一種含肉桂的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種含肉桂的植物組合物提取方法及應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 含肉桂的植物組合物由肉桂100份，糞貸篤60份、薛生馬先葛50份、老鴉花藤80 份、百靈草70份作為原料藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時(shí)，合并煎 液，濾過(guò)，濃縮成稠膏，制粒，干燥，包糖衣，即得。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含肉桂的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報(bào)道， 而采用水煎煮的方法，工藝粗糖、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影響 了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種含肉桂的植物組合物 提取方法。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含肉桂的植物組合物在制備抑制膀脫癌 BIU- 87細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 一種含肉桂的植物組合物提取方法，植物組合物由肉桂100份，糞貸篤60份、薛 生馬先葛50份、老鴉花藤80份、百靈草70份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成： 取上述原料藥，粉碎，加入化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為 400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50 % 乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔 料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0008] 上述一種含肉桂的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次 萃取6分鐘。
[0009] 一種含肉桂的植物組合物在制備抑制膀脫癌BIU- 87細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，含 肉桂的植物組合物由肉桂100份，糞貸篤60份、薛生馬先葛50份、老鴉花藤80份、百靈草 70份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入化的70%乙 醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合 并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減 壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010] 上述一種含肉桂的植物組合物在制備抑制膀脫癌BIU- 87細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。 W11] 現(xiàn)有技術(shù)中，含肉桂的植物組合物每片〇.4g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明制備 成的含肉桂的植物組合物每片0. 4g，但含有的藥材量是原來(lái)的2倍，因此每次僅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實(shí)施方式】
[0012] W下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于W下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。 陽(yáng)〇1引實(shí)施例1
[0014] 取肉桂100份，糞貸篤60份、薛生馬先葛50份、老鴉花藤80份、百靈草70份，粉 碎，加入化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2 次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每 片0. 4邑。 陽(yáng)〇1引實(shí)施例2
[0016] 取肉桂100份，糞貸篤60份、薛生馬先葛50份、老鴉花藤80份、百靈草70份，粉 碎，加入化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2 次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。
[0017] 實(shí)施例3
[001引取肉桂100份，糞貸篤60份、薛生馬先葛50份、老鴉花藤80份、百靈草70份，粉 碎，加入化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2 次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019] 糞貸篤為防己科千金藤屬植物糞貸篤StephaniaIongaLour.，W全株入藥。全年 可采，曬干或鮮用。清熱解毒，利尿消腫。用于腎孟腎炎，膀脫炎，慢性腎炎，腸炎，頻疾，毒 蛇咬傷；外用治癡巧瘡瘍，化脈性中耳炎。
[0020] 薛生馬先葛為玄參科植物薛生馬先葛的根。大補(bǔ)元?dú)狻⑸虬采?、?qiáng)屯、、治氣血虛 損、虛勞多汗、虛脫衰竭，血壓下降。
[0021] 老鴉花藤為豆科植物密絨毛油麻藤或長(zhǎng)芙油麻藤的莖。舒筋活絡(luò)，調(diào)經(jīng)。治風(fēng)濕 骨痛，小兒麻搏后遺癥，月經(jīng)不調(diào)。
[0022] 百靈草為蘿摩科植物百靈草的全株?；钛寡?，止咳平喘。用于跌打損傷，風(fēng)濕痛， 內(nèi)出血，支氣管炎，哮喘；外用治骨折，外傷出血。舒筋活絡(luò)，補(bǔ)虛平喘。肉桂為藥典品種。
[0023] 實(shí)施例4冶肉桂的植物組合物抑制膀脫癌BIU- 87細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0024] 1實(shí)驗(yàn)材料 陽(yáng)0巧]1. 1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株 陽(yáng)0%] 膀脫癌BIU- 87細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10 %FBS 常規(guī)培養(yǎng)。
[0027] 1. 2實(shí)驗(yàn)藥物
[0028] 研究藥物：本發(fā)明含肉桂的植物組合物：按實(shí)施例1方法制備。
[0029] 藥液儲(chǔ)液：稱取IOOmg含肉桂的植物組合物，溶于5ml無(wú)水乙醇中，0. 2ym濾器過(guò) 濾，500yIdoff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)0. 2ym濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇W備對(duì)照組之用。
[0030] 1. 3實(shí)驗(yàn)試劑
[0031] DMEM(GIBC0 公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司化t. No. 11810-033Lot.No. 1088387);T巧PSin(AMRESC0 公司批號(hào)：2010/04) ^dta(AMRESO) 公司批號(hào)：2009/10)!PenicillinGSodiumSalUAMRESCO公司批號(hào)：2010242); Str巧tomycinSul化te(AMRESC0公司批號(hào)：2010382);無(wú)水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司 批號(hào)：080310182);MTT度iosha巧批號(hào)：0793);PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）； 陽(yáng)0巧 1. 4實(shí)驗(yàn)器材 陽(yáng)的引萊卡倒置顯微鏡（德國(guó)Leica型號(hào)：DMlL);可見-紫外光微孔板檢測(cè)儀（美國(guó)MD公司型號(hào)：S陽(yáng)CTRAMAX190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號(hào)：3111);超凈臺(tái)（蘇凈集團(tuán)安泰公 司制造型號(hào)：SW-CJ-Z抑）；純水儀（美國(guó)Spring公司型號(hào)：S/N020579);精密移液器（法 國(guó)吉爾森公司型號(hào)：P2);電子天平（德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào)：BT323巧；全自動(dòng)高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號(hào)：MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型 號(hào)：畑G9123A);冰箱（西口子公司型號(hào)：KG18V2m);液氮罐仰S型號(hào)：2001);低速離屯、 機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)：KA-1000) ;0.濾器（MILLIP0RE型號(hào)：SLGP033RB);10cm 培養(yǎng)皿（肥ST公司）、96孔培養(yǎng)板（肥ST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離屯、管、移液管、Tips若干。
[0034] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0035] 1)膀脫癌BIU- 87 細(xì)胞用DMEM+10%FBS于 37°C、5%C02 進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（IOcm 培養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0. 25% 膜蛋白酶-0. 04%邸TA, 37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞 后將其轉(zhuǎn)入離屯、管中，100化pm離屯、5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3XIO4個(gè)/ml。
[0036] 。將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180y1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱 中（37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0037] 3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50% -70%，加入含肉桂的植物組合物溶液，繼續(xù) 培養(yǎng)2地。
[0038]4) 2地后加入20y1MTT溶液巧mg/ml，即0. 5 %MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)地。
[0039] 5)地后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200y1二甲基亞諷，置搖 床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。W40] 6)同時(shí)設(shè)置本底（不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），對(duì)照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解 介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞諷），每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0041] 7)結(jié)果W藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示：
[0042] 細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值）/對(duì)照孔OD值X100%。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。 陽(yáng)0創(chuàng) 3統(tǒng)計(jì)處理
[0044] 采用MicrosoftExcel2003軟件中的相關(guān)分析和Studentt檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)W mean+S.D.表不。 W45] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0046] MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)膀脫癌 BIU- 87細(xì)胞增殖抑制有差異（P<0. 05)，劑量在lOmg/ml時(shí)該差異具有顯著性（P<0. 01)， 當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異（P<0. 001)。
[0047] 表1含肉桂的植物組合物對(duì)膀脫癌BIU- 87細(xì)胞增殖抑制影響研究(X+S田
陽(yáng)化0] 注：與對(duì)照組比較，沖<0.Ol;*沖<0.OOl
[0051] 5實(shí)驗(yàn)結(jié)論 陽(yáng)052] 含肉桂的植物組合物可W抑制膀脫癌BIU- 87細(xì)胞增殖，減少膀脫癌BIU- 87 細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種含肉桂的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由肉桂100份，糞箕篤 60份、蘚生馬先蒿50份、老鴉花藤80份、百靈草70份作為原料藥制成，制備方法由下列步 驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃 取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱 上，50 %乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物， 加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含肉桂的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微 波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。3. -種含肉桂的植物組合物在抑制膀胱癌BIU- 87細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在 于含肉桂的植物組合物由肉桂100份，糞箕篤60份、蘚生馬先蒿50份、老鴉花藤80份、百靈 草70份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70% 乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘， 合并萃取液，濃縮，加到D101大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液， 減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種含肉桂的植物組合物在抑制膀胱癌BIU- 87細(xì)胞增殖藥 物中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含肉桂的植物組合物提取方法，由肉桂100份，糞箕篤60份、蘚生馬先蒿50份、老鴉花藤80份、百靈草70份作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含肉桂的植物組合物在制備抑制膀胱癌BIU－87細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61P35/00, A61K36/80
【公開號(hào)】CN105343288
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510843993
【發(fā)明人】王菊明
【申請(qǐng)人】蘇州楓靈醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請(qǐng)日】2015年11月27日