一種提高奶牛受胎率的制劑及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種提高奶牛受胎率的制劑及其制備 方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們生活水平的不斷提高，每年的牛奶消費(fèi)量日益增大，但近兩年國(guó)內(nèi)能繁 母牛的數(shù)量在迅速下降，如何提高奶牛的繁殖效率關(guān)系著奶牛的擴(kuò)繁速度和養(yǎng)殖戶的切身 利益，也是規(guī)模場(chǎng)生產(chǎn)管理的一項(xiàng)重要指標(biāo)。目前常用的提高奶牛繁殖效率的藥物主要為 促性腺激素類藥物，主要是促進(jìn)母牛卵巢機(jī)能，如促進(jìn)卵泡發(fā)育、排卵和黃體的分泌功能， 克服由此造成的繁殖障礙，但會(huì)影響到成熟卵子的質(zhì)量，不能還好的滿足提高奶牛繁殖效 率的要求。
[0003] 褪黑素（MT)是一種主要由松果體分泌的激素，化學(xué)結(jié)構(gòu)為N-乙?；?5-羥色胺， 在動(dòng)物的生長(zhǎng)和繁殖中有重要的調(diào)控功能。動(dòng)物繁殖過(guò)程中新陳代謝十分旺盛，會(huì)產(chǎn)生大 量的活性氧。活性氧會(huì)造成細(xì)胞DNA損傷，引起顆粒細(xì)胞凋亡，1個(gè)卵泡中只要有10%的顆 粒細(xì)胞凋亡就會(huì)導(dǎo)致卵泡閉鎖（ManabeN等，2004)。一方面，褪黑素可通過(guò)與卵巢上抗氧 化劑膜受體或核受體結(jié)合直接參與卵泡的發(fā)育及排卵，維持固醇類激素的穩(wěn)態(tài)；通過(guò)其抗 氧化作用清除活性氧，抑制卵泡顆粒細(xì)胞凋亡，確保卵泡發(fā)育及排卵過(guò)程的順利進(jìn)行。另一 方面，研宄表明褪黑素可以促進(jìn)卵母細(xì)胞的體外成熟和胚胎的體外發(fā)育。在牛胚胎的體外 發(fā)育液中添加MT的試驗(yàn)組囊胚發(fā)育率68. 85% (42/61)顯著高于對(duì)照組50. 79% (32/63) (Papis等，2007)。以上研宄說(shuō)明：褪黑素可以通過(guò)其抗氧化作用提高奶牛繁殖效率。
[0004] 奶牛繁殖是影響奶牛生產(chǎn)性能發(fā)揮的關(guān)鍵因素之一。研宄發(fā)現(xiàn)超氧化物是卵泡成 熟和排卵過(guò)程中的重要因子，但超氧化物會(huì)直接降低成熟卵子的質(zhì)量。利用皮下注射復(fù)合 抗氧化劑的方法，有助于奶牛卵子成熟過(guò)程中抗氧化物峰值的形成，促進(jìn)抗氧化物在卵泡 內(nèi)儲(chǔ)備，在卵泡成熟破裂后消除超氧化物對(duì)卵子質(zhì)量的影響。該方法簡(jiǎn)便，易操作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種提高奶牛受胎率的制 劑及其制備方法與應(yīng)用。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] -種提高奶牛受胎率的制劑，所述制劑為注射劑，其有效成分為褪黑素和維生素 E0
[0008] 進(jìn)一步地，所述褪黑素的濃度為KT3~lO^iol/L。
[0009] 作為優(yōu)選，所述褪黑素的濃度為l(T2m〇l/L。
[0010] 進(jìn)一步地，所述維生素E的濃度為KT6~l(T4m〇l/L。
[0011] 作為優(yōu)選，所述維生素E的濃度為l(T5m〇l/L。
[0012] 更進(jìn)一步地，所述制劑的輔料為75%乙醇溶液或無(wú)水乙醇。
[0013] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述制劑的制備方法，所述方法為：將維生素E溶于75%乙 醇溶液或無(wú)水乙醇，然后添加褪黑素，整個(gè)操作過(guò)程需在暗室內(nèi)（避光）進(jìn)行。
[0014] 本發(fā)明還提供了所述制劑在提高奶牛繁殖效率上的應(yīng)用。
[0015] 進(jìn)一步地，在奶牛配種時(shí)通過(guò)皮下注射所述制劑，提高奶牛受胎率。
[0016] 作為優(yōu)選，注射劑量為2mL。
[0017] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0018] 本發(fā)明提供的提高奶牛受胎率的制劑，將褪黑素與維生素E以一定的比例溶解， 在奶牛配種的通過(guò)皮下注射，可以提高奶牛的受胎率，并為進(jìn)一步開(kāi)展提高奶牛繁殖效率 的研宄提供有益的參考。
[0019] 本發(fā)明通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，含有濃度為KT2HI0VL褪黑素的制劑能夠使奶牛的情 期受胎率提高9-12個(gè)百分點(diǎn)，達(dá)到20-50%。充分說(shuō)明了配種同時(shí)體外注射本發(fā)明制劑能 夠降低活性氧自由基（Reactiveoxygenspecies，ROS)對(duì)卵子質(zhì)量的損傷，促進(jìn)精卵結(jié)合 實(shí)現(xiàn)受精。
[0020] 此外，本發(fā)明通過(guò)動(dòng)物實(shí)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，維生素E對(duì)含有褪黑素的制劑在提高使奶牛 情期受胎率方面有明顯的促進(jìn)作用，使用根據(jù)權(quán)利要求3和5制作的制劑可以提高奶牛 情期受胎率（44.09±0.76% )，顯著高于不含維生素E(37.35±0.88% )或只含維生素 E(37. 29 ±0. 49% )的制劑。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中24小時(shí)內(nèi)荷斯坦奶牛體內(nèi)MT的變化規(guī)律。
[0022] 圖2為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中奶牛產(chǎn)后和配種時(shí)體內(nèi)抗氧化劑的變化。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0024] 以下實(shí)施例中使用的試劑和材料均為市售商品。
[0025] 褪黑素要求純度達(dá)到99. 9 %。
[0026] 實(shí)施例1提尚奶牛受胎率的制劑及其制備方法
[0027] 原料：褪黑素、維生素E;
[0028] 制備方法：準(zhǔn)確稱量0.4307mg維生素E、232. 27mg褪黑素，先將0.4307mg維生素E 用75%乙醇溶液溶解于IOOmL容量瓶，攪拌均勻，然后再加入232. 27mg褪黑素，攪拌均勻， 定容至100mL，最后分裝成2mL的注射劑量，所有操作均在暗室中完成。
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 同實(shí)施例1，區(qū)別在于，所述褪黑素的濃度為K^mol/L，所述維生素E的濃度為 l(T4m〇l/L，且所述維生素E用無(wú)水乙醇溶解。
[0031] 實(shí)施例3
[0032] 同實(shí)施例1，區(qū)別在于，所述褪黑素的濃度為l(T3m〇l/L，所述維生素E的濃度為 10 6mol/L〇
[0033] 實(shí)驗(yàn)例1
[0034] 1、24小時(shí)內(nèi)荷斯坦奶牛體內(nèi)MT的變化規(guī)律
[0035] 經(jīng)產(chǎn)荷斯坦奶牛7頭（1-2胎），正常采食、飲水和擠奶。從早晨8點(diǎn)開(kāi)始每2小 時(shí)靜脈采血10毫升，離心取血清備用，直到次日早晨8點(diǎn)。用液相色譜法檢測(cè)血清中MT濃 度，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1。
[0036] 通過(guò)圖1可知，經(jīng)產(chǎn)荷斯坦奶牛24小時(shí)內(nèi)褪黑素分泌存在明顯的晝夜節(jié)律性變 化，夜間激素含量高，白天含量低。
[0037] 2、奶牛產(chǎn)后和配種時(shí)體內(nèi)MT的變化
[0038] 選擇經(jīng)產(chǎn)荷斯坦奶牛22頭，從產(chǎn)后開(kāi)始每4天的早晨8點(diǎn)采靜脈采血10毫升，離 心取血清備用，直至該奶牛配種完成。用液相色譜法檢測(cè)血清中MT濃度，首次配種成功的 荷斯坦奶牛從產(chǎn)后至配種時(shí)血液中MT濃度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖2。
[0039] 通過(guò)圖2可知，經(jīng)產(chǎn)荷斯坦奶牛產(chǎn)后血清中褪黑素濃度隨時(shí)間升高，到發(fā)情配種 時(shí)奶牛血清中褪黑素濃度達(dá)到最高。
[0040] 3、配種的同時(shí)頸部皮下注射
[0041] 8-9月份，對(duì)經(jīng)產(chǎn)荷斯坦奶牛（1-3胎）產(chǎn)后首次配種時(shí)皮下注射實(shí)施例1所述制 劑2mL，采取隨機(jī)注射的方式（隔一頭注射的方式，第一頭注射，第二頭不注射，第三頭注 射，以此類推）。
[0042] 4、奶牛受胎率檢測(cè)
[0043] 配種50-60天后，采用直腸檢查的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)荷斯坦奶牛進(jìn)行妊娠檢查，統(tǒng)計(jì)妊 娠率，發(fā)現(xiàn)經(jīng)產(chǎn)奶牛配種時(shí)同時(shí)注射本發(fā)明所述制劑，可以顯著提高奶牛受胎率20%以上， 最高的提高量接近50% (見(jiàn)表1、表2)。其中在夏季正常受胎率略低的情況下，本發(fā)明所述 制劑的提高奶牛受胎率的效果更加突出（見(jiàn)表1)。
[0044] 表1規(guī)?；?chǎng)經(jīng)產(chǎn)荷斯坦奶牛配種同時(shí)注射本發(fā)明制劑的受胎率情況
[0045]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種提高奶牛受胎率的制劑，其特征在于，所述制劑為注射劑，其有效成分為褪黑素 和維生素E。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其特征在于，所述褪黑素的濃度為KT3~lO^iol/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其特征在于，所述褪黑素的濃度為l(T2m〇l/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述維生素E的濃度為1(T6~ 10 4mol/L〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其特征在于，所述維生素E的濃度為l(T5m〇l/L。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制劑，其特征在于，所述制劑的輔料為75%乙醇溶液或無(wú)水 乙醇。
7. 權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述制劑的制備方法，其特征在于，所述方法為：將維生素E溶 于75%乙醇溶液或無(wú)水乙醇，然后添加褪黑素，操作過(guò)程避光進(jìn)行。
8. 權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述制劑在提高奶牛繁殖效率上的應(yīng)用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，在奶牛配種時(shí)通過(guò)皮下注射所述制劑，提 尚奶牛受胎率。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，注射劑量為2mL。
【專利摘要】本發(fā)明涉及畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域，具體提供一種提高奶牛受胎率的制劑及其制備方法與應(yīng)用。所述制劑的有效成分為濃度為10-3～10-1mol/L的褪黑素和濃度為10-6～10-4mol/L的維生素E(Vitamin E，Ve)。本發(fā)明通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，在配種同時(shí)體外注射本發(fā)明提供的制劑，能夠降低活性氧自由基(Reactive oxygen species，ROS)對(duì)卵子質(zhì)量的損傷，促進(jìn)精卵結(jié)合實(shí)現(xiàn)受精?？梢杂行岣吣膛Ｊ芴ヂ剩岣吣膛５姆敝承?。
【IPC分類】A61K31-355, A61K31-4045, A61P15-08
【公開(kāi)號(hào)】CN104721184
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510085043
【發(fā)明人】劉國(guó)世, 史建民, 路永強(qiáng), 何長(zhǎng)久, 王靜, 任康, 王艷, 姜小平, 王天坤
【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年6月24日
【申請(qǐng)日】2015年2月16日