1.一種多肽-抗體免疫偶聯(lián)物,其特征在于,所述免疫偶聯(lián)物由多肽與抗體或抗體Fc段通過共價鍵連接而成,其中,所述多肽為pH敏感型穿膜肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫偶聯(lián)物,其特征在于,所述多肽的序列如下:Ac-ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT,其中,Ac為乙?;?。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫偶聯(lián)物,其特征在于,所述免疫偶聯(lián)物由pH敏感型穿膜肽與抗體Fc段或抗體通過琥珀酰亞胺-4-(N-馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-1羥酸酯共價鍵連接而成,即所述pH敏感型穿膜肽N端半胱氨酸殘基上的巰基與抗體Fc段賴氨酸殘基上的ε-氨基通過琥珀酰亞胺-4-(N-馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-1羥酸酯共價交聯(lián)而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的免疫偶聯(lián)物,其特征在于,所述抗體或抗體Fc段為可誘導ADCC的抗體或抗體片段。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫偶聯(lián)物,其特征在于,所述抗體Fc段包括小鼠IgG 2a或IgG 2b的Fc片段,所述抗體為人CD20抗體,優(yōu)選利妥昔單抗。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的免疫偶聯(lián)物,其特征在于,每個抗體或抗體Fc段連接1-2條pH敏感型穿膜肽。
7.權(quán)利要求3-6任一項所述免疫偶聯(lián)物的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:
S1、抗體Fc段與交聯(lián)劑琥珀酰亞胺-4-(N-馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-1羥酸酯在pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液中室溫攪拌反應(yīng)0.5-1.5h,形成馬來酰亞胺修飾的Fc蛋白,即Fc-SMCC;
S2、將步驟S1所得產(chǎn)物與pH敏感型穿膜肽在pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液中室溫攪拌2-4h,即得所述多肽-抗體Fc段免疫偶聯(lián)物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,抗體Fc段和交聯(lián)劑的摩爾比為0.025-0.5:1,pH敏感型穿膜肽與Fc-SMCC的摩爾比為0.1-1:10。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,步驟S1還包括將生成的Fc-SMCC通過Sephadex G25除去未反應(yīng)的交聯(lián)劑,并通過截留分子量3KDa的Amicon ultra超濾管對產(chǎn)物進行濃縮的步驟。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,步驟S2還包括將生成的多肽-抗體Fc段免疫偶聯(lián)物用截留分子量10KDa的Amicon ultra超濾管除去未反應(yīng)的pH敏感型穿膜肽的步驟。