專利名稱：肽基化合物及其作為金屬蛋白酶的抑制劑的治療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新類型的肽基衍生物，其制備方法，以及其在藥品中的應(yīng)用。
在正常組織中，細(xì)胞結(jié)締組織的合成作用是通過胞外基質(zhì)的降解來調(diào)節(jié)的，兩種相反的效果以動(dòng)態(tài)平衡方式存在?；|(zhì)的降解作用是由常駐的結(jié)締組織細(xì)胞和侵入的發(fā)炎細(xì)胞釋放出的蛋白酶的作用引起的，而且部分是由于至少三組金屬蛋白酶的活性引起的。這三組蛋白酶是膠原酶(間質(zhì)膠原酶，MMP-1；PMN膠原酶，MMP-8)，明膠酶(明膠酶A，MMP-2，72KDα-明膠酶，Type IV膠原酶；明膠酶B，MMP-9，92KDα-明膠酶，Type IV膠原酶)和基質(zhì)溶素(蛋白多糖酶，MMP-3，基質(zhì)溶素-1，transin；基質(zhì)溶素-2，MMP-10；基質(zhì)溶素-3，MMP-11)。通常，這些代謝酶在其合成和分泌水平上、而且還在其胞外活性水平上受到嚴(yán)密地調(diào)控，后者是通過專一抑制劑的作用實(shí)現(xiàn)的，如TIMP(金屬蛋白酶的組織抑制劑)，它可與金屬蛋白酶形成失活的配合物，還有更為普通的蛋白酶抑制劑，如α2-巨球蛋白。
由金屬蛋白酶催化的胞外基質(zhì)的吸收作用加速的、結(jié)蒂組織的自由降解，是許多病態(tài)的特征，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、角膜炎、表皮或胃潰瘍；腫瘤轉(zhuǎn)移或侵入；周期性疾病、蛋白尿、伴隨粥樣硬化血小板破裂的冠狀血栓形成和骨疾病。抑制劑也可用于防止創(chuàng)傷以后的病原性Squaelae，這種病會(huì)導(dǎo)致永久殘廢。這些化合物還可用于通過抑制排卵或植入的方式實(shí)現(xiàn)生育控制?？梢灶A(yù)料，服用金屬蛋白酶抑制劑和被推薦用于這種目的的多種化合物能對(duì)上述疾病的發(fā)病機(jī)理進(jìn)行有益的改變[作為一般綜述，參見Wahl等人，Ann.Rep.Med.Chem.25175—184，Academic PressInc.，San Diego(1990)]。
已經(jīng)公開了幾種能抑制金屬蛋白酶的小類肽化合物。也許，其中最著名的是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)，這種酶制劑的作用是阻遏十肽的血管緊張素I轉(zhuǎn)化成血管緊張素II(一種潛在的前體物質(zhì)。在EP-A-0012401中公開了此類化合物。此外，有關(guān)的巰酰胺肽基衍生物在體外、體內(nèi)都表現(xiàn)出AEC抑制劑活性(Weller等(1984)Biochem.Biophys.Res.Comm.125(1)82-89)。
TNF是一種細(xì)胞分裂素，最初它是作為與細(xì)胞有關(guān)的28KD的前體產(chǎn)生的。它作為一種活性成分以17KD的分子量被釋放出來(Jue等(1990)Biochemistry 298371-8377)，它可以在活體內(nèi)引發(fā)很多有害效果。當(dāng)對(duì)動(dòng)物或人體使用這種化合物時(shí)，會(huì)引起炎癥、發(fā)熱、心血管疾病、出血血凝固和急性相反應(yīng)(acute phase response)，類似于在急性感染和休克狀態(tài)下出現(xiàn)的情形。長期使用會(huì)導(dǎo)致惡病質(zhì)和厭食。過量TNF的積累可以致死。
在動(dòng)物模擬研究中得到的大量證據(jù)表明，用專一性抗體阻遏TNF的作用，有利于急性感染、休克、移植體一宿主排斥反應(yīng)和自免疫疾病。對(duì)某些淋巴瘤和骨髓瘤來說，TNF還是一種autocrine生長因子，并能起到抑制長有這種腫瘤的病人的正常血細(xì)胞生成的作用。
因此，有人預(yù)測(cè)，阻止TNF的產(chǎn)生及其作用可能是多種炎癥、感染、免疫疾病和惡性疾病的潛在治療途徑。其中包括(但不限于)膿毒性休克、血流動(dòng)力學(xué)體克和膿毒綜合癥(Mathison等(1988)J.Clin.Ivest.811925-1937；Miethke等(1992)J.Exp.Med.17591-98)，Pos-ischaemic reperfusion損傷，瘧疾(Grau等(1989)Im-munol.Rev.11249-70)；分枝菌感染(Bames等(1992)Infecf.Imm.601441-6)，腦膜炎，牛皮癬，充血性心臟病，纖維化病變，惡病質(zhì)，移植排斥，癌癥，自免疫疾病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，放射性損傷，使用諸如OKT3或CAMPATH-1之類的免疫抑制單克隆抗體以后的毒性，以及高氧肺泡損傷。
現(xiàn)有的臨床抗-TNF方法，包括使用諸如地塞米松之類的皮質(zhì)類固醇和使用環(huán)孢素-A(cyceosporin-A)或FK506，它們是細(xì)胞分裂素轉(zhuǎn)錄的非專一抑制劑。已證實(shí)諸如Pentoxyfilline之類的磷酸二酯酶抑制劑是更為專一的TNF基因轉(zhuǎn)錄抑制劑(Endres S(1991)Immunol.7256-60，Schandene等(1992)Immuncl.7630-34，Ale-gre等(1991)Transplatation 52674-679，Bianco等(1991)Blood 781205-1221)，還證實(shí)酞胺哌啶酮可以抑制白細(xì)胞產(chǎn)生TNF。在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)，抗TNF單克隆抗體，可溶性TNF受體和可溶性TNF受體/免疫附著素可專一地抑制TNF的活性作用(Bagby等(1991)J.lnfect.Dis.162421-427，F(xiàn)ranks等(1991)Infect.Immun.592609-2614，Tracey等(1987)Nature 330662-664，F(xiàn)ischer等(1992)DNASUSA(在出版中)，Lesslauer等(1991)Eur.J.Immunol.212883-2886，Ashkenazi等(1991)PNAS USA 8810535-10539)。
最近證實(shí)，TNF的效果是受兩種肽TNF-a和TNF-b調(diào)控的。盡管這兩種肽之間只有30％的同源性，但它們能激活相同的受體并且是由緊鄰的基因編碼的。因此，這里所說的腫瘤壞死因子或TNF是指腫瘤壞死因子a和與TNF-a有高度的序列一致性或具有大致相同的生理作用的肽類，例如TN-b。
業(yè)已證實(shí)，具有能抑制與結(jié)締組織的降解有關(guān)的金屬蛋白酶，如膠原酶、基質(zhì)溶素和明膠酶的作用的特性的化合物，可以在體外和體內(nèi)抑制TNF的釋放(Gearing等(1994)Nature 370555-557，McGeehan等(1994)Nature 370558-561，WO93/20047)。所有報(bào)道過的此類抑制劑都帶有一個(gè)氧肟酸鋅結(jié)合基團(tuán)。
1985年4月16日授權(quán)公告的美國專利US4,511,504和1986年2月4日授權(quán)公告的美國專利US4,568,666中披露了抑制膠原酶的化合物。在1988年9月13日授權(quán)的美國專利US4,771,037中公開了據(jù)稱可抑制基質(zhì)溶素(蛋白多糖酶)化合物的有關(guān)結(jié)構(gòu)。
基質(zhì)溶素膠原蛋白酶抑制劑可用于與膿毒性關(guān)節(jié)炎相伴的關(guān)節(jié)軟滑損傷。關(guān)節(jié)的細(xì)菌感染能引起發(fā)炎反應(yīng)，而且可能永遠(yuǎn)也不能除去感染劑，導(dǎo)致對(duì)結(jié)構(gòu)成分的永久損傷。已將細(xì)菌制劑用在動(dòng)物模型上，以誘發(fā)關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)，伴隨出現(xiàn)蛋白水解活性。參見Case等(1989)J.Clin.lnvest.841731-40和Williams等(1990)Arth.Rheum.33533-41。
基質(zhì)溶素、膠原酶和明膠酶的抑制劑可適當(dāng)?shù)亟Y(jié)合現(xiàn)行的化療和/放療對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移進(jìn)行控制。參見Matrisian等(1986)PNA-SUSA 839413-7，Wilhelm等(1987)Ibid.846725-29，Werb等(1989)J.Cell Bio.109872-889，Liotta等(1983)Lab.Invest.49636-649和Reich等，Metatasis；lCiba Foundation Symposium，Wi-ley，Chicester，1988，PP.193-210。
在轉(zhuǎn)移性腫瘤侵入期間，分泌的蛋白酶，如基質(zhì)溶素、膠原酶和明膠酶在與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)的過程中起著重要作用。事實(shí)上，也有證據(jù)表明，在某些轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞系中，基質(zhì)金屬蛋白酶被過分地表達(dá)。在本文中，上述酶的作用是穿透下基底膜，并使得腫瘤細(xì)胞從原始腫瘤形成位點(diǎn)脫出，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。當(dāng)它附著在血管壁上以后，所述腫瘤細(xì)胞利用相同的酶穿透下基底膜并滲入其它組織，從而導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移。抑制上述過程即可阻止腫瘤的轉(zhuǎn)移，并改善現(xiàn)行化學(xué)治療和/或放射治療的效果。
這種抑制劑還可用于控制諸如齦炎之類的周期性疾病。從來自發(fā)炎的牙齦的成纖維細(xì)胞中分離到了膠原酶和基質(zhì)溶素的活性物質(zhì)(uitto等(1981)J.Periodontal Res.16417-424)。酶的含量與膠滴病的嚴(yán)重程度相關(guān)；Overall等(1987)J.Periodontal Res.2281-88。
在被堿燒傷后的角膜潰瘍中也觀察到了蛋白水解過程(Brown等(1969)Arch.Opthalmol.81370-373)。含有巰基的肽可以抑制從被堿燒傷的兔角膜中提取的膠原酶(Burns(1989)Invest.Opthal-mol 301569-1575)。用所述金屬蛋白酶并結(jié)合檸檬酸鈉或抗壞血酸鈉和/抗菌劑處理被堿燒傷的眼睛或感染而表現(xiàn)出角膜潰瘍的眼睛，可有效阻止角膜降解的發(fā)展。
基質(zhì)溶素參與了腎小球基底膜(GBM)結(jié)構(gòu)成分的降解，GBM的主要功能是限制血漿蛋白質(zhì)的通過，以免其進(jìn)入尿中(Baricos等(1989)Biochem.J.254609-612)。因腎小球疾病所致的蛋白尿，是因?yàn)樘岣吡薌BM對(duì)蛋白質(zhì)的透性所引起的尿中蛋白質(zhì)含量過高。提高GBM透性的根本原因尚不清楚，但包括基質(zhì)溶素在內(nèi)的蛋白酶可能在腎小球疾病中起著重要作用。對(duì)這種酶進(jìn)行抑制可能會(huì)減輕與腎功能異常相關(guān)的蛋白尿。
抑制基質(zhì)溶素的活性，可以阻止會(huì)導(dǎo)致血栓形成的粥樣硬化血小板破裂。粥樣硬化血小板的破裂是透發(fā)血栓形成的最常見因素。據(jù)認(rèn)為，由滲透的發(fā)炎細(xì)胞釋放出的蛋白水解酶或細(xì)胞分裂素導(dǎo)致的包圍這些血小板的結(jié)締組織基質(zhì)的不穩(wěn)定和降解，是引起血小板破裂的原因。這種血小板破裂，因血液迅速流出血管而引起急性血栓疾病。在進(jìn)行手術(shù)時(shí)，從心臟移植患者身上取出的粥樣硬化血小板的單個(gè)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了大量的基質(zhì)溶素RNA信息(Henney等(1991)PNAS USA 888154-8158)。用這種化合物抑制基質(zhì)溶素可能有助于阻止或延緩穩(wěn)定粥樣硬化血小板的結(jié)締組織基質(zhì)的降解，從而阻止導(dǎo)致急性冠狀血栓形成的成因。
可將基質(zhì)溶素和膠原酶的專一抑制劑用作生育控制劑。有證據(jù)表明，在未受精的卵子和合子中觀察到包括基質(zhì)溶素和膠原蛋白酶在內(nèi)的金屬蛋白酶的表達(dá)，并在隨后的分裂階段也觀察到其表達(dá)，而且其含量在胎兒發(fā)育的胚泡階段和內(nèi)胚層分化階得到提高(Brenner等(1989)Genes&Develop.3848-59)。與腫瘤轉(zhuǎn)移類似，胚泡也可以表達(dá)金屬蛋白酶，以便在植入時(shí)穿透子宮壁的胞外基質(zhì)。在上述初期發(fā)育期間抑制基質(zhì)溶素和膠原酶可以阻止子宮中正常的胚發(fā)育和/或植入。這種現(xiàn)象可形成一種生育控制方法。另外，有證據(jù)表明膠原酶在排卵中起著重要作用。在這種情形中，必須穿透覆蓋在濾泡頂部的一層膠原以排出卵細(xì)胞。在這一過程中檢測(cè)到了膠原酶，而且已證實(shí)抑制劑能有效阻止排卵(Woessner等(1989)Steroids54491-499)。在排卵期間，基質(zhì)溶素的活性也有作用(Too等(1982)Endocrin.1151043-1050)。
在營養(yǎng)不良表皮水泡癥中也觀察到了膠原水解及基質(zhì)溶素活性(Kronberger等(1982)J.lnvest.Dermatol.79208-211；Sawarnura等(1991)Biochem.Biophys.Res.Commun.1841003-8)。抑制金屬蛋白酶就可以限制表皮結(jié)締成分的迅速破壞。
除了由結(jié)構(gòu)成分組成的胞外基質(zhì)以外，基質(zhì)溶素還可以降解體內(nèi)的其它物質(zhì)，包括α1-蛋白酶抑制劑，并因此影響諸如彈性蛋白酶之類的其它蛋白酶活性(Winyard等(1991)FEBS Letts.27991-94)。抑制基質(zhì)金屬蛋白酶可以增強(qiáng)這些內(nèi)源抑制劑的抗蛋白酶。
最近發(fā)表的文章表明，已鑒定了MMP類的幾種新酶，其中有一些對(duì)發(fā)病來是很重要的。膠原酶3是乳癌細(xì)胞特有的一種酶，對(duì)乳癌的發(fā)病可能有作用(Freiie等(1994)J.Biol.Chem.269(24)16766-16773)，MT-MMP是MMP家族的另一個(gè)成員，被證實(shí)為膠原酶A活性中的一種重要酶(Sato等(1994)Nature 37061-65)。明膠酶A是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中的一種重要酶(如上所述)。
業(yè)已證實(shí)，b-淀粉狀蛋白前體(APP)的降解可以產(chǎn)生淀粉狀斑，在Al＝heimers病(AD)患者中發(fā)現(xiàn)，上述過程是老年斑的主要成因。最近的兩篇報(bào)道證實(shí)，金屬蛋白酶可將APP分裂成淀粉狀斑(Abraham等(1994)Biochemistry 33192-199；Huber等(1994)Biochem.Biophys.Res.Comm.201(1)45-53)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，上述新酶與其它MMPs之間的高度一致性會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)這樣的可能性，即能抑制其中一種酶的化合物可能在一定程度上抑制上述新酶。因此，本發(fā)明所提到的抑制劑可用于治療上述新酶相關(guān)的疾病。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供能基本抑制細(xì)胞釋放TNF的化合物，因而可將其用于治療由TNF引起的病變。這些用途包括，但不局限于發(fā)炎、發(fā)燒、心血管疾病、出血、血凝固、急性相反應(yīng)、惡病質(zhì)和厭食、急性感染、休克、移植物與宿主的反應(yīng)和自身免疫病的治療。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供除了能抑制TNF的釋放外還可能抑制MMPs的活性的化合物，因此，可將其用于治療患有由TNF和/或MMPs引起的病癥的患者。
本發(fā)明包括式(I)所示的巰烷基肽基化合物，該化合物是包括變性疾病(如上所述)和某些癌癥在內(nèi)的、由基質(zhì)金屬蛋白酶和/或TNF引起的疾病的有用抑制劑。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，新的化合物如通式(I)所示，即如下面的化學(xué)式所示。就式(I)而言，至少R1是C1-6烷基，C2-6烯烴基，芳基，(C1-6烷基)芳基或C1-6烷基AR9，其中A是O，NR9或S(O)m，其中m＝0-2，而該R9或每個(gè)R9是H，C1-4烷基，芳基或(C1-4烷基)芳基；R2是H或C1-6烷基；X表示NR4R5以及R4是H或是用氨基(NH2)選擇性取代的C1-6烷基，芳胺基，保護(hù)氨基，芳基，二(C1-6烷基)氨基，單(C1-6烷基)氨基，CO2H，保護(hù)羧基，氨甲酰基，單(C1-6烷基)氨甲?；蚨?C1-6烷基)氨甲?；约癛5是H或C1-6烷基，或NR4R5是吡咯烷基，哌啶子基或嗎啉代；R3表示[AlK]nR6，而R6是選擇性取代的C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯烴基，C1-6烷基，芐基，(C1-6烷氧基)芐基，芐氧基芐基或3-吲哚甲基，AlK是C1-6烷基或C2-6烯烴基，而n＝0或1；R7是H或R10CO，其中R10是C1-4烷基，(C1-4烷基)芳基，C3-6環(huán)烷基，(C3-6環(huán)烷基)C1-4烷基，C2-6烯烴基或(C2-6烯烴基)芳基；和R8是H，C1-4烷基，(C1-4烷基)芳基或芳基；或它的鹽、溶劑化物或水合物。
可以看出，本發(fā)明的化合物可以含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱地取代的碳原子，如式(I)中加有星號(hào)的C原子。式(I)化合物中一個(gè)或多個(gè)上述不對(duì)稱中心的存在，會(huì)產(chǎn)生立體異構(gòu)體，在每一種情況下都應(yīng)將本發(fā)明理解為擴(kuò)展到所有此類立體異構(gòu)體，包括對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體，以及它們的混合物，包括消旋混合物。
在這里的化學(xué)式中，一線被用在潛在的非對(duì)稱中心，以代表可能的R-和S-構(gòu)型，＜線和…線表示非對(duì)稱中心的單一構(gòu)型。
在該說明書中，無論單獨(dú)還是組合在一起，“C1-6烷基”一詞是指具有1～6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基部分，例如，甲基，乙基、丙基、異丙基、丁基、t-丁基、戊基、己基。因此，舉例來說， 可以是t-丁基。
“C1-4烷基”一詞是指具有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基部分，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基和t-丁基。
“C2-6烯烴基”一詞是指具有2-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基部分，此外，在可采用E或Z立體化學(xué)的地方還有一個(gè)雙鍵。這一術(shù)語包括，如乙烯基、1-丙烯基、1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。
“環(huán)(C3-6烷基”一詞是指具有3-6個(gè)碳原子的飽和脂環(huán)部分，包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
“環(huán)(C3-6)烯烴基”一詞是指具有3-6個(gè)碳原子的脂環(huán)部分，還另有一個(gè)雙鍵。該術(shù)語包括環(huán)戊烯基和環(huán)丁烯基。
“芳基”一詞是指選擇性取代的苯基或萘基，取代基選自鹵基、三氟甲基、C1-6烷基、烷氧基、苯基等?！胞u基”一詞是指氟、氯、溴或碘。
“保護(hù)氨基”和“保護(hù)羧基”兩個(gè)詞是指以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式保護(hù)起來的氨基和羧基。例如，可用芐氧基羰基、叔丁氧基羰基、乙?；蝾愃苹鶊F(tuán)保護(hù)氨基，或是以甲二酰亞氨基或類似基團(tuán)形式存在。羧基可以被以易于切除的酯，如甲基、乙基、芐基或叔丁基酯的形式保護(hù)起來。
“烷氧基”是指最多含6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基或叔丁氧基。
式(I)化合物的鹽包括可以藥用的鹽，如由無機(jī)酸或有機(jī)酸衍生的加酸鹽，例如氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、P-甲苯碘酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、高氯酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、檸檬酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、酒石酸鹽和苯甲酸鹽。
也可以與堿形成鹽。這類鹽包括由無機(jī)或有機(jī)堿衍生出來的鹽，如堿金屬鹽，象鎂鹽或鈣鹽，以及有機(jī)胺鹽，象嗎啉、哌啶、二甲胺、或二乙胺鹽。
當(dāng)“保護(hù)羧基”在發(fā)明的化合物中是酯化的羧基時(shí)，它可以是化學(xué)式為CO2R11的代謝不穩(wěn)定酯，其中，R11可以是乙基、芐基、苯乙基、苯丙基、或α或β-萘基、2，4-二甲基苯基、4-叔-丁基苯基、2，2，2-三氟乙基、1-(芐氧基)芐基1-(芐氧基)乙基、2-甲基-1-丙酸基丙基、2，4，6-三甲基芐氧基甲基或新戊酸基甲基。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括下面這些單獨(dú)的化合物或任意組合形式R1表示C1-4烷基或C1-3烷基-OH基，例如2-甲基丙基(異丁基)或2-羥乙基；R2表示氫；n是0；R4表示H或C1-3烷基，例如甲基；R5表示H或C1-3烷基，例如甲基；R6表示芐基或3-吲哚基甲基；R7表示H或R10CO基團(tuán)，其中R10是C1-4烷基，例如甲基；R8表示C1-4烷基，芳基或(C1-3烷基)芳基，例如苯基或芐基；本發(fā)明特別優(yōu)選化合物包括N-[N-(巰乙?；?-L-亮氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺N-(乙酰巰酰基)-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?戊酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-3-甲基丁酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-2-苯乙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-3-苯丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙酰基硫代)-4-苯丁?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺N-(乙?；鶐€乙?；?-L-蘇氨酰-L-苯丙氨酸甲酰胺N-(乙酰基巰乙?；?-L-亮氨酰-L-色氨酸甲酰胺(RS)-2-巰戊?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-3-甲基丁酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-2-苯乙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-3-苯丙酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-4-巰基-4-苯丁酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺N-[N-(巰乙?；?-L-蘇氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺和N-[N-(巰乙?；?-L-亮氨酰]-L-色氨酸甲酰胺通式(I)的化合物可用本領(lǐng)域已知的任何適當(dāng)方法進(jìn)行制備，和/或通過以下方法制備，該方法本身也是本發(fā)明的一部分。可以看出，當(dāng)需要式(I)的一種具體的立體異構(gòu)體時(shí)，這里所公開的方法可與適當(dāng)?shù)耐中栽牧?，?或可以用常規(guī)分離技術(shù)(例如HPLC)從混合物解析出的異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物可用以下方法制備。在下面的說明和化學(xué)式中，R1，R2，R3，R6，R7，R8和X基團(tuán)的定義與上文相同，除非另有說明?？梢钥闯觯谙率龈鞣N化合物中存在的功能基團(tuán)，如氨基、羥基或羧基需要保留時(shí)，在任何反應(yīng)開始以前要將其保護(hù)起來。在這些例子中，保護(hù)基團(tuán)的去除可能是具體反應(yīng)的最后一步。適用于上述官能團(tuán)防護(hù)的保護(hù)基對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。要獲得更具體的細(xì)節(jié)，參見“Protective Groups in Organic Synthesis”Wileylnterscien&，TW Greone，PGM Wuts.
一種制備通式(I)的化合物的方法包括將具有通式(II)的化合物去保護(hù)(例如通過水解)，它是式(I)，其中R7表示適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基(例如叔-丁基或乙酸基)。
可以理解，需要式(I)的一種特殊的立體異構(gòu)體時(shí)，可以用常規(guī)解析技術(shù)，如高效液相色譜法得到它。不過，當(dāng)必要時(shí)可將同手型的合適原料用于該偶聯(lián)反應(yīng)中，以獲得式(I)的特定立體異構(gòu)體。下面將對(duì)此加以舉例說明。
通過將式(III)的一種酸(其中R7和R8如上所述)或其活性衍生物同式(IV)的一種胺結(jié)合可以制備通式(II)的中間物。舉例來說，式(III)的酸的活性衍生物包括酸酐或?；u，如?；?。
該偶聯(lián)反應(yīng)可以采用這種類型的胺化反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)條件進(jìn)行。因此，該反應(yīng)可以在一種溶劑中進(jìn)行，例如一種惰性有機(jī)溶劑，如醚，象四氫呋喃之類的環(huán)醚；酰胺，如取代過的酰胺，象二甲基甲酰胺，或鹵代烴，如二氯甲烷。反應(yīng)溫度為-30℃至環(huán)境溫度，如-20℃～0℃，有選擇地存在一種堿，例如有機(jī)堿，象胺，如三乙胺或環(huán)胺，象N-甲基嗎啉。當(dāng)采用式(III)的酸時(shí)，該反應(yīng)另外要在有縮合劑時(shí)進(jìn)行，如二酰亞胺，如N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺，最好是添加了三唑，如1-羥基苯并三唑?；蛘?，在與式(IV)的胺反應(yīng)之前，上述酸先與氯甲酸酯，如氯甲酸乙酯反應(yīng)。
通式(IV)的胺可以這樣制備將式(V)的一種酸或其活性衍生物同式(VI)的一種胺偶聯(lián)，隨后除去所有的保護(hù)基團(tuán)。
式(V)的酸的衍生物包括如上文所述的酸酐或酰基鹵，如?；?。
通式(V)和(VI)所示的氨基酸及其衍生物，能夠以手性或外消旋形式獲得。在手性形式中，它們?yōu)橥ㄊ?I)的化合物的手性合成提供了非對(duì)稱結(jié)構(gòu)區(qū)。很多這樣的衍生物，都可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法由可從商業(yè)途徑得到的原料制成。(參見“The Prac-tice lf Peptide Synthesis”，Bodanszk等，Springer Verlag，New York，1984；WO92/2136)。
通式(II)的化合物可以通過用通式(VIII)的巰醇(其中R7表示適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)，如叔丁基或乙酸基)對(duì)通式(VII)的化合物(其中R14表示適當(dāng)?shù)碾x去基團(tuán)，如鹵基，像溴，或烷基磺酸酯，如甲基磺酸酯)進(jìn)行親核取代來制備，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)條件，如在WO 90/05719中所講述的。
通式(VIII)的巰醇可用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法由作為商品出售的原料制成。通式(VIII)的很多巰醇也可由商業(yè)途徑購得。
通式(VII)的化合物可通過將通式(IX)的酸(其中R14和R8的含義如上所述，或它的適當(dāng)保護(hù)形式)或它的活性衍生物與通式(IV)的胺偶聯(lián)制備而成，所采用的偶聯(lián)條件與制備式(II)的化合物時(shí)的條件相同。
可以手性或消旋形式獲得式(III)和(IX)所示結(jié)構(gòu)的羧酸。采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法(參見WO 90/05719)，可很容易地由作為商品出售的原料制成多種此類的衍生物。
式(I)的化合物也可通過式(I)的其它化合物的互變來制備。例如，其中R1為C1-6烷基基團(tuán)的式(I)化合物，可以是對(duì)其中R1為C2-6烯烴基基團(tuán)的式(I)化合物進(jìn)行氫化(在適當(dāng)溶劑，如醇，像乙醇中，采用附在碳上的鈀)而制成的。其中R7是R10CO的式(I)化合物，可以是對(duì)其中R7為H的式(I)化合物進(jìn)行酰化(在存在堿，如三乙胺的條件下，在適當(dāng)溶劑，如氯化溶劑，像二氯甲烷中用合適的?；萊10COCl)而制成。
可根據(jù)各組分的物理化學(xué)差異，用已知方法將所得到的最終產(chǎn)物或中間產(chǎn)物的任何混合物分離成純最終產(chǎn)物或中間產(chǎn)物。例如，可用色譜法，蒸餾法，分級(jí)結(jié)晶法，或是形成鹽，如果在某些情況下合適或可能的話。
在體外，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出對(duì)基質(zhì)溶素、膠原酶和明膠酶的抑制作用。在體外，本發(fā)明的化合物還表現(xiàn)出能抑制TNF的釋放。該化合物的活性及選擇性可以用適當(dāng)?shù)拿敢种圃囼?yàn)加以測(cè)定，如在下文的例A中所述。
本發(fā)明還涉及對(duì)患有因上述基質(zhì)溶素所引起的紊亂或疾病的患者(包括人和/或?yàn)榱巳∧?、肉食或皮毛業(yè)或作為寵物飼養(yǎng)的哺乳動(dòng)物)進(jìn)行治療的方法，更具體地說，涉及一種與服用以式(I)的化合物為活性成分的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑有關(guān)的治療方法。
因此，除其它用途之外，式(I)的化合物可用于治療骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，并可用于治療因這種基質(zhì)金屬蛋白酶的過分表達(dá)而產(chǎn)生的疾病和癥狀，如在轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞系中出現(xiàn)的癥狀。
如上所述，因?yàn)槟芷鸬絋NF和MMPs的抑制劑的作用，式(I)的化合物可用作人用藥或獸用藥。因此，在另一方面，本發(fā)明涉及一種對(duì)由TNF和/或MMPs在哺乳動(dòng)物，尤其是人體上引起的疾病或癥狀進(jìn)行控制(指治療或預(yù)防)的方法，該方法包括對(duì)上述哺乳動(dòng)物使用有效劑量的式(I)化合物或它的可以藥用的鹽。為此、可將式(I)化合物用于制備可用來控制(指治療或預(yù)防)由TNF和/或MMPs引起的疾病或癥狀的制劑。
上文中所提及的疾病或癥狀包括發(fā)炎、發(fā)熱、心血管疾病、出血、血凝固和急性相反應(yīng)、惡病質(zhì)和厭食、急性感染、休克、移植物與宿主的反應(yīng)和自身免疫性疾?。灰约芭c組織降解有關(guān)的疾病，如骨吸收、發(fā)炎疾病、皮膚病、腫瘤生長、血管形成和由二次轉(zhuǎn)移造成的入侵、特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙周炎、齦炎、角膜潰瘍、腫瘤生長、血管生長和由二次轉(zhuǎn)移造成的入侵。
為了治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和由于基質(zhì)金屬蛋白酶的過分表達(dá)而造成的疾病和癥狀，如在某些轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞系或其它由于基質(zhì)金屬蛋白酶或大量TNF的產(chǎn)生所引起的疾病，可以通過吸入、噴灑或腸道方式口服、局部使用、腸外使用劑量單位配方形式的含有無毒藥用載體、佐劑和賦形劑的式(I)化合物。這里所說的腸外使用包括皮下注射、靜脈注射、肌肉內(nèi)注射、胸內(nèi)注射或灌輸。本發(fā)明的化合物除了可用于治療熱血?jiǎng)游铮缧∈?、大鼠、馬、牛、羊和貓以外，也可用于對(duì)人體進(jìn)行治療。
含有所述活性成分的藥用組合物可以為適于口服的形式，例如片劑、錠劑、糖錠、水或油懸浮液、分散粉劑或顆粒、乳劑、硬或軟膠囊、或糖漿或酏劑。用于口服的混合物，可以按照本領(lǐng)域任何已知的藥用混合物制備方法進(jìn)行制備，而且，這種混合物中可含有選自甜味劑、香味劑、著色劑和防腐劑中的一種或多種制劑，以提供美觀、可口的藥品制劑。片劑中含有與適合于片劑生產(chǎn)的無毒、可用于制藥的賦形劑混合的活性成分。例如，所述賦形劑可以是惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑和崩解劑，如玉米淀粉、或藻酸；粘接劑，如淀粉、明膠或阿拉伯樹膠；以及潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。所述片劑可以是未包衣的，或是用已知技術(shù)包衣，以延緩其在胃腸道中的崩解和吸收，從而可在較長時(shí)間里持續(xù)發(fā)揮作用。例如，可以采用諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。也可以采用在美國專利US4,256,108、US4,166,452和US4,265,874中公開的技術(shù)進(jìn)行包衣，以制成控制釋放的滲透治療片劑。
用于口服的配方也可作成硬明膠囊的形式，其中，活性成分與惰性固體稀釋劑，如碳酯鈣、磷酸鈣或高嶺土混合；或是作成軟膠囊形式，其中，活性成分與水或油性介質(zhì)，如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。
水成懸浮液中含有與適于水成懸浮液生產(chǎn)的賦形劑混合的活性材料。所述賦形劑是懸浮劑，羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯樹膠；分散劑或濕潤劑可以是天然磷脂，如卵磷脂或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂醇的縮合產(chǎn)物，如十七乙烯氧基鯨蠟醇，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇形成的偏酯的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯與由脂肪酸和己糖醇酐形成的偏酯的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯。水成懸浮液也可以含有一種或多種防腐劑，如P-羥基苯甲酸乙酯或丙酯，一種或一種以上著色劑，一種或一種以上香味劑和一種或一種以上甜味劑，如蔗糖或糖精。
油性懸浮液可以通過將活性成分懸浮于植物油中而制成，例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，或是懸浮子礦物油，如液體石蠟中而制成。該油性浮液中可含有增稠劑，如蜂蠟、硬石蠟或十六醇。為了獲得可口的口服制劑，可加入上述甜味劑和香味劑?？梢韵蜻@種組合物中加入抗氧化劑，如抗壞血酸進(jìn)行防腐。
分散粉劑和顆粒，適于加水制成水成懸浮液，使活性成分與分散或濕潤劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合。適用的分散劑或濕潤劑以及懸浮劑在這里加以舉例說明。也可以加入甜味劑、香味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥用組合物也可以是水色油的乳劑形式。油相可以是植物油，如橄欖油或花生油，或礦物油，如液體石蠟，或它們的混合物。適用的乳化劑可以是天然樹膠，如阿拉伯樹膠或黃蓍樹膠，天然磷脂，如大豆，卵磷脂，和由脂防酸與己糖醇酐形成的酯或偏酯，如蘇糖醇單油酸酯和上述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯山梨醇單油酸酸酯。該乳劑中也可以含有甜味劑和香味劑。
糖漿和酏劑可以用甜味劑，如丙三醇、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制而成。這種配方還可以含有潤藥，防腐劑和香味劑及著色劑。
所述藥用組合物可以是無菌、可注射的水性或油性懸浮液。該懸浮液可用上面提到的適當(dāng)分散劑或濕潤劑和懸浮劑按照現(xiàn)有技術(shù)方法配制而成。該無菌可注射的制劑也可以是在無毒、可在腸外使用的稀釋劑或懸浮液中的無菌可注射的溶液或懸浮液，如溶于1，3-丁二醇中的溶液?？刹捎玫馁x形劑和溶劑為水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌的固定油類通常被用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，任何溫和的固定油類均可采用，包括合成單酸甘油酯或甘油二酯。此外，脂肪酸，如油酸可用于制備注射針劑。
式(I)的化合物也可以是用于直腸的栓劑。該組合物可通過將藥物與適當(dāng)?shù)臒o刺激性的賦形劑混合而制成，該賦形劑在常溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，因此，會(huì)在直腸中熔化釋放出藥物。這種材料為可可油和聚乙二醇。
為了局部使用，可采用含有式(I)化合物的乳油、軟膏、胨膠、溶液或懸浮液等。對(duì)這種應(yīng)用目的來說，局部使用包括漱口劑和含漱劑的使用。
在治療上述癥狀時(shí)，每公斤的使用劑量為0.05～140mg(2.5～7g/一個(gè)患者/天)。例如，每公斤體重使用0.01～50mg的該化合物即可有效治療發(fā)炎(0.5mg-3.5g/個(gè)患者/日)。
與載體材料混合制成一次使用劑量的活性成分量依受治宿主和具體使用方式而變化。例如，供人體口服的配方中，活性成分的量可在占組合物總重量的5～95％的范圍內(nèi)變化。劑量單位形式，通常含有1～500mg的活性成分。
不過，應(yīng)當(dāng)理解，任何具體患者的具體劑量取決于多種因素，包括所采用化合物的劑量，年齡、體重、一般健康狀況，性別，用餐時(shí)間，使用途徑，排泄速度、藥物組合和接受治療的具體患者的嚴(yán)重程度。
下面的非限定實(shí)施例1-23說明了式(I)化合物的制備，使用的材料包括下面的中間產(chǎn)物。實(shí)施例A-D說明了試驗(yàn)方法。
在實(shí)施例中，使用了以下縮略語DCC二環(huán)己基碳化二亞胺RT室溫EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺氫氯酸鹽
THF四氫呋喃TNFa腫瘤壞死因子aPMA佛波醇-13-肉豆蔻酰乙酸酯ELISA酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法中間產(chǎn)物1 L-苯丙氨酸N-甲酰胺將DCC(3.02g)加入由L-苯丙氨酸-N-芐基氨基甲酸酯(4.00g)和N-羥基丁二酰亞胺(1.69g)溶于無水THF(35ml)中而組成的溶液中(0℃)。在這一溫度(0℃)下將上述混合攪拌16小時(shí)并通過Celite(硅藻土)過濾。向?yàn)V液中加入甲胺水溶液(40％的含水量，5ml)，并在室溫下攪拌混合物24小時(shí)。在真空中對(duì)反應(yīng)混合物進(jìn)行濃縮，并將粗制材料(6.01g)溶解于乙醇(250ml)中。將10％附著于碳上的鈀在水(約2ml)中的懸浮液加入盛于彈中的乙醇溶液中。在加氫、壓力為724KPa(105psi)的情況下將上述混合物攪拌18小時(shí)。該混合物通過Celite過濾，濾液在真空中蒸發(fā)。殘余物被分配在1N的鹽酸(110ml)和二氯甲烷(50ml)之間。分離不同的層，并用二氯甲烷(50ml)提取水層。用3N的NaOH溶液將水層堿化至pH為14，并用二氯甲烷(3×50ml)進(jìn)行提取。將后一種提取液合并，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，以得到無色、粘稠油狀的標(biāo)題化合物，它在高真空度下固化(2.24g)。
TLC Rf0.15(5％MeOH-CH2Cl2)以相同方法制備中間產(chǎn)物2 L-色氨酸N-甲酰胺由L-色氨酸-N-芐基氨基甲酸酯(50g)制成無色的油狀物(14.3g)
TLC Rt0.30(5％MeOH-CH2Cl2)中間產(chǎn)物3 N-[N-(羰基芐氧)-L-亮氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺在0℃下將中間產(chǎn)物1(1.33g)，L-亮氨酸-N-芐基氨基甲酸酯(1.98g)，N-羥基苯并三唑(1.21g)和EDC(1.57g)放入無水THF(30ml)中共同攪拌24小時(shí)。加入水(10ml)和二氯甲烷(10ml)，并在真空中除去有機(jī)溶劑，將水相分布在稀鹽酸(1N，10ml)和乙酸乙酯(20ml)之間。分離有機(jī)層，并用飽和碳酸氫鹽溶液(8％，20ml)和鹽水(20ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，并蒸發(fā)成不透明的凝膠。將其重新溶解在二氯甲烷中并在真空中蒸發(fā)，得到無色固體產(chǎn)品(2.78g)。
TLC Rf0.60(EtOAc)以同樣的方法制備中間產(chǎn)物4 N-[N-(羰基芐氧)-L-亮氨酰]-L-色氨酸甲酰胺由中間產(chǎn)物2(11.4g)制成白色固體(20g)。
TLC Rf0.46(5％MeOH-CH2Cl2)中間產(chǎn)物5 N-[N-(羰基芐氧)-L-蘇氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺由L-蘇氨酸-N-芐基氨基甲酸酯(4.3g)制成無色油狀物(7，7g)。
TLC Rf0.31(5％MeOH-CH2Cl2)中間產(chǎn)物6 N-(L-亮氨酰)-L-苯丙氨酸甲酰胺將中間產(chǎn)物3(2.78g)溶于乙醇(140ml)中，再加入10％附著在碳上的的鈀(0.5g)(為分散于約3ml水中的漿體)。將懸浮液在氫氣中攪拌16小時(shí)。通過Celite過濾混合物，用二氯甲烷洗滌(20ml)。蒸發(fā)濾液得到半固體狀物，將其溶于1N鹽酸(100ml)，用二氯甲烷(3×50ml)萃取，再用NaOH(3N，50ml)堿化，并用二氯甲烷(3×50ml)提取。合并后一種提取物，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物的無色固體(1.66g)。
TLC Rf0.13(5％MeOH-CH2Cl2)中間產(chǎn)物7 N-(L-亮氨酰)-L-色氨酸甲酰胺用10％附著在碳上的鈀(0.2g)處理溶解在環(huán)己烯(50ml)和乙醇(50ml)中的中間產(chǎn)物4(2g)的溶液。在回流條件下攪拌混合物2小時(shí)。在用Celite過濾之后在真空中除去溶劑，并通過閃式柱色譜純化殘余物(SiO2，10％MeOH，CH2Cl2)，得到吸濕性無色固體(1.05g)。
TLC Rf0.38(10％MeOH-CH2Cl2)以相同方法制備中間產(chǎn)物8 N-(L-蘇氨酰)-L-苯丙氨酸甲酰胺由中間產(chǎn)物5(6.6g)制成白色固體(3.31g)。
TLC Rf0.05(5％MeOH-CH2Cl2)中間產(chǎn)物9乙酰巰基乙酸將鈉(460mg)加入乙醇(20ml)中，然后再向該溶液中加入硫醇乙酸(1.50ml)。5分鐘后，向混合物中加入溴乙酸(2.78g)，并在室溫下攪拌18小時(shí)。用二氯甲烷(60ml)稀釋反應(yīng)混合物，并用Celite過濾。蒸發(fā)濾液，得到淺黃色油狀物。將粗制產(chǎn)物溶于二氯甲烷(10ml)中，再過濾并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物淺黃色油狀物(2.84g)。
’HNMR(200MHz；CDCl3；RefTMS)2.41(s，3H)和3.75(s，2H)中間產(chǎn)物10(RS)-2-溴戊酸在0℃，用固體亞硝酸鈉(8.8g)對(duì)溶于硫酸水溶液(1.25M，130ml)中的D，L-降-纈氨酸(10g)和溴化鉀(35.5g)分批處理1小時(shí)以上。使該溶液回溫到室溫，并攪拌2小時(shí)。用二氯甲烷(2×100ml)提取該混合物，將合并的提取物干燥(MgSO4)并在真空中蒸發(fā)，以得到標(biāo)題中化合物的無色油狀物。
TLC Rf0.60(EtOAc)以相同方法制備中間產(chǎn)物11(RS)-2-溴-3-甲基丁酸由D，L-纈氨酸(10g)制成無色油狀物(11.48g)。
TLC Rf0.54(EtOAc)中間產(chǎn)物12(RS)-2-溴-2-苯乙酸由D，L-苯基甘氨酸(10g)制成淺黃色油狀物(7.24g)。
TLC Rf0.58(EtOAc)中間產(chǎn)物13(RS)-2-溴-3-苯基丙酸由D，L-苯丙氨酸(5g)制成淺黃色油狀物(6.72g)。
TLC Rf0.58(EtOAc)中間產(chǎn)物14(RS)-溴-4-苯基丁酸由D，L-高-苯丙氨酸(970mg)制成白色固體(1.0g)。
TLC Rf0.13(EtOAc)中間產(chǎn)物15(RS)-2-(乙?；虼?戊酸用硫醇乙酸鈉(2.1g)處理中間產(chǎn)物10(3.0g)在乙醇(50ml)中的溶液，并在室溫下攪拌混合物過夜。將該溶液在真空中蒸發(fā)，并將殘余物分布在水(30ml)和二氯甲烷(30ml)之間。；用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)并在真空中蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(2.23g)的淺黃色油狀物。
TLC Rf0.55(EtOAc)以相同方法制備中間產(chǎn)物16(RS)-2-(乙?；虼?丙酸由(RS)-2-溴丙酸(1.63g)制成黃色油狀物(1.38g)。
TLC Rf0.4(5％EtOH-CHCl3)中間產(chǎn)物17(RS)-2-(乙?；虼?-3-甲基丁酸由中間產(chǎn)物11(5g)制成淺黃色油狀物(4.1g)。
TLC Rf0.5(EtOAc)中間產(chǎn)物18(RS)-2-(乙?；虼?-2-苯基乙酸由中間產(chǎn)物12(3.0g)制成黃色油狀物(1.64g)TLC Rf0.5(EtOAc)中間產(chǎn)物19(RS)-2-(乙?；虼?-3-苯基丙酸由中間產(chǎn)物13(2.0g)制成黃色油狀物(1.41g)。
TLC Rf0.80(EtOAc)中間產(chǎn)物20(RS)-2-(乙?；虼?4-苯基丁酸由中間產(chǎn)物14(860mg)制成棕黃色油狀物(340mg)。
TLC Rf0.35(EtOAc)實(shí)施例1 N-[N-(乙?；鶐€乙?；?-L-亮氨酰]-L-苯丙氨酸N-甲酰胺將中間產(chǎn)物6(113mg)和中間產(chǎn)物9(52mg)溶于無水THF(10ml)中加進(jìn)N-羥基苯丙三唑(63mg)，接著再加入EDC(82mg)，并在0℃將該溶液攪拌16小時(shí)。在真空中濃縮反應(yīng)混合物，并將殘余物分布在1N鹽酸(20ml)和乙酸乙酯(20ml)。將各層分離，并用飽和的碳酸氫鈉溶液(2×20ml)和鹽水(20ml)提取有機(jī)相，干燥(Mg-SO4)，蒸發(fā)得到無色固體狀粗制產(chǎn)物(146mg)。通過閃式柱層析(8×1.5cm)EtOAc為洗脫液，用CH2Cl2裝柱)得到標(biāo)題化合物的無色固體110mg)。TLC Rf0.35(EtOAc)’H NMR(200MHz；CDCl3；Ref TMS)0.90(m，6H)，1.3-1.8(m，3H)，2.4(s，3H)，2.7(d，3H)，2.9-3.3(m，2H)，3.5(S，2H)，4.2(m，1H)，4.6(m，1H)，6.1(m，1H)，6.45(br.d，1H)，6.6(br.d，1H)，7.1-7.4(m，5H)以類似方法制備實(shí)施例2(RS)-2-(乙?；虼?戊?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由中間產(chǎn)物15(300mg)和中間產(chǎn)物6(500mg)制成白色固體(540mg)。
TLC Rf0.63(5％MeOH-CH2Cl2)C23H35N3O4S[449.6]；[MH+]＝450；[MNa+]＝472。
實(shí)施例3(RS)-2-(乙酰基硫代)丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由中間產(chǎn)物16(180mg)和中間產(chǎn)物6(355mg)制成白色固體(314mg)TLC Rf0.33(EtOAc)C21H31N3O4S[421.6]；[MH+]＝422
實(shí)施例4(RS)-2-(乙酰基硫代)-3-甲基丁酰-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酰胺由中間產(chǎn)物17(330mg)和中間產(chǎn)物6(553mg)在從乙醚中再結(jié)晶以后制成白色固體570mg)。
TLC Rf0.36，0.40(非對(duì)映體)(EtOAc)C23H35N3O4S[449.6]；[MH+]＝450；[MNa+]＝47.2
實(shí)施例5(RS)-2-(乙酰基硫代)-2-苯乙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由中間產(chǎn)物18(360mg)和中間產(chǎn)物6(500mg)制成白色固體(660mg)TLC Rf0.37(5％MeOH-CH2Cl2)C26H33N3O4S[483.6]；[MH+]＝484，[MNa+]＝496實(shí)施例6(RS)-2-(乙酰基硫代)-3-苯丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由中間產(chǎn)物19(420mg)和中間產(chǎn)物6(553mg)在從乙醚中再結(jié)晶以后制成白色固體(410mg)。
TLC Rf0.36，0.43(非對(duì)映體)(EtOAc)C27H35N3O4S[497.7]；[MH+]＝498；[MNa+]＝520實(shí)施例7(RS)-2-(乙?；虼?-4-苯丁?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由中間產(chǎn)物20(350mg)和中間產(chǎn)物6(500mg)制成白色固體(640mg)TLC Rf0.39(5％MeOH-CH2Cl2)
C28H37N3O4S[511.7]；[MH+]＝512；[MNa+]＝534實(shí)施例8 N-[N-(乙酰基巰乙?；?-L-蘇氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺由中間產(chǎn)物9(0.48g)和中間產(chǎn)物8(1.0g)制成白色固體(0.83g)TLC Rf0.35(7％MeOH-CH2Cl2)1H NMR(200MHzCDCl3+CD3ODRef TMS).1.1(d，3H)，2.4(s，3H)，2.7(d，3H)，3.1(m，2H)，3.6(d，2H)，4.2(m，2H)，4.6(m，1H)，7.2(m，5H).
實(shí)施例9 N-[N-(乙酰基巰乙?；?-L-亮氨酰]-L-色氨酸甲酰胺由中間產(chǎn)物9(220mg)和中間產(chǎn)物7(500mg)制成白色固體(590mg)TLC Rf0.22(EtOAc)C22H30N4O4S[446.6]；[MH+]＝447＝實(shí)施例10 N-[N-(巰乙?；?-L-苯丙氨酸甲酰胺在室溫下，在氮?dú)庵袑?shí)施例1的化合物(16mg)與飽和氫氧化銨溶液(200ml)和甲醇(400ml)攪拌2小時(shí)。用稀鹽酸(2N)將所得溶液酸化，并用二氯甲烷提取該混合物(3×40ml)。將合并的有機(jī)部分干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，得到無色固體狀粗制產(chǎn)物(14.2mg)。通過閃式柱層析(1.5×10cm；以EtOAc為洗脫液；用CH2Cl2裝柱)得到標(biāo)題化合物的無色固體(6.0mg)。
TLC Rf0.23(EtOAc).
1H NMR(200 MHz；CDCl3；Ref TMS)0.90(d，3H)，0.93(d，3H)，1.48-1.71(m，3H)，1.86(t，1H)，2.74(d，3H)3.02-3.17(m，4H)，4.40(m，1H)4.62(q，1H)，6.03(br m，1H)，6.82(br d，1H)，6.99(br d，1H)，and 7.12-7.37(m，5H).
以相同方法制備實(shí)施例11(RS)-3-巰戊?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由實(shí)施例2的產(chǎn)物(200mg)制成白色固體(180mg)TLC Rf0.37(5％MeOH-CH2Cl2)C21H33N3O4S[407.6]；[MH+]＝408；[MNa+]＝430＝實(shí)施例12(RS)-2-巰基-3-甲基丁酰-L-亮氨酰-苯丙氨酸N-甲酰胺由實(shí)施例4的產(chǎn)物(200mg)制成白色固體(190mg)。
TLC Rf0.41(5％MeOH-CH2Cl2)C21H33N3O3S[407.6]；[MH+]＝408，[MNa+]＝430實(shí)施例13(RS)-2-巰基-苯乙酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由實(shí)施例5的產(chǎn)物(200mg)制成白色固體(173mg)。
TLC Rf0.28(5％MeOH-CH2Cl2)C24H31N3O3S[441.6]；[MH+]＝442，[MNa+]＝464實(shí)施例14(RS)-2-巰基-3-苯丙酰基-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由實(shí)施例6的產(chǎn)物(202mg)制成白色固體(185mg)
TLC Rf0.28(5％MeOH-CH2Cl2)C25H33N3O3S[455.6]；[MH+]＝456，實(shí)施例15(RS)-2-巰基-4-苯丁酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺由實(shí)施例7的化合物(150mg)制成白色固體(138mg)TLC Rf0.20(5％MeOH-CH2Cl2)C26H35N3O3S[469.6]；[MH+]＝470，[MNa+]＝492實(shí)施例16 N-[N-(巰乙?；?-L-亮氨酰]-L-色氨酸甲酰胺由實(shí)施例9的產(chǎn)物(120mg)制成白色固體(100mg)。
TLC Rf0.12(5％MeOH-CH2Cl2)C20H38N3O3S[390.5]；[MH+]＝391，實(shí)施例17 N-[N-(巰乙?；?-L-蘇氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺由實(shí)施例8的產(chǎn)物(0.3g)制成白色固體(0.09g)TLC Rf0.09(5％MeOH-CH2Cl2)1H NMR(200MHz.DMSO)1.0(d，3H)，2.5(d，3H)，2.8(m，3H)，3.0(d.d，1H)，3.2(m，2H)，3.9(m，1H)，4.2(d.d，1H)，4.4(m，1H)，5.0(d，1H)，7.2(m，5H)，7.8(m，1H)，8.0(m，2H)實(shí)施例18 (RS)-2-巰丙酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺用實(shí)施例3的產(chǎn)物(56mg，0.133mmol)處理溶于甲醇(1.5ml)中的甲醇鈉(10mg)溶液，并將該混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。在真空中蒸發(fā)溶劑，并將殘余物分布在二氯甲烷(15ml)和2M鹽酸之間(10ml)。用二氯甲烷(10ml)對(duì)含水部分進(jìn)行再提純，將合并的提取物干燥(NaSO4)，并在真空中蒸發(fā)得到白色固體。通過柱層析進(jìn)行提純(SiO2，3％甲醇，二氯甲烷)得到標(biāo)題化合物(13mg)的白色固體。
C19H29N3O3S[379.5]；[MH+]＝380TLC Rf0.32(5％MeOH-CH2Cl2)實(shí)施例19-23可用與上述方法類似的方法，制備式(I)的另外五種化合物，其中R2＝R4＝R8＝H，R5＝CH3，R6＝……芐基，R7＝CH3CO，n＝0以及R1＝CH2SCH3(Ex.19)；R1＝CH2SOCH3(Ex.20)；R1＝CH2SO2CH3(Ex.21)；R1＝CH2OH(Ex.22)；R1＝CH2CH2OH(Ex.23).
實(shí)施例A 膠原酶抑制活性通過Cawston和Barret的方法(Anal.Biochem.，99340-345，1979)測(cè)定通式(I)的化合物作為膠原酶抑制劑的效力，將1mM的受試抑制劑溶液或其稀釋液與膠原和膠原酶一起在37℃溫度下溫育16小時(shí)(用50mM Tris緩沖，pH7.6，含有5mM CaCl2，0.05％Brij35，60mM NaCl和0.02％NaN3)。所述膠原是通過Cawston和Murpny的方法(Methods in Enzymology 80711，1981)制成的H3或C14膠原。放射性標(biāo)記的選擇，不會(huì)改變膠原酶降解膠原基質(zhì)的活性。對(duì)樣品進(jìn)行離心，沉淀未被消化的膠原，并取出放射性上清液的一個(gè)等分試樣在閃爍計(jì)數(shù)器上測(cè)量，以測(cè)定水解度。將存在1mM抑制劑或其稀釋液時(shí)膠原酶的活性與無抑制劑的對(duì)照的活性進(jìn)行比較，結(jié)果為抑制劑的濃度能產(chǎn)生對(duì)膠原酶50％的抑制作用(IC50)。
實(shí)施例B基質(zhì)溶素抑制活性通過Cawston等人的方法(Biochem.J.195159-165，1981)測(cè)定通式(I)的化合物作為基質(zhì)溶素的抑制劑的效力，其中，將1mM受試抑制劑溶液或其稀釋液與基質(zhì)溶素和14C-乙?；业鞍滓黄鹪?7℃溫度下溫育16小時(shí)(用50mM Tris緩沖，pH7.6，含有5mMCa-Cl2，0.05％Brij 35，和0.02％NaN3)。所述酪蛋白是按照上述的Cawston等人的方法14乙?；?。將存在1mM抑制劑時(shí)的基質(zhì)溶素活性與無抑制劑的對(duì)照中的活性進(jìn)行比較，結(jié)果為抑制劑的濃度能對(duì)基質(zhì)溶素產(chǎn)生50％的抑制作用(IC50)。
實(shí)施例C明膠酶抑制活性通過Harris和Keone的方法(Biochem.Biophys.Acta 258566-576，1972)測(cè)定通式(I)的化合物作為明膠酶抑制劑的效力，其中，將1mM的受試抑制劑溶液或其稀釋液與明膠酶和加熱變性的3H或14C乙?；z原一起在37℃溫育16小時(shí)(用50mM Tris緩沖，pH76，含有5mM CaCl2，0.05％Brij35和0.02％NaN3)。上述3H或14C明膠是按照上述Cawston和Murphy的方法，通過在60℃溫育30分鐘使3H或14C膠原變性而制得的。通過加入三氯乙酸并離心使未被消化的明膠沉淀。將存在1mM抑制劑或其稀釋液時(shí)的明膠酶活性與無抑制劑的對(duì)照的活性進(jìn)行比較，結(jié)果為抑制劑的濃度能對(duì)明膠酶產(chǎn)生50％的抑制作用(IC50)。
實(shí)施例D抑制TNFa的產(chǎn)生用以下方法測(cè)定通式的化合物作為抑制TNFa產(chǎn)生的抑制劑的效力。將1mM受試抑制劑溶液或其稀釋液與懸浮于RPMI 1640培養(yǎng)基中的密度為2×106/ml的U937細(xì)胞(人體淋巴組織瘤)一起在5％的CO2氣體中在37℃溫度下溫育，并以50nM的PMA最終濃度進(jìn)行刺激。18小時(shí)以后，用從商業(yè)渠道獲得的DlISA試劑盒(R&D Systems)分析TNFa的含量。將存在1mM抑制劑或其稀釋液時(shí)的活性與無抑制劑的對(duì)照的活性進(jìn)行比較，結(jié)果為抑制劑的濃度能抑制50％的TNFa的產(chǎn)生。
在實(shí)施例A-D中均檢測(cè)到本發(fā)明化合物的活性。

權(quán)利要求書按照條約第19條的修改1.一種如通式(I)的化合物 其特征在于R1為C2-6烷基，C2-6烯烴基、芳基、(C1-6烷基)芳基或C1-6烷基-AR9，其中A是O，NR9或S(O)m，其中m＝0-2，而該R9或每個(gè)R9為H，C1-4烷基、芳基或(C1-4烷基)芳基；R5是H或C1-6烷基；R4為H或用氨基(NH2)選擇性取代的C1-6烷基，芳氨基，保護(hù)氨基，芳基，二(C1-6烷基)氨基，單(C1-6烷基)氨基，CO2H，保護(hù)羧基，氨甲?；?，單(C1-6烷基)氨甲酰基或二(C1-6烷基)氨甲?；?，而R5為H或C1-6烷基，或NR4R5是吡咯烷基，哌啶子基或嗎啉代；R6是選擇性取代的C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯烴基，C1-6烷基，芐基，(C1-6烷氧基)芐基，芐氧基芐基或3-吲哚基甲基；AlK是C1-6烷基或C2-6烯烴基，n＝0或1R7是H或R10CO，其中R10是C1-4烷基，(C1-4烷基)芳基，C3-6環(huán)烷基，(C3-6環(huán)烷基)C1-4烷基，C2-6烯烴基或(C2-6烯烴基)芳基；以及
R8是H，C1-4烷基，(C1-4烷基)芳基或芳基；芳基為選擇性取代的苯基或萘基；選擇性的取代基選自鹵素，CF3，C1-6烷基，烷氧基和苯基；或它的鹽、溶劑化物或水合物。
2.如權(quán)利要求1的化合物，其特征在于R1是烷基；烯烴基；芳基或烷芳基；而R7和R8分別是H。
3.如權(quán)利要求1的化合物，它選自N-[N-(巰乙?；?-L-亮氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺N-(乙酰巰酰基)-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?戊酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?丙酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-3-甲基丁?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-2-苯乙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙酰基硫代)-3-苯丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-4-苯丁酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺N-(乙?；鶐€?；?-L-蘇氨酰-L-苯丙氨酸甲酰胺N-(乙?；鶐€酰基)-L-亮氨酰-L-色氨酸甲酰胺(RS)-2-巰戊?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-3-甲基丁?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-2-苯乙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-3-苯丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-4-苯丁酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺N-[N-(巰乙?；?-L-蘇氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺和N-[N-(巰乙酰基)-L-亮氨酰]-L-色氨酸甲酰胺4.一種用于治療的藥用組合物，包括權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的化合物和一種生理上可以接受的稀釋劑或載體。
5.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述化合物的用途，將其用于制造用來預(yù)防或治療與基質(zhì)金屬蛋白酶或TNF活性有關(guān)的癥狀的藥品。
6.權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于所述癥狀包括發(fā)炎，發(fā)熱，心血管疾病，出血，血凝固和急性相反應(yīng)，惡病質(zhì)和厭食，急性感染，休克，移植物對(duì)宿主反應(yīng)，自身免疫疾病，瘧疾，再輸注損傷，腦膜炎，牛皮癬，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化和腫瘤。
權(quán)利要求
1.一種如通式(I)的化合物 其特征在于R1為C1-6烷基，C2-6烯烴基、芳基、(C1-6烷基)芳基或C1-6烷基-AR9，其中A是O，NR9或S(O)m，其中m＝0-2，而該R9或每個(gè)R9為H，C1-4烷基、芳基或(C1-4烷基)芳基；R2是H或C1-6烷基；R4為H或用氨基(NH2)選擇性取代的C1-6烷基，芳氨基，保護(hù)氨基，芳基，二(C1-6烷基)氨基，單(C1-6烷基)氨基，CO2H，保護(hù)羧基，氨甲?；瑔?C1-6烷基)氨甲?；蚨?C1-6烷基)氨甲?；?，而R5為H或C1-6烷基，或NR4R5是吡咯烷基，哌啶子基或嗎啉代；R6是選擇性取代的C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯烴基，C1-6烷基，芐基，(C1-6烷氧基)芐基，芐氧基芐基或3-吲哚基甲基；AlK是C1-6烷基或C2-6烯烴基，n＝0或1；R7是H或R10CO，其中R10是C1-4烷基，(C1-4烷基)芳基，C3-6環(huán)烷基，(C3-6環(huán)烷基)C1-4烷基，C2-6烯烴基或(C2-6烯烴基)芳基；以及R8是H，C1-4烷基，(C1-4烷基)芳基或芳基；或它的鹽、溶劑化物或水合物。
2.如權(quán)利要求1的化合物，其特征在于R1是烷基；烯烴基；芳基或烷芳基；而R7和R8分別是H。
3.如權(quán)利要求1的化合物，它選自N-[N-(巰乙酰基)-L-亮氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺N-(乙酰巰?；?-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?戊酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙酰基硫代)丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙酰基硫代)-3-甲基丁?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-2-苯乙酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-3-苯丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-(乙?；虼?-4-苯丁?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺N-(乙酰基巰?；?-L-蘇氨酰-L-苯丙氨酸甲酰胺N-(乙?；鶐€?；?-L-亮氨酰-L-色氨酸甲酰胺(RS)-2-巰戊酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-3-甲基丁酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-2-苯乙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-3-苯丙?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺(RS)-2-巰基-4-苯丁?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酸N-甲酰胺N-[N-(巰乙?；?-L-蘇氨酰]-L-苯丙氨酸甲酰胺和N-[N-(巰乙酰基)-L-亮氨酰]-L-色氨酸甲酰胺
4.一種用于治療的藥用組合物，包括權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的化合物和一種生理上可以接受的稀釋劑或載體。
5.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述化合物的用途，將其用于制造用來預(yù)防或治療與基質(zhì)金屬蛋白酶或TNF活性有關(guān)的癥狀的藥品。
6.權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于所述癥狀包括發(fā)炎，發(fā)熱，心血管疾病，出血，血凝固和急性相反應(yīng)，惡病質(zhì)和厭食，急性感染，休克，移植物對(duì)宿主反應(yīng)，自身免疫疾病，瘧疾，再輸注損傷，腦膜炎，牛皮癬，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化和腫瘤。
全文摘要
一種如式(I)的化合物，其中R
文檔編號(hào)A61P25/00GK1134705SQ9419405
公開日1996年10月30日 申請(qǐng)日期1994年11月10日 優(yōu)先權(quán)日1993年11月10日
發(fā)明者J·蒙塔納, J·迪肯斯, D·A·歐文, A·D·巴克斯特 申請(qǐng)人:奇羅斯恩有限公司