本發(fā)明屬于組織修復(fù)材料制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種海地瓜膠原蛋白復(fù)合再生纖維修復(fù)材料的制備方法。

背景技術(shù)：

纖維素作為天然的生物高聚物，具有生物可降解性、生物相容性以及獨特的物理、化學(xué)和機(jī)械性能，已成為新型生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域的研究熱點。而現(xiàn)有技術(shù)多是采用再生纖維素與其他材料共混，冷凍干燥制備復(fù)合膜，采用此方法制得的復(fù)合膜均勻性、穩(wěn)定性較差，且組織修復(fù)能力及藥物附著性有待進(jìn)一步的提高。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種具有良好的組織修復(fù)能力及藥物附著性的海地瓜膠原蛋白復(fù)合再生纖維修復(fù)材料的制備方法。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種海地瓜膠原蛋白復(fù)合再生纖維修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：將新鮮的海地瓜傘部用自來水流水清洗，剪碎，放入燒杯中，加入質(zhì)量濃度為9％的10倍體積氯化鈉溶液浸泡海地瓜，攪拌浸泡24h后取出自然風(fēng)干；

步驟二：稱取經(jīng)步驟一處理后的海地瓜50g，加入100ml去離子水、2400u/g蛋白酶，于20℃進(jìn)行酶解反應(yīng)3h，ph為7.5，酶解產(chǎn)物進(jìn)行冷凍干燥，得海地瓜膠原蛋白；

步驟三：稱取2.5g大豆分離蛋白，量取50ml去離子水和1ml甘油于燒杯中，混合均勻，邊攪拌邊將大豆分離蛋白加入其中，將燒杯放在恒溫磁力攪拌器上，溫度調(diào)到45℃，向混合溶液中滴加1mol/l的naoh，將溶液的ph調(diào)節(jié)到10，再加入質(zhì)量百分比2％的丙三醇，攪拌3h后升溫至90℃繼續(xù)攪拌0.5h，制得成膜液，將成膜液倒在玻璃板上，置于水平的工作臺面上，室溫下自然成膜；

步驟四：將步驟三制得的膜加入丙酮中，制成質(zhì)量濃度5％的溶液，在攪拌下緩慢加入質(zhì)量百分比1％的乙酸酐，ph控制在7-8，55℃反應(yīng)1h，離心分離后取上清液，超聲處理20min，制得大豆分離蛋白溶液；

步驟五：將蠶繭去蛹，置入煮沸的質(zhì)量濃度為0.5％的碳酸鈉水溶液中，浴比為1:50，除去蠶繭表面絲膠,將已成絲狀的蠶繭撈出并擰干，再重復(fù)上述操作一次后，用去離子水洗凈，風(fēng)干后得到脫膠絲素；

步驟六：將cacl2在室溫狀態(tài)下溶解于甲酸中，攪拌30min，制得濃度為5wt.％的cacl2-fa溶液，然后將脫膠絲素溶解于cacl2-fa溶液中，磁力攪拌3h，獲得再生絲素蛋白溶液，室溫下干燥成膜，將膜用去離子水浸泡3h，再干燥，獲得再生絲素蛋白膜，將再生絲素蛋白膜在室溫狀態(tài)下二次溶解于甲酸中，浴比為1:10，溶解時間為2h，得再生絲素蛋白紡絲液；

步驟七：取棉短絨5g，將其溶解在甲酸中，配制成質(zhì)量濃度4％的纖維素溶液；

步驟八：將再生絲素蛋白紡絲液與纖維素溶液按重量比4:1混合均勻得再生纖維素紡絲液；

步驟九：將海地瓜膠原蛋白、大豆分離蛋白溶液、再生纖維素紡絲液按質(zhì)量比3:5:19混合均勻，使用超聲波震蕩對其進(jìn)行分散，50℃條件下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續(xù)攪拌8h，得到粘稠溶液置于與高壓裝置連接的醫(yī)用針管中，通過靜電紡絲制得修復(fù)材料，高壓裝置電壓為20kv，紡絲流量2ml/h，將制得的材料置于體積濃度75％乙醇中浸泡30min，在40℃下真空干燥。

優(yōu)選的，步驟九中所述的醫(yī)用針管的容量為20ml。

優(yōu)選的，步驟九中所述的醫(yī)用針管的針頭固定在距離靜電紡絲接收板20cm處。

優(yōu)選的，步驟九中所述的醫(yī)用針管的針頭內(nèi)徑為0.41mm。

本發(fā)明的有益效果在于：

1)海地瓜膠原蛋白多肽的肽鏈中含有多個氨基、羧基和羥基等親水基團(tuán)，而且由于其分子量小，與肌膚有很好的相容性，可進(jìn)入角質(zhì)層，不但具有維持肌膚的吸水能力，還具有組織修復(fù)功能。

2)大豆產(chǎn)量很高，大豆分離蛋白資源豐富，而且營養(yǎng)豐富，可加工性強(qiáng)，用其制成的材料生物相容性好，低碳環(huán)保，是一種很好的復(fù)合材料的原料。大豆分離蛋白可以與多種高分子聚合物共混，制備大豆蛋白纖維，這些大豆蛋白纖維具有良好的機(jī)械性能，比重輕，強(qiáng)度高，吸濕導(dǎo)濕性好。

3)絲素蛋白具有良好的抗菌性、生物相容性及組織修復(fù)能力。

4)纖維素具有良好的生物相容性、可降解性及優(yōu)良的機(jī)械性能。

5)纖維素可以改善材料的機(jī)械性能，絲素蛋白可以改善材料的組織修復(fù)能力。

6)采用靜電紡絲技術(shù)制備的材料，進(jìn)一步提高了材料的孔隙率，有利于藥物的附著。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。

實施例1

一種海地瓜膠原蛋白復(fù)合再生纖維修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：將新鮮的海地瓜傘部用自來水流水清洗，剪碎，放入燒杯中，加入質(zhì)量濃度為9％的10倍體積氯化鈉溶液浸泡海地瓜，攪拌浸泡24h后取出自然風(fēng)干；

步驟二：稱取經(jīng)步驟一處理后的海地瓜50g，加入100ml去離子水、2400u/g蛋白酶，于20℃進(jìn)行酶解反應(yīng)3h，ph為7.5，酶解產(chǎn)物進(jìn)行冷凍干燥，得海地瓜膠原蛋白；

步驟三：稱取2.5g大豆分離蛋白，量取50ml去離子水和1ml甘油于燒杯中，混合均勻，邊攪拌邊將大豆分離蛋白加入其中，將燒杯放在恒溫磁力攪拌器上，溫度調(diào)到45℃，向混合溶液中滴加1mol/l的naoh，將溶液的ph調(diào)節(jié)到10，再加入質(zhì)量百分比2％的丙三醇，攪拌3h后升溫至90℃繼續(xù)攪拌0.5h，制得成膜液，將成膜液倒在玻璃板上，置于水平的工作臺面上，室溫下自然成膜；

步驟四：將步驟三制得的膜加入丙酮中，制成質(zhì)量濃度5％的溶液，在攪拌下緩慢加入質(zhì)量百分比1％的乙酸酐，ph控制在7-8，55℃反應(yīng)1h，離心分離后取上清液，超聲處理20min，制得大豆分離蛋白溶液；

步驟五：將蠶繭去蛹，置入煮沸的質(zhì)量濃度為0.5％的碳酸鈉水溶液中，浴比為1:50，除去蠶繭表面絲膠,將已成絲狀的蠶繭撈出并擰干，再重復(fù)上述操作一次后，用去離子水洗凈，風(fēng)干后得到脫膠絲素；

步驟六：將cacl2在室溫狀態(tài)下溶解于甲酸中，攪拌30min，制得濃度為5wt.％的cacl2-fa溶液，然后將脫膠絲素溶解于cacl2-fa溶液中，磁力攪拌3h，獲得再生絲素蛋白溶液，室溫下干燥成膜，將膜用去離子水浸泡3h，再干燥，獲得再生絲素蛋白膜，將再生絲素蛋白膜在室溫狀態(tài)下二次溶解于甲酸中，浴比為1:10，溶解時間為2h，得再生絲素蛋白紡絲液；

步驟七：取棉短絨5g，將其溶解在甲酸中，配制成質(zhì)量濃度4％的纖維素溶液；

步驟八：將再生絲素蛋白紡絲液與纖維素溶液按重量比4:1混合均勻得再生纖維素紡絲液；

步驟九：將海地瓜膠原蛋白、大豆分離蛋白溶液、再生纖維素紡絲液按質(zhì)量比3:5:19混合均勻，使用超聲波震蕩對其進(jìn)行分散，50℃條件下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續(xù)攪拌8h，得到粘稠溶液置于與高壓裝置連接的醫(yī)用針管中，通過靜電紡絲制得修復(fù)材料，高壓裝置電壓為20kv，紡絲流量2ml/h，將制得的材料置于體積濃度75％乙醇中浸泡30min，在40℃下真空干燥。

步驟九中所述的醫(yī)用針管的容量為20ml，所述的醫(yī)用針管的針頭固定在距離靜電紡絲接收板20cm處，針頭內(nèi)徑為0.41mm。