中藥復(fù)方藥物組合物的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方藥物組合物的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為"腎藏精"、"腎主生殖"，腎與女性生殖功能關(guān)系密切。補(bǔ)腎中藥和 方劑對(duì)女性生殖功能的調(diào)控在臨床上有明顯的作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，臨床上補(bǔ)腎中藥有促進(jìn) 卵泡成熟、增加卵泡數(shù)量和改善卵巢儲(chǔ)備功能的作用[1，2-6]。近年實(shí)驗(yàn)室研宄發(fā)現(xiàn)，含補(bǔ) 腎中藥鼠血清加入卵細(xì)胞體外培養(yǎng)基中，可促進(jìn)小鼠未成熟卵細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育，主要是促進(jìn) 卵細(xì)胞核成熟，并且不增加成熟卵細(xì)胞細(xì)胞骨架的異常率。并發(fā)現(xiàn)其作用機(jī)制與增強(qiáng)卵細(xì) 胞成熟促進(jìn)因子調(diào)節(jié)亞基CyclinBl的表達(dá)有關(guān)。
[0003] 在臨床治療中，為保持接受化療、放療或?qū)π韵賹?shí)施手術(shù)患者的生育能力，需進(jìn)行 卵母細(xì)胞、胚胎或卵巢組織的冷凍儲(chǔ)存。但是成熟卵細(xì)胞對(duì)溫度變化敏感以及修復(fù)細(xì)胞內(nèi) 損傷的能力較低，且在冰晶的形成過(guò)程中會(huì)導(dǎo)致紡垂體損傷或減數(shù)分裂期出現(xiàn)異常，因此， 臨床很少采用卵子冷凍。胚胎的冷凍效果相對(duì)較好，但所需時(shí)間較長(zhǎng)，會(huì)耽誤患者的治療， 且只適用于那些已經(jīng)結(jié)婚或同意接受供精的患者，不適于青春前期的兒童，因而對(duì)癌癥患 者的臨床應(yīng)用也有一定局限性。而將卵巢組織冷凍是將數(shù)百個(gè)不成熟卵泡保存起來(lái)，既不 需要卵巢刺激，也不會(huì)耽誤癌癥治療，因而在保存婦女生育能力方面具有較大潛力。
[0004] 但是，卵巢組織經(jīng)冷凍后再?gòu)?fù)蘇過(guò)程必定對(duì)生殖細(xì)胞的功能有一定損傷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種中藥復(fù)方藥物組合物的新用 途。具體地，是在制備治療或治療卵巢損傷和/或者卵巢衰退的藥物或者培養(yǎng)液中的用途。
[0006] 本發(fā)明含有下述重量配比的原料藥在制備預(yù)防和/或治療卵巢損傷和/或者卵巢 衰退的藥物或者培養(yǎng)液中的用途：熟地18-30份、山茱萸9-12份、山藥8-16份、枸杞子9-12 份、菟絲子8-16份、鹿角膠8-16份、杜仲1-16份、肉桂1-9份、當(dāng)歸1-16份、制附子1-16 份。
[0007] 優(yōu)選地，所述原料藥的重量配比如下：熟地24份、山茱萸9-12份、山藥12份、枸杞 子9-12份、菟絲子12份、鹿角膠12份、杜仲12份、肉桂6份、當(dāng)歸9份、制附子6份。進(jìn)一 步優(yōu)選地，所述原料藥的重量配比如下：熟地24份、山茱萸12份、山藥12份、枸杞子12份、 菟絲子12份、鹿角膠12份、杜仲12份、肉桂6份、當(dāng)歸9份、制附子6份。
[0008] 其中，所述卵巢損傷是凍融引起的卵巢損傷。
[0009] 本發(fā)明還提供了一種卵巢組織的培養(yǎng)液，它以常用細(xì)胞培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添 加有2~20% (v/v)的含藥血清；
[0010] 所述含藥血清按照如下方法制備：
[0011] (1)按照前述配比取原料藥，制備成為超細(xì)粉，以5.Og/kg的劑量施用于鼠，施用 方式為口服給藥；
[0012] (2)給藥30min、60min、90min后，眼底靜脈叢取血，分別靜置、離心得上清液，混 勻，即為含藥血清。
[0013] 所述常用細(xì)胞培養(yǎng)基為a-MEM培養(yǎng)基、DMEM-高糖培養(yǎng)基、DMEM-低糖培養(yǎng)基、 RPMI-1640培養(yǎng)基、DMEM/F12培養(yǎng)基或M-199培養(yǎng)基。
[0014] 所述含藥血清的濃度為3~5 % (v/v)。
[0015] 所述誘導(dǎo)液中還添加有10~20% (v/v)的FBS、0. 5~1. 5 %的青鏈霉素和/或 50 ~150IU/L的HMG。
[0016] 所述FBS的添加量為10% (v/v);青鏈霉素的添加量為1 %;HMG的添加量為 100IU/L。
[0017] 本發(fā)明還提供了一種離體卵巢組織的凍存液，它是添加有1.5mol/L乙二醇、 0.lmol/L蔗糖以及10%~15%的含藥血清的PBS溶液；所述含藥血清按照如下方法制備：
[0018] (1)按照權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述配比取原料藥，制成口服液，按照生藥量 5. 2g/kg/d的劑量施用于鼠，施用方式為口服給藥，連續(xù)施用5周；
[0019] (2)股動(dòng)脈取血，靜置、離心得上清液，即為含藥血清。
[0020] 綜上，本發(fā)明右歸丸可以有效預(yù)防和治療卵巢組織損傷/衰退，尤其是對(duì)凍融導(dǎo) 致的卵巢組織損傷/衰退的防和治療效果確切，可以制備成為預(yù)防和治療卵巢組織損傷/ 衰退的藥物、培養(yǎng)液和凍存液，使得癌癥患者的卵巢移植成為可能，應(yīng)用前景非常優(yōu)良。
[0021] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0022] 以下通過(guò)實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō) 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1.各組卵細(xì)胞第一極體出現(xiàn)的代表性圖片，A、空白組成熟卵母細(xì)胞（第一極 體）；B、空白血清組成熟卵母細(xì)胞（第一極體）C、FSH組成熟卵母細(xì)胞（第一極體）D、 右歸丸血清組成熟卵母細(xì)胞（第一極體）（程序化凍存）
[0024] 圖2各組培養(yǎng)基中E2濃度比較圖，注：※與Blank組相比，P= 0.002;▲與Blank 組相比，P= 〇? 〇〇〇 ;★與BlankSerum組相比，P= 0? 021 ; * 與Blank組相比，P= 0? 002〇
【具體實(shí)施方式】
[0025] 實(shí)施例1本發(fā)明藥物組合物的制備（右歸丸）
[0026] 稱(chēng)取原料：熟地24g、山藥12g、山茱萸9g、枸杞子12g、英絲子12g、鹿角膠12g、杜 仲12g、肉桂6g、當(dāng)歸9g、制附子6g。
[0027] 制備方法：將熟地蒸爛杵膏，余為細(xì)末，烘干密封保存，兌水服用，或加煉蜜為丸， 如彈子大。每嚼服二三丸（6~9g)，以滾白湯送下。
[0028] 實(shí)施例2本發(fā)明藥物組合物的制備
[0029] 稱(chēng)取原料：熟地30g、山茱萸12g、山藥16g、枸杞子12g、英絲子16g、鹿角膠16g、杜 仲lg、肉桂lg、當(dāng)歸lg、制附子lg。
[0030] 制備方法：將熟地蒸爛杵膏，余為細(xì)末，烘干密封保存，兌水服用，或加煉蜜為丸， 如彈子大。每嚼服二三丸（6~9g)，以滾白湯送下。
[0031] 實(shí)施例3本發(fā)明藥物組合物的制備
[0032] 稱(chēng)取原料：熟地18g、山茱萸9g、山藥8g、枸杞子9g、英絲子8g、鹿角膠8g、杜仲 16g、肉桂9g、當(dāng)歸16g、制附子16g。
[0033] 制備方法：將熟地蒸爛杵膏，余為細(xì)末，烘干密封保存，兌水服用，或加煉蜜為丸， 如彈子大。每嚼服二三丸（6~9g)，以滾白湯送下。
[0034] 上述原料可以用原生藥，也可以用原生藥的炮制品。
[0035] 以下是通過(guò)藥效實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。
[0036] 試驗(yàn)例1右歸丸預(yù)防卵巢組織損傷/衰退
[0037] 1材料與方法
[0038] I. 1試驗(yàn)藥物
[0039] 右歸丸：熟地、山茱萸、山藥、枸杞子、菟絲子、鹿角膠、杜仲、當(dāng)歸、肉桂、制附子按 8:3:4:4:4:4:4:3:2:2比例稱(chēng)取，除鹿角膠烊化其余均水煎，水煎方法：浸泡30min后水煎， 分別煎煮20min、40min、60min后將三次的藥液混合，鹿角膠加溫熔于其中，制成1:1的水溶 液，4°C保存。
[0040] 選取大鼠32只，雌雄各半，體重（243.8±18.2)g，右歸丸組各16只。按成