專利名稱：植入用順性脫水組織的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及本發(fā)明屬于植入材料的領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及順性脫水植入材料，它們沒有活細(xì)胞，并且可以不浸入液體中進(jìn)行儲存和運輸。本發(fā)明也涉及生產(chǎn)所述植入材料的方法。
2．現(xiàn)有技術(shù)的簡要描述使用自體移植、同種移植和異種移植加強(qiáng)或者置換人類和動物的受損組織已經(jīng)公知有很長的時間。從提供適當(dāng)?shù)囊浦膊牧系慕嵌壬峡?，加?qiáng)或者置換骨等硬組織與加強(qiáng)和或者置換軟組織表現(xiàn)出不同的問題。在選擇硬組織植入物的替代材料方面，植入物的強(qiáng)度和硬度較重要，而順性和柔性一般地講不太主要。
另一方面，選擇植入的軟組織材料時，植入材料的順性和柔性一般最重要，因為軟組織置換材料通常必須與將被置換的功能健康的組織相匹配。在這個方面應(yīng)當(dāng)記住含有膠原的原軟組織強(qiáng)度大，能夠耐受反復(fù)的三維的應(yīng)力及彎曲和形變。通常原軟組織起著必須保持其結(jié)構(gòu)整合性的物理屏障的作用。理想地，用于移植的加強(qiáng)或者置換的軟組織應(yīng)當(dāng)與其所置換的原軟組織有同樣的特性，并且應(yīng)當(dāng)易于得到、保存及運輸。但是，這些卻是現(xiàn)有技術(shù)的努力難以達(dá)到的目標(biāo)，并且在本發(fā)明前均不太成功。
更具體地說，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的主要研究，為了保存軟組織用于最終移植，將人或者動物源的組織一直用化學(xué)改性劑/保存劑處理，例如與膠原和其它的蛋白質(zhì)交聯(lián)的戊二醛。戊二醛處理的組織植入人體后表現(xiàn)有適當(dāng)?shù)哪蜋C(jī)械疲勞性及生物降解性。然而，戊二醛交聯(lián)改變了組織的粘彈特性，而且因此，作為宿主反應(yīng)的結(jié)果，隨著時間的推移通常在植入物中發(fā)生不利的鈣化和周圍粒性組織增生。戊二醛是有效的殺菌劑(滅菌劑)，但是暴露于空氣中就會慢慢地失去其殺菌效力。因此打算用于移植的組織(生物假體)須保存在戊二醛溶液中儲存和運輸，并且包括戊二醛浸泡的生物假體的包裝必須保持高度密封。而且它不能暴露在顯著升高的溫度下。因為這些要求，使用戊二醛處理的軟組織生物假體的成本較高。戊二醛是有毒性的，因此植入前必須仔細(xì)地漂洗以從生物假體上去除戊二醛。這是用戊二醛處理的生物假體的又一個缺點。
在現(xiàn)有技術(shù)中提供軟組織生物假體的另一個主要研究是使用液體消毒劑而不是戊二醛。這些其它的研究中也有避免與戊二醛處理的植入物關(guān)聯(lián)的鈣化問題。但是，按照這些方法，為了避免脆性，以及為了或多或少地保持生物假體的物理整合性，所述組織必須在液體媒介中保持、儲存和運輸直到馬上進(jìn)行移植手術(shù)之前。
提供軟組織生物假體的又一個其它方法是用低溫保存同種移植(同一物種的組織)的新鮮組織。由于近來在低溫保存方面的進(jìn)步，低溫保存的新鮮組織近來使同種移植的植入更加成功，并且更加被接受作為戊二醛保存的異種移植的替代。低溫保存生物假體的一個嚴(yán)重的缺點是難于保證它們沒有感染致病劑。制備和處理低溫保存的生物假體的成本也非常地高，因為需要在所有的時間把組織保存在低于通常的或者說一般的冷凍溫度下。
數(shù)個現(xiàn)有技術(shù)的專利的公開涉及制備和/或保存移植用生物組織或者其它用作替換組織，我們對美國專利5,116,552(Morita等)和5,336,616(Livesey等)感興趣。美國專利5,116,552(Morita等)描述了一種用于制備低壓凍干的醫(yī)用膠原海綿體，如人造皮膚的方法。這個參考文獻(xiàn)的方法包括用親水的有機(jī)溶劑的水溶液浸漬交聯(lián)的膠原海綿體，冷凍海綿體，然后真空干燥(低壓凍干)之。然而，得到的凍干產(chǎn)品是不柔韌的，并且不能防止斷裂，因為在冷凍干燥步驟中去掉了水及親水的溶劑或溶劑。美國專利5,336,616(Livesey等)說明了處理從諸如尸體之類的來源得到的軟組織，它用含有抗氧化劑、蛋白酶抑制劑和抗生素(穩(wěn)定溶液)的溶液處理，用酶和清潔劑去除活性抗原細(xì)胞(處理溶液)，并且在脫細(xì)胞后用低溫保存液處理，低溫保存液在冷凍組織時防止形成破壞性的冰晶。低溫保存液可以包括有機(jī)溶劑和水的混合物。在低壓凍干以后，將制品在密封的容器中、在惰性氣體環(huán)境中儲存和運輸，以此防止大氣中的濕氣。在移植前，將組織再水合，并且必須用免疫耐受的活性細(xì)胞恢復(fù)，以產(chǎn)生移植用的永久可接受的植入物。
其它的有關(guān)制備和/或保存移植用生物組織，或者相關(guān)主題的公開文獻(xiàn)可見于美國專利2,106,261；2,610,625；2,645,618；3,939,260；4,277,238；4,280,954；4,300,243；4,383,832；4,578,067；4,703,108；4,704,131；4,760,131；4,801,299；4,911,915；5,028,597；5,131,850；5,674,290和英國專利說明書716,161。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種軟組織移植物，它滿足以上的目的，它還沒有活細(xì)胞并且不需要在植入前接種活細(xì)胞。
本發(fā)明的又一個目的是提供一種軟組織移植物，它滿足以上的目的，可以以脫水的形式儲存和運輸。
上述及其它目的和優(yōu)點是通過一種軟組織制備得到的，該軟組織在其脫水狀態(tài)是順性抗裂的，沒有活細(xì)胞并且是通過系列處理天然的軟組織得到的用液體組合物處理，逐漸地增加該液體組合物中的C1-C3醇的濃度或者其它極性的水溶性有機(jī)溶劑的濃度，直到最后所述液體組合物含有至少25體積％的醇或者其它的極性有機(jī)溶劑或者其混合物，其余部分是水；其后用第二液體組合物進(jìn)行處理，該液體組合物含有甘油或者低分子量(＜1000D)的聚乙二醇或者其混合物，濃度范圍在10于50體積％左右，所述第二液體組合物還含有約3％-20％重量/體積的分子量為6000D到15000D的聚乙二醇，和約每毫升2到75單位的分子量大于約3KD的肝素；然后，把如此處理軟組織中的過多液體排掉；然后，把軟組織浸入到濃度約每毫升20至500單位的肝素水溶液中，然后冷凍此組織并且把此組織低壓冷凍干燥。
通過下面對特定實施方式和實施例的詳細(xì)說明會很好地理解本發(fā)明的特征以及本發(fā)明的目的和優(yōu)點。
優(yōu)選的
具體實施例方式
的描述以下的說明提出本發(fā)明的優(yōu)選實施方式。本發(fā)明揭示的實施方式是發(fā)明人構(gòu)思的實施本發(fā)明的最佳方式，但是應(yīng)當(dāng)理解可以在本發(fā)明的參數(shù)范圍內(nèi)作各種修改。
根據(jù)本發(fā)明欲植入哺乳動物包括人類的軟組織首先從來源諸如尸體得到。牛、綿羊、豬組織和從綿羊之類的其它動物得到的軟組織，就可作為例子。也可以使用人的軟組織。
同種移植物，就是說作為供體的組織移植到同種中；及異種移植，就是說作為供體的組織移植到與供體不同的種屬中，都可以按照本發(fā)明制備。根據(jù)本發(fā)明使用的組織類型一般地與現(xiàn)行的主要用于人類的涉及軟組織移植手術(shù)常用的類型相同。此類手術(shù)中常用的組織例子是心包、主動脈和肺動脈根部、腱、韌帶、皮膚、腹膜、胸膜、二尖瓣和三尖瓣。
從供體切下的軟組織通常進(jìn)行整理以去除松散的多余或者不需要的組織和脂肪。一般將組織浸泡在鹽水中。然后按照本發(fā)明，把組織在第一水溶液中處理，該第一水溶液含有較低濃度(約15-35％)的C1-C3醇，然后在較高醇濃度約25-75％范圍的第二水溶液中處理。(除特殊說明外，本文所述濃度均為體積比)。用第一和第二溶液處理組織樣品的目的是逐漸地用醇置換樣品中的水成分。甲醇、乙醇和異丙醇可用于此目的，優(yōu)選乙醇。其它無毒極性的水溶性有機(jī)溶劑乙腈、丙酮、或者甲乙酮也可以用于代替上述醇，醇和有機(jī)溶劑的混合物也適用于本發(fā)明。優(yōu)選地，第一溶液含有約25％乙醇，其余為水，第二溶液含有約50％的乙醇，其余為水。
本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員容易了解，上述操作代表用按步驟地梯度增加醇(或者其它適宜的無毒的水溶性的溶劑)的濃度處理組織樣品，直到達(dá)到至少約25％，優(yōu)選約50％，最優(yōu)選約75％的醇(或者其它適宜的溶劑)濃度。替代上述兩步濃度梯度處理組織樣品，所述樣品也可以用三步或更多步的濃度梯度處理或甚至用連續(xù)增加濃度梯度直至達(dá)到醇(或其它合適的溶劑)濃度。用增加醇的濃度梯度(或者其它適宜的溶劑)的處理是在環(huán)境溫度下進(jìn)行的，并且最優(yōu)選的是把組織樣品浸泡在溶液中進(jìn)行的。把組織樣品放在這些溶液中的時間并不是關(guān)鍵的，并且或多或少地取決于組織的厚度。但是應(yīng)當(dāng)給予足夠的時間讓溶液滲透進(jìn)樣品。典型地，30分鐘足夠，而在本發(fā)明的方法的優(yōu)選實施方式中，組織樣品在第一和第二每個醇溶液中各保持約30分鐘。
在上述的醇溶液中浸泡(處理)后，將所述組織樣品浸入(處理)到一種第三溶液中，該第三溶液含有約10至50％甘油、約3至20％重量/體積(w/v)的分子量在6000D到15000D范圍的聚乙二醇和約每毫升2到75單位分子量大于約3KD的肝素。優(yōu)選地，第三溶液含有約20％甘油、約5％(w/v)的分子量約為8000D聚乙二醇和約每毫升50單位的肝素。在第三溶液中可以用低分子量(＜1000D)的聚乙二醇代替甘油。在第三溶液中浸泡的時間也不是關(guān)鍵，對于很薄的組織約30分鐘，例如綿羊、豬、?；蛘呷说男陌妥銐蛄?，但是對于較厚的組織適宜且較好放在溶液中的時間較長，例如6個小時，或者優(yōu)選地12個小時。
用第三溶液處理完畢之后，取出組織樣品并且使多余的液體從組織樣品中排出。然后暫短地(快速地浸幾秒)浸入或另外用濃度約每毫升20至500單位，優(yōu)選地濃度約每毫升250單位，的肝素水溶液處理，然后使之排掉肝素溶液。然后，以本領(lǐng)域內(nèi)常用的冷凍方式在低壓凍干樣品前冷凍樣品。本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員理解這種冷凍一般地是在超低溫冰箱中進(jìn)行的，溫度約在-60℃至-80℃。冷凍后以本領(lǐng)域內(nèi)公知的方式把組織樣品低壓凍干(真空冷凍干燥)。
按照本發(fā)明處理的組織樣品是半透明的，呈淡黃的色彩。與用100％的水或者生理鹽水低壓冷凍干燥的組織不同，本發(fā)明的組織是柔韌的，順性的，并且不會由于物理性操作裂開或者破損。
為了在外科手術(shù)中用作移植物，并且對于根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行的旨在與用新鮮組織處理的組織作比較的大多數(shù)試驗，首先將低壓冷凍的組織用生理緩沖鹽水再水合。這優(yōu)選地通過將本發(fā)明的低壓冷凍的組織在生理緩沖鹽水浸泡約5分鐘至1個小時進(jìn)行。本發(fā)明的再水合后的組織外觀實際上與新鮮組織的外觀沒有差別。再水合一般在環(huán)境溫度進(jìn)行。這可以在患者自己的血液中、組織培養(yǎng)介質(zhì)中和在低濃度(＜10％)的乙醇溶液進(jìn)行而不在鹽水中進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的組織樣品再水合的優(yōu)選的方法是在pH值為7.4的緩沖鹽水中進(jìn)行。
如上所述，除非對本發(fā)明的組織樣品進(jìn)行試驗，再水合只是在用組織樣品移植前進(jìn)行。其它情況下樣品在防止環(huán)境濕氣的密封容器品在環(huán)境溫度下儲存和運輸。低壓冷凍干燥的組織可以方便地用氣相消毒的方法消毒，也可以不進(jìn)行再水合就移植。
本發(fā)明的組織樣品不含有活細(xì)胞，但是下文說明的試驗表明在再水合后，組織樣品沒有細(xì)胞毒性并且對于要附著在其上增殖的宿主內(nèi)皮細(xì)胞是相容性的。宿主內(nèi)皮細(xì)胞的附著和增殖以及沒有細(xì)胞毒性對于多數(shù)移植長期存活是重要的。本發(fā)明的組織是血液相容的并且抗血小板侵入和血栓形成。下述的試驗表明在本發(fā)明的方法步驟中原有組織的膠原纖維基本上保持完好無損。特殊舉例和試驗說明(a)制備冷凍干燥的牛或者綿羊的心包把新鮮的牛和綿羊心包切成條和塊。切碎的目的是去除松散的組織和脂肪。把此組織立即放入25％的乙醇水溶液中30分鐘。然后用50％的乙醇水溶液代替25％的乙醇水溶液再浸泡另30分鐘。第二個(50％乙醇)溶液由第三溶液代替約16小時，第三溶液含有20％甘油、約5％(w/v)聚乙二醇(MW8000)和每毫升50單位(分子量大于3KD)的肝素。仔細(xì)地從第三溶液中取出組織，讓多余的液體從組織排出，然后把組織浸入濃度為每毫升250單位的肝素溶液中幾秒鐘，再把組織在-70℃冷凍，把完全冷凍了的組織進(jìn)行低壓冷凍干燥。
以上得到的?；蛘呔d羊的低壓冷凍干燥心包組織是半透明的，呈淡黃的色彩。它們是柔韌的，不會由于物理性操作裂開或者破損。它們可以通過室溫浸入生理緩沖鹽水中約5分鐘而再水合。再水合后，這些組織與原來的新鮮組織外觀上沒有區(qū)別。
在再水合的心包上培養(yǎng)人的成纖維和臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，以研究其生物適應(yīng)性。切出組織圓盤以配合24孔培養(yǎng)板的孔底。在組織上放置塑料圈以壓下組織并且確保對組織的邊緣進(jìn)行良好的密封。把細(xì)胞接種在普通的培養(yǎng)介質(zhì)中的組織上培養(yǎng)一周。培養(yǎng)期末揭開組織并且切成不同的部分進(jìn)行組織學(xué)研究。組織截面的組織學(xué)檢查表明薄層的內(nèi)皮細(xì)胞附著在組織表面上。所述組織上的細(xì)胞也由胰蛋白酶釋放并被計數(shù)。這些結(jié)果表明再水合的組織沒有細(xì)胞毒性并且對于附著和增殖的宿主細(xì)胞是生物相容的。公知地，內(nèi)皮細(xì)胞和其它的結(jié)締組織在心植入物上的附著和增殖對于植入物的長期存活是基本的。
處理的組織中膠原纖維的整合性通過熔融溫度進(jìn)行檢查。為此將組織在磷酸鹽緩沖鹽水中從37℃加熱到它開始皺縮。新鮮的原組織的皺縮溫度和根據(jù)本發(fā)明的低壓冷凍干燥再水合的組織的皺縮溫度大致相同，約為63+1℃，表明經(jīng)低壓冷凍干燥和再水合過程的膠原纖維保持完好無損。
(b)制備低壓冷凍干燥的綿羊主動脈和肺動脈根供體綿羊的主動脈和肺動脈根也用25％的乙醇水溶液、50％的乙醇水溶液、20％的甘油5％聚乙二醇水溶液、接著用肝素溶液處理，再進(jìn)行低壓冷凍干燥，如以上對牛和綿羊的心包處理所述。
把處理過的動脈根再水合后作為同種移植物植入宿主綿羊的降主動脈中。我們的結(jié)果表明，在植入100天以后，動脈瓣功能能夠勝任，并且動脈根與非移植的原有組織末顯不同。百天的移植未發(fā)生纖維蛋白的沉積和宿主組織反應(yīng)。辯膜片顯得完好無損，不論肉眼觀察還是組織學(xué)檢查與非移植的瓣膜均無法區(qū)別。
權(quán)利要求
1．一種制備柔韌的軟組織樣品的方法，包含步驟(1)將從供體得到的天然軟組織，用(a)液體組合物處理，逐漸地增加所述液體組合物中的一種或者多種極性有機(jī)溶劑的濃度，直到最后所述液體組合物含有至少25體積％的一種或者多種所述溶劑，其余部分是水，所述溶劑選自具有一至三個碳原子的脂肪醇和其它水溶性極性有機(jī)溶劑；(b)其后用第二液體組合物處理，這種液體組合物含有濃度范圍在10至50體積％的甘油或者分子量低于1000D的低分子量的聚乙二醇，所述第二液體組合物還含有約3％-20％重量/體積的分子量為6000D到15000D的聚乙二醇，和約每毫升2到75單位分子量大于約3KD的肝素；(2)然后，暫短地將軟組織浸入到肝素的水溶液中；(3)然后，冷凍所述軟組織并且將其低壓冷凍干燥。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述極性有機(jī)溶劑選自由甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、丙酮和甲乙酮組成的組中。
3．根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述極性有機(jī)溶劑是乙醇。
4．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中將從供體得到的天然軟組織用液體組合物處理，逐漸地增加所述液體組合物中的一種或者多種極性有機(jī)溶劑的濃度，直到最后所述液體組合物含有至少50體積％的一種或者多種所述溶劑。
5．根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述極性有機(jī)溶劑是乙醇。
6．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述第二液體組合物含有約20體積％的甘油。
7．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中將天然軟組織相繼地用兩種包含一種和多種極性有機(jī)溶劑的液體組合物處理，所述的第一液體組合物含有約15至35體積％的所述一種或多種溶劑，所述的第二液體組合物含有約25至75體積％的所述一種或多種溶劑。
8．根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述極性有機(jī)溶劑是乙醇。
9．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，該方法還包括將低壓冷凍干燥的組織樣品再水合的步驟。
10．一種制備柔韌的哺乳動物軟組織樣品，用于最終植入哺乳動物中以置換或者強(qiáng)化原組織，的方法，包含步驟(1)將從供體得到的哺乳動物軟組織，用(a)液體組合物處理，逐漸地增加所述液體組合物中的具有一到三個碳原子的脂肪醇或者脂肪醇混合物的濃度，直到最后所述液體組合物含有至少25體積％的所述醇或者醇的混合物，其余部分是水；(b)其后用第二液體組合物處理，所述第二液體組合物含有濃度在10～50體積％范圍內(nèi)的甘油，還含有濃度范圍在約3％-20％重量/體積的分子量為6000D到15000D的聚乙二醇，和約每毫升2到75單位分子量大于約3KD的肝素；(2)然后，暫短地將軟組織浸入到濃度約為每毫升20到500單位肝素的水溶液中；(3)然后，冷凍所述組織并且將其低壓冷凍干燥。
11．根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述脂肪醇是乙醇。
12．根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中將天然軟組織用含有乙醇的液體組合物處理，直到最后所述液體組合物含有至少50體積％的乙醇。
13．根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中第二液體組合物中的甘油濃度約為20體積％。
14．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中第二液體組合物中的聚乙二醇濃度約為5％重量/體積，所述聚乙二醇分子量約為8000D。
15．根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中將天然軟組織相繼地用兩種含有乙醇的液體組合物處理，所述的第一液體組合物含有約15至35體積％的乙醇，所述的第二液體組合物含有約25至75體積％的乙醇。
16．根據(jù)權(quán)利要求16的方法，該方法還包括將低壓冷凍干燥的組織樣品再水合的步驟。
17．根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述哺乳動物的天然軟組織取自心包、胸膜、腹膜、主動脈、肺動脈、二尖瓣或者三尖瓣，或者取自腱或皮膚。
18．一種柔韌的軟組織樣品，該軟組織樣品用下列步驟制備(1)將從供體得到的天然軟組織，用(a)液體組合物處理，逐漸地增加所述液體組合物中的一種或多種極性有機(jī)溶劑的濃度，直到最后所述液體組合物含有至少25體積％的所述溶劑或者溶劑的混合物，其余部分是水，所述溶劑選自具有一至三個碳原子的脂肪醇和其它水溶性極性有機(jī)溶劑；(b)其后用第二液體組合物處理，所述液體組合物含有濃度范圍在10-50體積％的甘油或者分子量低于1000D的低分子量的聚乙二醇，所述第二液體組合物還含有約3％-20％重量/體積的分子量6000D到15000D的聚乙二醇，和約每毫升2到75單位分子量大于約3KD的肝素；(2)然后，暫短地將軟組織浸入到肝素水溶液中；(3)然后，冷凍所述組織并且將其低壓冷凍干燥。
19．根據(jù)權(quán)利要求18的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，所述極性有機(jī)溶劑選自由甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、丙酮、和甲乙酮組成的組中。
20．根據(jù)權(quán)利要求18的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，將從供體得到的天然軟組織，用液體組合物處理，逐漸地增加所述液體組合物中的一種或多種極性有機(jī)溶劑的濃度，直到最后所述液體組合物含有至少50體積％的所述溶劑或者溶劑的混合物。
21．根據(jù)權(quán)利要求20的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，所述極性有機(jī)溶劑是乙醇。
22．根據(jù)權(quán)利要求18的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，所述第二液體組合物含有約18體積％的甘油。
23．根據(jù)權(quán)利要求18的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，將天然軟組織相繼地用兩種含有一種或多種極性有機(jī)溶劑的液體組合物處理，所述的第一液體組合物含有約15至35體積％的一種或多種所述溶劑，所述的第二液體組合物含有約25至75體積％的一種或多種所述溶劑。
24．根據(jù)權(quán)利要求18的柔韌的軟組織樣品，其中用于制備這種樣品的方法還包括將低壓冷凍干燥的組織再水合的步驟。
25．一種柔韌的軟組織樣品，用于最終植入哺乳動物中以置換或者強(qiáng)化原組織，用于制備這種樣品的方法包含步驟(1)將從供體得到的哺乳動物原軟組織，用(a)液體組合物處理，逐漸地增加所述液體組合物中的具有一到三個碳原子的脂肪醇或者脂肪醇的混合物的濃度，直到最后所述液體組合物含有至少25體積％的所述醇或者醇的混合物，其余部分是水；(b)其后用第二液體組合物處理，所述液體組合物含有濃度范圍為10～50體積％的甘油，所述第二液體組合物還含有約3％-20％重量/體積的分子量6000D到15000D的聚乙二醇，和約每毫升2到75單位分子量大于約3KD的肝素；(2)然后，暫短地將軟組織浸入到濃度約為每毫升20到500單位肝素的水溶液中；(3)然后，冷凍所述組織并且將其低壓冷凍干燥。
26．根據(jù)權(quán)利要求25的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，所述脂肪醇是乙醇。
27．根據(jù)權(quán)利要求26的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，將天然軟組織，用含有乙醇的液體組合物處理，直到最后所述液體組合物含有至少50體積％的乙醇。
28．根據(jù)權(quán)利要求27的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，第二液體組合物中的甘油濃度約為20體積％。
29．根據(jù)權(quán)利要求28的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，第二液體組合物中的聚乙二醇濃度約為5％重量/體積，所述聚乙二醇分子量約為8000D。
30．根據(jù)權(quán)利要求29的柔韌的軟組織樣品，其中在用于制備這種樣品的方法中，將所述天然軟組織相繼地用兩種含有乙醇的液體組合物處理，所述的第一液體組合物含有約15至35體積％的乙醇，所述的第二液體組合物含有約25至75體積％的乙醇。
31．根據(jù)權(quán)利要求25的柔韌的軟組織樣品，其中用于制備這種樣品的方法中還包括將低壓冷凍干燥的組織樣品再水合的步驟。
32．根據(jù)權(quán)利要求25的柔韌的軟組織樣品，其中所述天然哺乳動物軟組織取自心包、胸膜、腹膜、主動脈、肺動脈、二尖瓣或者三尖瓣，或者取自腱或皮膚。
全文摘要
一種耐裂無活細(xì)胞的柔韌的軟組織樣品的制備方法,該方法包括下列步驟:將從供體得到的天然軟組織用溶液處理,所述溶液為逐漸地梯度增加脂肪醇或者其它合適的水溶性極性有機(jī)溶劑直到最后的醇(或者其它溶劑)溶液具有至少25體積%的有機(jī)液體水溶液。其后將組織樣品用含甘油或者(分子量低1000D)的低分子量的聚乙二醇、分子量為約6000—15000D的聚乙二醇和肝素的溶液處理。然后將所述組織樣品簡單地浸入到肝素水溶液中,冷凍并冷凍干燥。所述組織樣品在再水合或者不再水合下,適于作為同種移植物或者異種移植物植入。
文檔編號A61L27/36GK1306445SQ99807736
公開日2001年8月1日 申請日期1999年6月23日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月24日
發(fā)明者卡洛斯·M.G·杜蘭, 章大衛(wèi), 潘俊貽 申請人:蒙大拿基金會國際心臟學(xué)院