一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]水蛭是一味傳統(tǒng)中藥，歷史悠久，中醫(yī)認(rèn)為水蛭有破血、逐淤、通經(jīng)等功效。自從二十世紀(jì)五十年代從醫(yī)用水蛭中分離出具有抗凝作用的物質(zhì)一水蛭素后，國內(nèi)外已對其進(jìn)行了廣泛而深入的藥理學(xué)研宄。水蛭素為最強(qiáng)的凝血酶抑制劑，并可阻止纖維蛋白凝固，對各種血栓病都有效。
[0003]天然水蛭素是從水蛭唾液腺分泌物中提取得到的一種由65或66個(gè)氨基酸殘基組成的、無糖基化的單鏈小分子酸性單鏈多肽。目前己發(fā)現(xiàn)天然水蛭素存在十余種變體，相互間只有幾個(gè)氨基酸殘基的差別，具有85%以上的結(jié)構(gòu)同源性。天然水蛭素分子量為7000Da左右。
[0004]水蛭品種繁多，其中菲牛蛭中水蛭素含量最高。基因重組水蛭素雖然有天然水蛭素類似的結(jié)構(gòu)和功能，但是藥效要差很多。天然水蛭素仍然是最好的水蛭素藥物。水蛭素可以口服，高純度水蛭素也可以用于靜脈注射，但是中藥靜脈注射常出現(xiàn)過敏反應(yīng)而產(chǎn)生嚴(yán)重后果，因此口服是最安全的。中國發(fā)明專利200410037695.7 “一種水蛭素凍干粉針制劑及其制備方法”認(rèn)為:水蛭素良好的藥效不僅僅因?yàn)樗嗡氐淖饔?，還有水蛭唾液中其它活性成分的參與作用共同形成的。因此，充分利用水蛭全粉將會充分發(fā)揮其功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制備方法。
[0006]本發(fā)明，包括以下步驟:
Cl)以新鮮的菲牛輕為原料，清水沖洗去除雜物，浸入50?10ppm 二氧化氯水溶液消毒3?5min，瀝干備用；
(2)將消毒好的菲牛蛭置入勻漿機(jī)，加入菲牛蛭重量2?3倍的無菌水進(jìn)行勻漿；
(3)將勻漿液倒入酶解容器中，按新鮮的牛蛭原料計(jì)，加入1.0?1.5wt%的甲殼質(zhì)酶和0.3?0.6wt%的膠原酶，在pH值為4.0?5.0，溫度為35?40°C的條件下水解I?2h，至菲牛蛭軀體溶化，升溫到90°C滅酶1min ;
(4)冷卻后用2mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7，在-20?-30°C條件下預(yù)冷180?240min，然后進(jìn)行真空冷凍干燥得到一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉；
(5)采用錫薄袋進(jìn)行包裝。
[0007]本發(fā)明的原理:利用甲殼質(zhì)酶和膠原酶，在pH值為4.0?5.0，溫度為35?40°C條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)。甲殼質(zhì)酶能將甲殼素分解為乙?；咸烟前?，膠原酶能分解膠原蛋白，消化細(xì)胞間質(zhì)。兩種酶一起作用可以分解水蛭軀體組織，使水蛭素完全釋放，從而制備富含高活性水蛭素的水蛭全粉。
[0008]本發(fā)明，具有以下有益效果: 1.能夠使水蛭體內(nèi)的水蛭素全部釋放，水蛭素包含于唾液腺和水蛭軀體中，且以各種化學(xué)鍵的形式與各組織相結(jié)合，通常提取率小于40%。采用雙酶法可以使包括唾液腺的整個(gè)軀體水解，這樣可以所有水蛭素全部變成游離狀態(tài)，有利于人體對水蛭素的吸收和利用。同時(shí)水蛭全粉包含了水蛭各種組織及唾液中的其它活性成分，有助于提高水蛭素的抗凝血活性。
[0009]2.制備過程包括消毒和加溫處理，可以保證所得產(chǎn)品符合食品安全要求，可直接服用。
[0010]3.整個(gè)制備過程條件溫和，無污染排放。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1、取新鮮的菲牛輕20g，清水沖洗去除雜物，浸入10ppm 二氧化氯水溶液消毒3min，瀝干備用；將消毒好的菲牛蛭置入勻漿機(jī)，加入40 g無菌水進(jìn)行勻漿；將勻漿液倒入燒杯中，加入0.22g的甲殼質(zhì)酶和0.1g的膠原酶，在pH值為5.0，溫度為37°C的條件下水解1.0 h，菲牛蛭軀體溶化，升溫到90°C滅酶lOmin。冷卻后用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7，在-30°C條件下預(yù)冷240min，然后進(jìn)行真空冷凍干燥得到一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉。采用錫薄袋進(jìn)行包裝。經(jīng)檢測該粉抗凝血活性為580AT-U/g。
[0012]實(shí)施例2、取新鮮的菲牛輕20 g，清水沖洗去除雜物，浸入50ppm 二氧化氯水溶液消毒5min，瀝干備用；將消毒好的菲牛蛭置入勻漿機(jī)，加入60 g無菌水進(jìn)行勻漿；將勻漿液倒入燒杯中，加入0.25g的甲殼質(zhì)酶和0.12g的膠原酶，在pH值為4.0，溫度為40°C的條件下水解2h，菲牛蛭軀體溶化，升溫到90°C滅酶lOmin。冷卻后用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7，在-30°C條件下預(yù)冷180min，然后進(jìn)行真空冷凍干燥得到一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉。采用錫薄袋進(jìn)行包裝。經(jīng)檢測該粉抗凝血活性為560AT-U/g。
[0013]實(shí)施例3、取新鮮的菲牛蛭20 g，清水沖洗去除雜物，浸入75ppm 二氧化氯水溶液消毒4min，瀝干備用；將消毒好的菲牛蛭置入勻漿機(jī)，加入50 g無菌水進(jìn)行勻漿；將勻漿液倒入燒杯中，加入0.20g的甲殼質(zhì)酶和0.12g的膠原酶，在pH值為4.0，溫度為35°C的條件下水解1.5h，菲牛蛭軀體溶化，升溫到90°C滅酶lOmin。冷卻后用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7，在-30°C條件下預(yù)冷240min，然后進(jìn)行真空冷凍干燥得到一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉。采用錫薄袋進(jìn)行包裝。經(jīng)檢測該粉抗凝血活性為552AT-U/g。
[0014]實(shí)施例4、取新鮮的菲牛輕209，清水沖洗去除雜物，浸入10ppm 二氧化氯水溶液消毒3min，瀝干備用；將消毒好的菲牛蛭置入勻漿機(jī)，加入409無菌水進(jìn)行勻漿；將勻漿液倒入燒杯中，加入0.25g的甲殼質(zhì)酶和0.1lg的膠原酶，在pH值為4.5，溫度為38°C的條件下酶1.8h，菲牛蛭軀體溶化，升溫到90°C滅酶lOmin。冷卻后用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7，在-30°C條件下預(yù)冷240min，然后進(jìn)行真空冷凍干燥得到一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉。采用錫薄袋進(jìn)行包裝。經(jīng)檢測該粉抗凝血活性為558AT-U/g。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制備方法，包括下列步驟: (1)以新鮮的菲牛輕為原料，清水沖洗去除雜物，浸入50?10ppm二氧化氯水溶液消毒3?5min，瀝干備用； (2)將消毒好的菲牛蛭置入勻漿機(jī)，加入菲牛蛭重量2-3倍的無菌水進(jìn)行勻漿； (3)將勻漿液倒入酶解容器中，按新鮮的牛蛭原料計(jì)，加入1.0?1.5wt%的甲殼質(zhì)酶和.0.3?0.6wt%的膠原酶，在pH值為4.0?5.0，溫度為35?40°C的條件下水解I?2h，至菲牛蛭軀體溶化，升溫到90°C滅酶1min ; (4)冷卻后用2mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7，在-20?-30°C條件下預(yù)冷180?.240min，然后進(jìn)行真空冷凍干燥得到一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉； (5)采用錫薄袋進(jìn)行包裝。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制備方法，以新鮮的菲牛蛭為原料，清水沖洗去除雜物，浸入50～100ppm二氧化氯水溶液消毒3～5min，加入菲牛蛭重量2—3倍的無菌水勻漿后，采用甲殼質(zhì)酶和膠原酶，在pH值為4.0～5.0，溫度為35～40℃的條件下水解1～2h，至菲牛蛭軀體溶化，升溫到90℃滅酶10min，冷卻后調(diào)節(jié)pH值至7，然后進(jìn)行真空冷凍干燥得到水蛭全粉。采用雙酶法可以使包括唾液腺的整個(gè)軀體水解，這樣可以所有水蛭素全部變成游離狀態(tài)，使水蛭體內(nèi)的水蛭素全部釋放，有利于人體對水蛭素的吸收和利用。同時(shí)，水蛭全粉包含了水蛭各種組織及唾液中的其它活性成分，有助于提高水蛭素的抗凝血活性。
【IPC分類】A61K9/19, A61K38/58, A61K35/62, A61P7/02
【公開號】CN104906142
【申請?zhí)枴緾N201510314664
【發(fā)明人】方練, 方卓榕, 余以剛
【申請人】廣東庭顥藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年6月10日