一種復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法及應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 復(fù)方板藍(lán)根顆粒記載于中國藥典標(biāo)準(zhǔn)，處方為板藍(lán)根2000g、大青葉3000g、阿斯 巴坦120g糊精450g，以上二味藥材，加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，濾過，合 并濾液，濃縮至相對密度為1. 10~1. 30(60°C )的清膏，加入乙醇使含醇量至71%，攪勻， 靜置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1. 20 (60°C )的清膏，加入糊精， 混勻，再加阿斯巴坦，沸騰干燥，制成顆粒，即得。清熱解毒，涼血。用于溫病發(fā)熱，出斑，風(fēng) 熱感冒，咽喉腫爛，流行性乙腦型腦炎，肝炎，腮腺炎。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有復(fù)方板藍(lán)根顆粒在提取制備方面采用超臨界技術(shù)的報(bào)道，而 采用水提取等方法，工藝粗糙、復(fù)雜、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影 響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制 備方法。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種復(fù)方板藍(lán)根顆粒在制備抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株 HEB增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法，由板藍(lán)根2000g、大青葉3000g作為原料藥制 成，所述的方法由下列步驟組成：取上述藥材加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶 劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流 量l-3ml/g生藥· min，萃取時(shí)間150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，加阿斯巴坦 120g糊精450g，制粒，制備成顆粒劑，每袋重3g。
[0008] 所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法，所述C02超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體 積百分比為5%。
[0009] 所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法，所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度 40°C，C02 流量 2ml/g 生藥· min，萃取時(shí)間 160min。
[0010] 所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒在制備抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖藥物中的應(yīng)用，復(fù)方板 藍(lán)根顆粒由板藍(lán)根2000g、大青葉3000g作為原料藥制成，制備方法為：取板藍(lán)根2000g、大 青葉3000g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百 分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生藥· min，萃取時(shí)間 150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，加阿斯巴坦120g糊精450g，制粒，制備成顆粒 劑，每袋重3g。
[0011] 所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒在制備抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖藥物中的應(yīng)用，其特征 在于復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法中所述C02超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分 比為5%。
[0012] 所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒在制備抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖藥物中的應(yīng)用，其特征 在于復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法中所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02 流量2ml/g生藥· min，萃取時(shí)間160min。
[0013] 現(xiàn)有技術(shù)中，復(fù)方板藍(lán)根顆粒每袋3g，口服，一次1袋，一日3次，采用本發(fā)明制備 成的復(fù)方板藍(lán)根顆粒每袋3g，但含有的藥材量比原來多，在同樣服用量的情況下具有更多 活性成分。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 以下通過實(shí)施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0015] 實(shí)施例1 :取板藍(lán)根2000g、大青葉3000g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為 夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力30MPa，溫度30°C，C02流量 lml/g生藥· min，萃取時(shí)間180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，加阿斯巴坦120g糊精 450g，制粒，制備成顆粒劑，每袋重3g。
[0016] 實(shí)施例2 :取板藍(lán)根2000g、大青葉3000g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為 夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力15MPa，溫度50°C，C02流量 lml/g生藥· min，萃取時(shí)間180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，加阿斯巴坦120g糊精 450g，制粒，制備成顆粒劑，每袋重3g。
[0017] 實(shí)施例3 :取板藍(lán)根2000g、大青葉3000g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為 夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量 2ml/g生藥· min，萃取時(shí)間160min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，加阿斯巴坦120g糊精 450g，制粒，制備成顆粒劑，每袋重3g。
[0018] 實(shí)施例4 :復(fù)方板藍(lán)根顆粒抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖的實(shí)驗(yàn)研宄資料
[0019] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0020] I. 1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株：人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+10% FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0021] 1. 2實(shí)驗(yàn)藥物：研宄藥物：本發(fā)明復(fù)方板藍(lán)根顆粒：按實(shí)施例3方法制備。藥液儲(chǔ) 液：稱取IOOmg復(fù)方板藍(lán)根顆粒內(nèi)容物，混懸于5ml無水乙醇中，0. 2 μπι濾器過濾，500 μ 1 doff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)0. 2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0022] L 3 實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM(GIBCO 公司 Cat. No. 12100-061Lot. No. 758137);胎牛血清 (浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No.11810-033Lot. No. 1088387) Jrypsin(AMRESC0 公司批號(hào)：2010/04) ;EDTA(AMRESCO 公司批號(hào)：2009/10) ;Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號(hào)：2010242); Str印tomycin Sulfate(AMRESO)公司批號(hào)：2010382);無水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司 批號(hào)：080310182) ;MTT(Biosharp 批號(hào)：0793) ;PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；
[0023] I. 4實(shí)驗(yàn)器材：萊卡倒置顯微鏡（德國Leica型號(hào)：DMlL);可見-紫外光微孔板檢 測儀（美國MD公司型號(hào)：SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號(hào)：3111);超凈臺(tái)（蘇 凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào)：SW-CJ-ZFD);純水儀（美國Spring公司型號(hào)：S/N 020579);精 密移液器（法國吉爾森公司型號(hào)：P2);電子天平（德國賽多利斯有限公司型號(hào)：BT323S); 全自動(dòng)高壓滅菌鍋（日本SANK)公司型號(hào)：MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密 實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào)：DHG9123A);冰箱（西門子公司型號(hào)：KG18V21TI);液氮罐（CBS型號(hào)： 2001);低速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)：KA-1000) ;0. 2μπι濾器（MILLIPORE型號(hào)： SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿（NEST公司）、96孔培養(yǎng)板（NEST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移 液管、Tips若干。
[0024] 2實(shí)驗(yàn)方法：1)HEB細(xì)胞用DMEM+10% FBS于37°C、5% C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（IOcm培 養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0. 25%胰蛋 白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將 其轉(zhuǎn)入離心管中，1000 rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。2)將細(xì)胞種入96 孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180μ1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中（37°C，5%C02)常規(guī)培 養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50%-70%，加入復(fù)方板藍(lán)根顆粒溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。 4) 24h后加入20 μ I MTT溶液（5mg/ml，即0. 5% MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4h。5) 4h后扣板法倒去上 清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ 1二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物 充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底（不加細(xì)胞， 只加培養(yǎng)液），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組 設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示：細(xì)胞增值抑制率（％) = (對照孔OD 值-給藥孔OD值）/對照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0025] 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果：MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對 HEB細(xì)胞增殖抑制有差異（P〈0. 05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性（P〈0. 01)，當(dāng)劑量 達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異（P〈0. 001)。
[0026] 表1復(fù)方板藍(lán)根顆粒對人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖抑制影響研宄（X 土 SD)
[0027]
[0028] 注：與對照組比較，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0029] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)論：復(fù)方板藍(lán)根顆?？梢砸种迫四X膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖，減少人腦膠質(zhì)細(xì) 胞株HEB的細(xì)胞生長數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法，由板藍(lán)根2000g、大青葉3000g作為原料藥制成， 其特征在于所述的方法由下列步驟組成：取上述藥材加入到〇) 2超臨界萃取器中，乙醇作為 夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，CO 2 流量l-3ml/g生藥? min，萃取時(shí)間150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，加阿斯巴坦 120g糊精450g，制粒，制備成顆粒劑，每袋重3g。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法，其特征在于所述CO 2超臨界萃取 夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法，其特征在于所述CO 2超臨界萃取 的萃取壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥? min，萃取時(shí)間160min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒在制備抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖藥物中 的應(yīng)用，其特征在于復(fù)方板藍(lán)根顆粒由板藍(lán)根2000g、大青葉3000g作為原料藥制成，制備 方法為：取板藍(lán)根2000g、大青葉3000g加入到0) 2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶 劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，CO 2流量l-3ml/ g生藥? min，萃取時(shí)間150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，加阿斯巴坦120g糊精 450g，制粒，制備成顆粒劑，每袋重3g。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒在制備抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖藥物中的 應(yīng)用，其特征在于復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法中所述CO 2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑 的體積百分比為5%。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述復(fù)方板藍(lán)根顆粒在制備抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖藥物中的 應(yīng)用，其特征在于復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法中所述〇) 2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫 度40°C，CO2流量2ml/g生藥? min，萃取時(shí)間160min。
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，具體提供一種復(fù)方板藍(lán)根顆粒的制備方法，由板藍(lán)根2000g、大青葉3000g作為原料藥制成，采用超臨界萃取制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了復(fù)方板藍(lán)根顆粒在制備抑制人腦膠質(zhì)細(xì)胞株HEB增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K36/704, A61P11/00, A61P1/16, A61K9/16, A61P29/00, A61P31/14, A61P11/04, A61K36/315, A61K36/855, A61K36/195
【公開號(hào)】CN104983691
【申請?zhí)枴緾N201510364605
【發(fā)明人】趙明亮
【申請人】趙明亮
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年6月28日