本發(fā)明具體涉及一種鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)及其制備方法。

背景技術(shù)：

鵝不食草系菊科(Compositae)石胡荽屬植物鵝不食草[Centipeda minima(L.)A.Br.et Aschers.]的帶花全草，為常用中藥，收載于《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)一部。別名石胡荽、雞腸草、地花椒，味辛性溫，具有通鼻竅、止咳喘的功效，中醫(yī)臨床主要用于風(fēng)寒頭痛，咳嗽痰多，鼻塞不通，鼻淵流涕等。鵝不食草在我國(guó)主要分布于福建、廣東、湖北、浙江、江蘇等地，江西、廣西等多地亦產(chǎn)。鵝不食草油(VOCM)是從鵝不食草藥材中提取的揮發(fā)油，含有反式乙酸菊烯酯、麝香草酚、棕櫚酸、馬鞭草烯醇、石竹烯等化學(xué)成分，不同產(chǎn)地鵝不食草所含揮發(fā)油中成分存在一定的差異性，其中含量較高的成分多為乙酸菊烯酯、麝香草酚等，經(jīng)硅膠柱色譜分離所得上述2種成分的分離物具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛活性。

申請(qǐng)人前期研究表明，從鵝不食草提取的鵝不食草油是治療過敏性鼻炎、咳嗽變異性哮喘的藥效部位，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景；鵝不食草油是脂溶性、淡黃色油狀液體，易揮發(fā)、味苦，其黏膜吸收及生物利用度較低。因此，依據(jù)鵝不食草油的藥效作用、性質(zhì)及吸收特點(diǎn)，研發(fā)可提高其生物利用度的臨床應(yīng)用制劑具有現(xiàn)實(shí)意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之一，在于提供一種鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)，包括以下重量份的各組分：

進(jìn)一步地，包括以下重量份的各組分：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之二，在于提供一種鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)的制備方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種所述的鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟：

步驟1：取鵝不食草油、聚氧乙烯蓖麻油、無(wú)水乙醇、置于燒杯中，渦旋分散，再于25℃下恒溫磁力攪拌均勻，得到微乳濃縮液；

步驟2：加蒸餾水總量20％的蒸餾水于所述微乳濃縮液中充分混勻，制成微乳中間體，備用；

步驟3：往剩余的蒸餾水中加入泊洛沙姆407和泊洛沙姆188，4℃放置至溶脹完全，得溫敏凝膠基質(zhì)；

步驟4：將所述微乳中間體加入所述溫敏凝膠基質(zhì)中，25℃恒溫充分?jǐn)嚢杈鶆?，即得鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：以鵝不食草油為原料，制備的鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)，室溫條件下藥物呈納米級(jí)微乳溶液，在鼻腔給藥后液體遇鼻腔溫度固化為凝膠，可黏附于鼻腔，且藥物以納米級(jí)顆粒被吸收，明顯改善了鵝不食草揮發(fā)油在水中的溶解度，提高了鵝不食草揮發(fā)油的穩(wěn)定性及鼻用生物利用度。

附圖說明

下面參照附圖結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。

圖1是本發(fā)明中鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)中的乙酸菊烯酯的累積釋放百分率曲線圖。

圖2是本發(fā)明中鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)中的麝香草酚的累積釋放百分率曲線圖。

圖3是本發(fā)明中大鼠鼻黏膜組織切片圖。

圖4是本發(fā)明中大鼠心臟組織切片圖。

圖5是本發(fā)明中大鼠肝臟組織切片圖。

圖6是本發(fā)明中大鼠脾臟組織切片圖。

圖7是本發(fā)明中大鼠肺組織切片圖。

圖8是本發(fā)明中大鼠腎臟組織切片圖。

其中，圖3至圖8中的A、B、C分別表示：

A空白對(duì)照組；B空白凝膠組；C鵝不食草油微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)組

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟：

步驟1：取59重量份的鵝不食草油、20重量份Lauglycol FCC(丙二醇單月桂酸甘油酯)、61重量份CrEL(聚氧乙烯蓖麻油)、61重量份無(wú)水乙醇，置于燒杯中，渦旋分散，再置于25℃恒溫磁力攪拌均勻，得微乳濃縮液；

步驟2：取133重量份蒸餾水與所述微乳濃縮液充分混勻，制成微乳中間體。

步驟3：另取86重量份泊洛沙姆407、66重量份泊洛沙姆188，加于514重量份蒸餾水中，4℃放置使之溶脹完全，得溫敏凝膠基質(zhì)。

步驟4：將步驟2所得微乳中間體加入步驟3所得溫敏凝膠基質(zhì)中，25℃恒溫充分磁力攪拌均勻，即得鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)。

實(shí)施例2

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：59重量份的鵝不食草油、56重量份Lauglycol FCC、42重量份CrEL、42重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例3

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：59重量份的鵝不食草油、14重量份Lauglycol FCC、84重量份CrEL、42重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例4

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：59重量份的鵝不食草油、14重量份Lauglycol FCC、42重量份CrEL、84重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例5

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：59重量份的鵝不食草油、35重量份Lauglycol FCC、63重量份CrEL、42重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例6

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：59重量份的鵝不食草油、35重量份Lauglycol FCC、42重量份CrEL、63重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例7

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：59重量份的鵝不食草油、14重量份Lauglycol FCC、63重量份CrEL、63重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例8

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：59重量份的鵝不食草油、28重量份Lauglycol FCC、56重量份CrEL、56重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例9

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：42重量份的鵝不食草油、22重量份Lauglycol FCC、68重量份CrEL、68重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例10

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：25重量份的鵝不食草油、25重量份Lauglycol FCC、75重量份CrEL、75重量份無(wú)水乙醇。

實(shí)施例11

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟1：置于室溫恒溫磁力攪拌均勻，得微乳濃縮液。

實(shí)施例12

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟3：取99重量份泊洛沙姆407、66重量份泊洛沙姆188，加于501重量份蒸餾水中。(蒸餾水總計(jì)634重量份。)

實(shí)施例13

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟3：取73重量份泊洛沙姆407、66重量份泊洛沙姆188，加于528重量份蒸餾水中。(蒸餾水總計(jì)661重量份。)

實(shí)施例14

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟3：取86重量份泊洛沙姆407、33重量份泊洛沙姆188，加于547重量份蒸餾水中。(蒸餾水總計(jì)680重量份。)

實(shí)施例15

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟3：取86重量份泊洛沙姆407、99重量份泊洛沙姆188，加于481重量份蒸餾水中。(蒸餾水總計(jì)614重量份。)

實(shí)施例16

本部分與實(shí)施例1不同之處在于：

步驟4：室溫恒溫充分磁力攪拌均勻。

其中，將實(shí)施例1制得的產(chǎn)品鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)，生產(chǎn)三批，并測(cè)驗(yàn)其各項(xiàng)性能，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1

本發(fā)明將鵝不食草揮發(fā)油與輔料充分混勻制得納米級(jí)鵝不食草油微乳，再與溫敏凝膠基質(zhì)混合，得到鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠，將鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠進(jìn)行體外釋藥特性研究，及與原料藥進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)比較研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)體外釋藥良好，且有助于提高鵝不食草揮發(fā)油的生物利用度。體外釋放度是將制劑在體外環(huán)境下模擬體內(nèi)情況進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，可用于評(píng)價(jià)制劑的體外釋藥特性。為考察鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)主要組分群的體外釋藥行為，本發(fā)明建立了鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)體外釋放度頂空GC-MS分析方法，本發(fā)明模擬體內(nèi)環(huán)境，采用Franz擴(kuò)散池法，以半透膜模擬鼻黏膜，考察鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)在人工鼻液中的體外釋藥行為，具體結(jié)果見圖1、圖2、表2、表3、表4。

從表2、圖1和圖2可見，在60h時(shí)，鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)中的乙酸菊烯酯和麝香草酚的累積釋放百分率達(dá)80％。表4、表5表明，鵝不食草油微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)中乙酸菊烯酯的釋藥行為符合Weibull方程，相關(guān)系數(shù)為0.9835；麝香草酚的釋藥行為符合Weibull方程，相關(guān)系數(shù)為0.9877，提示鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)的釋藥行為遵循Weibull動(dòng)力學(xué)。

表2三批鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠累積釋放百分率

表3鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)中的乙酸菊烯酯體外釋放的方程擬合結(jié)果

表4鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)中的麝香草酚體外釋放的方程擬合結(jié)果

生物利用度是指藥物被機(jī)體吸收進(jìn)入體循環(huán)的相對(duì)量和速率，是衡量不同制劑劑型療效的一個(gè)重要指標(biāo)，生物利用度又分為絕對(duì)生物利用度和相對(duì)生物利用度。微乳溫敏凝膠是一類新型納米制劑，它可通過增加藥物在給藥部位的作用時(shí)間從而提高藥效成分的生物利用度。本發(fā)明建立了測(cè)定大鼠血漿樣品中鵝不食草油主要成分乙酸菊烯酯與麝香草酚的頂空GC-MS分析方法，分析比較鼻腔給藥及口服給藥的藥物動(dòng)力學(xué)特性及相對(duì)生物利用度，通過鼻腔給藥鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)，和口服給藥1％鵝不食草油-0.5％吐溫80溶液。從表5和表6可以看到，鼻腔給藥鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)，乙酸菊烯酯與麝香草酚的達(dá)峰時(shí)間t_max均為5min，達(dá)峰濃度C_max分別為(0.2982±0.0489)μg·mL^-1和(0.7362±0.0574)μg·mL^-1?？诜Z不食草油-吐溫80溶液，乙酸菊烯酯與麝香草酚達(dá)峰時(shí)間t_max均為90min，達(dá)峰濃度C_max分別為(0.0790±0.0524)μg·mL^-1和(0.0936±0.0079)μg·mL^-1，表明鼻腔給藥比口服給藥起效快，鼻腔給藥血漿中的半衰期及平均駐留時(shí)間較短，鼻腔給藥鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)，乙酸菊烯酯與麝香草酚的C_max分別是口服給藥的3.775倍和7.865倍；藥鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)中乙酸菊烯酯與麝香草酚的相對(duì)生物利用度是口服給藥的1.279倍和1.323倍，表明鼻腔給藥納米制劑鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)后生物利用度獲得提高。

表5乙酸菊烯酯主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較(n＝6，)

表6麝香草酚主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較(n＝6，)

由于鼻用微乳溫敏凝膠在制劑過程要添加特定功能的輔料才能以鼻腔制劑的形式使用，故需要考察所采用的輔料對(duì)鼻黏膜可能產(chǎn)生的刺激性等，避免安全隱患。本發(fā)明通過觀察鼻腔給藥后大鼠的局部刺激性反應(yīng)及外觀特征、行為活動(dòng)等，并選擇大鼠鼻黏膜及主要臟器組織的形態(tài)學(xué)為檢測(cè)指標(biāo)，考察大鼠鼻腔給藥后鼻黏膜及主要臟器的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)變化，研究鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)的鼻黏膜刺激性及對(duì)主要臟器的影響，評(píng)價(jià)釋藥系統(tǒng)配方的安全性，為鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠的應(yīng)用開發(fā)提供初步的安全性評(píng)價(jià)。

實(shí)驗(yàn)：取實(shí)驗(yàn)大鼠18只，隨機(jī)分為3組，每組6只。A組為空白對(duì)照組，鼻腔給予生理鹽水；B組為空白微乳溫敏凝膠組，滴入空白溫敏凝膠基質(zhì)，觀察溫敏凝膠基質(zhì)是否對(duì)黏膜產(chǎn)生毒性；C組為鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)組，鼻腔給予鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)。采用SPSS statistics 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理，結(jié)果用表示，多組間比較用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，空白對(duì)照組、空白微乳溫敏凝膠組、鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)在給藥期間大鼠無(wú)一死亡，外觀體征正常，覓食行為正常，呼吸狀況未見異常，未見明顯中毒現(xiàn)象，鼻腔給藥后5min內(nèi)各組均有前爪撓鼻現(xiàn)象，撓鼻次數(shù)組間比較無(wú)差異(P>0.05，見表7)；未見打噴嚏、流涕、哮喘、咳嗽、嘔吐等局部刺激反應(yīng)；眼、鼻、耳等未見異常分泌物；糞便狀況無(wú)異常；肉眼觀察大鼠鼻腔未出現(xiàn)充血、紅腫現(xiàn)象。大鼠處死后肉眼觀察鼻黏膜及各臟器，各組鼻黏膜及臟器未有明顯外觀性狀差異。

給藥期間，空白微乳溫敏凝膠組、鵝不食草油微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)組與空白對(duì)照組的大鼠體重增加量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示其應(yīng)用具有一定安全性，結(jié)果見表8。

表7撓鼻次數(shù)比較表(n＝6)

表8體重情況變化表(n＝6)

從圖3可以看到，空白對(duì)照組大鼠鼻中隔軟骨上有完整纖毛和正常的黏膜細(xì)胞存在，未見明顯的血管充血現(xiàn)象；空白凝膠組及鵝不食草油微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)組均無(wú)明顯的黏膜細(xì)胞壞死、脫落及出血現(xiàn)象，表明給藥后鼻黏膜均無(wú)細(xì)胞壞死、脫落及出血。

從圖4可以看到，各組大鼠心臟組織切片心肌纖維排列整齊，未見纖維素滲出及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)明顯細(xì)胞病變、壞死現(xiàn)象，表明給藥后對(duì)心臟組織未見明顯影響。

從圖5中可以看到，各組大鼠肝臟組織切片肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，胞質(zhì)豐富，核大而圓，核仁清晰，未見明顯水腫、壞死現(xiàn)象，表明給藥后對(duì)肝臟組織未見明顯影響。

從圖6中可以看到，各組大鼠脾組織切片脾髓結(jié)構(gòu)完整，未見細(xì)胞壞死現(xiàn)象，表明給藥后脾組織均無(wú)明顯細(xì)胞壞死現(xiàn)象。

從圖7可以看到，各組大鼠肺組織切片被膜完整，未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)及明顯細(xì)胞壞死現(xiàn)象，表明給藥后肺組織均無(wú)明顯細(xì)胞壞死現(xiàn)象。

從圖8可以看到，各組大鼠腎臟組織切片有正常的腎小管邊界，完整的腎小球，未見纖維素滲出及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，未見明顯水腫、病變及壞死現(xiàn)象，表明給藥后腎臟組織均無(wú)明顯水腫病變及壞死現(xiàn)象。

本發(fā)明以生理鹽水為空白對(duì)照，對(duì)鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)及空白凝膠組正常劑量下連續(xù)給藥7天的安全性進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，大鼠外觀體征正常，呼吸狀況、體重增加量、撓鼻次數(shù)無(wú)差異，未見明顯局部刺激反應(yīng)。該制劑鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)在正常劑量下的鼻黏膜刺激性與空白對(duì)照組相近，刺激性?。淮笫蟊乔唤o藥鵝不食草油微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)后，主要臟器的組織切片圖結(jié)構(gòu)顯示與正常組及空白凝膠組一樣，均未見明顯的組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)病變、水腫、壞死等變化，表明應(yīng)用鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)具備安全性。

綜上所述，本發(fā)明的鵝不食草油鼻用微乳溫敏凝膠釋藥系統(tǒng)，室溫條件下藥物呈納米級(jí)微乳溶液，在鼻腔給藥后液體遇鼻腔溫度固化為凝膠可黏附于鼻腔，藥物以納米級(jí)顆粒被吸收，明顯改善了鵝不食草揮發(fā)油在水中的溶解度，提高了鵝不食草揮發(fā)油的穩(wěn)定性及鼻用生物利用度。