壓蒸餾蒸去溶劑，得氯仿萃取浸膏281g、乙酸乙酯萃取浸膏46和正丁醇萃 取浸膏402g ; (6) 合并氯仿和乙酸乙酯層浸膏，轉(zhuǎn)移至AB-8型大孔吸附樹脂柱上； (7) 分別以水、體積比 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80% 和 95% 乙醇以 l-3BV/h 的流 速梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫5-8個(gè)柱體積，取50%-70%乙醇洗脫液； (8) 將50%-70%乙醇洗脫液合并，采用噴霧干燥技術(shù)干燥，進(jìn)料速度5mL/min，進(jìn)風(fēng)口溫 度150-160°C，出風(fēng)口溫度60-70°C，噴霧干燥得到產(chǎn)品。
[0021] 實(shí)施例二(本藥物HPLC分析）： 取實(shí)施例1所述鎮(zhèn)痛止血粉末(過三號篩）進(jìn)行HPLC分析。
[0022] (1)色譜條件 色譜柱 Diamonsil C18 (250 mmX4.6 mm, 5 u m) 流動相A :乙腈 B :0. 75%冰醋酸水溶液 洗脫方式梯度洗脫 流速I. 0 mL/min 檢測波長320 nm 柱溫25 °C 進(jìn)樣量20 μ L 色譜運(yùn)行時(shí)間為90分鐘，梯度洗脫程序見表1，在此色譜條件下本發(fā)明鎮(zhèn)痛止血藥物 的HPLC色譜圖見附圖1。
[0023] (2)樣品制備方法 約提取物約〇. 5g，精密稱定，置錐形瓶中，加70%乙醇超聲溶解，濾過，濾液置100 mL量 瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，用0. 45 μ m濾膜過濾，即得。
[0024] (3)測定結(jié)果 根據(jù)測定結(jié)果建立飛龍掌血提取物的色譜指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了飛龍掌血提取物 中20個(gè)共有峰(見附圖1 )，其中3號峰為綠原酸，7號峰為兩面針堿，11號峰為毛兩面針?biāo)兀?12號峰為8-羥基-6-甲氧基香豆素，13號峰為白屈菜紅堿，14號峰為茵芋堿，15號峰為 異茴芹香豆素，16號峰為茴芹香豆素，20號峰為珊瑚菜內(nèi)酯，香豆素類成分約占提取物的 35. 2%，白屈菜紅堿等生物堿類物質(zhì)降低到2. 0%以下。
[0025] 實(shí)施例三（口服本藥物后小鼠醋酸扭體鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)）： (1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^小鼠醋酸扭體法對本發(fā)明鎮(zhèn)痛止血藥物的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究。
[0026] (2)實(shí)驗(yàn)對象：昆明種小鼠，雌雄各半。
[0027] (3)藥材與儀器：本發(fā)明鎮(zhèn)痛止血藥物由實(shí)驗(yàn)室自制，加蒸餾水制成混懸液；秒 表。
[0028] (4)動物分組及給藥：健康小鼠40只隨機(jī)分為4組，每組10只，分為3% CMC-Na溶 液(模型組)、阿司匹林組、本發(fā)明藥物低劑量組(折合生藥量為〇. 65g/kg)和本發(fā)明藥物高 劑量組(折合生藥量為I. 3g/kg)，每日灌胃一次，連續(xù)給藥5天，于第5天給藥30分鐘后腹 腔注射0. 6%醋酸（0. 2ml/只），觀察20分鐘內(nèi)各組實(shí)驗(yàn)動物由醋酸引起的扭體次數(shù)，結(jié)果 如表2 : (5)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)one-way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明：模型組、阿司匹林組及本發(fā)明藥 物給藥組小鼠開始扭體時(shí)間和扭體次數(shù)之間均存在顯著性差異（/<〇. 05)，說明本發(fā)明鎮(zhèn)痛 止血藥給藥組均表現(xiàn)出不同程度鎮(zhèn)痛作用，其中以提取物高劑量給藥組的鎮(zhèn)痛作用最為顯 著。
[0029] 實(shí)施例四（口服本藥物止血活性實(shí)驗(yàn)）： (1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模翰捎脭辔卜y定小鼠出血時(shí)間，以小鼠給藥前后出血時(shí)間的縮短為指 標(biāo)，來判斷藥物止血的效果。
[0030] (2)實(shí)驗(yàn)對象：昆明種小鼠，雌雄各半。
[0031] (3)動物分組及給藥：取健康小鼠40只，飼養(yǎng)一周后隨機(jī)分為4組，即空白組、陽 性藥組(云南白藥)、本發(fā)明藥物低劑量組和本發(fā)明藥物高劑量組。參考文獻(xiàn)給藥劑量并根 據(jù)人每日服用飛龍掌血和云南白藥膠囊的劑量進(jìn)行折算，按體重分別按低劑量組(折合生 藥量為〇. 65g/kg)和高劑量組(折合生藥量為I. 3g/kg) 口服灌胃給藥，陽性藥云南白藥的 給藥劑量為〇. 2 g/kg，每日灌胃一次，連續(xù)7天，于第7天給藥30分鐘后采用毛細(xì)玻管法測 定小鼠凝血時(shí)間，次日采用剪尾法測定出血時(shí)間，結(jié)果見表3和表4。
[0032] (4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0處理，所有數(shù)據(jù)經(jīng)one-way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明：空白組與陽性對照組及本發(fā)明鎮(zhèn)痛止血藥物給藥組小鼠出血時(shí) 間（BT)值和小鼠凝血時(shí)間（CT)之間均存在顯著性差異（/<0. 05)，說明本發(fā)明藥物給藥組 均表現(xiàn)出不同程度縮短小鼠出血時(shí)間和凝血時(shí)間的作用，其中以提取物高劑量給藥組的止 血作用最為顯著。

[0033] w: 5麵 實(shí)施例五(片劑的制備）： 取實(shí)施例1所述藥物，加入淀粉、麥芽糖等藥用輔料后采用濕法制粒，整粒后加入滑石 粉等潤滑劑，按常規(guī)方法壓片，即得本發(fā)明鎮(zhèn)痛止血片。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種鎮(zhèn)痛止血藥物，其特征是以飛龍掌血（Toddalia asiatica ( L. ) Lam.)的根或 根皮為原料，分別經(jīng)水和乙醇溶液提取，再經(jīng)提純和分離而制得的一種黃棕色固體顆粒，其 主要成份香豆素類化學(xué)物質(zhì)含量不低于25%，生物堿類物質(zhì)低于5%，其余為淀粉、糖類、鞣 制、萜類和留醇類物質(zhì)，該藥物具有良好的鎮(zhèn)痛止血效果，鎮(zhèn)痛效果堪比阿司匹林，止血效 果與云南白藥相近。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種鎮(zhèn)痛止血藥物，其特征是所指的香豆素類化學(xué)物質(zhì)包括茴 芹香豆素、異茴芹香豆素、毛兩面針?biāo)亍?-羥基-6-甲氧基香豆素和珊瑚菜內(nèi)酯。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種鎮(zhèn)痛止血藥物，其特征是生物堿指白屈菜紅堿毒性生物堿 物質(zhì)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種鎮(zhèn)痛止血藥物的制備方法，其特征是按下列步驟制備： (1) 將飛龍掌血（Toddalia asiatica ( L.) Lam.)的根或根皮洗凈、瞭干、粉碎過80 目篩； (2) 分別加入水、乙醇溶液：10% (v/v)、20% (v/v)、30% (v/v)、40% (v/v)、50% (v/v)、 60% (v/v)、70% (v/v)、80% (v/v)和95% (v/v)回流提取3次，每次I小時(shí)，料液比第一次 為1 :12,第二和三次為1 :10 ; (3) 將全部提取液合并，過濾，取濾液減壓蒸餾蒸去溶劑，得乙醇浸膏，向浸膏中加入 1-2倍重的40-60°C熱水，攪拌懸浮，得懸浮液； (4) 依次用0. 5-2倍體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取1-3次； (5) 分別減壓蒸餾蒸去溶劑，得石油醚萃取浸膏、氯仿萃取浸膏、乙酸乙酯萃取浸膏和 正丁醇萃取浸膏； (6) 將全部浸膏轉(zhuǎn)移至AB-8型大孔吸附樹脂柱上； (7 )分別以水、體積比10%、20%、、30%、40%、50%、60%、70%、80%和95%的乙醇梯度洗脫，每 個(gè)梯度洗脫5-8個(gè)柱體積，取50%-70%乙醇洗脫液； (8)將50%-70%乙醇洗脫液合并，采用噴霧干燥技術(shù)干燥后得到產(chǎn)品。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述一種鎮(zhèn)痛止血藥物的制備方法，其特征是步驟（2)提取方式除 了回流提取外還包括煎煮提取、索式提取、滲轆提取或超臨界流體萃取。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述一種鎮(zhèn)痛止血藥物的制備方法，其特征是步驟（8)干燥方法還 包括常溫減壓干燥、冷凍干燥和真空微波干燥。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種鎮(zhèn)痛止血藥物的應(yīng)用，其特征是用于制備鎮(zhèn)痛止血的藥物 或藥劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述一種鎮(zhèn)痛止血藥物的應(yīng)用，其特征是所指的藥劑包括外用散 劑、巴布劑，口服顆粒劑、膠囊劑或片劑。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述一種鎮(zhèn)痛止血藥物的應(yīng)用，其特征是可將本藥物與三七提取物 或者市售三七總皂苷等具有活血化淤作用的植物藥提取物制成復(fù)方鎮(zhèn)痛、止血藥物。
【專利摘要】本發(fā)明一種鎮(zhèn)痛止血藥物及其制備方法和應(yīng)用提供了一種以傳統(tǒng)民族藥物飛龍掌血（<i>Toddalia？asiatica</i>？(？L.)？Lam．）為原料深加工所得的鎮(zhèn)痛止血藥物及其制備方法和應(yīng)用，屬于中藥深加工技術(shù)領(lǐng)域，飛龍掌血分別經(jīng)水和乙醇溶液提取，再經(jīng)提純和分離而制得的一種黃棕色顆粒，其主要成份香豆素類化學(xué)物質(zhì)含量不低于25%，生物堿類物質(zhì)低于5%，其余主要為淀粉、糖類、鞣制、萜類和甾醇類物質(zhì)。該藥物具有良好的鎮(zhèn)痛止血效果，并可應(yīng)用于符合現(xiàn)代制劑工藝的藥物及制劑，藥效學(xué)研究表明其鎮(zhèn)痛效果堪比阿司匹林，止血效果與云南白藥相近，本發(fā)明工藝簡便、操作方便、可工業(yè)化生產(chǎn)，市場前景良好。
【IPC分類】A61P7/04, A61P29/00, A61K36/75, A61K125/00
【公開號】CN105012455
【申請?zhí)枴緾N201510508482
【發(fā)明人】劉志剛, 謝曉林
【申請人】貴陽學(xué)院
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2015年8月19日