本發(fā)明公開了一種利用泥鰍制備滲透促進(jìn)劑的方法，屬于滲透促進(jìn)劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
由于細(xì)胞膜的天然屏障作用，大多數(shù)具有治療作用的極性分子、多肽、寡聚核苷酸很難進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮藥效作用，因此很多具有良好治療功能的大分子生物活性物質(zhì)在實(shí)際應(yīng)用中受到了極大的限制。研究人員用治療活性藥物的透皮給藥途徑來把藥物釋放進(jìn)哺乳動物、包括人的全身循環(huán)。不過，盡管對藥物的透皮釋藥來說已經(jīng)開發(fā)了許多方式，但對于外用化學(xué)物質(zhì)的滲透來說，人及其它動物的皮膚仍是一種優(yōu)秀的屏障。皮膚的最外層是角質(zhì)層，它對滲透提供了最大的抵抗性，而往里的皮膚層相對容易滲透。對皮膚疾患和疾病的適當(dāng)治療來說，使藥理活性劑透過角質(zhì)層并在病變部位達(dá)到適當(dāng)?shù)臐舛仁呛苤匾?，病變部位可能是角質(zhì)層、活的表皮、表皮一真皮連接、真皮本身、或所有上述皮膚層，具體位置取決于皮膚疾患或皮膚疾病的類型。
盡管已有多種滲透促進(jìn)劑被用來促進(jìn)治療劑的吸收進(jìn)入及通過皮膚，但當(dāng)滲透促進(jìn)劑經(jīng)過較長時(shí)間階段后與所給藥物不能共存時(shí)便產(chǎn)生了嚴(yán)重問題，因此當(dāng)將促進(jìn)劑與藥物共同配制用于包括人在內(nèi)的溫血動物的藥學(xué)上可接受的組合物中時(shí)，會導(dǎo)致藥物不穩(wěn)定并產(chǎn)生降解。所以，如果不把該滲透促進(jìn)劑和藥物混合在一起并不把它們存放在一起，藥物就不會在一段時(shí)間后變得不穩(wěn)定并降解產(chǎn)生所不希望的和潛在有害的副產(chǎn)物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題：針對滲透促進(jìn)劑相對分子質(zhì)量大、穩(wěn)定性差、皮膚滲透率較低，導(dǎo)致大多數(shù)具有治療作用的極性分子、多肽、寡聚核苷酸很難進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮藥效作用的問題，提供了一種利用泥鰍制備滲透促進(jìn)劑的方法，本發(fā)明從泥鰍中分別提取泥鰍滑液和泥鰍肉，將利用白糖分離泥鰍滑液后加入納米二氧化鈦，用紫外光照射催化得照射后的粘液，將泥鰍肉用復(fù)合酶酶解后得到的酶解液和照射后的粘液混合，混合后再加水混合，用樹脂柱層析后洗脫，收集洗脫液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得濃縮液與肉豆蔻酸異丙酯、薄荷酮、茴香醚和檸檬烯混合，即可得到滲透促進(jìn)劑，本發(fā)明制備得到的滲透促進(jìn)劑無毒、無刺激性及無過敏反應(yīng)，能可逆地降低皮膚的屏障性能，而又不損害皮膚的其它功能，皮膚滲透率高，而且與藥物之間不會發(fā)生相互作用，不影響藥效。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
（1）選取40～50只鮮活的泥鰍，放入3～5L自來水中，不添加食物，饑餓養(yǎng)殖5～7天，將養(yǎng)殖后的泥鰍取出，撒50～70g蔗糖在泥鰍表面，攪拌混合10～15min，使泥鰍表面滑液和蔗糖混合，靜置30～50min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鰍備用；
（2）將上述收集后的粘液裝入燒杯中，并向燒杯中加入粘液質(zhì)量0.3～0.5%納米二氧化鈦，超聲分散5～10min后放入紫外燈下，在波長為250～400nm條件下照射10～15min，將照射后的粘液備用；
（3）將步驟（1）刮液后的泥鰍表面用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%氯化鈉溶液洗滌3～5次，洗滌后去除泥鰍頭、尾巴和血，將剩下的泥鰍肉放入絞肉機(jī)中絞碎成肉糜，將肉糜在-25～-20℃溫度下冷凍3～5h；
（4）將上述冷凍后的肉糜在25℃溫度下解凍3～5h，將解凍后的肉糜按質(zhì)量比1:5與去離子水混合，放入高速勻漿機(jī)中勻漿20～30min得漿液，向漿液中加入漿液質(zhì)量5～7%復(fù)合蛋白酶，在40～50℃下酶解1～3h，酶解后在100℃下加熱5～7min，冷卻至室溫后在7000～9000rpm和4℃條件下離心分離15～20min，得上清液；所述的復(fù)合蛋白酶為動物蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比3:2:2:1混合；
（5）將上述上清液和步驟（2）照射后的粘液混合20～30min后得混合液，將混合液按體積比1:8與去離子水混合，混合后經(jīng)過HP-20樹脂柱層析，層析后先用去離子水洗脫2～3次，去除洗脫液后再依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積20～30%，收集濃縮液；
（6）按重量份數(shù)計(jì)，分別選取60～70份上述濃縮液、3～6份肉豆蔻酸異丙酯、2～5份薄荷酮、3～6份茴香醚和1～3份檸檬烯，攪拌混合均勻后即可得到滲透促進(jìn)劑。
本發(fā)明的應(yīng)用方法：按重量份數(shù)計(jì)，分別選取40～50份聚丙烯酸樹脂、20～22份癸二酸二丁酯、3～5份琥珀酸，25～35份無水乙醇，攪拌混合1～3h后得壓敏膠液，向壓敏膠液中加入本發(fā)明制備得到的滲透促進(jìn)劑，加入量為300～500mg/mL，攪拌均勻，制得含藥壓敏膠液，將含藥壓敏膠液涂布在防粘層上，涂覆量為8～10mL/m2，涂覆后自然干燥，干燥完全后覆蓋背襯膜，包裝，即可得貼劑。
本發(fā)明的有益效果是：
（1）本發(fā)明制備得到的滲透促進(jìn)劑無毒、無刺激性及無過敏反應(yīng)；
（2）本發(fā)明制備得到的滲透促進(jìn)劑能可逆地降低皮膚的屏障性能，而又不損害皮膚的其它功能，皮膚滲透率高，生物利用活性高；
（3）本發(fā)明制備得到的滲透促進(jìn)劑與藥物之間不會發(fā)生相互作用，不影響藥效。
具體實(shí)施方式
選取40～50只鮮活的泥鰍，放入3～5L自來水中，不添加食物，饑餓養(yǎng)殖5～7天，將養(yǎng)殖后的泥鰍取出，撒50～70g蔗糖在泥鰍表面，攪拌混合10～15min，使泥鰍表面滑液和蔗糖混合，靜置30～50min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鰍備用；將上述收集后的粘液裝入燒杯中，并向燒杯中加入粘液質(zhì)量0.3～0.5%納米二氧化鈦，超聲分散5～10min后放入紫外燈下，在波長為250～400nm條件下照射10～15min，將照射后的粘液備用；將刮液后的泥鰍表面用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%氯化鈉溶液洗滌3～5次，洗滌后去除泥鰍頭、尾巴和血，將剩下的泥鰍肉放入絞肉機(jī)中絞碎成肉糜，將肉糜在-25～-20℃溫度下冷凍3～5h；將上述冷凍后的肉糜在25℃溫度下解凍3～5h，將解凍后的肉糜按質(zhì)量比1:5與去離子水混合，放入高速勻漿機(jī)中勻漿20～30min得漿液，向漿液中加入漿液質(zhì)量5～7%復(fù)合蛋白酶，在40～50℃下酶解1～3h，酶解后在100℃下加熱5～7min，冷卻至室溫后在7000～9000rpm和4℃條件下離心分離15～20min，得上清液；所述的復(fù)合蛋白酶為動物蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比3:2:2:1混合；將上述上清液和照射后的粘液混合20～30min后得混合液，將混合液按體積比1:8與去離子水混合，混合后經(jīng)過HP-20樹脂柱層析，層析后先用去離子水洗脫2～3次，去除洗脫液后再依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積20～30%，收集濃縮液；按重量份數(shù)計(jì)，分別選取60～70份上述濃縮液、3～6份肉豆蔻酸異丙酯、2～5份薄荷酮、3～6份茴香醚和1～3份檸檬烯，攪拌混合均勻后即可得到滲透促進(jìn)劑。
實(shí)例1
選取40只鮮活的泥鰍，放入3L自來水中，不添加食物，饑餓養(yǎng)殖5天，將養(yǎng)殖后的泥鰍取出，撒50g蔗糖在泥鰍表面，攪拌混合10min，使泥鰍表面滑液和蔗糖混合，靜置30min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鰍備用；將上述收集后的粘液裝入燒杯中，并向燒杯中加入粘液質(zhì)量0.3%納米二氧化鈦，超聲分散5min后放入紫外燈下，在波長為250nm條件下照射10min，將照射后的粘液備用；將刮液后的泥鰍表面用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%氯化鈉溶液洗滌3次，洗滌后去除泥鰍頭、尾巴和血，將剩下的泥鰍肉放入絞肉機(jī)中絞碎成肉糜，將肉糜在-25℃溫度下冷凍3h；將上述冷凍后的肉糜在25℃溫度下解凍3h，將解凍后的肉糜按質(zhì)量比1:5與去離子水混合，放入高速勻漿機(jī)中勻漿20min得漿液，向漿液中加入漿液質(zhì)量5%復(fù)合蛋白酶，在40℃下酶解1h，酶解后在100℃下加熱5min，冷卻至室溫后在7000rpm和4℃條件下離心分離15min，得上清液；所述的復(fù)合蛋白酶為動物蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比3:2:2:1混合；將上述上清液和照射后的粘液混合20min后得混合液，將混合液按體積比1:8與去離子水混合，混合后經(jīng)過HP-20樹脂柱層析，層析后先用去離子水洗脫2次，去除洗脫液后再依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積20%，收集濃縮液；按重量份數(shù)計(jì)，分別選取60份上述濃縮液、3份肉豆蔻酸異丙酯、2份薄荷酮、3份茴香醚和1份檸檬烯，攪拌混合均勻后即可得到滲透促進(jìn)劑。
按重量份數(shù)計(jì)，分別選取40份聚丙烯酸樹脂、20份癸二酸二丁酯、3份琥珀酸，25份無水乙醇，攪拌混合1h后得壓敏膠液，向壓敏膠液中加入本發(fā)明制備得到的滲透促進(jìn)劑，加入量為300mg/mL，攪拌均勻，制得含藥壓敏膠液，將含藥壓敏膠液涂布在防粘層上，涂覆量為8mL/m2，涂覆后自然干燥，干燥完全后覆蓋背襯膜，包裝，即可得貼劑。
實(shí)例2
選取45只鮮活的泥鰍，放入4L自來水中，不添加食物，饑餓養(yǎng)殖6天，將養(yǎng)殖后的泥鰍取出，撒60g蔗糖在泥鰍表面，攪拌混合13min，使泥鰍表面滑液和蔗糖混合，靜置40min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鰍備用；將上述收集后的粘液裝入燒杯中，并向燒杯中加入粘液質(zhì)量0.4%納米二氧化鈦，超聲分散7min后放入紫外燈下，在波長為350nm條件下照射13min，將照射后的粘液備用；將刮液后的泥鰍表面用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%氯化鈉溶液洗滌4次，洗滌后去除泥鰍頭、尾巴和血，將剩下的泥鰍肉放入絞肉機(jī)中絞碎成肉糜，將肉糜在-23℃溫度下冷凍4h；將上述冷凍后的肉糜在25℃溫度下解凍4h，將解凍后的肉糜按質(zhì)量比1:5與去離子水混合，放入高速勻漿機(jī)中勻漿25min得漿液，向漿液中加入漿液質(zhì)量6%復(fù)合蛋白酶，在45℃下酶解2h，酶解后在100℃下加熱6min，冷卻至室溫后在8000rpm和4℃條件下離心分離17min，得上清液；所述的復(fù)合蛋白酶為動物蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比3:2:2:1混合；將上述上清液和照射后的粘液混合25min后得混合液，將混合液按體積比1:8與去離子水混合，混合后經(jīng)過HP-20樹脂柱層析，層析后先用去離子水洗脫2次，去除洗脫液后再依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積25%，收集濃縮液；按重量份數(shù)計(jì)，分別選取65份上述濃縮液、4份肉豆蔻酸異丙酯、4份薄荷酮、5份茴香醚和2份檸檬烯，攪拌混合均勻后即可得到滲透促進(jìn)劑。
按重量份數(shù)計(jì)，分別選取45份聚丙烯酸樹脂、21份癸二酸二丁酯、4份琥珀酸，30份無水乙醇，攪拌混合2h后得壓敏膠液，向壓敏膠液中加入本發(fā)明制備得到的滲透促進(jìn)劑，加入量為400mg/mL，攪拌均勻，制得含藥壓敏膠液，將含藥壓敏膠液涂布在防粘層上，涂覆量為9mL/m2，涂覆后自然干燥，干燥完全后覆蓋背襯膜，包裝，即可得貼劑。
實(shí)例3
選取50只鮮活的泥鰍，放入5L自來水中，不添加食物，饑餓養(yǎng)殖7天，將養(yǎng)殖后的泥鰍取出，撒70g蔗糖在泥鰍表面，攪拌混合15min，使泥鰍表面滑液和蔗糖混合，靜置50min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鰍備用；將上述收集后的粘液裝入燒杯中，并向燒杯中加入粘液質(zhì)量0.5%納米二氧化鈦，超聲分散10min后放入紫外燈下，在波長為400nm條件下照射15min，將照射后的粘液備用；將刮液后的泥鰍表面用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%氯化鈉溶液洗滌5次，洗滌后去除泥鰍頭、尾巴和血，將剩下的泥鰍肉放入絞肉機(jī)中絞碎成肉糜，將肉糜在-20℃溫度下冷凍5h；將上述冷凍后的肉糜在25℃溫度下解凍5h，將解凍后的肉糜按質(zhì)量比1:5與去離子水混合，放入高速勻漿機(jī)中勻漿30min得漿液，向漿液中加入漿液質(zhì)量7%復(fù)合蛋白酶，在50℃下酶解3h，酶解后在100℃下加熱7min，冷卻至室溫后在9000rpm和4℃條件下離心分離20min，得上清液；所述的復(fù)合蛋白酶為動物蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比3:2:2:1混合；將上述上清液和照射后的粘液混合30min后得混合液，將混合液按體積比1:8與去離子水混合，混合后經(jīng)過HP-20樹脂柱層析，層析后先用去離子水洗脫3次，去除洗脫液后再依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積30%，收集濃縮液；按重量份數(shù)計(jì)，分別選取70份上述濃縮液、6份肉豆蔻酸異丙酯、5份薄荷酮、6份茴香醚和3份檸檬烯，攪拌混合均勻后即可得到滲透促進(jìn)劑。
按重量份數(shù)計(jì)，分別選取50份聚丙烯酸樹脂、22份癸二酸二丁酯、5份琥珀酸，35份無水乙醇，攪拌混合3h后得壓敏膠液，向壓敏膠液中加入本發(fā)明制備得到的滲透促進(jìn)劑，加入量為500mg/mL，攪拌均勻，制得含藥壓敏膠液，將含藥壓敏膠液涂布在防粘層上，涂覆量為10mL/m2，涂覆后自然干燥，干燥完全后覆蓋背襯膜，包裝，即可得貼劑。