人工培養(yǎng)陰道菌群移植在婦科炎癥中的應(yīng)用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種人工培養(yǎng)陰道菌群移植在婦科炎癥中的應(yīng)用方法，通過以菌治菌的方法，實(shí)現(xiàn)女性下生殖道疾病的治療與保護(hù)。
【背景技術(shù)】
[0002]在人體體表和外界相通的腔道中經(jīng)常共生著許多微生物菌群，它們發(fā)揮著對宿主有益的重要生理作用。正常微生物群、宿主和環(huán)境之間始終處于動態(tài)平衡狀態(tài)，形成一個(gè)相互依存、相互制約的系統(tǒng)，這個(gè)平衡一旦破壞，就可能致病。
[0003]女性下生殖道是人體重要的微生態(tài)區(qū)。健康婦女陰道排出物中，厭氧菌與需氧菌的比例為5:1，活菌數(shù)為12?10 9/ml，菌數(shù)可達(dá)8 XlOVml。寄生著200多種微生物，以特殊形式生長于正常人陰道粘膜表面，主要的常住菌有乳桿菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、棱狀桿菌、糞鏈球菌等。
[0004]多種女性下生殖道疾病是由于陰道微生態(tài)系統(tǒng)平衡失調(diào)所致，如細(xì)菌性陰道炎，霉菌性陰道炎，滴蟲性陰道炎等。目前治療陰道感染的措施主要是運(yùn)用抗生素、滅滴靈、雌激素以及酸化陰道的制劑等來殺滅陰道內(nèi)的病原微生物。但是，上述療法在某種程度上會抑制正常的菌群，引起致病菌或條件致病菌的過度繁殖，從而造成反復(fù)感染或多重感染，增加治療的的難度和成本。許多研究表明，利用陰道正常微生態(tài)中的乳酸桿菌制成的制劑對陰道感染的預(yù)防和治療都具有良好的療效，包括卷曲乳桿菌、詹氏乳桿菌、格氏乳桿菌、陰道乳桿菌、約氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌和發(fā)酵乳桿菌等。
[0005]本發(fā)明主要采用多種陰道乳酸菌進(jìn)行復(fù)合，選用最佳組合實(shí)現(xiàn)用于女性下生殖道疾病治療的微生態(tài)制劑，具有安全簡單、無抗藥性、降低誘發(fā)其他感染和復(fù)發(fā)的可能等優(yōu)點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種人工培養(yǎng)陰道菌群移植在婦科炎癥中的應(yīng)用方法，可以通過調(diào)節(jié)女性下生殖道內(nèi)環(huán)境和菌群組成，實(shí)現(xiàn)維護(hù)陰道微生態(tài)平衡，長期、有效、快捷地治療由陰道菌群失衡引起的感染性疾病。
[0007]本發(fā)明所述應(yīng)用方法包括下列步驟:
1、陰道益生菌分離:采集健康組女性下生殖道排泄物樣品，續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)通N2保持厭氧，發(fā)酵罐置于37°C水浴，罐內(nèi)pH在線控制為6.5，運(yùn)行體積500mL，以35 mL / h稀釋速率栗進(jìn)栗出；待恒化器穩(wěn)定后，接種糞便樣品；每隔3d做一次活菌計(jì)數(shù)，每天取新鮮培養(yǎng)液，一 80°C保存；利用平板分離技術(shù)分離益生菌；
所述益生菌為:青春雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、動物雙歧桿菌、短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、卷曲乳桿菌、德氏乳桿菌、保加利亞乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、格氏乳桿菌、瑞士乳桿菌、德氏乳桿菌、副干酪乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌或唾液乳桿菌中的一種或幾種聯(lián)合使用； 2、陰道益生菌的凍干:將篩選出的益生菌群進(jìn)行二次活化；將益生菌群制成凍干粉；
3、微膠囊的制備:選擇海藻酸鈉為囊材，以果膠為輔材，果膠液濃度為2%，果膠液與益生菌液體積比為1:1，海藻酸鈉與果膠質(zhì)量比為2:1，CaCL2濃度為0.3 moL / L ;雙歧桿菌微膠囊直徑為I?2 mm ;
4、益生菌栓塞制備方法:將上述益生菌凍干粉或微膠囊包裹于具有良好生物兼容性的無生物毒性的薄膜上，通過塞入女性陰道部位達(dá)到菌體的釋放和女性疾病的治療。
[0008]5、益生菌膠囊的制備:益生菌凍干粉或微膠囊包裹于膠囊中，通過塞入女性陰道部位達(dá)到菌體的釋放和女性疾病的治療。
[0009]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明可通過調(diào)節(jié)女性下生殖道內(nèi)環(huán)境和菌群組成，實(shí)現(xiàn)維護(hù)陰道微生態(tài)平衡，長期、有效、快捷地治療由陰道菌群失衡引起的感染性疾病。
【具體實(shí)施方式】
[0010]本發(fā)明所述應(yīng)用方法包括下列步驟:
1、陰道益生菌分離:采集健康組女性下生殖道排泄物樣品，續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)通N2保持厭氧，發(fā)酵罐置于37°C水浴，罐內(nèi)pH在線控制為6.5，運(yùn)行體積500mL，以35 mL / h稀釋速率栗進(jìn)栗出。待恒化器穩(wěn)定后，接種糞便樣品。每隔3d做一次活菌計(jì)數(shù)，每天取新鮮培養(yǎng)液，一 80°C保存。利用平板分離技術(shù)分離益生菌；
所述益生菌為:青春雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、動物雙歧桿菌、短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、卷曲乳桿菌、德氏乳桿菌、保加利亞乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、格氏乳桿菌、瑞士乳桿菌、德氏乳桿菌、副干酪乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌或唾液乳桿菌中的一種或幾種聯(lián)合使用；
2、陰道益生菌的凍干:將篩選出的益生菌群進(jìn)行二次活化；將益生菌群制成凍干粉；
3、微膠囊的制備:選擇海藻酸鈉為囊材，以果膠為輔材，果膠液濃度為2%，果膠液與益生菌液體積比為1:1，海藻酸鈉與果膠質(zhì)量比為2:1，CaCL2濃度為0.3 moL / L ;雙歧桿菌微膠囊直徑為I?2 mm ;
4、益生菌栓塞制備方法:將上述益生菌凍干粉或微膠囊包裹于具有良好生物兼容性的無生物毒性的薄膜上，通過塞入女性陰道部位達(dá)到菌體的釋放和女性疾病的治療。
[0011]5、益生菌膠囊的制備:益生菌凍干粉或微膠囊包裹于膠囊中，通過塞入女性陰道部位達(dá)到菌體的釋放和女性疾病的治療。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種人工培養(yǎng)陰道菌群移植在婦科炎癥中的應(yīng)用方法，其特征是: A、陰道益生菌分離:采集健康組女性下生殖道排泄物樣品，續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)通N2保持厭氧，發(fā)酵罐置于37°C水浴，罐內(nèi)pH在線控制為6.5，運(yùn)行體積500mL，以35 mL / h稀釋速率栗進(jìn)栗出；待恒化器穩(wěn)定后，接種糞便樣品；每隔3d做一次活菌計(jì)數(shù)，每天取新鮮培養(yǎng)液，一 80°C保存；利用平板分離技術(shù)分離益生菌； B、陰道益生菌的凍干:將篩選出的益生菌群進(jìn)行二次活化；將益生菌群制成凍干粉； C、微膠囊的制備:選擇海藻酸鈉為囊材，以果膠為輔材，果膠液濃度為2%，果膠液與益生菌液體積比為1:1，海藻酸鈉與果膠質(zhì)量比為2:1，CaCL2濃度為0.3 moL / L ;雙歧桿菌微膠囊直徑為I?2 mm ; D、益生菌栓塞制備方法:將上述益生菌凍干粉或微膠囊包裹于具有良好生物兼容性的無生物毒性的薄膜上，通過塞入女性陰道部位達(dá)到菌體的釋放和女性疾病的治療。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人工培養(yǎng)陰道菌群移植在婦科炎癥中的應(yīng)用方法，其特征是:所述步驟(A)中的益生菌是:青春雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、動物雙歧桿菌、短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、卷曲乳桿菌、德氏乳桿菌、保加利亞乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、格氏乳桿菌、瑞士乳桿菌、德氏乳桿菌、副干酪乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌或唾液乳桿菌中的任何一種或幾種聯(lián)合使用。
【專利摘要】一種人工培養(yǎng)陰道菌群移植在婦科炎癥中的應(yīng)用方法，是利用女性陰道正常益生菌群對女性陰道疾病的調(diào)理作用，恢復(fù)女性菌群失調(diào)，從而達(dá)到維護(hù)女性泌尿生殖道健康的目的。其特點(diǎn)為采用以菌治菌的方法，通過維持女性下生殖道菌群的穩(wěn)定，實(shí)現(xiàn)無耐藥性、無毒副作用的微生態(tài)治療法，制劑形式為陰道栓塞，制作簡單，使用方便，成本較低。
【IPC分類】A61P31/00, A61K35/745, A61P15/02, A61K35/747, A61P33/02
【公開號】CN105193860
【申請?zhí)枴緾N201510619424
【發(fā)明人】陳廷濤, 辛洪波, 鄧侃, 張榕吉, 唐先耀, 周海婷
【申請人】南昌大學(xué)
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月25日