專利名稱：通過nf－kappab的抑制治療梗塞的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及局部缺血和再灌注損傷的治療，其包括預防血管閉合后引起的栓塞或降低栓塞大小。
所有組織對低灌注以及由此帶來的氧氣缺乏、局部缺血都是敏感的。長時間的局部缺血可以導致細胞損傷。損傷的程度以及挽救組織的可能性取決于局部缺血的程度和時間長短。長時間的局部缺血可以發(fā)生細胞死亡(梗死)，并且在這種情況下，損傷是不可逆的。另一方面，如果適時應用藥物，可以通過藥物治療對死亡的或?qū)⒁劳龅募毎M行挽救。
與治療有關(guān)的主要局部缺血事件包括(但不限于)心臟病和中風。在人類中，中風占所有早期死亡的10％。對于那些經(jīng)過損傷存活下來的人來說，其中的50％留下了嚴重的殘疾，僅有一小部分(10％)的患者完全恢復了功能。
每年大約有超過1,500,000的美國人患上心肌梗塞。其中的半數(shù)到醫(yī)院后未能存活。然而，隨著人們對溶解血栓治療方法(例如鏈激酶或組織纖維溶酶原活化(TPA)的逐步接受，對于到醫(yī)院的患者來說，一個月的存活率可高達93.6％(Werns，S.W.Textbook ofInterventional Cardiology，ED.Topol，E.J.WB Saunders1994，PP142-153)。通過在梗塞過程中溶解血凝塊，可以挽救局部缺血的肌肉和組織。然而再灌注本身導致了組織損傷。
再灌注損傷源于以下一或多個原因細胞酸中毒導致了鈣超載；分解代謝引起細胞內(nèi)滲透量增加，導致細胞膨脹；來自中性白細胞和其它炎癥細胞的游離基。
再灌注后，立即可以在再灌注的心肌層中看到中性白細胞。單細胞/大噬菌體在24-48小時內(nèi)出現(xiàn)。再灌注的心肌層中中性白細胞是局部缺血心肌層中中性白細胞的3-5倍。其由內(nèi)皮細胞的粘附引發(fā)，在再灌注10分鐘內(nèi)發(fā)生。其中的中性白細胞或其本身可被毛細管捕獲，并妨礙再灌注。血管內(nèi)的中性白細胞可阻斷高達27％的毛細管，并顯示與局部血流的降低有關(guān)(Forman et al.，Acute MyocardialInfarction，eds.Gersh et al.Elsevier1991，pp 347-370)。這一情況可以導致“無再流動”現(xiàn)象，其中的血流在再灌注后繼續(xù)降低。
已知，中性白細胞必須首先通過與吸附分子間的相互作用將其本身附著在內(nèi)皮細胞壁上，然后中性白細胞驅(qū)使自己在鄰近的內(nèi)皮細胞之間運動，進入腦組織，在那里釋放細胞毒細胞分裂素。在細胞損傷(包括局部缺血)后，這類粘附分子的表達增加。另外，由于一氧化氮(NO)的釋放，對于浸潤細胞來說，內(nèi)皮細胞壁變得更具可滲透性。因此，抑制中性白細胞這種從外周血管進入損傷組織的運動(紅細胞滲出)，對于允許死亡細胞從局部缺血損傷中及時進行恢復來說具有價值。
因此，本領(lǐng)域需要一個有效的治療方法，其可以用來預防或降低局部缺血導致的結(jié)果。
第一個方面，本發(fā)明涉及治療哺乳動物局部缺血損傷的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑。優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，IkB-α絲氨酸磷酸化抑制劑以及它們的混合物。優(yōu)選地，是在暫時性的血管閉合發(fā)生之后且永久性的局部缺血損傷產(chǎn)生之前給予這些藥劑。
第二個方面，本發(fā)明涉及預防或減輕哺乳動物體內(nèi)再灌注損傷嚴重程度的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑。優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，IkB-α絲氨酸磷酸化抑制劑以及它們的混合物。
第三個方面，本發(fā)明涉及預防或降低梗塞大小或減輕梗塞嚴重程度的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑。優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，IkB-α絲氨酸磷酸化抑制劑以及它們的混合物。在優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的這個方面，此方法可以預防或減輕腦血管或心血管發(fā)生閉合后的梗塞嚴重程度。在一些優(yōu)選的實施方案中，此方法可以預防閉合引起的中風，或減輕由于腦血管閉合所引起的中風的嚴重程度。
第四個方面，本發(fā)明涉及治療局部缺血或再灌注損傷的方法，包括預防或減輕哺乳動物體內(nèi)梗塞嚴重程度的方法，其包括除了給予NF-kB活化抑制劑外，再給予所述的哺乳動物附加治療劑。優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，IkB-α絲氨酸磷酸化抑制劑以及它們的混合物。一些優(yōu)選的附加治療劑包括(但不限于)這樣一些藥劑，可以進一步抑制NF-kB活化或抑制前炎癥細胞因子或細胞粘附分子的表達或作用的甾體；可對再灌注或氧化的組織起作用的藥物，例如抗水腫藥物，血栓溶解劑，例如TPA，鏈激酶和尿激酶，聚陰離子，例如肝素，抗凝劑；以及有助于溫度正?；乃巹?。
優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑通過遍在蛋白蛋白酶體途徑抑制NF-kB活化。在一些優(yōu)選的實施方案中，NF-kB活化抑制劑抑制IkB-α的磷酸化。在一些優(yōu)選的實施方案中，NF-kB活化抑制劑為蛋白酶體抑制劑。優(yōu)選地，蛋白酶體抑制劑選自肽基醛，硼酸或硼酸酯，乳胱氨蛋白(lactacystin)或乳胱氨蛋白同類物。在一些優(yōu)選的實施方案中，NF-kB活化抑制劑為遍在蛋白抑制劑。
圖表簡述

圖1顯示了導致再灌注損傷(包括梗塞)的NF-kB活化的系列過程。圖上給出了本發(fā)明方法的干預點。
圖2顯示了遍在蛋白蛋白酶體途徑。
圖3顯示了在中等程度的腦動脈(MCA)閉合后，給予蛋白酶體抑制劑N-(2-吡嗪)羰基-L-苯基丙氨酸-L-亮氨酸硼酸所導致的梗塞體積的降低。
圖4顯示了給予蛋白酶體抑制劑N-(2-吡嗪)羰基-L-苯基丙氨酸-L-亮氨酸硼酸后梗塞體積降低的情況，其以對側(cè)半球的百分比來表示。
圖5顯示了在中等程度的腦動脈(MCA)閉合后，給予蛋白酶體抑制劑7-正丙基-斷裂(clasto)-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺所導致的梗塞體積的降低。
圖6顯示了在中等程度的腦動脈(MCA)閉合后，給予蛋白酶體抑制劑7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺所導致的神經(jīng)病學分數(shù)降低的情況。
圖7顯示了給予蛋白酶體抑制劑7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺所導致的梗死體積的降低。
圖8顯示了給予蛋白酶體抑制劑7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺所導致的神經(jīng)病學分數(shù)降低的情況。
本發(fā)明涉及局部缺血和再灌注損傷的治療，其包括預防血管閉合后引起的梗塞或減輕梗塞的嚴重程度。這里引證的專利申請，專利以及參考文獻指出了這一范圍內(nèi)涉及的知識，它們在此被整體引入作為參考文獻。在有矛盾的情況下，以本發(fā)明為準。
現(xiàn)已出人意外地發(fā)現(xiàn)遍在蛋白蛋白酶體途徑是治療血管閉合后(例如發(fā)生于心臟病或中風期間)局部缺血和再灌注損傷，包括預防血管閉合后引起的梗塞、降低梗塞大小或減輕梗塞的嚴重程度的目標，這些通過遍在蛋白蛋白酶體途徑的NF-kB活化抑制劑可以有效地治療這些疾病狀況。本發(fā)明令人驚奇地提供了治療局部缺血和再灌注損傷的有效方法。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，阻斷蛋白酶體功能，可以降低局部缺血的作用，例如降低血管閉合后梗塞的大小。這可以通過直接的蛋白酶體抑制(見N-(2-吡嗪)羰基-L-苯基丙氨酸-L-亮氨酸硼酸和7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺所顯示)或通過阻斷蛋白酶體目標蛋白(例如IkB-α)的遍在蛋白化來實現(xiàn)。任何通過真核生物細胞中遍在蛋白蛋白酶體途徑影響NF-kB活化的抑制劑均可預期有效地預防或治療梗塞，包括血管閉合后引起的梗塞，因此，它們也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明，治療包括再灌注損傷的局部缺血、預防血管閉合后引起的梗塞、降低梗塞大小或減輕梗塞的嚴重程度可以通過給予哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑。優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，IkB-α絲氨酸磷酸化抑制劑以及它們的混合物。
第一個方面，本發(fā)明涉及治療哺乳動物局部缺血的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑。所有組織對低灌注帶來的氧氣缺乏(局部缺血)都是敏感的。與治療有關(guān)的主要局部缺血事件包括(但不限于)心臟病和中風。局部缺血還可以影響其它組織，包括視網(wǎng)膜、肝臟、腎臟、骨骼、胎盤以及脊柱組織。長時間的局部缺血可以導致細胞損傷，明顯的，在腦局部缺血的情況下可以導致神經(jīng)功能失調(diào)?，F(xiàn)行使用的治療中風的藥劑以下列內(nèi)容為目標1)扭轉(zhuǎn)與局部缺血事件有關(guān)的過度中毒現(xiàn)象；或2)使局部缺血組織的血流增加。
局部缺血通常是由血管閉合導致的，例如由栓或血栓，出血，淹溺以及窒息引起的血管閉合。按照不受理論束縛的想法，人們認為局部缺血引發(fā)了大腦突觸前神經(jīng)末端中大量促毒素氨基酸、谷氨酸的釋放，它們可以作用于鄰近細胞中的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體。一旦活化，NMDA受體允許過量的鈣進入細胞，其反過來活化一系列的次級途徑，它們最終導致了細胞蛋白質(zhì)的降解和細胞死亡。在尋找有效治療方法的過程中，人們進行了各種努力，目標是既能有突觸前谷氨酸的釋放(經(jīng)過對k-鴉片制劑受體的刺激)，又可以阻斷NMNA受體的活化(或直接用NMDA拮抗劑，或間接用甘氨酸拮抗劑)。對鈣通道阻斷劑以及依鈣蛋白(calpin)抑制劑也進行了研究。當各種藥物在臨床前期和臨床中顯示出活性時，由于系列反應發(fā)生的速度、用藥時間以及治療的有效性等原因，它們的有益之處有所限制。臨床上唯一能增加血流的藥物是組織纖維蛋白溶酶原活化劑(TPA)，其有助于阻斷血管的凝血的迅速溶解。盡管在中風患者身上的有有限程度的療效(事實上其促進出血)，TPA這種藥物對那些患有腦出血的病人來說可以使其致死。因此，在患者被確診患有中風而不是出血之前，不能給予TPA。對于中風病人來說，用于此項分析所需要的時間明顯地增加了局部缺血的時間，因此使得可搶救組織的量降低。象NF-kB活化抑制劑等可以作用于局部缺血系列反應系統(tǒng)本身的藥劑則不受這類延長診斷期的影響，因為它們對腦出血病人是無害的。
優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑通過遍在蛋白蛋白酶體途徑抑制NF-kB的活化。在一些優(yōu)選的實施方案中，NF-kB活化抑制劑抑制IkB-α的磷酸化。在一些優(yōu)選的實施方案中，NF-kB活化抑制劑為蛋白酶體抑制劑。在這類實施方案中，對蛋白酶體的抑制優(yōu)選小于完全抑制。蛋白酶體優(yōu)選抑制劑選自肽基醛，硼酸或硼酸酯，乳胱氨蛋白或乳胱氨蛋白同類物。在一些優(yōu)選的實施方案中，NF-kB活化抑制劑為遍在蛋白途徑抑制劑。
轉(zhuǎn)錄因子NF-kB是Rel蛋白質(zhì)家族中的一員。轉(zhuǎn)錄活化劑蛋白的Rel家族可以分成兩組。第一組需要蛋白分解操作，包括p105和p100，它們可以相應地加工成p50和p52。第二組不需要蛋白分解操作，包括p65(Rel A)，Rel(c-Rel)以及Rel B。NF-kB包含兩個亞單位，p50以及另一個Rel基因家族的成員(例如p65)。未經(jīng)加工的p105也可與p65以及Rel家族的其它成員連結(jié)。在大多數(shù)細胞中，p50-p65二雜合體在胞漿中以一種與IkB-α相連的非活化的形式存在。對IkB-α進行分離和破壞可使三元復合體得以活化，而p65/p105二雜合體可通過對p105進行加工得以活化。
遍在蛋白蛋白酶體途徑在NF-kB活性的調(diào)節(jié)中起著必要的作用，其對p105至p50的加工以及抑制劑蛋白IkB-α的降解均負有責任(Palombella等人，WO95/25533)。為了通過蛋白酶體達到降解的目的，IkB-α必須首先在絲氨酸殘基32和36上經(jīng)過選擇的磷酸化作用，然后是遍在蛋白ation(Alkalay等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9210599(1995)；Chen，WO97/35014)。
一旦活化，NF-kB向細胞核易位，在那里，在明顯不同的一整套涉及免疫和炎癥反應的基因的調(diào)節(jié)中，它起著中心的作用(Grilli等人，International Review Of Cytology 1431-62(1993))。例如在炎癥反應中涉及的許多基因的表達需要NF-kB，如TNF-α基因以及編碼細胞粘附分子E-選擇蛋白，P-選擇蛋白，ICAM以及VCAM(Collins，T.，Lab.Invest.(1993)68499)。大量細胞因子基因(例如IL-2，IL-6，粒性白細胞集落刺激因子以及IFN-β)的表達也需要NF-kB?？烧T導的一氧化氮合成酶也是在NF-kB的調(diào)控之下。
蛋白酶體抑制劑阻斷IkB-α的降解和NF-kB的活化(Palombella等人，WO95/25533，發(fā)表于9/28/95；Traenckner等人，EMBO J.(1994)135433)。蛋白酶體抑制劑還可以阻斷IFN-α誘導的白細胞粘附分子E-選擇蛋白，VCAM-1以及ICAM-1的表達(Read等人，Immunity(1995)2493)。這些細胞粘附分子在支持從血流到血管外損傷處(例如局部缺血組織)的白細胞滲出方面起了關(guān)鍵的作用。盡管想獲得修復作用，但所導致的細胞流入(尤其是中性白細胞)可以通過細胞因子的釋放促進損傷，結(jié)果加速了細胞死亡，并且為其它細胞(例如噬菌體)進攻該區(qū)域提供了信號。
第二個方面，本發(fā)明涉及預防或減輕哺乳動物體內(nèi)再灌注損傷嚴重程度的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑。再灌注損傷源于以下一或多個原因細胞酸中毒導致了鈣超載；分解代謝引起細胞內(nèi)滲透量增加，導致細胞膨脹；來自中性白細胞和其它炎癥細胞的游離基。優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白途徑抑制劑，IkB-α絲氨酸磷酸化抑制劑以及它們的混合物。
第三個方面，本發(fā)明涉及預防或降低梗塞大小或減輕梗塞嚴重程度的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑。優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，IkB-α絲氨酸磷酸化抑制劑以及它們的混合物。在優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的這個方面，此方法可以預防腦血管或心血管發(fā)生閉合后梗塞的發(fā)生，降低梗塞大小，減輕梗塞的嚴重程度。在一些優(yōu)選的實施方案中，此方法可以預防閉合引起的中風，或減輕由于腦血管閉合所引起的中風的嚴重程度。
最常見的中風是血栓形成性中風，其中腦血管的閉合被認為是由于聚集的血小板的栓引起的。通常，這些血小板栓從主頸動脈或腦血管動脈粥樣硬化斑上的血小板血栓中以栓子的形式釋放出來。血栓形成性中風通常具有類似于“口吃”的特征，其最初的發(fā)作較輕微，通常是可逆的，在一個更嚴重的不可逆的中風后，出現(xiàn)了神經(jīng)損傷。最初的事件通常反映了由血小板血栓引起的暫時性的腦血管阻礙，其實際上是可逆的。事實上，從臨床的角度來說，一次溫和的中風可被視作為暫時性局部缺血攻擊(TIA)系列反應的一種極端的結(jié)束方式-一種可逆性的神經(jīng)缺損，其中腦血管被栓性的血小板血栓暫時性的堵塞，結(jié)果發(fā)生聚集，故只得重新建立流動。因此，本發(fā)明提供了在暫時性的血管閉合發(fā)生后，給予本發(fā)明中公開的藥劑的方法。如前討論的，另一種重要的中風形式是腦出血后的中風。我們相信這里公開的的藥劑在預防各種原因引起的梗塞、降低梗塞大小或減輕梗塞嚴重程度方面具有廣泛的療效，包括血栓形成性中風以及腦出血后的中風。就實際應用而言，梗塞大小的降低或梗塞嚴重程度的減輕可以從與梗塞有關(guān)的癥狀的減弱來推測，包括未加限制的神經(jīng)癥狀以及心功能癥狀。
第四個方面，本發(fā)明涉及治療局部缺血或再灌注損傷的方法，包括(但不限于)降低梗塞大小或減輕哺乳動物體內(nèi)梗塞嚴重程度的方法，其包括除了給予NF-kB活化抑制劑外，再給予所述的哺乳動物附加治療劑。優(yōu)選的NF-kB活化抑制劑選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白途徑抑制劑，IkB-α絲氨酸磷酸化抑制劑以及它們的混合物。一些優(yōu)選的附加治療劑包括(但不限于)這樣一些藥劑，可以進一步抑制NF-kB活化或抑制前炎性細胞因子或細胞粘附分子的表達或作用的甾體；可對組織進行再灌注或氧化的藥劑，抗水腫藥物，血栓溶解劑，例如TPA，鏈激酶和尿激酶，聚陰離子，例如肝素，抗凝劑；以及有助于溫度正常化的藥劑。抑制促炎性細胞因子或細胞粘附分子作用的藥劑包括(但不限于)抗體或抗體衍生物，其更優(yōu)選的是單克隆抗體，人類抗體，人類化抗體，單鏈抗體，嵌合抗體或與抗原連接的抗體片斷。這里討論或公開的任何藥劑與任何其它在中風或心肌梗塞治療中使用的藥劑的聯(lián)合應用進一步被包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
在本描述中，使用了下列定義。
“治療”是指預防或減輕局部缺血損傷或再灌注損傷，其包括預防血管閉合后的梗塞或降低梗塞大小或減輕梗塞的嚴重程度，包括無限制梗塞。按照治療方法，采用任意的蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，或通過抑制劑干擾NF-kB活化的藥劑所觀察到的梗塞癥狀的任意改善均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
術(shù)語“哺乳動物”包括人類。
“NF-kB活化的抑制劑”或“NF-kB活化抑制劑”是指任何通過遍在蛋白蛋白酶體途徑抑制NF-kB活化的物質(zhì)，包括下列任意物質(zhì)1)抑制蛋白酶體或其活性；2)抑制IkB-α或p105的普遍存在；或3)抑制IkB-α或p105的磷酸化。
“遍在蛋白途徑抑制劑”是指直接或間接抑制遍在蛋白ation或遍在蛋白向蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移的任意物質(zhì)。非限定性的遍在蛋白抑制劑包括那些在Berleth等人，Biochem.35(5)1664-1671(1996)中所描述的抑制劑。IkB-α磷酸化的抑制劑也是已知的(Chen，Cell84853(1996))。
“蛋白酶體抑制劑”是指直接或間接抑制蛋白酶體或其活性的任意物質(zhì)。本發(fā)明中使用的非限定性的蛋白酶體抑制劑包括肽基醛(Stein等人于1995年9月21日公開的WO 95/24914；Siman等人于1991年9月19日公開的WO 91/13904；Iqbal等人，J.Med.Chem.382276-2277(1995))，肽基硼酸(Adams等人于1996年5月9日公開的WO 96/13266；Siman等人，WO 91/13904)，乳胱氨蛋白和乳胱氨蛋白同類物(Fenteany等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1994)913358；Fenteany等人于10/17/96公開的WO96/32105)。
優(yōu)選地，本發(fā)明中使用的肽基醛蛋白酶體抑制劑為Stein等人在1995年9月21日公開的WO 95/24914中或Siman等人在1991年9月19日公開的WO 91/13904中提到的那些化合物，上述兩篇文獻均被全文引入作為參考。
優(yōu)選地，本發(fā)明中使用的硼酸或酯類化合物為Adams等人在1996年5月9日公開的WO 96/13266中或Siman等人在WO 91/13904中提到的那些化合物，上述兩篇文獻均被全文引入作為參考。
更優(yōu)選地，本發(fā)明中使用的硼酸或酯類化合物選自N-(4-嗎啉)羰基-β-(1-萘基)-L-丙氨酸-L-亮氨酸硼酸。N-(8-喹啉)磺?；?β-(1-萘基)-L丙氨酸-L丙氨酸-亮氨酸硼酸。N-(2-吡嗪)羰基-L-苯基丙氨酸-L-亮氨酸硼酸以及N-(4-嗎啉)羰基-[O-(2-吡啶甲基)]-L-酪氨酸-L-亮氨酸硼酸。
優(yōu)選地，本發(fā)明中使用的乳胱氨蛋白和乳胱氨蛋白同類化合物為Fenteany等人在10/17/96公開的WO 96/32105中提到的那些化合物，上述文獻被全文引入作為參考。更優(yōu)選地，用于本發(fā)明方法的乳胱氨蛋白同類物選自乳胱氨蛋白，斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺，7-乙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺以及7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺。最優(yōu)選的乳胱氨蛋白同類物為7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺。
這里公開的藥劑可以任何途徑給藥，包括皮內(nèi)、皮下、口服、關(guān)節(jié)內(nèi)、靜脈等途徑。優(yōu)選的給藥途徑是靜脈給藥。優(yōu)選的非腸道給藥方式為一次性注射或靜脈滴注。
藥用混合物中所公開化合物的濃度可以根據(jù)幾個因素變化，上述因素包括給予化合物的劑量，所用化合物的藥代動力學特性以及給藥途徑。用于治療局部缺血或再灌注損傷的藥劑的有效劑量可以在一個比較寬的范圍內(nèi)變化，為約10μg-50mg/kg受試哺乳動物體重。藥劑可以單一或重復劑量給予受試對象。根據(jù)以下因素，治療可以每日進行，也可以采取更頻繁的方式進行，這些因素包括患者的整體健康狀況，所選化合物的配方和給藥途徑。
公開的化合物可以在例如局部缺血發(fā)生之前、期間或之后的任何時候進行給藥。在一些優(yōu)選的實施方案中，是在局部缺血發(fā)生之后，但又來得及逆轉(zhuǎn)受影響組織的部分或全部損傷。優(yōu)選地，是在局部缺血發(fā)生之后12小時之內(nèi)，更優(yōu)選的是6小時之內(nèi)，最優(yōu)選的是3小時之內(nèi)給予藥劑。治療可以在對局部缺血組織進行再灌注之前、期間或之后開始。在許多情況下，無法精確決定再灌注的時間，但是優(yōu)選的是在再灌注之前、期間或再灌注剛剛結(jié)束之后開始治療，目的是預防或減輕由再灌注導致的額外損傷。
在凝血導致的局部缺血事件中，可以給予類似于TPA這樣的可以破壞凝血的藥物，以降低潛在的組織損傷。一旦給藥，藥物迅速發(fā)揮作用，去除血管內(nèi)阻礙物，因此可以測定局部缺血的終止時間。在一個優(yōu)選的實施方案中，在凝血溶于藥物的同時或剛剛?cè)苡谒幬镏蠼o予NF-kB活化抑制劑。
在一些其它優(yōu)選的實施方案中，是在局部缺血發(fā)生之前給予NF-kB活化抑制劑。在一些醫(yī)療操作的情況下(例如外科手術(shù))，局部缺血的發(fā)生是可以預測的。在另外一些優(yōu)選的實施方案中，公開的化合物是在上述醫(yī)療操作過程中(例如血管成形術(shù))局部缺血發(fā)生及再灌注開始之前或剛剛開始之后進行給藥的。
下列實例將進一步說明本發(fā)明的某些優(yōu)選實施方案，但其實質(zhì)上不限制本發(fā)明。實施例實施例1方法用鹵代乙烷使六只雄性Sprague Dawley大鼠(300g)麻醉，然后使用尼龍纖維將其中腦動脈(MCA)閉合2小時。隨后，移去纖維，在對大鼠進行斬首前，對發(fā)生梗塞的組織進行24小時再灌注。
取自整個大腦的冠狀部分(2.0mm×7-8)用氯化三苯基四唑鎓進行染色，然后在雙盲操作下，用圖象分析對其進行評價，測定梗塞大小。
還可以對側(cè)(未梗塞的)半球的百分比來表示梗塞的程度，用以提供一個指標上述操作究竟對同側(cè)(梗塞)的半球有多大的損傷。按由于在梗塞的半球存在水腫，實際上通常無法直接確定被損傷的同側(cè)半球的百分比。劑量方案在開始閉合30分鐘、2小時以及6小時后，經(jīng)靜脈給予大鼠一次性注射(1.0mL/kg)載體(10％PEG200/鹽水；n＝3)或N-(2-吡嗪)羰基-L-苯基丙氨酸-L-亮氨酸硼酸(0.03mg/kg；n＝3)。結(jié)果接受處理的動物，其同側(cè)半球的梗塞體積降低了62％(見圖1)。這一結(jié)果反映了該半球的總損傷降低了19％-2％(圖2)。實施例2方法用鹵代乙烷使雄性Sprague Dawley大鼠(250-400g)麻醉，然后使用尼龍纖維將其中腦動脈(MCA)閉合2小時。隨后，移去纖維，在對大鼠進行斬首前，對發(fā)生梗塞的組織進行24小時再灌注。
在撤掉纖維后，立即用神經(jīng)學記分系統(tǒng)對動物進行評價。神經(jīng)學分數(shù)用0-10的數(shù)字來表示，0代表沒有神經(jīng)學損傷，10代表有嚴重的神經(jīng)學損傷。24小時后以及斬首前，用同樣的神經(jīng)學記分系統(tǒng)對動物進行第二次評價。
取自整個大腦的冠狀部分(2.0mm×7-8)用氯化三苯基四唑鎓進行染色，然后在雙盲操作下，用圖象分析對其進行評價，測定梗塞大小。劑量方案在開始閉合2小時后，經(jīng)靜脈給予大鼠一次性注射(1.0mL/kg)載體(50％丙二醇/鹽水；n＝8)或7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺(0.1mg/kg；n＝6)。結(jié)果經(jīng)7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺處理的動物，其梗塞體積降低70％(見圖5)。
在局部缺血事件剛剛發(fā)生后2小時，所有動物的神經(jīng)病學分數(shù)為10±0。24小時時，用載體處理的大鼠的神經(jīng)病學分數(shù)為8.7±0.6，而用單一劑量(0.1mg/kg)7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺處理的動物的平均分數(shù)為5.5±1(見圖6)。這些數(shù)據(jù)表明，對于藥物處理過的動物來說，其產(chǎn)生了40％的神經(jīng)學改善。結(jié)論7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺對神經(jīng)缺損以及梗塞大腦的損傷均有明顯的保護作用。實施例3方法用鹵代乙烷使雄性Sprague Dawley大鼠(250-400g)麻醉，然后使用尼龍纖維將其中腦動脈(MCA)閉合2小時。隨后，移去纖維，在對大鼠進行斬首前，對發(fā)生梗塞的組織進行24小時再灌注。
在撤掉纖維后，立即用神經(jīng)學記分系統(tǒng)對動物進行評價。神經(jīng)學分數(shù)用0-10的數(shù)字來表示，0代表沒有神經(jīng)學損傷，10代表有嚴重的神經(jīng)學損傷。24小時后以及斬首前，用同樣的神經(jīng)學記分系統(tǒng)對動物進行第二次評價。
取自整個大腦的冠狀部分(2.0mm×7-8)用氯化三苯基四唑鎓進行染色，然后在盲操作下，用圖象分析對其進行評價，測定梗塞大小。劑量方案在開始閉合2小時后，經(jīng)靜脈給予大鼠一次性注射(1.0mL/kg)載體(50％丙二醇/鹽水；n＝8)或7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺(0.3mg/kg；n＝7)。另外兩組大鼠在開始閉合后0分鐘、2小時以及6小時后經(jīng)靜脈注射(1.0mL/kg)給予7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺。其中一組(0.1mg/kg×3；n＝6)在上述每一時刻接受0.1mg/kg，而另一組(0.3mg/kg×3；n＝7)在上述每一時刻接受0.3mg/kg。結(jié)果經(jīng)用單一劑量的7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺處理的動物，其梗塞體積降低50％(見圖3)。用0.1mg/kg×3劑量組或0.3mg/kg×3劑量組的梗塞體積沒有明顯變化(見圖7)。
在局部缺血事件剛剛發(fā)生后2小時，所有動物的神經(jīng)病學分數(shù)為10±0。24小時時，用載體處理的大鼠的神經(jīng)病學分數(shù)為8.7±0.6，而用單一劑量(0.3mg/kg)7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺處理的動物的平均分數(shù)為4±1(見圖8)。這些數(shù)據(jù)表明，對于藥物處理過的動物來說，其產(chǎn)生了60％的神經(jīng)學改善。就0.1mg/kg×3劑量組或0.3mg/kg×3劑量組來說，沒有觀察到明顯的神經(jīng)學改善(見圖8)。結(jié)論7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺對神經(jīng)缺損以及梗塞大腦的損傷均有明顯的保護作用。
盡管上文中描述了一些特定的優(yōu)選實施方案，但應該明白它們并沒有限制本發(fā)明。對于具有通常水平的本領(lǐng)域內(nèi)的專家來說，可以對已公開的實施方案進行各種修飾，并且這樣的修飾亦被包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，其由下列權(quán)利要求來限定。
權(quán)利要求
1.治療哺乳動物局部缺血損傷的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑，通過遍在蛋白蛋白酶體途徑干擾NF-kB活化的藥劑，以及它們的混合物。
2.治療哺乳動物局部缺血后導致的再灌注損傷的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑，它們選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，通過遍在蛋白蛋白酶體途徑干擾NF-kB活化的藥劑，以及它們的混合物。
3.預防哺乳動物體內(nèi)栓塞、降低栓塞大小或減輕由局部缺血或再灌注損傷所引起的梗塞的嚴重程度的方法，其包括給予所述的哺乳動物有效劑量的NF-kB活化抑制劑，它們選自蛋白酶體抑制劑，遍在蛋白抑制劑，通過遍在蛋白蛋白酶體途徑干擾NF-kB活化的藥劑，以及它們的混合物。
4.權(quán)利要求1-3中所述的方法，其中的局部缺血是血管閉合引起的。
5.權(quán)利要求4中所述的方法，其中的閉合是指腦血管。
6.權(quán)利要求4中所述的方法，其中的閉合是指心血管。
7.權(quán)利要求1-3中所述的方法，其中的方法可以預防或減輕中風的嚴重程度。
8.權(quán)利要求1-3中所述的方法，其中的方法可以預防或減輕由腦血管閉合引起的中風的嚴重程度。
9.權(quán)利要求6中所述的方法，其中的方法可以預防或減輕由心血管閉合引起的心肌梗死的嚴重程度。
10.權(quán)利要求1-3中所述的方法，其中的NF-kB活化抑制劑可以抑制IkB-α的磷酸化作用。
11.權(quán)利要求1-3中所述的方法，其中的NF-kB活化抑制劑包括蛋白酶體抑制劑。
12.權(quán)利要求11中所述的方法，其中的蛋白酶體抑制劑為肽基醛。
13.權(quán)利要求11中所述的方法，其中的蛋白酶體抑制劑為肽基硼酸或肽基硼酸酯。
14.權(quán)利要求11中所述的方法，其中的蛋白酶體抑制劑為乳胱氨蛋白類似物。
15.權(quán)利要求13中所述的方法，其中的蛋白酶體抑制劑為N-(2-吡嗪)羰基-L-苯基丙氨酸-L-亮氨酸硼酸。
16.權(quán)利要求14中所述的方法，其中的蛋白酶體抑制劑為7-正丙基-斷裂-乳胱氨蛋白-β-內(nèi)酰胺。
17.權(quán)利要求1-3中所述的方法，其中是在局部缺血發(fā)作后12小時內(nèi)給予哺乳動物NF-kB活化抑制劑。
18.權(quán)利要求1-3中所述的方法，其中是在局部缺血發(fā)作后6小時內(nèi)給予哺乳動物NF-kB活化抑制劑。
19.權(quán)利要求1-3中所述的方法，其中是在局部缺血發(fā)作前給予哺乳動物NF-kB活化抑制劑。
20.權(quán)利要求1-4中所述的方法，其進一步包含給予第二種藥劑的步驟。
21.權(quán)利要求21中所述的方法，其中的第二種藥劑選自NF-kB活化抑制劑，抑制促炎癥細胞因子或細胞粘附分子的表達或作用的藥劑，可對組織進行再灌注或氧化的藥劑，以及有助于溫度正?；乃巹?。
22.權(quán)利要求21中所述的方法，其中的第二種藥劑選自甾體，抗水腫藥物，血栓溶解劑，血凝塊助溶藥物，聚陰離子以及抗凝劑。
23.權(quán)利要求22中所述的方法，其中的第二種藥劑包含血栓溶解劑和血凝塊助溶藥物。
24.權(quán)利要求23中所述的方法，其中的血凝塊助溶藥物包含組織纖維蛋白溶酶原活化劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過給予蛋白酶體抑制劑,遍在蛋白抑制劑,通過遍在蛋白蛋白酶體途徑干擾NF－kB活化的藥劑,來治療局部缺血。
文檔編號A61K31/407GK1250376SQ98803396
公開日2000年4月12日 申請日期1998年2月17日 優(yōu)先權(quán)日1997年2月15日
發(fā)明者S·布蘭德, A·L·哥爾德伯格, L·普拉曼頓, F·蘇西 申請人:普羅斯克里普特公司