專利名稱：新型驅(qū)鎘藥物及它們的合成和在醫(yī)學方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一系列新型驅(qū)鎘藥物及它們的合成和在醫(yī)學上的應(yīng)用。
鎘對人體的危害具有特別的嚴重性，原因是進入人體的鎘最終大多沉積在腎中，代謝極為緩慢，即使長期接觸濃度極底的鎘，也可因在腎中過量積累我產(chǎn)生腎損傷(C，G，Elinder et al.，Eaviror，Res.，1981，26，1；M，Webb，Brit，Med.Bull.，1975，3(3)，246)。常用的排重金屬藥物主要有巰基化合物雖然對鎘有較強的親和力，但由于形成的低分子復合物經(jīng)腎小球濾出時，可被腎小管重吸收，導致向腎小管細胞富集鎘，使腎臟毒性加劇。這樣，巰基化合物列為鎘的禁用藥物(W.Ran et al.，Biological Trace Element Res.，1989，21，227；M.P.Kojima et al.，Toxicol.Appl.pharmacol.，1989，98，39)。氨羧型絡(luò)合劑盡管能與鎘形成較為穩(wěn)定的復合物，毒性也不大，但在體內(nèi)的選擇性差，且不易進入細胞內(nèi)，對清除腎臟中的鎘沉積無明顯作用(L.Friberg et al.，Handbook on the Toxicology of Metals，2nd ed.Vol，IISpecial Metals，P.130-184，New York；Elservier，1986；S.G.Jones et al.，Chem.Res.Toxicol.1988，1(4)，234)。鎘中毒治療一直是臨床中存在的棘手問題之一，研究有效的驅(qū)鎘藥物是新藥研究的熱點之一。
近年的文獻報道二硫代羧基甲酸鹽類具有較強的驅(qū)鎘能力并顯示腎臟保護功能，是防治鎘中毒的潛在藥物(G.R.Gale，Amm Chin.Lab.Sci.，1981，11，476；L.R.J.Cantilena，et al.，Toxicol.Appl，Pharment，1981，58，452)。往二硫代羧基甲酸鹽的結(jié)構(gòu)中引入葡萄糖分子，不僅毒性可以大幅度降低，而且驅(qū)鎘能力可以明顯增強，不過毒性也相應(yīng)地增大。這類化合物中的N-4-甲氧芐基-D-葡萄糖胺二硫代甲酸鈉(MeO)被公認為最優(yōu)秀的驅(qū)鎘劑(G.R.Galeet al.，Toxicol.Letter，1989，48，105)。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，在二硫代羧酸基甲酸鹽的結(jié)構(gòu)中同時引入葡萄糖和氨基酸，獲得的化合物不僅驅(qū)鎘能力強，而且選擇性高，毒性低。
本發(fā)明的根本目標在于在二硫代羧酸基甲酸鹽的結(jié)構(gòu)中同時引入葡萄糖和氨基酸，提供一類新型驅(qū)鎘藥物，與現(xiàn)有的驅(qū)鎘藥物不同，這類新型驅(qū)鎘藥物的結(jié)構(gòu)中由于含有葡萄糖和氨基酸，因而不僅驅(qū)鎘能力強，而且選擇性高，毒性低。
本發(fā)明涉及通式(1)的化合物 其中R為H，CH2，CH2Ph，CH(OH)CH2，CH2SH。本發(fā)明按照

圖1的路線合成了通式(1)的新化合物。 圖1.合成路線其中R為H，CH2，CH2Ph，CH(OH)CH2，CH2SH。
本發(fā)明對通式(1)的化合物進行了動物實驗，結(jié)果表明經(jīng)本發(fā)明的化合物治療大鼠腎中鎘含量明顯低于對照組動物(P＜0.01-0.001)，其中有的化合物比文獻報道的MeOBGDTC(MeO)還要好。經(jīng)本發(fā)明的化合物治療大鼠血液中鎘含量明顯高于對照組，提示在本發(fā)明的化合物的影響下，體內(nèi)各組織中的“結(jié)合鎘”在藥物治療下重新調(diào)動；本發(fā)明的化合物可以選擇性地作用于鎘，對鋅、銅、鐵、錳、鈣、銣無影響，本發(fā)明的化合物的LD50為3.7g～4.8g/kg，按WHO急性毒性分級標準，本發(fā)明的化合物屬于低毒化合物。
本發(fā)明的化合物可以具體化為 N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-甘氨酸鈉 N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-丙氨酸鈉 N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-苯丙氨酸鈉 N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-蘇氨酸鈉 N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-半胱氨酸鈉這類新型化合物的結(jié)構(gòu)特點是分子中同時含有葡萄糖和氨基酸，與現(xiàn)有的驅(qū)鎘藥物比，不僅驅(qū)鎘能力強，而且選擇性高，毒性低。
下面的實施例僅作為例證對本發(fā)明作進一步的說明，不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。制備實施例1，α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基乙酸鈉的合成2.25g(30mmol)甘氨酸，1.20g(30mmol)氫氧化鈉溶于3ml蒸餾水中，攪拌下加入5.94g(30mmol)α-D-(+)葡萄糖。氮氣保護下，于60℃反應(yīng)5小時，冷卻后得糖漿樣產(chǎn)品。該產(chǎn)品不進行純化，直接用于制備實施例6。FAB-MS(m/e)260(M+H]+。制備實施例2，α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基丙酸鈉的合成2.67g(30mmol)L-丙氨酸，1.20g(30mmol)氫氧化鈉，溶于3ml蒸餾水中，攪拌下加入5.94g(30mmol)α-D-(+)葡萄糖。氮氣保護下，于60℃反應(yīng)5小時，冷卻后得糖漿樣產(chǎn)品。該產(chǎn)品不進行純化，直接用于制備實施例7。FAB-MS(m/e)274[M+H]+。制備實施例3，α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基-α-芐基乙酸鈉的合成4.95g(30mmol)L-苯丙氨酸，1.20g(30mmol)氫氧化鈉，溶于3ml蒸餾水中，攪拌下加入5.94g(30mmol)α-D-(+)葡萄糖。氮氣保護下，于60℃反應(yīng)5小時，冷卻后得糖漿樣產(chǎn)品。該產(chǎn)品不進行純化，直接用于制備實施例8。FAB-MS(m/e)350[M+H]+。制備實施例4，α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基-β-羥基丁酸鈉的合成3.57g(30mmol)L-蘇氨酸，1.20g(30mmol)氫氧化鈉，溶于3ml蒸餾水中，攪拌下加入5.94g(30mmol)α-D-(+)葡萄糖。氮氣保護下，于60℃反應(yīng)5小時，冷卻后得糖漿樣產(chǎn)品。該產(chǎn)品不進行純化，直接用于制備實施例9。FAB-MS(m/e)304[M+H]+。制備實施例5，α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基-β-巰基丙酸鈉的合成3.63g(30mmol)L-半胱氨酸，1.20g(30mmol)氫氧化鈉，溶于3ml蒸餾水中，攪拌下加入5.94g(30mmol)α-D-(+)葡萄糖。氮氣保護下，于60℃反應(yīng)5小時，冷卻后得糖漿樣產(chǎn)品。該產(chǎn)品不進行純化，直接用于制備實施例10。FAB-MS(m/e)306[M+H]+。制備實施例6，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)甘氨酸的合成將制備實施例1制備的α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基乙酸鈉的水溶液于室溫攪拌下，分批加入NaBH4固體共計3g，室溫反應(yīng)5晝夜。反應(yīng)完畢后，于0℃攪拌下滴加濃鹽酸酸化至PH2，減壓蒸去部分水后，加入少量甲醇，使得無機鹽充分析出。濾除析出的無機鹽，濾液中加入無水乙醇，反復重結(jié)晶后得產(chǎn)品4.30g，與制備實施例1兩步的總收率為60％。mp.182～183℃；FAB-MS(m/e)，240[M+1]+；1HNMR(D2O，δ)，3.05～3.18(dd，2H)，3.63(m，1H)，3.68(dd，1H)，3.99(m，1H)，3.68(dd，1H)，3.52(m，2H)，3.54(d，2H)；IR(KBr，cm-1)，3222，3020，2926，1617，1563，1467，1377，1245，1145，1122，1092，1059，1037 Anal.Calcd for C8H17N1O7，C40.17，H7.16，N5.86，F(xiàn)oundC40.37，H6.90，N5.64。制備實施例7，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-L-丙氨酸的合成將制備實施例2制備的α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基丙酸鈉的水溶液于室溫攪拌下，分批加入NaBH4固體共計3g，室溫反應(yīng)5晝夜。反應(yīng)完畢后，于0℃攪拌下滴加濃鹽酸酸化至PH2，減壓蒸去部分水后，加入少量甲醇，使得無機鹽充分析出。濾除析出的無機鹽，濾液中加入無水乙醇，反復重結(jié)晶后得產(chǎn)品4.33g，與制備實施例2兩步的總收率為57％，mp，201～203℃；FAB-MS(m/e)，254[M+1]+；1HNMR(D2O，δ)1.37(d，3H)，3.03～3.14(dd，2H)，3.62(m，1H)，3.70(dd，1H)，3.97(m，1H)，3.70(dd，1H)，3.52(m，2H)，3.61(q，1H)；IR(KBr，cm-1)，3410，3270，2972，2940，1903，1821，1585，1479，1421，1396，1367，1287，1267，1146，1131，1014，1003.Anal.Calcd for C9H19N1O7C42.68，H7.56，N5.53；Found C42.39，H7.33，N5.55。制備實施例8，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-L-苯丙氨酸的合成將制備實施例3制備的α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基-α-芐基乙酸鈉的水溶液于室溫攪拌下，分批加入NaBH4固體共計3g，室溫反應(yīng)5晝夜。反應(yīng)完畢后，于0℃攪拌下滴加濃鹽酸酸化至PH2，減壓蒸去部分水后，加入少量甲醇，使得無機鹽充分析出。濾除析出的無機鹽，濾液中加入無水乙醇，反復重結(jié)晶后得產(chǎn)品3.75g，與制備實施例3兩步的總收率為38％；mp.213-215℃；FAB-MS(m/e)，330[M+1]+；1HNMR(D2O，δ)，2.95～3.05(dd，2H)，3.58(m，1H)，3.66(dd，1H)，3.93(m，1H)，3.66(dd，1H)，3.50(m，2H)，3.82(t，1H)，3.10(d，2H)，7.15～7.30(5H)；IR(KBr，cm-1)，3361，3105，3025，2922，2655，1617，1491，1430，1371，1297，1249，1218，1122，1081，1043.Anal.Calcd for C15H22N1O7.1/2HCl，C51.83，H6.82，N4.03；Found C52.20，H6.97，N3.99。制備實施例9，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-L-蘇氨酸的合成將制備實施例4制備的α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基-β-羥基-β基乙酸鈉的水溶液于室溫攪拌下，分批加入NaBH4固體共計3g，室溫反應(yīng)5晝夜。反應(yīng)完畢后，于0℃攪拌下滴加濃鹽酸酸化至PH2，減壓蒸去部分水后，加入少量甲醇，使得無機鹽充分析出。濾除析出的無機鹽，濾液中加入無水乙醇，反復重結(jié)晶后得產(chǎn)品4.33g，與制備實施例4兩步的總收率為51％；mp219-221℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)，284[M+1]+；1HNMR(D2O，δ)，1.15(d，3H)，2.98～3.10(dd，2H)，3.30(d，1H)，3.44(m，2H)，3.54(m，1H)，3.62(dd，1H)，3.62(dd，1H)，3.88(m，1H)，3.95(m，1H)；IR(KBr，cm-1)，3383，3250，2982，2944，15701446，1391，1325，1303，1208，1133，1109，1057，1035；Anal.Calcd forC10H21N1O8，C42.38，H7.47，N4.95；Found C42.35，H7.05，N4.74。制備實施例10，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-L-半胱氨酸的合成將制備實施例5制備的α-(N-2，3，4，5，6-五羥基己基)亞氨基-β-巰基-β基乙酸鈉的水溶液于室溫攪拌下，分批加入NaBH4固體共計3g，室溫反應(yīng)5晝夜。反應(yīng)完畢后，于0℃攪拌下滴加濃鹽酸酸化至PH2，減壓蒸去部分水后，加入少量甲醇，使得無機鹽充分析出。濾除析出的無機鹽，濾液中加入無水乙醇，反復重結(jié)晶后得產(chǎn)品2.99g，與制備實施例5兩步的總收率為35％；mp.197-199℃；FAB-MS(m/e)，286[M+1]+；1HNMR(D2O，δ)，2.80～2.94(dd，2H)，3.06(dd，ZH)，3.54(m，1H)，3.41(m，2H)，3.60(dd，1H)，3.60(dd，1H)，3.72(t，1H)，，3.90(m，1H)，IR(KBr，cm-1)3271，2932，1603 1565，1414，1388，1350，1290，1131，1082，1036；Anal.Calcd for C9H19N1O7S1)C，37.89H，6.71 N，4.91；Found C，37.69 H，6.43 N，4.91。制備實施例11，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-甘氨酸鈉的合成N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)甘氨酸3.0g(12.6mmol)，氫氧化鈉0.50g(12.6mmol)溶于10ml蒸餾水中，0℃攪拌下，加入1.9g(25.0mmol)二硫化碳和10ml二氧六環(huán)，并在氫氣保護下，激烈攪拌。滴加0.50g(12.6mmol)氫氧化鈉水溶液。2小時后溫度回升至室溫，反應(yīng)過夜。次日減壓抽去殘余的二硫化碳及二氧六環(huán)，水溶液冷凍干燥后得粗品，粗品在95％乙醇中重結(jié)晶后得產(chǎn)品4.07g(90％)；mp.100～102℃(dec)；FAB-MS(m/e)，358[M-1]-；IR(KBr，cm-1)，3408，2960，1588，1460，1377，1209，1169，1055。制備實施例12，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-丙氨酸鈉的合成N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-L-丙氨酸3.19g(12.6mmol)，氫氧化鈉0.50g(12.6mmol)溶于10ml蒸餾水中，0℃攪拌下，加入1.9g(25.0mmol)二硫化碳和10ml二氧六環(huán)，并在氫氣保護下，激烈攪拌。滴加0.50g(12.6mmol)氫氧化鈉水溶液。2小時后溫度回升至室溫，反應(yīng)過夜。次日減壓抽去殘余的二硫化碳及二氧六環(huán)，水溶液冷凍干燥后得粗品，粗品在95％乙醇中重結(jié)晶后得產(chǎn)品4.23g(90％)；mp.103～105℃(dec)；FAB-MS(m/e)，372[M-1]-；350[M-23]-；IR(KBr，cm-1)，3378，2923，1584，1389，1254，1171，1076。制備實施例13，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-苯丙氨酸鈉的合成N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-L-苯丙氨酸4.15g(12.6mmol)，氫氧化鈉0.50g(12.6mmol)溶于10ml蒸餾水中，0℃攪拌下，加入1.9g(25.0mmol)二硫化碳和10ml二氧六環(huán)，并在氫氣保護下，激烈攪拌。滴加0.50g(12.6mmol)氫氧化鈉水溶液。2小時后溫度回升至室溫，反應(yīng)過夜。次日減壓抽去殘余的二硫化碳及二氧六環(huán)，水溶液冷凍干燥后得粗品，粗品在95％乙醇中重結(jié)晶后得產(chǎn)品4.53g(80％)；mp.145～147℃(dec)；FAB-MS(m/e)，448[M-1]-，426[M-23]-；IR(KBr，cm-1)，3350，2925，1588，1449，1381，1225，1160，1079。制備實施例14，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-蘇氨酸鈉的合成N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-L-蘇氨酸3.57g(12.6mmol)，氫氧化鈉0.50g(12.6mmol)溶于10ml蒸餾水中，0℃攪拌下，加入1.9g(25.0mmol)二硫化碳和10ml二氧六環(huán)，并在氫氣保護下，激烈攪拌。滴加0.50g(12.6mmol)氫氧化鈉水溶液。2小時后溫度回升至室溫，反應(yīng)過夜。次日減壓抽去殘余的二硫化碳及二氧六環(huán)，水溶液冷凍干燥后得粗品，粗品在95％乙醇中重結(jié)晶后得產(chǎn)品4.42g(87％)；mp.78～81℃(dec)；FAB-MS(m/e)，402[M-1]-，380[M-23]-；IR(KBr，cm-1)，3334，2923，1588，1388，1227，1079。制備實施例15，N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-半胱氨酸鈉的合成N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-L-半胱氨酸3.59g(12.6mmol)，氫氧化鈉0.50g(12.6mmol)溶于10ml蒸餾水中，0℃攪拌下，加入1.9g(25.0mol)二硫化碳和10ml二氧六環(huán)，并在氫氣保護下，激烈攪拌。滴加0.50g(12.6mmol)氫氧化鈉水溶液。2小時后溫度回升至室溫，反應(yīng)過夜。次日減壓抽去殘余的二硫化碳及二氧六環(huán)，水溶液冷凍干燥后得粗品，粗品在95％乙醇中重結(jié)晶后得產(chǎn)品3.16g(62％)；mp.104～106℃(dec)；FAB-MS(m/e)，404[M-1]-；IR(KBr，cm-1)3369，2923，1600，1386，1224，1178，1083。制備實施例16，4-甲氧卞基-D-葡萄糖胺-N-二硫代甲酸鈉(MeO)的合成取1.92g(14.0mmol)的對甲氧芐胺和2.73(13.8mmol)的α-D-(+)葡萄糖，溶于2ml水中，于60℃氮氣保護下，攪拌反應(yīng)4小時，得膠狀物。
將膠狀物溶于30ml甲醇中，加入0.16gPtO2，于45℃，激烈攪拌下通入氫氣24小時。反應(yīng)完畢后，趁熱過濾，濾液于冰箱中放置過夜后，有白色沉淀物析出，過濾收集固體，得中間體。
將以上合成的中間體1.5g(5mmol)用適量二環(huán)六環(huán)∶水7∶1的混合溶液溶解，并加入5mmol的NaOH，于0℃，氮氣保護，激烈攪拌的情況下，緩慢滴加8mmol二硫化碳的二氧六環(huán)溶液，反應(yīng)液中漸漸有沉淀析出，反應(yīng)液在常溫攪拌下過夜。次日抽濾，收集固體，乙醇重結(jié)晶得產(chǎn)品1.79g，總收率45％；mp.197～199℃(dec)；Anal，Calcd for C15H22NO8S2Na·H2O，C，43.25，H5.47，N3.19；FoundC，43.15，H，5.86，N，3.29；FAB-FM(m/e)，398[M-H]-，376[M-Na]-。生物活性實施例1，驅(qū)排效果實驗動物體重為250g±50g的Wistar大鼠為實驗動物。
染毒方式用混有巰基乙醇的氯化鎘溶液CdCl2(15μmol/kg)+ME(300μmol/kg)單次腹腔注射，體積為0.1ml/Kg。
給藥方式所有實驗動物均在染毒后2hr腹腔注射本發(fā)明藥物的水溶液(劑量為0.25mmol/Kg)，體積為0.1ml/Kg。
標本收集實驗動物的標本分別在染毒后4hr，24hr及48hr進行采集。實驗動物處死后，留取腎標本。血樣的收集則采用麻醉狀態(tài)下心臟穿刺取血。實驗動物于代謝籠中留尿。
Cd含量分析收集的標本用混酸HNO3+H2SO4(3∶1)消化后，用HITACHI 180-80原子吸收分光光度計測定(火焰法)。a.腎鎘含量表1 給藥后大鼠腎鎘含量(μg Cd/g組織；X±Sg)藥物 4hrs 24hrs 48hrsCd 25.53±0.6620.59±0.6618.39±1.32MeO14.63±0.3415.03±1.2313.08±0.712 17.44±0.6217.56±0.6716.59±0.643 20.17±1.0121.23±0.8520.90±0.624 15.75±0.6112.90±0.4710.76±0.425 12.12±0.6815.47±0.6112.23±0.476 9.80±0.90 11.20±0.9411.69±0.06n＝5給藥后2h即染毒后4h時，實驗動物腎皮質(zhì)鎘含量均顯著降低(P＜0.05)，其中以MeO、6、4、5下降較多，6組顯著低于MeO組(P＜0.001)，5組也顯著低于MeO組(P＜0.05)。不同時間點腎皮質(zhì)鎘含量變化，3治療組12h腎鎘負荷最低，但48h末，反較染毒組增高(P＜0.05)；6治療組各時間點腎皮質(zhì)鎘含量均較低，觀察期末略有上升趨勢；5治療組12h較4h腎鎘稍有升高，至48h又降至較低水平；2，4治療各組在觀察期內(nèi)均呈下降趨勢。b.血液中鎘含量分析從表2的結(jié)果可見，染毒后4小時組的動物血液中，給藥組的鎘含量明顯升高。
血鎘含量在6，2，5組4h時顯著升高(P＜0.05)，其余各組未見高于染毒組；其中5，2組血鎘升高最甚，達染毒組3-4倍。表明體內(nèi)各組織中的“結(jié)合鎘”在給藥后其又被重新“調(diào)動”。
表2 給藥后大鼠血液鎘含量(μg/ml，X±Sg)藥物4hrs 24hrs 48hrsCd 0.0556±0.0169- -MeO 0.1800±0.0255- -2 0.9083±0.1015- -3 0.2780±0.0418- -4 0.1340±0.03080.0103±0.0004 0.0513±0.01395 0.8750±0.0428- -6 0.4908±0.0197- -n＝5；-為未檢出c.尿鎘含量分析表3給藥后大鼠尿鎘含量(μg Cd/ml，X±Sg)藥物4hrs 24hrs48hrsCd 0.0329±0.0036 --MeO 0.1001±0.0016 --2 1.6785±0.3746 --3 0.5936±0.0716 --4 3.5959±0.4111 --5 1.8192±0.2075 --6 6.2516±0.2641 --n＝5；-為未檢出從表3可見，尿鎘含量的變化除MeO、3組外，4hs時尿鎘均顯著升高，達染毒組3-20倍左右，以6組為最顯著，4h后各組尿鎘與染毒組相近(P＞0.05)。d.肝鎘含量分析表4給藥后大鼠肝鎘含量(μg Cd/g組織；X±Sg)m＝5藥物 4hrs24hrs 48hrCd24.4±0.69 20.4±0.48 20.0±0.59MeO 24.4±3.82 15.4±1.79 13.5±0.862 24.1±1.38 14.8±0.52 15.3±0.553 21.9±1.23 17.9±0.90 14.6±0.994 18.7±4.56 16.6±1.03 14.3±1.025 28.5±0.92 22.1±0.58 9.94±0.386 13.0±1.70 15.8±0.56 11.0±0.38從表4的結(jié)果可見，6治療組4h時肝鎘含量顯著低于染毒組，而5治療組4h時肝鎘含量顯著高于染毒組(P＜0.05)；其余藥物4h組與染毒組無顯著差異。動態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)在觀察期內(nèi)，5治療組肝臟鎘含量24h后開始顯著下降；6治療組24h后雖有所升高，至48h則又顯著降低，但始終低于相應(yīng)時間點染毒組肝鎘含量(P＜0.05)；其余各組僅見12h時肝鎘含量較4h時上升或相近，之后則顯著下降，且均低于相應(yīng)時間染毒組(P＜0.05)。e.腎功能損害檢測尿總蛋白含量MeO，2，3，4，5，6組在尿總蛋白含量觀察期內(nèi)始終大多未見高于染毒組；單獨給予絡(luò)合劑組尿總蛋白與空白對照組無顯著差異(P＜0.05)。
尿β2MG含量6治療組各組尿β2-MG始終低于染毒組(P＜0.05)；2，3，治療各組尿β2-MG含量在36h后方高于染毒組；5治療組從24h后尿中β2-MG含量開始下降；單獨應(yīng)用絡(luò)合劑組，尿β2-MG含量與空白對照組無顯著差異(P＜0.05)。
尿滲透壓5治療組尿滲透在各個時間點均顯著高于染毒組；6治療組觀察期內(nèi)呈升高趨勢，但12h時低于染毒組(P＜0.05)；在觀察期內(nèi)，3治療組呈下降趨勢，36h后，尿滲透壓低而固定。MeO，2，4治療組尿滲透12h后均呈升高趨勢，48h時均顯著高于染毒組(P＜0.05)。單獨給予絡(luò)合劑組尿滲透壓與空白對照組無差異(P＜0.05)。
GFR及FENaGFR以肌酐清除率(CCr)表示。2，3，4治療各組CCr在觀察期內(nèi)呈下降趨勢，至觀察期末，僅見MeO，5，6治療組CCr高于染毒組達3-4倍左右。FENa的改變恰與CCr的改變相反，5，6治療組在觀察內(nèi)始終低于染毒組，4治療組則逐漸顯著升高(P＜0.01)。f.腎臟病理形態(tài)學改變特點MeO，2，6治療組觀察期內(nèi)呈現(xiàn)病理損傷逐漸好轉(zhuǎn)；5組也較染毒組有所減輕；4治療組呈中度損傷，觀察期內(nèi)未見加重或改善；3治療組病損比染毒組稍重，觀察期內(nèi)也未見改善。g.對腎皮質(zhì)必需微量元素Zn、Cu、Fe等含量的影響染毒后2h給藥，劑量為0.25mmol/kg b.w.，每組5只大鼠，染毒后4h各處死1組，染毒后24h，處死另一組。采取腎組織樣晶，切去中間髓質(zhì)部分，稱取腎皮質(zhì)0.1-0.2g，冷凍干燥后，進行低溫灰化，然后加入8M HNO3溶解樣品。再加入Y(銥)內(nèi)標溶液，混合后吸取溶液滴在7μm厚的Mylar膜上，點樣直徑5mm，待干燥后，在鉬旋轉(zhuǎn)靶X-光機上進行X射線熒光分析測定，測定條件電壓50kV，電流40mA，在樣品前放置8×8mm2準直器。鎘染毒對腎皮質(zhì)元素分布的影響標本制作方法及測定條件、操作同腎皮質(zhì)鎘分布X-射線熒光掃描分析，共掃描2組(正常組和染毒4h組)實驗大鼠腎組織冰凍切片，然后用多元統(tǒng)計SPSS/PC作聚類分析和元素間的相關(guān)性分析。
表5 給藥后對大鼠腎皮質(zhì)必需微量元素含量的影響(X±Sg)藥物 Zn Cu Fe Mn Ca RbCd 4hr 21.8±1.24 5.4±0.25 50.2±1.93 1.2±0.20 82.4±3.93 9.8±0.6024hr 21.8±3.27 6.6±0.51 45.2±3.60 1.0±0.00 126.6±47.3 8.0±0.71MeO 4hr 22.0±0.32 5.5±0.58 45.4±5.03 1±0.00 51.80±3.57 10.0±0.5524hr 28.4±1.03 7.0±0.97 54.4±5.84 1.2±0.20 77.4±18.96 12.4±0.6844hr 21.0±1.00 6.0±0.55 47.2±3.26 1±0.00 53.8±7.59 14.4±0.7524hr 22.8±0.68 6.6±0.25 44.4±2.21 1±0.00 61.2±4.22 8.4±0.4054hr 22.0±0.55 10.4±0.40 37.8±0.37 1.2±0.20 66.2±6.14 16.6±0.2524hr 19.0±0.84 5.4±0.25 56.0±1.45 1.2±0.20 62.0±2.72 8.2±0.3764hr 19.8±0.58 5.4±0.25 51.4±5.54 0.8±0.20 65.0±4.189.0±0.7124hr 23.8±0.49 5.2±0.37 61.4±3.06 1.2±0.20 79.6±7.369.0±0.00實驗動物腎皮質(zhì)掃描測定，均能測到P、S、Cl、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn、As、Se、Br和Rb，染毒組尚可測到Cd。根據(jù)皮質(zhì)中的元素分布相關(guān)性聚類統(tǒng)計，正常大鼠腎皮質(zhì)元素基本上分成二大類，其中Cu、Zn、Mn、Se為一類，其它元素為一類。CdCl2+ME染毒大鼠腎皮質(zhì)中，Cu、Zn、Mn、Se之間相關(guān)系數(shù)有變動，Zn、Cu、Se與Cd表現(xiàn)出良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)在0.47-0.65之間，同時Se與Cu、Zn的相關(guān)關(guān)系受到干擾，相關(guān)系數(shù)則分別由0.83、0.83降至0.61、0.34。生物活性實施例2，不同時間5，6給藥治療效果將Wistar大鼠隨機分為8個組，每組5只，給予CdCl2+ME混合染毒，分別在染毒后0h，2h，12h給予6或5(0.5mmol/kg b.w.i.p.)；其中2h給藥均為2組，先在4h時各處死一個組，另一組則在48h時處死。每12h收集一次尿液。血、尿、組織樣品(肝、腎)采集、處理及鎘含量分析、腎功能指標檢測、腎臟病理觀察均與生物活性實施例1相同。
腎功能改變檢測6在0h、2h給藥，受試動物尿滲透壓均未見持續(xù)下降，且CCd上升，F(xiàn)ENa降低，尿總蛋白含量低于染毒組，僅尿β2-MG含量較高；但12h給藥治療組尿滲透壓則未見改善(與染毒組相比，P＞0.05)，尿總蛋白、β2-MG含量反逐漸上升，F(xiàn)ENa達2.10％左右，而CCr則僅為10ml/h/100gb.w.左右；5在0h、2h給藥，F(xiàn)ENa均低于1％，CCr顯著升高，尿總蛋白、尿β2-MG含量顯著降低，接近空白對照組，同時見尿滲透壓也有升高；12h給藥組則FENa仍大于2％，CCr較低，尿總蛋白、尿β2-MG含量未見下降，觀察期尿滲透壓未見改變。
病理改變特征光鏡下未見腎小球及腎間質(zhì)異常改變。6治療組0h給藥組近曲小管上皮雖有明顯濁腫較多見，局部可見管腔塌陷，細胞壞死，但較未治療組為輕；12h給藥組，小管上皮細胞濁腫明顯，壞死，脫落較多見，可見大量管型，與未治療組。5治療組0h、2h給藥小管上皮濁腫較輕，管型少見；12h給藥組則可見大量腎小管上皮細胞壞死脫落，管腔塌陷，阻塞及多量管型，與未治療組相近。
加大劑量給藥治療效果腎內(nèi)鎘負荷為0.5mmol/kg b.w，劑量下，6在染毒后2h給予，4h時腎鎘含量為染毒組的80％左右；5在染毒后2h給藥，4h時腎鎘負荷有更大幅度降低，僅為染毒組的5％左右。6為0.5mmol/kg劑量時腎Cd反較0.25mmol/kg組為高，而5為0.5mmol/kg組腎皮質(zhì)Cd則顯著低于0.25mmol/kg劑量組。
肝、血、尿中鎘含量6的大劑量治療組肝鎘含量有顯著下降(P＜0.05)，尿中鎘含量顯著升高(P＜0.05)，全血及血漿中鎘含量略有升高；5的大劑量治療組血中鎘含量未測出，但尿中鎘含量顯著升高(P＜0.01)，肝鎘負荷大幅度下降(P＜0.001)。生物活性實施例3，5，6急性毒性(LD50)
實驗動物昆明種雄性小鼠，體重25g；雄性Wistar大鼠體重250g，實驗期間自由飲水，進食。
小鼠按體重編號，隨機分組，每組10只。6共5個劑量組分別為3.24，3.86，4.59，5.46，6.48g/kg；5的5個劑量組分別為2.82，3.41，4.13，5.00，6.05g/kg b.w.；均按0.1ml/10gb.w.體積皮下注射(s.e.)，連續(xù)觀察3天，按Karber法計算LD50。急性毒性結(jié)果為6皮下注射的LD50為4753.4mg/kg，其95％可信限范圍為4343.1-5202.4mg/kg；5皮下注射的LD50為4130.5mg/kg，其95％的可信限范圍為3728.2-4576.2mg/kg。觀察期內(nèi)可見高劑量組注射后，注射局部皮膚壞死，小鼠行動遲緩，精神萎靡；死亡高峰時間為2-12h。
按WHO急性毒性分級標準MeO屬于微毒，5，6屬于低毒。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一系列新型驅(qū)鎘藥物及它們的合成和在醫(yī)學上的應(yīng)用，這類新型化合物涉及通式(1)的結(jié)構(gòu)，其特點是分子中同時含有葡萄糖和氨基酸，與現(xiàn)有的驅(qū)鎘藥物相比，這類新型化合物不僅驅(qū)鎘能力強，而且選擇性高，毒性低；本權(quán)利要求涉及通式(1)的化合物 其中R為H，CH2，CH2Ph，CH(OH)CH2，CH2SH，涉及它們的合成和在醫(yī)學上的應(yīng)用。
2.合成權(quán)利要求1的化合物的下述合成路線 其中R為H，CH2，CH2Ph，CH(OH)CH2，CH2SH。
3.權(quán)利要求1的化合物，尤其是下述具體化合物N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)甘氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-丙氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-苯丙氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-蘇氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-半胱氨酸鈉。
4.權(quán)利要求1的化合物的合成，尤其是下述具體化合物的合成N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)甘氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-丙氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-苯丙氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-蘇氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-半胱氨酸鈉。
5.權(quán)利要求1的化合物在醫(yī)學上的應(yīng)用，尤其是下述具體化合物在醫(yī)學上的應(yīng)用N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)甘氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-丙氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-苯丙氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-蘇氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-半胱氨酸鈉。
6，權(quán)利要求1的化合物作為驅(qū)鎘藥物使用，尤其是下述具體化合物作為驅(qū)鎘藥物使用N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)甘氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-丙氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-苯丙氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-蘇氨酸鈉；N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-半胱氨酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一系列新型驅(qū)鎘藥物及它們的合成和在醫(yī)學上的應(yīng)用，本發(fā)明的化合物可以具體化為N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-甘氨酸鈉N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-丙氨酸鈉N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-苯丙氨酸鈉N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-蘇氨酸鈉N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-N-(二硫代甲酸鈉基)-L-半胱氨酸鈉這類新型化合物的結(jié)構(gòu)特點是分子中同時含有葡萄糖和氨基酸，與現(xiàn)有的驅(qū)鎘藥物相比，不僅驅(qū)鎘能力強，而且選擇性高，毒性低。
文檔編號A61P39/00GK1137896SQ9510634
公開日1996年12月18日 申請日期1995年6月13日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月13日
發(fā)明者彭師奇, 王超, 趙明, 趙金垣, 馬東星 申請人:北京醫(yī)科大學