用于肺特異性遞送的工具的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含脂質(zhì)組合物的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物由以下組成：式(I)的陽離子脂質(zhì)，其中n是1、2、3和4中的任一個，其中m是1、2和3中的任一個，Y?是陰離子，其中R1和R2中的每一個單獨地和獨立地選自直鏈C12?C18烷基和直鏈C12?C18烯基；甾醇化合物，其中所述甾醇化合物選自膽甾醇和豆甾醇；和聚乙二醇化脂質(zhì)，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)包含PEG部分，且其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)選自：式(II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，其中R3和R4中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C13?C17烷基，且p是15?130的任意整數(shù)；式(III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺，其中R5是直鏈C7?C15烷基，且q是15?130的任意整數(shù)；和式(IV)的聚乙二醇化二酰甘油，其中R6和R7中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C11?C17烷基，且r是15?130的任意整數(shù)。
【專利說明】用于肺特異性遞送的工具
[0001] 本發(fā)明涉及包含脂質(zhì)組合物的組合物;用在治療疾病的方法中的包含脂質(zhì)組合物 的組合物;包含脂質(zhì)組合物的組合物用于制備用于治療和/或預防疾病的藥物的用途;藥物 組合物，其含有包含脂質(zhì)組合物的組合物;包含脂質(zhì)組合物的組合物作為轉運劑的用途;試 劑盒，其含有包含脂質(zhì)組合物的組合物；用于將生物學活性化合物或藥學活性化合物轉運 到細胞中或穿過細胞膜的方法，其中所述方法包括使所述細胞或所述細胞膜與所述包含脂 質(zhì)組合物的組合物接觸;用于治療和/或預防疾病的方法，其中所述方法包括給有此需要的 受試者施用有效量的所述包含脂質(zhì)組合物的組合物。
[0002] 分子生物學以及分子醫(yī)學都嚴重依賴于將生物學活性化合物引入細胞中。這樣的 生物學活性化合物典型地分別包括DNA、RNA以及肽和蛋白質(zhì)以及其它。不得不克服的障礙 典型地是具有帶負電荷的外表面的脂質(zhì)雙層。在本領域中，已經(jīng)開發(fā)了許多技術以穿透細 胞膜并且由此引入所述生物學活性化合物。但是，為實驗室用途設想的一些方法不能用于 醫(yī)學領域，并且更具體地不適合用于藥物遞送。例如，本領域已知的電穿孔和彈道 (ballistic)方法僅僅容許(如果能夠的話)生物學活性化合物的局部遞送。除了所述脂質(zhì) 雙層之外，細胞膜還包含運輸系統(tǒng)。因此，進行努力以使用該種類的運輸系統(tǒng)，以便將所述 生物學活性化合物轉運穿過細胞膜。但是，由于這樣的運輸系統(tǒng)的特異性或交叉反應性，它 們的應用不是普遍可適用的方法。
[0003] 在本領域中描述的用于將生物學活性化合物轉運到細胞中的一種更普遍可適用 的方案是使用病毒載體。但是，病毒載體僅可以用于將基因有效地轉運到一些細胞類型中； 但是它們不可用于將化學合成的分子引入到細胞中。
[0004] 一個替代方案是使用所謂的脂質(zhì)體(Bangham，J.Mol .Biol .13,238-252)。脂質(zhì)體 是兩親的脂質(zhì)在水中締合后所產(chǎn)生的小泡。脂質(zhì)體典型地包含同心排列的磷脂雙層。取決 于層的數(shù)量，脂質(zhì)體可以分類為小的單層小泡、多層小泡和大的多層小泡。已經(jīng)證明脂質(zhì)體 是有效的遞送劑，因為它們可以將親水的化合物摻入水性中間層中，而將疏水的化合物摻 入脂質(zhì)層中。本領域眾所周知，脂質(zhì)制劑的組成以及它的制備方法對得到的脂質(zhì)聚集體的 結構和大小具有影響，并因而對脂質(zhì)體具有影響。也已知脂質(zhì)體結合陽離子脂質(zhì)。
[0005] 除了是脂質(zhì)體的組分之外，陽離子脂質(zhì)也已經(jīng)引起相當大的注意，因為它們可以 如此用于生物聚合物的細胞遞送。使用陽離子脂質(zhì)，由于靜電相互作用可以將任何陰離子 化合物基本上以定量方式包封。另外，據(jù)信，陽離子脂質(zhì)與帶負電荷的細胞膜相互作用，從 而引發(fā)細胞膜運輸。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，使用含有陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)體制劑或?qū)⑷绱说年栯x子脂質(zhì) 與生物學活性化合物一起使用需要探索性的方法，因為每種制劑具有有限的用途，因為它 典型地可以將質(zhì)粒遞送到一些而不是全部細胞類型中，經(jīng)常是在不存在血清的情況下。
[0006] 已經(jīng)證實脂質(zhì)和由其運輸?shù)纳飳W活性化合物的電荷和/或質(zhì)量比是不同類型的 所述生物學活性化合物遞送中的關鍵因素。例如，已經(jīng)證實，適于包含5,000至10,000個堿 基大小的質(zhì)粒遞送的脂質(zhì)制劑對于典型地包含約10至約50個堿基的寡核苷酸如siRNA分 子、合成的核酶或反義分子的遞送而言通常不是有效的。另外，最近已經(jīng)指示，即使在相同 的細胞類型中，反義寡核苷酸和核酶的最佳遞送條件也是不同的。
[0007] 美國專利6,395,713公開了基于陽離子脂質(zhì)的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)由親 脂基團、接頭和頭基團組成，并且公開了這樣的組合物用于將生物學活性化合物轉運到細 胞中的用途。
[0008] 國際專利申請W0 2005/105152公開了另一種基于陽離子脂質(zhì)的組合物，其經(jīng)證實 在功能性核酸分子如siRNA分子的遞送中是特別有效的。
[0009] 取決于要治療的疾病和要遞送的藥物，需要將藥物遞送至特定器官或特定細胞類 型。一種這樣的特定器官是肺，且一種這樣的特定細胞類型是肺內(nèi)皮細胞。肺和肺內(nèi)皮細胞 的革G向例如在用于治療疾病如急性肺損傷(acute lung injury)、急性呼吸窘迫綜合征 (acute respiratory distress syndrome)、肺癌（lung cancer)、肺車專移瘤（pulmonary metastasis)、肺高血壓（pulmonary hypertension)和肺動脈高壓（pulmonary artery hypertension)的藥物的遞送中是有利的。
[0010] 作為本發(fā)明的基礎的一個問題是，提供能夠向肺遞送藥劑(優(yōu)選治療活性劑，更優(yōu) 選藥物）的工具。作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供能夠向肺組織遞送藥劑(優(yōu)選治 療活性劑，更優(yōu)選藥物）的工具。作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供能夠向肺內(nèi)皮細 胞遞送藥劑(優(yōu)選治療活性劑，更優(yōu)選藥物)的工具。
[0011] 作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供用于治療肺病、優(yōu)選地選自急性肺損傷、 急性呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓的肺病的工具。
[0012] 作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種遞送載體作為用于治療肺病、優(yōu)選 地選自急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓的肺病 的工具的部分。
[0013] 作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種藥物組合物。優(yōu)選地，所述藥物組合 物適合用于向肺遞送藥劑(優(yōu)選治療活性劑，更優(yōu)選藥物）。作為本發(fā)明的基礎的另一個問 題是，提供一種藥物組合物，其適合用于向肺組織遞送藥劑（優(yōu)選治療活性劑，更優(yōu)選藥 物）。作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種藥物組合物，其適合用于向肺內(nèi)皮細胞 遞送藥劑(優(yōu)選治療活性劑，更優(yōu)選藥物）。
[0014] 作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種可以用于制備藥物的工具，其中所 述藥物適合用于或被用于治療肺病、優(yōu)選地選自急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征、肺癌、 肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓的肺病。
[0015] 作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種用于預防和/或治療疾病的方法，其 中所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的組合物，所述組合物包含治療活性劑或 藥學活性劑，優(yōu)選藥物。作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種用于治療和/或預防 肺病的方法，其中所述方法包括給有此需要的受試者施用有效量的組合物，所述組合物包 含治療活性劑或藥學活性劑，優(yōu)選藥物。作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種用于 治療和/或預防疾病、優(yōu)選肺病的方法，其中所述治療包括向肺、優(yōu)選肺內(nèi)皮細胞遞送治療 活性劑或藥學活性劑。
[0016] 作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種轉運劑。優(yōu)選地，所述轉運劑能夠?qū)?生物學活性劑、治療活性劑和/或藥學活性劑轉運到細胞中或穿過細胞膜，其中優(yōu)選地這樣 的細胞是肺內(nèi)皮細胞。
[0017] 作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種用于將生物學活性劑、治療活性劑 和/或藥學活性劑轉運到細胞中或穿過細胞膜的方法，其中優(yōu)選地這樣的細胞是肺內(nèi)皮細 胞。
[0018] 作為本發(fā)明的基礎的另一個問題是，提供一種試劑盒。優(yōu)選地，所述試劑盒適合 (a)用在治療和/或預防疾病、優(yōu)選肺病的方法中，（b)用在將生物學活性劑、治療活性劑和/ 或藥學活性劑轉運到細胞中或穿過細胞膜的方法中，其中優(yōu)選地這樣的細胞是肺內(nèi)皮細 胞，和/或(c)用在藥物、優(yōu)選用于治療和/或預防疾病(更優(yōu)選肺病，且最優(yōu)選選自急性肺損 傷、急性呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓的肺?。┑乃幬锏闹苽?中。
[0019] 所附的從屬權利要求的主題解決了這些和其它問題。優(yōu)選的實施方案可以取自所 附的從屬權利要求。以下實施方案也解決了這些和其它問題。
[0020] 實施方案1:包含脂質(zhì)組合物的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物由以下組成：
[0021] 式(I)的陽離子脂質(zhì)
[0023] 其中n是1、2、3和4中的任一個，
[0024] 其中m是1、2和3中的任一個，
[0025] Y-是陰離子，
[0026] 其中R1和R2中的每一個單獨地和獨立地選自直鏈C12-C18烷基和直鏈C12-C18烯 基；
[0027]甾醇化合物，其中所述甾醇化合物選自膽甾醇和豆甾醇;和
[0028]聚乙二醇化脂質(zhì)，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)包含PEG部分，且其中所述聚乙二醇化 脂質(zhì)選自：
[0029]式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺
[0031] 其中R3和R4中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C13-C17烷基，且 [0032] p是15-130的任意整數(shù)；
[0033]式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺
[0035] 其中R5是直鏈C7-C15烷基，且
[0036] q是15-130的任意整數(shù)；
[0037]和
[0038] 式（IV)的聚乙二醇化二酰甘油
[0040] 其中R6和R7中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C11-C17烷基，且
[0041 ] r是15-130的任意整數(shù)。
[0042]實施方案2:實施方案1的組合物，其中R1和R2彼此不同。
[0043] 實施方案3:實施方案1的組合物，其中R1和R2是相同的。
[0044] 實施方案4:實施方案1-3中的任一個的組合物，其中R1和R2中的每一個單獨地和 獨立地選自C12烷基、C14烷基、C16烷基、C18烷基、C12烯基、C14烯基、C16烯基和C18烯基。
[0045] 實施方案5:實施方案4的組合物，其中C12烯基、C14烯基、C16烯基和C18烯基中的 每一個包含一個或兩個雙鍵。
[0046] 實施方案6:實施方案5的組合物，其中C18烯基是具有一個在C9和C10之間的雙鍵 的C18烯基，優(yōu)選順式-9-十八烷基]。
[0047]實施方案7:實施方案1-6中的任一個的組合物，其中R1和R2是不同的，且R1是棕櫚 基且R2是油烯基。
[0048]實施方案8:實施方案1-6中的任一個的組合物，其中R1和R2是不同的，且其中R1是 月桂基且R2是肉豆蔻基。
[0049]實施方案9:實施方案1-8中的任一個的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)是式（la)的 化合物
[00511實施方案10:實施方案1-9中的任一個的組合物，其中F選自鹵化物、乙酸鹽和三 氟乙酸鹽。
[0052] 實施方案11:實施方案10的組合物，其中r是cr。
[0053] 實施方案12:實施方案1-11中的任一個的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)是式（lb) 的精氨酰基_2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽酸鹽：
[0055]實施方案13:實施方案1-11中的任一個的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)是式（Ic) 的精氨?；?2，3-二氨基丙酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽：
[0057]實施方案14:實施方案1-11中的任一個的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)是式（Id) 的精氨?；?賴氨酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽：
[0060] 實施方案15:實施方案1-14中的任一個的組合物，其中所述留醇化合物是膽甾醇。
[0061] 實施方案16:實施方案12-14中的任一個、優(yōu)選實施方案14的組合物，其中所述甾 醇化合物是膽甾醇。
[0062] 實施方案17:實施方案1-14中的任一個的組合物，其中所述留醇化合物是豆甾醇。
[0063] 實施方案18:實施方案12-14中的任一個、優(yōu)選實施方案14的組合物，其中所述甾 醇化合物是豆甾醇。
[0064] 實施方案19:實施方案1-18中的任一個、優(yōu)選實施方案12-14中的任一個、更優(yōu)選 實施方案16和18中的任一個的組合物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分具有約800至約 5000Da的分子量。
[0065]實施方案20:實施方案19的組合物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分的分子量 是約800Da。
[0066]實施方案21:實施方案19的組合物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分的分子量 是約 2000Da。
[0067]實施方案22:實施方案19的組合物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分的分子量 是約 5000Da。
[0068]實施方案23:實施方案1-22中的任一個、優(yōu)選實施方案19-22中的任一個的組合 物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，其中R3和R4中的每一個 單獨地和獨立地是直鏈C13-C17烷基，且
[0069] p是選自18、19或20、或選自44、45或46、或選自113、114或115的任意整數(shù)。
[0070]實施方案24:實施方案23的組合物，其中R3和R4是相同的。
[0071]實施方案25:實施方案23的組合物，其中R3和R4是不同的。
[0072]實施方案26:實施方案23和25中的任一個的組合物，其中R3和R4中的每一個單獨 地和獨立地選自C13烷基、C15烷基和C17烷基。
[0073]實施方案27:實施方案1-26中的任一個、優(yōu)選實施方案12-14中的一個、更優(yōu)選實 施方案14和16中的任一個的組合物，其中所述式(II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺是
[0075]實施方案28:實施方案1-26中的任一個、優(yōu)選實施方案12-14中的一個、更優(yōu)選實 施方案16和18中的任一個的組合物，其中所述式(II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺是
[0077]實施方案29:實施方案1-22中的任一個、優(yōu)選實施方案19-22中的任一個的組合 物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺，其中R5是直鏈C7-C15烷 基，且
[0078] q是選自18、19或20、或選自44、45或46、或選自113、114或115的任意整數(shù)。
[0079]實施方案30:實施方案29的組合物，其中R5是直鏈C7烷基。
[0080]實施方案31:實施方案30的組合物，其中R5是直鏈C15烷基。
[00811 實施方案32:實施方案1-22和29-31中的任一個、優(yōu)選實施方案12-14中的一個、更 優(yōu)選實施方案16和18中的任一個的組合物，其中所述式(III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺是
[0083] 實施方案33:實施方案1-22和29-31中的任一個、優(yōu)選實施方案12-14中的一個、更 優(yōu)選實施方案16和18中的任一個的組合物，其中所述式(III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺是
[0085]實施方案34:實施方案1-22中的任一個、優(yōu)選實施方案19-22中的任一個的組合 物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式(IV)的聚乙二醇化二酰甘油
[0087] 其中R6和R7中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C11-C17烷基，且
[0088] r是選自18、19或20、或選自44、45或46、或選自113、114或115的任意整數(shù)。
[0089] 實施方案35:實施方案34的組合物，其中R6和R7是相同的。
[0090] 實施方案36:實施方案34的組合物，其中R6和R7是不同的。
[0091]實施方案37:實施方案34-36中的任一個的組合物，其中R6和R7中的每一個單獨地 和獨立地選自直鏈C17烷基、直鏈C15烷基和直鏈C13烷基。
[0092] 實施方案38:實施方案1-22和34-37中的任一個、優(yōu)選實施方案12-14中的一個、更 優(yōu)選實施方案16和18中的任一個的組合物，其中所述式(IV)的聚乙二醇化二酰甘油是
[0094] 實施方案39:實施方案1-22和34-36中的任一個、優(yōu)選實施方案12-14中的一個、更 優(yōu)選實施方案16和18中的任一個的組合物，其中所述式(IV)的聚乙二醇化二酰甘油是
[0096] 實施方案40:實施方案1-22和34-36中的任一個、優(yōu)選實施方案12-14中的一個、更 優(yōu)選實施方案16和18中的任一個的組合物，其中所述式(IV)的聚乙二醇化二酰甘油是
[0098] 實施方案41:實施方案1-40中的任一個的組合物，其中
[0099] 式(I)的陽離子脂質(zhì)選自：
[0100] 精氨酰基-2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽
[0102] 精氨?；?2,3-二氨基丙酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽
[0104]和
[0105] 精氨酰基-賴氨酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽
[0107] 其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;且
[0108] 其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，其中所述聚乙二醇 化磷酸乙醇胺選自：
[0109] 1，2_二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](銨鹽）
[0111] 1，2_二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-5000](銨鹽）
[0113] 實施方案42:實施方案1-40中的任一個的組合物，其中
[0114] 式(I)的陽離子脂質(zhì)選自：
[0115] f精氨酰基，3_二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽酸鹽
[0117] 精氨?；鵢2,3-二氨基丙酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽
[0119] 和
[0120] e-精氨?；?賴氨酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽
[0122] 其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;且
[0123] 其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺，其中所述聚乙二醇 化神經(jīng)酰胺選自：
[0124] N-辛?；?鞘氨醇_1-{琥珀酰[甲氧基(聚乙二醇)2000]}
[0126] 和
[0127] N-棕櫚?；?鞘氨醇_1-{琥珀酰[甲氧基(聚乙二醇)2000]}
[0129] 實施方案43:實施方案1-40中的任一個的組合物，其中
[0130] 式(I)的陽離子脂質(zhì)選自：
[0131 ] f精氨?；?，3_二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽酸鹽
[0133] 精氨酰基-2,3-二氨基丙酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽
[0135] 和e-精氨?；?賴氨酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽
[0137] 其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;且
[0138] 其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（IV)的聚乙二醇化二酰甘油，其中所述聚乙二醇化 二酰甘油選自：
[0139] 1，2_二硬脂?；?sn-甘油[甲氧基(聚乙二醇)2000]
[0141] 1，2-二棕櫚?；?sn-甘油[甲氧基(聚乙二醇)2000 ]
[0143] 實施方案44:實施方案1-43中的任一個、優(yōu)選實施方案41-43中的任一個的組合 物，其中
[0144] 所述陽尚子脂質(zhì)是精氨?；鵢2，3_二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽 酸鹽
[0146] 所述甾醇化合物是膽甾醇，且
[0147] 所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，所述式（II)的聚乙二醇 化磷酸乙醇胺是
[0148] 1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](銨鹽）
[0150] 實施方案45:實施方案1-44中的任一個、優(yōu)選實施方案41-44中的任一個和更優(yōu)選 實施方案44的組合物，其中，在所述脂質(zhì)組合物中，所述陽離子脂質(zhì)組合物的含量是約65摩 爾％至約75摩爾％，所述留醇化合物的含量是約24摩爾％至約34摩爾％，且所述聚乙二醇 化脂質(zhì)的含量是約0.5摩爾％至約1.5摩爾％，其中所述脂質(zhì)組合物的陽離子脂質(zhì)的含量、 甾醇化合物的含量和聚乙二醇化脂質(zhì)的含量的總和是1 〇〇摩爾％。
[0151] 實施方案46:實施方案45的組合物，其中，在所述脂質(zhì)組合物中，所述陽離子脂質(zhì) 的含量是約70摩爾％，所述留醇化合物的含量是約29摩爾％，且所述聚乙二醇化脂質(zhì)的含 量是約1摩爾％。
[0152] 實施方案47:上述實施方案中的任一個的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物如下：
[0153] 70摩爾％的0_精氨?；?2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽
[0155] 29摩爾％的膽甾醇，和
[0156] 1摩爾％的1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基（聚乙二醇）_ 2000](銨鹽）
[0158] 實施方案48:實施方案1-47中的任一個的組合物，其中所述組合物包含載體，優(yōu)選 地所述載體是藥學上可接受的載體。
[0159] 實施方案49:實施方案48的組合物，其中所述載體選自水、水溶液、優(yōu)選等滲水溶 液、鹽溶液、優(yōu)選等滲鹽溶液、緩沖液、優(yōu)選等滲緩沖液和水混溶性溶劑。
[0160] 實施方案50:實施方案49的組合物，其中所述載體是水混溶性溶劑，且其中所述水 混溶性溶劑選自乙醇和叔丁醇。
[0161] 實施方案51:實施方案48-50中的任一個的組合物，其中所述載體是蔗糖水溶液， 優(yōu)選270mM蔗糖水溶液。
[0162] 實施方案52:根據(jù)上述實施方案中的任一項的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物如下：
[0163] 70摩爾％的0_精氨酰基-2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽
[0165] 29摩爾％的膽甾醇，和
[0166] 1摩爾％的式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，所述式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇 胺是
[0167] 1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)_2000](銨鹽）
[0169] 且
[0170] 其中所述組合物包含270mM蔗糖水溶液。
[0171] 實施方案53:實施方案48-52中的任一個的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物在載體中 形成顆粒。
[0172] 實施方案54:實施方案53的組合物，其中所述顆粒具有約30nm至約150nm的根據(jù) DLS測量的Z-平均尺寸（Z-average size) 〇
[0173] 實施方案55:實施方案54的組合物，其中所述顆粒具有約50nm至約100nm的根據(jù) DLS測量的Z-平均尺寸。
[0174] 實施方案56:實施方案53-55中的任一個的組合物，其中，通過動態(tài)光散射確定，所 述顆粒的根據(jù)DLS測量的Z-平均尺寸是約60-80nm。
[0175] 實施方案57 :實施方案1-56中的任一個、優(yōu)選實施方案48-56中的任一個的組合 物，其中在20°C的溫度和在270mM蔗糖溶液中確定，所述組合物具有約+25至約+80mV的（電 位，優(yōu)選約+30mV至約+60mV的（電位，更優(yōu)選約+46mV的G電位。
[0176] 實施方案58:實施方案1-57中的任一個、優(yōu)選實施方案41-57中的任一個和更優(yōu)選 實施方案47和52中的任一個的組合物，其中所述組合物還包含化學化合物，其中所述化學 化合物是生物學活性劑或藥學活性劑。
[0177] 實施方案59:實施方案1-57中的任一個、優(yōu)選實施方案41-57中的任一個和更優(yōu)選 實施方案47和52中的任一個的組合物，其中所述組合物還包含化學化合物，其中所述化學 化合物能夠由所述脂質(zhì)組合物遞送到細胞中和/或遞送至細胞。
[0178]實施方案60:實施方案59的組合物，其中所述細胞是哺乳動物的細胞，優(yōu)選地所述 哺乳動物選自人、小鼠、大鼠、兔、倉鼠、豚鼠、猴、狗、貓、豬、綿羊、山羊、牛和馬。
[0179]實施方案61:實施方案59-60中的任一個的組合物，其中所述細胞是肺內(nèi)皮細胞， 優(yōu)選地所述細胞是人肺內(nèi)皮細胞。
[0180]實施方案62:實施方案58-61中的任一個的組合物，其中所述化學化合物選自寡核 苷酸、多核苷酸、核酸、肽、多肽、蛋白質(zhì)和小分子。
[0181] 實施方案63:實施方案62的組合物，其中所述化學化合物是核酸，且其中所述核酸 選自 RNA、DNA、PNA 和 LNA。
[0182] 實施方案64:實施方案62的組合物，其中所述核酸是功能性核酸，優(yōu)選地所述功能 性核酸選自siRNA、微RNA(microRNA)、siNA、介導RNA干擾的核酸、反義核酸、核酶、適配體、 sp i egelmer和mRNA 〇
[0183] 實施方案65:實施方案62的組合物，其中所述多核苷酸選自siRNA、微RNA、siNA、介 導RNA干擾的核酸、反義核酸、核酶、適配體、sp i ege lmer和mRNA。
[0184] 實施方案66:實施方案62的組合物，其中所述寡核苷酸選自siRNA、微RNA、siNA、介 導RNA干擾的核酸、反義核酸、核酶、適配體和sp i ege lmer。
[0185] 實施方案67:實施方案62和66中的任一個的組合物，其中所述寡核苷酸與所述脂 質(zhì)組合物形成復合物。
[0186] 實施方案68:實施方案1-67中的任一個、優(yōu)選實施方案41-47和53-56中的任一個 的組合物，其中所述組合物包含s iRNA分子。
[0187] 實施方案69:實施方案68的組合物，其中所述siRNA分子靶向ANG2。
[0188] 實施方案70:實施方案70的組合物，其中所述靶向ANG2的siRNA分子包含以下兩個 序列中的一個或兩個：
[0189] 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3'(SEQ ID N0:1)和
[0190] 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2),
[0191 ]優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2 ' -0-甲基。
[0192] 實施方案71:實施方案70的組合物，其中所述靶向ANG 2的siRNA分子包含以下兩 個序列：
[0193] 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3'(SEQ ID N0:1)和
[0194] 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2),
[0195] 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2'-0_甲基。
[0196] 實施方案72:實施方案62的組合物，其中所述化學化合物是蛋白質(zhì)，且其中所述蛋 白質(zhì)選自抗體、細胞因子和抗促成素(anticaline)。
[0197] 實施方案73:根據(jù)上述實施方案中的任一個的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物如下：
[0198] 70摩爾％的0_精氨酰基-2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽
[0200] 29摩爾％的膽甾醇，和
[0201] 1摩爾％的1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基（聚乙二醇）- 2000](銨鹽）
[0203] 其中所述組合物包含270mM蔗糖水溶液，優(yōu)選地作為載體或所述載體;且
[0204] 其中所述組合物包含化學化合物，其中所述化學化合物選自siRNA、微RNA、siNA和 介導RNA干擾的化合物，優(yōu)選地所述化學化合物是(a)生物學活性劑或藥學活性劑或所述生 物學活性劑或藥學活性劑和/或(b)能夠被所述脂質(zhì)組合物遞送到細胞中和/或遞送至細 胞，更優(yōu)選地遞送至哺乳動物肺內(nèi)皮細胞。
[0205]實施方案74:實施方案1-73中的任一個、優(yōu)選實施方案58-73中的任一個和更優(yōu)選 實施方案73的組合物，其中所述化學化合物是功能性核酸，且其中帶電荷的脂質(zhì)氮原子與 核酸主鏈磷酸之比(N/P比）是約3-12，優(yōu)選約5-10，且更優(yōu)選約8-9，且最優(yōu)選約8.4。
[0206]實施方案75:實施方案73和74中的任一個的組合物，其中所述組合物包含siRNA分 子。
[0207] 實施方案76:實施方案75的組合物，其中所述siRNA分子靶向ANG2。
[0208] 實施方案77:實施方案76的組合物，其中所述靶向ANG2的siRNA分子包含以下兩個 序列中的一個或兩個：
[0209] 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3'(SEQ ID N0:1)和
[0210] 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2),
[0211] 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2 ' -0-甲基。
[0212] 實施方案78:實施方案77的組合物，其中所述靶向ANG 2的siRNA分子包含以下兩 個序列：
[0213] 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3'(SEQ ID N0:1)和
[0214] 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2),
[0215] 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2 ' -0-甲基。
[0216] 實施方案79:實施方案73-78中的任一個、優(yōu)選實施方案78的組合物，其中所述組 合物包含0.28mg/ml siRNA和2.4mg/ml總脂質(zhì)。
[0217] 實施方案80:根據(jù)上述實施方案中的任一個的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物如下：
[0218] 70摩爾％的0_精氨酰基-2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽
[0220] 29摩爾％的膽甾醇，和
[0221] 1摩爾％的1，2_二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基（聚乙二醇）_ 2000](銨鹽）
[0223] 其中所述組合物包含270mM蔗糖水溶液，優(yōu)選地作為載體或所述載體；
[0224] 其中所述組合物包含化學化合物，其中所述化學化合物選自siRNA、微RNA和siNA， 優(yōu)選地所述化學化合物是(a)生物學活性劑或藥學活性劑或所述生物學活性劑或藥學活性 劑和/或(b)能夠被所述脂質(zhì)組合物遞送到細胞中和/或遞送至細胞，更優(yōu)選地遞送至哺乳 動物肺內(nèi)皮細胞;且
[0225] 其中帶電荷的脂質(zhì)氮原子與核酸主鏈磷酸之比(N/P比)是約8-9,優(yōu)選約8.4。
[0226] 實施方案81:實施方案80的組合物，其中所述組合物包含siRNA分子。
[0227] 實施方案82:實施方案81的組合物，其中所述siRNA分子靶向ANG2。
[0228] 實施方案83:實施方案82的組合物，其中所述靶向ANG2的siRNA分子包含以下兩個 序列中的一個或兩個：
[0229] 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3'(SEQ ID N0:1)和
[0230] 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2),
[0231 ]優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2 ' -0-甲基。
[0232] 實施方案84:實施方案83的組合物，其中所述靶向ANG 2的siRNA分子包含以下兩 個序列：
[0233] 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3'(SEQ ID N0:1)和
[0234] 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2),
[0235] 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2 ' -0-甲基。
[0236] 實施方案85:實施方案80-84中的任一個、優(yōu)選實施方案84的組合物，其中所述組 合物包含0.28mg/ml siRNA和2.4mg/ml總脂質(zhì)。
[0237] 實施方案86:實施方案1-85中的任一個、優(yōu)選實施方案58-85中的任一個和更優(yōu)選 實施方案73-85中的任一個的組合物，所述組合物用在治療和/或預防受試者的疾病的方法 中。
[0238] 實施方案87:實施方案86的組合物，其中所述方法包括給有此需要的受試者施用 有效量的所述組合物，優(yōu)選治療有效量的所述組合物。
[0239] 實施方案88:實施方案86-87中的任一個的組合物，其中所述組合物將所述化學化 合物遞送到受試者的細胞中。
[0240] 實施方案89:實施方案88的組合物，其中所述細胞是肺內(nèi)皮細胞。
[0241 ]實施方案90:實施方案89的組合物，其中所述化學化合物在所述肺內(nèi)皮細胞中提 供治療效果，優(yōu)選地所述化學化合物靶向并更優(yōu)選地抑制所述細胞內(nèi)的靶分子，由此實現(xiàn) 所述治療效果。
[0242] 實施方案91:實施方案90的組合物，其中所述靶分子參與作為所述疾病的基礎的 病理學機制。
[0243] 實施方案92:實施方案86-91中的任一個的組合物，其中所述疾病選自急性肺損 傷、急性呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓。
[0244] 實施方案93:實施方案86-92中的任一個的組合物，其中所述受試者選自人、小鼠、 大鼠、兔、倉鼠、豚鼠、猴、狗、貓、豬、綿羊、山羊、牛和馬。
[0245] 實施方案94:實施方案86-93中的任一個的組合物，其中借助于靜脈內(nèi)施用或借助 于吸入將所述組合物施用給所述受試者。
[0246] 實施方案95:實施方案1-85中的任一個、優(yōu)選實施方案58-85中的任一個和更優(yōu)選 實施方案73-85中的任一個的組合物用于制備用于治療和/或預防疾病的藥物的用途。
[0247] 實施方案96:實施方案95的用途，其中所述疾病是這樣的疾病，其中參與作為所述 疾病的基礎的病理學機制的靶分子存在于肺內(nèi)皮細胞中，且抑制所述靶分子會提供治療效 果。
[0248] 實施方案97:實施方案95-96中的任一個的用途，其中所述組合物的化學化合物靶 向并更優(yōu)選地抑制所述細胞內(nèi)的靶分子，由此實現(xiàn)所述治療效果。
[0249] 實施方案98:實施方案95-97中的任一個的用途，其中所述疾病選自急性肺損傷、 急性呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓。
[0250]實施方案99:實施方案95-98中的任一個的用途，其中所述藥物用于靜脈內(nèi)施用。
[0251] 實施方案100:藥物組合物，其包含實施方案1-85中的任一個的組合物、優(yōu)選實施 方案58-85中的任一個的組合物以及更優(yōu)選實施方案73-85中的任一個的組合物和藥學上 可接受的載體。
[0252] 實施方案101:實施方案100的藥物組合物，其中實施方案1-85中的任一個的組合 物、優(yōu)選實施方案58-850中的任一個的組合物且更優(yōu)選實施方案73和85中的任一個的組合 物的化學組合物是藥學活性劑或所述藥學活性劑。
[0253] 實施方案102:實施方案100-101中的任一個的藥物組合物，其中所述實施方案1-85中的任一個的組合物、優(yōu)選實施方案57-85中的任一個的組合物且更優(yōu)選實施方案73-85 中的任一個的組合物的載體是藥學上可接受的載體或所述藥學上可接受的載體。
[0254] 實施方案103:實施方案100-102中的任一個的藥物組合物，其中所述藥物組合物 用于治療和/或預防疾病，其中所述疾病如在實施方案95-99中的任一個中所定義。
[0255] 實施方案104:實施方案1-85中的任一個、優(yōu)選實施方案58-85中的任一個和更優(yōu) 選實施方案73-85中的任一個的組合物作為轉運劑的用途。
[0256] 實施方案105:實施方案104的用途，其中所述轉運劑將生物學活性化合物或藥學 活性化合物轉運到細胞中，優(yōu)選轉運到哺乳動物細胞中，且更優(yōu)選轉運到人細胞中。
[0257] 實施方案106:實施方案105的用途，其中所述細胞是肺內(nèi)皮細胞，優(yōu)選人肺內(nèi)皮細 胞。
[0258] 實施方案107:實施方案104-106中的任一個的用途，其中所述化學組合物的化學 化合物是所述生物學活性劑或所述藥學活性劑。
[0259]實施方案108:試劑盒，其包含實施方案1-85中的任一個、優(yōu)選實施方案58-85中的 任一個和更優(yōu)選實施方案73-85中的任一個的組合物和使用說明書。
[0260]實施方案109:用于將生物學活性化合物或藥學活性化合物轉運到細胞中或穿過 細胞膜的方法，其中所述方法包括以下步驟:使所述細胞或所述細胞膜與實施方案1-85中 的任一個、優(yōu)選實施方案58-85中的任一個和更優(yōu)選實施方案73-85中的任一個的組合物以 及所述生物學活性化合物或藥學活性化合物接觸。
[0261 ]實施方案110 :實施方案109的方法，其中所述方法包括以下步驟:在所述細胞中 和/或在所述細胞膜之外檢測所述生物學活性化合物或所述藥學活性化合物。
[0262] 實施方案111:實施方案109-110中的任一個的方法，其中所述生物學活性化合物 或所述藥學活性化合物是實施方案58-85中的任一個的組合物的化學化合物。
[0263] 實施方案112:用于治療和/或預防疾病的方法，其中所述方法包括給有此需要的 受試者施用有效量的實施方案1-85中的任一個、優(yōu)選實施方案58-85中的任一個和更優(yōu)選 實施方案73-85中的任一個的組合物。
[0264] 實施方案113:實施方案112的方法，其中所述組合物將所述化學化合物遞送到受 試者的細胞中。
[0265] 實施方案114:實施方案113的方法，其中所述細胞是肺內(nèi)皮細胞。
[0266] 實施方案115:實施方案114的方法，其中所述化學化合物在所述肺內(nèi)皮細胞中提 供治療效果，優(yōu)選地所述化學化合物靶向并更優(yōu)選地抑制所述細胞內(nèi)的靶分子，由此實現(xiàn) 所述治療效果。
[0267] 實施方案116:實施方案115的方法，其中所述靶分子參與作為所述疾病的基礎的 病理學機制。
[0268] 實施方案117:實施方案112-116中的任一個的方法，其中所述疾病選自急性肺損 傷、急性呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓。
[0269] 實施方案118:實施方案112-117中的任一個的方法，其中所述受試者選自人、小 鼠、大鼠、兔、倉鼠、豚鼠、猴、狗、貓、豬、綿羊、山羊、牛和馬，優(yōu)選地所述受試者是人。
[0270] 實施方案119:用于制備藥物的方法，其中所述方法包括將根據(jù)實施方案1-85中的 任一個的組合物與藥學活性劑一起配制。
[0271] 實施方案120:實施方案119的方法，其中所述藥物用于治療和/或預防如上述實施 方案中的任一個所述的疾病。
[0272] 實施方案121:實施方案119-120中的任一個的方法，其中所述藥學活性劑是適合 用于治療肺病的化合物。
[0273] 實施方案122:根據(jù)實施方案1-68中的任一個的組合物，其中所述siRNA靶向如表1 中所示的靶標。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述靶標
[0274] 是?題3，其中更優(yōu)選地所述8丨1?財包含具有3￡〇10^):3的核苷酸序列的核酸鏈 和/或具有SEQ ID NO: 4的核苷酸序列的核酸鏈，其中所述核酸鏈的核苷酸被如表1中所示 地修飾，或者沒有被修飾或被不同地修飾；
[0275] 是⑶31，其中更優(yōu)選地所述siRNA包含具有SEQ ID N0:11的核苷酸序列的核酸鏈 和/或具有SEQ ID N0:12的核苷酸序列的核酸鏈，其中所述核酸鏈的核苷酸被如表1中所示 地修飾，或者沒有被修飾或被不同地修飾；
[0276] 是Tie2,其中更優(yōu)選地所述siRNA包含具有SEQ ID N0:9的核苷酸序列的核酸鏈 和/或具有SEQ ID N0:10的核苷酸序列的核酸鏈，其中所述核酸鏈的核苷酸被如表1中所示 地修飾，或者沒有被修飾或被不同地修飾；
[0277] 是仰1^^^^1?2，其中更優(yōu)選地所述811?祖包含具有3￡〇10^):13的核苷酸序列的 核酸鏈和/或具有SEQ ID N0:14的核苷酸序列的核酸鏈，其中所述核酸鏈的核苷酸被如表1 中所示地修飾，或者沒有被修飾或被不同地修飾；
[0278] 是CDH5/VE-鈣黏著蛋白，其中更優(yōu)選地所述siRNA包含具有SEQ ID N0:15的核苷 酸序列的核酸鏈和/或具有SEQ ID NO: 16的核苷酸序列的核酸鏈，其中所述核酸鏈的核苷 酸被如表1中所示地修飾，或者沒有被修飾或被不同地修飾;或者
[0279] 是BMPR2,其中更優(yōu)選地所述siRNA包含具有SEQ ID N0:17的核苷酸序列的核酸鏈 和/或具有SEQ ID N0:18的核苷酸序列的核酸鏈，其中所述核酸鏈的核苷酸被如表1中所示 地修飾，或者沒有被修飾或被不同地修飾；
[0280] 在本發(fā)明內(nèi)，在其中所述陽離子脂質(zhì)是精氨?；鵢2,3_二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺的本發(fā)明的每個和任意方面的每個和任意實施方案中，所述精氨酰基-2， 二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺優(yōu)選地是0-L-精氨酰基-2，3_L_二氨基丙酸-N-棕 櫚基-N-油烯基-酰胺。
[0281] 在本發(fā)明內(nèi)，在其中所述陽離子脂質(zhì)是精氨酰基_2,3_二氨基丙酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺的本發(fā)明的每個和任意方面的每個和任意實施方案中，所述精氨酰基-2，3-二氨基丙酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺優(yōu)選地是P-L-精氨酰基-2，3-L-二氨基丙酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺。
[0282]在本發(fā)明內(nèi)，在其中所述陽離子脂質(zhì)是e-精氨?；?賴氨酸-N-月桂基-N-肉豆蔻 基-酰胺的本發(fā)明的每個和任意方面的每個和任意實施方案中，所述精氨?；?賴氨酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰胺優(yōu)選地是e -L-精氨?；?L-賴氨酸-N-月桂基-N-肉豆蔻基-酰 胺。
[0283]本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，包含脂質(zhì)組合物的組合物，其中所述脂質(zhì) 組合物由以下組成：
[0284]式(I)的陽離子脂質(zhì)
[0286] 其中n是1、2、3和4中的任一個，
[0287] 其中m是1、2和3中的任一個，
[0288]其中Y-是陰離子，且
[0289] 其中R1和R2中的每一個單獨地和獨立地選自直鏈C12-C18烷基和直鏈C12-C18烯 基；
[0290] 留醇化合物，其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;和
[0291]聚乙二醇化脂質(zhì)，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)包含PEG部分，且其中所述聚乙二醇化 脂質(zhì)選自：
[0292]式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺
[0294] 其中R3和R4中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C13-C17烷基，且
[0295] 其中p是15-130的任意整數(shù)；
[0296] 式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺
[0298] 其中R5是直鏈C7-C15烷基，且
[0299] 其中q是15-130的任意整數(shù)；
[0300] 和
[0301] 式（IV)的聚乙二醇化二酰甘油
[0303] 其中R6和R7中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C11-C17烷基，且 [0304] 其中r是15-130的任意整數(shù)，
[0305]適合到達宿主生物體(諸如哺乳動物）的肺和肺組織并積累在其中，并從而將與這 樣的脂質(zhì)組合物結合的試劑(諸如核酸)遞送至這樣的器官和組織，且更具體地遞送至這樣 的宿主生物體的肺內(nèi)皮細胞。優(yōu)選地，這樣的核酸是寡核苷酸或多核苷酸(諸如siRNA)，但 是不限于此。
[0306]該發(fā)現(xiàn)是如此驚人的，因為它與陽離子脂質(zhì)納米復合物的典型系統(tǒng)行為形成對 比，陽離子脂質(zhì)納米復合物通常顯示出普遍的肝組織中的基因敲低，而在肺中僅有瞬時的 siRNA 積累（Polach，KJ 等人（2012)，Mol Ther 20:91-100;Schroeder，A 等人（2010)，J Intern Med 267:9-21;Tao，W等人（2010)，Mol Ther 18:1657-1666)。不希望受任何理論約 束，本發(fā)明的發(fā)明人假定，聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分存在于由脂質(zhì)組合物形成的lipoplex 納米顆粒的表面上，從而在所述納米顆粒周圍形成親水保護層，所述保護層能夠通過空間 排斥力排斥調(diào)理素蛋白的吸附，從而避免血清調(diào)理素如免疫球蛋白和纖連蛋白對lipoplex 的結合和快速降解，否則所述血清調(diào)理素會導致在陽離子遞送系統(tǒng)的靜脈內(nèi)施用后觀察到 的全身性毒性。此外，證實了陽離子脂質(zhì)分別由于靜電相互作用和熵效應而允許帶負電荷 的RNA主動加載到lipoplex中。它會濃縮寡核苷酸，保護它們免于降解并促進細胞攝取和內(nèi) 體釋放。設想本發(fā)明的脂質(zhì)組合物的留醇化合物在不喪失融合性(如8<^6]1；[(3；^7)的情況下 維持lipoplex穩(wěn)定性，并從而影響lipoplex的層化性（lamellarity)、血衆(zhòng)藥代動力學和生 物分布。
[0307]考慮到本文中提供的實驗證據(jù)，本發(fā)明的包含脂質(zhì)組合物的組合物顯然適合用于 治療肺病和可以通過將藥學活性劑和/或治療活性劑靶向肺、肺組織和/或肺內(nèi)皮細胞來治 療的疾病。這樣的疾病包括肺癌以及肺轉移瘤（參見，例如Steeg，PS(2006)，Nat Med 12: 895-904)，其中在肺癌的情況下靶分子是CD31、Ras、myc、Hif-la、VEGF-R2、-Rl、R-3、PKN3、 miR221、miR145。用本發(fā)明的包含脂質(zhì)組合物的組合物觀察到的低的和一次性(one-time) 定量給藥具體地也使它成為用于遞送藥劑的載體，所述藥劑可用于治療需要住院進行靜脈 內(nèi)藥物施用的急性感染，諸如急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)/急性肺損傷(ALI)、以導致水腫 和膿毒癥的炎癥和增加的血管滲透性為特征的危及生命的綜合征(van der Heijden，M等 人（2009)，Expert Opin Ther Targets 13:39_53;David，S等人（2012)，Crit Care Med 40: 3034-3041;和Hotchkiss，RS等人（2003)，N Engl J Med 348:138-150?？梢苑謩e被與 ARDS/ALI相關的藥學活性劑或治療活性劑靶向的特定靶分子是也被稱作"促血 管生成素-2(angi 〇p〇ietin-2)"）是一種內(nèi)皮衍生出的Tie2拮抗劑，并且作為血管不穩(wěn)定因 子直接促進膿毒癥發(fā)病率和死亡率（Fiedler，U.，和H.G. August in. 2006, Trends Immunol .27:552-8)。因此，通過采用合成核酸如siRNA、反義分子、antagomir(例如，描述在 Piva等人.2013，INTERNATI0NAL JOURNAL OF ONCOLOGY 43:985-994，Ganguli等人，2011， Bioinformation 7( 1):41-43(2011 )，和Costa等人? 2013，Pharmaceuticals，6，1195-1220) 和/或微RNA模擬物（例如，描述在Henry等人，2011，Pharmaceutical research 12，3030-3042;和Ling,H.，等人（2013)，Nat Rev Drug Discov 12(11) :847-865)的脂質(zhì)組合物抑制 選擇性靶基因是一種用于治療和/或預防肺病(包括危及生命的急性肺病)的策略。
[0308] 本發(fā)明的另一個方面是一種脂質(zhì)組合物，其中所述脂質(zhì)組合物由以下組成：
[0309] 式(I)的陽離子脂質(zhì)
[0311] 其中n是1、2、3和4中的任一個，
[0312] 其中m是1、2和3中的任一個，
[0313]其中Y-是陰離子，且
[0314] 其中R1和R2中的每一個單獨地和獨立地選自直鏈C12-C18烷基和直鏈C12-C18烯 基；
[0315] 留醇化合物，其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;和
[0316]聚乙二醇化脂質(zhì)，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)包含PEG部分，且其中所述聚乙二醇化 脂質(zhì)選自：
[0317]式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺
[0319] 其中R3和R4中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C13-C17烷基，且
[0320] 其中p是15-130的任意整數(shù)；
[0321] 式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺
[0323] 其中R5是直鏈C7-C15烷基，且
[0324] 其中q是15-130的任意整數(shù)；
[0325] 和
[0326] 式（IV)的聚乙二醇化二酰甘油
[0328] 其中R6和R7中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C11-C17烷基，且
[0329] 其中r是15-130的任意整數(shù)。
[0330] 本發(fā)明的另一個方面在于式（I)的陽離子脂質(zhì)在制備本發(fā)明的脂質(zhì)組合物、本發(fā) 明的藥物或本發(fā)明的遞送載體中的用途，
[0332] 其中n是1、2、3和4中的任一個，
[0333] 其中m是1、2和3中的任一個，
[0334]其中Y-是陰離子，且
[0335] 其中R1和R2中的每一個單獨地和獨立地選自直鏈C12-C18烷基和直鏈C12-C18烯 基。
[0336] 本發(fā)明的另一個方面是選自膽留醇和豆留醇的留醇化合物在制備本發(fā)明的脂質(zhì) 組合物、本發(fā)明的藥物或本發(fā)明的遞送載體中的用途。
[0337] 本發(fā)明的另一個方面是以下物質(zhì)在制備本發(fā)明的脂質(zhì)組合物、本發(fā)明的藥物或本 發(fā)明的遞送載體中的用途：
[0338] 式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺
[0340] 其中R3和R4中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C13-C17烷基，且
[0341] 其中p是15-130的任意整數(shù)；
[0342] 式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺
[0344] 其中R5是直鏈C7-C15烷基，且
[0345] 其中q是15-130的任意整數(shù)；
[0346] 和
[0347] 式（IV)的聚乙二醇化二酰甘油
[0349] 其中R6和R7中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C11-C17烷基，且
[0350] 其中r是15-130的任意整數(shù)。
[0351] 如果沒有相反指示，本發(fā)明的組合物是本發(fā)明的包含脂質(zhì)組合物的組合物。在本 發(fā)明內(nèi)，本發(fā)明的脂質(zhì)組合物的任何實施方案也是本發(fā)明的脂質(zhì)組合物的實施方案。
[0352] 如在本文中優(yōu)選地使用的，遞送劑或遞送載體是包含本發(fā)明的脂質(zhì)組合物的組合 物。也如在本文中優(yōu)選地使用的，遞送劑或遞送載體是本發(fā)明的組合物。如在本文中優(yōu)選地 使用的，遞送劑或遞送載體是這樣的試劑或載體，諸如適合用于將化合物遞送至結構的組 合物;優(yōu)選地，這樣的結構是器官、組織或細胞;更優(yōu)選地，這樣的結構是器官、組織或細胞。 在一個優(yōu)選的實施方案中，這樣的化合物是治療活性劑、生物學活性劑或藥學活性劑。
[0353] 如在本文中優(yōu)選地使用的，治療活性劑是適合在宿主生物體中引起治療效果或治 療有益效果的化合物。
[0354] 如在本文中優(yōu)選地使用的，生物學活性劑是適合在宿主生物體中引起生物學效應 的化合物。
[0355] 如在本文中優(yōu)選地使用的，藥學活性劑是適合在宿主生物體中引起藥物效果或藥 學有益效果的化合物。
[0356] 要理解，如果沒有相反指示，治療活性劑的任何實施方案也是生物學活性劑的實 施方案和藥學活性劑的實施方案，反之亦然。
[0357] 關于本發(fā)明，治療也包括預防。與此相一致，在一個實施方案中，治療活性劑也是 在疾病的預防中有活性的藥劑。在一個備選實施方案中，治療活性劑在疾病的預防中沒有 活性。
[0358] 如在本文中優(yōu)選地使用的，烷基是缺少一個氫的烷烴取代基，其中烷烴僅由氫和 碳原子組成，所有鍵是單鍵，且所述碳原子沒有以環(huán)狀結構相連，而是形成開鏈;烷烴的一 般化學式是CnH2n+2。
[0359] 如在本文中優(yōu)選地使用的，烯基是缺少一個氫的烯烴取代基，其中烯烴是含有至 少一個碳-碳雙鍵的不飽和化學化合物。
[0360]如在本文中優(yōu)選地使用的，PEG是聚乙二醇。
[0361]如本文中使用的，n是1-4之間的任意整數(shù)，這意味著n可以是1、2、3和4。如本文中 使用的，m是1_3之間的任意整數(shù)，這意味著m可以是1、2和3。
[0362]本發(fā)明的組合物的陽離子脂質(zhì)及其制備方法例如公開在國際專利申請W0 2005/ 105152 中。
[0363] 應當理解，本發(fā)明的組合物的陽離子脂質(zhì)是陽離子脂質(zhì)。更優(yōu)選地，存在于所述脂 質(zhì)中的NH或NH2基團中的任一個以質(zhì)子化形式存在。典型地，所述脂質(zhì)的任何正電荷由陰離 子的存在來補償。這樣的陰離子可以是單價或多價陰離子。優(yōu)選的陰離子是鹵化物、乙酸鹽 和三氟乙酸鹽。如本文中使用的鹵化物優(yōu)選地是氯化物、氟化物、碘化物和溴化物。最優(yōu)選 的是氯化物。在陽離子脂質(zhì)與要轉運到細胞中的治療活性化合物或藥學活性化合物或生物 學活性化合物結合后，鹵化物陰離子被優(yōu)選地表現(xiàn)出一個或幾個負電荷的所述活性化合物 替代，但是要承認生物學活性化合物的總電荷不一定是負的。相同的考慮同樣適用于本發(fā) 明的組合物的其它化合物。在這樣的化合物是陰離子化合物或帶有一個或幾個負電荷的情 況下，這樣的負電荷可以被陽離子的存在補償。這樣的陽離子可以是單價或多價陰離子。優(yōu) 選的陽離子是銨、鈉或鉀。
[0364] 要知道，根據(jù)式(I)的任何化合物包含至少兩個不對稱的C原子。在本發(fā)明內(nèi)，在本 文中公開了這樣的化合物的任何可能的非對映異構體，即具體地是R-R、S-S、R-S和S-R非對 映異構體。
[0365] 本發(fā)明的組合物的留醇化合物可以是合成的或得自天然來源諸如綿羊毛或植物。
[0366] 本發(fā)明的組合物的聚乙二醇化脂質(zhì)可得自商業(yè)來源諸如日本的N 0 F Corporation、美國的Avanti Polar Lipids或瑞士的Cordon Pharma。
[0367] 用于確定本發(fā)明的脂質(zhì)組合物和本發(fā)明的組合物的Z-平均尺寸的方法是本領域 技術人員已知的，且包括如在實施例部分中描述的動態(tài)光散射DLS，或可以得自例如， Zetasizer Nano Series User Manuel,Malvern Instruments Ltd.，UK〇
[0368] 用于確定本發(fā)明的脂質(zhì)組合物和本發(fā)明的組合物的G電位的方法是本領域技術人 員已知的，且包括如在實施例部分中描述的電泳光散射，或可以得自例如，Zetasizer Nano Series User Manuel,Malvern Instruments Ltd.，UK〇
[0369] 在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物和特別是本發(fā)明的脂質(zhì)組合物可以包含載 體。這樣的載體優(yōu)選地是液體載體。優(yōu)選的液體載體是水性載體和非水性載體。優(yōu)選的水性 載體是水、水性鹽溶液、水性緩沖系統(tǒng)，更優(yōu)選地所述緩沖系統(tǒng)和/或所述水性鹽溶液具有 生理學緩沖強度和生理學鹽濃度。優(yōu)選的非水性載體是溶劑，優(yōu)選有機溶劑諸如乙醇、叔丁 醇。不希望受任何理論約束，原則上，可以使用任何水混溶性有機溶劑。要承認的是，所述組 合物、更具體地所述脂質(zhì)組合物因此可以作為脂質(zhì)體存在或形成脂質(zhì)體；當與總體上帶負 電荷的化合物接觸時，優(yōu)選地要通過本發(fā)明的脂質(zhì)組合物和/或本發(fā)明的組合物遞送的化 合物，本發(fā)明的脂質(zhì)組合物和本發(fā)明的組合物形成lipoplex，即通過靜電相互作用和熵效 應形成的復合物，所述熵效應基于當聚陰離子(諸如核酸分子)與陽離子脂質(zhì)或除了其它脂 質(zhì)組分以外還含有至少一種陽離子脂質(zhì)組分的脂質(zhì)系統(tǒng)相互作用時抗衡離子和水的釋放。
[0370] 在另一個實施方案中，本發(fā)明的脂質(zhì)組合物和/或本發(fā)明的組合物作為凍干的組 合物存在。如此凍干的組合物允許所述組合物在室溫有效的長期貯存。
[0371] 在本發(fā)明內(nèi)，本發(fā)明的脂質(zhì)組合物和/或本發(fā)明的組合物包含化學化合物，其中所 述化學化合物是生物學活性劑、治療活性劑和/或藥學活性劑。這類藥劑在本文中也被稱作 "活性劑"。
[0372] 優(yōu)選地，任何這樣的活性劑是帶負電荷的分子。術語帶負電荷的分子意在包括具 有至少一個或超過一個帶負電荷的基團的分子，所述帶負電荷的基團可以與根據(jù)本發(fā)明的 陽離子脂質(zhì)的帶正電荷的基團離子配對，盡管本發(fā)明的發(fā)明人不希望受任何理論約束。原 則上，在接頭部分處的正電荷也可以對脂質(zhì)本身或在陽離子脂質(zhì)和帶負電荷的分子（即生 物學活性化合物)之間形成的任何復合物的總結構具有一些影響。除此以外，與在美國專利 6,395,713中公開的陽離子脂質(zhì)相比，如由Xu Y，Szoka FC Jr. ;Biochemistry;1996May 07,35(18):5616-23所教導的，引入到根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)中的額外的正電荷應當促進該脂 質(zhì)的增加的毒性。與本領域技術人員將從該現(xiàn)有技術文件預見到的相反，根據(jù)本發(fā)明的化 合物特別適合用于在本文中公開的多種目的，并且特別地沒有任何增加的毒性。
[0373] 如在本文中優(yōu)選地使用的肽是由至少兩個彼此共價地連接(優(yōu)選地通過肽鍵）的 氨基酸組成的任何聚合物。更優(yōu)選地，肽由2-10個氨基酸組成。所述肽的一個特別優(yōu)選的實 施方案是寡肽，其甚至更優(yōu)選地包含約10至約1〇〇個氨基酸。如在本文中優(yōu)選地使用的蛋白 質(zhì)是由多個彼此共價地連接的氨基酸組成的聚合物。優(yōu)選地，這樣的蛋白質(zhì)包含約至少100 個氨基酸或氨基酸殘基。
[0374] 可以與根據(jù)本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)和組合物結合使用的優(yōu)選蛋白質(zhì)是任何抗體，優(yōu) 選任何單克隆抗體。
[0375] 特別優(yōu)選的生物學活性化合物（即藥學活性化合物)和這樣的與根據(jù)本發(fā)明的組 合物結合使用的另外的組分是核酸。這樣的核酸可以是DNA、RNA、PNA或其任何混合物。更優(yōu) 選地，所述核酸是功能性核酸。如在本文中優(yōu)選地使用的功能性核酸是這樣的核酸，其不是 分別編碼肽和蛋白質(zhì)的核酸。優(yōu)選的功能性核酸是811?嫩、以嫩、1?嫩1、反義核酸、核酶、適配 體和sp i ege lmer，它們都是本領域已知的。
[0376] siRNA是小干擾RNA，例如，如在國際專利申請PCT/EP03/08666中所描述的。這些分 子典型地由雙鏈RNA結構組成，所述雙鏈RNA結構包含15-25個、優(yōu)選18-23個核苷酸對，它們 彼此堿基配對，即，彼此基本上互補，典型地由沃森-克里克堿基配對介導。該雙鏈RNA分子 的一條鏈與靶核酸(優(yōu)選mRNA)基本上互補，而所述雙鏈RNA分子的第二條鏈與所述靶核酸 的一段基本上相同。所述siRNA分子可以在每側和每段上分別側接許多另外的寡核苷酸，但 是，所述另外的寡核苷酸不一定必須彼此堿基配對。
[0377] RNAi具有與siRNA基本上相同的設計，但是，所述分子與siRNA相比顯著更長。RNAi 分子典型地分別包含50個或更多個核苷酸和堿基對。
[0378] 基于與siRNA和RNAi相同的作用模式而有活性的另一類功能性核酸是siNA。例如， 在國際專利申請PCT/EP03/074654中描述了 s iNA。更具體地，s iNA對應于siRNA，其中所述 s iNA分子不包含任何核糖核苷酸。
[0379] 如在本文中優(yōu)選地使用的反義核酸是這樣的寡核苷酸，其基于堿基互補性而與靶 RNA(優(yōu)選mRNA)雜交，從而活化RNA酶H ANA酶H被磷酸二酯和硫代磷酸酯偶聯(lián)的DNA活化。但 是，除了硫代磷酸酯偶聯(lián)的DNA以外，磷酸二酯偶聯(lián)的DNA被細胞核酸酶快速地降解。反義多 核苷酸因此僅作為DNA-RNA雜合復合物是有效的。反義核酸的優(yōu)選長度是在16-23個核苷酸 的范圍內(nèi)。這類反義寡核苷酸的例子描述在美國專利5,849,902和美國專利5,989,912等 中。
[0380]另一組功能性核酸是作為優(yōu)選地由RNA組成的催化活性核酸的核酶，其基本上包 含兩個部分。第一部分顯示催化活性，而第二部分負責與靶核酸的特異性相互作用。在靶核 酸和核酶的所述部分之間的相互作用（典型地通過兩個雜交鏈上的基本上互補的堿基段的 雜交和沃森-克里克堿基配對)后，催化活性部分可以變得有活性，這意味著，在所述核酶的 催化活性是磷酸二酯酶活性的情況下，所述催化活性部分對靶核酸進行分子內(nèi)或分子間的 切割。核酶、用途和設計原則是本領域技術人員已知的，并且，例如，描述在Doherty和 Doudna(Annu.Ref?Biophys.Biomolstruct?2000;30:457-75)中。
[0381] 另一組功能性核酸是微RNA。微RNA是小非編碼RNA分子。完全加工的成熟的miRNA 典型地具有約22個核苷酸的長度。微RNA在基因表達的轉錄和轉錄后調(diào)節(jié)中起作用。由真核 細胞核DNA編碼的miRNA通過與mRNA分子內(nèi)的互補序列的堿基配對而起作用，經(jīng)常通過翻譯 抑制或靶標降解和/或微RNA模擬物而導致基因沉默（參見，例如，Anand，S. (2013)，Vase Cell 5(1):2;Kasinski，A.L?和F.J.Slack(2011)，Nat Rev Cancer 11(12):849-864;Liu， 0.，等人（2011)，11^了06￥81〇1 55(4-5):419-429;5七&8261，1\，等人（2011)，？〇1厶代11 Med Wewn 121(10) :361-366;Urbich，C.，等人（2008)，Cardiovasc Res 79(4) :581-588; Costa,P.M?和M.C.Pedroso de Lima(2013)，Pharmaceuticals(Basel)6(10):1195-1220; 和Henry，J.C.，等人（2011)，Pharm Res 28(12) :3030-3042)。
[0382] 另一組功能性核酸是31^38〇111；[1'，其被例如描述在&3 8七3，？.]\1.和]\1.(].?6(11'080(16 Lima(2013)，Pharmaceuticals (Basel )6( 10) :1195_1220;Piva，R.，等人（2013)，Int J Oncol 43(4) :985_994;Ganguli，S.，等人（2011)，Bioinformation 7(1) :41_43;和Ling, 11.，等人（2013)，恥七1^￥〇^^018。(^12(11):847-865中。
[0383]另一組功能性核酸是適配體。適配體是單鏈的或雙鏈的與靶分子特異性地相互作 用的D-核酸。適配體的制備或選擇例如描述在歐洲專利EP 0533 838中。與RNAi、siRNA、 siNA、反義核苷酸和核酶不同，適配體不降解任何祀mRNA，而是與靶化合物(諸如蛋白質(zhì)）的 二級和三級結構特異性地相互作用。在與靶標相互作用后，所述靶標典型地顯示其生物活 性的改變。適配體的長度典型地在少至15個到多達80個核苷酸的范圍內(nèi)，并且優(yōu)選地在約 20至約50個核苷酸的范圍內(nèi)。
[0384] 另一組功能性核酸是spiegelmer，如在例如國際專利申請W0 98/08856中所述。 Spiegelmer是類似于適配體的分子。但是，與適配體不同，spiegelmer完全地或者大部分由 L-核苷酸而不是D-核苷酸組成。另外，特別是關于spiegelmer的可能長度，關于適配體所述 的同樣適用于spiegelmer。
[0385] 本發(fā)明的另一個方面涉及藥物組合物，其包含本發(fā)明的脂質(zhì)組合物或本發(fā)明的組 合物。本發(fā)明的藥物組合物包含藥學活性化合物和任選的藥學上可接受的載體。這樣的藥 學上可接受的載體可以優(yōu)選地選自如本文中關于根據(jù)本發(fā)明的組合物所限定的載體。本領 域技術人員將理解，如本文中所述的任何組合物原則上也可以用作藥物組合物，前提條件 是，它的成分和它們的任意組合是藥學上可接受的。藥物組合物包含藥學活性化合物。這樣 的藥學活性化合物可以與根據(jù)本發(fā)明的組合物的另外的化合物或活性劑相同，其優(yōu)選地是 任何生物學活性化合物，更優(yōu)選地是本文中公開的任何生物學活性化合物。另外的組分，藥 學活性化合物和/或生物學活性化合物優(yōu)選地選自肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、多核苷酸和核酸。
[0386] 根據(jù)本發(fā)明的組合物，特別是藥物組合物，可以用于多種施用形式，其中局部施用 和全身施用是特別優(yōu)選的。甚至更優(yōu)選的是選自肌肉內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、靜脈內(nèi)和肺施用的施 用途徑。如在本文中優(yōu)選地使用的，局部施用是指，將相應的組合物以空間上緊密關聯(lián)的方 式分別施用至要分別給其施用所述組合物和生物學活性化合物的細胞、組織和器官。如本 文中使用的，全身施用是指不同于局部施用的施用，并且更優(yōu)選地是分別施用至體液諸如 血液和液體中，其中所述體液將所述組合物分別運輸至要分別給其遞送所述組合物和生物 學活性化合物的細胞、組織和器官。
[0387] 如在本文中優(yōu)選地使用的，宿主生物體或受試者是哺乳動物，優(yōu)選地所述哺乳動 物選自人、小鼠、大鼠、兔、倉鼠、豚鼠、猴、狗、貓、豬、綿羊、山羊、牛和馬；更優(yōu)選地，所述宿 主生物體或所述受試者是人。
[0388] 任何可以使用根據(jù)本發(fā)明的組合物制備的藥物分別用于治療和預防受試者。優(yōu)選 地，這樣的受試者是哺乳動物，且甚至更優(yōu)選地，這樣的哺乳動物選自人、小鼠、大鼠、兔、倉 鼠、豚鼠、猴、狗、貓、豬、綿羊、山羊、牛和馬。在另一個方面，根據(jù)本發(fā)明的組合物和/或本發(fā) 明的脂質(zhì)組合物可以用作轉運劑，更優(yōu)選地用作轉染劑。
[0389] 如在本文中優(yōu)選地使用的，轉運劑是適合用于轉運化合物（更優(yōu)選生物學活性化 合物諸如藥學活性化合物)穿過膜(優(yōu)選細胞膜)并且更優(yōu)選地如本文前面描述的那樣將這 樣的化合物轉運到細胞中的任何試劑。優(yōu)選地，所述細胞是肺內(nèi)皮細胞，更優(yōu)選如本文中定 義的宿主生物體的內(nèi)皮細胞。
[0390] 在另一個方面，本發(fā)明涉及轉運、更具體地用生物學活性化合物轉染細胞的方法。 在第一步中（其中不一定限制步驟的順序），分別提供細胞以及膜和細胞。在第二步中，提供 根據(jù)本發(fā)明的化合物以及生物學活性化合物諸如藥學活性化合物?？梢允乖摲磻锓謩e與 所述細胞和所述膜接觸，并且由于根據(jù)本發(fā)明的化合物和組合物的生物物理學特征，所述 生物學活性化合物將從膜的一側轉移至另一側，或者在所述膜形成細胞的情況下，從細胞 外部轉移至細胞內(nèi)。在本發(fā)明內(nèi)，在分別接觸細胞和膜之前，將生物學活性化合物和本發(fā)明 的組合物和/或本發(fā)明的脂質(zhì)組合物接觸，由此優(yōu)選地形成復合物，并且使這樣的復合物分 別與細胞和膜接觸。
[0391] 在本發(fā)明的另一個方面，分別轉運生物學活性化合物和藥學活性化合物的方法包 括以下步驟:分別提供細胞和膜，提供根據(jù)本發(fā)明的組合物和/或本發(fā)明的脂質(zhì)組合物，并 分別使所述兩種組合物與細胞和膜接觸。在本發(fā)明內(nèi)，可以在分別與細胞和膜接觸之前或 期間形成所述組合物。
[0392] 在如本文中公開的用于轉運生物學活性化合物的任何方法的實施方案中，所述方 法可以包括另外的步驟，優(yōu)選檢測生物學活性化合物是否已經(jīng)被轉移的步驟。這樣的檢測 反應強烈地依賴于根據(jù)所述方法轉移的生物學活性化合物的種類，并且對于本領域技術人 員是顯而易見的。在本發(fā)明內(nèi)，這樣的方法在如本文中所述的任何細胞、組織、器官和生物 體上執(zhí)行。
[0393] 在另一個方面，本發(fā)明涉及用于制備藥物的方法。所述方法包括將治療活性劑或 藥學活性劑與本發(fā)明的組合物和/或本發(fā)明的脂質(zhì)組合物一起配制。關于如何實踐這樣的 配制的細節(jié)是本領域技術人員已知的，且也可以獲自本說明書的實施例部分。
[0394] 通過以下圖和實施例進一步舉例說明本發(fā)明，從以下圖和實施例可以獲得本發(fā)明 的其它特征、實施方案和優(yōu)點，其中
[0395] 圖1是這樣的圖，其顯示了使用不同的lipoplex制劑全身施用后1小時的siRNA體 內(nèi)分布;siRNA濃度以每克組織的初始劑量百分比[% ID/g]指示；
[0396] 圖2a顯示了形成DACC的化學化合物、它們的化學結構和它們的摩爾比（以百分比 表達），以及由DACC和siRNA分子形成的lipoplex的所述siRNA分子的基礎設計;所述siRNA 分子是平端的，且在兩條鏈上的圓圈指示2-0-甲基修飾的核苷酸；
[0397] 圖2b是這樣的圖，其以Z-平均尺寸顯示DACC/siRNA lipoplex的粒度分布；
[0398] 圖2c是這樣的圖，其顯示DACC/siRNA lipoplex的G電位；
[0399] 圖2d是DACC/siRNA lipoplex的電子顯微照片；
[0400] 圖3a是這樣的圖，其顯示在施用DACC/siRNA lipoplex后1、6和24小時在不同器官 中表示為％ ID/g組織的siRNA濃度；
[0401]圖3b是福爾馬林固定的石蠟包埋的肺組織切片的一系列共焦顯微圖像，顯示了在 DACC/siRNACy3的全身靜脈內(nèi)施用后1小時Cy3-標記的siRNA在肺中的細胞分布;左上圖像 顯示siRNA-Cy3染色（白色），右上圖像和下面的圖像顯示了 siRNACy3染色（紅色)和核染色 (綠色）的放大視圖；指示了比例條；
[0402]圖3c是福爾馬林固定的石蠟包埋的心臟、肝、脾和腎的切片的一系列共焦顯微圖 像，顯示了在DACC/siRNACy3的全身靜脈內(nèi)施用后1小時Cy3-標記的siRNA在所述器官中的 細胞分布;上圖用白色以低放大率顯示，而下圖用紅色以放大視圖顯示;指示了比例條； [0403] 圖4a顯示了在轉染用于抑制Tie-2的DACC/siRNA Tie-2lipoplex后，小鼠內(nèi)皮細胞系 MS-1的蛋白質(zhì)印跡分析的結果；
[0404] 圖4b至4e是這樣的圖，其顯示了在用DACC/siRNATie_2l ipoplex處理后，通過定量逆 轉錄酶-PCR分析確定的小鼠的肺（圖4b)、心臟（圖4c)、肝（圖4d)和腎（圖4e)的細胞中Tie-2mRNA的抑制與PTEN mRNA的抑制的對比；
[0405]圖 5a是這樣的圖，其顯示了 通過用DACC/siRNATie -2lipoplex、DACC/ siRNAeD31lip〇pleX和270mM蔗糖溶液進行推注處理的小鼠的肺細胞中Tie-2mRNA的抑制與 肌動蛋白mRNA的抑制的對比，其中施用的lipoplex的量分別是3 . Omg/kg、1.5mg/kg和 0.75mg/kg；
[0406]圖5b是這樣的圖，其顯示了通過輸注DACC/siRNATie_2lipoplex和5%葡萄糖溶液處 理的小鼠的肺細胞中T i e - 2 m R N A的抑制與肌動蛋白m R N A的抑制的對比，其中施用的 1 ipop 1 ex 的量分別是0 ? 3mg/kg、1 ? Omg/kg、3 ? Omg/kg、6 ? Omg/kg和 12mg/kg;
[0407]圖6a是這樣的圖，其顯示了處理后3天、處理后7天、處理后14天和處理后21天，用 DACC/siRNATie_2lipoplex、對照lipoplex或蔗糖處理的小鼠的肺細胞中Tie-2mRNA的抑制與 肌動蛋白mRNA的抑制的對比；
[0408]圖6b顯示了施用單次劑量的DACC/SiRNATie^2lip 〇plex或蔗糖溶液后3天和21天收 集的小鼠肺組織的蛋白質(zhì)印跡分析的結果，PTEN被用作上樣對照；
[0409] 圖7a至7d是這樣的圖，其顯示了用DACC/siRNAVEGFR2lipoplex(圖7a)、DACC/ siRNAV^^^lipoplex(圖 7b)、DACC/siRNABMPR2lipoplex(圖 7c)和 DACC/siRNACD31lipoplex (圖7d)處理的小鼠的肺內(nèi)皮中不同靶基因（圖7a: VEGFR2;圖7b: VE-鈣黏著蛋白；圖7c: BMPR2;和圖7d:CD31)的抑制與PTEN mRNA的抑制的對比，其中在每種情況下在對照動物組 中施用270mM蔗糖和DACC/s iRNA*氣
[0410] 圖8a是肺轉移瘤小鼠模型的實驗設置和使用DACC/siRNAeD31的治療方案的圖示； [0411]圖8b是這樣的圖，其顯示了在圖8a中所示的治療方案期間直至第15天的相對體 重；
[0412]圖8c是Kaplan-Meier圖，其顯示了如圖8a中的方案所描繪的實驗肺轉移瘤小鼠模 型中用DACC/s i RNAGD31、DACC/s i RNA3^或270mM蔗糖(作為對照)處理的小鼠到限定的終點 標準在細胞攻擊后70天的時間里的存活。
[0413] 圖8d是這樣的圖，其顯示了用DACC/siRNACD31lipoplex、對照lipoplex或鹿糖處理 的小鼠的肺組織中⑶31mRNA的抑制與⑶34mRNA的抑制的對比；
[0414] 圖9a是通過LPS處理和使用DACC/siRNAMGPT2的治療方案誘導炎癥反應的實驗設置 的圖示；
[0415] 圖9b是這樣的圖，其顯示了用LPS(0.5mg/kg)或鹽水(0.9%NaCl)攻擊后6小時小 鼠的肺中ANGPT2mRNA的抑制與肌動蛋白mRNA的表達的對比。用2 ? 8mg/kg、2 ? Omg/kg和 "l〇mg/kg的劑量的DACC/SiRNAMGPT2lip 〇plex處理小鼠；270mM蔗糖用作空載對照；
[0416] 圖10a是肺炎鏈球菌(S. pneumoniae)感染的肺小鼠模型的實驗設置和使用DACC/ s iRNAMepT2的治療方案的圖示；
[0417] 圖10b是Kaplan-Meier圖，其顯示了在用肺炎鏈球菌（S.pneumoni)攻擊后10天的 時間里，用DACC/siRNA ANepT2和氨芐青霉素、DACC/siRNA3^和氨芐青霉素、蔗糖和氨芐青霉 素或蔗糖和空載(鹽水)處理的小鼠的存活，如圖l〇a中的方案所描繪的；
[0418] 圖11概述了用于確定使用不同的靶向EDN1或可溶性的VEGF受體l(sFltl)的siRNA 分子和不同的遞送系統(tǒng)的小鼠中m)Ni表達的減少的實驗設置;和
[0419]圖12是柱狀圖，其顯示了來自根據(jù)圖5所示的實驗設置處理的小鼠的肺組織的總 裂解物中的EDNlmRNA表達;將EDNlmRNA表達相對于PTEN mRNA標準化。
[0420]實施例1:材料和方法
[0421] 如果沒有相反指示，則貫穿實施例使用以下描述的材料和方法。
[0422] 短干擾RNA
[0423] 在表1中列出了實施例2-9的主題實驗所用的siRNA分子(AtuRNAi)。在所述實施例 2-9中使用的siRNA分子(AtuRNAi)是平端的19-聚體雙鏈RNA寡核苷酸，其通過在兩條鏈上 的交替的2'_0_甲基修飾而穩(wěn)定化，并且在表2中列出了實施例10-11的主題實驗所用的 s iRNA分子。在所述實施例10-11中使用的s iRNA分子是平端的19-聚體雙鏈RNA寡核苷酸，其 通過在兩個鏈上的交替的2'-0_甲基修飾而穩(wěn)定化，靶向螢光素酶的對照siRNA分子是通過 在兩條鏈上的交替的2 ' -0-甲基修飾而穩(wěn)定化的23-聚體雙鏈RNA寡核苷酸。這樣的修飾以 前已經(jīng)由3&1^614等人（3&拉61，厶等人（2006).66116 1'1161'13:1222-1234)和〇2&11(16111&，卩. 等人(Czauderna，F(xiàn)?等人（2003)，Nucleic Acids Res 31:2705-2716)描述，并由BioSpring (Frankfurt a.M.，德國）合成。貫穿本說明書和權利要求書，核苷酸的2'-0-甲基修飾被表 示為由對應的大寫字母表示的如此修飾的核苷酸，而未修飾的核苷酸用對應的小寫字母表 不。
[0424] 表1:
[0429] siRNA lipoplex的制備和表征 [0430] Atuplex是一種脂質(zhì)組合物，其含有
[0431] a)5Om〇l%0-(L-精氨?；?-2,3-L-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸 鹽)；
[0432] b)49mol%l，2_二植烷?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPhyPE);和
[0433] c)lmol%N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-l，2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙 醇胺鈉鹽。
[0434] DACC9是一種脂質(zhì)組合物，其含有
[0435] a)70mol%下式的P-(L-精氨?；?-2,3_L-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺 三鹽酸鹽：
[0437] b)29mol% 膽甾醇；和
[0438] c)lmol% 下式的 mPEG-2000-DSPE:
其中配料比（〇1^坪6瓜1:;[0)[脂質(zhì)/磷酸寡聚物（11。1(18/^1108。1^七601180)]是8.4。 [0440] DACC10是一種脂質(zhì)組合物，其含有
[0441 ] a)70mol%下式的P-(L-精氨?；?-2,3-L-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺 三鹽酸鹽：
[0443] b)29mol% 膽甾醇；和
[0444] c) lmol % 下式的 mPEG-2000-神經(jīng)酰胺-C8:
[0446] ，其中配料比[脂質(zhì)/磷酸寡聚物]是8.4。
[0447] 通過用270mM無菌蔗糖溶液進行脂質(zhì)膜再水合(Santel，A等人(2006) .Gene Ther 13:1222-1234))制備陽離子脂質(zhì)體(也被稱作DACC9 )，其由摩爾比為70:29:1的陽離子脂質(zhì) AtuFECTOl (0-L-精氨?；?2，3-L-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽酸鹽； Silence Therapeutics AG,Berlin,德國）、膽留醇（Sigma Aldrich)和mPEG2000_DSPE(l， 2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N[甲氧基（聚乙二醇）-2000]); Avanti Polar Lipids Inc .，Alabaster，AL,USA)組成。以類似的方式制備由以上DACC10脂質(zhì)組合物組成 的陽離子脂質(zhì)體。得到的脂質(zhì)體儲液分別具有5mg/ml或高達9mg/ml(例如用于輸注研究）的 總脂質(zhì)濃度。通過在27OmM蔗糖中混合等體積的脂質(zhì)體分散體和s iRNA溶液，形成s iRNA lipoplex。為此，以特定方式調(diào)節(jié)二者的濃度，所述方式使得最終的lipoplex制劑特征在于 約6.8的最終脂質(zhì)/siRNA比[m/m]，該比率對應于大約8.4的核酸主鏈磷酸與帶電荷的脂質(zhì) 氮原子之間的配料比（N/P 比）。使用Zetasizer Nano_ZS(Malvern Instruments, Worcestershire, UK)通過動態(tài)光散射確定脂質(zhì)體和lipoplex的顆粒尺寸(Z-平均尺寸、強 度分布)和G電位。在這里，將對應的分散劑性質(zhì)調(diào)至270mM蔗糖。通過Vironova AB(斯德哥 爾摩，瑞典)進行負染色透射電子顯微術(nsTEM)。
[0448] 如果提及DACC，這意味著，這樣的提及表示DACC9和DACC10。
[0449] siRNA分布和體內(nèi)RNAi
[0450] 將8周齡C57Bl/6j (Harlan)雄性和雌性用于體內(nèi)研究。在該研究中的所有動物實 驗根據(jù)批準的方案執(zhí)行，并遵循Landesamt fiir Arbeits_，Gesundheitsschutz und technische Sicherheit Berlin，Germany的指南（No .G0264/99)。通過以指不的劑量推注 尾靜脈，靜脈內(nèi)地施用等滲的s iRNA 1 ipopl ex制劑。對于s iRNA-Cy3生物分布研究，小鼠接 受單劑量的DACC9 s iRNA-Cy 3 (2.8mg s i RNA/kg體重）。注射后1小時，通過斷頸法將小鼠處 死，并如前所述處理組織用于石蠟包埋（Santel，A等人（2006) .Gene Ther 13:1222- 1234))。切割4_的切片，并用R〇ticlear(R〇th，A538.5)脫石蠟，通過分級乙醇洗滌再水合 并用Sytox Green染料(Molecular probes)復染色。用Zeiss LSM510Meta共焦顯微鏡分析 熒光攝取。通過Zeiss LSM5軟件記錄和處理圖像。對于不同器官中的siRNA分布的定量分 析，小鼠接受單劑量的用PKN3 s i RNA配制的lipoplex。通過改進的捕獲探針夾心雜交測定 (Aleku，M,等人(2008) .Cancer Res 68:9788-9798)，確定不同組織中的PKN3siRNA的濃度。 對于祀mRNA敲低分析，在處死小鼠后立即解剖組織，并立即在液氮中快速冷凍。使用碳化鎢 珠子（Qiagen)在Mixer Mill MM301(Retsch GmbH，Haan,德國）中將大約20mg組織勾衆(zhòng)化。 用Invisorb Spin Tissue RNA Mini Kit(Invitek,Berlin,德國）從裂解物分離總RNA。取 決于組織，將25-100ng總RNA用于使用得自BioTez GmBH(柏林，德國）的擴增子集合(在表3 中列出）的定量TaqMan RT-PCR:使用以前描述的用于RT-PCR的標準方案（Sante 1，A等人 (2006).Gene Ther 13:1222-1234))，利用濃度分別為300和100nM的引物和探針，利用ABI PRISM 7700Sequence Detector(軟件：Sequence Detection System vl.6.3(ABI))或 StepOnePlus?Real Time PCR Sytem(ABI)進行TaqMan RT-PCR反應。通過使用Comparative CT方法，計算TaqMan數(shù)據(jù)。如以前所述(Sante 1，A等人(2006 )? Gene Ther 13:1222-1234))， 通過全組織裂解物的蛋白質(zhì)印跡法評估靶蛋白質(zhì)表達。將速凍的組織在Mixer Mill MM 301 (Retsch GmbH，Haan，德國）中勻漿化，并在Riper-裂解緩沖液中提取蛋白質(zhì)。將等量的 蛋白質(zhì)加載用于使用下述抗體的免疫印跡分析：兔抗 -PTEN(Ab-2，Neomarkers，F(xiàn)remont， CA，USA)和小鼠抗-Tie2(克隆Ab33，Upstate05-584)。
[0451]表3:用于Taqman分析的引物集合
[0454] 輸注研究
[0455] 對于輸注研究，頸靜脈中插入導管的小鼠（Harlan)接受單次最高劑量（12mg siRNA/kg體重；40ml/kg體重）的DACC9/lipoplex的1小時輸注。對于劑量滴定，將 DACC91 ipoplex儲液在5 %葡萄糖溶液中稀釋以保持施用體積恒定。
[0456] 小鼠內(nèi)皮細胞系MSI的轉染.
[0457] 從美國典型細胞培養(yǎng)物中心(ATCC)得到小鼠內(nèi)皮細胞系MSI (ATCC CRL-2279)，并 根據(jù)供應商的推薦進行培養(yǎng)。將細胞接種進6孔板中并如前所述（Santel，A等人（2006) .Gene Ther 13:1222-1234)用DACC9/siRNATie-2轉染。簡而言之，在細胞接種后約12小時， 將不同量的在含有10 %血清的培養(yǎng)基中稀釋的DACC9/siRNA制劑添加至細胞以達到10-160nM siRNA的轉染濃度。轉染以后3天，裂解細胞。將蛋白質(zhì)通過SDS-PAGE進行分離，并如 前所述進行免疫印跡法(Santel,A等人(2006).Gene Ther 13:1222-1234))。
[0458] 實驗肺轉移瘤小鼠模型
[0459 ] 在補充了 10 % FCS和4mM谷氨酰胺的RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)Lewi s肺癌(LLC)細胞。用胰 蛋白酶將細胞解離，隨后在細胞培養(yǎng)基中并且在中洗滌。將在200yl PBS中的250 000個 細胞注射進8周齡雄性BDF1小鼠（Harlan)的尾靜脈中。腫瘤細胞攻擊前5天開始，每隔一天 將小鼠用等滲蔗糖或DACC91ip 〇pleX處理11次。每天監(jiān)測小鼠的體重發(fā)展和痛苦征象。當達 到限定的終點標準(評分> =4)時，通過斷頸法處死動物。終點標準是痛苦征象(萎靡不振、 變虛弱、難以移動或進食、化合物毒性（弓起痙攣(hunching convulsion))、連續(xù)3天體重下 降15 %或1天體重損失邠％和> =4的評分）。
[0460]肺炎鏈球菌感染的肺模型
[0461 ]通過￡111'〇;1^;[11/?&111&&8(1?;[061'0&，研究1309784，從模型608100改進)進行研究：通過 尾靜脈注射用DACC91ipoplex(2.8mg siRNA/kg體重)或鹿糖(作為空載對照)處理雄性的無 特定病原體的ICR小鼠（體重20-228)。24小時后，將所有小鼠用LD 90-100劑量(O.C^mlJ-gxlCfCFU) 的肺炎鏈球菌 (ATCC 6301) 氣管內(nèi)感染以誘導急性肺炎。感染后 2 小時 ，通過靜脈 內(nèi)途徑施用單次次優(yōu)劑量的氨芐青霉素(3mg/kg)。監(jiān)測小鼠的存活直到感染后10天。在沒 有氨芐青霉素處理的情況下，小鼠在肺炎鏈球菌感染后3天內(nèi)死亡。用單次劑量的氨芐青霉 素僅觀察到存活的中等增加。除了氨芐青霉素處理以外還進行DACC9/Angpt2 siRNA預處理 顯著地增加小鼠的存活。>50%的動物存活指示試驗物的顯著活性。
[0462]統(tǒng)計分析
[0463] 將數(shù)據(jù)表達為平均值土 SEM。
[0464] 實施例2:DACC的肺特異性
[0465] 在體內(nèi)評價不同的lipoplex制劑，以便研究它們各自的將siRNA貨物遞送至選定 器官的能力。所有用于檢查siRNA生物分布模式的lipoplex都用陽離子脂質(zhì)AtuFECTOl和 siRNA?-3配制，但是含有不同比率的不同輔脂質(zhì)(co-lipid)和/或PEG-脂質(zhì)。通過尾靜脈注 射靜脈內(nèi)地施用lipoplex，并使用siRNA特異性的基于定量ELISA的捕獲探針測定確定全身 施用后1小時肝、腎、肺、心臟和脾組織樣品中的siRNA濃度。結果顯示在圖1中。
[0466] 不同lipoplex的組成總結在表4中。
[0467] 表4:不同lipoplex的組成
[0468] Lipoplex 陽離子脂質(zhì) 輔脂朽 輔臘質(zhì) PEG-脂質(zhì) 摩爾比[%] li}X)plcx_01 1611H: 1 Dap Arg 10U lipoplexJ)2 16 lH:ll.)apArg DPiiyPII mPr：.G20(!0-DSITi 50:49:01 lipoplex_03： 16/18:lDapArg 膽甾醇 mPEG2000-DSPE 50:49:01 lipoplex J)4 12/14DapArg 膽甾醇 mPEG2000-DSPE. 70:29:01 DACC9 16 18:lDt!pA!-g mPEG20!)0-DSPR 70:29:01 lipopkx_().5 16 ]S:lD;.ipAnj CHIiMS in! >r：G2*)0()-DSPrs 70:29:01 lipoplcx_06 16 iSilDapArg DOPC tn3)[(;2?)()()-DSr)「i 25:74:1 lipopic>:_07 16 1H: iDapArg DOPC' iTiPEG20i)0-DSPn 50:49:0! lipoplexJ)H 16 lHMDapArg DOPC' mPnG2()0()-DSP[l 75:24:01 lipoplex_09 16/lg:IDapArg 膽甾醇 CHEMS mPnG20DD-DMPE 19:30:59:2 lipoptex-lO ^ISiiDapArg m3"n(.i2000-DMI>[： 45:33:20:2
[0469] 遞送至各個組織的siRNA的濃度隨使用的lipoplex系統(tǒng)而變化，而DACC91ipoplex 系統(tǒng)顯示出向肺的最有效siRNA遞送（圖1，黑色條）。此外，lipoplex制劑穩(wěn)定性和功能性器 官攝取之間的反相關，即甚至就它們的聚集趨勢而言最穩(wěn)定的制劑也被發(fā)現(xiàn)最少被捕集在 肺內(nèi)皮的血管床中，而是直接積累在肝和脾中用于隨后降解。然而，siRNA向靶組織的遞送 和細胞攝取不是負責活性的唯一因素，如之前由Heyes等人(Heyes, J，Palmer，L，Bremner， K,和MacLachlan, 1(2005) .J Control Release 107:276-287)對于不同的基于陽離子脂質(zhì) 的系統(tǒng)所證實的，提示胞吞作用不是限速的，而是在siRNA已經(jīng)被細胞內(nèi)化后發(fā)生的那些事 件(諸如內(nèi)體釋放和RISC加載)對基因沉默的效率具有最大影響。
[0470] 實施例3:脂質(zhì)組合物和DACC/siRNA lipoplex的物理化學表征
[0471 ] DACC91ipoplex(在本文中有時也被稱作DACC91ipoplex)由在270mM蔗糖溶液中的 摩爾比為70: 29:1的帶正電荷的脂質(zhì)系統(tǒng)AtuFECTOl⑴-L-精氨?；?2，3-L-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽）、膽留醇和mPEG2000-DSPE(l，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N[甲氧基(聚乙二醇)-2000 ])以及通過使Y -0-甲基修飾在兩條鏈上交替而化 學穩(wěn)定化的平端的siRNA雙鏈體組成（Santel，A,等人（2006)，Gene Ther 13:1222-1234; 八1〇1〇1，]\1，等人(2008)，〇31^611^8 68:9788-9798)。040：9的化學化合物、它們的化學結構 和它們的摩爾比（以百分比表達）以及l(fā)ipoplex的siRNA分子的基礎設計顯示在圖2a中。關 于siRNA分子，應當指出，它們是平端的，并且圓圈指示2-0-甲基修飾的核苷酸。
[0472] 關于尺寸和（電位來表征得到的DACC91ip〇pleX顆粒。在270mM蔗糖溶液中的Z-平 均尺寸達到~70nm，如通過動態(tài)光散射所確定的，結果顯示在圖2b中，并且在270mM蔗糖中 測量的（電位是在40_50mV之間，這可以從圖2c看出。
[0473] DACC91ipopleX顆粒的電子顯微術揭示了主要呈球形排列的優(yōu)勢層狀結構，如在 圖2d中所示。蔗糖的添加使得制劑能夠在冷凍、干燥和再水合步驟期間穩(wěn)定，由此確保有效 長期貯存為凍干產(chǎn)品(數(shù)據(jù)未顯示）。對于由在270mM蔗糖溶液中的DACC10脂質(zhì)組合物、通過 使 2 / - 〇 -甲基修飾在兩條鏈上交替而化學穩(wěn)定化的平端的s i R N A雙鏈體組成的 DACC101ipoplex(Santel，A,等人（2006)，Gene Ther 13:1222-1234;Aleku，M,等人（2008)， Cancer Res 68:9788-9798)，得到了類似的結果。
[0474] 實施例4: DACC主要將siRNA遞送至肺內(nèi)皮
[0475] 為了更詳細地表征通過DACC91ipoplex的全身施用的siRNA遞送的組織分布和動 力學，用單次劑量的DACC9(2.8mg siRNA/kg體重)處理小鼠，并在施用DACC91ipoplex制劑 后1、6和24小時收集來自不同器官的許多組織樣品以確定相應的siRNA濃度。結果顯示在圖 3a中。
[0476] 如從圖3a可見，在1小時時間點在肺組織中發(fā)現(xiàn)了最高s iRNA濃度[約40 % ID/g組 織]，其次是脾、肝，腎和心臟更低。所有研究的組織中的siRNA濃度隨時間減小，在血液、腦、 前列腺或骨骼肌中測得低于初始劑量的1 %的siRNA水平。
[0477] 為了檢查優(yōu)勢地靶向的組織內(nèi)的siRNA分布，用與花青染料(Cy3)標記的siRNA- 起配制的DACC91ip〇ple X處理小鼠。然后通過對福爾馬林固定的石蠟包埋的組織切片進行 共焦顯微術，使組織中的Cy3-標記的siRNA可視化。在肺、肝、腎和心臟中的siRNA分布模式 暗示血管染色模式，這可以從圖3b-c看出。
[0478] 從所有研究的器官，肺被siRNA_Cy3最強烈地染色，其中siRNA染色在肺血管系統(tǒng) 中均勻地分布。
[0479] 在放大視圖中，肺中源自siRNA的染色是細小的點且圍繞細胞核集中，該觀察結果 指示siRNA的細胞內(nèi)攝?。▓D3b)。在心臟中，發(fā)現(xiàn)覆蓋毛細血管內(nèi)層的不同的Cy3染色，而肌 肉纖維沒有siRNA-Cy3信號（圖3c)。肝中的竇狀隙內(nèi)皮細胞層顯示弱siRNA-Cy3染色模式 (圖3c)，而在肝竇狀隙內(nèi)的個體細胞被強烈地Cy3染色。橢圓形狀的細胞核（圖3c，參見箭 頭)標記了負責除去外來顆粒物質(zhì)的庫普弗(Kupffer)細胞，因此，這里發(fā)現(xiàn)的lipoplex也 可能是通過吞卩策作用被吸收的(Whitehead,KA等人（2009)，Nat Rev Drug Discov 8:129-138)。肝細胞(可通過它們的大的、規(guī)則和圓形的細胞核來辨別）不具有siRNA-Cy3染色。脾 中的siRNA-Cy3染色在白髓的邊緣區(qū)中是顯著的，而白髓的中央保持沒有CY3染色（圖3c)。 由于已知負責從血液中清除lipoplex的單核細胞和巨噬細胞被隔離在該區(qū)域中，通過相應 的巨噬細胞的lipoplex清除可以解釋在該區(qū)域中觀察到的增強的siRNA-Cy3染色模式。還 在腎的小管周毛細血管中檢測到不同的Cy3信號（圖3c，箭頭）。腎小管細胞的染色是彌散性 的，具有Cy3-siRNA向小管的內(nèi)腔積累的趨勢，指示由腎分泌游離的siRNA。總之，通過DACC9 遞送系統(tǒng)的siRNA分布的定量和定性分析揭示了siRNA攝取主要發(fā)生在肺中，但是也在心 臟、肝和腎的微血管系統(tǒng)中以及在肝和脾的吞噬細胞中檢測到不同的來源于siRNA-Cy3的 信號。
[0480] 實施例5:肺血管系統(tǒng)中DACC9對靶基因表達的抑制
[0481] 為了試驗由DACC9遞送的siRNA是否在功能上有活性且可以用于抑制血管床中的 靶基因表達，制備了含有對靶基因Tie-2有特異性的siRNA的DACC制劑。Tie-2表達是對內(nèi)皮 細胞高度特異性的，且它是許多器官中該細胞類型的共同標志物（van der Heijden，M等 人，Expert Opin Ther Targets 13:39-53)。首先在體外試驗了DACC/siRNATle-2的RNAi活 性。用DACC9/siRNA Tie"2轉染人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)，并在72小時后通過免疫印跡法評估 細胞裂解物中的Tie-2蛋白表達。結果顯示在圖4a中。
[0482] Tie-2表達被 160和80nM siRNA劑量的DACC9/siRNATie-2顯著地減小，40nM siRNA減 小的程度較低（圖4a)，這證實了DACC9可以在功能上將siRNA遞送到細胞中并介導RNAi。應 當指出，這些濃度不反映siRNA IC50,因為DACC9沒有為細胞培養(yǎng)轉染實驗進行優(yōu)化，且較 低濃度可以用在后者中。
[0483] 為了研究DACC9是否能夠在體內(nèi)在血管內(nèi)皮中進行基因沉默，通過尾靜脈注射連 續(xù)數(shù)天給小鼠施用3劑04(^911口<^161(312.811^/1^)。在最后一次處理后24小時，收集肺、心 臟、肝和腎組織。從全組織裂解物制備總mRNA，并通過定量RT-PCR評估祀mRNA水平。結果顯 示在圖4b-e中。與使用DACC9/siRNA*^或使用蔗糖溶液的對照處理相比，在用DACC9/ SiRNATie"2全身性地處理的小鼠的肺組織中，Tie-2mRNA水平下降了超過80% (圖4b)。即使在 重復施用DACC9/SiRNATle-2制劑以后，在肝、腎和心臟組織中也沒有觀察到顯著的Tie-2敲低 (圖4c-e)，指示肺是在功能上被DACC9/s iRNATie_2靶向的主要器官。
[0484] 實施例6:靶基因表達的DACC/siRNA劑量應答性
[0485] 為了進一步研究小鼠中DACC91ip〇pleX抑制靶基因的劑量要求，通過靜脈內(nèi)尾靜 脈推注施用單劑的3.0、1.5和0.75mg siRNA/kg體重的DACC9/siRNATie-2或DACC9siRNAGD311。 在注射后24小時收集肺組織用于RNA分析。Tie-2靶基因表達的抑制的結果顯示在圖5a中。
[0486] 令人驚奇地，通過推注處理注射的單劑DACC9/siRNATie_2(3? Omg siRNA/kg)足以降 低Tie-2mRNA水平，類似于關于圖4b所述的重復給藥(3x2.8mg siRNA/kg)以后得到的水平 (比較，圖5a和4b)。1.5mg siRNA/kg也可有效地降低Tie-2表達，但是程度較低，而0.75mg siRNA/kg不顯著影響Tie-2水平。由于到目前為止描述的所有DACC9施用都通過推注來執(zhí) 行，而經(jīng)由輸注施用是在人中遞送lipoplex的優(yōu)選形式，所以通過1小時輸注將不同劑量的 DACC9/ SiRNATle-2施用到小鼠的頸靜脈中。此種通過輸注形式進行的施用(所述輸注用約lh 的時間實施)是臨床上必要的。結果顯示在圖5b中。
[0487] DACC9/siRNATie_2輸注以后的靶基因沉默與3mg siRNA/kg體重的推注的結果相當。 肺組織中的Tie-2mRNA水平下降了大約80%。由于該施用模式使得能夠使用與推注相比更 大體積的DACC91ipoplex，所以施用的劑量分別增加至6mg siRNA/kg和/或12mg siRNA/kg。 經(jīng)證實，lipoplex濃度的這種增加將Tie-2表達水平甚至進一步降低超過95% (圖5b)。盡管 如此，所有動物耐受甚至在最高劑量(12mg/kg)的DACC9/SiRNATie" 2的輸注處理（圖5b)。
[0488] 基于以上數(shù)據(jù)，對于使用單次劑量在肺中抑制Tie-2表達而言，小鼠的EC50為約 1.5mg siRNA/kg，而更高的劑量3mg/kg(推注)和高達6mg/kg(輸注)也被耐受。但是，較高單 劑量的siRNA lipoplex對體重發(fā)展具有不利的影響，在12mg siRNA/kg劑量水平顯示超過 10%的下降（相對于在3和lmg siRNA/kg劑量時可忽略的重量減輕(數(shù)據(jù)未顯示）。從臨床角 度，觀察到的低的和一次性的定量給藥對于隨后的毒性分析(profiling)而言是有利的。
[0489] 實施例7:靶標抑制的持續(xù)時間和由DACC介導的RNAi介導的敲低的驗證
[0490] 為了評估通過DACC9lipoplex的革E1基因抑制的持續(xù)時間，用單次劑量(2.8mg/kg) 的DACC9/siRNATie_2或DACC9/siRNAMGPT2處理小鼠，并將組群在處理后(p.t.)3、7、14和21天 處死。通過定量RT-PCR定量在相應的肺組織中的Tie-2祀mRNA水平。結果顯示在圖6a中。 [0491 ] 在用lipoplex處理后3天，在DACC9/siRNATie_2處理組中觀察到最顯著的Tie-2表達 減少（與D A C C 9對照組相比，超過8 0 % T i e - 2減少）。盡管如此，與用蔗糖或用對照 DACC91ipoplex處理的對照組相比，21天以后Tie-2mRNA水平仍然下降了超過50% (圖6a)。 顯著地，證實單次劑量的DACC91ipoplex(2.8mg siRNA/kg)使靶基因Tie-2的mRNA水平下降 60-90% (圖6a)，該沉默效應持續(xù)多達3周。
[0492] 為了證實Tie_2mRNA的減少導致Tie-2蛋白的對應減少，分別在用DACC91ipoplex 或用蔗糖(作為空載對照)處理以后3和21天，由小鼠制備肺組織勻漿物。通過蛋白質(zhì)印跡法 檢測Tie-2蛋白，如在圖6b中所示。在處理以后3天觀察到Tie-2蛋白水平的最顯著下降，這 對應于Tie-2mRNA水平的相應下降，并被證實隨時間逐漸衰減。但是，在處理以后21天仍然 觀察到Tie-2蛋白表達的深遠下降。此外，Tie-2mRNA水平在21天以后保持下降了超過70%。
[0493] 實施例8: DACC/s i RNA對肺內(nèi)皮中的另外的靶基因的抑制
[0494] 為了證實DACC9遞送系統(tǒng)也能夠抑制在肺內(nèi)皮中表達的除了Tie-2以外的其它基 因，用對其它基因靶標（其表達高度限于內(nèi)皮細胞）具有特異性的siRNA制備 DACC91 ipop 1 ex: VEGFR2受體、VE-鈣黏著蛋白、BMPR2和CD31基因，各種siRNA的序列在實施 例1 中顯示。用 DACC9/siRNAVEGFR2、DACC9/siRNAVE-鏹懸白、DACC9/siRNA BMPR-2 或 DACC9/ siRNA?31的單次注射(2.8mg siRNA/kg)處理小鼠，使相應靶基因的mRNA水平下降60-90%， 如在圖7中所示。觀察到的mRNA水平的下降因而證實，DACC91ipoplex能夠在功能上將siRNA 遞送至血管內(nèi)皮，由此能夠?qū)崿F(xiàn)在該組織類型中的靶標特異性的基因沉默。此外， DACC91ip 〇pleX的僅僅單次施用足以下調(diào)相應的靶基因在肺血管系統(tǒng)中的表達。
[0495] 實施例9: DACC/s iRNAeD31處理增加實驗肺轉移瘤小鼠模型中的存活
[0496] CD31/Pecaml是同型以及異型細胞相互作用所需的細胞表面蛋白。它參與腫瘤發(fā) 生的多個過程，如血管生成、血管滲透性和轉移(Cao，G等人(2009)，Am J Pathol 175:903-915;DeLisser，H等人（2010)，Proc Natl Acad Sci USA 107:18616-18621)。在以前的研究 中也證實，通過RNA干擾來靶向CD31會導致皮下異種移植物腫瘤模型中和常位前列腺癌模 型中的腫瘤生長的下降（Santel，A,等人(2006)，Gene Ther 13:1360-1370)。
[0497]在本研究中，研究了 DACC9/siRNAeD31是否可以在治療上被用于治療肺癌。為此，試 驗了使用DACC9/siRNAeD31的處理是否在實驗肺轉移瘤小鼠模型中具有治療益處(Santel，A 等人(2010)，Clin Cancer Res 16:5469-5480)。在該模型中，將Lewis肺癌細胞(LL)靜脈內(nèi) 地施用給同基因的BDF1小鼠，從而導致腫瘤細胞在肺中的定殖以及隨后肺轉移瘤的長出。 在LL腫瘤細胞靜脈內(nèi)注射之前5天，制備DACC9/siRNAeD31、對照lipoplex DACCg/siRNA?**1 和蔗糖(作為空載對照)并將其注射到小鼠中。每隔一天重復通過推注(2.8mg/kg)的處理直 至第15天（圖8a)。
[0498] 連續(xù)地監(jiān)測體重。在處理期間沒有觀察到由DACC91ip〇pleX施用引起的體重下降， 這可以從圖8b看出。
[0499] 監(jiān)測動物的存活至限定的終點標準達多至腫瘤細胞攻擊后70天。結果顯示在圖8c 中。與接受蔗糖(P〈〇 . 006，時序檢驗)或DACCg/siRNAg^pW. 001)的對照處理組相比，接 受DACC9/siRNAeD31的動物的存活顯著地增強。用等滲蔗糖溶液或螢光素酶對照lipoplex處 理的動物顯示出較差的存活:在蔗糖對照組中，沒有動物存活超過30天，DACCg/siRNA 3^ 對照組中僅兩只動物存活至第70天。與此相比，8只接受DACC9/siRNAeD31的動物中的7只存 活至第70天。在單獨的組群中在腫瘤細胞攻擊以后第16天在處理階段結束以后評價了 CD31 表達（圖8a)。與用DACC9/siRNA?^或蔗糖（作為空載對照）處理的動物相比，用DACC9/ siRNA? 31處理的動物的肺中的⑶31表達下降了大約80% (圖8d)，從而證實在治療情況中 CD31表達可以被DACC91ipoplex靶向。
[0500] 實施例HhDACC/siRNA^2防止小鼠中通過LPS的ANG2的誘導
[05011用指定劑量的DACC91ip0pleX或用蔗糖溶液靜脈內(nèi)地處理C57BL6小鼠。48小時以 后，用LPS(0.5mg/kg，靜脈內(nèi)）或鹽水(0.9%NaCl)攻擊小鼠。在LPS處理后6小時收集肺組 織，并處理以用于RNA分離(參見圖9a)。通過qRT-PCR確定肺組織樣品中的ANGPT2mRNA水平。 使用肌動蛋白mRNA水平作為標準化物。與使用的材料和方法有關的實驗的其它方面根據(jù)實 施例1進行。
[0502] 結果顯示在圖9b中。如從圖9b可見，蔗糖處理組LPS誘導了肺組織中ANGPT2mRNA水 平的升高。DACC9/ANGPT2s iRNA處理以劑量依賴性的方式減少了 ANGPT2誘導。
[0503]實施例11 :DACC/siRNA處理增加肺炎鏈球菌感染的肺模型(小鼠）中的存活 [0504] 通過尾靜脈注射，用04(^91丨口(^161(2.811^811?熟/1^體重）或鹿糖(作為11。(^16叉 的空載對照)處理雄性的無特定病原體的ICR小鼠（體重20-22g)。24小時以后，用LD 90-100 劑量(0.02ml，7-9x 106CFU)用肺炎鏈球菌(ATCC 6301)氣管內(nèi)地感染所有小鼠以誘導急性 肺炎。感染以后2小時，通過靜脈內(nèi)途徑施用單次次優(yōu)劑量的氨芐青霉素"AMP"（3mg/kg)或 0.9%NaCl。監(jiān)測小鼠的存活直到感染以后10天(參見圖10a)。與使用的材料和方法有關的 實驗的其它方面根據(jù)實施例1進行。結果顯示在圖l〇b中。
[0505]如從圖10b可見，在沒有氨芐青霉素處理的情況下，小鼠在肺炎鏈球菌感染后3天 內(nèi)死亡。通過單次劑量的氨芐青霉素，僅觀察到存活的中等增加。除了氨芐青霉素處理以外 的DACC9/Angpt2siRNA(DACC9/siRNA Angpt2)預處理顯著增加小鼠存活。>50%的動物存活指 示試驗物的顯著活性。
[0506] 實施例12:小鼠中EDN-1表達的減少
[0507]該動物研究的目的是評價用于靶向內(nèi)皮縮血管肽1編碼基因EDN1的不同遞送系 統(tǒng)。用于小鼠的實驗設定和處理方案描繪在圖11中。
[0508] 通過推注施用，用單劑量的與DACC9、DACC10-起配制的靶向EDN1的siRNA(被稱作 EDNl-hmr2)(其由兩條單獨的鏈組成，所述鏈彼此100%互補，其中每條鏈由19個核苷酸組 成)或用三個劑量的與Atuplex-起配制的EDNl_hmr2siRNA處理小鼠。對照lipoplex含有革巴 向編碼可溶性VEGF受體l(sFltl)的基因的siRNA(其被稱作sFLTl-hm4)。在處理后48小時分 析肺組織中的靶基因表達。
[0509] 結果顯示在圖12中。從所述圖12顯而易見，就向肺組織遞送siRNA的目的而言，與 DACC9或DACC10-起配制的siRNA比與Atuplex-起配制的siRNA更有效。
[0510] 在本文中列舉的所有參考文獻通過引用并入本文。
[0511] 在本說明書、權利要求書和/或附圖中公開的本發(fā)明的特征可以單獨地和以其任 意組合成為用于實現(xiàn)其不同形式的本發(fā)明的材料。
【主權項】
1. 包含脂質(zhì)組合物的組合物，其中所沭脂質(zhì)組合物由以下組成:式（I)的陽離子脂質(zhì)其中η是1、2、3和4中的任一個， 其中m是1、2和3中的任一個， Y_是陰離子， 其中R1和R2中的每一個單獨地和獨立地選自直鏈C12-C18烷基和直鏈C12-C18烯基； 甾醇化合物，其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;和 聚乙二醇化脂質(zhì)，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)包含PEG部分，且其中所述聚乙二醇化脂質(zhì) 選自： 式(II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺其中R3和R4中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C13-C17烷基，且p是15-130的任意整 數(shù)； 式(III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺其中R5是直鏈C7-C15烷基，且 q是15-130的任意整數(shù)； 和 式（IV)的聚乙二醇化一釀1廿油其中R6和R7中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C11-C17烷基，且r是15-130的任意整 數(shù)。2. 根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中R1和R2彼此不同。3. 根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中R1和R2是相同的。4. 根據(jù)權利要求1-3中的任一項所述的組合物，其中R1和R2中的每一個單獨地和獨立 地選自C12烷基、C14烷基、C16烷基、C18烷基、C12烯基、C14烯基、C16烯基和C18烯基。5. 根據(jù)權利要求4所述的組合物，其中C12烯基、C14烯基、C16烯基和C18烯基中的每一 個包含一個或兩個雙鍵。6. 根據(jù)權利要求5所述的組合物，其中C18烯基是具有一個在C9和CIO之間的雙鍵的C18 烯基，優(yōu)選是順式-9-十八烷基]。7. 根據(jù)權利要求1-6中的任一項所述的組合物，其中R1和R2是不同的，且R1是棕櫚基且 R2是油烯基。8. 根據(jù)權利要求1-6中的任一項所述的組合物，其中R1和R2是不同的，且其中R1是月桂 基且R2是肉豆蔻基。9. 根據(jù)權利要求1-8中的任一項所述的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)是式（la)的化合 物 1 1(ia,)c10. 根據(jù)權利要求1-9中的任一項所述的組合物，其中Γ選自鹵化物、乙酸鹽和三氟乙酸 鹽。11. 根據(jù)權利要求10所述的組合物，其中。12. 根據(jù)權利要求1-11中的任一項所述的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)是式（lb)的β- 精氨?；鵢2，3-二氨基丙酸-Ν-棕櫚基-Ν-油烯基-酰胺二鹽酸鹽：(1DJC13. 根據(jù)權利要求1-11中的任一項所述的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)是式（Ic)的β-精氨?；?2，3-二氨基丙酸-Ν-月桂基-Ν-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽：14. 根據(jù)權利要求1-11中的任一項所述的組合物，其中所述陽離子脂質(zhì)是式（Id)的ε- 精氨酰基-賴氨酸-Ν-月桂基-Ν-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽：15. 根據(jù)權利要求1-14中的任一項所述的組合物，其中所述留醇化合物是膽甾醇。16. 根據(jù)權利要求12-14中的任一項、優(yōu)選權利要求14所述的組合物，其中所述留醇化 合物是膽甾醇。17. 根據(jù)權利要求1-14中的任一項所述的組合物，其中所述留醇化合物是豆甾醇。18. 根據(jù)權利要求12-14中的任一項、優(yōu)選權利要求14所述的組合物，其中所述留醇化 合物是豆甾醇。19. 根據(jù)權利要求1-18中的任一項、優(yōu)選權利要求12-14中的任一項、更優(yōu)選權利要求 16和18中的任一項所述的組合物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分具有約800至約 5000Da的分子量。20. 根據(jù)權利要求19所述的組合物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分的分子量是約 800Da〇21. 根據(jù)權利要求19所述的組合物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分的分子量是約 2000Da〇22. 根據(jù)權利要求19所述的組合物，其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)的PEG部分的分子量是約 5000Da〇23. 根據(jù)權利要求1-22中的任一項、優(yōu)選權利要求19-22中的任一項所述的組合物，其 中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，其中R3和R4中的每一個單獨地 和獨立地是直鏈Cl 3-C17烷基，且 P是選自18、19或20、或選自44、45或46、或選自113、114或115的任意整數(shù)。24. 根據(jù)權利要求23所述的組合物，其中R3和R4是相同的。25. 根據(jù)權利要求23所述的組合物，其中R3和R4是不同的。26. 根據(jù)權利要求23和25中的任一項所述的組合物，其中R3和R4中的每一個單獨地和 獨立地選自C13烷基、C15烷基和C17烷基。27. 根據(jù)權利要求1 -26中的任一項、優(yōu)選權利要求12-14中的一項、更優(yōu)選權利要求14 和16中的任一項所述的組合物，其中所述式(II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺是28. 根據(jù)權利要求1 -26中的任一項、優(yōu)選權利要求12-14中的一項、更優(yōu)選權利要求16 和18中的任一項所述的組合物，其中所述式(II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺是29. 根據(jù)權利要求1-22中的任一項、優(yōu)選權利要求19-22中的任一項所述的組合物，其 中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺，其中R5是直鏈C7-C15烷基，且 q是選自18、19或20、或選自44、45或46、或選自113、114或115的任意整數(shù)。30. 根據(jù)權利要求29所述的組合物，其中R5是直鏈C7烷基。31. 根據(jù)權利要求30所述的組合物，其中R5是直鏈C15烷基。32. 根據(jù)權利要求1-22和29-31中的任一項、優(yōu)選權利要求12-14中的一項、更優(yōu)選權利 要求16和18中的任一項所述的組合物，其中所述式(III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺是33. 根據(jù)權利要求1-22和29-31中的任一項、優(yōu)選權利要求12-14中的一項、更優(yōu)選權利 要求16和18中的仟一項所述的組合物，其中所述式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺是34. 根據(jù)權利要求1-22中的任一項、優(yōu)選權利要求19-22中的任一項所述的組合物，其 中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（IV)的聚乙二醇化二酰甘油 其中R6和R7中的每一個單獨地和獨立地是直鏈C11-C17烷基，且 r是選自18、19或20、或選自44、45或46、或選自113、114或115的任意整數(shù)。35. 根據(jù)權利要求34所述的組合物，其中R6和R7是相同的。36. 根據(jù)權利要求34所述的組合物，其中R6和R7是不同的。37. 根據(jù)權利要求34-36中的任一項所述的組合物，其中R6和R7中的每一個單獨地和獨 立地選自直鏈C17烷基、直鏈C15烷基和直鏈C13烷基。38. 根據(jù)權利要求1-22和34-37中的任一項、優(yōu)選權利要求12-14中的一項、更優(yōu)選權利 要求16和18中的任一項所述的組合物，其中所述式(IV)的聚乙二醇化二酰甘油是39. 根據(jù)權利要求1-22和34-36中的任一項、優(yōu)選權利要求12-14中的一項、更優(yōu)選權利 要求16和18中的任一項所述的組合物，其中所述式(IV)的聚乙二醇化二酰甘油是40. 根據(jù)權利要求1 -22和34-36中的任一項、優(yōu)選權利要求12-14中的一項、更優(yōu)選權利 要求16和18中的任一項所述的組合物，其中所述式(IV)的聚乙二醇化二酰甘油是41. 根據(jù)權利要求1-40中的任一項所述的組合物，其中式(I)的陽離子脂質(zhì)選自 精氨?；鵢2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽酸鹽精氨酰基-2,3-二氨基丙酸-Ν-月桂基-Ν-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽和 ε_精氨?；?賴氨酸-Ν-月桂基-Ν-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;且 其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，其中所述聚乙二醇化磷 酸乙醇胺選自 1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-Ν-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](銨鹽）1，2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-5000](銨鹽）42.根據(jù)權利要求1-40中的任一項所述的組合物，其中 式(I)的陽離子脂質(zhì)選自 精氨酰基_2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽酸鹽精氨酰基-2,3-二氨基丙酸-Ν-月桂基-Ν-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽和 ε_精氨?；?賴氨酸-Ν-月桂基-Ν-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;且 其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（III)的聚乙二醇化神經(jīng)酰胺，其中所述聚乙二醇化神 經(jīng)酰胺選自 Ν-辛酰基-鞘氨醇-1-{琥珀酰[甲氧基(聚乙二醇)2000]}N-棕櫚?；?鞘氨醇-1 - {琥珀酰[甲氧基(聚乙二醇)2000 ]}43.根據(jù)權利要求1-40中的任一項所述的組合物，其中 式(I)的陽離子脂質(zhì)選自 精氨酰基_2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽酸鹽精氨?；?2,3-二氨基丙酸-Ν-月桂基-Ν-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽和ε_精氨酰基-賴氨酸-Ν-月桂基-Ν-肉豆蔻基-酰胺三鹽酸鹽其中所述留醇化合物選自膽留醇和豆留醇;且 其中所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（IV)的聚乙二醇化二酰甘油，其中所述聚乙二醇化二酰 甘油選自 1，2-二硬脂?；?sn-甘油[甲氧基(聚乙二醇)2000 ]1，2-二棕櫚?；?sn-甘油[甲氧基(聚乙二醇)2000 ]44. 根據(jù)權利要求1-43中的任一項、優(yōu)選權利要求41-43中的任一項所述的組合物，其 中 所述陽尚子脂質(zhì)是精氨?；鵢2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺二鹽酸鹽所述留醇化合物是膽留醇，且 所述聚乙二醇化脂質(zhì)是式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，所述式（II)的聚乙二醇化磷 酸乙醇胺是 1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-Ν-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](銨鹽）- 1 Q45. 根據(jù)權利要求1 -44中的任一項、優(yōu)選權利要求41 -44中的任一項和更優(yōu)選權利要求 44所述的組合物，其中，在所述脂質(zhì)組合物中，所述陽離子脂質(zhì)組合物的含量是約65摩爾％ 至約75摩爾％，所述留醇化合物的含量是約24摩爾％至約34摩爾％，且所述聚乙二醇化脂 質(zhì)的含量是約0.5摩爾％至約1.5摩爾％，其中所述脂質(zhì)組合物的陽離子脂質(zhì)的含量、甾醇 化合物的含量和聚乙二醇化脂質(zhì)的含量的總和是100摩爾％。46. 根據(jù)權利要求45所述的組合物，其中，在所述脂質(zhì)組合物中，所述陽離子脂質(zhì)的含 量是約70摩爾％，所述留醇化合物的含量是約29摩爾％，且所述聚乙二醇化脂質(zhì)的含量是 約1摩爾％。47. 上述權利要求中的任一項所述的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物如下： 70摩爾％的0_精氨酰基-2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽29摩爾％的膽留醇，和 1摩爾％的1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](銨 鹽）? u48. 根據(jù)權利要求1-47中的任一項所述的組合物，其中所述組合物包含載體，優(yōu)選地所 述載體是藥學上可接受的載體。49. 根據(jù)權利要求48所述的組合物，其中所述載體選自水、水溶液、優(yōu)選等滲水溶液、鹽 溶液、優(yōu)選等滲鹽溶液、緩沖液、優(yōu)選等滲緩沖液和水混溶性溶劑。50. 根據(jù)權利要求49所述的組合物，其中所述載體是水混溶性溶劑，且其中所述水混溶 性溶劑選自乙醇和叔丁醇。51. 根據(jù)權利要求48-50中的任一項所述的組合物，其中所述載體是蔗糖水溶液，優(yōu)選 270mM蔗糖水溶液。52. 根據(jù)上述權利要求中的任一項所述的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物如下： 70摩爾％的0_精氨?；?2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽29摩爾％的膽留醇，和 1摩爾％的式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇胺，其中所述式（II)的聚乙二醇化磷酸乙醇 胺是 1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](銨鹽）且 其中所述組合物包含270mM蔗糖水溶液。53. 根據(jù)權利要求48-52中的任一項所述的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物在載體中形成 顆粒。54. 根據(jù)權利要求53所述的組合物，其中所述顆粒具有約30nm至約150nm的根據(jù)DLS測 量的Z-平均尺寸。55. 根據(jù)權利要求54所述的組合物，其中所述顆粒具有約50nm至約100nm的根據(jù)DLS測 量的Z-平均尺寸。56. 根據(jù)權利要求53-55中的任一項所述的組合物，其中，通過動態(tài)光散射確定，所述顆 粒的根據(jù)DLS測量的Z-平均尺寸是約60-80nm。57. 根據(jù)權利要求1-56中的任一項、優(yōu)選權利要求48-56中的任一項所述的組合物，其 中在20°C的溫度和在270mM蔗糖溶液中確定，所述組合物具有約+25至約+80mV的ζ電位，優(yōu) 選約+30mV至約+60mV的ζ電位，更優(yōu)選約+46mV的ζ電位。58. 根據(jù)權利要求1-57中的任一項、優(yōu)選權利要求41-57中的任一項和更優(yōu)選權利要求 47和52中的任一項所述的組合物，其中所述組合物還包含化學化合物，其中所述化學化合 物是生物學活性劑或藥學活性劑。59. 根據(jù)權利要求1-57中的任一項、優(yōu)選權利要求41-57中的任一項和更優(yōu)選權利要求 47和52中的任一項所述的組合物，其中所述組合物還包含化學化合物，其中所述化學化合 物能夠通過所述脂質(zhì)組合物被遞送到細胞中和/或遞送至細胞。60. 根據(jù)權利要求59所述的組合物，其中所述細胞是哺乳動物的細胞，優(yōu)選地所述哺乳 動物選自人、小鼠、大鼠、兔、倉鼠、豚鼠、猴、狗、貓、豬、綿羊、山羊、牛和馬。61. 根據(jù)權利要求59-60中的任一項所述的組合物，其中所述細胞是肺內(nèi)皮細胞，優(yōu)選 地所述細胞是人肺內(nèi)皮細胞。62. 根據(jù)權利要求58-61中的任一項所述的組合物，其中所述化學化合物選自寡核苷 酸、多核苷酸、核酸、肽、多肽、蛋白質(zhì)和小分子。63. 根據(jù)權利要求62所述的組合物，其中所述化學化合物是核酸，且其中所述核酸選自 尺熟、0嫩、？嫩和1^熟。64. 根據(jù)權利要求62所述的組合物，其中所述核酸是功能性核酸，優(yōu)選地所述功能性核 酸選自siRNA、微RNA、siNA、介導RNA干擾的核酸、反義核酸、核酶、適配體、spiegelmer和 mRNA〇65. 根據(jù)權利要求62所述的組合物，其中所述多核苷酸選自siRNA、微RNA、siNA、介導 RNA干擾的核酸、反義核酸、核酶、適配體、sp i ege lmer和mRNA。66. 根據(jù)權利要求62所述的組合物，其中所述寡核苷酸選自siRNA、微RNA、siNA、介導 RNA干擾的核酸、反義核酸、核酶、適配體和sp i ege lmer。67. 根據(jù)權利要求62和66中的任一項所述的組合物，其中所述寡核苷酸與所述脂質(zhì)組 合物形成復合物。68. 根據(jù)權利要求1-67中的任一項、優(yōu)選權利要求41-47和53-56中的任一項所述的組 合物，其中所述組合物包含s iRNA分子。69. 根據(jù)權利要求68所述的組合物，其中所述siRNA分子靶向ANG2。70. 根據(jù)權利要求70所述的組合物，其中所述靶向ANG2的siRNA分子包含以下兩個序列 中的一個或兩個： 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 31SEQ ID N0:1)和 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2), 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2'-0-甲基。71. 根據(jù)權利要求70所述的組合物，其中所述靶向ANG 2的siRNA分子包含以下兩個序 列： 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 31SEQ ID N0:1)和 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2), 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2'-0-甲基。72. 根據(jù)權利要求62所述的組合物，其中所述化學化合物是蛋白質(zhì)，且其中所述蛋白質(zhì) 選自抗體、細胞因子和抗促成素。73. 根據(jù)上述權利要求中的任一項所述的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物如下： 70摩爾％的0_精氨酰基-2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽29摩爾％的膽留醇，和 1摩爾％的1，2_二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](銨 鹽）其中所述組合物包含270mM蔗糖水溶液，優(yōu)選地作為載體或所述載體;且 其中所述組合物包含化學化合物，其中所述化學化合物選自siRNA、微RNA、siNA和介導 RNA干擾的化合物，優(yōu)選地所述化學化合物是(a)生物學活性劑或藥學活性劑或所述生物學 活性劑或藥學活性劑和/或(b)能夠被所述脂質(zhì)組合物遞送到細胞中和/或遞送至細胞，更 優(yōu)選地遞送至哺乳動物肺內(nèi)皮細胞。74. 根據(jù)權利要求1-73中的任一項、優(yōu)選權利要求58-73中的任一項和更優(yōu)選權利要求 73所述的組合物，其中所述化學化合物是功能性核酸，且其中帶電荷的脂質(zhì)氮原子與核酸 主鏈磷酸之比(N/P比）是約3-12,優(yōu)選約5-10,且更優(yōu)選約8-9,且最優(yōu)選約8.4。75. 根據(jù)權利要求73和74中的任一項所述的組合物，其中所述組合物包含siRNA分子。76. 根據(jù)權利要求75所述的組合物，其中所述siRNA分子靶向ANG2。77. 根據(jù)權利要求76所述的組合物，其中所述靶向ANG2的siRNA分子包含以下兩個序列 中的一個或兩個： 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 31SEQ ID ΝΟ:1)和 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2), 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2'-0-甲基。78. 根據(jù)權利要求77所述的組合物，其中所述靶向ANG 2的siRNA分子包含以下兩個序 列： 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 31SEQ ID N0:1)和 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2), 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2'-0-甲基。79. 根據(jù)權利要求73-78中的任一項、優(yōu)選權利要求78所述的組合物，其中所述組合物 包含 0 · 28mg/ml 的 siRNA和 2 · 4mg/ml 總脂質(zhì)。80. 根據(jù)上述權利要求中的任一項所述的組合物，其中所述脂質(zhì)組合物如下： 70摩爾％的0_精氨酰基-2，3-二氨基丙酸-N-棕櫚基-N-油烯基-酰胺三鹽酸鹽 29摩爾％的膽留醇，和1摩爾％的1，2_二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](銨 鹽）其中所述組合物包含270mM蔗糖水溶液，優(yōu)選地作為載體或所述載體； 其中所述組合物包含化學化合物，其中所述化學化合物選自siRNA、微RNA和siNA，優(yōu)選 地所述化學化合物是(a)生物學活性劑或藥學活性劑或所述生物學活性劑或藥學活性劑 和/或(b)能夠被所述脂質(zhì)組合物遞送到細胞中和/或遞送至細胞，更優(yōu)選地遞送至哺乳動 物肺內(nèi)皮細胞;且 其中帶電荷的脂質(zhì)氮原子與核酸主鏈磷酸之比(N/P比）是約8-9,優(yōu)選約8.4。81. 根據(jù)權利要求80所述的組合物，其中所述組合物包含siRNA分子。82. 根據(jù)權利要求81所述的組合物，其中所述s i RNA分子靶向ANG2。83. 根據(jù)權利要求82所述的組合物，其中所述靶向ANG2的siRNA分子包含以下兩個序列 中的一個或兩個： 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 31SEQ ID ΝΟ:1)和 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2), 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2'-0-甲基。84. 根據(jù)權利要求83所述的組合物，其中所述靶向ANG 2的siRNA分子包含以下兩個序 列： 5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 31SEQ ID N0:1)和 57gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 37(SEQ ID NO:2), 優(yōu)選地，被指示為大寫字母的核苷酸是2'-0-甲基。85. 根據(jù)權利要求80-84中的任一項、優(yōu)選權利要求84所述的組合物，其中所述組合物 包含0.28mg/ml siRNA和2.4mg/ml總脂質(zhì)。86. 根據(jù)權利要求1-85中的任一項、優(yōu)選權利要求58-85中的任一項和更優(yōu)選權利要求 73-85中的任一項所述的組合物，所述組合物用在治療和/或預防受試者的疾病的方法中。87. 根據(jù)權利要求86所述的組合物，其中所述方法包括給有此需要的受試者施用有效 量的所述組合物，優(yōu)選治療有效量的所述組合物。88. 根據(jù)權利要求86-87中的任一項所述的組合物，其中所述組合物將所述化學化合物 遞送到受試者的細胞中。89. 根據(jù)權利要求88所述的組合物，其中所述細胞是肺內(nèi)皮細胞。90. 根據(jù)權利要求89所述的組合物，其中所述化學化合物在所述肺內(nèi)皮細胞中提供治 療效果，優(yōu)選地所述化學化合物靶向并更優(yōu)選地抑制所述細胞內(nèi)的靶分子，由此實現(xiàn)所述 治療效果。91. 根據(jù)權利要求90所述的組合物，其中所述靶分子參與作為所述疾病的基礎的病理 學機制。92. 根據(jù)權利要求86-91中的任一項所述的組合物，其中所述疾病選自急性肺損傷、急 性呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓。93. 根據(jù)權利要求86-92中的任一項所述的組合物，其中所述受試者選自人、小鼠、大 鼠、兔、倉鼠、豚鼠、猴、狗、貓、豬、綿羊、山羊、牛和馬。94. 根據(jù)權利要求86-93中的任一項所述的組合物，其中借助于靜脈內(nèi)施用或借助于吸 入將所述組合物施用給所述受試者。95. 根據(jù)權利要求1-85中的任一項、優(yōu)選權利要求58-85中的任一項和更優(yōu)選權利要求 73-85中的任一項所述的組合物用于制備用于治療和/或預防疾病的藥物的用途。96. 根據(jù)權利要求95所述的用途，其中所述疾病是這樣的疾病，其中參與作為所述疾病 的基礎的病理學機制的靶分子存在于肺內(nèi)皮細胞中，且抑制所述靶分子提供治療效果。97. 根據(jù)權利要求95-96中的任一項所述的用途，其中所述組合物的化學化合物靶向并 更優(yōu)選地抑制所述細胞內(nèi)的所述靶分子，由此實現(xiàn)所述治療效果。98. 根據(jù)權利要求95-97中的任一項所述的用途，其中所述疾病選自急性肺損傷、急性 呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓。99. 根據(jù)權利要求95-98中的任一項所述的用途，其中所述藥物用于靜脈內(nèi)施用。100. 藥物組合物，其包含根據(jù)權利要求1-85中的任一項所述的組合物、優(yōu)選根據(jù)權利 要求58-85中的任一項所述的組合物且更優(yōu)選根據(jù)權利要求73-85中的任一項所述的組合 物和藥學上可接受的載體。101. 根據(jù)權利要求100所述的藥物組合物，其中根據(jù)權利要求1-85中的任一項所述的 組合物、優(yōu)選根據(jù)權利要求58-850中的任一項所述的組合物且更優(yōu)選根據(jù)權利要求73和85 中的任一項所述的組合物的化學組合物是藥學活性劑或所述藥學活性劑。102. 根據(jù)權利要求100-101中的任一項所述的藥物組合物，其中根據(jù)權利要求1-85中 的任一項所述的組合物、優(yōu)選根據(jù)權利要求57-85中的任一項所述的組合物且更優(yōu)選權利 要求73-85中的任一項所述的組合物的載體是藥學上可接受的載體或所述藥學上可接受的 載體。103. 根據(jù)權利要求100-102中的任一項所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物用于 治療和/或預防疾病，其中所述疾病如在權利要求95-99中的任一項中所定義。104. 根據(jù)權利要求1-85中的任一項、優(yōu)選權利要求58-85中的任一項和更優(yōu)選權利要 求73-85中的任一項所述的組合物作為轉運劑的用途。105. 根據(jù)權利要求104所述的用途，其中所述轉運劑將生物學活性化合物或藥學活性 化合物轉運到細胞中，優(yōu)選轉運到哺乳動物細胞中，且更優(yōu)選轉運到人細胞中。106. 根據(jù)權利要求105所述的用途，其中所述細胞是肺內(nèi)皮細胞，優(yōu)選人肺內(nèi)皮細胞。107. 根據(jù)權利要求104-106中的任一項所述的用途，其中所述化學組合物的化學化合 物是所述生物學活性劑或所述藥學活性劑。108. 試劑盒，其包含根據(jù)權利要求1-85中的任一項、優(yōu)選權利要求58-85中的任一項和 更優(yōu)選權利要求73-85中的任一項所述的組合物和使用說明書。109. 用于將生物學活性化合物或藥學活性化合物轉運到細胞中或穿過細胞膜的方法， 其中所述方法包括以下步驟:使所述細胞或所述細胞膜與根據(jù)權利要求1-85中的任一項、 優(yōu)選權利要求58-85中的任一項和更優(yōu)選權利要求73-85中的任一項所述的組合物以及所 述生物學活性化合物或藥學活性化合物接觸。110. 根據(jù)權利要求109所述的方法，其中所述方法包括以下步驟:在所述細胞中和/或 在所述細胞膜之外檢測所述生物學活性化合物或所述藥學活性化合物。111. 根據(jù)權利要求109-110中的任一項所述的方法，其中所述生物學活性化合物或所 述藥學活性化合物是根據(jù)權利要求58-85中的任一項所述的組合物的化學化合物。112. 用于治療和/或預防疾病的方法，其中所述方法包括給有此需要的受試者施用有 效量的根據(jù)權利要求1-85中的任一項、優(yōu)選權利要求58-85中的任一項和更優(yōu)選權利要求 73-85中的任一項所述的組合物。113. 根據(jù)權利要求112所述的方法，其中所述組合物將所述化學化合物遞送到所述受 試者的細胞中。114. 根據(jù)權利要求113所述的方法，其中所述細胞是肺內(nèi)皮細胞。115. 根據(jù)權利要求114所述的方法，其中所述化學化合物在所述肺內(nèi)皮細胞中提供治 療效果，優(yōu)選地所述化學化合物靶向并更優(yōu)選地抑制所述細胞內(nèi)的靶分子，由此實現(xiàn)所述 治療效果。116. 根據(jù)權利要求115所述的方法，其中所述靶分子參與作為所述疾病的基礎的病理 學機制。117. 根據(jù)權利要求112-116中的任一項所述的方法，其中所述疾病選自急性肺損傷、急 性呼吸窘迫綜合征、肺癌、肺轉移瘤、肺高血壓和肺動脈高壓。118. 根據(jù)權利要求112-117中的任一項所述的方法，其中所述受試者選自人、小鼠、大 鼠、兔、倉鼠、豚鼠、猴、狗、貓、豬、綿羊、山羊、牛和馬，優(yōu)選地所述受試者是人。119. 用于制備藥物的方法，其中所述方法包括將根據(jù)權利要求1-85中的任一項所述的 組合物與藥學活性劑一起配制。120. 根據(jù)權利要求119所述的方法，其中所述藥物用于治療和/或預防如上述權利要求 中的任一項所述的疾病。121. 根據(jù)權利要求119-120中的任一項所述的方法，其中所述藥學活性劑是適合用于 治療肺病的化合物。
【文檔編號】C12N15/11GK105873568SQ201480071830
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2014年12月5日
【發(fā)明人】奧利弗·凱爾, 約爾格·考夫曼, 沃克·費靈, 尤特·舍佩爾
【申請人】賽倫斯治療有限公司