一種誘導(dǎo)免疫耐受的中藥復(fù)方制劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種誘導(dǎo)免疫耐受的中藥復(fù)方制劑及 其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 免疫排斥反應(yīng)是組織器官移植、變態(tài)反應(yīng)和自身免疫性疾病的瓶頸。目前在國內(nèi) 外治療免疫排斥反應(yīng)的方法中，療效最為確切的是免疫抑制劑。理想的免疫抑制劑具有高 效、低毒、方便和經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，然而目前在臨床使用的免疫抑制劑存在廣泛而強(qiáng)烈的毒副作 用，長期使用可造成機(jī)體的免疫功能抑制，抗感染能力下降，對肝腎的毒性增加，甚至引起 致畸和不育。例如肝移植常用免疫抑制劑如CsA、FK506等藥物的神經(jīng)毒作用已屢見報(bào)道， 兩者均可出現(xiàn)震顫、頭痛、癲癇、皮質(zhì)性失明、局灶性腦白質(zhì)病等神經(jīng)系統(tǒng)病變以及精神狀 態(tài)改變（王麗馨，陳偉，楊沛，鄒曉薇，羅中蘭.腎移植術(shù)后患者環(huán)孢素A血藥濃度的 監(jiān)測.重慶醫(yī)學(xué).2008 ;37 (03) :243-246.賀智.他克莫司的臨床應(yīng)用與不良反應(yīng)，河北 醫(yī)藥.2007 ;29 (03) :261-262)。而糖皮質(zhì)激素其主要副作用為消化道出血（蘇寶印，李立 偉.糖皮質(zhì)激素治療腎臟病所致副作用的中醫(yī)藥對策.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志.2010; 11(11) :1015-1016)。因此，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對移植物抗原、過敏原和自身抗原的免疫耐受 是治療組織器官移植后免疫排斥、變態(tài)反應(yīng)和自身免疫性疾病的理想措施。
[0003] 近年來，調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞（regulatorydendriticcells，DCregs)誘導(dǎo)的 免疫耐受作用備受關(guān)注，在組織器官移植后免疫排斥、變態(tài)反應(yīng)和自身免疫性疾病的 治療中具有潛在前景（Raich-RegueD，GlancyM，ThomsonAW.Regulatorydendritic celltherapy:fromrodentstoclinicalapplication.ImmunolLett.2014 ； 161 (2):216-221.；LiH，ShiB.Tolerogenicdendriticcellsandtheirapplications intransplantation.CellMolImmunol. 2015 ；12(1):24-30.；SchmidtSVjNino-Castro AC,SchultzeJL.Regulatorydendriticcells:thereismorethanjustimmune activation.FrontImmunol. 2012 ;3:274) D樹突狀細(xì)胞根據(jù)其分化成熟的不同狀態(tài)可分 為不成熟樹突狀細(xì)胞和成熟樹突狀細(xì)胞。不成熟樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生大量抗炎的細(xì)胞因子和 低表達(dá)共刺激分子，誘導(dǎo)免疫抑制，成熟樹突狀細(xì)胞和不成熟樹突狀細(xì)胞恰恰相反，高表達(dá) 共刺激分子，誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。DOegs是一類具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能的DC亞群，高 表達(dá)CDllb/c分子、IL-10、TGF-3或者ID0,低表達(dá)共刺激分子CD80、CD86和HLA-DRjg 抑制T細(xì)胞的增殖并促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增，并能對抗促炎細(xì)胞因子誘導(dǎo)的分化成熟 (HuangH,Dawickiff,LuM,NayyarA,ZhangX,GordonJR.Regulatorydendriticcell expressionofMHCIIandIL-IOarejointlyrequisiteforinductionoftolerance inamurinemodelofOVA-asthma.Allergy. 2013 ;68 (9) :1126-1135)D因此，誘導(dǎo) DOeg的產(chǎn)生已經(jīng)成為治療包括移植物抗宿主病在內(nèi)的免疫相關(guān)疾病的一種新策略（Han YjChenZjYangYjJiangZjGuYjLiuYjLinCjPanZjYuYjJiangMjZhouMjCaoX.Human CD14+CTLA-4+regulatorydendriticcellssuppressT-cellresponsebycytotoxic T-Iymphocyte antigen-4-dependent IL-IO and indoleamine-2,3-dioxygenase production in hepatocellular carcinoma. Hepatology. 2014 ;59 (2):567-579)〇
[0004] 誘導(dǎo)DCregs產(chǎn)生的方法包括藥物制劑如免疫抑制劑（Hackstein H, Thomson Aff. Dendritic cells:emerging pharmacological targets of immunosuppressive drugs. Nat Rev Immunol. 2004 ;4 (I) : 24-34.)，生理性的介質(zhì)如基質(zhì)細(xì)胞、抗炎的細(xì) 胞因子如IL-10,以及基因工程技術(shù)如降低共刺激分子表達(dá)、促進(jìn)抗炎細(xì)胞因子表達(dá) 如 TGF-P 等（Cai Z，Zhang W，Li M，Yue Y，Yang F，Yu L，Cao X，Wang J.TGF-betal gene-modified, immature dendritic cells delay the development of inflammatory bowel disease by inducing CD4 (+)Foxp3(+)regulatory T cells. Cell Mol Immunol. 2010 ;7 (I) : 35-43)，但存在不良反應(yīng)和并發(fā)癥多或者價(jià)格昂貴的缺點(diǎn)。因此，尋找 一種經(jīng)濟(jì)、安全的獲得DCreg的方法具有良好的臨床開發(fā)價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的旨在克服上述不足之處，根據(jù)多年的臨床實(shí)踐和民間秘方，反復(fù)臨 床驗(yàn)證拆方組方，提供一種安全有效經(jīng)濟(jì)的誘導(dǎo)免疫耐受的中藥復(fù)方制劑及其制備方法， 應(yīng)用于治療組織器官移植后免疫排斥、變態(tài)反應(yīng)和自身免疫性疾病。
[0006] -種誘導(dǎo)免疫耐受的中藥復(fù)方制劑及其制備方法和應(yīng)用。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案是：一種誘導(dǎo)免疫耐受的中藥復(fù)方制劑， 其特征在于，按重量份數(shù)計(jì)，由以下的組份組成：2~30份的柴胡、3-31份的牡丹皮、4-32 份的白芍、5-33份的郁金、6-35份的甘草。
[0008] 優(yōu)選的，上述中藥復(fù)方制劑按照質(zhì)量份數(shù)計(jì)，由以下組份組成：10-28份的柴胡、 17-22份的牡丹皮、11-30份的白芍、19-29份的郁金、10-30份的甘草。
[0009] 更進(jìn)一步的，上述中藥復(fù)方制劑按照質(zhì)量份數(shù)計(jì)，由以下組份組成：10-20份的柴 胡、18-22份的牡丹皮、11-24份的白芍、19-23份的郁金、10-28份的甘草。
[0010] -種誘導(dǎo)免疫耐受的中藥復(fù)方制劑的制備方法，包括備料和粉碎步驟，其特征在 于還需依次進(jìn)行如下操作：
[0011] ⑴水提：將粉碎后的柴胡、牡丹皮、白茍、郁金、甘草進(jìn)行混合，放入30-KKTC沸 水中浸泡10-60分鐘，再加入1-8倍的水，在80-100°C條件下浸提1-3小時(shí)，在升溫過程中 不斷攪拌，最后將所得浸提液合并；
[0012] (2)除雜：將步驟⑴得到的浸提液采用過濾，離心方法除雜；
[0013] (3)干燥：將除雜后的浸提液經(jīng)50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，凍干后即得該中藥復(fù)方制劑。
[0014] 將誘導(dǎo)免疫耐受的中藥復(fù)方制劑制成為符合藥劑學(xué)要求的口服劑型。
[0015] 上述一種誘導(dǎo)免疫耐受的中藥復(fù)方制劑的配伍原理為：少陽肝膽，病機(jī)為正邪相 爭，調(diào)理肝膽，使邪證兩孤立，則可誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)對病邪的免疫耐受。此方以柴胡為君， 疏肝解表，白芍、郁金為臣，疏肝活血，肝藏血，佐以牡丹皮涼血，甘草調(diào)和諸藥為使。肝體 陰而用陽，白芍養(yǎng)肝之體，柴胡助肝之用；肝主氣而藏血，柴胡理氣，郁金活血；氣有余便是 火，更加牡丹皮涼血清熱?？v觀全方，攻補(bǔ)皆施，氣血同調(diào)，實(shí)為調(diào)理肝膽以誘導(dǎo)免疫耐受之 良方。
[0016]本發(fā)明的有益效果及作用機(jī)理是：
[0017] (1)能有效抑制免疫排斥反應(yīng)
[0018] 免疫排斥反應(yīng)是組織器官移植、變態(tài)反應(yīng)和自身免疫性疾病的瓶頸。免疫抑制劑 盡管臨床療效確切，但是因?yàn)槎鄶?shù)藥物具有毒性或者對機(jī)體免疫功能的抑制，患者容易出 現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)和并發(fā)癥。生物制劑因價(jià)格昂貴致使大多數(shù)患者難以維持使用。相比之 下該制劑不僅能誘導(dǎo)受體小鼠對同種異基因移植皮膚的耐受，而且對受體小鼠的肝腎生化 功能沒有影響，受體小鼠移植皮膚、肝臟和腎臟結(jié)構(gòu)完整、無炎性細(xì)胞浸潤。而且該制劑價(jià) 格低廉，患者可以長期使用。
[0019] (2)能有效誘導(dǎo)DCregs的產(chǎn)生
[0020] DCregs介導(dǎo)的免疫耐受作用在免疫相關(guān)疾病的治療中備受關(guān)注。通過藥物治療獲 得DCregs因其具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值而備受青睞。該