長春七中sesibricin的抗炎應用及其提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物化學技術(shù)領(lǐng)域，具體設及一種長春屯中sesibricin的抗炎應 用及其提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗炎藥物是指對炎性反應有抑制作用或調(diào)節(jié)作用的一類藥物，主要適用于炎癥免 疫性疾病。其作為僅次于抗感染藥物的第二大類藥物，在人類與疾病的抗爭中發(fā)揮著重要 作用。除了非醬體類抗炎藥和腎上腺皮質(zhì)激素類外，中草藥也是應用很廣泛的抗炎藥。我國 中藥具有資源豐富，藥理作用廣泛，且毒副作用小等的優(yōu)點。一些中草藥活性成分如祗類、 巧類、苯丙素類、蔥釀類、黃酬類、生物堿類、多糖類等化合物等都具有很好的抗炎作用。因 此近年來，中草藥的抗炎藥理研究成為當今世界上新藥開發(fā)的熱點，也是中醫(yī)藥現(xiàn)代研究 十分活躍的領(lǐng)域。
[0003] 長春屯[Libanotis Buchtomensis(Fisch. )DC.]，又名長蟲屯，為傘形科，巖風屬 多年生草本植物，藥用其干燥的根和根莖。長春屯，性味辛甘，溫。具有桂風散寒，活血止痛， 桂風濕，鎮(zhèn)痛，解毒等功能。主治感冒風寒，周身疼痛，頭痛，牙痛，關(guān)節(jié)腫痛，跌打損傷，風濕 筋骨疼痛等癥。在我國主要分布于陜西、甘肅、新疆、寧夏、四川等地。
[0004] 近年來的研究報道發(fā)現(xiàn)長春屯中含有香豆素類、醋類、酬類、醬醇類等化合物;且 長春屯超臨界提取物、中性油和酪酸部分具有抗炎、鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用；乙酸和乙醇提取物也 有明顯的鎮(zhèn)痛活性。目前雖然有報道從長春屯、云前胡等中藥中均分離得到sesibricin，但 卻未見其具有抗炎活性的研究報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種長春屯中sesibricin的抗炎應用及其提取方法，該提 取方法條件溫和、操作簡便、成本低，經(jīng)該方法提取得到的化合物抗炎活性高，從而有助于 在炎癥治療過程中發(fā)揮作用。
[0006]本發(fā)明是通過W下技術(shù)方案來實現(xiàn)：
[0007] 本發(fā)明公開了sesibricin在制備抗炎藥物中的應用，所述sesibricin的結(jié)構(gòu)如 下：
[000引
[0009] 本發(fā)明還公開了從長春屯中提取上述sesibricin的方法，包括W下步驟：
[0010] 1)取長春屯的根和根莖粗粉，采用體積分數(shù)為95%的乙醇冷浸提取數(shù)次，合并提 取液，濃縮后得到褐色乙醇提取物；
[0011] 2)將乙醇提取物用娃藻±拌勻，W石油酸為萃取溶劑進行索氏提取，回收溶劑，審U 得石油酸提取物；
[0012] 3)將石油酸提取物通過硅膠色譜柱分離，用石油酸-乙酸乙醋溶劑系統(tǒng)進行梯度 洗脫，分離得到SeSibriCiη粗品。
[0013] 還包括將分離得到的sesibricin粗品進行重結(jié)晶處理，制得sesibricin的白色針 狀結(jié)晶。
[0014]所述重結(jié)晶是將sesibricin粗品先用石油酸：乙酸乙醋體積比為5:1的混合溶劑 反復重結(jié)晶，然后末次用石油酸重結(jié)晶，制得白色針狀結(jié)晶。
[0015]步驟1)所述的冷浸提取具體是用體積分數(shù)為95%的乙醇浸提Ξ次，Ξ次加入的乙 醇體積分別為長春屯的根和根莖粗粉質(zhì)量的6倍、4倍和4倍。
[0016] 步驟3)所述的硅膠色譜柱采用100-200目硅膠濕法裝柱制得。
[0017]所述的石油酸-乙酸乙醋溶劑系統(tǒng)是按石油酸：乙酸乙醋體積比為40:0~10:1的 比例進行梯度洗脫，對洗脫液進行薄層檢識，收集石油酸：乙酸乙醋體積比為20:1的洗脫 液。
[0018]將收集的石油酸:乙酸乙醋體積比為20:1的洗脫液進行減壓濃縮，回收溶劑，薄層 色譜法檢識，合并洗脫液，然后經(jīng)靜置、析晶及過濾，得到淡黃色sesibricin粗品。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有W下有益的技術(shù)效果：
[0020] 本發(fā)明首次公開了長春屯中sesibricin具有抗炎作用，W抗炎作用為藥效學指標 對長春屯中制得的sesibricin進行活性研究，確定其為長春屯抗炎的活性成分之一。通過 二甲苯所致小鼠耳廓腫脹抑制試驗和角叉菜膠所致小鼠足腫脹抑制實驗，證明了長春屯中 sesibricin具有較好的抗炎作用。本發(fā)明結(jié)果顯示:ses化ricin抗炎活性顯著，有望成為具 有抗炎作用的備選藥物；同時也為長春屯藥材的質(zhì)量控制、臨床合理用藥和進一步開發(fā)利 用提供依據(jù)。
[0021] 本發(fā)明還公開了從長春屯中提取分離sesibricin的方法，該方法采用體積分數(shù)為 95%乙醇為溶劑進行提取，低毒，低成本，實驗條件溫和，且可循環(huán)利用，適合工業(yè)化生產(chǎn)； 采用冷浸的方式進行提取，不需要加熱，提取條件溫和，溶出雜質(zhì)少，且提取裝置簡單，可行 性和重復性良好;將乙醇提取物分別用不同極性的有機溶劑進行索氏提取，通過化C確定大 部分sesibricin在石油酸(60-90°C)提取物中，故對石油酸(60-90°C)提取物進行柱色譜分 離制備sesibricin;采用索氏提取的方式，節(jié)能環(huán)保，節(jié)約溶劑，操作較簡便，提取效率高。 將石油酸提取物通過硅膠柱色譜分離，用石油酸(60-90°C)-乙酸乙醋溶劑系統(tǒng)進行梯度洗 脫，收集石油酸(60-90°C)-乙酸乙醋（20:1)的洗脫液，靜置，析出淡黃色沉淀，沉淀經(jīng)反復 重結(jié)晶，得到白色針狀結(jié)晶，經(jīng)鑒定為sesibriCin。
【附圖說明】
[0022] 圖1為本發(fā)明制得的sesibricin的化C圖；
[0023] 其中，a-l、b-l和C-1為在紫外燈(365nm)下觀察到藍色巧光斑點；a-2、b-2和C-2為 噴WlO%硫酸乙醇溶液，驚干，加熱，可見光下顯黃色的斑點；a-3、b-3和c-3為可見光下顯 色后，紫外燈(365nm)下顯棟黃色的斑點；
[0024] 圖2為本發(fā)明制得的sesibricin的HPLC圖；
[0025] 圖3為本發(fā)明制得的sesibricin的UV圖；
[0026] 圖4為本發(fā)明制得的sesibricin的IR圖；
[0027] 圖5為本發(fā)明制得的sesibricin的ESI-MS圖；
[002引圖6為本發(fā)明制得的sesibricin的IH-NMR圖；（CDCb,400MHz)
[0029] 圖 7 為本發(fā)明制得的sesibricin的"C-NIR圖（CDCl3,400MHz);
【具體實施方式】
[0030] 下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而 不是限定。
[0031] 本發(fā)明公開了從長春屯中提取sesibricin的方法，包括W下步驟：
[0032] 1)冷浸提取:取陜西太白山產(chǎn)長春屯干燥的根和根莖，洗凈，干燥，粉碎，用體積分 數(shù)為95 %乙醇冷浸提取數(shù)次，濾過，合并提取液，回收溶劑，得褐色乙醇提取物。
[0033] 2)石油酸索氏提取:將所得乙醇提取物與娃藻±拌勻后，用石油酸(60-90°C)進行 索氏提取，將提取液減壓濃縮，得石油酸提取物。
[0034] 3)將石油酸提取物通過硅膠柱色譜分離，得到sesibricin的粗品。所述的柱色譜 分離步驟如下：采用100-200目硅膠濕法裝柱制得硅膠色譜柱，取石油酸提取物與硅膠拌 樣，上樣至色譜柱，用石油酸(60-90°C)-乙酸乙醋溶劑系統(tǒng)(40:0~10:1)進行梯度洗脫，收 集其中石油酸(60-90°C)-乙酸乙醋(20:1)的洗脫液，回收溶劑，用薄層色譜法檢識，合并組 分基本相同的洗脫液，放置，有淡黃色結(jié)晶析出，過濾，得淡黃色沉淀。
[0035] 4)將柱色譜法分離析出的沉淀經(jīng)過重結(jié)晶步驟，得到sesibricin的結(jié)晶。精制過 程，是將柱色譜法分離析出的淡黃色沉淀將sesibricin粗品先用石油酸-乙酸乙醋(5:1)反 復重結(jié)晶，末次用石油酸重結(jié)晶，得到白色針狀結(jié)晶。
[0036] 所述的長春屯為陜西秦己山區(qū)道地藥材，產(chǎn)于陜西太白山。
[0037] 綜上所述，本發(fā)明提出了一種提取條件溫和、操作簡單、成本低的方法，該方法能 夠從陜西太白山產(chǎn)長春屯根和根莖中有效提取sesibricin。
[003引實施例1
[0039] 取長春屯干燥的根和根莖粗粉4kg，用體積分數(shù)為95 %乙醇冷浸提取Ξ次，每次提 取Ξ天，Ξ次加入的體積化)分別為長春屯的根和根莖粗粉質(zhì)量化g)的6、4和4倍，合并提取 液，減壓濃縮，回收溶劑，得棟褐色乙醇提取物774g。
[0040] 將所得乙醇提取物與娃藻±拌勻后，用石油酸(60-90°C)溶劑進行索氏提取2地， 回收石油酸溶劑，得石油酸提取物，共152g。
[0041 ] 先用100-200目硅膠濕法裝柱制得硅膠色譜柱，再取石油酸提取物5始與適量硅膠 拌樣，上樣至硅膠柱，進行柱色譜分離，W石油酸(60-90°C)-乙酸乙醋溶劑系統(tǒng)作為洗脫 劑，按體積比40:0~10:1進行梯度洗脫，在石油酸(60-90°C)與乙酸乙醋體積比分別為40; 0、40:1、20:1和10:1條件下，收集洗脫液，每份收集2501111，共收集222份。分別為1、11、虹和 IV四個部分。其中I部分為1-45份，為石油酸-乙酸乙醋（40:0)洗脫部分；Π部分為46-109 份，為石油酸-乙酸乙醋(40:1)洗脫部分；虹部分為110-183份，為石油酸-乙酸乙醋（20:1) 洗脫部分;IV部分為184-222份，為石油酸-乙酸乙醋（10:1)洗脫部分。將洗脫液減壓濃縮， 薄層色譜法檢識，合并成分基本相同的流份，靜置，虹部分中113-118編號有淡黃色沉淀析 出，過濾，得淡黃色沉淀。
[0042] 將柱色譜法分離析出沉淀將sesibricin粗品先用石油酸-乙酸乙醋（5:1)反復重 結(jié)晶，末次用石油酸重結(jié)晶，得到白色針狀結(jié)晶，稱為化合物A，共0.17 10g(純度為 98.24%)。
[0043] 化合物A的純度檢查采用化C和HPLC法?；衔顰純度檢查的化C法，結(jié)果見圖1。取 化合物A，加甲醇制成濃度為l(K)yg·ml/i的溶液，吸取扣L點于W簇甲基纖維素鋼為粘合劑 的硅膠G薄層板上，分別用展開劑:a.石油酸(60-90°C)-乙酸乙醋（5:l)、b.正己燒-乙酸乙 醋-丙酬（15:1:2.5)和C.石油酸-正己燒-丙酬(6: 3: 2)為展開劑，展開，取出，驚干，在紫外 燈(365nm)下觀察到藍色巧光斑點，見圖1 (a-1、b-l和C-1);噴W10%硫酸乙醇溶液，驚干， 加熱，可見光下斑點顯黃色，見