本發(fā)明屬于農(nóng)林產(chǎn)品加工技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種以白果淀粉為原料，采用納米乳化-交聯(lián)法制備負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的方法。

背景技術(shù)：

白果是中國特有古老樹種銀杏的果實(shí)，我國的白果資源豐富，產(chǎn)量占全世界的70％。白果具有極高的營養(yǎng)和醫(yī)療價(jià)值，其作為食療、滋補(bǔ)、保健食品已有1000多年的歷史。近年來由于銀杏的快速發(fā)展，出現(xiàn)了嚴(yán)重的市場供需問題。行家預(yù)測，依我國各地銀杏產(chǎn)區(qū)的種植情況，10年后全國白果產(chǎn)量將達(dá)到30萬噸，而屆時國際市場需求量只是10萬噸左右。目前白果價(jià)格，最高每公斤8元/公斤，最低降至4元/公斤，個別地方出現(xiàn)了種銀杏果不如種花生果、毀樹種田的現(xiàn)象。目前對白果的加工利用，大多是采用傳統(tǒng)方式將白果加工成菜肴、罐頭、飲料、蜜餞等，白果產(chǎn)品的加工還是處于初級加工水平，而產(chǎn)品的深層次研究和深加工幾乎沒有，從而導(dǎo)致白果產(chǎn)品的附加值極低，嚴(yán)重阻礙了銀杏產(chǎn)業(yè)健康持續(xù)發(fā)展，成為地方政府解決林農(nóng)經(jīng)濟(jì)的當(dāng)務(wù)之急。

白果中淀粉含量極高，約含有60-70％的淀粉。但是目前有關(guān)白果淀粉的加工利用和產(chǎn)品開發(fā)方面的研究還十分有限。淀粉微球是天然淀粉一種人造衍生物，系為淀粉在引發(fā)劑作用下，淀粉上羥基與交聯(lián)劑進(jìn)行適度交聯(lián)而制得一種微球。與其它人工合成的高分子材料相比，淀粉微球因具有生物相容性好、可生物降解性、無毒性、無免疫原性、貯存穩(wěn)定、原料來源廣泛、價(jià)格低廉等顯著優(yōu)點(diǎn)，目前已作為靶向制劑的藥物載體在鼻腔給藥系統(tǒng)、動脈栓塞技術(shù)、放射性治療、免疫分析等領(lǐng)域得到很好應(yīng)用。對于很多無法直接使用，或直接使用療效不理想的藥物，可將其包埋在微球內(nèi)部或吸附在微球表面，并通過合理設(shè)計(jì)微球的尺寸、表面性質(zhì)、緩釋性能來達(dá)到在所需時間、所需地點(diǎn)、以所需速度釋放藥物的目的。因此淀粉微球在醫(yī)學(xué)工程中尤其受到關(guān)注，常被用作藥物載體，應(yīng)用前景十分廣闊。但是有關(guān)如何制備白果淀粉微球及其加工工藝的研究，目前國內(nèi)外尚沒有任何報(bào)道。

漆酚是一種天然的烷基酚類化合物，研究表明其具有很好的抗腫瘤生物活性，其對人體9種器官29種腫瘤細(xì)胞均有抑制作用，漆酚對多種腫瘤細(xì)胞均具有細(xì)胞毒作用，可通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖或轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤細(xì)胞血管再生，從而誘發(fā)細(xì)胞凋亡或分化，漆酚對白血病、肝癌、肺癌、食道癌、骨髓癌、乳腺癌、結(jié)腸癌和前列腺癌等癌癥均具有顯著的治療效果，因此漆酚非常有希望用于癌癥的治療。但是漆酚結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，容易氧化聚合，限制了其在腫瘤藥物中的應(yīng)用，研究表明將藥物活性成分負(fù)載在生物醫(yī)藥載體上，不僅可明顯提高藥物的穩(wěn)定性，而且可提高藥物在體內(nèi)的生物利用度及靶向釋藥性能等。但是目前國內(nèi)外還沒有將漆酚負(fù)載在生物醫(yī)藥載體應(yīng)用的相關(guān)研究報(bào)道。

針對以上不足，本發(fā)明提出采用納米乳化-交聯(lián)技術(shù)，制備負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球。該方法以白果淀粉為原料，通過添加fe3o4磁流體，經(jīng)過納米乳化-交聯(lián)反應(yīng)，使白果淀粉形成表面和內(nèi)部多孔的可靶向作用的納米淀粉微球，并通過負(fù)載具有抗腫瘤活性的漆酚，制備負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球產(chǎn)品；該產(chǎn)品平均粒徑達(dá)到150nm以下，且大小均一，分散均勻，比表面積大，其包封率＞85％，載藥量＞30％，磁含量＞15mg/g，磁強(qiáng)度＞1emu/g，具有很好的載藥及靶向緩釋性能，產(chǎn)品負(fù)載了天然活性物漆酚，具有很好的抗腫瘤活性，可應(yīng)用于臨床靶向抗腫瘤藥物中，附加值極高；另外該產(chǎn)品加工工藝路線簡單，反應(yīng)條件溫和，生產(chǎn)成本低，對環(huán)境污染小，可以成為工業(yè)上生產(chǎn)白果淀粉高附加值產(chǎn)品的一種新技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種采用納米乳化-交聯(lián)技術(shù)制備負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的方法，該方法綠色安全，操作簡單，生產(chǎn)成本低，制備得到的負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球，平均粒徑達(dá)到150nm以下，且大小均一，分散均勻，比表面積大，不僅具有很好的載藥及靶向緩釋性能，且具有很好的抗腫瘤活性，可應(yīng)用于臨床靶向抗腫瘤藥物中，附加值極高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

1.一種負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備方法，具體步驟如下：

(1)白果淀粉的分離

將新鮮白果脫殼，粉碎，用濃度為0.3～0.5％的稀堿液浸泡2～3h，勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加濃度為0.3～0.5％的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)?，水洗淀?～4次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥48～72h，得到白果淀粉。

(2)靶向納米白果淀粉微球的制備

稱取一定量白果淀粉，加入適量的蒸餾水調(diào)勻，淀粉乳的濃度為8～12％，然后用2mol/l的koh溶液調(diào)ph值為8～10，置于80℃水浴鍋中攪拌至透明，待溶液冷卻后再加入白果淀粉質(zhì)量3～5％的fe3o4磁流體，超聲攪拌均勻后作為水相a；量取一定體積的液體石蠟倒入三口燒瓶中，加入液體石蠟質(zhì)量10～14％的乳化劑，在55℃攪拌10～30min至充分混勻，作為油相b；將制備好的水相a逐滴加入上述油相b中，保持均勻攪拌速度乳化反應(yīng)30～60min后，加入白果淀粉質(zhì)量20～30％的n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)劑攪拌2～5min，再加入白果淀粉質(zhì)量15～25％的引發(fā)劑，于60℃條件下交聯(lián)反應(yīng)2～4h，反應(yīng)結(jié)束后，離心除去上層油相，下層沉淀依次用乙酸乙酯、無水乙醇、丙酮各洗滌3次，真空冷凍干燥后，即得靶向納米白果淀粉微球。

(3)負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

配制質(zhì)量體積百分比為10～20％的漆酚溶液，然后在其中加入一定量制備好的靶向納米白果淀粉微球，震蕩并超聲1～2h，抽濾，并用無水乙醇洗滌，冷風(fēng)吹干，最終得到負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球。

所述的乳化劑為司盤80或司盤60與吐溫80或吐溫60組成的混合乳化劑，二者的質(zhì)量比為2∶1。

所述的水相a和油相b的體積比為1∶6～1∶10。

所述的引發(fā)劑為過硫酸鉀和亞硫酸氫鈉組成的混合引發(fā)劑，二者的質(zhì)量比為2∶1。

所述的漆酚溶液，其溶劑為無水乙醇或丙酮。

所述的靶向納米白果淀粉微球與漆酚溶液的質(zhì)量體積百分比為3～6％。

本發(fā)明采用稀堿液分離白果淀粉，新鮮白果經(jīng)過脫殼，粉碎后，用濃度為0.3～0.5％的稀堿液浸泡2～3h，勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加濃度為0.3～0.5％的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)?，水洗淀?～4次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥48～72h，得到白果淀粉。

白果中化學(xué)成分主要包括蛋白質(zhì)和淀粉，堿液可使白果中與白果蛋白質(zhì)結(jié)合的白果淀粉的緊密結(jié)構(gòu)變得疏松，同時堿液可破壞蛋白質(zhì)分子中氫鍵作用，使某些極性基團(tuán)發(fā)生解離致使蛋白質(zhì)分子表面具有相同的電荷，從而使蛋白質(zhì)溶解于堿液中，促進(jìn)淀粉和蛋白的分離。

本發(fā)明對稀堿液濃度進(jìn)行了考察，分別取脫殼粉碎好的白果種仁100g，用濃度分別為0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％的稀堿液浸泡2h，然后再勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加上述濃度的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)?，水洗淀?次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥72h，得到白果淀粉，測定白果淀粉得率和純度，結(jié)果表明，隨著堿液濃度的增加，白果淀粉的得率和純度呈上升趨勢，當(dāng)堿液濃度為0.3％時，白果淀粉得率和純度達(dá)到最大，分別為60.95％和99.86％，再增加堿液濃度，白果淀粉得率和純度變化不大。因此優(yōu)選堿液濃度為0.3～0.5％。

本發(fā)明采用納米乳化-交聯(lián)法制備靶向納米白果淀粉微球，取一定量的白果淀粉，加入適量的蒸餾水調(diào)勻，淀粉乳的濃度控制為8～12％，然后用2mol/l的koh溶液調(diào)ph值為8～10，置于80℃水浴鍋中攪拌至透明，待溶液冷卻后再加入白果淀粉質(zhì)量3～5％的fe3o4磁流體，超聲攪拌均勻后作為水相a；量取一定體積的液體石蠟倒入三口燒瓶中，加入液體石蠟質(zhì)量10～14％的乳化劑，在55℃條件下攪拌10～30min至充分混勻，作為油相b；將制備好的水相a逐滴加入上述油相b中，控制水相a和油相b的體積比為1∶6～1∶10，保持均勻攪拌速度乳化反應(yīng)30～60min后，加入白果淀粉質(zhì)量20～30％的n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)劑攪拌2～5min，再加入白果淀粉質(zhì)量15～25％的引發(fā)劑，于60℃條件下交聯(lián)反應(yīng)2～4h，反應(yīng)結(jié)束后，離心除去上層油相，下層沉淀依次用乙酸乙酯、無水乙醇、丙酮各洗滌3次，真空冷凍干燥后，即得靶向納米白果淀粉微球。所述的乳化劑為司盤80或司盤60與吐溫80或吐溫60組成的混合乳化劑，二者的質(zhì)量比為2∶1；所述的引發(fā)劑為過硫酸鉀和亞硫酸氫鈉組成的混合引發(fā)劑，二者的質(zhì)量比為2∶1。

本發(fā)明考察了靶向納米白果淀粉微球制備工藝中淀粉乳質(zhì)量濃度、油水體積比、交聯(lián)劑用量、乳化劑質(zhì)量濃度以及引發(fā)劑用量等因素對微球吸附性能的影響，結(jié)果表明當(dāng)?shù)矸廴橘|(zhì)量濃度為8～12％，油水體積比為6∶1～10∶1，交聯(lián)劑用量為20～30％，乳化劑質(zhì)量濃度為10～14％，引發(fā)劑用量為15～25％，白果淀粉微球的吸附量都可達(dá)到60mg/g以上；因此優(yōu)選靶向納米白果淀粉微球的制備工藝條件為淀粉乳質(zhì)量濃度為8～12％，油水體積比為6∶1～10∶1，交聯(lián)劑用量為20～30％，乳化劑質(zhì)量濃度為10～14％，引發(fā)劑用量為15～25％，fe3o4磁流體加入量為3～5％，交聯(lián)反應(yīng)時間為2～4h。

本發(fā)明通過將天然抗腫瘤活性成分漆酚吸附在微球中制備負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球，以無水乙醇或丙酮為溶劑配制質(zhì)量體積百分比為10～20％的漆酚溶液，然后在其中加入一定量制備好的靶向納米白果淀粉微球，控制靶向納米白果淀粉微球與漆酚溶液的質(zhì)量體積百分比為3～6％，然后震蕩并超聲1～2h，抽濾，并用無水乙醇洗滌，冷風(fēng)吹干，即得到負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球；該產(chǎn)品是一種具有靶向抗腫瘤作用的給藥制劑，其可有效提高藥物的穩(wěn)定性和組織選擇性，延緩藥物釋放，增強(qiáng)療效，降低毒副作用，該產(chǎn)品的制備可實(shí)現(xiàn)白果淀粉及漆酚在靶向抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明對負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的粒徑、載藥釋藥性及磁響應(yīng)性分別進(jìn)行測定；采用粒度分布測定儀測定微球的平均粒徑和粒度分布，結(jié)果表明負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的粒徑分布范圍為100～150nm，平均粒徑為120nm，且大小均一，分散性很好；測定了淀粉微球的載藥量及包封率，表明制備的負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球產(chǎn)品具有很好的載藥性能，其包封率為85～90％，載藥量為20～30％；采用體外靜態(tài)透析法研究藥物的緩釋，結(jié)果表明，制備的負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球產(chǎn)品具有很好的緩釋效果，其在24小時內(nèi)累積釋藥量90～95％；采用體外磁場模擬方法評價(jià)負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球被磁場吸附定位的效果，結(jié)果表明其具有很好磁靶向性，飽和磁強(qiáng)度為0.8～1.5emu/g。

本發(fā)明的有益效果：

(1)首次采用納米乳化-交聯(lián)技術(shù)制備靶向納米白果淀粉微球，與傳統(tǒng)的淀粉微球相比，該靶向納米白果淀粉微球具有更小的粒徑，產(chǎn)品平均粒徑達(dá)到150nm以下，且大小均一，分散均勻，比表面積大，具有很好的載藥、釋藥性能，包封率＞85％，載藥量＞20％，因此制備的靶向納米白果淀粉微球作為生物醫(yī)藥載體具有很好的應(yīng)用前景。

(2)本發(fā)明制備的靶向納米白果淀粉微球里添加了fe3o4磁流體，是一種具有磁性的淀粉微球，該磁性納米白果淀粉微球磁含量＞15mg/g，磁強(qiáng)度＞1emu/g，其在外磁場的作用下可靶向定位到病變部位，從而實(shí)現(xiàn)藥物緩慢定位釋放，提高藥物的組織選擇性，延緩藥物釋放，增強(qiáng)療效，降低毒副作用，達(dá)到緩釋、長效和靶向治療的目的。

(3)本發(fā)明制備的靶向納米白果淀粉微球負(fù)載了天然抗腫瘤活性成分漆酚，活性成分結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，靶向緩釋效果好，釋藥t1/2比原藥延長了約6倍，具有很好的抗腫瘤活性，可應(yīng)用于臨床靶向抗腫瘤藥物中。

(4)該發(fā)明首次以白果淀粉為原料制備負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球，該產(chǎn)品可應(yīng)用于靶向藥物載體及抗腫瘤藥物中，產(chǎn)品附加值極高，該產(chǎn)品的開發(fā)對提高白果資源的利用率及經(jīng)濟(jì)價(jià)值具有重要意義；另外產(chǎn)品加工技術(shù)工藝路線簡單、反應(yīng)條件溫和，生產(chǎn)成本低，對環(huán)境污染小，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，本發(fā)明不受此限制。

實(shí)施例1

白果淀粉的分離

將新鮮白果脫殼，粉碎，用濃度為0.3～0.5％的稀堿液浸泡2～3h，勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加濃度為0.3～0.5％的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)吹矸?～4次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥48～72h，得到白果淀粉。

白果中化學(xué)成分主要包括蛋白質(zhì)和淀粉，堿液可使白果中與白果蛋白質(zhì)結(jié)合的白果淀粉的緊密結(jié)構(gòu)變得疏松，同時堿液可破壞蛋白質(zhì)分子中氫鍵作用，使某些極性基團(tuán)發(fā)生解離致使蛋白質(zhì)分子表面具有相同的電荷，從而使蛋白質(zhì)溶解于堿液中，促進(jìn)淀粉和蛋白的分離。

本發(fā)明研究了堿液濃度對白果淀粉得率和純度的影響，分別取脫殼粉碎好的白果種仁100g，用濃度分別為0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％的稀堿液浸泡2h，然后再勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加上述濃度的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)?，水洗淀?次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥72h，得到白果淀粉，測定白果淀粉純度，試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1不同濃度堿液對白果淀粉得率和純度的影響

由表1可以看出，隨著堿液濃度的增加，白果淀粉的得率和純度呈上升趨勢，當(dāng)堿液濃度為0.3％時，白果淀粉得率和純度達(dá)到最大，分別為60.95％和99.76％，再增加堿液濃度，白果淀粉得率和純度變化不大。因此優(yōu)選堿液濃度為0.3～0.5％。

實(shí)施例2

靶向納米白果淀粉微球的制備

稱取一定量的白果淀粉，加入適量的蒸餾水調(diào)勻，淀粉乳的濃度控制為8～12％，然后用2mol/l的koh溶液調(diào)ph值為8～10，置于80℃水浴鍋中攪拌至透明，待溶液冷卻后再加入白果淀粉質(zhì)量3～5％的fe3o4磁流體，超聲攪拌均勻后作為水相a；量取一定體積的液體石蠟倒入三口燒瓶中，加入液體石蠟質(zhì)量10～14％的乳化劑，在55℃條件下攪拌10～30min至充分混勻，作為油相b；將制備好的水相a逐滴加入上述油相b中，控制水相a和油相b的體積比為1∶6～1∶10，保持均勻攪拌速度乳化反應(yīng)30～60min后，加入白果淀粉質(zhì)量20～30％的n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)劑攪拌2～5min，再加入白果淀粉質(zhì)量15～25％的引發(fā)劑，于60℃條件下交聯(lián)反應(yīng)2～4h，反應(yīng)結(jié)束后，離心除去上層油相，下層沉淀依次用乙酸乙酯、無水乙醇、丙酮各洗滌3次，真空冷凍干燥后，即得靶向納米白果淀粉微球。

所述的乳化劑為司盤80或司盤60與吐溫80或吐溫60組成的混合乳化劑，二者的質(zhì)量比為2∶1。

所述的引發(fā)劑為過硫酸鉀和亞硫酸氫鈉組成的混合引發(fā)劑，二者的質(zhì)量比為2∶1。

本發(fā)明研究了靶向納米白果淀粉微球制備工藝中淀粉乳質(zhì)量濃度(6、8、10、12、14％)、油水體積比(4∶1、6∶1、8∶1、10∶1、12∶1)、交聯(lián)劑用量(10、15、20、25、30％)、乳化劑質(zhì)量濃度(6、8、10、12、14％)以及引發(fā)劑用量(10、15、20、25、30％)等因素對靶向納米白果淀粉微球吸附性能的影響，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2不同工藝條件對靶向納米白果淀粉微球吸附性能的影響

由表2可以看出，當(dāng)?shù)矸廴橘|(zhì)量濃度為8～12％，油水體積比為6∶1～10∶1，交聯(lián)劑用量為20～30％，乳化劑質(zhì)量濃度為10～14％，引發(fā)劑用量為15～25％，白果淀粉微球的吸附量都可達(dá)到60mg/g以上。因此優(yōu)選靶向納米白果淀粉微球的制備工藝條件為淀粉乳質(zhì)量濃度為8～12％，油水體積比為6∶1～10∶1，交聯(lián)劑用量為20～30％，乳化劑質(zhì)量濃度為10～14％，引發(fā)劑用量為15～25％，fe3o4磁流體加入量為3～5％，交聯(lián)反應(yīng)時間為2～4h。

實(shí)施例3：

負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

以無水乙醇或丙酮為溶劑配制質(zhì)量體積百分比為10～20％的漆酚溶液，然后在其中加入一定量制備好的靶向納米白果淀粉微球，控制靶向納米白果淀粉微球與漆酚溶液的質(zhì)量體積百分比為3～6％，然后震蕩并超聲1～2h，抽濾，并用無水乙醇洗滌，冷風(fēng)吹干，得到負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球。

漆酚是一種天然的抗腫瘤活性成分，但是漆酚結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，其單獨(dú)作為藥物使用時，在體內(nèi)生物利用度差，且缺乏組織選擇性，毒副作用大。本發(fā)明以白果淀粉為原料制備納米白果淀粉微球，并將漆酚吸附在該淀粉微球中，制備得到負(fù)載漆酚的納米白果淀粉微球，該產(chǎn)品是一種具有靶向抗腫瘤作用的給藥制劑，其可有效提高藥物的穩(wěn)定性和組織選擇性，延緩藥物釋放，增強(qiáng)療效，降低毒副作用，該產(chǎn)品的制備可實(shí)現(xiàn)白果淀粉及漆酚在靶向抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

實(shí)施例4：

負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的粒徑、載藥釋藥性、磁響應(yīng)性的測定

粒徑測定：采用粒度分布測定儀測定微球的平均粒徑和粒度分布，首先在樣品池中加入適量無水乙醇并進(jìn)行背景測試，直至達(dá)到測量要求，然后往樣品池中加入適量經(jīng)超聲波分散2min的淀粉微球懸浮液，達(dá)到要求的濃度范圍后進(jìn)行測定；結(jié)果表明負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的粒徑分布范圍為100～150nm，平均粒徑為120nm，且大小均一，分散性很好。

載藥性能測定：配置0.1mg/ml的漆酚溶液，稱取0.2g干燥的靶向納米白果淀粉微球于燒杯中，加入漆酚溶液50ml，超聲10min后，離心取上清液，測定上清液中漆酚的含量，從而分別計(jì)算出淀粉微球的載藥量及包封率；載藥量/％＝微球中藥物量/微球質(zhì)量×100；包封率/％＝微球中藥物量/投藥量×100。經(jīng)測定，制備的負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球產(chǎn)品具有很好的載藥性能，其包封率為85～90％，載藥量為20～30％。

釋藥性能測定：采用體外靜態(tài)透析法研究藥物的緩釋；精確稱取0.2g負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球置入透析袋中，并加入3ml釋放介質(zhì)，將透析袋的兩端扎緊，平放在含有30ml釋放介質(zhì)的100ml小燒杯中。然后將燒杯置于37℃的恒溫水浴鍋中，靜態(tài)透析，每隔一定時間后測定外部介質(zhì)中藥物的累積釋放量。結(jié)果表明，制備的負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球產(chǎn)品具有很好的緩釋效果，其在24小時內(nèi)累積釋藥量90～95％。

磁響應(yīng)性能測定：采用體外磁場模擬方法評價(jià)負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球被磁場吸附定位的效果，結(jié)果表明其具有很好磁靶向性，飽和磁強(qiáng)度為0.8～1.5emu/g。

實(shí)施例5：

負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

(1)白果淀粉的分離

取新鮮白果1kg脫殼，粉碎，用濃度為0.3％的稀堿液浸泡3h，勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加濃度為0.3％的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)?，水洗淀?次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥72h，得到白果淀粉610.2g，純度為99.85％。

(2)負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

取白果淀粉100g，加入1250ml的蒸餾水調(diào)勻，淀粉乳的濃度為8％，然后用2mol/l的koh溶液調(diào)ph值為8，置于80℃水浴鍋中攪拌至透明，待溶液冷卻后再加入3g的fe3o4磁流體，超聲攪拌均勻后作為水相a；量取1000ml的液體石蠟倒入三口燒瓶中，加入100g的乳化劑(司盤80∶吐溫80＝2∶1)，在55℃攪拌30min至充分混勻，作為油相b；取制備好的水相a130ml逐滴加入上述油相b中，保持均勻攪拌速度乳化反應(yīng)60min后，加入25g的n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)劑攪拌4min，再加入20g的引發(fā)劑(過硫酸鉀∶亞硫酸氫鈉＝2∶1)，于60℃條件下交聯(lián)反應(yīng)3h，反應(yīng)結(jié)束后，離心除去上層油相，下層沉淀依次用乙酸乙酯、無水乙醇、丙酮各洗滌3次，真空冷凍干燥后，即得靶向納米白果淀粉微球。

以無水乙醇為溶劑配制質(zhì)量體積百分比為15％的漆酚溶液500ml，然后在其中加入20g制備好的靶向納米白果淀粉微球，震蕩并超聲1h，抽濾，并用無水乙醇洗滌，冷風(fēng)吹干，最終得到負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球。經(jīng)測定，其平均粒徑為125nm，包封率為88.5％，載藥量為24.6％，24小時內(nèi)累積釋藥量93.5％，飽和磁強(qiáng)度為1.1emu/g。

實(shí)施例6：

負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

(1)白果淀粉的分離

取新鮮白果1kg脫殼，粉碎，用濃度為0.4％的稀堿液浸泡3h，勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加濃度為0.4％的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)?，水洗淀?次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥60h，得到白果淀粉620.5g，純度為99.39％。

(2)負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

取白果淀粉100g，加入1000ml的蒸餾水調(diào)勻，淀粉乳的濃度為10％，然后用2mol/l的koh溶液調(diào)ph值為9，置于80℃水浴鍋中攪拌至透明，待溶液冷卻后再加入4g的fe3o4磁流體，超聲攪拌均勻后作為水相a；量取1000ml的液體石蠟倒入三口燒瓶中，加入120g的乳化劑(司盤80∶吐溫60＝2∶1)，在55℃攪拌20min至充分混勻，作為油相b；取制備好的水相a160ml逐滴加入上述油相b中，保持均勻攪拌速度乳化反應(yīng)40min后，加入22g的n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)劑攪拌5min，再加入18g的引發(fā)劑(過硫酸鉀∶亞硫酸氫鈉＝2∶1)，于60℃條件下交聯(lián)反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束后，離心除去上層油相，下層沉淀依次用乙酸乙酯、無水乙醇、丙酮各洗滌3次，真空冷凍干燥后，即得靶向納米白果淀粉微球。

以無水乙醇為溶劑配制質(zhì)量體積百分比為12％的漆酚溶液500ml，然后在其中加入25g制備好的靶向納米白果淀粉微球，震蕩并超聲1.5h，抽濾，并用無水乙醇洗滌，冷風(fēng)吹干，最終得到負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球。經(jīng)測定，其平均粒徑為120nm，包封率為89.2％，載藥量為21.5％，24小時內(nèi)累積釋藥量92.8％，飽和磁強(qiáng)度為1.2emu/g。

實(shí)施例7：

負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

(1)白果淀粉的分離

取新鮮白果1kg脫殼，粉碎，用濃度為0.3％的稀堿液浸泡3h，勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加濃度為0.3％的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)?，水洗淀?次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥48h，得到白果淀粉615.6g，純度為99.28％。

(2)負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

取白果淀粉100g，加入900ml的蒸餾水調(diào)勻，淀粉乳的濃度為11％，然后用2mol/l的koh溶液調(diào)ph值為10，置于80℃水浴鍋中攪拌至透明，待溶液冷卻后再加入5g的fe3o4磁流體，超聲攪拌均勻后作為水相a；量取1000ml的液體石蠟倒入三口燒瓶中，加入110g的乳化劑(司盤60∶吐溫80＝2∶1)，在55℃攪拌30min至充分混勻，作為油相b；取制備好的水相a170ml逐滴加入上述油相b中，保持均勻攪拌速度乳化反應(yīng)50min后，加入28g的n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)劑攪拌3min，再加入24g的引發(fā)劑(過硫酸鉀∶亞硫酸氫鈉＝2∶1)，于60℃條件下交聯(lián)反應(yīng)2.5h，反應(yīng)結(jié)束后，離心除去上層油相，下層沉淀依次用乙酸乙酯、無水乙醇、丙酮各洗滌3次，真空冷凍干燥后，即得靶向納米白果淀粉微球。

以無水乙醇為溶劑配制質(zhì)量體積百分比為16％的漆酚溶液500ml，然后在其中加入15g制備好的靶向納米白果淀粉微球，震蕩并超聲2h，抽濾，并用無水乙醇洗滌，冷風(fēng)吹干，最終得到負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球。經(jīng)測定，其平均粒徑為118nm，包封率為86.4％，載藥量為26.0％，24小時內(nèi)累積釋藥量94.1％，飽和磁強(qiáng)度為1.4emu/g。

實(shí)施例8：

負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

(1)白果淀粉的分離

取新鮮白果1kg脫殼，粉碎，用濃度為0.4％的稀堿液浸泡2h，勻漿，過篩，靜置后傾去上清液，再加濃度為0.4％的稀堿液低速磁力攪拌過夜，離心，除去上層及底部殘?jiān)?，水洗淀?次，再用無水甲醇脫脂24h，45℃干燥72h，得到白果淀粉622.3g，純度為99.75％。

(2)負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球的制備

取白果淀粉100g，加入850ml的蒸餾水調(diào)勻，淀粉乳的濃度為11.8％，然后用2mol/l的koh溶液調(diào)ph值為9，置于80℃水浴鍋中攪拌至透明，待溶液冷卻后再加入4g的fe3o4磁流體，超聲攪拌均勻后作為水相a；量取1000ml的液體石蠟倒入三口燒瓶中，加入130g的乳化劑(司盤60∶吐溫60＝2∶1)，在55℃攪拌25min至充分混勻，作為油相b；取制備好的水相a140ml逐滴加入上述油相b中，保持均勻攪拌速度乳化反應(yīng)60min后，加入23g的n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)劑攪拌4min，再加入16g的引發(fā)劑(過硫酸鉀∶亞硫酸氫鈉＝2∶1)，于60℃條件下交聯(lián)反應(yīng)3h，反應(yīng)結(jié)束后，離心除去上層油相，下層沉淀依次用乙酸乙酯、無水乙醇、丙酮各洗滌3次，真空冷凍干燥后，即得靶向納米白果淀粉微球。

以無水乙醇為溶劑配制質(zhì)量體積百分比為18％的漆酚溶液500ml，然后在其中加入18g制備好的靶向納米白果淀粉微球，震蕩并超聲1h，抽濾，并用無水乙醇洗滌，冷風(fēng)吹干，最終得到負(fù)載漆酚的靶向納米白果淀粉微球。經(jīng)測定，其平均粒徑為120nm，包封率為89.1％，載藥量為28.3％，24小時內(nèi)累積釋藥量92.6％，飽和磁強(qiáng)度為1.0emu/g。