專(zhuān)利名稱(chēng)：用于器官的低溫儲(chǔ)藏和治療病毒和細(xì)菌感染的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明特別涉及用于器官的低溫儲(chǔ)藏和治療病毒和／或微生物感染的物質(zhì)或組合物，用于器官低溫儲(chǔ)藏的物質(zhì)或組合物，用于治療病毒和／或微生物感染的物質(zhì)或組合物，制造用于器官低溫儲(chǔ)藏的低溫儲(chǔ)藏試劑的方法，制造用于治療病毒和／或微生物感染的藥物或制劑的方法，低溫儲(chǔ)藏試劑在低溫儲(chǔ)藏器官中的應(yīng)用，藥物或制劑在治療病毒和／或微生物感染中的應(yīng)用，低溫儲(chǔ)藏試劑在低溫儲(chǔ)藏試劑的生產(chǎn)中的應(yīng)用，物質(zhì)或組合物在用于治療病毒和／或微生物感染的藥物或制劑的制造中的應(yīng)用，低溫儲(chǔ)藏器官的方法，解凍器官的方法，治療病毒和／或微生物感染的方法，劑量形式和疫苗。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了用于器官低溫儲(chǔ)藏和治療病毒和／或微生物感染的物質(zhì)或組合物，含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性劑的物質(zhì)或組合物，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
至少R1和R2中的一個(gè)可以是甲基基團(tuán)。
或者，至少R1和R2中的一個(gè)可以是氟化C1-C3烷基基團(tuán)。
活性劑可以選自含有甲酰胺，甲基甲酰胺，二甲基甲酰胺，乙酰胺，甲基乙酰胺，二甲基乙酰胺，二乙基乙酰胺，異丙基乙酰胺，二異丙基乙酰胺，N-乙?；哙ぃ琋-(β-羥乙基)乙酰胺，N，N-二(β-羥乙基)乙酰胺，N-乙?；鶈徇?，丙烯酰胺，丙酰胺，N-氟甲基-N-甲基-甲酰胺和其中任何兩種或多種的混合物。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，活性劑可以是二甲基甲酰胺C3H7NO(DMF)。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，活性劑可以是N-氟甲基-N-甲基-甲酰胺，HCON(CH3)(CH2F)。
DMF通常用作極性試劑，并容易通過(guò)皮膚，通過(guò)肺或口腔接觸吸收。通過(guò)皮膚的液體DMF的吸收速率達(dá)到每平方厘米每小時(shí)9．4毫克。DMF快速代謝，主要的生物轉(zhuǎn)化位點(diǎn)是肝，大部分借助于尿排泄。在大鼠，大鼠，倉(cāng)鼠和人中的主要代謝物質(zhì)是N-(羥甲基)-N-甲基甲酰胺(HMMF)，N-(羥甲基)-甲酰胺(HMF)和N-乙?；?S-(N-甲基-氨基甲酰基)半胱氨酸(AMMC)。未變化的DMF作為小部分劑量在尿中排出。有限的可得數(shù)據(jù)表明明顯量的劑量留下未排出和／或以未鑒定化合物形式排出。
DMF具有低的急性皮膚，口腔和吸入毒性。它被認(rèn)為具有溫和到中等的皮膚和眼刺激劑，并且能容易地滲透進(jìn)皮膚。沒(méi)有皮膚敏感特性的指示。
在幾個(gè)90天的研究中，不能建立NOAEL(未觀察到的毒性作用量)。在對(duì)狗的28天的吸入研究中，在63毫克／立方米時(shí)發(fā)現(xiàn)沒(méi)有效應(yīng)。在另一個(gè)對(duì)狗的研究中，在60毫克／立方米時(shí)發(fā)現(xiàn)可逆的心血管效應(yīng)。
DMF是致畸形的和可能是胚胎致死的。在口服研究中，發(fā)育效應(yīng)的NOAEL總共達(dá)到44毫克／千克體重，在兔的吸入研究中達(dá)到150毫克／立方米。
本發(fā)明的一個(gè)特定特征是通過(guò)在暴露于DMF之前預(yù)冷器官，低溫過(guò)程中，DMF的毒性實(shí)質(zhì)性降低或基本消除。作為例子，在室溫下，在水或生理溶液中的30％的DMF溶液中，蛋白質(zhì)變性。但是，在8℃，根據(jù)本發(fā)明的方法，在30％的DMF濃度水平和低于0℃的溫度，器官基本不受影響，40％的DMF濃度也不影響器官。
如下面的實(shí)施例所述，在低溫過(guò)程中，如果溫度為8-4℃之間導(dǎo)入10％的DMF溶液，器官通常不受影響，如果導(dǎo)入25％到30％的DMF溶液，器官和溶液的溫度應(yīng)該低于4℃。
在低溫儲(chǔ)藏過(guò)程中，本發(fā)明的物質(zhì)或組合物功能同時(shí)為低溫儲(chǔ)藏試劑和抑制病毒和／或抑制細(xì)菌的試劑。所以，如果病毒或細(xì)菌感染器官，器官的低溫儲(chǔ)藏將同時(shí)破壞病毒和／或微生物的感染。
為了本說(shuō)明書(shū)的目的，應(yīng)該將詞“器官”廣泛地解釋為包括心，肝，皮膚，組織，角膜，骨，腺體和心瓣的范圍。
本發(fā)明提供了低溫儲(chǔ)藏試劑(CPA)和用CPA處理哺乳動(dòng)物或其它組織，器官或整個(gè)身體，深度冷凍，和基本不定期地儲(chǔ)藏直到需要時(shí)解凍的方法。通常，非冷凍供體器官的儲(chǔ)藏壽命約為4小時(shí)，在這之后，細(xì)胞破壞開(kāi)始，從而使供體器官的跨大陸的轉(zhuǎn)移困難或不可能。正如下面將變得清楚，本發(fā)明的過(guò)程并不復(fù)雜，通過(guò)在CPA處理后浸入液氮中，器官容易承受的冷凍溫度速率為-10℃／秒。所以供體器官的跨大陸轉(zhuǎn)移和供體器官庫(kù)的建立或用于醫(yī)療應(yīng)用的尸體，肢體和器官的儲(chǔ)藏變得可行。
所以，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用于器官低溫儲(chǔ)藏的物質(zhì)或組合物，含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的低溫試劑的物質(zhì)或組合物，其中R1和R2各自選自下列組，包括H，Me，鹵代甲基的組，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4，或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
至少R1和R2中的一個(gè)可以是甲基基團(tuán)。
或者，至少R1和R2中的一個(gè)可以是氟化C1-C3烷基基團(tuán)。
酰胺可以如本文前面所述。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，低溫試劑可以是二甲基甲酰胺，在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，低溫試劑可以是N-氟化甲基-N-甲基甲酰胺。
低溫試劑可以與包括選自含有氯化鈉，EDTA-二鈉，碳酸氫鈉，氯化鉀，磷酸二氫鉀，氯化鎂，硫酸鎂，氯化鈣，葡萄糖，Hespes-氫氧化鈉和其中任何兩種或多種的混合物的成分的生理溶液結(jié)合。
具體地說(shuō)，生理溶液可以是Tyrode’s溶液(本文稱(chēng)為T(mén)yrode)，威斯康星大學(xué)溶液(ViaSpan)，Krebs Henseleit或任何其它適當(dāng)?shù)纳砣芤骸?br> 本發(fā)明延伸到用于治療病毒和／或微生物感染的物質(zhì)或組合物，含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑的物質(zhì)或組合物，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)；飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
R1，R2和R3可以如本文上面所述。
酰胺可以如本文上面所述。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案，酰胺可以是二甲基甲酰胺。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案，酰胺可以是N-氟化甲基-N-甲基甲酰胺。
病毒感染可以是逆行的病毒感染，即后天獲得性的人免疫缺陷(HIV-1)病毒感染。但是，本發(fā)明的化合物，物質(zhì)或組合物可以用于其它病毒和／或微生物感染如德國(guó)麻疹，皮膚粉刺和與免疫系統(tǒng)疾病如HIV- 1相關(guān)的隨機(jī)感染的治療。具體地說(shuō)，本發(fā)明的物質(zhì)或組合物可以用于病毒感染的治療，其中病毒具有外殼保護(hù)包衣。
所以，病毒感染可以選自后天獲得性的人免疫缺陷病毒感染(HIV- 1)。
物質(zhì)或組合物可以包括至少一種生理可接受賦型劑或載體。賦型劑或載體可以是膠質(zhì)二氧化硅。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了制造用于器官低溫儲(chǔ)藏的低溫儲(chǔ)藏試劑的方法，包括將選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的低溫儲(chǔ)藏成份和生理溶液合并的步驟的方法，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或
R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
生理溶液可以如本文上面所述。
R1，R2和R3可以如本文上面所述。
酰胺可以如本文上面所述。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了制造用于治療病毒和／或微生物感染的藥劑或制劑的方法，包括將選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑與至少一種生理學(xué)可接受賦型劑或載體合并的步驟，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，R1，R2和R3可以如本文上面所述。
酰胺可以如本文上面所述。
本發(fā)明延伸到包括選自含有通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的冷凍儲(chǔ)藏成份的冷凍儲(chǔ)藏試劑在冷凍儲(chǔ)藏器官中的應(yīng)用，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
冷凍儲(chǔ)藏試劑可以包括冷凍儲(chǔ)藏成份和生理溶液。
R1，R2和R3可以如本文所述。
酰胺可以如本文所述。
本發(fā)明進(jìn)一步延伸到包括選自含有通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑的藥劑或制劑在治療病毒和／或微生物感染中的應(yīng)用，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵化甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
R1，R2和R3可以如本文所述。
藥劑或制劑可以包括至少一種生理學(xué)可接受賦型劑或載體。
生理學(xué)可接受賦型劑或載體可以是膠質(zhì)二氧化硅。
酰胺可以如本文所述。
本發(fā)明延伸到在制造冷凍儲(chǔ)藏試劑中冷凍儲(chǔ)藏成份的使用，該成份選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
R1，R2和R3可以如本文前面所述。
酰胺可以是本文前面所述。
本發(fā)明進(jìn)一步延伸到用于病毒和／或微生物感染的治療的藥劑或制劑的制造中物質(zhì)或組合物的使用，包括選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑的物質(zhì)或組合物，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，鹵化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
R1，R2和R3可以如本文上面所述。
酰胺可以如本文上面所述。
通常，該方法包括起始時(shí)用生理溶液如Tyrode[商標(biāo)名]灌注器官，然后以逐步或連續(xù)方式，用含有循序性增高的濃度的冷凍儲(chǔ)藏成份的生理溶液灌注器官，同時(shí)降低器官的溫度。
通過(guò)最初冷凍器官，然后在液氮中快速冷凍器官和在液氮溫度儲(chǔ)藏器官；通過(guò)在液氮中冷凍器官和在冷凍器中儲(chǔ)藏；通過(guò)在液氮中冷凍和儲(chǔ)藏的計(jì)劃；或在冷凍器中冷凍和儲(chǔ)藏的計(jì)劃，可以降低溫度。
所以該方法包括前面的用生理溶液灌注器官和冷凍器官到8到5℃之間的溫度的步驟，然后用冷凍儲(chǔ)藏試劑灌注器官，同時(shí)循序性地提高冷凍儲(chǔ)藏試劑中冷凍儲(chǔ)藏成份的濃度和冷凍器官到儲(chǔ)藏溫度。
冷凍儲(chǔ)藏成份的濃度可以循序性地從10％增加到40％。
通常儲(chǔ)藏溫度在范圍為約-50℃到-196℃的零下溫度范圍內(nèi)(液氮溫度)。
具體地說(shuō)，儲(chǔ)藏溫度可以是約-80℃到-196℃之間?？梢岳靡后wCFC(氯氟烴)或液氮冷凍劑達(dá)到該溫度。
本發(fā)明延伸到解凍已經(jīng)用冷凍儲(chǔ)藏試劑灌注并冷凍到儲(chǔ)藏溫度的器官的方法，該方法包括下列步驟將器官暴露于包括選自含有通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的冷凍儲(chǔ)藏成份的冷凍儲(chǔ)藏試劑，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，直到器官已經(jīng)達(dá)到在上面儲(chǔ)藏溫度上的預(yù)定溫度；用含有冷凍儲(chǔ)藏成份的冷凍儲(chǔ)藏試劑灌注器官，同時(shí)循序性地降低冷凍儲(chǔ)藏試劑中冷凍儲(chǔ)藏成份的濃度并增加器官的溫度；
用生理溶液灌注器官。
預(yù)定溫度約為-4℃到4℃。
R1，R2和R3可以如本文上面所述。
酰胺可以如本文上面所述。
本發(fā)明進(jìn)一步延伸到治療病毒和／或微生物感染的方法，該方法包括對(duì)具有病毒和／或微生物感染的個(gè)體施用含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑的生理有效劑量的藥劑或制劑，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
藥劑或制劑如本文前面所述可以包括至少一種生理學(xué)可接受賦型劑或載體。
R1，R2和R3可以如本文上面所述。
酰胺可以如本文上面所述。
為了提供約2-200ppm，優(yōu)選地約為50-100ppm的待治療個(gè)體的血液中的活性治療劑的血液濃度，可以選擇劑量。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)50-100ppm的DMF血漿峰濃度使帶有HIV-1的病人的CD4 T-細(xì)胞數(shù)在開(kāi)始治療的3星期內(nèi)從312／毫升增加到超過(guò)1000／毫升。
劑量可以經(jīng)皮給藥，即通過(guò)皮膚轉(zhuǎn)移活性治療劑，如通過(guò)應(yīng)用已經(jīng)用活性治療劑或含有活性治療劑的組合物浸泡過(guò)的皮膚膏藥或棉花羊毛墊。用于浸泡皮膚膏藥或棉花羊毛墊的組合物中的活性治療劑的濃度約為10-100％。
然而劑量可以通過(guò)選自口服劑量，吸入，通過(guò)栓劑，靜脈內(nèi)和其任何兩種或多種的聯(lián)合的方法給藥。通常靜脈內(nèi)導(dǎo)入將在一個(gè)時(shí)期內(nèi)以控制速度進(jìn)行。
所以本發(fā)明延伸到用于包括局部應(yīng)用手段如皮膚膏藥或墊的應(yīng)用手段的病毒和／或微生物感染的治療的劑量形式，該皮膚膏藥或墊被吸收或吸收如本文上面所述有效量的活性治療劑。
局部應(yīng)用手段可以包括一種活性治療劑被吸收或吸收的合成聚合體物質(zhì)的主體如TEFLON(商標(biāo))。通常，劑量形式將包括DMF與膠質(zhì)二氧化硅混合形成用于膏藥浸泡的凝膠。膏藥可以是Virodene PO58膏藥。
本發(fā)明延伸到在用病毒感染，然后已經(jīng)用本發(fā)明的方法治療后的人的身體上收獲的抗體制備的疫苗。
病毒可以是逆行轉(zhuǎn)錄病毒如HIV-1。
現(xiàn)在參考附圖和實(shí)施例，通過(guò)舉例的方式，敘述本發(fā)明，其中

圖1顯示了將大鼠心臟浸泡在液氮中的過(guò)程中主動(dòng)脈套管中溫度的變化；圖2是顯示套管插入術(shù)過(guò)程和心臟中溫差電偶的位置；圖3顯示了作為用Virodene PO58(DMF)膏藥治療艾滋病人的時(shí)間的函數(shù)的HIV-1病毒的負(fù)載(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)[PCR])；圖4顯示了作為根據(jù)本發(fā)明的方法整個(gè)大鼠心臟灌注，低溫儲(chǔ)藏，冷凍，解凍和再灌注的時(shí)間的函數(shù)的溫度。
圖5顯示作為溫差電偶和瞬時(shí)反應(yīng)的時(shí)間的溫度；圖6顯示作為在第一套人毒性試驗(yàn)過(guò)程中的時(shí)間的函數(shù)的血漿DMF濃度；圖7顯示作為在第二套人毒性試驗(yàn)過(guò)程中的時(shí)間的函數(shù)的血漿DMF濃度；圖8是將根據(jù)本發(fā)明的低溫儲(chǔ)藏過(guò)程之后的冷凍／解凍大鼠心臟放大22500倍的心瓣膜的顯微圖；圖9是將根據(jù)本發(fā)明低溫儲(chǔ)藏過(guò)程之后的冷凍／解凍大鼠心臟放大36250倍的心瓣膜的顯微圖；和圖10是將根據(jù)本發(fā)明低溫儲(chǔ)藏過(guò)程之后的冷凍／解凍大鼠心臟放大28500倍的心瓣膜的顯微圖。
實(shí)施例1
低溫儲(chǔ)藏材料和方法模型分離的經(jīng)灌注的大鼠心臟利用十二只重量各為250-350克的BD9大鼠。根據(jù)可接受的方案，用乙基戊基巴比通鈉麻醉大鼠。
Langendorff儀器利用兩個(gè)連接到兩個(gè)水浴的標(biāo)準(zhǔn)Langendorff系統(tǒng)，一個(gè)在低溫，用于冷凍器官到大約4-5℃，另一個(gè)維持在37℃。利用冷的Langendorff系統(tǒng)(稱(chēng)為L(zhǎng)D2)，用Tyrode-DMF溶液灌注心臟，在缺乏DMF時(shí)，即用純Tyrode，用熱的Langendorff系統(tǒng)(稱(chēng)為L(zhǎng)D1)灌注心臟。
每升溶液的灌注組合物(Tyrode)NaCl 137．6mMKcl5．4mMMgCl21．0mMCaCl21．8mM葡萄糖 5．0mMHespes-NaOH 11．6mM溶液的pH值 7．45DMF特性(BASF工業(yè)化學(xué)，二甲基甲酰胺技術(shù)印刷品M5351e，1989年10月)N，N-二甲基甲酰胺(DMF)是具有下面特性的細(xì)胞分化劑分子式 C3H7ON相對(duì)摩爾質(zhì)量 73，095克／摩爾冰點(diǎn)-61℃DMF是無(wú)色的，高沸點(diǎn)，可動(dòng)的，極性的，具有微弱特性氣味的吸水液體。作為具有高二電常數(shù)的惰性溶劑，DMF是良好的溶劑，是水和液體可溶的并在23℃具有低的氣壓。DMF與強(qiáng)氧化劑，烷基化鋁和鹵化化學(xué)品接觸可以導(dǎo)致產(chǎn)生火或爆炸。
DMF儲(chǔ)藏在低于-5℃的密封容器中。當(dāng)需要時(shí)定量混合灌注液／CPA(OV)溶液并不儲(chǔ)藏用于以后使用。
溫度測(cè)量如圖2顯示，通過(guò)定位于主動(dòng)脈套管內(nèi)的小(0．5毫米直徑)的T型溫度電偶連續(xù)地測(cè)量溫度。選擇這一位置作為心臟附近與對(duì)心臟運(yùn)動(dòng)的最小干涉之間的最好統(tǒng)一。溫差電偶能夠精確地以超過(guò)45℃／秒的速度跟隨溫度變化。用具有定制的擴(kuò)增器(摻入冷點(diǎn)溫度補(bǔ)償)的PC-30 12bitA／D卡(Eagle電子公司)實(shí)驗(yàn)期間每秒一次對(duì)溫度取樣。以商品Fluke 52K-型溫差電偶溫度計(jì)校正溫度測(cè)量系統(tǒng)。在-100℃到+100℃范圍內(nèi)的測(cè)量證明精確到真正溫度的2％。在液氮中快速冷凍的過(guò)程中，將心臟淹沒(méi)在液氮中剛剛超過(guò)主動(dòng)脈(參見(jiàn)圖2)。在左心室內(nèi)和如上面提到的主動(dòng)脈導(dǎo)管內(nèi)進(jìn)行低溫儲(chǔ)藏實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的溫度測(cè)量。淹沒(méi)在液氮中的心臟在20秒內(nèi)心臟內(nèi)的溫度達(dá)到-196℃，相對(duì)的主動(dòng)脈尖的溫度為-75℃。左心室在快速冷凍過(guò)程中冷凍速度約為10℃／秒，在主動(dòng)脈尖為7．5℃／秒。
使用的灌注液／CPA(OV)混合物稱(chēng)為(OV1)溶液的Tyrode 90％和DMF 10％稱(chēng)為(OV2)溶液的Tyrode 80％和DMF 20％稱(chēng)為(OV25)溶液的Tyrode 75％和DMF 25％稱(chēng)為(OV3)溶液的Tyrode 70％和DMF 30％所有百分?jǐn)?shù)為體積／體積(v／v)百分?jǐn)?shù)。
技術(shù)制備了如上所述的熱／冷(37℃／5℃)LD1和冷(5℃)LD2 Langendorff系統(tǒng)。在LD1利用單一純Tyrode溶液并利用該系統(tǒng)冷凍所有灌注的大鼠心臟。在LD2只在冷溫度(5℃)使用純Tyrode和儲(chǔ)藏保護(hù)劑的OV混合物。
將DMF保持在-5℃的密封的容器內(nèi)的冷凍儲(chǔ)藏區(qū)域。在使用之前立即制造Tyrode溶液中的10％，20％，25％和30％DMF溶液。
在第一套實(shí)驗(yàn)中，將大鼠麻醉，切除心臟，浸入冷的Tyrode溶液，通過(guò)左心室插入套管，連接到37℃的含有純的Tyrode溶液的熱／冷Langendorff系統(tǒng)(LD1)并灌注8分鐘以便固定收縮(圖4-注解a)，然后該系統(tǒng)溫度降到5℃并維持這一溫度10分鐘(圖4-注解b-c)。
用Mayo剪刀在緊靠肋骨骨架的下面橫切腹部，暴露隔膜，然后切除腹部和側(cè)面邊緣的隔膜以便暴露心臟和肺。在這時(shí)，肺不再起作用，缺血性時(shí)鐘開(kāi)始運(yùn)轉(zhuǎn)。然后切除心臟與肋骨骨架之間的縱隔并將心臟溫和地舉起并用隔膜剪刀切除。然后將心臟放入冷的Tyrode燒杯中，淹沒(méi)。然后通過(guò)切除主動(dòng)脈的邊緣舉起心臟，借助于棉線將主動(dòng)脈關(guān)閉到套管，修剪縫的邊緣。
然后將心臟與LD1系統(tǒng)分開(kāi)，連接到LD2系統(tǒng)(圖4-注解c-d)。用純Tyrode在5℃開(kāi)始灌注來(lái)自LD2系統(tǒng)的心臟，然后將灌注溶液變化為50毫升OV1溶液(LD2)(圖4-注解d)。灌注心臟10分鐘直到耗盡OV1溶液。然后用30毫升OV1溶液填充系統(tǒng)LD2，連續(xù)灌注8分鐘。然后用30毫升OV3溶液填充系統(tǒng)LD2，在耗盡OV3之前8分鐘后，停止灌注。然后用薄層棉絮覆蓋心臟，用OV3溶液在0℃浸沒(méi)。然后在液氮中完全浸沒(méi)心臟，直到左心室的溫度達(dá)到-196℃。以冷凍速度為-10℃／秒時(shí)冷凍20秒。在再加熱之前將心臟維持在-196℃的溫度10秒到45分鐘的時(shí)間范圍。
然后將心臟置于0℃的含有70毫升OV3的100毫升玻璃杯中并保留12分鐘進(jìn)行解凍(圖4，注解g-i)。此后，左心室溫度在+4℃到-4℃之間。在冷的仍然連接的Langendorff系統(tǒng)(LD2)上，利用20毫升OV3再開(kāi)始灌注2分鐘。然后用20毫升OV2溶液填充LD2系統(tǒng)，繼續(xù)灌注2分鐘，然后用30毫升OV1溶液繼續(xù)灌注4分鐘，然后用100毫升純Tyrode繼續(xù)灌注12分鐘。總的再灌注時(shí)間20分鐘。然后移出心臟，再連接到冷／熱Langendorff系統(tǒng)LD1(圖4-注解j-k)，用純Tyrode溶液在5℃的溫度開(kāi)始灌注(圖4-注解k)并再加熱系統(tǒng)到溫度37℃(圖4-注解k-m)，直到左心室溫度為37℃。在溫度達(dá)到14到30℃時(shí)心臟開(kāi)始在3到6分鐘內(nèi)收縮。將跳動(dòng)的心臟保持在溫?zé)岬腖angendorff系統(tǒng)中30分鐘，然后實(shí)驗(yàn)終止。
在第二套實(shí)驗(yàn)中，使用了OV1和OV25溶液。在這套實(shí)驗(yàn)中，OV25代替了OV2和OV3。
如果在8℃以上開(kāi)始在液氮中冷凍，通常發(fā)生心臟的脆裂。通過(guò)在心臟周?chē)纬筛綦x囊，棉絮包裹材料減慢溫度的下降。
通過(guò)用95％的氧／5％的CO2氣體混合物預(yù)吹使所有溶液氧化。在細(xì)胞中足夠快地?cái)U(kuò)散DMF，沒(méi)有觀察到滲透膨脹。必須避免進(jìn)入心臟的灌注液中的氣泡因?yàn)樗鼈儠?huì)導(dǎo)致引起缺血并干涉CPA的加入和除去的梗塞。大的氣泡是致死的。灌注液的壓力頭優(yōu)選地是90-100厘米。37．5厘米的壓力頭導(dǎo)致不恰當(dāng)?shù)墓嘧ⅰ?br> 在實(shí)驗(yàn)完成時(shí)對(duì)所有心臟進(jìn)行亞心內(nèi)和亞賁門(mén)層的轉(zhuǎn)移電子顯微術(shù)(參見(jiàn)圖8-10)。
對(duì)100個(gè)大鼠心臟重復(fù)如上所述的實(shí)驗(yàn)。
結(jié)果如圖1-注解b可以看到用溫度冷卻速度-75℃／秒達(dá)到快速冷凍。將心臟浸沒(méi)在液氮中，使主動(dòng)脈套管尖的溫度固定在-75℃。與此相關(guān)的心臟內(nèi)的溫度為-196℃。在從液氮中取出心臟后，再加熱，溫度快速達(dá)到-7℃(參見(jiàn)圖Ⅰ-注解c)。
在這一系列實(shí)驗(yàn)中，在Langendorff系統(tǒng)熱灌注后開(kāi)始收縮3到6分鐘的心臟，在心肌溫度為14到30℃的范圍下重新啟動(dòng)。觀察活動(dòng)的，有節(jié)律跳動(dòng)的心臟至少30分鐘。冠狀流回到預(yù)冷速度，心臟速度恢復(fù)到預(yù)冷值。肉眼沒(méi)有看到損壞。用電子顯微鏡在22500，28500和36250的放大倍數(shù)下觀察細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)沒(méi)有可見(jiàn)的損壞(附圖8-10)。
在肝的低溫儲(chǔ)藏的情況中，在導(dǎo)入CPA之前阻止肝功能很重要，因?yàn)橛泄δ艿母螌⒎纸釪MF成毒性化合物(AMCC)。DMF是有肝毒性的。肝功能在約8℃時(shí)終止，肝必須冷凍到最小4℃，然后導(dǎo)入DMF。在導(dǎo)入DMF溶液之前，整個(gè)身體必須保持或低于4℃。為了冷凍整個(gè)身體，將身體置于心肺機(jī)器中，用純生理溶液替代血液，并冷凍到4℃。導(dǎo)入CPA(OV溶液)并循環(huán)到整個(gè)身體直到所有細(xì)胞被CPA飽和。然后用吸足CPA溶液的填塞物覆蓋身體并在液氮中冷凍。在再加熱時(shí)，必須維持最小4℃的溫度直到所有CPA溶液從身體細(xì)胞中沖洗出。然后用純生理溶液再加熱身體直到11℃，然后再將血液導(dǎo)入身體。
討論過(guò)去通過(guò)在達(dá)到-196℃的溫度冷凍儲(chǔ)藏固體器官，同時(shí)在冷凍過(guò)程后再獲得功能狀態(tài)的嘗試沒(méi)有成功的(Wang T，Banker MC，ClaydenN，Hicks GL Jr，Layne JR Jr，哺乳動(dòng)物心臟外植體Ⅵ的冷凍儲(chǔ)藏。解凍速度對(duì)功能恢復(fù)的影響，“低溫生物學(xué)”29期，(470-477)，1992；Wang T，Connery CP，Batty PR，在高的亞零下溫度成年哺乳動(dòng)物心臟的冷凍儲(chǔ)藏，“低溫生物學(xué)”29期(171-176)，1991；Wicomb WN，Hill DJ，Collins GM，兔心臟的24小時(shí)冰儲(chǔ)藏，“心肺移植雜志”，135，(891-894)，1994。就申請(qǐng)人的了解范圍，還沒(méi)有成功的實(shí)驗(yàn)，其中在低于-80℃的溫度冷凍固體器官，隨后在宏觀和微觀評(píng)價(jià)都沒(méi)有顯示可見(jiàn)的器官的損壞。
由結(jié)晶，毒性和滲透壓引起細(xì)胞內(nèi)的損壞。低溫學(xué)雜志已經(jīng)很好地記錄了這些問(wèn)題。以前報(bào)道的成功的低溫儲(chǔ)藏僅限于單個(gè)細(xì)胞和精子。這些過(guò)程通常使用慢的或計(jì)劃性冷凍，其中，結(jié)構(gòu)的絕對(duì)體積非常小(Rall WF，F(xiàn)ahy GM，通過(guò)玻璃化作用，在-196℃無(wú)冰低溫儲(chǔ)藏大鼠胚胎，“自然”，313，(573-575)，1985)。在單個(gè)細(xì)胞中，假定高的溫度冷卻速度和冷凍具有更小的效應(yīng)，因?yàn)轶w積變化對(duì)單個(gè)細(xì)胞比對(duì)完整器官具有更小的損壞效應(yīng)。
當(dāng)淹沒(méi)在液氮中，正如電解質(zhì)-水溶液，25％的DMF和Tyrode溶液不表現(xiàn)體積擴(kuò)展。所以本發(fā)明人在一些鼠心臟實(shí)驗(yàn)中利用了這一濃度。
在鼠心臟實(shí)驗(yàn)中遇到的溫度冷卻速度并不具有任何毒害效應(yīng)，沒(méi)有細(xì)胞內(nèi)的損壞發(fā)生。
為了成功地低溫儲(chǔ)藏整個(gè)器官，需要具有下面特性的介質(zhì)和過(guò)程1．該介質(zhì)必須快速替代細(xì)胞內(nèi)的水分；2．該介質(zhì)必須同時(shí)達(dá)到器官中所有細(xì)胞(Burrows FA，BissonetteB，在新生兒和嬰兒的心臟手術(shù)中利用深遠(yuǎn)的體溫過(guò)低和低的心肺流動(dòng)或循環(huán)時(shí)阻止腦的血液流動(dòng)速度的方式，“Can Anaesth”，404，(298-307)，1993)；3．該介質(zhì)必須改變水和介質(zhì)的混合物的特性以致在冷凍時(shí)沒(méi)有或很少體積變化發(fā)生；4．該介質(zhì)必須是對(duì)細(xì)胞和組織沒(méi)有毒性的；5．必須在廣泛的溫度范圍維持介質(zhì)特性；6．該介質(zhì)必須在冷凍溫度下具有低粘度，通常接近水；7．在亞零下溫度呈液態(tài)的介質(zhì)。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)二甲基甲酰胺(DMF)符合上面提到的大多數(shù)要求。
利用大鼠心臟作模型，因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)工作中它容易評(píng)價(jià)。其中在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭性诖笫笮呐K中可以測(cè)試功能的方式已經(jīng)很好地建立了，所以比較信息是可得的。興趣初步集中在進(jìn)行低溫儲(chǔ)藏技術(shù)后心臟的功能上。但是，在所有情況中進(jìn)行組織的電子顯微術(shù)以便研究超級(jí)結(jié)構(gòu)變化的可能性。
電子顯微術(shù)顯示細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)沒(méi)有可見(jiàn)的損壞，盡管經(jīng)過(guò)非常細(xì)致的對(duì)細(xì)胞損壞的信號(hào)的研究。
在遭遇了極度溫度冷卻速度以及非常低的終點(diǎn)溫度后，實(shí)驗(yàn)中心臟恢復(fù)特別好。宏觀沒(méi)有損壞可以看到，正如心臟收縮的運(yùn)動(dòng)所表示的，功能性良好。
本發(fā)明開(kāi)創(chuàng)了長(zhǎng)期儲(chǔ)藏固體器官和組織結(jié)構(gòu)和建立器官庫(kù)的潛能。實(shí)施例2HIV的治療如對(duì)HIV-1陽(yáng)性病人利用Virodene PO58皮膚膏藥的3期臨床實(shí)驗(yàn)，對(duì)人進(jìn)行毒性研究。同時(shí)本發(fā)明人也進(jìn)行了DMF對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物的體外研究。
通過(guò)將用二甲基甲酰胺凝膠浸泡的皮膚膏藥用于病人的身體，利用二甲基甲酰胺(Virodene PO58)，治療感染HIV-1的病人。兩塊皮膚膏藥用于病人身體的不同部分例如前臂。每塊皮膚膏藥含有7．064克含有DMF(92．5％m／m)和膠質(zhì)二氧化硅(7．5％m／m)的凝膠。凝膠的作用是防止液體DMF從膏藥中漏出。由于DMF快速蒸發(fā)，在使用之前不超過(guò)12小時(shí)制造這些膏藥。病人血液中的希望的DMF水平是100ppm。對(duì)于重量約為60千克的病人，在12小時(shí)的時(shí)期生產(chǎn)100ppm的水平需要約14克的量。N-乙酰-半胱氨酸-谷胱甘肽和／或基本磷脂以250毫克到300毫克每天的劑量作為肝加強(qiáng)注射劑量對(duì)病人給藥。另外，谷氨酸也可以作為肝加強(qiáng)注射劑量對(duì)病人給藥(口腔或靜脈)。根據(jù)Marz和Nohova的研究，吸收這一劑量需要的表面面積約為127．2平方厘米。為了獲得100ppm的血液水平，每小時(shí)必須吸收約1．272克DMF，所以每個(gè)張貼物需要約7．064克DMF以傳遞需要的劑量，表面面積為6．36平方厘米(每個(gè)張貼物)。DMF的吸收速度是9．4毫克／平方厘米／小時(shí)。在理論上，這一治療將傳遞125-135ppm，但由于DMF的蒸發(fā)，得到100ppm。根據(jù)各種因素如皮膚類(lèi)型和皮膚厚度吸收能力隨不同的病人有變化。為了在病人中獲得需要的DMF水平，對(duì)每個(gè)病人檢測(cè)血漿DMF的濃度并根據(jù)每個(gè)病人的DMF水平逐漸調(diào)節(jié)治療(參見(jiàn)圖6和7，例如在接受同樣治療的病人中各種血漿DMF濃度水平)。
所以每個(gè)張貼物加載約7．064克DMF和二氧化硅的凝膠。每塊膏藥用12小時(shí)的時(shí)期，每星期一塊，12星期一周期，或每星期兩塊，6星期一周期。
在某些病人中在三星期內(nèi)(參見(jiàn)圖3)，用盡可能少的三次治療的血液試驗(yàn)表明CD4 T-細(xì)胞數(shù)量從350增加到1000，PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))快速?gòu)?20000降低(病毒負(fù)載)到500／毫升。進(jìn)行PCR試驗(yàn)的是Roche amplicor HIV檢測(cè)器。＜500／毫升血漿的病毒負(fù)載認(rèn)為是不可檢測(cè)的。
一些進(jìn)行治療的病人在治療前具有嚴(yán)重的粉刺或展示德國(guó)麻疹癥狀。當(dāng)用DMF治療以致病人血液中的DMF水平為50-100ppm時(shí)，德國(guó)麻疹癥狀和嚴(yán)重的粉刺在7天內(nèi)清除或消失。
在用二甲基甲酰胺治療前，對(duì)病人進(jìn)行綜合的基本臨床和心理評(píng)估。評(píng)估提供了病人的基本生化和血液數(shù)據(jù)。同時(shí)進(jìn)行詳細(xì)的病毒血清學(xué)試驗(yàn)(HIV-1)以便確定病人整個(gè)身體的病毒數(shù)，這些試驗(yàn)在每周或每次治療的進(jìn)行。
在治療周期中，每小時(shí)確定病人血液中的DMF的濃度。每天早晨導(dǎo)入靜脈內(nèi)細(xì)線以便取血樣并以20毫升／小時(shí)注入普通生理鹽水保持開(kāi)放，同時(shí)進(jìn)行每天監(jiān)測(cè)起源于DMF的活性代謝物AMCC(如通過(guò)4小時(shí)的尿樣)。根據(jù)吸收變化性的變化導(dǎo)致的血液水平的DMF的濃度的測(cè)定的變化調(diào)節(jié)隨后的DMF的應(yīng)用并進(jìn)行每天的整個(gè)血液學(xué)和生化圖譜以便檢測(cè)肝功能的任何變化。同時(shí)進(jìn)行每天的臨床和心理評(píng)估。
同時(shí)進(jìn)行確定每天總的身體病毒數(shù)和檢測(cè)病人免疫狀態(tài)(CD4T-輔助細(xì)胞)和預(yù)測(cè)因素的改善的每天病毒血清學(xué)工作。血清學(xué)工作是根據(jù)p24抗原和定量的PCR或可選擇地通過(guò)其它方法。同時(shí)也進(jìn)行CD4數(shù)和β-2-巨球蛋白的每周特異性測(cè)定以便監(jiān)測(cè)病人免疫狀態(tài)和預(yù)測(cè)因素的改善。為了縮短治療以便使臨床效果最大和副作用最小，將所有臨床和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)裝入集中的數(shù)據(jù)系統(tǒng)以便簡(jiǎn)化對(duì)任何危害變化的快速應(yīng)答。
試驗(yàn)包括a)血清S-Na，S-K，S-Cl，S-CO2，S-脲，Surate，S-Creat，S-Ca，S-Ca，S-Mg，S-Phos，總血清，S-Conjd；b)紅血球HB Det，紅細(xì)胞，Haematocrit，MCV，MCH，MCHC，RDW；c)蛋白質(zhì)電泳ST-蛋白質(zhì)，S-白蛋白，S-總Glob，S-αGlob，S-α2 Glob，S-βGlob，S-γGlob；d)白細(xì)胞分化數(shù)白細(xì)胞數(shù)，Neutro絕對(duì)值，Lypho絕對(duì)值，Mono絕對(duì)值，Eosino絕對(duì)值，Baso絕對(duì)值；e)肝酶S-Alk，Phos，S-γGT，S-Alt(SGPT)，S-AST(SGOT)，S-LD；f)病毒學(xué)細(xì)胞標(biāo)記，PCR，β2-微球蛋白，P24抗原，C-反應(yīng)性蛋白，和CK-MB濃度；g)DMF水平的血液分析；h)AMCC水平的尿分析。
DMF的作用似乎是逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑中的一種。進(jìn)行的體外試驗(yàn)表明似乎是DMF的可溶特性使病毒顆粒如外殼溶解。
權(quán)利要求
1．用于器官的低溫儲(chǔ)藏和病毒和／或微生物感染的治療的物質(zhì)或組合物，含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性劑的物質(zhì)或組合物，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的物質(zhì)或組合物，其中至少R1和R2中的一個(gè)是甲基基團(tuán)。
3．根據(jù)權(quán)利要求1所述的物質(zhì)或組合物，其中至少R1和R2中的一個(gè)是氟化C1-C3烷基基團(tuán)。
4．根據(jù)權(quán)利要求3所述的物質(zhì)或組合物，其中活性劑是N-氟化甲基-N-甲基-甲酰胺。
5．根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的物質(zhì)或組合物，其中活性劑是二甲基甲酰胺。
6．用于低溫儲(chǔ)藏器官的物質(zhì)或組合物，含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的組的活性低溫試劑的物質(zhì)或組合物，其中R1和R2各自選自包括H，Me和鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
7．根據(jù)權(quán)利要求6所述的物質(zhì)或組合物，其中至少R1和R2中的一個(gè)是甲基基團(tuán)。
8．根據(jù)權(quán)利要求6所述的物質(zhì)或組合物，其中至少R1和R2中的一個(gè)是氟化C1-C3烷基基團(tuán)。
9．根據(jù)權(quán)利要求8所述的物質(zhì)或組合物，其中活性低溫試劑是N-氟化甲基-N-甲基-甲酰胺。
10．根據(jù)權(quán)利要求6或權(quán)利要求7所述的物質(zhì)或組合物，其中活性低溫試劑是二甲基甲酰胺。
11．根據(jù)權(quán)利要求5到10包括的任何一個(gè)所述的物質(zhì)或組合物，其中低溫試劑與包括選自含有氯化鈉，EDTA-二鈉，碳酸氫鈉，氯化鉀，磷酸二氫鉀，氯化鎂，硫酸鎂，氯化鈣，葡萄糖和Hespes-氫氧化鈉和其中任何兩種或更多的混合物的組的成份的生理溶液。
12．用于治療病毒和／或微生物感染的物質(zhì)或組合物，含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的組的活性治療劑的物質(zhì)或組合物，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
13．根據(jù)權(quán)利要求12所述的物質(zhì)或組合物，其中病毒感染選自獲得性人免疫缺陷病毒感染(HIV-1)。
14．根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的物質(zhì)或組合物，其中至少R1和R2中的一個(gè)是甲基基團(tuán)。
15．根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的物質(zhì)或組合物，其中至少R1和R2中的一個(gè)是氟化C1-C3烷基基團(tuán)。
16．根據(jù)權(quán)利要求15所述的物質(zhì)或組合物，其中活性治療劑是N-氟化甲基-N-甲基-甲酰胺。
17．根據(jù)權(quán)利要求12到14包括的任何一種所述的物質(zhì)或組合物，其中活性治療劑是二甲基甲酰胺。
18．根據(jù)權(quán)利要求12到17包括的任何一種所述的物質(zhì)或組合物，其中包括至少一種生理學(xué)可接受賦型劑或載體。
19．根據(jù)權(quán)利要求18所述的物質(zhì)或組合物，其中生理學(xué)可接受賦型劑或載體是膠質(zhì)二氧化硅。
20．制造用于低溫儲(chǔ)藏器官的低溫儲(chǔ)藏試劑的方法，包括將選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的低溫儲(chǔ)藏成份與生理學(xué)溶液合并的步驟的方法，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
21．制造用于治療病毒和／或微生物感染的藥劑或制劑的方法，包括將選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑與至少一種生理學(xué)可接受賦型劑或載體合并的步驟的方法，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
22．含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的組的低溫儲(chǔ)藏成份的低溫儲(chǔ)藏試劑在低溫儲(chǔ)藏器官中的應(yīng)用，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
23．含有選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組活性治療劑的藥劑或制劑在治療病毒和／或微生物感染中的應(yīng)用，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
24．低溫儲(chǔ)藏成份在制造低溫儲(chǔ)藏試劑中的應(yīng)用，該成份選自包括通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
25．物質(zhì)或組合物在制造用于治療病毒和／或微生物感染的藥劑或制劑中的應(yīng)用，該物質(zhì)或組合物包括選自含有通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基的組，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
26．低溫儲(chǔ)藏器官的方法，該方法包括用含有低溫儲(chǔ)藏成份的低溫儲(chǔ)藏試劑灌注器官的步驟，該低溫儲(chǔ)藏成份選自含有通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基的組，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)；和將灌注器官的溫度降低到儲(chǔ)藏溫度，在該溫度至少將器官臨時(shí)儲(chǔ)藏。
27．根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，包括前面的用生理溶液灌注器官和冷凍器官到5到8℃的步驟，然后用低溫儲(chǔ)藏試劑灌注器官，同時(shí)逐漸增加低溫儲(chǔ)藏試劑中低溫儲(chǔ)藏成份的濃度并將器官冷卻到儲(chǔ)藏溫度。
28．根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中低溫儲(chǔ)藏成份的濃度逐漸增加到25％到40％。
29．根據(jù)權(quán)利要求27或權(quán)利要求28所述的方法，其中低溫儲(chǔ)藏溫度在-4℃和-196℃之間。
30．解凍已經(jīng)用低溫儲(chǔ)藏試劑灌注并冷卻到低溫儲(chǔ)藏溫度的器官的方法，該方法包括步驟將器官與含有低溫儲(chǔ)藏成份的低溫儲(chǔ)藏試劑接觸，該低溫儲(chǔ)藏成份選自通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組，其中；R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)直到器官達(dá)到在低溫儲(chǔ)藏溫度之上的預(yù)定溫度；用含有低溫儲(chǔ)藏成份的低溫儲(chǔ)藏試劑灌注器官，同時(shí)逐漸降低低溫儲(chǔ)藏試劑中低溫儲(chǔ)藏成份的濃度并增加器官的溫度；和用生理溶液灌注器官。
31．治療病毒和／或微生物感染的方法，該方法包括步驟對(duì)感染病毒和／或微生物的個(gè)體施用含有生理有效劑量的選自含有通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑的藥劑或制劑，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
32．根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所選擇劑量提供約為50-200ppm的待治療的個(gè)體的血液中活性劑的血液濃度。
33．根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所選擇劑量提供50-500ppm的血液濃度。
34．根據(jù)權(quán)利要求31到32包括的任何一種所述的方法，其中劑量通過(guò)皮下給藥。
35．根據(jù)權(quán)利要求31到34包括的任何一種所述的方法，其中劑量是通過(guò)選自口服劑量，吸入，通過(guò)栓劑，靜脈內(nèi)給藥和其中任何兩種或更多的聯(lián)合的方法給藥。
36．用于病毒和／或微生物感染治療的劑量形式，包括局部應(yīng)用的工具，其上吸收或被吸收了有效量的選自含有通式R3-CO-NR1R2的酰胺的組的活性治療劑，其中R1和R2各自選自包括H，Me，鹵代甲基，飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)，飽和及不飽和鹵化C2-C3烷基基團(tuán)，羥基化烷基基團(tuán)的組；或R1和R2一起選自(CH2)n，其中n=4或5，或(CH2)2O(CH2)2；和R3選自H，Me和飽和及不飽和C2-C3烷基基團(tuán)。
37．從用病毒感染人并已經(jīng)根據(jù)權(quán)利要求31到35包括的任何一種所述的方法治療后的人的身體中收獲的抗體制備的疫苗。
38．基本上如本文前面所述和闡明的用于低溫儲(chǔ)藏器官和治療病毒和／或微生物感染的物質(zhì)或組合物。
39．基本上如本文前面所述和闡明的用于器官的低溫儲(chǔ)藏的物質(zhì)或組合物。
40．基本上如本文前面所述和闡明的用于治療病毒和／或微生物感染的物質(zhì)或組合物。
41．基本上如本文前面所述和闡明的制造的低溫儲(chǔ)藏試劑的方法。
42．基本上如本文前面所述和闡明的制造藥劑或制劑的方法。
43．基本上如本文前面所述和闡明的低溫儲(chǔ)藏試劑在器官的低溫儲(chǔ)藏中的應(yīng)用。
44．基本上如本文前面所述和闡明的藥劑或制劑在病毒和／或微生物感染治療中的具體應(yīng)用。
45．基本上如本文前面所述和闡明的低溫儲(chǔ)藏成份在制造低溫儲(chǔ)藏試劑中的應(yīng)用。
46．基本上如本文前面所述和闡明的物質(zhì)或說(shuō)明在制造藥劑或制劑中的應(yīng)用。
47．基本上如本文前面所述和闡明的低溫儲(chǔ)藏器官的方法。
48．基本上如本文前面所述和闡明的解凍器官的方法。
49．基本上如本文前面所述和闡明的治療病毒和／或微生物感染的方法。
50．基本上如本文前面所述和闡明的劑量形式。
51．如本文前面所述和闡明具體的疫苗。
全文摘要
本發(fā)明提供了器官的低溫儲(chǔ)藏和治療病毒和/或微生物感染的方法,含有選自包括通式R
文檔編號(hào)A61K31/16GK1204232SQ96199028
公開(kāi)日1999年1月6日 申請(qǐng)日期1996年12月13日 優(yōu)先權(quán)日1996年12月13日
發(fā)明者米歇爾·奧爾加·帕特里夏·吉斯泰拉·維瑟 申請(qǐng)人:低溫貯藏技術(shù)有限公司