慢性潰瘍的新治療的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了包含LL?37或其藥學上可接受的鹽和一種或多種藥學上可接受的稀釋劑或載體系統(tǒng)的藥物制劑，其用于治療慢性潰瘍創(chuàng)傷(例如難以治愈的腿靜脈性潰瘍或糖尿病性足潰瘍)的方法，該方法包括：(a)局部施用所述制劑至所述潰瘍；然后，(b)施用敷料，其中所述制劑的所述施用在該創(chuàng)傷部位提供了一定劑量的LL?37，該劑量為每平方厘米創(chuàng)傷面積施用低于約80μg的LL?37，和/或治療的每天、每平方厘米創(chuàng)傷面積施用低于約26.7μg的LL?37。
【專利說明】
慢性潰痛的新治療
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及使用創(chuàng)傷護理產(chǎn)品的方法。具體地，本發(fā)明提供了對慢性潰瘍的治療。
【背景技術(shù)】
[0002] 創(chuàng)傷愈合是一個動態(tài)的途徑，其最佳地使組織完整性和功能得以恢復。"慢性"創(chuàng) 傷是指其中該愈合過程被延長且愈合不完全，導致缺乏完整性恢復的病癥。慢性創(chuàng)傷對患 者、醫(yī)護專業(yè)人員和該醫(yī)護體系帶來挑戰(zhàn)，并顯著影響數(shù)以百萬計人的生活質(zhì)量。需要長期 反復的治療，其就生產(chǎn)力損失和醫(yī)護預算而言給社會帶來巨大的負擔。
[0003] 難以治愈(HTH)性潰瘍或慢性潰瘍是一類慢性創(chuàng)傷。腿和腳的HTH潰瘍通常是痛苦 且受歧視的，且對功能性能力造成負面影響。
[0004] 靜脈性腿潰瘍(VLU)是出現(xiàn)在膝蓋和踝之間的小腿上的慢性皮膚和皮下潰瘍。瑞 典醫(yī)療產(chǎn)品局(the Swedish Medical Product Agency)將VLU定義為由靜脈功能不全造成 的膝蓋以下的創(chuàng)傷，其無法在6周標準療法（即傳統(tǒng)創(chuàng)傷護理產(chǎn)品，例如低科技的基于紗布 的敷料、紡織和無紡海綿、固位繃帶（conforming bandage)和非粘附繃帶(non-adherent bandage))期間得到治愈。
[0005] 當腿的靜脈喪失有效栗送靜脈血的能力時會造成慢性靜脈功能不全(CVI)。由于 液體滲漏到細胞間隙導致一系列的問題，該區(qū)域隨之易發(fā)生潰瘍。
[0006] VLU構(gòu)成全部腿潰瘍的大多數(shù)，占下肢創(chuàng)傷的70-90 % (參見Snyder， Clin.Dermatol ·，23,388(2005))。流行病學數(shù)據(jù)表明，每1，000人中有1.5-3.0人（0· 15-0.3%)患有活動性腿潰瘍，在超過80歲的人群中上升至每1，000約20人(2%)患有活動性腿 潰瘍（參見Valencia等人，J. Am. Acad.Dermatol ·，44,401 (2001))。因此，VLU是巨大的經(jīng)濟 負擔。僅在歐洲，以每次發(fā)作€ 7 0 0 0的平均花費計，每年總的花費估計在€ 6 5億（參見 Posnett，等人，J. Wound Care，18，154(2009))。花費不僅限于潰瘍護理的直接花費，還包括 勞動能力喪失和數(shù)日無法工作相關(guān)的間接成本。
[0007] 糖尿病性足潰瘍(DFU)是糖尿病患者的主要并發(fā)癥之一。糖尿病引起的周圍神經(jīng) 病變伴有感覺功能受損和增加的受創(chuàng)風險。循環(huán)受損妨礙自然皮膚愈合的過程，從而導致 HTH創(chuàng)傷。根據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟，糖尿病患者發(fā)展成足部潰瘍的風險大約是25% (參見，例如 Boulton 等人，Lancet，366,1719(2005)和 Singh 等人，JAMA，293,217(2005))。在糖尿病患者 中，糖尿病性足潰瘍每年的發(fā)病率和患病率分別是2-6%和4-10% (也參見Ramsey等人， Diabetes Care，22，382(1999))。此外，10%的糖尿病患者具有發(fā)展成足潰瘍的促成因素， 例如周圍神經(jīng)病變和血管并發(fā)癥。DFU易發(fā)生感染，造成顯著的死亡率，且其與這一患者群 體中25_90%的截肢有關(guān)（也參見1^811&^〇11-161111￥&11等人，0丨&匕61:〇1〇8丨&，44,2077 (2001))〇
[0008] DFU也造成顯著的經(jīng)濟負擔。在歐洲，12個月內(nèi)無法治愈的DFU平均每例患者花費 € 20，000(Prompers等人，Diabetologia，51，1826(2008))。
[0009]沒有任何證據(jù)證實，標準的敷料材料對治療上述HTH潰瘍有任何顯著益處，即使是 當其與其他常規(guī)措施(清洗、清創(chuàng)、包扎等)一起使用時。在歐洲，Regranex/K (貝卡普勒明） 凝膠被指定用于治療下肢糖尿病性神經(jīng)潰瘍，其擴散至皮下組織或更遠處并具有足夠的血 液供應。其用作良好的潰瘍護理操作(包括初始大幅度的清創(chuàng)、壓力緩解和感染控制）的輔 助而不是替代。盡管Regranex是唯一一個批準用于治療這種HTH潰瘍的藥物產(chǎn)品，但是它對 VLU沒有任何經(jīng)證明的效果。
[0010]因此，迫切地需要對慢性創(chuàng)傷(且具體地是HTH潰瘍，例如VLU和DFU)改進的治療。 [0011] LL-37衍生自18-kDa人cathelicidin抗微生物蛋白18(hCAP18)。它是組織修復和 預防感染的重要介質(zhì)。hCAP18和LL-37存在于各種體液中，包括創(chuàng)傷液（參見，例如， Murakami等人，J.Dent.Res.，81，845(2002)，Schaller_Bals等人，Am. J.Respir .Crit.Care Med.，165,992(2002)和Sorensen等人，J.Biol.Chem.，278,28540(2003))。雖然在急性創(chuàng) 傷中，hCAP18/LL-37的轉(zhuǎn)錄在幾小時內(nèi)被上調(diào)，且LL-37通過基底表皮角化細胞表達于該創(chuàng) 傷邊緣，但是慢性創(chuàng)傷在該創(chuàng)傷邊緣不具有LL-37免疫反應性(參見，例如，Dressel等人， Exp .Dermatol ·，19，628 (2010)和 Rivas-Santiago 等人，J.Derm. Sci ·，65,19(2012))。
[0012]合成性LL-37的體內(nèi)研究已顯示，皮下注射刺激血管發(fā)生（Koczul la等人， J. Cl in. Invest .，Ill，1665 (2003 ))，且在急性創(chuàng)傷處反復局部給藥吸引炎癥細胞至其周圍 組織。在人急性創(chuàng)傷的離體模型中，針對L L - 3 7的抗體抑制愈合（H e i 1 b 〇 r η等人， J. Invest .Dermatol ·，120,379(2003);也參見國際專利申請W0 2004/067025)，而用皮質(zhì)類 固醇處理來損害正常愈合的小鼠中，用LL-37的局部治療刺激創(chuàng)傷愈合（Ramos等人， PeptideS，32,1469(2011))。在一個研究中，將LL-37給藥于具有創(chuàng)傷愈合受損的糖尿病小 鼠的急性傷口處，其顯示出有益的效果（Carretero等人，J. Invest.Dermatol .，128,223 (2008))，而其他研究未能顯示出療效(Steinstraesser等人，PLoS ONE，7，e39373(2012))。 EP 1 358 888公開了LL-37是血管發(fā)生的誘導劑。
[0013] 國際專利申請W0 2009/001087公開了創(chuàng)傷護理產(chǎn)品，其中LL-37被浸漬于包含創(chuàng) 傷護理材料的固體基質(zhì)(敷料）中。在那個文件中沒有任何建議認為必須在每單位創(chuàng)傷面積 施用一定劑量的于制劑中的LL-37來有效治療該創(chuàng)傷。當然也沒有任何建議認為可能存在 該劑量的上限，更不必說該限制可能是什么了。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 發(fā)明人現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，在臨床環(huán)境中，可施用一定劑量的LL-37以有效治療HTH/慢性腿 潰瘍。具體地，如下所述，發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，每平方厘米的潰瘍/創(chuàng)傷面積施用至少約 80yg劑量的LL-37不會有效地治療慢性潰瘍，包括VLU。
[0015] 因此根據(jù)本發(fā)明，提供了用于局部治療慢性潰瘍，例如VLU或DFU的方法，該方法包 括：
[0016] (a)向所述潰瘍局部施用包含LL-37或其藥學上可接受的鹽和一種或多種藥學上 可接受的稀釋劑或載體系統(tǒng)的藥物制劑;然后
[0017] (b)施用敷料，
[0018] 其中所述制劑的所述施用在所述創(chuàng)傷部位提供的LL-37的劑量為每平方厘米創(chuàng)傷 面積低于約80yg的LL-37,從而治療所述潰瘍。
[0019] 還提供了以所述劑量用于所述方法以治療慢性潰瘍的所述藥物制劑，以及LL-37 在制備以所述劑量用于所述方法來治療慢性潰瘍的藥物制劑中的用途。
[0020] 人LL-37的氨基酸序列如下SEQ ID N0:1所示：
[0021] LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES[SEQ ID N0:1]
[0022] LL-37可以藥學上可接受的堿加成鹽的形式使用，包括堿金屬陽離子（例如鉀和 鈉)和堿土金屬陽離子(例如鈣和鎂）的那些鹽、銨鹽或水溶性胺加成鹽例如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺），和低級燒醇銨(alkanolammonium)和藥學上可接受的有機胺的其他堿鹽，等等。 LL-37可以乙酸鹽的形式使用。
[0023 ]本發(fā)明的方法/用途尤其用于治療慢性潰瘍，包括HTH潰瘍、靜脈性潰瘍、糖尿病性 潰瘍和壓力性潰瘍?？杀痪唧w提及的潰瘍包括DFU和，尤其是，腿潰瘍，例如VLU。
[0024]如下文所述，在本文例舉的具體制劑中，當每三天施用一次至該潰瘍時，每毫升所 采用的具體媒介物〇. 5mg LL-37的濃度經(jīng)計算提供每平方厘米創(chuàng)傷面積約13yg LL-37的有 效劑量。1 · 6mg/mL濃度提供40yg/cm2的有效劑量。3 · 2mg/mL的濃度產(chǎn)生80yg/cm2，但這不產(chǎn) 生任何臨床益處。
[0025]因此，每平方厘米創(chuàng)傷面積所施用的LL-37來治療潰瘍的劑量可低于約40yg至約 80yg LL-37的范圍內(nèi)的值(換句話說，低于一個數(shù)值，該數(shù)值介于約40yg至約80yg LL-37)。 施用于所述潰瘍的LL-37的劑量合適的上限可為每平方厘米創(chuàng)傷面積施用約75yg的LL-37， 例如約 70yg/cm2，例如約 65yg/cm2，或 60yg/cm2，包括約 55yg/cm2，例如約50yg/cm2 或約 45yg/ cm2。每平方厘米創(chuàng)傷面積所施用的LL-37的劑量的合適的下限可為約lyg，例如約3yg，包括 約5yg，例如約 10yg/cm2，例如約 15yg/cm2，或 20yg/cm2，包括約25yg/cm2，例如約 30yg/cm2 或 約35yg/cm2〇
[0026] 本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，慢性潰瘍，例如VLU和DFU，當每三天施用一次時，可用每平方厘 米創(chuàng)傷面積施用低于約80yg的LL-37的劑量得到有效治療，這相當于治療的每天，每平方厘 米創(chuàng)傷面積施用約26.7yg的LL-37。
[0027]對于"治療的每天提供每平方厘米創(chuàng)傷面積低于約26.7yg的劑量的LL-37的藥物 制劑"，其包括或指的是：
[0028] (i)制劑是天然的；和/或
[0029] (ii)施用該制劑的頻率是這樣的，
[0030]該頻率使得LL-37在該創(chuàng)傷部位可用的治療所述潰瘍的量為在治療的每天，每平 方厘米創(chuàng)傷面積不超過約26.7yg。
[0031] 為了闡明，在下文示例性的具體制劑中，當每三天施用一次時，所采用的濃度為每 毫升所用具體媒介物〇.5mg LL-37(即下文描述的具體藥物制劑），提供每平方厘米創(chuàng)傷面 積約13yg的LL-37的有效劑量，相當于治療的每天，每平方厘米創(chuàng)傷面積約4.3yg的LL-37。 類似地，1.6mg/mL的濃度提供每天13.3yg/cm 2的有效劑量。然而，3.2mg/mL的濃度提供每天 26.7yg/cm2的有效劑量，但這不產(chǎn)生任何臨床益處。
[0032] 在這個方面，可以預料的是，如果更頻繁地施用(例如每天），則每毫升所采用的相 同具體媒介物低于約〇.5mg LL-37的濃度可在所述創(chuàng)傷部位提供更多的LL-37來治療所述 潰瘍，從而提供臨床益處。這同樣適用于每毫升相同具體媒介物約3.2mg(mg/mL)或更高濃 度，其以低于每三天一次的頻率施用。
[0033] 同樣地，如果采用不同制劑(例如更加延長釋放的制劑和/或緩釋制劑），則可在任 意時間來治療所述潰瘍的LL-37的量將低于在下文具體舉例說明的制劑中的量。這將導致 在任一給定時間，可在所述創(chuàng)傷部位治療所述潰瘍的LL-37更少。因此，最初在該制劑中可 使用更高濃度的LL-37以確保在任一給定時間，在所述創(chuàng)傷部位有類似量的LL-37來治療所 述潰瘍。也可以更低的頻率施用該制劑以獲得相同效果。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明的其他方面，提供了一種治療慢性潰瘍的方法，該方法包括：
[0035] (a)向所述潰瘍局部施用包含LL-37和一種或多種藥學上可接受的稀釋劑或載體 系統(tǒng)的藥物制劑;然后
[0036] (b)施用敷料，
[0037] 其中將所述制劑的所述施用在該創(chuàng)傷部位提供了一定劑量的LL-37,該劑量為治 療的每天，每平方厘米創(chuàng)傷面積所施用的LL-37低于約26.7yg(例如該劑量低于約13.3yg至 約26.7yg之間的一個值），從而治療所述潰瘍。
[0038] 在本發(fā)明方法中可采用的藥物制劑可配制用以直接(如本文所定義）局部施用至 潰瘍。這種制劑的非限制性實例是液體或半固體制劑，并包括任何溶液、混懸液、乳液、乳 膏、凝膠或洗劑，前提是其在室溫(例如約20°C至約25°C)和大氣壓(例如約1個大氣壓)下足 夠粘稠，從而在其施用后，在所述創(chuàng)傷部位能夠物理上保持粘附狀態(tài)(coherent state)。
[0039] 所述液體或半固體制劑應為粘稠的，并因此不是完全自由流動的，例如在重力的 影響下、在室溫和在大氣壓下不是完全自由流動的。但是，在室溫和大氣壓下也不應非常粘 稠以至于基本上為固態(tài)，并因此無法使用適當?shù)尼t(yī)療器械，用標準和/或合理的手動壓力進 行操作，以例如將其敷于傷口處。也可通過使用適當?shù)膰婌F（例如栗驅(qū)動(pump-action)或 氣霧劑)裝置噴灑傷口處來施用所述制劑，從而向每單位創(chuàng)傷面積遞送確定的劑量(參見， 例如，國際專利申請W0 2011/056116)。
[0040] 因此，該制劑合適的粘度將取決于所采用的賦形劑，但是可在約1至約lOOPa · s的 范圍內(nèi)，例如約50Pa · s、例如約25Pa · s，包括約15或約10Pa · s。前述粘度值在室溫(如上 文所定義)和大氣壓(如上文所定義)下是動態(tài)粘度，其通過標準粘度計或流變儀進行測量。
[0041] 可用于施用LL-37至潰瘍的藥物制劑包括水溶液。水溶液是指具有生理學上或藥 學上可接受的性質(zhì)（關(guān)于PH、離子強度、等滲性等）的溶液。例如，可采用包含水和其他生物 相容的溶劑的等滲溶液、水溶液(例如鹽水和葡萄糖溶液)和水凝膠形成材料。所述水溶液 可用例如乙酸鹽緩沖液進行緩沖。
[0042] 所述藥物制劑也可包含藥學上可接受的賦形劑，例如預防微生物生長的防腐劑、 抗氧化劑、張力調(diào)節(jié)劑、著色劑等。在含水混懸液中，所述組合物可與助懸劑和穩(wěn)定劑組合。 [0043]在本發(fā)明的一個方面，將LL-37溶于水性溶劑(例如水或乙酸鹽緩沖液）中并將適 當?shù)脑龀韯┘尤胍援a(chǎn)生粘稠、可涂抹的含水軟凝膠、乳膏或洗劑制劑。
[0044]當在水溶液中配制時，LL-37也可與增稠劑一起配制以獲得有如上文所述足夠粘 度的乳膏、凝膠或洗劑。合適的試劑包括水凝膠形成材料，其包括合成性聚合物，例如聚乙 烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚乙二醇、泊洛沙姆嵌段共聚物等;半合成聚合物，例如 纖維素醚，包括羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維 素和乙基羥乙基纖維素等;天然樹膠，例如阿拉伯樹膠、卡拉膠、殼聚糖、果膠、淀粉、黃原膠 等。可提及的這種材料包括藥用級聚乙烯醇(例如具有約70至約99%的水解程度(例如約85 至約89%)，和約15,000至約130,000的分子量）。
[0045]使用生物和/或粘膜粘著性制劑是有利的。
[0046]但是關(guān)鍵的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員應理解，一旦他或她獲悉了本文提出的關(guān)于每單 位面積創(chuàng)傷應施用LL-37的最大量(包括治療的每天）的相關(guān)信息，則他或她將能夠使用常 規(guī)技術(shù)來確定所采用的賦形劑（即稀釋劑、載體、增稠劑和其他成分）、在特定制劑中所用的 使每單位創(chuàng)傷面積達到合適的劑量(每天)的LL-37的正確濃度。
[0047]例如，該制劑可在生物測定中測試LL-37活性并與磷酸緩沖鹽水(PBS)中的LL-37 比較。該生物測定可為抗微生物測定或基于真核細胞系響應的測定。在所研究的制劑中LL-37 的濃度可用于計算給藥因子 ，在該濃度時的生物學效應相當于特定濃度的 LL-37 的 PBS 溶 液(例如1 〇μg/ml)的效應。例如，如果為了與在PBS中約1 Oμg/ml的LL-37實現(xiàn)相同的生物學 效應而需要在所研究制劑中LL-37的濃度為約20μg/ml，則可得出計量因子約2,其用于將該 制劑中的LL-37的濃度翻倍并因此用于每創(chuàng)傷面積遞送所需劑量的LL-37。
[0048]如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，上述一般常規(guī)技術(shù)不適于以下情況：即所采用的一 種或多種賦形劑與LL-37相互作用，從而消耗LL-37、基本阻礙LL-37從所述制劑中釋放至所 述創(chuàng)傷部位和/或產(chǎn)生協(xié)同作用，從而導致治療的每天每單位創(chuàng)傷面積的LL-37劑量在上述 范圍之外。另一方面，如果賦形劑使LL-37從所述制劑中持續(xù)釋放，則當如上所述計算所采 用的濃度時應將這點考慮進去。
[0049] 在本發(fā)明的方法/用途中，首先將本文所述的包含LL-37的藥物制劑按上文所述直 接（即無需中間步驟)并局部施用至所述潰瘍。隨后并與施用所述制劑分開的是，單獨施用 敷料。所述隨后且單獨施用所述敷料可能，例如，在所述包含LL-37的藥物制劑的施用后的 小于約5分鐘，例如約10分鐘（以使LL-37結(jié)合至所述創(chuàng)傷組織)發(fā)生，但也可在不超過約20， 例如約30分鐘后發(fā)生。
[0050] 可使用的敷料材料可為適用于創(chuàng)傷護理和/或能夠幫助(例如，加速)所述創(chuàng)傷愈 合過程和/或預防傷口感染的惰性(即基本上無毒的)材料。例如，所述敷料可能能夠促進上 皮再生和/或受傷上皮和/或受傷間質(zhì)的愈合。在一個實施方案中，所述創(chuàng)傷護理產(chǎn)品能夠 促進上皮和/或間質(zhì)細胞的增生。
[0051 ]所述敷料也可吸收創(chuàng)傷滲出液。
[0052]因此，所述敷料可包括選自以下的材料：海藻酸鹽、片狀水凝膠（sheet hydroge 1)、水化纖維、泡沫及它們的混合物。
[0053]能夠吸收創(chuàng)傷滲出液的其他敷料包括水膠體、膠原基材料、透明質(zhì)酸基材料、聚糖 酐(dextrinomer)、聚糖酐/卡地姆和氧化再生纖維素。
[0054]敷料通常以固體、干燥的無紡片(或'毛氈'）、冷凍干燥片狀物、帶狀物或繩狀物的 形式提供，并尤其適用于治療高滲出傷口。
[0055] 示例性的市售可得的基于海藻酸鹽的材料包括油?(Sammons Preston， USA)和 (ConvaTec，UK) 〇
[0056] 所述敷料可包含片狀水凝膠或由片狀水凝膠組成。這種創(chuàng)傷護理材料尤其適用于 治療非滲出傷口。合適的片狀水凝膠可包含一種或多種形成水凝膠的聚合物，該聚合物選 自：合成性聚合物，例如聚氨酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚乙二醇、泊洛沙姆 嵌段共聚物等;半合成聚合物，例如纖維素醚，包括羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維 素、甲基羥丙基纖維素和乙基羥乙基纖維素等；天然樹膠，例如阿拉伯樹膠、卡拉膠、殼聚 糖、果膠、淀粉、黃原膠等;和海藻酸鹽。
[0057] 市售可得的示例性的片狀水凝膠包括五&對￡?容￡?:1?(Southwest Technologies Inc.，USA)和S/iWiZSW'/?⑧G(Sammons Preston，USA)〇
[0058] 作為其他替代方案，所述敷料可包含水化纖維或由水化纖維組成。包含這種敷料 的創(chuàng)傷護理產(chǎn)品通常以干燥的無紡片狀物、冷凍干燥的片狀物或帶狀物或繩狀物的形式提 供，且尤其適用于有輕度到重度滲出的傷口或有干燥和潮濕區(qū)域的傷口。
[0059] 合適的水化纖維可包含羧甲基纖維素或由羧甲基纖維素組成，且包括,4<r/wi?ce/? (均來自 ConvaTec，UK)和5ν)/ναΙ?·?:6?'Ν(Activa Healthcare，UK) 〇
[0060] 作為其他替代方案，所述敷料可包含聚氨酯泡沫或由聚氨酯泡沫組成，例如 產(chǎn)品系列（S m i t h & N e p h e w，U K )、Μ細_.，（ Mdlnlycke，S w e d e η )和 Tegadcnn? (3M, UK) 〇
[0061] 在使用前，所述藥物制劑和所述敷料應為無菌的并包裝在微生物不透過的容器 中。無菌可通過使用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)實現(xiàn)，例如無菌生產(chǎn)和/或通過照射進行最終（即生 產(chǎn)后)滅菌。
[0062]如上所述，所述敷料材料應為惰性的，并因此不以任何方式與LL-37相互作用，以 使其例如化學或物理性降解。
[0063]因此敷料也可以或選擇性地包含合成性聚合物、淀粉和/或多糖。例如，所述敷料 可包含水性聚合物基質(zhì)、纖維素衍生物、丙烯酸酯共聚物、膠、多糖和/或聚乳酸聚合物。這 種材料可為水溶性的和/或可為穿孔的。
[0064]在本發(fā)明的方法/用途中，將包含LL-37的所述制劑以上文所述正確的劑量直接施 用至所述潰瘍且隨后施用所述敷料以覆蓋所治療的創(chuàng)傷區(qū)域。
[0065] 任選地，可將第二常規(guī)敷料施于第一敷料的頂部。此外，在一些情況下，可將可透 過的防粘附敷料施用于所述潰瘍和所述敷料之間的某處。
[0066] 施用所述敷料后，可有利地應用適當?shù)膲浩妊b置，包括韌性、柔軟和能吸收的墊 子，例如 C:V//(wa?（Act i va，UK)或 ( Smi th&Nephew，UK)、壓迫繃帶，例如 (Smith&Nephew)，和/或醫(yī)療抹，例如Smith&Nephew)。
[0067] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在實施本發(fā)明方法/用途之前，可能需要除去死亡、受損 或感染的組織(清創(chuàng)）、使用適當?shù)尼t(yī)學療法(消毒劑)來處理任何感染組織、使用適當?shù)那?潔劑(例如水)清潔所述創(chuàng)傷區(qū)域，并使用例如紗布把它弄干。也可預先進行刮除術(shù)。
[0068] 此外，且有利地，所述制劑和/或敷料也可能夠預防、消除、降低或以其他方式減少 微生物在創(chuàng)傷環(huán)境中的生長。因此，在本發(fā)明方法/用途中所采用的制劑還可包含抗微生物 物質(zhì)，例如選自以下的多肽：防御素、短桿菌肽S、爪蟾抗菌肽、殺菌肽、富組蛋白、 hyphanc in、肉桂霉素 、burf or in 1、paras ini、魚精蛋白及其片段、變體和它們的融合體，它 們至少部分保留母蛋白的抗微生物活性；以及銀、磺胺啼啶銀、polyhexinide、碘或甲硝挫。
[0069] 將理解，在本發(fā)明的方法/用途中，在所述創(chuàng)傷處的所述制劑、敷料和/或壓迫裝置 應以有規(guī)律的間隔進行替換，以幫助該愈合過程并預防感染。
[0070] 每當本文中使用"約"這個字，尤其是與量有關(guān)時，包括LL-37的劑量和在制劑中的 濃度、時限、粘度、劑量因子、水解度、分子量等，將理解，這些變量是近似值并因此可在本文 指定數(shù)值的± 10%，例如±5%并優(yōu)選在±2% (例如± 1 %)的范圍內(nèi)進行變化。
[0071 ]本發(fā)明的方法/用途提供了創(chuàng)傷護理裝置，其制造起來簡單并且價廉，且其能夠有 效治療慢性創(chuàng)傷，包括VLU、DFU等。
[0072]本發(fā)明的方法/用途還具有以下優(yōu)勢：它們采用的是已確立的藥品加工方法并采 用被批準(或類似監(jiān)管現(xiàn)狀)的用于食品或藥品、醫(yī)療器械產(chǎn)品的材料。
[0073]本發(fā)明的方法/用途也可具有以下優(yōu)勢：它們可能比本領(lǐng)域已知的類似的方法無 論在治療慢性創(chuàng)傷，例如VLU、DFU，或者在其他方面更加有效、產(chǎn)生更少的副作用、具有更好 的患者接受性、具有更好的藥代動力學分布、和/或具有其他有用的藥理學、物理或化學性 質(zhì)。
[0074]本發(fā)明通過以下實施例進行說明，參考所附圖1，其顯示的是針對施用包含不同濃 度LL-37的制劑至HTH VLU得到的創(chuàng)傷愈合率的"分割線段(broken stick)"分析得到的評 估，其中實線表示的是安慰劑組，長虛線表示的是3.2mg/mL組，短虛線表示的是1.6mg/mL 組，和點虛線表示的是0.5mg/mL組。 實施例
[0075] LL-37在HTH VLU中的雙盲的、隨機的、安慰劑對照的、安全性和試驗性-劑量響應 研究
[0076] 雙盲、隨機、安慰劑對照、I/II期安全性和試驗性-劑量響應研究在人受試者中進 行。第一位受試者在2012年8月加入且最后一位受試者在2013年4月完成。
[0077] 該研究根據(jù)針對藥物臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范(GCP)的國際協(xié)調(diào)會議（ICH)協(xié)調(diào)的 三方指南進行設(shè)計、實施和報告，其符合赫爾辛基宣言中規(guī)定的地方性法規(guī)和倫理原則并 在瑞典的三個研究中心進行。
[0078] 選擇標準
[0079] 研究受試者既包括至少18歲的男性受試者，也包括停經(jīng)后或臨床上不育的女性， 其患有VLU或并發(fā)的主要靜脈成分的靜脈-動脈潰瘍。
[0080] 排除標準包括:受試者在目標潰瘍內(nèi)具有除VLU之外的流行病，以及惡性?。ú话?括基底細胞癌），除非已消退了 5年或以上。
[0081] 在獲得必要的行政(瑞典醫(yī)療產(chǎn)品局(MPA)和倫理(地區(qū)性倫理委員會)批準并簽 署知情同意書后，共有56名受試者參加一個篩查訪問，然后進行3周的開放標簽的磨合期。 [0082]最初將面積大于30cm 2以及小于2cm2的目標傷口排除。但是，為了增加入選率 (inclusion rate)并降低總的研究時間，在隨機選擇21名受試者后，將標準修改為將大于 40cm2以及小于lcm 2的面積排除。如果一名合格的受試者有一個以上滿足該入選標準的創(chuàng)傷 時，則研究人員將具有最合適尺寸、形狀和位置的創(chuàng)傷確定為目標傷口。在本研究中，僅對 每位受試者的一處創(chuàng)傷進行治療。
[0083]在為期3周的磨合期中，受試者以每三天一次（±1)且不超過每周兩次接受6次(總 共)安慰劑制劑的施用(見下文)結(jié)合標準壓迫包扎(如Swedish MPA所定義），其包括彈性包 扎和適當?shù)姆罅弦钥刂苿?chuàng)傷滲出物。
[0084]如果相比于磨合期起始時，所述潰瘍面積每周減小超過7%至13% (取決于尺寸）， 則所述潰瘍出于本研究的目的不被定義為HTH。在這樣的情況下，將受試者從所述研究中排 除且其結(jié)果被記錄為篩選失敗。
[0085] 磨合期之后，34位合格受試者進行基線評估，然后隨機接受活性療法(三種治療強 度中的一種)或安慰劑。
[0086] 制劑和治療
[0087]在上述磨合期之后，開始4周的治療期，包括8次訪問、最后一次治療后的第3天（土 1天)進行治療終點訪問以及再經(jīng)4周（± 1至7天)后的隨訪。
[0088]將受試者隨機分成4個治療組，以接受LL_37(三種備選強度中的一種)或安慰劑。 [0089]在治療前的創(chuàng)面準備包括非活組織的清創(chuàng)、臨床感染的治療和最合適敷料的選擇 (見下文）。將所述創(chuàng)傷使用自來水清洗、用紗布墊輕輕干燥并且，如果需要的話，在施用實 驗品或安慰劑之前實施刮除術(shù)。
[0090] 將濃度為每毫升2.5mg、8mg或16mg LL-37的0.7mL LL-37的無菌濃縮物的水溶液 置于密封玻璃小瓶中(APL，IJmeL Sweden)，將其在實驗前儲存于2至8°C。在即將施用于傷 口前，將其用5mL粘稠稀釋劑溶液稀釋，所述粘稠稀釋劑溶液包含13. l%(w/w)聚乙烯醇于 乙酸鹽緩沖的鹽水(APL AB)中，從而提供分別為0 · 5mg/mL、1 · 6mg/mL或3 · 2mg/mL的最終濃 度。安慰劑包含完全相同的溶液，但不存在LL-37。
[0091] 用lmL規(guī)格的注射器將活性治療劑或安慰劑的稀粘稠液體溶液以25yL/cm2的量局 部施于所述經(jīng)清潔且干燥的潰瘍中心，并使用先前用于混合所述研究藥物的注射器柱塞的 圓頭將所述溶液均勻分布于整個潰瘍區(qū)域。
[0092] 在等待5分鐘后(防止LL-37或安慰劑被所述敷料材料所吸收），在上述步驟后進行 敷料和壓迫繃帶的施用。
[0093] 對于中到重度滲出性創(chuàng)傷，使用由聚氨酯泡沫，例如·. d?和 Tegaifeww?制成的高吸收性敷料?；蛘?，使用有吸收力的水化纖維敷料J f ?αα/⑧。對于 輕到中度滲出性創(chuàng)傷，使用非粘附型敷料，其具有或不具有粘著邊緣。所用敷料是 或組合型聚氨酯/水化纖維敷料對于干性創(chuàng)傷，使用水 化纖維敷料。
[0094] 在與這些其他敷料組合時，紗布墊在施壓過程中用于卸除(offload)敏感部分。使 用100 %粘性、可延展的、柔軟且吸收性的墊，包括CW/om??或 是本研究中最常使用的壓迫繃帶。將兩條繃帶(8和10cm寬）以大約50%從腳趾底開始以螺 旋方式延展到膝蓋以下，系在一起?；蛘?，還可以使用Z/pZw?醫(yī)療襪加上或類 似的自黏附繃帶或Prof ore 與一些上述創(chuàng)傷敷料的組合。也可使用Dauer型長拉伸繃 帶。由于這類繃帶的高靜息壓力，因此在夜間或當受試者長時間處于靜止位置時將其暫時 除去。
[0095]其他治療包括用于治療皮膚問題的特定的局部乳膏。將鋅糊劑或CV?v//〇/7_?用于 整個潰瘍皮膚以保護該創(chuàng)傷邊緣附近的皮膚免受浸漬。氫化可的松乳膏或軟膏（I類局部類 固醇（topical steroid group I)或氫化可的松-咪唑乳膏）用于潰瘍周圍濕疹。如果所述 皮膚是干燥和鱗狀的，允許使用Canoderm或Propyderm乳膏。
[0096]在為期4周的治療周期內(nèi)，每三天（±1)重復一次上述步驟，不超過一周兩次，總共 8次的施用。
[0097]治療后，對受試者進行持續(xù)4周（± 1-7天)的隨訪。
[0098] 該研究使用直觀模擬標度尺(visual analogue scale) (VAS)評估創(chuàng)傷愈合的速 度、敷藥時和之前24小時的疼痛。記錄所有完全愈合的發(fā)生，但基于該實驗的短持續(xù)時間和 小樣本量預期不會得到統(tǒng)計學顯著結(jié)果。創(chuàng)傷大小的測量在研究期間反復進行以表明創(chuàng)傷 愈合的程度。每隔一次訪問，使用Visitrak?測面積裝置測量創(chuàng)傷面積，記錄該創(chuàng)傷部位的 疼痛和創(chuàng)傷特性(氣味、腐痂、肉芽形成和壞死組織）。使用該創(chuàng)傷的照片對所述創(chuàng)傷情況進 行說明。
[0099]不良事件(AE)和局部耐受性在所有訪問中都進行評估。受試者被建議報告所有不 良事件并提供了有電話號碼的緊急卡以在任何顯著不良事件的情況下?lián)艽?。收集血液用?實驗室安全評估并研究抗LL-37的抗體的進展。評估實驗值和生命體征的變化，并分析抗 LL-37的自身抗體的形成。
[0100]安全性終點包括：
[0101] ?發(fā)生了在創(chuàng)傷及其附近皮膚處嚴重的局部反應，例如炎癥的臨床癥狀(水腫、發(fā) 紅、氣味和升高的溫度)或皮膚刺激的臨床癥狀(脫皮、發(fā)紅、丘疹、水皰、膿皰）；任意局部反 應均以分級量表(0-3)進行記錄；
[0102] ?發(fā)生了相比于基線創(chuàng)傷面積增加超過30% (隨機訪問）；
[0103] ?實驗室值和生命體征相對基線的變化；
[0104] ?不良事件的總發(fā)生率。
[0105]效力終點包括：
[0106] ?在該研究期間的創(chuàng)傷愈合速率；
[0107] ?在隨機選取中，多個潰瘍的面積比基線降低超過30% ;和
[0108] ?使用VAS評分(0-10)的局部疼痛的變化
[0109] ?與基線相比，創(chuàng)傷特性的變化:（腐痂、滲出物、肉芽組織、壞死的級別）（0-3級）。
[0110] 分析
[0111] 使用SAS%)軟件(9 · 2或更高版本;SAS Institute，Cary，NC，US)進行統(tǒng)計學分析。
[0112] 對各受試者的創(chuàng)傷面積隨時間進行建模，以評估治療期間的治愈速率并研究治愈 速率和劑量之間的關(guān)系。
[0113] 治愈速率常數(shù)的評估值（即創(chuàng)傷面積或數(shù)學轉(zhuǎn)換的創(chuàng)傷面積的改變/天)用四個治 療組的每個組的95%置信區(qū)間（CI)推導出。使指數(shù)式衰變模型與數(shù)據(jù)擬合，其中兩個參數(shù) 代表初始創(chuàng)傷面積和愈合速率。該模型的形式為：
[0114] Y = axe-et
[0115] 其中a代表初始創(chuàng)傷面積（即在隨機訪問時），β代表尺寸的降低，表示為治愈速率/ 天，Y代表創(chuàng)傷面積和t代表距離隨機訪問時的時間(天）。
[0116] 進行結(jié)合了所有磨合數(shù)據(jù)的額外分析以評估施用所研究的治療劑如何影響所述 愈合過程。這個是用"分割線段"法進行評估的，在合適的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化后（例如對數(shù)，平方根）， 通過隨時間的線性響應近似得出隨機前和隨機后的數(shù)據(jù)。
[0117] 如果合適的話，疼痛評分使用重復測量分析進行分析，以評估經(jīng)一段時間內(nèi)治療 間的總體差異。該模型包括針對治療和時間以及這二者間相互作用的術(shù)語。
[0118] 任意不良事件的發(fā)生率是用在各治療組中出現(xiàn)至少一種不良事件的受試者的百 分數(shù)進行評估的，其具有相關(guān)的95%的Cl XI是使用Altman等人，Statistics with Confidence，BMJ Publication Group(2000)詳述的方法計算的，其適合小樣本或低發(fā)生 率。如果合適的話，研究不良事件的發(fā)生率和劑量之間的關(guān)系。3級(嚴重）局部反應的總體 發(fā)生出現(xiàn)在用LL-37治療的受試者中，其具有95%CI。實驗室數(shù)據(jù)顯示在治療后數(shù)值v.s.基 線值的圖中，其具有參考范圍。
[0119] 結(jié)果
[0120]總共31位受試者接受全程8次治療施用。在剩余的三位受試者中，兩位(在0.5mg/ mL治療組中）接受7次施用和一位受試者(在安慰劑組)接受三次施用。
[0121] 擬合于所述創(chuàng)傷面積的所述指數(shù)式衰變提供了與數(shù)據(jù)的良好擬合。
[0122] 0.5mg/mL劑量的LL-37的治愈速率常數(shù)（0.039)與安慰劑組的治愈速率常數(shù) (0.007，p = 0.003)明顯不同，所述0.5mg/mL劑量的LL-37的治愈速率常數(shù)代表了更快地降 低創(chuàng)傷面積（即改善的愈合）。使用非線性混合的效應模型以及通過以下方式計算參數(shù)間的 差異的顯著性:評估差異并除以其標準誤差以及比較針對t-分布的結(jié)果。
[0123] 1.6mg/mL劑量的LL-37的評估的治愈速率常數(shù)為0.019，這相比于安慰劑組也表示 更快的創(chuàng)傷面積減小，但是其在5%水平上不是統(tǒng)計學顯著的(p = 0.09)。在最高劑量的LL-37(治愈速率常數(shù)0.004)組和所述安慰劑組之間不存在統(tǒng)計學顯著差異。所述低和中劑量 組在統(tǒng)計學上是無法區(qū)分的。針對各治療劑所評估的治愈速率常數(shù)如下表1所示，其測量創(chuàng) 傷面積的平均降低。
[0124] 藍
[0125] 創(chuàng)傷愈合速率的評估
[0126]
[0128] 1在95%置信下限為負時，這代表了隨時間正的治愈速率常數(shù)，因為該擬合的模型 假定了一個負常數(shù)(即創(chuàng)傷面積的減少）。
[0129] 總而言之，在全部訪問中，創(chuàng)傷面積的最大降低出現(xiàn)在1.6mg/mL劑量的LL-37。從 隨機訪問到研究結(jié)束，1.6mg/mL劑量的LL-37的平均創(chuàng)傷面積降低為5.29cm 2(見下表2)。
[0130] 整
[0131] 在各訪問時的創(chuàng)傷面積(cm2)
[0132]
[0133] SD:標準偏差;研究結(jié)束是指在最終治療后大約4周進行的隨訪。
[0134] 相對于安慰劑組，最低劑量(0.5mg/mL)組的指數(shù)式衰變模型的治愈速率常數(shù)呈現(xiàn) 出6倍差異，和中劑量（1.6mg/mL)組的指數(shù)式衰變模型的治愈速率常數(shù)呈現(xiàn)出3倍差異(對 于0 · 5mg/mL，p = 0 · 003，和對于1 · 6mg/mL，p = 0 · 088)。因此這些制劑引起更快的創(chuàng)傷面積降 低，并因此引起改善的愈合響應。但是，最高LL-37劑量(3.2mg/mL)組和所述安慰劑組之間 的估計的治愈速率沒有差別。
[0135] 為了合并磨合期的數(shù)據(jù)并評估是否治療劑的加入會影響愈合速率，進行了分割線 段分析并與之前的分析一致。如圖1所示，相比于磨合期，在隨機之后的兩個較低劑量的LL-37具有更大的創(chuàng)傷面積減小，意味著相比于治療前的值，統(tǒng)計學顯著提高的治愈（對于 0.5mg/mL和1.6mg/mL分別是p〈0.001和p = 0.011)。對于最高劑量或安慰劑，未見到隨機后 速率和磨合期的速率有顯著差異。正如所預料的，磨合期的變化速率非常接近零，因為將響 應者從該研究中排除。
[0136] 結(jié)論
[0137] 響應于給藥兩個較低劑量的LL-37(0.5和1.6mg/mL)，觀察到了創(chuàng)傷愈合明顯且顯 著的改善。這一研究的結(jié)果表明，每三天一次的〇.5mg/mL劑量(其等于每平方厘米創(chuàng)傷面積 13yg的LL-37)和1.6mg/mL劑量(其等于每平方厘米創(chuàng)傷面積40yg的LL-37)導致對創(chuàng)傷愈合 的顯著刺激?；蛘撸皖l率的施用更高的劑量也是合適的。
【主權(quán)項】
1. 藥物制劑，其包含LL-37或其藥學上可接受的鹽和一種或多種藥學上可接受的稀釋 劑或載體系統(tǒng)，其用于局部治療慢性潰瘍，所述方法包括： (a) 局部施用所述制劑至所述潰瘍;然后 (b) 施用敷料， 其中所述制劑的所述施用在該創(chuàng)傷部位提供的LL-37的劑量為每平方厘米創(chuàng)傷面積施 用小于約80yg的LL-37。2. 權(quán)利要求1所述的制劑，其中LL-37的劑量低于約40yg/cm2至約80yg/cm2之間的一個 值。3. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的制劑，其中LL-37的劑量在約lyg/cm2至約70yg/cm2之 間。4. 前述權(quán)利要求中任一項所述的制劑，其中所述劑量在約5yg/cm2至約60yg/cm2之間。5. 前述權(quán)利要求中任一項所述的制劑，其中所述劑量為治療的每天低于約26.7yg/cm2。6. 權(quán)利要求5所述的制劑，其中LL-37的劑量低于治療的每天約13.3yg/cm2至約26.7yg/ cm2之間的一個值。7. 權(quán)利要求5或權(quán)利要求6所述的制劑，其中LL-37的劑量為治療的每天約0.3yg/cm2至 約23·3yg/cm 2〇8. 權(quán)利要求5-7中任一項所述的制劑，其中所述劑量為治療的每天約1.6yg/cm2至約20μ g/cm 2 〇9. 前述權(quán)利要求中任一項所述的制劑，其中所述制劑為粘性液體或半固體。10. 權(quán)利要求9所述的制劑，其中所述制劑的粘度在約2Pa · s至約25Pa · s的范圍內(nèi)。11. 前述權(quán)利要求中任一項所述的制劑，其中所述潰瘍?yōu)橥褥o脈性潰瘍。12. 權(quán)利要求1-10中任一項所述的制劑，其中所述潰瘍?yōu)樘悄虿⌒宰銤儭?3. 前述權(quán)利要求中任一項所述的制劑，其包括LL-37的水溶液。14. 前述權(quán)利要求中任一項所述的制劑，其為混懸液、乳液、乳膏、凝膠或洗劑的形式。15. 權(quán)利要求13或權(quán)利要求14所述的制劑，其包含聚乙烯醇。 16. LL-37或其藥學上可接受的鹽在制備用于局部治療慢性潰瘍的方法中的藥物制劑 中的用途，該治療包括施用所述制劑以在所述創(chuàng)傷部位提供的LL-37的劑量為每平方厘米 創(chuàng)傷面積施用低于約80yg的LL-37。17. 用于局部治療慢性潰瘍的方法，該方法包括： (a) 向所述潰瘍局部施用藥物制劑，所述藥物制劑包含LL-37或其藥學上可接受的鹽和 一種或多種藥學上可接受的稀釋劑或載體系統(tǒng);然后 (b) 施用敷料， 其中所述制劑的所述施用在該創(chuàng)傷部位提供的LL-37劑量為每平方厘米創(chuàng)傷面積施用 低于約80yg的LL-37,從而治療所述潰瘍。
【文檔編號】A61L15/44GK105939726SQ201480063233
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2014年11月19日
【發(fā)明人】A.格龍伯格, C.迪特里希, M.馬爾阿普
【申請人】利波佩普泰德公司