專利名稱：人早期胚胎因子及其制取法和在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)療領(lǐng)域，涉及到人胚胎因子及其制取方法，以及人早期胚胎因子的抗癌治癌用途。
攻克癌癥是當(dāng)今生物科學(xué)和醫(yī)學(xué)上的重大課題，近幾十年來，細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、組織培養(yǎng)學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科的建立和發(fā)展，為人類征服癌癥提供了新的途徑——生物療法，如干擾素、轉(zhuǎn)移因子、白介素-2，以及基因療法均屬此類。目前國內(nèi)的醫(yī)藥研究，有人從胎兒腦中提取神經(jīng)生長因子，也有人從胎盤中提取胎盤轉(zhuǎn)移因子，還有用胎兒肝脾細(xì)胞制成胎兒細(xì)胞懸浮液的報導(dǎo)，但都不是從人的早期整體胚胎提取。無疑，從人的早期整體胚胎中提取高活性的因子和物質(zhì)，在醫(yī)藥上將具有重大的意義。
本發(fā)明的目的就是試圖從人的早期胚胎中提取一種具有直接逆抑癌細(xì)胞作用又能刺激、調(diào)節(jié)人體免疫細(xì)胞抗癌功能的活性因子，制取一種新的抗癌藥品，應(yīng)用于臨床抗癌治療。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的依據(jù)現(xiàn)代生物科學(xué)原理，人的早期胚胎組織是人體生命活力最強的組織，采用如下的方法，可以制成人早期胚胎因子生物制劑。
(一)原料收集的標(biāo)準(zhǔn)要求(1)制取人早期胚胎因子的組織材料，應(yīng)由健康婦女提供，時期為2—3個月，胚胎組織在體內(nèi)為活體，無病態(tài)異常。
(2)取出胚胎組織后，觀察無異常，應(yīng)迅速放置-20℃以下保存。
(3)對胚胎組織進行乙肝、丙肝等血液的病毒抗原抗體×檢測，陰性方可選為正式原料。
(二)將收集到的符合標(biāo)準(zhǔn)要求的胚胎組織用無菌蒸餾水沖洗干凈，然后置高速絞碎機內(nèi)，加冷蒸餾水進行勻漿，轉(zhuǎn)速10000—12000轉(zhuǎn)/分，時間3—5分鐘，將勻漿置-20℃以下冰凍，然后取出，在35—37℃水浴融化，融化后立即速凍，將勻漿混懸液調(diào)整PH值為4.6—4.8，在4—6℃下放置1—2小時，然后離心(轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分)以上，取出上清液。將上清液調(diào)為PH6.9—7.1，澄清過濾。將澄清液倒入超濾器內(nèi)進行超濾。所得超濾液即為人早期胚胎因子制劑。對超濾所得制劑進行除菌，各類血液病毒抗原抗體檢測，全部為陰性后進行分裝成品。
采用上述方法，提取了人早期胚胎因子，并同時完成了人早期胚胎因子作為制備治癌癥藥的應(yīng)用。
其藥性檢測符合國家生物制品標(biāo)準(zhǔn)要求1、外觀液體制劑無色澄明。
2、PH值7.0±23、分子量2萬4、紫外分析測定多肽為1000mg/ml以上，核糖體為100mg/ml以上。
5、蛋白質(zhì)反應(yīng)3%磺基水楊酸法(一)性。
6、熱流反應(yīng)(一)。
7、過敏反應(yīng)(一)。
8、藥物刺激試驗皮下注射無紅腫、硬變、壞死、癥狀、眼結(jié)膜滴入無紅腫、充血現(xiàn)象。
實驗證明，人早期胚胎因子，具有下列醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值和用途(一)人早期胚胎因子對癌細(xì)胞有顯著的直接抑殺作用經(jīng)組織培養(yǎng)，反復(fù)實驗，人早期胚胎因子對人癌細(xì)胞(如人宮頸癌細(xì)胞、人猴頭癌細(xì)胞等)有顯著的抑殺作用，人癌細(xì)胞加入人早期胚胎因子后，在35℃條件下，孵育120小時，90%以上的癌細(xì)胞崩解死亡，而同樣條件下的對照組癌細(xì)胞卻正常生長。具有重要意義的是人早期胚胎因子對人體正常細(xì)胞無毒副作用，加入人早期胚胎因子的人體正常細(xì)胞，(如人胎肺二倍體細(xì)胞等)與對照組一樣，生長良好。
(二)動物實驗，有明顯的抑瘤作用①小鼠皮下實體瘤實驗經(jīng)對40只小鼠分批實驗，注射人早期胚胎因子組與對照組相比，對實體瘤的抑瘤率達39.19%，P＜0.001，有顯著差異。
②小鼠腹水癌實驗經(jīng)對30只小鼠實驗，注射人早期胚胎因子組的小鼠平均腹圍每只增加0.51厘米，P值＞0.050，而對照組平均每只增加0.98厘米，P值＜0.001，兩者相差明顯。
③動物病理切片檢驗經(jīng)對小鼠皮下實體瘤病理切片檢驗，注射人早期胚胎因子的皮下實體瘤的癌細(xì)胞大量壞死，對照組癌細(xì)胞沒有壞死現(xiàn)象，顯示人早期胚胎因子對動物腫瘤生長有破壞和抑制作用。
(三)有類似白介素—2作用，能高效誘導(dǎo)Lak細(xì)胞產(chǎn)生很強的殺癌能力Lak細(xì)胞是人血中分離出來的一種特定淋巴細(xì)胞，它在白介素-2(一種淋巴細(xì)胞生長因子)的誘導(dǎo)下能成為一種識別性很高、殺癌性很強的專門細(xì)胞，將它回輸給病人，可獲得抗腫瘤的治療效果，因此白介素-2是一種有重要醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用價值的細(xì)胞因子?，F(xiàn)經(jīng)實驗證明，人早期胚胎因子具有類似白介素-2的作用，也能高效誘導(dǎo)Lak細(xì)胞，并使之產(chǎn)生很強殺癌率。經(jīng)生物化學(xué)檢測證明，人早期胚胎因子與白介素-2是兩種不同的物質(zhì)，前者的成分中也不含有后者的物質(zhì)。又經(jīng)10次實驗證明，人早期胚胎因子，在誘導(dǎo)Lak細(xì)胞形態(tài)上和數(shù)量上，與白介素-2的誘導(dǎo)結(jié)果是類似的，而且在殺癌率上也十分接近，白介素-2最佳殺癌率為93.2%，人早期胚胎因子最佳殺癌率為89.2%，而對照組僅為10.3%。(采用的實驗方法細(xì)菌培養(yǎng)加MTT酶標(biāo)儀測定法)。
(四)能高效激活NK細(xì)胞，提高NK細(xì)胞的殺癌力NK細(xì)胞是哺乳動物體內(nèi)的自然殺癌細(xì)胞，它無需預(yù)先致敏，也不需要由抗體參加，即可對自身的各種腫瘤有迅速的溶解作用，因此，能否激活NK細(xì)胞是檢驗?zāi)撤N生物制劑有無抗癌作用的重要標(biāo)志。經(jīng)10次人血實驗證明，人早期胚胎因子激活NK細(xì)胞，其激活殺癌率與白介素-2十分接近。實驗結(jié)果人早期胚胎因子組殺癌率為88.2%(平均值)，白介素-2組殺癌率為91.1%(平均值)，而對照組僅為47.2%，顯示人早期胚胎因子組明顯高于對照組，P值＜0.001。
經(jīng)對20只小白鼠實驗證明，僅注射8針人早期胚胎因子，即可使小白鼠脾臟NK細(xì)胞殺癌活性上升11%，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理P＜0.001。
(五)能顯著提高免疫功能經(jīng)取40個人血實驗，人早期胚胎因子可使人白細(xì)胞吞噬率比對照組上升88.06%，比豬胸腺組高23.53%；可使人白細(xì)胞吞噬指數(shù)比對照組上升161.4%，比豬胸腺素組高72.5%，通過α—醋酸萘酯酶實驗，可使T淋巴細(xì)胞活性上升37.26%，比豬胸腺素組高7%。
經(jīng)對15只大白鼠實驗證明，用人早期胚胎因子后比用人早期胚胎因子前血白細(xì)胞吞噬率上升118.8%，吞噬指數(shù)上升207.7%，可使大鼠T淋巴細(xì)胞活性上升117.7%。
從以上可以看出，人早期胚胎因子對癌細(xì)胞有顯著的抑殺作用，它類似白介素-2，能高效誘導(dǎo)Lak細(xì)胞，高效激活NK細(xì)胞，提高細(xì)胞的殺癌力，能顯著提高免疫功能，對人體正常細(xì)胞無毒副作用。人早期胚胎因子原料為人工流產(chǎn)的廢棄物，成本低，產(chǎn)品價格便宜，效價成本僅是白介素-2的1/7—1/10(白介素-2國內(nèi)價格為每克60萬元)。制造方法簡單，一般的生物制品研究所均可制造，該藥品及其制取方法，有廣闊的醫(yī)藥應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.一種人早期胚胎因子及其制取法和在制藥中的應(yīng)用，其特征是所說的人早期胚胎因子的物理-化學(xué)參數(shù)是①外觀液體制劑為無色澄明；②PH值7.0±2；③分子量2萬；④紫外分析測定多肽為1000mg/ml以上，核糖體為100mg/ml以上；⑤蛋白質(zhì)反應(yīng)3%磺基水楊酸法(一)性；⑥熱流反應(yīng)(一)；⑦過敏反應(yīng)(一)；⑧藥物刺激試驗皮下注射無紅腫、硬變、壞死癥狀，眼結(jié)膜滴入無紅腫、充血現(xiàn)象。
2.按照權(quán)利要求1所述的人早期胚胎因子及其制取法和在制藥中的應(yīng)用，其特征是所說的制取法是①收集原料的標(biāo)準(zhǔn)要求為a、制取人早期胚胎因子的組織材料，應(yīng)由健康婦女提供，時期為2—3個月，胚胎組織在體內(nèi)為活體，無病態(tài)異常；b、取出胚胎組織后應(yīng)迅速放置-20℃以下保存；c、對胚胎組織進行乙肝、丙肝等血液的病毒抗原抗體×檢測、陰性方可選為正式原料；②將收集到的符合標(biāo)準(zhǔn)要求的胚胎組織用無菌蒸餾水沖洗干凈，然后置高速絞碎機內(nèi)，加冷蒸餾水進行勻漿，轉(zhuǎn)速10000—12000轉(zhuǎn)/分，時間3—5分鐘，將勻漿置-20℃以下冰凍，然后取出，在35—37℃水浴融化，融化后立即速凍，將勻漿混懸液調(diào)整PH值為4.6—4.8，在4—6℃下放置1—2小時，然后離心，轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分以上，取出上清液，將上清液調(diào)為PH6.9—7.1，澄清過濾，將澄清液倒入超濾器內(nèi)進行超濾，所得超濾液即為人早期胚胎因子制劑，對超濾所得制劑進行除菌，各類血液病毒抗原抗體檢測，全部為陰性后進行分裝成品。
3.按照權(quán)利要求1、2所述的人早期胚胎因子及其制取法和在制藥中的應(yīng)用，其特征在于所說的在制藥中的應(yīng)用是人早期胚胎因子作為治癌癥藥的應(yīng)用，它能直接抑殺癌細(xì)胞，誘導(dǎo)Lak細(xì)胞，激活NK細(xì)胞。
全文摘要
公開了人早期胚胎因子及其制取方法和在制藥中的應(yīng)用。它將人早期胚胎組織置高速絞碎機內(nèi)勻漿，勻漿冰凍后取出，然后離心、過濾和超濾、除菌，進行血液病毒抗原抗體檢測，所得人早期胚胎因子分子量為2萬，多肽為1000mg/ml以上，核糖體為100mg/ml以上，能高效誘導(dǎo)Lak細(xì)胞，激活NK細(xì)胞，作為治癌藥物，具有很強的殺癌力和免疫功能，無毒副作用。所用原料為人工流產(chǎn)廢棄物，一般生物制品所均可制造，應(yīng)用前景廣闊。
文檔編號A61K35/54GK1102097SQ93115199
公開日1995年5月3日 申請日期1993年10月29日 優(yōu)先權(quán)日1993年10月29日
發(fā)明者李濱勝, 李榮杰, 孫安堂, 李星 申請人:泰安市中醫(yī)醫(yī)院, 泰安市衛(wèi)生防疫站, 山東省生物制品研究所