一種延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域，具體地說，設(shè)及一種延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 稱黑素(Melatonin, MT)是松果體分泌的一種嗎I噪類神經(jīng)內(nèi)分泌激素，其分泌有明 顯晝低夜高的節(jié)律性。1958年由美國皮膚病學(xué)家Lerner從肉牛松果體中首次分離出運(yùn)一化 合物，并鑒定出其化學(xué)結(jié)構(gòu)為N-乙酷-5-甲氧基色胺。其分子式為Cl油16的〇3,分子量為 232.27，烙點(diǎn)116.65~118°C。稱黑素是一種高親脂性和部分親水性的化合物，屬中性偏弱 酸性。不溶于水，溶于丙酬、乙醇、乙酸等有機(jī)溶劑，受熱易破壞。因稱黑素含有嗎I噪環(huán)而具 有嗎I噪雜環(huán)的性質(zhì)，另外它能與徑自由基(-OH)和燒過氧自由基(R00-)等反應(yīng)。稱黑素合成 原料為色氨酸，在松果體內(nèi)由徑基嗎I噪氧化酶催化最終合成，其半衰期約lOmin，主要在肝 臟微粒體徑化酶催化下生成6-徑基稱黑激素由尿液排出。稱黑素廣泛存在于多種生物中， 分泌量隨年齡增長逐漸降低。
[0003] 稱黑素與卵母細(xì)胞成熟間的關(guān)系，已有相關(guān)研究。Brzezinski等（1987)研究表明， 人卵泡液中的稱黑素的含量比周圍血清中的高。Itoh等（1999)報(bào)道，人類卵巢可W合成稱 黑素。Tatyana等（2007)研究發(fā)現(xiàn)，在給小鼠注射異種抗卵巢抗體前用5mg/kg MT連續(xù)給小 鼠注射3次，可W改善異種抗卵巢抗體引起的卵母細(xì)胞成熟率的降低及卵泡細(xì)胞、淋己結(jié)細(xì) 胞的調(diào)亡。Takasaki等(2003)給因卵母細(xì)胞質(zhì)量差而導(dǎo)致不孕的婦女服用MT(3mg/d)后，測 得卵泡液內(nèi)MT的濃度極顯著增加、脂質(zhì)過氧化物化P0)的含量明顯降低、退化的卵母細(xì)胞的 數(shù)量極顯著降低、不孕婦女的受孕率明顯提高。而化rosh等(2008)在人體外受精-胚胎移植 (IVF-ET)上的研究表明，活性氧簇(R0S)會降低卵母細(xì)胞的質(zhì)量，MT可W保護(hù)卵母細(xì)胞免受 自由基的損傷，并且可W提高體外受精率。
[0004] 近年來，稱黑素得到廣泛的應(yīng)用和關(guān)注，國內(nèi)外均有對其抗氧化作用的研究，多項(xiàng) 研究均表明稱黑素是一種很有效的自由基清除劑，能激活其他抗氧化酶的活性，有效清除 自由基，保護(hù)器官細(xì)胞免受損害。實(shí)驗(yàn)動物攝入稱黑素的方式大多為松果體移植、皮下或腹 腔注射等非口服的實(shí)驗(yàn)手段，在為數(shù)不多的采用口服稱黑素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究的報(bào)道中，也未 見詳細(xì)的稱黑素對生殖機(jī)能影響的報(bào)道。如魏濤等(2002年)的研究表明口服稱黑素同樣能 提高小鼠機(jī)體的抗氧化能力，但未研究其對生殖機(jī)能的影響。
[0005] 德國是第一個將松果體、稱黑素及生殖機(jī)能聯(lián)系在一起研究的國家。人們還通過 動物實(shí)驗(yàn)證明了松果體分泌的稱黑素運(yùn)方面的作用。給動物注射稱黑素會出現(xiàn)諸多抗生殖 機(jī)能的現(xiàn)象，如延緩未成熟動物的性成熟，抑制動物的自發(fā)性排卵和發(fā)情反應(yīng)。用稱黑素給 兔子注射，不僅使雌雄兩性生殖器官較正常細(xì)小，身體較矮小，而且雌兔卵巢內(nèi)卵泡退化， 子宮肌肉減少，雄兔的曲精管內(nèi)精細(xì)胞退化。如繼續(xù)注射到6個月，不論雌雄，都失去了生殖 能力。因此一些研究者據(jù)此得出結(jié)論，稱黑素起著明顯的抑制生殖機(jī)能的作用。運(yùn)一點(diǎn)，連 稱黑素產(chǎn)品專利執(zhí)有者、美國馬薩諸塞工業(yè)大學(xué)的烏特曼博±(此人曾在腦白金的宣傳材 料中隆重出場，但記者核對其論文的英文原文，發(fā)現(xiàn)其對稱黑素的功能出言極為謹(jǐn)慎)也完 全認(rèn)同。
[0006] 但本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)試驗(yàn)偶然發(fā)現(xiàn)，經(jīng)口服方式飼喂稱黑素的實(shí)驗(yàn)小鼠，在生殖 機(jī)能方面表現(xiàn)出一定的改善，如顯著地增加了產(chǎn)仔數(shù)等，運(yùn)與現(xiàn)有技術(shù)提供的教導(dǎo)相惇。因 此，現(xiàn)有技術(shù)中對稱黑素與生殖機(jī)能之間的研究尚不全面，如能夠研發(fā)出一種延緩雌性小 鼠生殖機(jī)能衰退的方法，將對其他物種具有指導(dǎo)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種延緩雌性動物生殖機(jī) 能畏退的方法。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0009] 本發(fā)明提供一種延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退的方法，具體為使動物通過口服方式 攝取稱黑素。
[0010] 所述延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退表現(xiàn)為:提高大齡雌性動物的產(chǎn)仔數(shù)、卵巢的SOD 水平、子宮的SOD水平、可用卵數(shù)量、總沖卵數(shù)、卵裂率或囊胚率，或降低大齡雌性動物卵巢 的MDA水平、子宮的MDA水平或不可用卵數(shù)量。
[0011] 進(jìn)一步地，本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)摸索得到對延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退有效的稱黑素 攝取劑量，具體為動物攝取稱黑素的日劑量與動物體重比為0.6~600mg/kg。
[0012] 更進(jìn)一步地，本發(fā)明通過大量客觀試驗(yàn)，針對具體不同的雌性動物生殖機(jī)能衰退， 提供了不同的最佳攝取量如下，W實(shí)現(xiàn)最佳的延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退的效果。
[0013] (1)提高大齡雌性動物的產(chǎn)仔數(shù)或總沖卵數(shù)時，動物攝取稱黑素的日劑量與動物 體重比為0.6~60mg/kg。
[0014] (2)提高大齡雌性動物的可用卵數(shù)量或囊胚率時，動物攝取稱黑素的日劑量與動 物體重比為6~60mg/kg。
[0015] (3)提高大齡雌性動物的卵巢的SOD水平或降低不可用卵數(shù)量時，動物攝取稱黑素 的日劑量與動物體重比為6 + Img/kg或600 + lOOmg/kg。
[0016] 本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)例中驗(yàn)證了當(dāng)動物日攝取稱黑素的劑量為6mg/kg和600mg/kg時，能 顯著提高大齡雌性動物的卵巢的SOD水平且顯著降低不可用卵數(shù)量。本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)例中對 稱黑素?cái)z取劑量W10倍梯度進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可W預(yù)見到，在最終篩選到的 最佳劑量的基礎(chǔ)上，適當(dāng)?shù)倪M(jìn)行些許上下浮動，仍然能夠?qū)崿F(xiàn)相應(yīng)的技術(shù)效果。
[0017] (4)降低大齡雌性動物的子宮的MDA7JC平時，動物攝取稱黑素的日劑量與動物體重 比為 60±10mg/kg。
[0018] (5)降低大齡雌性動物的卵巢的MDA水平時，動物攝取稱黑素的日劑量與動物體重 比為 60 ~600mg/kg。
[0019] (6)提高大齡雌性動物的子宮的SOD水平時，動物攝取稱黑素的日劑量與動物體重 比為0.6 ~600mg/kg。
[0020] (7)提高大齡雌性動物的卵裂率時，動物攝取稱黑素的日劑量與動物體重比為6~ 600mg/kg。
[0021] 本發(fā)明研究針對的動物對象為實(shí)驗(yàn)小鼠，實(shí)施例中使用的動物為8周齡的昆明白 母鼠，購自中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中屯、，自由采食(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中屯、生 產(chǎn)全價營養(yǎng)顆粒飼料)和飲水?？毓?光照12h/d)，室內(nèi)溫度為20~22°C。
[0022] 實(shí)驗(yàn)小鼠是哺乳動物模式生物，被廣泛運(yùn)用于世界各地的實(shí)驗(yàn)室，新技術(shù)的開發(fā)、 運(yùn)用和檢測多在實(shí)驗(yàn)小鼠上進(jìn)行，W檢測該技術(shù)的可實(shí)施性和安全性。其中昆明白小鼠自 引進(jìn)W后，是目前我國生產(chǎn)量、使用量最大的遠(yuǎn)交群小鼠?？茖W(xué)地管理實(shí)驗(yàn)鼠及使用合適的 實(shí)驗(yàn)手段是保證實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素。同時，對實(shí)驗(yàn)小鼠行之有效的實(shí)驗(yàn)手段，也可W考慮 運(yùn)用于其他物種。
[0023] 因此，所述動物可為小鼠、大鼠、豬、狐貍、兔或水貂等，飼喂起始時間為動物的性 成熟時期，可一直飼喂到繁殖性能喪失。
[0024] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0025] 本發(fā)明提供一種延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退的方法，具體為使動物通過口服方式 攝取稱黑素。所述延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退表現(xiàn)為:提高大齡雌性動物的產(chǎn)仔數(shù)、卵巢的 SOD水平、子宮的SOD水平、可用卵數(shù)量、總沖卵數(shù)、卵裂率或囊胚率，或降低大齡雌性動物卵 巢的MDA水平、子宮的MDA水平或不可用卵數(shù)量。
[0026] 本發(fā)明通過大量客觀試驗(yàn)，針對具體不同的雌性動物生殖機(jī)能衰退，提供了不同 的最佳攝取量，W實(shí)現(xiàn)最佳的延緩雌性動物生殖機(jī)能衰退的效果。
[0027] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，在雌性8周齡小鼠（相當(dāng)婦女20歲左右)飼料或飲水中開始每天添加 稱黑素。直到服用24周齡小鼠（相當(dāng)婦女50歲左右)老齡時，與未添加稱黑素相比，可W顯著 地增加其產(chǎn)仔數(shù)。運(yùn)種方式不僅能夠做到方便地按需添加，及時更改劑量，而且在自動喂料 喂水系統(tǒng)下能夠?qū)崿F(xiàn)大范圍使用。
[0028] 隨著時代進(jìn)步和社會發(fā)展，女性晚婚晚孕已經(jīng)成為一種常見現(xiàn)象。已有研究表明， 女性的生殖機(jī)能在35歲之后面臨急劇下降，包括卵子質(zhì)量退化、卵巢衰老、子宮機(jī)能下降等 等。因此，如何延緩大齡女性生殖機(jī)能的衰退成為當(dāng)前科學(xué)前沿的重要問題。本發(fā)明可為延 緩大齡女性生殖機(jī)能的衰退提供參考。
【附圖說明】
[0029] 圖1為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中不同濃度MT對24周齡小鼠產(chǎn)仔數(shù)的影響；肩標(biāo)不同字母代 表差異顯著P<〇. 05，肩標(biāo)含有相同字母代表差異不顯著P〉0.05。
[0030] 圖2為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中不同濃度MT對24周齡小鼠卵巢和子宮MDA水平的影響。
[0031] 圖3為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中不同濃度MT對24周齡小鼠卵巢和子宮SOD水平的影響。
[0032] 圖4為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中不同濃度MT飲水組24周齡小鼠可用卵數(shù)、不可用卵數(shù)及總 沖卵數(shù)的比較。
[0033] 圖5為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中不同濃度MT飲水組24周齡小鼠卵體外受精后卵裂率和囊胚 率的比較。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。需要理解的是W下實(shí) 施例的給出僅是為了起到說明的目的，并不是用于對本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。本領(lǐng)域的技 術(shù)人員在不背離本發(fā)明的宗旨和精神的情況下，可W對本發(fā)明進(jìn)行各種修改和替換。
[0035] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0036] W下實(shí)施例中使用的試劑和材料均為市售商品。使用的稱黑素(Melatonin, MT)購 自 Si 卵 a 公司（St 丄 ouis，M0，USA)。
[0037] W下實(shí)施例中使用的動物為8周齡的昆明白母鼠，購自中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn) 動物中屯、，自由采食(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中屯、生產(chǎn)全價營養(yǎng)顆粒飼料)和飲水。控光 (光照12h/d)，室內(nèi)溫度為20~22°C。
[003引實(shí)施例1
[0039] 本實(shí)施例設(shè)及給雌性動物飼喂稱黑素進(jìn)而延緩