

尼皮二氏病(nieman-pickdisease)是一種溶酶體貯積病，其中脂肪鞘磷脂蓄積在溶酶體中。a型和b型因編碼酶酸性神經鞘磷酯酶的基因中的突變導致。c型因編碼核內質溶酶體系統(tǒng)的轉運蛋白的基因中的突變導致。

沃爾曼氏病歸因于編碼溶酶體酸性脂酶(lal或lipa)的基因中的突變并且是一種溶酶體貯積病。晚期發(fā)作形式稱作膽固醇酯貯積病。

異染性腦白質營養(yǎng)不良，即一種溶酶體貯積病，因編碼芳基硫酸酯酶a的基因中的缺陷導致，并且導致細胞中稱作硫苷脂類的脂肪蓄積。

法布萊病，即一種溶酶體貯積病，因編碼α-半乳糖苷酶a的基因中的突變導致，并且導致血管、其它組織和器官內的球形三脂?；拾按?gb3、gl-3或三己糖?；拾贝?蓄積。

中性脂質貯積病肌病亞型(nlsd-m)因編碼脂肪細胞甘油三酯脂酶(atgl，也稱作desnutrin)的pnpla2中的功能缺失突變導致。

神經節(jié)苷脂沉積癥是神經鞘脂貯積癥的亞類，其包含來自不同類型的脂質貯積障礙，它們因稱作神經節(jié)苷脂類的脂質蓄積導致。gm1神經節(jié)苷脂沉積癥因β-半乳糖苷酶缺乏導致，其中產生中樞神經系統(tǒng)和外周神經系統(tǒng)細胞中的酸性脂質物質異常貯存，但特別是在神經細胞中的酸性脂質物質異常貯存。gm2神經節(jié)苷脂沉積癥因酶β-氨基己糖苷酶缺乏導致，該酶催化稱作神經節(jié)苷脂類的脂肪酸衍生物的生物降解。例如，泰-薩二氏病因hexa基因(編碼β-n-乙酰氨基己糖苷酶a即一種溶酶體酶的α-亞單位)中的突變導致，所述突變導致基因產物中的異常。

在一個實施方案中，脂質貯積障礙是中性脂質貯積病(nlsd)(也稱作"chanarin-dorfman綜合征")。nlsd是常染色體隱性遺傳障礙，其中脂質異常地被貯存在遍及體內的器官和組織中，其特征在于甘油三酯類蓄積在白細胞的細胞質、肌肉、肝、成纖維細胞和其它組織中，具有nlsd的個體患有心肌病和骨骼肌病和因脂肪蓄積在肌肉組織中導致的脂肪肝。nlsd的其它特征包括脂肝、心臟衰弱和心臟擴大(心肌病)、胰腺炎癥(胰腺炎)和甲狀腺活性降低(甲狀腺功能減退)。脂肪細胞甘油三酯脂酶(atgl)調節(jié)蛋白cgi-58中的突變導致nlsd-i，額外的癥狀在于神經缺陷(lefevre等人am.j.hum.genet.2001)。在一個實施方案中，脂質貯積障礙是具有肌病的中性脂質貯積病(nlsd-m)。pnpla2基因中的突變導致nlsd-m，其特征在于一種比nlsd更嚴重性的肌病。pnpla2基因編碼酶脂肪細胞甘油三酯脂酶(atgl)，其在破壞細胞中主要儲能來源的甘油三酯類中起作用。pnpla2基因突變損傷atgl酶分解甘油三酯類的能力，然后蓄積在遍及體內的肌肉和組織中，導致具有肌病的中性脂質貯積病的征候和癥狀。被鑒定為nlsd-m的6位患者中的2位死于心力衰竭(fischer等人nat.genet.2007)。

在一個實施方案中，脂質貯積障礙是尼皮二氏病。尼皮二氏病是一組常染色體隱性遺傳障礙，其因脂肪和膽固醇蓄積在肝、脾、骨髓、肺和在一些患者中的腦中導致。神經系統(tǒng)并發(fā)癥可以包括共濟失調、眼麻痹、腦退化、學習問題、痙攣狀態(tài)、攝食和吞咽困難、語言不清、肌緊張喪失、對觸摸的超敏反應和一定的角膜混濁。特征性櫻桃色暈輪(halo)發(fā)生在50％患者中的視網膜中心周圍。

在一個實施方案中，脂質貯積障礙是戈謝病。戈謝病是脂質貯積病中最常見的并且由酶葡糖腦苷酯酶缺乏導致。脂肪物質通常在脾、肝、腎、肺、腦和骨髓中采集。癥狀可以包括脾和肝擴大、肝功能障礙、骨骼疾患和可能導致疼痛和骨折的骨損害、嚴重的神經系統(tǒng)并發(fā)癥、淋巴結和(偶然的)相鄰關節(jié)腫大、腹脹、皮膚呈褐色、貧血、低血小板和眼內黃斑。受到最嚴重侵害的人還更易感感染。該疾病對男性和女性的侵害是等同的。

戈謝病具有三種常見的臨床亞型。1型(或非神經病變型(normeuropathictype))是該病的最常見形式。它最常見于德系猶太人遺傳性的人中。

戈謝病的癥狀開始于生命的早期和成年期，并且包括擴大的肝和明顯擴大的脾，其可能破裂并且導致額外的并發(fā)癥。骨骼脆弱和骨病可能泛發(fā)。腦不受侵害，但可能存在于肺，且罕見腎損傷。該組中的患者因低血小板而通常易于青腫并且因貧血而經歷疲勞。根據疾病發(fā)作和嚴重性的不同，1型患者可以良好地生活至成年期。許多患者具有該病的輕度形式或未表現(xiàn)出任何癥狀。2型(或急性嬰幼兒神經性戈謝病)典型地開始于出生的3個月內。癥狀包括肝和脾擴大、異常眼運動、泛發(fā)性和進行性腦損害、癲癇發(fā)作、肢體僵化和吸入和吞咽能力差。受侵害的兒童通常在2歲之前死亡。3型(慢性神經病形式)可以開始于兒童期的任意時間或甚至成年期。其特征在于緩慢的進行性、而與急性或2型戈謝病相比較為輕度的神經病學表現(xiàn)。主要癥狀包括擴大的脾和/或肝、癲癇發(fā)作、協(xié)調性差、骨骼不齊、眼運動障礙、血液病包括貧血和呼吸問題。患者通常生活至其青少年早期，并且在一些情況中，可以生活至成年期。

在一些實施方案中，可以將本發(fā)明內容的化合物與已知在該病中有效的另外的療法結合施用。例如，針對1型且最可能是3型戈謝病患者，可以每2周通過靜脈內給予酶替代治療，并且可以顯著地減小肝和脾的大小，減輕骨骼異常，并且逆轉其它的表現(xiàn)。對于罕見情形可能需要手術摘除脾(只要患者貧血或在擴大的器官影響患者舒適感時)。輸血可以使一些貧血患者有益。另外的患者可能需要關節(jié)置換術以改善運動性和生活質量。

尼皮二氏病目前被再分成4類。最嚴重形式的a型發(fā)作見于早期嬰兒期。嬰兒在出生時表現(xiàn)正常，但截止到6個月齡時展示出擴大的肝和脾、腫脹的淋巴結、皮膚下結節(jié)(黃斑瘤(xanthemas))和明顯的腦損害。脾可能擴大至其正常大小的10倍并且可能破裂。這些兒童逐漸變得更為虛弱，失去運動功能，可能變成貧血，并且易感復發(fā)性感染。他們罕有生活超過18個月。該病的這種形式最常見于猶太家族中。在第二組中，稱作b型(或青少年發(fā)作)的肝和脾擴大特征性地發(fā)生于青春期前。大部分患者還發(fā)生共濟失調、周圍神經病和隨年齡逐步發(fā)生的與肺相關的困難，但腦通常不受侵害。b型患者可以生活相當長的時間，但許多因牽涉肺而需要補充供氧。尼皮二氏病a和b型因稱作鞘磷脂的脂肪物質蓄積導致，這歸因于稱作鞘磷脂酶的酶缺乏。

尼皮二氏病還包括兩種另外的變化形式，稱作c和d型。它們可以出現(xiàn)在生命早期或在青少年或甚至成年中發(fā)展。尼皮二氏病c和d型不因鞘磷脂酶缺乏導致，而是因npc1或npc2蛋白缺乏導致。作為結果，不同的脂質且特別是膽固醇蓄積在神經細胞內部并且導致它們功能障礙。具有c和d型的患者的脾和肝僅具有中度的擴大。牽涉腦可能是廣泛的，導致不能向上和向下觀察、行走和吞咽困難和進行性目盲和聽覺缺失。d型患者典型地發(fā)生晚于具有c型的那些患者的神經病學表現(xiàn)，并且具有較為緩慢速率的進行性神經功能喪失。大部分d型患者共有常見的在新斯科舍(novascotia)的遺傳性背景。具有c和d型的患者的預期壽命相當不同。一些患者死于兒童期，而另外似乎受到侵害的嚴重程度較低的患者可以生活至成年期。兒童通常死于干擾或進行性神經損耗。

在本發(fā)明內容的一些實施方案中，可以將本發(fā)明內容的化合物結合另外的療法施用，例如，通?？梢詫⒕哂衏和d型的患者置于低-膽固醇膳食和/或降膽固醇藥環(huán)境中，不過，研究未證實這些干預改變異常膽固醇代謝或阻止該病的發(fā)展。

在一個實施方案中，脂質貯積障礙是法布萊病。法布萊病也稱作α半乳糖苷酶-a缺乏，其導致脂肪物質在自主神經系統(tǒng)、眼、腎和心血管系統(tǒng)中累積。法布萊病是僅伴x染色體的脂質貯積病。男性主要受侵害，不過，較為輕度的形式常見于女性中。偶然地，受侵害的女性具有類似于在具有該病的男性中觀察到的嚴重表現(xiàn)。癥狀發(fā)作通常在兒童期或青春期過程中。神經征候包括臂和腿中的灼痛，其在熱氣候中或在鍛煉后惡化，并且過量物質累積在角膜的透明層中(導致渾濁，但無視力改變)。血管壁上脂肪貯存可以損傷循環(huán)，從而使患者處于中風或心臟病的風險中。其它表現(xiàn)包括心臟擴大、導致腎衰竭的進行性腎損傷、胃腸道困難、出汗減少和發(fā)熱。血管角質瘤(皮膚上小的、非癌性的、淡紅色-紫色隆起斑點)可以發(fā)生在身體的軀干的下部上并且隨年齡的增長變得更多。具有法布萊病的患者通常過早地因并發(fā)癥死于心臟病、腎衰竭或中風。

在一些實施方案中，將所述化合物與另外的療法一起施用，例如，通常開據藥物處方，例如苯妥英(phenyloin)和卡馬西平，以便治療伴有法布萊病的疼痛，且甲氧氯普胺(metoclopramaide)或立普妥(lipisorb)(營養(yǎng)補劑)可以減輕通常發(fā)生在法布萊病中的胃腸道不適感，并且一些個體可能需要腎移植或透析。酶替代可以減少具有法布萊病的患者的貯存、減輕疼痛和改善器官功能。

法伯病，也稱作法伯脂肪性肉芽腫病，描述了一組罕見常染色體隱性遺傳障礙，其導致脂肪物質蓄積在關節(jié)、組織和中樞神經系統(tǒng)中。該障礙侵害男性和女性。疾病發(fā)作典型地在早期嬰兒期，但可以在生命的后期發(fā)生。具有典型法伯病形式的兒童在生命的前幾周發(fā)生神經病學表現(xiàn)。這些癥狀可以包括中度損害的心智能力和具有吞咽的問題。肝、心臟和腎也可能受到侵害。其它癥狀可以包括嘔吐、關節(jié)炎、淋巴結腫大、關節(jié)腫大、關節(jié)攣縮(關節(jié)周圍的肌肉或腱慢性縮短)、聲音嘶啞和當疾病發(fā)展時圍繞關節(jié)增厚的黃斑瘤。具有呼吸困難的患者可能需要插呼吸管。具有該病的大部分兒童截止到2歲時死亡，通常死于肺病。在該病的最嚴重形式之一中，肝和脾擴大(肝脾腫大)可以在出生后迅速被診斷。具有該病的這種形式的兒童通常在6個月內死亡。

法伯病因稱作神經鞘氨醇酶的酶缺乏導致。目前，不存在針對法伯病的特異性治療。可以開據皮質類固醇處方來緩解疼痛。骨髓移植可以改善幾乎沒有或無肺或神經系統(tǒng)并發(fā)癥的患者上的肉芽腫(發(fā)炎組織的小塊)。老年患者可能需要手術減輕或摘除肉芽腫。

在一個實施方案中，脂質貯積障礙是神經節(jié)苷脂累積病。神經節(jié)苷脂累積病由兩個不同組的遺傳疾病組成。它們均為常染色體隱性遺傳并且同樣侵害男性和女性。gm1神經節(jié)苷脂質貯積癥因酶β-半乳糖苷酶缺乏導致，從而造成酸性脂質物質特別地異常貯存在中樞神經系統(tǒng)和外周神經系統(tǒng)的神經細胞中。gm1神經節(jié)苷脂質貯積癥具有3種臨床表現(xiàn)：早期嬰幼兒、晚期嬰幼兒和成年人。早期嬰幼兒gm1征候(最嚴重的亞型，出生后即刻發(fā)作)可以包括神經變性、癲癇發(fā)作、肝和脾擴大、面部特征粗化、骨骼不齊、關節(jié)僵直、腹脹、肌無力、夸張的驚恐反應和與步態(tài)相關的問題。約半數(shù)受侵害的患者在眼中出現(xiàn)櫻桃紅斑。兒童截止到1歲可能出現(xiàn)聾和失明，且通常截止到3歲時死于心臟并發(fā)癥或肺炎。后期嬰幼兒gm1神經節(jié)苷脂質貯積癥發(fā)作典型地出現(xiàn)在1歲至3歲之間。神經學征候包括共濟失調、癲癇發(fā)作、癡呆和與語言相關的困難。成年人gm1神經節(jié)苷脂質貯積癥發(fā)作于3至30歲之間。癥狀包括肌肉萎縮、嚴重程度較低并且以比該病另外形式緩慢的速率發(fā)展的神經系統(tǒng)并發(fā)癥、在一些患者中出現(xiàn)的角膜混濁和張力失常(導致扭曲和反復運動或異常姿勢的持續(xù)肌肉收縮)。血管角質瘤可以發(fā)生在身體軀干的下部。在大部分患者中肝和脾的大小是正常的。

gm2神經節(jié)苷脂貯積癥還導致身體在組織和細胞中貯積過量的酸性脂肪物質，最明顯的是在神經細胞中。這些障礙因酶β-氨基己糖苷酶缺乏導致。gm2障礙包括泰-薩二氏病和sandhoff病。

泰-薩二氏病(也稱作gm2神經節(jié)苷脂質貯積癥變異型b)。泰-薩二氏病及其變化形式因酶氨基己糖苷酶a缺乏導致。發(fā)病率在東歐和德系猶太人人群以及一些法籍加拿大人和美國路易安那州本地人中特別地高。受侵害的兒童似乎在生命的前幾個月內出現(xiàn)正常。癥狀開始于6個月齡，并且包括進行性心智能力缺失、癡呆、減少的眼睛接觸、對噪聲的驚跳反射增加、導致耳聾的進行性聽覺缺失、吞咽困難、失明、視網膜中的櫻桃紅斑和一些麻痹。癲癇發(fā)作可以開始于兒童的第二年。兒童最終可能需要飼管，且他們通常截止到4歲時死于復發(fā)的感染。無特異性治療可以利用?？贵@厥藥最初可以控制癲癇發(fā)作。另外的支持性治療包括適當?shù)臓I養(yǎng)和水化和保持氣道開放的技術。該病的更為罕見的形式稱作遲發(fā)的泰-薩二氏病，其在患者的二十幾歲中和三十歲以內發(fā)生，其特征在于步態(tài)不穩(wěn)和進行性神經衰退。

sandhoff病(變異型ab)。這是一種嚴重形式的泰-薩二氏病。通常在6個月齡時發(fā)作，且不限于任何種族群體。神經系統(tǒng)征候可以包括中樞神經系統(tǒng)進行性衰退、運動發(fā)力、早期失明、對聲音的驚恐反應明顯、痙攣狀態(tài)、肌痙攣(肌肉震動樣收縮)、癲癇發(fā)作、大頭(異常擴大的頭)和眼中的櫻桃紅斑。其它癥狀可以包括頻繁的呼吸道感染、心臟雜音、洋娃娃樣面部特征以及肝和脾擴大。對于sandhoff病無特異性治療。與泰-薩二氏病一樣，支持性治療包括保持氣道開放和適當營養(yǎng)和水化?？贵@厥藥最初可以控制癲癇發(fā)作。兒童通常截止到3歲時死于呼吸道感染。

在一個實施方案中，脂質貯積障礙是克拉貝病?？死惒?也稱作球樣細胞腦白質營養(yǎng)不良和半乳糖?；拾贝贾练e癥)是因酶半乳糖腦苷脂酶缺乏導致的常染色體隱性遺傳障礙。該病最常見地侵害嬰兒，在6個月齡前發(fā)作，但可以發(fā)生在青春期或成年期中。未消化的脂肪累積侵害神經保護性髓鞘生長并且導致精神和運動技能嚴重衰退。其它癥狀包括肌無力、張力亢進(肌肉拉伸的能力下降)、肌陣攣性癲癇發(fā)作(肢體突然的震動樣收縮)、痙攣狀態(tài)、易怒、無法解釋的發(fā)熱、耳聾、視神經萎縮和失明、麻痹和吞咽時困難。還可能發(fā)生延長的體重減輕。該病可以根據其細胞特征性分組為腦白質中的球樣體、神經脫髓鞘和變性以及腦細胞破壞而被診斷。在嬰兒中，該病通常在2歲前是致命性的。具有該病的遲發(fā)形式的患者具有較為輕度的疾病過程并且明顯可以生活更長時間。

在一個實施方案中，脂質貯積病是異染性腦白質營養(yǎng)不良(mld)。mld是一組障礙，它們以在中樞神經系統(tǒng)白質和外周神經中貯存累積并且在某種程度上在腎中為標志。與克拉貝病類似，mld侵害覆蓋和保護神經的鞘磷脂。常染色體隱性遺傳障礙因酶芳基硫酸酯酶缺乏導致。男性和女性均受該病侵害。

mld具有三種特征性表型：晚期嬰幼兒、青少年和成年。該病的最常見形式為晚期嬰幼兒，典型地在出生后12至20個月之間發(fā)作。嬰兒可以首先表現(xiàn)為正常，但在2歲前發(fā)生步行中發(fā)生困難且有跌倒的趨勢，然后在臂和腿中出現(xiàn)間歇性痛、導致失明的進行性目盲、發(fā)育遲滯、吞咽損害、驚厥和癡呆。兒童還發(fā)生逐步的肌萎縮且最終發(fā)生行走能力缺失。具有該病的這種形式的大部分兒童截止到5歲時死亡。青少年形式的癥狀典型地開始于3至10歲之間。癥狀包括學校表現(xiàn)受損、精神衰退、共濟失調、癲癇發(fā)作和癡呆。癥狀是進行性的，在發(fā)作后10-20年發(fā)生死亡。在成年形式中，癥狀開始于16歲之后并且可以包括注意力不集中、抑郁癥、精神病學障礙、共濟失調、癲癇發(fā)作、顫動和癡呆。死亡在癥狀發(fā)作后6-14年內發(fā)生。

在一些情況中，骨髓移植可以延遲該病的發(fā)展。在mld動物模型中，有關基因療法方面已經取得了相當?shù)倪M展。

在一個實施方案中，脂質貯積障礙是沃爾曼氏病。沃爾曼氏病也稱作酸性脂酶缺乏，其為嚴重的脂質貯積障礙，截止到1歲時通常是致命性的。這種常染色體隱性遺傳障礙以可以明顯累積并且導致細胞和組織中的損害的膽固醇酯(正常地膽固醇轉運形式)和甘油三酯類(化學形式，其中脂肪存在于體內)蓄積。該病可以侵害男性和女性。嬰兒是正常的且在出生時是活躍的，但迅速地發(fā)生進行性精神衰退、肝擴大和顯著的脾擴大、腹脹、胃腸道問題包括脂肪瀉(糞便中脂肪過量)、黃疸、貧血、嘔吐和腎上腺中鈣沉積(導致其硬化)。

在一個實施方案中，脂質貯積障礙是膽固醇酯貯積病，其特征在于酸性脂酶缺乏。膽固醇酯貯積病因膽固醇酯和甘油三酯類貯積在血液和淋巴和淋巴組織內的細胞中而導致。兒童發(fā)生肝擴大，導致肝硬化，和成年期前的慢性肝衰竭。兒童還可能具有腎上腺中的鈣沉積并且可能在該病的晚期發(fā)生黃疸。

具有脂質貯積障礙的受試者的治療優(yōu)選盡可能早地開始，且通常如上述對特征為異常脂質蓄積的另外的疾病所述進行和監(jiān)測。還可以提供結合酶替代療法的治療。

在一些方面，通過本文所述方法治療的受試者群體可以具有或可以不具有高水平膽固醇(高膽固醇血癥，例如血清中的膽固醇水平在約200mg/dl或更多的范圍)或與高水平膽固醇相關的病癥的一種或多種的癥狀和/或已經被診斷為上述情形，所述病癥例如高脂血癥、動脈粥樣硬化、心臟病、中風、阿爾茨海默病、膽石病、膽汁郁積性肝病等。在一些方面，通過本文所述方法治療的受試者群體可以具有或可以不具有高甘油三酯血癥的或具有與高甘油三酯血癥相關的病癥的癥狀和/或已經被診斷為上述情形。在一些方面，通過本文所述方法治療的受試者群體不具有高水平膽固醇(高膽固醇血癥，例如血清中的膽固醇水平在約200mg/dl或更多的范圍)或具有與高水平膽固醇相關的病癥的癥狀和/或未曾被診斷上述情形，所述病癥例如高脂血癥、動脈粥樣硬化、心臟病、中風、阿爾茨海默病、膽石病、膽汁郁積性肝病等。

在另外的方面，通過本文所述方法治療的受試者群體可以具有或可以不具有肝病癥的癥狀和/或未被診斷為肝病癥，所述肝病癥例如肝炎、主要由各種病毒、而且由一些毒物(例如酒精)造成的肝臟炎癥；自身免疫性病癥(自身免疫性肝炎)或遺傳性病癥；非酒精性脂肪肝病，即與肥胖有關且以肝臟中的豐富的脂肪為特征的疾病范圍，它們可以導致肝炎，即脂肪肝和/或肝硬化；肝硬化，即由于替換死亡肝細胞而在肝臟中形成纖維瘢痕組織(肝細胞的死亡可以由例如病毒性肝炎、酒精中毒或與其它肝毒性化學物質的接觸造成)；血色素沉著癥，即一種造成鐵在體內積累、最終導致肝損傷的遺傳性疾?。桓伟?例如原發(fā)性肝細胞癌或膽管上皮癌和轉移性癌癥，經常來自胃腸道的其它部分)；肝豆狀核變性(wilson’sdisease)，即造成體內保留銅的遺傳?。辉l(fā)性硬化性膽管炎，即一種膽管炎性疾病，可能在性質上是自身免疫性的；原發(fā)性膽汁性肝硬變，即一種膽管自身免疫病(可能本質上自身免疫)；巴-希二氏綜合征(肝靜脈的阻塞)；吉伯特氏綜合征，即一種遺傳性膽紅素代謝障礙，在約5％的人群中發(fā)現(xiàn)；糖原貯積病ⅱ型；以及各種兒科肝疾病，例如包括膽道閉鎖、α-1抗胰蛋白酶缺乏、alagille綜合征和進行性家族性肝內膽汁淤積等。另外，還可以治療由創(chuàng)傷引起的肝損傷，例如由事故、槍彈傷等造成的損傷。此外，可以預防或治療由某些藥物治療造成的肝損傷，例如，已知藥物例如抗心律不齊藥胺碘酮、各種抗病毒藥(例如核苷類似物)、阿司匹林(罕見地作為兒童的瑞氏綜合征的一部分)、皮質類固醇、甲氨蝶呤、他莫昔芬、四環(huán)素等會造成肝損傷。在另外的方面，通過本文所述方法治療的受試者群體不具有肝病癥的癥狀和/或未被診斷為肝病癥，所述肝病癥例如肝炎、主要由各種病毒、而且由一些毒物(例如酒精)造成的肝臟炎癥；自身免疫性病癥(自身免疫性肝炎)或遺傳性病癥；非酒精性脂肪肝病，即與肥胖有關且以肝臟中的豐富的脂肪為特征的疾病范圍，它們可以導致肝炎，即脂肪肝和/或肝硬化；肝硬化，即由于替換死亡肝細胞而在肝臟中形成纖維瘢痕組織(肝細胞的死亡可以由例如病毒性肝炎、酒精中毒或與其它肝毒性化學物質的接觸造成)；血色素沉著癥，即一種造成鐵在體內積累、最終導致肝損傷的遺傳性疾?。桓伟?例如原發(fā)性肝細胞癌或膽管上皮癌和轉移性癌癥，經常來自胃腸道的其它部分)；威爾森氏病，即一種造成身體保留銅的遺傳性疾??；原發(fā)性硬化性膽管炎，即一種膽管炎性疾病，可能在性質上是自身免疫性的；原發(fā)性膽汁性肝硬化，即一種小膽管自身免疫病；巴-希二氏綜合征(肝靜脈的阻塞)；吉爾伯特氏綜合征，即一種遺傳性膽紅素代謝障礙，在約5％的人群中發(fā)現(xiàn)；ii型糖原貯積??；以及各種兒科肝疾病，例如包括膽道閉鎖、α-1抗胰蛋白酶缺乏、alagille綜合征和進行性家族性肝內膽汁淤積等。另外，還可以治療由創(chuàng)傷引起的肝損傷，例如由事故、槍彈傷等造成的損傷。此外，可以預防或治療由某些藥物治療造成的肝損傷，例如，已知藥物例如抗心律不齊藥胺碘酮、各種抗病毒藥(例如核苷類似物)、阿司匹林(罕見地作為兒童的瑞氏綜合征的一部分)、皮質類固醇、甲氨蝶呤、他莫昔芬、四環(huán)素等會造成肝損傷。

在另外的方面，通過本文所述方法治療的受試者群體可以具有或可以不具有的癥狀非酒精性脂肪肝病(nafld)和/或非酒精性脂肪性肝炎(nash)。在另外的方面，通過本文所述方法治療的受試者群體不具有非酒精性脂肪肝病(nafld)和/或非酒精性脂肪性肝炎(nash)的癥狀。

在另外的方面，通過本文所述方法治療的受試者群體可以具有或可以不具有一種或多種疾病和病癥的癥狀，所述疾病和病癥導致和/或造成如下情形或否則與如下情形相關：器官或器官系統(tǒng)功能障礙/衰竭，例如一種或多種器官或器官系統(tǒng)，例如肝、腎、心臟、腦、胰腺、心血管、呼吸器官、腎、血液、神經、胃腸器官、肝器官、肺、腸、結腸和脾功能障礙或衰竭，包括多器官功能障礙綜合征(mods)和/或急性肝功能衰竭和/或腎功能衰竭和因對乙酰氨基酚(atmp)導致的器官功能障礙或衰竭；局部缺血，例如心臟、腦、腸、四肢和皮膚局部缺血；炎癥、組織壞死、器官壞死、中風和再灌注損傷；或與心血管手術、心臟手術、動脈瘤手術、肝手術和移植手術相關的器官功能障礙/衰竭。在另外的方面，通過本文所述方法治療的受試者群體不具有一種或多種疾病和病癥和/或未被診斷為具有一種或多種疾病和病癥，所述疾病和病癥導致和/或造成器官或器官系統(tǒng)功能障礙/衰竭或否則與之相關，例如一種或多種器官或器官系統(tǒng)，例如肝、腎、心臟、腦、胰腺、心血管、呼吸器官、腎、血液、神經、胃腸器官、肝器官、肺、腸、結腸和脾功能障礙或衰竭，包括多器官功能障礙綜合征(mods)和/或急性肝功能衰竭和/或腎功能衰竭和因對乙酰氨基酚(atmp)導致的器官功能障礙或衰竭；局部缺血，例如心臟、腦、腸、四肢和皮膚局部缺血；炎癥、組織壞死、器官壞死、中風和再灌注損傷；或與心血管手術、心臟手術、動脈瘤手術、肝手術和移植手術相關的器官功能障礙/衰竭。

在另外的方面，作為施用結果，對受試者施用本文所述的ocs可以或不可以一致性地治療另一種繼發(fā)性病癥，例如高脂血癥，和/或可以具有有益活性，例如減少胞內脂質，治療nafld中的脂質蓄積，減輕炎癥，抑制膽固醇生物合成，減少肝細胞中的脂肪蓄積，促進肝增生或肝組織再生，抑制脂質生物合成，減少膽固醇，減輕炎癥或治療例如糖尿病、高脂血癥、動脈粥樣硬化、脂肪肝病和/或炎性疾病。然而，本文所述的方法預期主要用于在有此需要的受試者中治療與減弱的瘦蛋白活性和/或脂質貯積障礙相關的疾病，所述受試者如本文所述被診斷，無論該受試者是否具有另外的障礙或另外的障礙的癥狀，無論所述“另外的障礙”是否在形式上被診斷。

本文所用的過渡性措詞"主要由…組成"(和合乎語法的變化形式)應當被理解為涵蓋所述材料或步驟和實質上影響所要求保護的本發(fā)明的基本和新特征的那些。參見mpep2111.03。因此，本文所用的術語"主要由…組成"與"包含"并不等同。

通過下列實施例進一步示例了本發(fā)明。該實施例是非限制性的，且不限制本發(fā)明的范圍。除非另有描述，否則實施例中提供的全部的百分比、份數(shù)等均按重量計。

實施例

25hc3s施用對與瘦蛋白抗性相關的癥狀和病癥的體內作用

方法

動物研究

為了檢驗25hc3s對瘦蛋白-缺乏(肥胖fa/fa)動物模型(zucker大鼠)中血清和肝中脂質蓄積的作用，將11周齡zucker大鼠(charlesriver,wilmington,ma)隨機分成4個組。肥胖fa/fazucker大鼠具有缺陷性瘦蛋白受體并且用作瘦蛋白活性缺乏的一般動物模型，無論是歸因于低瘦蛋白水平、瘦蛋白受體中的先天性缺陷，還是歸因于獲得性瘦蛋白抗性，因為它們均導致不足或錯誤的瘦蛋白活性。此外，這些動物在生活幾周后發(fā)生不需要的脂質蓄積，這歸因于瘦蛋白受體中的遺傳突變。使全部大鼠寄居在相同條件下，即12-小時光照/12-小時黑暗周期并且可以自由地取水和攝食。給大鼠(每個治療組中n＝5)口腔管飼媒介物(10％纖維素)或25hc3s(10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg)，每日1次，持續(xù)21天，并且禁食過夜(14hrs)，然后采集樣品。為了比較管飼法施用，給另外的大鼠(每個治療組中n＝10-17)通過腹膜內注射媒介物溶液(乙醇/pbs；媒介物)或25hc3s(50mg/kg)，每隔3天1次，持續(xù)6周，并且禁食過夜(14hrs)。采集血樣，然后處死。使用標準酶技術測定血清甘油三酯(tg)、總膽固醇(chol)、高密度脂蛋白-膽固醇(hdl-c)、堿性磷酸酶(alk)、丙氨酸氨基轉移酶(alt)和天冬氨酸氨基轉移酶(ast)。在如下描述中通過hplc分析脂蛋白特征(profile)。

血清脂蛋白特征的hplc分析

通過凝膠過濾，使用如上所述的hplc(bai等人,2012)測定脂蛋白、甘油三酯類和極低密度脂蛋白(vldl)、低密度脂蛋白(ldl)和高密度脂蛋白(hdl)中的膽固醇。簡言之，用154mmnacl與0.1mmedta(ph8.0)的溶劑以0.2ml/min的流速通過pharmaciasuperose6hr10/30fplc柱洗脫大鼠血清(100μl)，并且在280nm波長處讀取信號。從20min至100min各自采集級分1.2min。將180μl各級分+20μl10xwako總膽固醇e試劑的溶液(wakochemicalsusa,richmond,va)在96-孔板中在37℃下在黑暗中溫育3hrs，以便分析膽固醇水平，且在595nm的波長處讀取吸光度。將2μl各級分+200μlofinfinity^tm甘油三酯試劑(fisherscientific,pittsburgh,pa)在96-孔板中在37℃下在黑暗中溫育5分鐘，以便分析甘油三酯水平，且在500nm的波長處讀取吸光度。將脂蛋白特征監(jiān)測為內部對照。

組織形態(tài)學分析

采集來自每只大鼠肝臟的不同區(qū)域的3個樣本并且在室溫下固定在0.1m磷酸鹽緩沖液中的4％在低聚甲醛中過夜。將全部大鼠的樣本區(qū)域標準化。用蘇木精和伊紅(he)染色石蠟包埋的組織切片(4μm)。將3-3'-二氨基聯(lián)苯胺(dab)用作色原體并且將蘇木精用作核復染劑。

總胞內脂質的測定：胞內中性脂質的油紅o染色：用在pbs中3.7％的甲醛將肝載玻片固定30min，然后用磷酸緩沖鹽水(pbs)洗滌2次。用在60％2-丙醇中的0.2％油紅o將細胞染色10min，并且用pbs洗滌3次。使用安裝圖像記錄器的顯微鏡(olympus,tokyo,japan)在40x透鏡下取圖像。

通過光學顯微鏡檢查，由部門有經驗的獸醫(yī)病理學家定性檢查組織的全部載玻片。給損害的發(fā)生率和嚴重性評分。還評價損害的期限和分布。

肝脂質的定量

將肝組織勻漿化，并用氯仿和甲醇的混合物(2:1,v:v)提取肝總脂質。過濾提取物后。將0.2ml各自蒸發(fā)至干燥，并溶解于100μl含有10％triton^tmx-100(wakochemicalsusa,richmond,va)的異丙醇中進行膽固醇測定，溶解于100μlnefa溶液(0.5gedta-na2、2gtriton^tmx-100、0.76ml1nnaoh和0.5g疊氮化鈉/l,ph6.5)中用于游離脂肪酸測定(wakochemicalsusa,richmond,va)，或溶解于僅100μl異丙醇中用于甘油三酯測定(fisherscientific,pittsburgh,pa)。將每種脂質濃度通過肝重量標準化。

統(tǒng)計學分析

將全部結果表示為平均值±標準誤差。使用學生t-檢驗對于未配對樣品進行統(tǒng)計學分析。將p<0.05的值視為具有統(tǒng)計學顯著性。

結果

體內用25hc3s治療預防或逆轉具有所述疾病的受試者中的lr癥狀。特別地，施用25hc3s導致血清脂質水平下降并且減少受試者肝中的脂肪沉積。

25hc3s施用對zucker大鼠中脂質體內穩(wěn)態(tài)的作用。

已經顯示25hc3s減少原代肝細胞和thp-1巨噬細胞中的脂質蓄積(ma等人,2008；ren等人,2007；xu等人,2010)。為了研究25hc3s施用對瘦蛋白-抗性zucker大鼠中高脂血癥的作用，用25hc3s或媒介物將大鼠治療21天并且禁食過夜。通過管飼施用25hc3s治療顯著地分別將血漿tg和chol降低了30％和17％，如圖1中所示，而hdl(圖1a)和ldl水平(圖1b)沒有明顯改變。有意義地，腹膜內施用顯著地減低了總膽固醇和甘油三酯以及hdl(圖1a、c和d)，并且比管飼施用更有效。結果表明25hc3s不僅降低了肝中的這些脂質水平，而且降低了外周組織中的這些脂質水平。

為了研究25hc3s對肝脂質代謝的作用，測定了肝組織中的脂質水平。結果顯示管飼施用10mg/kg25hc3s顯著地降低了肝組織中的脂質，例如甘油三酯、總膽固醇和游離脂肪酸水平分別降低了43％、25％和26％(圖2a、b和c)。值得注意的是，游離膽固醇濃度不受施用25hc3s影響(圖2d)。通過形態(tài)學分析進一步證實，脂質水平降低(圖3和4)。對照大鼠的肝組織是蒼白的并且膨脹為大的細胞質脂質包含物(圖3a)，這表明成功地建立了瘦蛋白缺乏模型。然而，施用25hc3s顯著地降低了肝細胞中的脂質包含物(圖3b、c和d)。通過油紅o染色證實脂質蓄積，如圖4中所示。將結果如表1中所示概括。

表1.肝脂肪沉積的組織學發(fā)現(xiàn)

*n＝5只雄性

**1＝嚴重性最低(leastsevere)，5＝嚴重性最高(mostsevere)

因此，本研究首次顯示，當將25hc3s體內施用于瘦蛋白抗性受試者時，與lr相關的癥狀和病癥(例如肝中升高的血清脂質和脂質蓄積)得到有效地治療或預防。

參考文獻

bai,q.,zhang,x.,xu,l.,kakiyama,g.,heuman,dm.,sanyal,a.,pandak,wm.andren,s.oxysterolsulfationbyoverexpressionofhydroxysteroidsulfotransferasesult2b1bsuppressessrebp-1csignalingandreduceshepaticlipidsinmousemodelsofnonalcoholicfattyliverdiseases.metabolism：clinicalandexperimental,61,836-845,2012.

ma,y.,xu,l.,rodriguez-agudo,d.,li,x.,heuman,d.,hylemon,p.,pandak,wm.andren,s.25-hydroxycholesterol-3-sulfate(25hc3s)regulatesmacrophagelipidmetabolismviathelxr/srebp-1signalingpathway.ajp-endocrinologyandmetabolism,295,e1369,2008.

ren,s.,li,x.,rodriguez-agudo,d.,gil,g.,hylemon,p.andpandak,wm.sulfatedoxysterol,25hc3s,isapotentregulatoroflipidmetabolisminhumanhepatocytes.biochem.biophysic.res.commun.,6,802,2007.

xu,l.,bai,q.,rodriguez-agudo,d.,hylemon,p.,heuman,dm.,pandak,wm.,andren,s.regulationofhepatocytelipidmetabolismandinflammatoryresponseby25-hydroxycholesteroland25-hydroxycholesterol-3-sulfate,lipids,45,821-832,2010.

zhang,z.,li,d.,blanchard,d.e.,lears.r.,erickson,s.k.,andspencert.a.keyregulatoryoxysterolsinliver：analysisasδ4-3-ketonederivativesbyhplcandresponsetophysiologicalperturbations.j.lipidres.42,649-658,2001.

除非另有描述，否則所涉及的化合物或成分包括該化合物或成分自身以及與另外的化合物或成分的組合，例如化合物的混合物。

本文所用的單數(shù)形式"一種(a)"、"一種(an)"和"該(the)"包括復數(shù)參比物，上下文中另有清楚描述的除外。

盡管已經以它的優(yōu)選實施方案的方式描述了本發(fā)明，但是本領域技術人員會認識到，在所附權利要求的精神和范圍內做出修改的情況下，可以實踐本發(fā)明。因此，本發(fā)明不應當限于如上所述的實施方案，而是應當進一步包括在本文提供的描述的精神和范圍內的所有修改方案及其等同方案。