一種藏獸藥止瀉散及其研制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藏獸藥止瀉散研制方法領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種防治巧牛細(xì)菌性腹瀉藏獸 藥復(fù)方----止瀉散及其研制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 巧牛細(xì)菌性腹瀉病是一種對(duì)川西北畜牧業(yè)影響比較大的常見病，藏獸醫(yī)主要結(jié)合 當(dāng)?shù)夭厮庂Y源優(yōu)勢(shì)選擇單方藥物或藥物組合進(jìn)行防治，同時(shí)兼顧對(duì)因治療和對(duì)癥治療相結(jié) 合。本專利申請(qǐng)人根據(jù)藏獸藥止瀉散組方藥物及其復(fù)方的抗菌活性，研發(fā)了一種防治巧牛 細(xì)菌性腹瀉藏獸藥復(fù)方----止瀉散及其研制方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對(duì)川西北巧牛細(xì)菌性腹瀉病獵獄的實(shí)際情況，本發(fā)明的目的旨在提供一種藏獸 藥止瀉散及其研制方法。
[0004] 為此，本發(fā)明采用W下技術(shù)方案： 陽(yáng)〇化]一種藏獸藥止瀉散，所述的止瀉散組份為苦參、纖毛婆婆納、松蘿和獨(dú)一味。
[0006] 一種藏獸藥止瀉散的研制方法，包括W下步驟：
[0007] 1)、采集苦參、纖毛婆婆納、松蘿和獨(dú)一味四種藥材；
[0008] 2)、將四種藥材經(jīng)切塊或粉碎過(guò)篩后按一定比例加入75%乙醇浸泡一段時(shí)間后將 提取液濃縮、冷凍干燥成粉末備用；
[0009] 3)、組方藥物稀釋液的制備：將獨(dú)一味、纖毛婆婆納、松蘿凍干粉分別按質(zhì)量比例 為1:6用二甲基亞諷稀釋，得藥物濃度為0. 167g/mU苦參按1:2的比例用二甲基亞諷稀釋 成濃度為0. 5g/mU最后將藥物過(guò)濾除菌；
[0010] 4)、采用微量稀釋法和紙片法評(píng)價(jià)止瀉散及其組方藥材對(duì)14種標(biāo)準(zhǔn)菌株的抗菌 活性；
[0011] 5)、采用Lg(34)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化四個(gè)組方藥物的配伍組合，確定其最佳組合；
[0012] 6)、按藥物濃度組距為0. 8的梯度設(shè)置不同劑量組，測(cè)定組方藥物的LDs。。
[0013] 7)、止瀉散散劑對(duì)布利丹沙口氏菌3733株復(fù)制細(xì)菌腹瀉的治療效果評(píng)價(jià)
[0014] 作為對(duì)上述技術(shù)方案的補(bǔ)充和完善，本發(fā)明還包括W下技術(shù)特征。
[0015] 步驟2)中將獨(dú)一味和纖毛婆婆納分別用中藥粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)40目篩后取 lOOOg，按1:10比例加入75%乙醇浸泡3天后將提取液濃縮、冷凍干燥成粉末備用；苦參切 成小塊后放入瓶中加入75 %乙醇，常溫下浸提48小時(shí)，倒出浸提液后再浸提2次，濃縮提取 液，將提取物冷凍干燥成粉末備用；將松蘿剪成小段，于45°C煎煮=次，將3次提取液混合 在一起，用紗布過(guò)濾，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于45°C、110巧m濃縮浸提液至原體積的1 %，冷凍干 燥后備用。將苦參切成小塊后放入瓶中加入75%乙醇浸泡72小時(shí)后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于50°C 將浸提液濃縮至無(wú)醇味，冷凍干燥至粉末后備用。
[0016] 使用本發(fā)明可W達(dá)到W下有益效果：本發(fā)明研制過(guò)程采用藏獸醫(yī)和中獸醫(yī)理論， 選擇川西北常見藏藥材纖毛婆婆納、松蘿、苦參和獨(dú)一味為研究對(duì)象，采用微量稀釋法和紙 片法分別對(duì)藏獸藥止瀉散組方藥物及其復(fù)方進(jìn)行抗菌活性評(píng)價(jià)，W期發(fā)明一種防治巧牛細(xì) 菌性腹瀉藏獸藥的研制方法，為防治川西北巧牛腹瀉病提供研究資料和技術(shù)支持，并為藏 獸藥的開發(fā)利用及產(chǎn)業(yè)化奠定基礎(chǔ)。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 實(shí)施例：
[0018] (1)組方藥物的采集及鑒定：四種組方藥材（除苦參采自四川省阿巧藏族弟族自 治州松潘縣外，纖毛婆婆納、松蘿和獨(dú)一味均采自四川省阿巧藏族弟族自治州紅原縣），經(jīng) 西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院陳朝喜副教授鑒定為相應(yīng)的藥材。
[0019] (2)組方藥物提取物和凍干粉的制備：將獨(dú)一味和纖毛婆婆納分別用中藥粉碎機(jī) 中粉碎，過(guò)40目篩后取lOOOg，按1:10比例加入75%乙醇浸泡3天后將提取液濃縮、冷凍 干燥成粉末備用；苦參切成小塊后放入瓶中加入75%乙醇，常溫下浸提48小時(shí)，倒出浸提 液后再浸提2次，濃縮提取液，將提取物冷凍干燥成粉末備用；將松蘿剪成小段，于45°C煎 煮S次，將3次提取液混合在一起，用紗布過(guò)濾，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于45°C、110巧m濃縮浸提 液至原體積的1%，冷凍干燥后備用。將苦參切成小塊后放入瓶中加入75%乙醇浸泡72 小時(shí)后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于50°C將浸提液濃縮至無(wú)醇味，冷凍干燥至粉末后備用。
[0020] (3)組方藥物的抗菌活性評(píng)價(jià)
[0021] ①組方藥物稀釋液的制備：組方藥材的將獨(dú)一味、纖毛婆婆納、松蘿凍干粉按1:6 的比例用二甲基亞諷稀釋，得藥物濃度為0. 167g/mL;苦參按1:2的比例稀釋成濃度為 0. 5g/mL。最后將藥物過(guò)濾除菌，備用。
[0022] ②實(shí)驗(yàn)菌株的選擇：為保證抗菌活性評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，本專利項(xiàng)目選擇14 種標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行研究，菌株包括維氏氣單胞菌CGMCC3700、大腸桿菌ATCC25922、銅綠假單 胞桿菌CGMCCPa3、普通變形桿菌CGMCC1. 491、肺炎克雷伯氏菌CGMCC1. 1062、頻疾志賀氏菌 CGMCC1. 1869、中間耶爾森氏菌CGMCC1. 6197、腸沙口氏菌腸亞種CGMCC1. 10754、粘質(zhì)沙雷 氏菌CGMCC1. 4256、金黃色葡萄球菌ATCC25913、糞腸球菌ATCC25912、尿腸球菌ATCC35667、 阪崎腸桿菌CGMCC1. 6765、陰溝腸桿菌陰溝亞種CGMCC1. 2022。
[0023] ③微量稀釋法測(cè)定組方藥物抗菌效果
[0024] 實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果判定參考標(biāo)準(zhǔn)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NC化巧推薦的微 量肉湯稀釋法操作程序進(jìn)行。試驗(yàn)結(jié)果如表1所示：從表中可W看出，松蘿和苦參對(duì)大多 數(shù)實(shí)驗(yàn)菌株的抗菌活性較強(qiáng)，而纖毛婆婆納的抗菌活性最弱；其中松蘿對(duì)CGMCC1. 1869、 ATCC35667XGMCC1. 6197和ATCC25912的抗菌活性比其他10種實(shí)驗(yàn)菌株強(qiáng)；與其他菌株的 MIC值相比，苦參對(duì)ATCC25913、CGMCC1. 1869、ATCC35667、CGMCC1. 6197 和ATCC25912 抗菌 活性較強(qiáng)。
[00巧]表1微量稀釋法藥敏試驗(yàn)結(jié)果（單位：mg/血）
[0026]
[0028] ④紙片法測(cè)定組方藥物抗菌效果
[0029] 實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果判定參考標(biāo)準(zhǔn)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NC化巧推薦的紙 片法操作程序進(jìn)行。試驗(yàn)結(jié)果如表2所示：從表中可W看出，除了CGMCC1. 1062外，針對(duì)同 一菌株，松蘿和苦參對(duì)大多數(shù)菌株的抗菌活性比纖毛婆婆納和獨(dú)一味強(qiáng)；而對(duì)同一藥物來(lái) 講，其抗菌活性與稀釋法的結(jié)果基本一致。
[0030] 表2紙片法藥敏試驗(yàn)結(jié)果（單位：mm)
[0031]
[0033] (4)止瀉散組方優(yōu)化
[0034] 采用正交設(shè)計(jì)法對(duì)藏獸醫(yī)止瀉散組方進(jìn)行優(yōu)化，通過(guò)U(34)設(shè)計(jì)表對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn) 行分析，得到藏獸藥止瀉散的最優(yōu)組方為：A化即3。
[0035] 表3止瀉散組方配伍設(shè)計(jì)
[0036]
[0037] 妨止瀉散散劑LD加測(cè)定
[0038] 按藥物濃度組距為0. 8的梯度設(shè)置不同劑量組，采用改良寇氏法進(jìn)行LDs。測(cè)定，評(píng) 價(jià)止瀉散的毒性大小。試驗(yàn)結(jié)果測(cè)得LDs。=0.595g/血。
[0039] (6)止瀉散散劑對(duì)布利丹沙口氏菌3733株復(fù)制細(xì)菌腹瀉的治療效果評(píng)價(jià)
[0040] 將布利丹3733菌液用生理鹽水稀釋至1XIO8CFlVmU按照0. 2ml/10g體重的量給 實(shí)驗(yàn)小鼠腹腔注射菌液，然后根據(jù)LDw設(shè)定高、中和低劑量組，分別按照0. 2ml/10g體重的 標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)口服給藥止瀉散煎劑7天，重點(diǎn)觀察小鼠的排便次數(shù)和腹瀉情況等各種反應(yīng)。同 時(shí)設(shè)立對(duì)照組，W生理鹽水代替藥物。在腹腔注射菌液后，各組小鼠均表現(xiàn)出腹瀉癥狀，且 食欲降低。給藥后，小鼠的腹瀉情況如表4所示，從中可W看出，藥物的止瀉效果與劑量呈 現(xiàn)一定的量效關(guān)系；與對(duì)照組相比，各劑量組的止瀉率均高于對(duì)照組，且差異性顯著。
[0041] 表4止瀉散止瀉效果統(tǒng)計(jì)
[0042]
[0043]W上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技 術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書中描述的只是說(shuō)明 本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，運(yùn)些 變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及 其等效物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種藏獸藥止瀉散，其特征在于：所述的止瀉散組份為苦參、纖毛婆婆納、松蘿和獨(dú) 一味。2. -種藏獸藥止瀉散的研制方法，包括以下步驟： 1) 、采集和炮制苦參、纖毛婆婆納、松蘿和獨(dú)一味四種藥材； 2) 、將四種藥材經(jīng)切塊或粉碎過(guò)篩后按一定比例加入75%乙醇浸泡一 段時(shí)間后將提取液濃縮、冷凍干燥成粉末備用； 3) 、組方藥物稀釋液的制備：將獨(dú)一味、纖毛婆婆納和松蘿凍干粉分別按質(zhì)量比例為 1:6用二甲基亞砜稀釋，得藥物濃度為0. 167g/mL，苦參按1:2的比例用二甲基亞砜稀釋成 濃度為〇. 5g/mL，最后將藥物過(guò)濾除菌； 4) 、采用微量稀釋法和紙片法評(píng)價(jià)止瀉散及其組方藥材對(duì)14種標(biāo)準(zhǔn)菌株的抗菌活性； 5) 、采用L9(34)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化四個(gè)組方藥物的配伍組合，確定其最佳組合； 6) 、按藥物濃度組距為0. 8的梯度設(shè)置不同劑量組，測(cè)定組方藥物的LD5。。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一藏獸藥止瀉散的研制方法，其特征在于：步驟2)中將獨(dú)一 味和纖毛婆婆納分別用中藥粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)40目篩后取1000g，按1:10比例加入75%乙 醇浸泡3天后將提取液濃縮、冷凍干燥成粉末備用；苦參切成小塊后放入瓶中加入75%乙 醇，常溫下浸提48小時(shí)，倒出浸提液后再浸提2次，濃縮提取液，將提取物冷凍干燥成粉末 備用；將松蘿剪成小段，于45°C煎煮三次，將3次提取液混合在一起，用紗布過(guò)濾，再用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀于45°C、1lOrpm濃縮浸提液至原體積的1 %，冷凍干燥后備用。將苦參切成小塊后放 入瓶中加入75%乙醇浸泡72小時(shí)后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于50°C將浸提液濃縮至無(wú)醇味，冷凍干 燥至粉末后備用。
【專利摘要】一種藏獸藥止瀉散及其研制方法，屬于藏獸藥止瀉散研制方法領(lǐng)域。本發(fā)明研制方法包括以下步驟：采集苦參、纖毛婆婆納、松蘿和獨(dú)一味四種藥材；將四種藥材經(jīng)切塊或粉碎過(guò)篩后按一定比例加入75％乙醇浸泡一段時(shí)間后將提取液濃縮、冷凍干燥成粉末備用；組方藥物稀釋液：將獨(dú)一味、纖毛婆婆納、松蘿凍干粉分別按質(zhì)量比例為1:6用二甲基亞砜稀釋，得藥物濃度為0.167g/mL，苦參按1:2的比例用二甲基亞砜稀釋成濃度為0.5g/mL，最后將藥物過(guò)濾除菌；選擇多種一定數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)菌株用微量稀釋法和紙片法評(píng)價(jià)其抗菌活性；采用L9(34)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化四個(gè)組方藥物的配伍組合，確定其最佳組合；按藥物濃度組距為0.8的梯度設(shè)置不同劑量組，測(cè)定組方藥物的LD50。
【IPC分類】A61P31/04, A61K36/80, A61K9/14, A61P1/12
【公開號(hào)】CN105343289
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510867397
【發(fā)明人】陳朝喜, 湯承
【申請(qǐng)人】西南民族大學(xué)
【公開日】2016年2月24日
【申請(qǐng)日】2015年12月1日