溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物I;
5)硅膠柱分離純化:將步驟4)烘干得到的粗提物I用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液為含1%甲醇的氯仿溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物Π;
6)用ODS開放柱分離純化:將步驟5)得到的粗提物Π用乙醇溶解后上ODS開放柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物m;
7)用中壓柱分離純化:將步驟6)得到的粗提物m上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物IV;
8)f過濾結(jié)晶:將步驟7)得到的粗提物IV用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進(jìn)行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時停止攪拌，靜置50min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。
[0021]步驟4 )、步驟6 )、步驟7 )中的乙醇水溶液為80%的乙醇水溶液。所述的步驟8 )中的濾膜孔徑為0.5μπι。
[0022]本是實施例黃芪總黃酮的提取率為1.6mg/g。
[0023]實施例3
1)粗提液獲取:干燥黃芪根原料Ikg，清洗、干燥、粉碎后加入3倍水(清洗為用清水清洗3次，粉碎為黃芪粉碎至75目)，在微波功率為120W、pH=6.5條件下進(jìn)行提取1.2h，提取2次，合并提取液靜置放涼，得到粗提液；
2)濃縮蒸發(fā):在步驟I)得到的粗提液中加入由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的天然植物提取液澄清劑KBT-ZTC，加入量為7.5g/L，靜置25min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，至水比重d為1.20的浸膏，得到浸膏粗品；
3)溶解除雜:在步驟2)得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量為浸膏的3倍體積，攪拌浸膏進(jìn)行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進(jìn)行攪拌后靜置，離心收集沉淀物；
4)大孔吸附樹脂柱分離純化:將步驟3)得到的沉淀物上大孔吸附樹脂柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物I;
5)硅膠柱分離純化:將步驟4)烘干得到的粗提物I用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液為含3%甲醇的氯仿溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物Π;
6)用ODS開放柱分離純化:將步驟5)得到的粗提物Π用乙醇溶解后上ODS開放柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物m;
7)用中壓柱分離純化:將步驟6)得到的粗提物m上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物IV;
8)f過濾結(jié)晶:將步驟7)得到的粗提物IV用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進(jìn)行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時停止攪拌，靜置30min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。
[0024]步驟4 )、步驟6 )、步驟7 )中的乙醇水溶液為70%的乙醇水溶液。所述的步驟8 )中的濾膜孔徑為0.35μηι。
[0025]本是實施例黃芪總黃酮的提取率為1.9mg/g。
[0026]應(yīng)用實施例1
黃芪總黃酮按照一定的比例拌入豬的喂養(yǎng)飼料中(Ikg的飼料中添加5g黃芪總黃酮)，一日三餐中喂養(yǎng)一餐，可以顯著提高動物的免疫力，發(fā)病率從最初的30%降低到了 18.5%，實現(xiàn)動物的健康飼養(yǎng)，減少抗生素、激素藥物的治療，實現(xiàn)生態(tài)飼養(yǎng)，提高畜牧養(yǎng)殖經(jīng)濟價值。
[0027]應(yīng)用實施例2
黃芪總黃酮按照一定的比例拌入牛的喂養(yǎng)飼料中(Ikg的飼料中添加9g黃芪總黃酮)，一日三餐中喂養(yǎng)一餐，可以顯著提高動物的免疫力，發(fā)病率從最初的32%降低到了20.5%，實現(xiàn)動物的健康飼養(yǎng)，減少抗生素、激素藥物的治療，實現(xiàn)生態(tài)飼養(yǎng)，提高畜牧養(yǎng)殖經(jīng)濟價值。
[0028]本發(fā)明上述實施例方案僅是對本發(fā)明的說明而不能限制本發(fā)明，權(quán)利要求中指出了本發(fā)明的范圍，而上述的說明并未指出本發(fā)明的范圍，因此，在與本發(fā)明的權(quán)利要求書相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是包括在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
[0029]本發(fā)明是經(jīng)過多位黃芪總黃酮提取加工人員長期工作經(jīng)驗積累，并通過創(chuàng)造性勞動創(chuàng)作而出，其在在實際黃芪總黃酮的提取過程中，該方法可得到黃芪總黃酮提取率為1.3?1.9mg/g以上，得到的黃芪總黃酮可用于獸醫(yī)臨床中對動物免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗菌方面等藥物預(yù)防治療。
【主權(quán)項】
1.一種利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，以黃芪為原料，其特征在于，該方法步驟包括: 1)粗提液獲取:干燥黃芪根原料Ikg，清洗、干燥、粉碎后加入3?6倍水，在微波功率為80?150W、pH=6?7條件下進(jìn)行提取I?1.5h，提取2次，合并提取液靜置得到粗提液； 2)濃縮蒸發(fā):在步驟I)得到的粗提液中加入天然植物提取液澄清劑KBT-ZTC，加入量為5?10g/L，靜置20~30min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，得到浸膏粗品； 3)溶解除雜:在步驟2)得到的浸膏粗品中加入乙醇，攪拌浸膏進(jìn)行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進(jìn)行攪拌后靜置，離心收集沉淀物； 4)大孔吸附樹脂柱分離純化:將步驟3)得到的沉淀物上大孔吸附樹脂柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物I; 5)硅膠柱分離純化:將步驟4)烘干得到的粗提物I用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物Π ; 6)用ODS開放柱分離純化:將步驟5)得到的粗提物Π用乙醇溶解后上ODS開放柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物m; 7)用中壓柱分離純化:將步驟6)得到的粗提物m上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物IV; 8)過濾結(jié)晶:將步驟7)得到的粗提物IV用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進(jìn)行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時停止攪拌，靜置20-50min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，其特征在于，所述的清洗為用清水清洗2?3次;所述的粉碎為黃芪粉碎至50?100目。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，其特征在于，所述的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮為將粗提液蒸發(fā)至水比重d為1.0?1.50的浸膏。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，其特征在于，所述的步驟3 )中乙醇的加入量為浸膏的2?5倍體積。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，其特征在于，所述的步驟I)中酶液成分為半纖維素酶、真菌淀粉酶、纖維素酶中的一種或是它們的組合物。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，其特征在于，所述的天然植物提取液澄清劑KBT-ZTC為由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的澄清劑。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，其特征在于，所述的步驟5)中含甲醇的氯仿溶液為含1~5%甲醇的氯仿溶液。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，其特征在于，所述的步驟4 )、步驟6 )、步驟7 )中的乙醇水溶液為60?80%的乙醇水溶液。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，其特征在于，所述的步驟9)中的濾膜孔徑為0.35-0.5μπι。
【專利摘要】本發(fā)明涉及黃芪藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體說是利用微波技術(shù)技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝。該方法步驟取干燥黃芪根清洗、干燥、粉碎后加入水，微波提取2次，合并提取液靜置放涼，加入天然植物提取液澄清劑KBT-ZTC，靜置后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液得到浸膏粗品；浸膏粗品中加入乙醇，攪拌浸膏靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，依次經(jīng)大孔吸附樹脂柱、硅膠柱、ODS開放柱、中壓柱分離純化技術(shù)得到純品黃芪總黃酮。本發(fā)明微波輻射細(xì)胞破裂使胞外溶劑容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，溶解更總黃酮提高了總黃酮的收率，并且引入的澄清除雜過程能夠高效去除黃芪總黃酮中的蛋白質(zhì)、核酸、淀粉等大分子雜質(zhì)。
【IPC分類】A23K20/121, A61P37/04, A61K36/481
【公開號】CN105535080
【申請?zhí)枴緾N201610017094
【發(fā)明人】徐大鵬
【申請人】徐大鵬
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2016年1月12日