專利名稱：含有起抑制雄性生殖毒性作用的果膠的藥物組合物的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及含有起抑制雄性生殖毒性作用的果膠的藥物組合物。
現(xiàn)有技術(shù)的描述近年來成為話題并且在美國、歐洲、日本等受到密切關(guān)注的所謂“環(huán)境激素”的內(nèi)分泌系統(tǒng)干擾物質(zhì)，是干擾內(nèi)分泌系統(tǒng)功能的化學(xué)物質(zhì)并且在體內(nèi)有類似激素的活性。這種物質(zhì)的例子是諸如各種工業(yè)化學(xué)產(chǎn)品、殺蟲劑及除草劑之類的農(nóng)業(yè)化學(xué)藥品、有機(jī)重金屬、焚燒爐中產(chǎn)生的二噁英、植物雌激素之類的激素類似物、二乙基乙烯雌酚之類的藥用合成雌激素，以及其它食品或食品添加劑。這些物質(zhì)中受到特別關(guān)注的是二噁英。
二噁英是有兩個(gè)與兩個(gè)氧原子化學(xué)地鍵合的苯環(huán)的有機(jī)化合物。普通可得到的二噁英是苯環(huán)中的氫被氯取代的氯代二噁英。有數(shù)十種氯原子數(shù)量和取代位置不同的二噁英。最有毒性而且最穩(wěn)定的是有四個(gè)氯取代基的2，3，7，8-TCDD(四氯代苯并-p-二噁英)。由于二噁英易于在焚燒家庭垃圾或軟化汽油時(shí)產(chǎn)生，它對環(huán)境更加有危害性(見S.Alex.villalobs，Michael J Anderson，and Peter Kelley，1996.“Dioxinline Properties of a TrichloroethyleneCombustion-Generated Aerosol，Environmental Health Perspectives”，104.p734-p743)。
二噁英一般經(jīng)消化道、皮膚和呼吸器官吸收。二噁英吸收率隨著品種、溶劑、二噁英同系物及異構(gòu)體、同時(shí)攝取的物質(zhì)、給藥量、及年齡等而不同。吸收的二噁英一般積累在肝臟和脂性組織中，并且極少排出體外。
從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可清楚地了解二噁英的毒性作用。據(jù)報(bào)告稱，即使少量的二噁英，也會(huì)引起皮膚病，及引起肝臟毒性、肝癌及肝臟畸形。近年對人體進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了二噁英的危害。特別是，二噁英造成激素分泌失衡、降低生殖能力及免疫力、使生殖器畸變、抑制生長，并且導(dǎo)致癌癥。從這樣的實(shí)驗(yàn)充分地知道所述雄性生育能力下降可以是精子減少、精液減少、睪丸素濃度下降、精子活動(dòng)性降低、變性精子數(shù)量增加、生殖器畸形、前列腺疾病，以及其它與生殖有關(guān)的組織中出現(xiàn)的問題。盡管對環(huán)境激素的毒性進(jìn)行了積極的研究，但是還沒有充分地研究對環(huán)境激素的預(yù)防劑/治療劑。最近公知，綠茶提取物(以表兒茶精(epicatechin)和表沒食子兒茶精(epigallocatechin)為有效成份)及人參提取物對抑制降低生殖能力的毒性有效。試驗(yàn)中，對豚鼠進(jìn)行人參給藥。檢測結(jié)果表明顯著抑制睪丸重量下降、輸精管變細(xì)、胚上皮毀損、胚細(xì)胞變形等(見W.Kim，S.Hwang，H.Song，and S.Kim，“Panax Ginseng Protect the Testis Against2，3，7，8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin Induced Testicular Damage inGuinea Pigs”，BJU International 199983842-849)。
當(dāng)前尚沒有揭示用果膠抑制環(huán)境激素引起的雄性生殖毒性。
美國專利5,834,442和5,895,784揭示了一種受藥者口服調(diào)整pH值的柑桔果膠抑制原發(fā)腫瘤的方法。
國際申請第WO 9710727號公開揭示了使用酶減少血清從含果膠水性載體分離的方法。
WO 9631239揭示了可用于預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物腹瀉及胃潰瘍的藥物，其含有果膠和磷脂的混合物。
發(fā)明概述多次實(shí)驗(yàn)后本申請人發(fā)現(xiàn)果膠對于抑制由包括二噁英的環(huán)境激素引起的雄性生殖毒性起作用。
果膠大量含于植物的初級細(xì)胞壁和中間板。果膠的主要生理作用是連接和保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)并且對保水力起作用。果膠含有部分多糖酸甲酯及其鈉、鉀、鈣及銨鹽。與果膠的功能性緊密相關(guān)的甲酯基團(tuán)易于被堿水解，并且依水解率不同而具有各種功能性。
一般地，果膠易于水解并且有強(qiáng)吸水性。另外，果膠在水中形成親水的膠體溶液，并且顯現(xiàn)有高的粘度。
果膠當(dāng)前用于許多行業(yè)，諸如糖果、食品添加劑、乳制品及化妝品。對醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用應(yīng)當(dāng)給與特別的關(guān)注。據(jù)認(rèn)為果膠是有各種治療作用的預(yù)防性食品。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的果膠的作用之一是防止重金屬或者放射性金屬中毒。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，果膠有與鉛、汞、鎘、鉬、錳之類的重金屬形成良好的絡(luò)合物的能力及與鈷、鍶、銫、鋯和釕之類的放射性金屬形成良好的絡(luò)合物的能力。因此果膠可防止金屬中毒并且在金屬于體內(nèi)長期積累的過程中產(chǎn)生良好的作用。
另外，果膠降低血清膽固醇并且促進(jìn)腸蠕動(dòng)，從而解除便秘。它還降低糖尿病患者的血糖濃度，并對減肥和治療胃腸失調(diào)有效。這些作用已經(jīng)由實(shí)驗(yàn)證實(shí)了。當(dāng)前已經(jīng)將果膠用于以上的指征，并且正在研究果膠的其它應(yīng)用方面。
本發(fā)明可以使用從柑桔、檸檬、橙、蘋果或類似果物中提取的果膠，但是不僅限于這些果膠。優(yōu)選地使用從柑桔提取的果膠。柑桔果膠的化學(xué)式由[公式1]給出 GaLP-吡喃半乳糖GaLUA-半乳糖諾品酸L-Rhap-L-鼠李吡喃糖L-Araf-L-呋喃糖。
本申請中所用術(shù)語“藥用果膠”有別于一般的低級果膠，而在下文中指酯化度(果膠中的有機(jī)酸甲酯化度)低于50的。然而，本發(fā)明不受限于藥用果膠(即，抑制雄性生殖毒性)。
本發(fā)明中使用的果膠可以用本發(fā)明人以前的申請，韓國專利申請(1999年10月19日提交)10-1999-45200號公開的方法制備。根據(jù)本方法，果膠可以通過下述步驟得到干燥柑桔、蘋果、橙、檸檬或類似果物的果肉、把干燥了的果肉切成碎末，水解和提取果膠、然后用膜式過濾器濃縮和干燥。該方法還含有相繼地用堿和酸處理果膠并且用醇去掉水份進(jìn)行提純的步驟。
使用由上述方法制備的高純度果膠，本發(fā)明可以產(chǎn)生優(yōu)良的抑制包括二噁英在內(nèi)的環(huán)境激素造成的雄性生殖毒性。
本申請中所使用的術(shù)語“雄性生殖毒性”指精子數(shù)量減少、精液減少、睪丸素濃度降低、精子活動(dòng)性下降、變性精子數(shù)量增加、生殖器畸形、前列腺疾病和與生殖相關(guān)的其它組織中的類似問題的雄性生育能力下降。
為了達(dá)到本發(fā)明的主要目的，提供含有果膠的藥物組合物，更優(yōu)選地含有藥用果膠的藥物組合物。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供口服的藥物組合物，其含有用于抑制由環(huán)境激素引起的雄性生殖毒性的果膠。因此可以以液體配方形式諸如凝膠、溶液或者懸浮液的形式制備含果膠的組合物，也可以以固體單位劑量形式諸如壓片或者膠囊之類的形式制備含果膠的組合物。制備這種液體配方或者固體單位劑量形式的組合物的方法及這些方法所用的載體是相關(guān)技術(shù)中所公知的。在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以附加地使用分散劑、乳化劑、表面活性劑、流動(dòng)性控制劑、保存劑、調(diào)節(jié)劑等等。
盡管本申請人提出本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選地為口服形式，本申請中所述絕不應(yīng)當(dāng)解釋為限制所述藥物組合物的給藥途徑。本發(fā)明還考慮聯(lián)合用藥。換言之，可以與公知的對環(huán)境激素防護(hù)生育能力有效的成份(例如人參提取物及綠茶提取物)一起進(jìn)行果膠給藥。本發(fā)明所用的果膠可以用藥理上可接受的載體給藥，優(yōu)選地利用適于特定的給藥方法的無毒性載體給藥?？梢园压z配制得以適于公知的給藥方法。
果膠可以配制成不同于上述劑型的其它各種形式，諸如食品，包括保健食品和食物添加劑。
對于口服給藥，配方應(yīng)當(dāng)含有足以產(chǎn)生對抗由環(huán)境激素包括二噁英引起的雄性生殖毒性的抑制作用的量的果膠。因此，本發(fā)明的藥物組合物可以含有每公斤體重1微克至1000毫克量的果膠。果膠的治療有效量按照受藥者的年齡、性別、狀態(tài)、飲食等等確定?！爸委熡行Я俊敝赣行У氐玫礁鶕?jù)本發(fā)明所要求的結(jié)果而沒有任何藥理副作用的量。所述所要求的結(jié)果是抑制附睪重量下降、抑制精子數(shù)量或者活性等的下降。
果膠可以用單一單位劑量的形式給藥，也可以用分開的多劑量形式給藥。


圖1是示出各實(shí)驗(yàn)組的圖表。
圖2是示出果膠對由TCDD引起的雄性生殖毒性的預(yù)防作用的附睪重量關(guān)系的圖表。
圖3是示出果膠對由TCDD引起的雄性生殖毒性的預(yù)3作用的精囊重量關(guān)系的圖表。
圖4是示出果膠對由TCDD引起的雄性生殖毒性的預(yù)防作用的精子活動(dòng)性關(guān)系的圖表。
圖5是示出果膠對由TCDD引起的雄性生殖毒性的預(yù)防作用的精子數(shù)量關(guān)系的圖表。
發(fā)明詳述本發(fā)明人進(jìn)行了以下的實(shí)驗(yàn)研究果膠如何對二噁英引起的雄性生殖毒性起作用。
以下各例說明本發(fā)明而不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1材料和方法(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物三組，每組各含十只四周齡的雄性SD大鼠(斯普拉-道來氏大鼠)，在實(shí)驗(yàn)室中飼養(yǎng)以適應(yīng)環(huán)境。當(dāng)SD大鼠五周齡時(shí)(110～120克)，用之于實(shí)驗(yàn)。
(2)實(shí)驗(yàn)材料避光保存的2，3，7，8-四氯代苯并-p-二噁英(TCDD)(NIH，美國)溶于丙酮，用玉米油稀釋，以15微克/公斤的濃度腹腔內(nèi)一次給藥。果膠溶于消毒蒸餾水中，口服給藥，每天給藥量為50毫克/公斤。
(3)實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分組為(A)組在TCDD給藥之前一周起給以果膠，(B)組僅給以TCDD，(C)組僅給以生理鹽水。各組詳情示于圖1中。
分析及結(jié)果(1)前列腺重量和精囊重量分析分離大鼠的前列腺和精囊，去除連接的脂肪組織后稱重。
結(jié)果用大鼠的體重除前列腺和精囊的重量。對每組十只大鼠的分析結(jié)果如下表1

此結(jié)果詳示于圖2和圖3。
與對照組相比較，給以TCDD的兩組顯示前列腺和精囊對體重的比下降。當(dāng)給以果膠時(shí)，前列腺恢復(fù)了31.2％。然而，精囊重量沒有顯著性改變。
(2)精子活動(dòng)性分析切下右后附睪后置于預(yù)熱至37.5℃的含有35毫升的HBSS(漢克氏平衡氯化鈉溶液)的平皿中。避開血管，用手術(shù)刀(15號)在附睪上切兩或三個(gè)切口。把平皿加蓋然后緩慢攪拌。用滴管移液兩或三次后把一或兩滴滴至加熱至37.5℃的載玻片上。用100倍的光學(xué)顯微鏡觀察總數(shù)200個(gè)精子，計(jì)算具有活動(dòng)性的精子百分比。
結(jié)果觀察的200個(gè)精子中有活動(dòng)性的精子百分比如下表2

該結(jié)果詳示于圖4中。
在給以TCDD的兩組中，精子的活動(dòng)性顯著下降。給以果膠的組活動(dòng)性提高了40.5％。
(3)精子數(shù)量分析連皮剝離的右睪丸進(jìn)行稱重，然后投入到錐形管中，管內(nèi)加入20毫升消毒蒸餾水。把睪丸進(jìn)行均漿后用超聲波處理5分鐘。取出2毫升，加8毫升消毒蒸餾水稀釋五次。把稀釋了的睪丸移入血球計(jì)數(shù)器，在400倍的光學(xué)顯微鏡下對精子計(jì)數(shù)。表達(dá)式為精子數(shù)量×矩形因數(shù)×血球計(jì)數(shù)器因數(shù)×稀釋倍數(shù)/睪丸重量＝精子數(shù)量×1×104×(20×5)/睪丸重量結(jié)果表3

該結(jié)果詳示于圖5。
由TCDD顯著降低了的精子數(shù)量通過果膠給藥提高了21.3％。
TCDD公知為二噁英類中最強(qiáng)的環(huán)境激素。該實(shí)驗(yàn)還表明給以TCDD顯著地降低了精子數(shù)量、降低了精子活動(dòng)性、并且減輕了精囊和前列腺的重量。相反，果膠抑制了作為環(huán)境激素的TCDD的作用，并且提高了精子的數(shù)量和活動(dòng)性，增加了精囊和前列腺的重量。因此，可見果膠有效地防止由包括二噁英的環(huán)境激素造成的雄性生殖力下降。
如上例所證實(shí)，果膠對于由于二噁英中毒產(chǎn)生的精囊和前列腺重量降低及精子數(shù)量和活動(dòng)性下降有抑制或者預(yù)防作用。因此，果膠可以用作對于包括二噁英的環(huán)境激素造成的雄性生殖力下降的預(yù)防劑/治療劑。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，含有治療有效量的果膠，用于抑制雄性生殖毒性。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述果膠的治療有效量是每公斤體重1微克至1000毫克。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物口服給藥。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還包括藥理上可接受的載體。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述的雄性生殖毒性包括精子數(shù)量降低、精液減少、睪丸素濃度降低、精子活動(dòng)性下降、變性精子數(shù)量增加，生殖器畸變、前列腺疾病、及其它與生殖相關(guān)的組織的問題。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還含有任何其它的具有保護(hù)雄性生殖力的藥性的有效成份。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有起抑制雄性生殖毒性作用的果膠的藥物組合物。該藥物組合物以受藥者每公斤體重1微克至1000毫克的有效量口服給藥。它可以用作為對于包括二噁英的環(huán)境激素產(chǎn)生的精子數(shù)量和活動(dòng)性下降和雄性不育的預(yù)防劑/治療劑。
文檔編號A61P5/24GK1398186SQ99817060
公開日2003年2月19日 申請日期1999年12月30日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月24日
發(fā)明者金吉南, 李奉雨 申請人:株式會(huì)社韓國新科學(xué)技術(shù)中心