專利名稱：提供牙齒潔白外觀的方法和材料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本文涉及參與提供牙齒潔白外觀的方法和材料。例如，本文涉及用一種或多種熒光發(fā)射多肽(例如藍(lán)色熒光蛋白(BFP))接觸牙齒以提供牙齒具有更白外觀的方法和材料。2.背景信息總的來說，認(rèn)為白色的牙齒是美容上所需要的。然而，在沒有介入的情況下牙齒會(huì)變色。引起呈現(xiàn)有色外觀的牙齒結(jié)構(gòu)通常是釉質(zhì)層。很多因素會(huì)導(dǎo)致釉質(zhì)變色。例如，牙齒表面形成的菌斑和牙垢基質(zhì)會(huì)包圍污點(diǎn)，因此導(dǎo)致釉質(zhì)變色。已研發(fā)非處方牙齒增白制品來解決該美容偏好以使被表面包埋物質(zhì)變色的牙齒釉質(zhì)恢復(fù)光澤。雖然所有的潔齒劑和漱口水含有一些清潔和拋光劑，但一些釉質(zhì)沉積物變得很頑固，正常使用情況下通過這些試劑無法對(duì)其完全去除。吸煙者的釉質(zhì)經(jīng)常變色，因?yàn)槲胂銦熤械慕褂秃皖w粒聚集在牙齒上。在一些情況下，食物和飲料(例如茶)會(huì)對(duì)牙齒釉質(zhì)染色或變色
發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)?zhí)峁┝擞糜谔峁┭例X潔白外觀的方法和材料。例如，本申請(qǐng)?zhí)峁┯靡环N或多種熒光發(fā)射多肽(例如藍(lán)色熒光蛋白(BFP))接觸牙齒來提供牙齒更白外觀的方法和材料。如本文所述，在使熒光發(fā)射多肽直接或間接結(jié)合或附著牙齒的條件下，熒光發(fā)射多肽(例如BFP多肽)可施加于牙齒。在該情況下，熒光發(fā)射多肽可在特定波長發(fā)射熒光。在BFP多肽的情況下，BFP多肽可在約440nm-約500nm的范圍(例如約450nm_約490nm)發(fā)射熒光，其中當(dāng)從牙齒發(fā)射時(shí)給予牙齒白色外觀。即使當(dāng)下方的牙齒不是天然地那么白時(shí)，該白色外觀也可出現(xiàn)。例如，本文提供的方法和材料可使人具有呈現(xiàn)白色的牙齒，即使該牙齒可能被著色。因此，可使用本文提供的方法和材料獲得潔白外觀的牙齒，不需要刺激的漂白(例如不需要牙齒漂白處理，例如那些包括過氧化氫或過氧化脲的處理)或脫色技術(shù)?？偟膩碚f，本文的一個(gè)方面闡述了一種改變牙齒外觀的方法。該方法包括對(duì)牙齒施加熒光發(fā)射多肽或基本上由其組成，其中由熒光發(fā)射多肽發(fā)射的熒光改變牙齒的外觀。該牙齒可以是人的牙齒。該方法可包括改變牙齒外觀從而牙齒看上去更白。熒光發(fā)射多肽可以是BFP多肽。熒光發(fā)射多肽能偶聯(lián)某一分子，該分子具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。該分子可以是多肽。該分子可以是酪蛋白多肽。該分子可以是富酪蛋白(statherin)多肽。該分子可以是具有與釉質(zhì)、羥基磷灰石或獲得性牙齒膜相互作用或與之結(jié)合能力的分子。熒光發(fā)射多肽可以是酪蛋白多肽氨基酸序列的融合多肽。熒光發(fā)射多肽可以是包含富酪蛋白多肽氨基酸序列的融合多肽。熒光放射多肽可以存在于牙膏中，并且施加步驟可包括將該牙膏施加于牙齒。熒光發(fā)射多肽可以是聚合物的一個(gè)單位，該聚合物包含兩個(gè)或多個(gè)熒光放射多肽。該聚合物可以與酪蛋白多肽結(jié)合以形成復(fù)合物，其中將該復(fù)合物施加于牙齒。在另一個(gè)方面，本文闡述了一種組合物，該組合物包含熒光發(fā)射多肽和酪蛋白多肽或基本上由其組成。在另一個(gè)方面，本文闡述了一種組合物，該組合物包含熒光發(fā)射多肽和富酪蛋白多肽或基本上由其組成。在另一方面，本文闡述一種嵌合多肽，該嵌合多肽包含熒光放射多肽的20或更多個(gè)殘基長度的氨基酸序列以及酪蛋白多肽的20或更多個(gè)殘基長度的氨基酸序列或基本由其組成。該嵌合多肽可包含全長熒光放射多肽或其片段，該片段與全長熒光發(fā)射多肽至少越90 %相同。該嵌合多肽可包含全長酪蛋白多肽或其片段，該片段與全長酪蛋白多肽至少約80%相同。該嵌合多肽可包含發(fā)射熒光的能力和與牙齒或牙齒組分相互反應(yīng)或與之結(jié)合的能力。在另一方面，本文闡述一種嵌合多肽，該嵌合多肽包含突光放射多肽的20或更多個(gè)殘基長度的氨基酸序列以及富酪蛋白多肽的20或更多個(gè)殘基長度的氨基酸序列或基本由其組成。該嵌合多肽可包含全長熒光放射多肽或其片段，該片段與全長熒光發(fā)射多肽至少約90%相同。該嵌合多肽可包含全長富酪蛋白多肽或其片段，該片段與約全長富酪蛋白多肽至少約80%相同。該嵌合多肽可包含發(fā)射熒光的能力和與牙齒或牙齒組分相互反應(yīng)或與之結(jié)合的能力。除非另外定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語的意義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同。雖然在本發(fā)明的實(shí)施或測(cè)試中可以采用類似于或等同于本文所述的那些方法和材料，但是下面描述了合適的方法和材料。本文中述及的所有出版物、專利申請(qǐng)、專利和其他參考文獻(xiàn)都通過引用全文納入本文。在抵觸的情況下，以本說明書(包括定義在內(nèi))為準(zhǔn)。此外，材料、 方法和實(shí)施例都僅是說明性，并不構(gòu)成限制。

從下面的詳述和所附權(quán)利要求很容易了解本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)。


圖1是編碼示例性BFP多肽(GenBank登錄號(hào):U70497.1 ；GI N0.1619752)的核酸序列表(SEQ ID NO:1) ο圖2 是示例性 BFP 多肽(GenBank 登錄號(hào):AAB16959.1;GI N0.1619753)的氨基酸序列表(SEQ ID NO:2) ο圖3是編碼示例性α -酪蛋白多肽(GenBank登錄號(hào):ΝΜ_181029.2;GIN0.31341348)的核酸序列表(SEQ ID NO:3)。圖4是示例性α -酪蛋白多肽(GenBank登錄號(hào):851372.1;GI N0.30794348)的氨基酸序列表(SEQ ID NO:4)。圖5是編碼示例性β -酪蛋白多肽(GenBank登錄號(hào):BC111172.1;GIN0.83406092)的核酸序列表(SEQ ID NO:5)。圖6是示例性 β-酪蛋白多肽(GenBank 登錄號(hào)=AAI 11173.1; GI N0.83406093)的氨基酸序列表(SEQ ID NO:6) ο
圖7是編碼示例性富酪蛋白多肽(GenBank登錄號(hào):AAH67219.1;GI N0.45501309)的核酸序列表(SEQ ID NO:7)。圖8是示例性富酪蛋白多肽(GenBank登錄號(hào):BC067219.1;GI N0.45501308)的氨基酸序列表(SEQ ID NO:8)。圖9是示例性BFP多肽的氨基酸序列表(SEQ ID NO:9)。圖10包含牙齒在初始(左)，施加β -酪蛋白/BFP多肽偶聯(lián)物后(中)，和浮石研磨后(右)的照片。經(jīng)施加酪蛋白/BFP多肽偶聯(lián)物后，牙齒相比初始顯示更白的外觀。該更白的外觀在浮石研磨后失去。
具體實(shí)施例方式本文提供了用于提供牙齒潔白外觀的方法和材料。例如，本文提供用一種或多種熒光發(fā)射多肽(例如藍(lán)色熒光蛋白(BFP))接觸牙齒來提供牙齒更白外觀的方法和材料。如本文所述，可對(duì)牙齒施加熒光發(fā)射多肽從而熒光從牙齒發(fā)射?？蓪?duì)牙齒施加任何合適的熒光發(fā)射多肽。例如，當(dāng)需要擁有更白外觀的牙齒時(shí)，可對(duì)人的牙齒施加發(fā)射藍(lán)色突光的多肽。該藍(lán)色突光的發(fā)射波長可為約440nm_約500nm (例如約450nm_約500nm、約460nm-約 500nm、約 470nm_ 約 500nm、約 480nm_ 約 500nm、約 440nm_ 約 490nm、約 440nm_ 約480nm、約 440nm_ 約 470nm、約 440nm_ 約 460nm、約 450nm_ 約 490nm、或約 460nm_ 約 480nm)。在一些情況下，可根據(jù)本文所述對(duì)牙齒施加熒光發(fā)射多肽，該熒光發(fā)射多肽在以下發(fā)射波長發(fā)射突光:約 420nm-約 450nm、約 430nm_ 約 450nm、約 440nm_ 約 450nm、約 420nm_ 約440nm、約 485nm_ 約 505nm。當(dāng)需要具有不同顏色的牙齒時(shí)，可對(duì)人的牙齒施加發(fā)射紅色、綠色或黃色光譜的突光的多肽。紅色突光的發(fā)射波長可為約555nm_約655nm (例如，約565nm_約645nm、約575nm-約635nm或約585nm_約625nm)。綠色突光的發(fā)射波長可為約500nm_約525nm(例如，約505nm_約520nm或約510nm_約515nm)。黃色突光的發(fā)射波長可為約525nm_約555nm(例如，約530nm_約550nm或約535nm_約545nm)。在一些情況下，可對(duì)人的牙齒施加不同熒光發(fā)射多肽的組合。例如，可對(duì)人的牙齒施加BFP多肽和紅色熒光蛋白(RFP)多肽的組合。在一些情況下，可對(duì)人的牙齒施加RFP多肽和綠色熒光蛋白(GFP)多肽的組合?？筛鶕?jù)本文所述使用任何合適的BFP多肽。根據(jù)本文所述可使用的BFP多肽的示例包括但不限于:EBFP (例如最大發(fā)射為460nm的EBFP)、熒光蛋白SBFPl (GenBankx登錄號(hào):ABM97856 ；GI 號(hào):124264536)、熒光蛋白 SBFP2 (GenBank''' 登錄號(hào):ABM97857, GI號(hào):124264538), EBFP2 ( GenBank 登錄號(hào):EF517318, GI 號(hào):145666498)、Azurite (Mena等，Nature Biotechnology, 24:1569-1571 (2006)) > mKalamal ( GenBank'* 登錄號(hào):EF517317，GI 號(hào):145666496)、鋅指蛋白 383 (GenBank"登錄號(hào):EDU39924.1，GI號(hào):187972425)、示于美國專利號(hào) 7，166, 424 的 SEQ ID NO:445( GenBank 登錄號(hào):ABN30727.1 ；GI號(hào):125148618)、可溶修飾型藍(lán)色熒光蛋白(smBFP) ( GenBankκ登錄號(hào):U70497.1 ；GI 號(hào):1619752)、具有Ge nBank'"登錄號(hào):CAE00365.1 (GI 號(hào)=32260521)所示序列的多肽、具有GenBankx登錄號(hào):CAE00361.1 (GI號(hào)=32260509)所示序列的多肽、具有GenBank 登錄號(hào):CAE00361.1 (GI 號(hào):32260509)所示序列的多肽、ECFP 多肽(GenBank 登錄號(hào)；AC048275.1;GI 號(hào):226331138)、天藍(lán)色多肽(GenBankJ;登錄號(hào):ADE48834.1 ；GI 號(hào):293612838)、熒光蛋白 Cypet 多肽(GenBank 登錄號(hào):3GEX_A ；GI 號(hào):290789997)、MiCy 多肽(GenBank 登錄號(hào):ADE48830.1 ；GI 號(hào):293612833)、和 mTFPl 熒光蛋白多肽(GenBank&登錄號(hào):AC048263.1 ；GI號(hào):226320339)。在一些情況下，根據(jù)本文所述可使用美國專利申請(qǐng)?zhí)?010/0062460所示的BFP多肽。可根據(jù)本文所述使用任何合適的RFP多肽和GFP多肽。根據(jù)本文所述可使用的RFP多肽的示例包括但不限于可溶修飾型紅移型綠色熒光蛋白(smSGFP)多肽(GenBanlJ登錄號(hào):U70496.1 ;GI 號(hào):1619750)、具有GenBankli'登錄號(hào):AAG16224.1 (GI 號(hào)=10304307)所示序列的紅色熒光蛋白多肽、AB038175.1 (GI號(hào):133753343)、或AAU06852.1 (GI號(hào):51593130)、發(fā)橙光的 Gfp-樣蛋白多肽(GenBank 登錄號(hào):2ZMW_D ；GI 號(hào):209870302)、橘紅色(mOrange)熒光蛋白多肽(GenBank 登錄號(hào):AC048285.1 ；GI 號(hào):226331152)、NLS-dTomato)多肽(GenBank 登錄號(hào):ADC42843.1 ；GI 號(hào):288188779)、紅色熒光蛋白 tdTomato 多肽(GenBanC 登錄號(hào):ACQ43939.1 ；GI 號(hào):228484713)、DsRed 多肽(GenBank 登錄號(hào):BAE53441.1GI 號(hào):83016748)、DsRed2 多肽(GenBank 登錄號(hào):AAV73970.1 ；GI 號(hào):56119204)、DsRed-Express 多肽(GenBank"療錄號(hào):ACU30027.1 ；GI號(hào):255689290)、DsRed-單體(DsRed-Monomer)多肽(GenBank"登錄號(hào):ACF35425.1 ；GI號(hào):194245628 )、單體橙紅色熒光蛋白多肽(GenBank 登錄號(hào):AAV52170.1 ；GI號(hào):55420625)、單體橙紅色熒光蛋白多肽(GenBank 登錄號(hào):AAV52166.1 ;GI號(hào):55420617)、mCherry 多肽(GenBank* 登錄號(hào):ACY24904.1 ；GI 號(hào):262089840)、具有美國專利號(hào)7，393，923所示氨基酸序列SEQ ID NO: 3的多肽(GenBank"登錄號(hào):ACH06540.1 ；GI號(hào):197013979)和具有美國專利號(hào)7，393，923所示氨基酸序列SEQ ID N0:5的多肽(GenBankw 登錄號(hào):ACH06541.1 ；GI 號(hào):197013980)。根據(jù)本文所述可使用的GFP多肽的示例包括但不限于可溶修飾型綠色熒光蛋白(smGFP)多肽(GenBank*..登錄號(hào):U70495.1;GI號(hào):1619748)、修飾型綠色熒光蛋白 GFP-ER (mfgp4-ER)多肽(GenBank* 登錄號(hào):U87625.1 ；GI 號(hào):1842446)、GFP 多肽(GenBank 登錄號(hào):ACJ06700.1, GI 號(hào):210076685)、增強(qiáng)型 GFP 多肽(GenBank 登錄號(hào):ACV20892.1 ；GI 號(hào)=256708579)、turboGFP 多肽(GenBank 登錄號(hào):ADD23343.1 ；GI號(hào)=290131407) ,VisGreen GFP 多肽(GenBank "登錄號(hào):ABR26680.1 ;GI 號(hào):149393496)、和 Azam1-綠色(Azam1-Green)多肽(GenBanks 登錄號(hào):BAD52001.1 ；GI 號(hào):52839539)。在一些情況下，可根據(jù)本文所述使用熒光發(fā)射多肽，例如Subach等(Chem.Biol.，15:1116-1124(2008))所述的那些。也可參見GenBank'登錄號(hào):3M24_A(GI 號(hào):296863586)、GenBank 登錄號(hào):3M24_B (G1: 296863587)、GenBank 登錄號(hào):3M24_C (G1: 296863588)、和 GenBank 登錄號(hào):3M24_D (G1: 296863589)。根據(jù)本文所述可使用的其它熒光發(fā)射多肽示例包括但不限于他處(Alieva等，PLoS ONE, 3 (7):e2680(2008)和Chudafov 等,Physiol.Rev., 90:1103-1163 (2010))所述的那些。例如參見 Alieva 等參考文獻(xiàn)的表I和Chudafov等參考文獻(xiàn)的圖5、10、12、和14。在一些情況下，可根據(jù)本文所述使用珊瑚熒光發(fā)射多肽。在一些情況下，可根據(jù)本文所述使用一種熒光發(fā)射多肽，該多肽具有圖2或圖9所不的氣基酸序列或具有圖1所不序列編碼的氣基酸序列。可使用任何合適的方法來制備熒光發(fā)射多肽。例如,可使用多肽表達(dá)技術(shù)(例如,使用細(xì)菌細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞的異源表達(dá)技術(shù))來制備熒光發(fā)射多肽。在一些情況下，可根據(jù)他處(Yakhnin 等,Protein Expr.Purif., 14:382-386 (1998)和 Jain 等,J.Chromatography A, 1035:83-86 (2004))所述制備熒光發(fā)射多肽(例如BFP多肽)。在一些情況下，可使用標(biāo)準(zhǔn)多肽合成技術(shù)(例如，液相多肽合成技術(shù)或固相多肽合成技術(shù))來合成制備熒光發(fā)射多肽?？赏ㄟ^一種分子(例如多肽)將熒光發(fā)射多肽結(jié)合或附著牙齒，該分子具有與牙齒或牙齒組分(例如，釉質(zhì)、羥基磷灰石、獲得性牙齒膜、牙骨質(zhì)、牙冠、牙頸、牙骨質(zhì)與釉質(zhì)交接處或牙根尖)互相作用或與之結(jié)合的能力。例如，熒光發(fā)射多肽可與多肽(酪蛋白多肽、富酪蛋白多肽或其片段)共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合。根據(jù)本文所述可使用的酪蛋白多肽示例包括但不限于:α -酪蛋白多肽(例如α-SI酪蛋白多肽和a-S2酪蛋白多肽)、β-酪蛋白多肽(例如Al β-酪蛋白多肽和Α2β_酪蛋白多肽)、Y-酪蛋白多肽(例如Y 1-酪蛋白多肽、Y 2-酪蛋白多肽和Y 3-酪蛋白多肽)、δ-酪蛋白多肽和ε-酪蛋白多肽。在一些情況下，可根據(jù)本文所述使用酪蛋白多肽，該多肽具有圖4或6所示的氨基酸序列或者圖3或5所示序列編碼的氨基酸序列。在一些情況下，酪蛋白多肽可以是部分的全長酪蛋白多肽，前提是該部分具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。例如，根據(jù)本文所述可使用的酪蛋白多肽可以是包含酪蛋白多肽 的陰離子結(jié)構(gòu)域(例如:全長牛a-SI酪蛋白多肽的氨基酸殘基59-79、全長牛a-S2酪蛋白多肽的氨基酸殘基2-20或全長牛β酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25)的多肽。在一些情況下，酪蛋白多肽可以是(a)由全長牛α-SI酪蛋白多肽的氨基酸殘基59-79組成的多肽、(b)長度不超過50個(gè)氨基酸殘基(例如，長度不超過45、40、35、30或25個(gè)氨基酸殘基)的多肽，前提是該多肽包含全長牛α -SI酪蛋白多肽的氨基酸殘基59-79、或(C)包含全長牛α-SI酪蛋白多肽的氨基酸殘基59-79的多肽，該多肽相比全長牛α-SI酪蛋白多肽的氨基酸殘基59-79具有0、1、2、3、4、5或6個(gè)氨基酸取代。在一些情況下，酪蛋白可以是(a)由全長牛β酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25組成的多肽、(b)長度不超過50個(gè)氨基酸殘基(例如，長度不超過45、40、35、或30個(gè)氨基酸殘基)的多肽，前提是該多肽包含全長牛β酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25、或(c)包含全長牛β酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25的多肽，該多肽相比全長牛β酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25具有0、1、2、3、4、5或6個(gè)氨基酸取代。在一些情況下，酪蛋白多肽可制備(例如合成)成包含一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基以促進(jìn)酪蛋白多肽與熒光發(fā)射多肽(例如，BFP多肽)的偶聯(lián)。根據(jù)本文所述可使用的酪蛋白多肽能具有自然存在于任何哺乳動(dòng)物類型的氨基酸序列。例如，根據(jù)本文所述可使用的酪蛋白多肽能具有氨基酸序列，該氨基酸序列自然存在于人、牛、山羊、綿羊、馬、小鼠、大鼠、猴、狗、貓、猩猩、黑猩猩、豬、馬、象、或負(fù)鼠。在一些情況下，將牛酪蛋白多肽與熒光發(fā)射多肽偶聯(lián)以形成酪蛋白多肽/熒光發(fā)射多肽偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。根據(jù)本文所述可使用的富酪蛋白多肽示例包括但不限于:人富酪蛋白多肽，牛富酪蛋白多肽和唾液富酪蛋白。在一些情況下，富酪蛋白多肽可以是部分的全長富酪蛋白多肽，前提是該部分具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。例如，根據(jù)本文所述可用的富酪蛋白多肽可以是包含富酪蛋白多肽高度負(fù)結(jié)構(gòu)域(例如全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-15)的多肽。在一些情況下，富酪蛋白可以是(a)由全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-15組成的多肽、(b)長度不超過50個(gè)氨基酸殘基(例如，長度不超過45、40、35、25、或20個(gè)氨基酸殘基)的多肽，前提是該多肽包含全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-15、或(c)包含全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-15的多肽，該多肽相比全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-15具有0、1、2、3、4或5個(gè)氨基酸取代。在一些情況下，富酪蛋白多肽可以是(a)由全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25組成的多肽、(b)長度不超過50個(gè)氨基酸殘基(例如，長度不超過45、40、35或30個(gè)氨基酸殘基)的多肽，前提是該多肽包含全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25 、或(c)包含全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25的多肽，該多肽相比全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基1-25具有0、1、2、3、4、5或6個(gè)氨基酸取代。在一些情況下，富酪蛋白多肽可以是(a)由全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基19-43組成的多肽、(b)長度不超過50個(gè)氨基酸殘基(例如，長度不超過45、40、35、30或25個(gè)氨基酸殘基)的多肽，前提是該多肽包含全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基19-43、或(c)包含全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基19-43的多肽，該多肽相比全長人富酪蛋白多肽的氨基酸殘基19-43具有O、1、2、3、4、5或6個(gè)氨基酸取代。在一些情況下，可以用帶負(fù)電殘基(例如天冬氨酸)替代一個(gè)或多個(gè)帶負(fù)電磷酸絲氨酸殘基制備(例如合成)富酪蛋白多肽。在一些情況下，富酪蛋白多肽可制備(例如合成)成包含一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基以促進(jìn)富酪蛋白多肽與熒光發(fā)射多肽(例如，BFP多肽)的偶聯(lián)。根據(jù)本文所述可使用的富酪蛋白多肽能具有自然存在于任何哺乳動(dòng)物類型的氨基酸序列。例如，根據(jù)本文所述可使用的富酪蛋白多肽能具有某一氨基酸序列，該氨基酸序列自然存在于人、牛、山羊、綿羊、馬、小鼠、大鼠、猴、狗、貓、猩猩、黑猩猩、豬、馬、象、或負(fù)鼠。在一些情況下，人富酪蛋白多肽與熒光發(fā)射多肽偶聯(lián)以形成富酪蛋白多肽/熒光發(fā)射多肽偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。在一些情況下，可根據(jù)本文所述使用富酪蛋白多肽，該多肽具有圖8所示的氨基酸序列或圖7所示序列編碼的氨基酸序列?？墒褂萌魏魏线m的方法來制備多肽，該多肽具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。例如，可使用多肽表達(dá)技術(shù)(例如，使用細(xì)菌細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞的異源表達(dá)技術(shù))來制備多肽，該多肽具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。在一些情況下，可根據(jù)他處(美國專利號(hào)7，666，996,6, 797，810,6, 558，717、6，121，421,6, 080，844,5, 834，427 和 4，713，254，以及美國專利申請(qǐng)公開號(hào) 2009/0074680和2010/0144598)所述來制備具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽，例如酪蛋白多肽或富酪蛋白多肽。在一些情況下，可使用標(biāo)準(zhǔn)多肽合成技術(shù)(例如液相多肽合成技術(shù)或固相多肽合成技術(shù))來合成制備具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽?？墒褂萌魏魏线m的方法將熒光發(fā)射多肽共價(jià)或非共價(jià)地與一種分子(例如多肽)結(jié)合，該分子具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。例如，可用化學(xué)方法通過一個(gè)或多個(gè)配位共價(jià)鍵、共價(jià)鍵、二硫鍵、高能鍵、氫建、離子鍵或肽鍵將熒光發(fā)射多肽(例如BFP多肽)與酪蛋白多肽和/或富酪蛋白多肽偶聯(lián)。在一些情況下，可通過化學(xué)方法將熒光發(fā)射多肽與存在于多肽上的胺基偶聯(lián)，該多肽具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力(例如，酪蛋白多肽和/或富酪蛋白多肽)。該胺基可位于多肽的N端、C端或多肽的N端和C端之間。在一些情況下，待偶聯(lián)的多肽可在偶聯(lián)前活化。例如，可通過引入活性巰基來活化多肽(例如，酪蛋白多肽或富酪蛋白多肽)。對(duì)于富酪蛋白多肽，例如，可通過在化學(xué)合成期間向多肽添加半胱氨酸殘基來完成。對(duì)于酪蛋白多肽，可根據(jù)他處(McCall等，Bioconjugate Chem.，1:222-226 (1990))所述通過與2-亞氨基四氫噻吩(例如特勞特試劑(Traut’s reagent))反應(yīng)將酪蛋白多肽巰基化。在α-和β-酪蛋白多肽的情況中，能與特勞特試劑反應(yīng)的多肽上可存在多個(gè)胺基(例如，N端和賴氨酸)?？筛淖兎磻?yīng)條件來最大化用一個(gè)或多個(gè)巰基活化的分子得率以減少偶聯(lián)可能干擾牙齒結(jié)合的可能性?？筛鶕?jù)他處(Lacy等，Analytical Biochemistry, 382:66-68 (2008))所述采用靈敏的突光試驗(yàn)測(cè)定巰基的引入程度?？赏ㄟ^多肽的胺與包含馬來酰亞胺基團(tuán)和活性N-羥基琥珀酰亞胺酯的雙功能試劑反應(yīng)，用一個(gè)或多個(gè)馬來酰亞胺基團(tuán)取代熒光發(fā)射多肽。然后可將被馬來酰亞胺取代的熒光發(fā)射多肽偶聯(lián)到多肽的巰基上，該多肽具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力?？筛鶕?jù)他處(Singh, Bioconjugate Chem., 5:348-351 (1994))所述改變被馬來酰亞胺基團(tuán)取代的熒光發(fā)射多肽程度?？捎糜谂悸?lián)熒光發(fā)射多肽與分子(例如多肽)的其他偶聯(lián)方法示例包括但不限于他處(例如，Hermanson, G .T., Bioconjugate Techniques (《生物偶聯(lián)技術(shù)》),第二版,2008,埃爾斯威爾公司(Elsevier))所述的那些，其中該分子具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。例如參見第I部分第4節(jié)和第II部分第5節(jié)。在一些情況下，可通過連接多個(gè)熒光發(fā)射多肽與單個(gè)分子(例如多肽)來增強(qiáng)使用本文所提供方法獲得的熒光信號(hào)，其中該分子具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。因?yàn)槲蛔栊?yīng)，該放大效應(yīng)可通過以下方法有效完成:首先制備含有多個(gè)熒光發(fā)射多肽的聚合物，然后將該聚合物與分子(例如酪蛋白多肽)連接，該分子具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力?？捎糜谛纬珊卸鄠€(gè)熒光發(fā)射多肽的聚合物的方法(如聚合方法)示例包括但不限于他處(例如，例如，Hermanson, G.T., BioconjugateTechniques (《生物偶聯(lián)技術(shù)》),第二版,2008,埃爾斯威爾公司(Elsevier))所述的那些。例如可參見第II部分第25節(jié)。在一些情況下，熒光發(fā)射多肽可制備為融合或嵌合多肽，具有能與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的多肽。例如，可使用異源多肽表達(dá)技術(shù)或合成多肽合成技術(shù)來生產(chǎn)單一多肽鏈，該單一多肽鏈具有熒光發(fā)射多肽的氨基酸序列和具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽的氨基酸序列。在一些情況下，該單一多肽鏈可具有(a)熒光發(fā)射多肽的氨基酸序列，然后是具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽的氨基酸序列，或(b)具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽的氨基酸序列，然后是熒光發(fā)射多肽的氨基酸序列。在一些情況下，單一多肽鏈可具有一個(gè)或多個(gè)(例如，1、2、3、4或5個(gè))氨基酸序列，其中每個(gè)序列編碼一種熒光發(fā)射多肽；并可具有一個(gè)或多個(gè)(例如，1、2、3、4或5個(gè))氨基酸序列，其中每個(gè)序列編碼具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽。在一些情況下，本文提供的融合或嵌合多肽可包含其它氨基酸序列(例如間隔子或結(jié)合殘基)。例如，含有熒光發(fā)射多肽的氨基酸序列和具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽氨基酸序列的融合或嵌合多肽可包含一個(gè)或多個(gè)額外氨基酸殘基，例如甘氨酸、賴氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、脯氨酸、組氨酸、纈氨酸、絲氨酸、酪氨酸、鳥氨酸、牛磺酸、焦賴氨酸(pyrolysine)或硒代半胱氨酸(seleocysteine)殘基、或氨基酸衍生物(例如5-輕色氨酸(5-hydroxytryptophan)、L- 二輕基苯丙氨酸或α - 二氟甲基鳥氨酸)。該額外氨基酸殘基可設(shè)計(jì)成間隔子(例如5個(gè)或更多甘氨酸殘基鏈)或設(shè)計(jì)成使多肽或其它分子以化學(xué)方法偶聯(lián)到融合或嵌合多肽上。例如，含有熒光發(fā)射多肽的氨基酸序列和具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽氨基酸序列的融合或嵌合多肽可包含1、2、3、4、5或更多個(gè)額外賴氨酸殘基從而一個(gè)或多個(gè)具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的多肽(例如酪蛋白多肽和/或富酪蛋白多肽)可通過化學(xué)方法偶聯(lián)到融合或嵌合多肽上?？蓪?duì)牙齒施加本文提供的包含熒光發(fā)射多肽的組合物(例如，包含熒光發(fā)射多肽、熒光發(fā)射多肽/酪蛋白多肽偶聯(lián)物、熒光發(fā)射多肽/富酪蛋白多肽偶聯(lián)物、熒光發(fā)射多肽/酪蛋白多肽融合多肽、和/或熒光發(fā)射多肽/富酪蛋白多肽融合多肽的組合物)以改變?cè)撗例X的外觀。例如，可對(duì)牙齒施加本文提供的包含BFP多肽(例如，BFP多肽/富酪蛋白多肽偶聯(lián)物)的組合物以給予該牙齒更白的外觀?？墒褂萌魏魏线m的方法來向牙齒遞送本文提供的組合物。例如，可將本文提供的組合物納入牙膏、漱口水、飲料、食品、口香糖、凝膠、粉末或乳膏。 在一些情況下，可將有效量的本文所提供組合物遞送到牙齒從而改變?cè)撗例X的外觀(例如，該牙齒的外觀變得更白)。有效量的本文所提供組合物可以是改變牙齒外觀而不誘導(dǎo)顯著毒性的任何量。例如,本文提供的組合物可以每克牙膏產(chǎn)生約0.0OOlmg-約IOOmg(例如，約 0.0Olmg-約 lOOmg、約 0.0lmg-約 100mg、約 0.1mg-約 100mg、約 0.5mg-約 IOOmg、約 0.5mg-約 50mg、約 0.5mg-約 25mg、約 Img-約 100mg、約 Img-約 50mg 或約 Img-約 25mg)熒光發(fā)射多肽的量納入牙膏制品。在一些情況下，可將本文提供的組合物在清洗、吞咽或移除前對(duì)牙齒施加一段時(shí)間從而改變牙齒的外觀(例如，該牙齒外觀變得更白)。例如，配置成包含本文所述熒光發(fā)射多肽的牙膏可施加于牙齒并保持與那些牙齒接觸30秒-10分鐘(比如，30秒-5分鐘、30秒-2.5分鐘、30秒-2分鐘、I分鐘-10分鐘、2分鐘-10分鐘或I分鐘-5分鐘)不沖洗。在一些情況下，可在遞送本文提供的組合物前預(yù)備人的牙齒。例如，可在遞送本文提供的組合物前清洗、刷洗或拋光(例如用浮石拋光)人的牙齒。在一些情況下，可用一種或多種能暴露磷酸鈣結(jié)合部位的試劑處理待處理的單個(gè)牙齒或多個(gè)牙齒表面。例如，用本文所提供組合物處理的牙齒可接觸EDTA或磷酸以暴露牙齒上存在的磷酸鈣結(jié)合部位。在磷酸處理的情況中，只可將牙釉質(zhì)暴露于酸以防止或減少軟組織損傷的風(fēng)險(xiǎn)。在一些情況下，可使用兩種或多種步驟方法將熒光發(fā)射多肽施加于牙齒。例如，可將包含具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的分子(例如多肽)的組合物遞送到待處理的牙齒，將上述處理作為一個(gè)步驟，后續(xù)步驟是遞送具有與所遞送分子相互作用或與之結(jié)合能力的熒光發(fā)射多肽。在一些情況下，可使用含有與熒光發(fā)射多肽分開的分子的單一組合物或使用單獨(dú)組合物(其中一種組合物含有分子且另一種組合物含有熒光發(fā)射多肽)同時(shí)實(shí)施這兩個(gè)步驟。在一些情況下，可進(jìn)行試驗(yàn)確定本文提供的組合物或本文提供的組合物組分(例如酪蛋白多肽)具有對(duì)牙齒或牙齒組分的結(jié)合親和性。例如，待測(cè)試的物質(zhì)可與羥基磷灰石(HA)基質(zhì)一起孵育，可將HA結(jié)合后溶液中的物質(zhì)含量與初始濃度作比較，從而通過差異來測(cè)定結(jié)合物質(zhì)的量。例如參見Raj等，J.Biol.Chem.，267:5968-5976(1992)。在一些情況下，用EDTA溶解HA基質(zhì)后能直接測(cè)定HA結(jié)合的物質(zhì)(Lamkin等，J.Dent.Res.，75:803-808(1996))。在多肽物質(zhì)的情況中，可使用二辛可寧酸試驗(yàn)和/或鄰-苯二醒胺試驗(yàn)來測(cè)定溶液中的多肽濃度?？墒褂美矢窨姞柲Ｐ?Bouropoulos和Moradian-Oldak, Calcif.Tissue Int.，72:599-603 (2003)))來測(cè)定結(jié)合常數(shù)。在一些情況下，可根據(jù)他處所述(Lamkin等，J.Dent.Res., 75:803-808 (1996))用HA基質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)，該基質(zhì)用人唾液預(yù)孵育以將蛋白涂覆HA。在一些情況下，可通過清洗去除未結(jié)合的唾液蛋白，因?yàn)槠浯嬖诳赡芨蓴_多肽的濃度測(cè)定?？墒褂萌魏魏线m的方法評(píng)估本文提供的組合物對(duì)牙齒或HA基質(zhì)的親和性。例如，可通過測(cè)定組合物的熒光 發(fā)射多肽的熒光來定量結(jié)合和未結(jié)合的組合物。利用熒光來定量的能力可在人唾液存在下測(cè)定組合物與HA的結(jié)合。在一些情況下，可評(píng)估本文提供的組合物在體外結(jié)合人牙齒的能力。該牙齒可接受不同程度的清潔，例如用浮石刷洗或拋光。然后可用人唾液處理該牙齒以形成獲得性牙齒膜并在有和沒有唾液的情況下用本文提供的組合物孵育?？赏ㄟ^測(cè)量結(jié)合和未結(jié)合的熒光來測(cè)定與牙齒的結(jié)合。可使用溫和的方法完成從牙齒提取結(jié)合的熒光發(fā)射多肽。例如，可根據(jù)他處所述(Siqueira和Oppenheim, Archives of Oral Biology, 54:437-444(2009))用濾紙采集條擦拭牙齒，并在溫和的條件下從紙中提取多肽。在一些情況下，可通過熒光顯微方法分析牙齒來評(píng)估不同情況下結(jié)合的熒光發(fā)射多肽的相對(duì)量?？墒褂萌魏魏线m的方法來評(píng)估本文提供的組合物對(duì)于改變牙齒外觀的能力。例如，可使用視覺檢查技術(shù)來測(cè)定本文提供的組合物是否能改變牙齒的外觀。該視覺檢查技術(shù)可包括如他處(Paravina 等,J.Esthet.Restor.Dent., 19:276-283 (2007))所述使用色板(shade guide)進(jìn)行對(duì)比。在一些情況下，可使用反射分光光度計(jì)測(cè)定本文提供的組合物改變牙齒外觀(如使牙齒看上去更白)的能力。該情況下，可用白色光源照射牙齒，并分析反射分光光度計(jì)(比色法)在不同波長所吸收的光量。然后可用過濾自光源的UV光重復(fù)這些測(cè)定。包含和排除UV光的情況下所得反射值的差異是牙齒表面的UV熒光譜(例如，可參見 Park 等，M.Dental Materials, 23:731-735(2007))。本文提供的組合物對(duì)于使用該組合物的人具有低毒性風(fēng)險(xiǎn)，可以含有一種或多種人來源的多肽，可含有一種或多種天然存在于食品或飲料產(chǎn)品中的多肽，和/或缺少潛在的毒性染料。以下實(shí)施例進(jìn)一步描述了本發(fā)明，這些實(shí)施例不限制權(quán)利要求書所述的本發(fā)明范圍。
實(shí)施例實(shí)施例1 一獲得酪蛋白多肽混合物的方法將酪蛋白、α-酪蛋白和β-酪蛋白與胰蛋白酶反應(yīng)來生產(chǎn)各酪蛋白磷酸肽(酪蛋白-ΡΡ、α-酪蛋白PP和β-酪蛋白ΡΡ)。胰蛋白酶和三種酪蛋白購自西格瑪奧德里奇公司(Sigma-Aldrich)。用于這些制備的方法改良自他處(Reynolds等，Anal.Biochem.，217:277-284(1994))所述的那些。簡單來說，在含有60mg多肽、0.05M Tris緩沖液(PH8)和1.2mg、0.6mg或0.3mg胰蛋白酶的3mL反應(yīng)中，對(duì)酪蛋白、α-酪蛋白和β-酪蛋白多肽進(jìn)行水解。使該反應(yīng)在室溫下(21° C)過夜進(jìn)行，此時(shí)用IM鹽酸將反應(yīng)混合物調(diào)至ΡΗ4.6。通過離心(12，OOOx gl5分鐘)移除該階段中的任何沉淀。然后在水中加入10%氯化鈣溶液以將鈣濃度調(diào)至1%，通過加入等體積的100%乙醇來沉淀含有多個(gè)磷酸絲氨酸基團(tuán)的多肽。通過離心(12，OOOx gl5分鐘)收集沉淀的多肽。將沉淀物重新溶解于0.5mL磷酸鹽緩沖液以用于分析。通過二辛可寧酸試驗(yàn)使用皮爾斯(Pierce) BCA試驗(yàn)試劑盒中的試劑和方案測(cè)定沉淀物中的多肽濃度。通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，使用
16.5%Tricine凝膠(伯樂公司(BioRad))測(cè)定胰蛋白酶水解后多肽的尺寸和相對(duì)濃度。將樣品(10 μ L)與等體積的Tricine樣品緩沖液(伯樂公司)混合,并在95° C加熱5分鐘，然后上樣到凝膠上，在1 00伏(恒定)室溫電泳100分鐘。通過在40%甲醇/10%乙酸溶液中室溫溫和振搖I小時(shí)來固定凝膠，然后通過在50%考馬斯亮藍(lán)(伯樂公司)和50%固定溶液中室溫孵育30分鐘進(jìn)行染色。最后，通過在I %乙酸中溫和振搖過夜對(duì)凝膠脫色。在含有60mg酪蛋白和1.2mg、0.6mg、及0.3mg胰蛋白酶的3mL反應(yīng)體積中于pH8水解酪蛋白。對(duì)于含有1.2mg、0.6mg和0.3mg胰蛋白酶的反應(yīng)，由水解反應(yīng)(通過沉淀方法回收)產(chǎn)生的多肽百分?jǐn)?shù)分別為9%、9%和13%。SDS-PAGE分析顯示，所有情況下，酪蛋白被水解為較小的多肽復(fù)合物。沉淀后，從所有三個(gè)反應(yīng)中回收的物質(zhì)主要是小分子量多肽。α-酪蛋白和β-酪蛋白在含有60mg多肽和L2mg胰蛋白酶的3mL反應(yīng)中于ρΗ8水解。就α -酪蛋白和β -酪蛋白而言氯化鈣/乙醇沉淀分別含有4%和7%的水解多肽。SDS-PAGE分析表明，沉淀樣品含有多肽混合物。實(shí)施例2形成BFP多肽和具有與牙齒組分相互作用或與之結(jié)合能力的分子的偶聯(lián)物將未標(biāo)記的β -酪蛋白(西格瑪奧德里奇公司)、β -酪蛋白-磷酸肽(根據(jù)實(shí)施例1制備)和富酪蛋白(1-25)-C(Biomatic公司)與獲自生物視野公司(Biovision)的BFP多肽偶聯(lián)，以此分別形成β -酪蛋白/BFP偶聯(lián)物、β -酪蛋白-PP/BFP偶聯(lián)物、和富酪蛋白(1-25)C/BFP偶聯(lián)物。本實(shí)施例描述了酪蛋白的偶聯(lián)，但用相似的方法實(shí)施α-酪蛋白和β-酪蛋白磷酸多肽的偶聯(lián)。簡單地說，用3mL含有l(wèi)mg/mL BFP,0.33mg/mL SM(PEG)4(皮爾斯公司(Pierce),目錄號(hào)22104)、2mM EDTA、0.05%吐溫20和0.05磷酸鈉緩沖液(pH7.2)的反應(yīng)制備經(jīng)馬來酰亞胺活化的BFP。使該反應(yīng)在室溫進(jìn)行40分鐘，然后在經(jīng)5mM MES緩沖液(pH6)、2mM EDTAJP 0.05%吐溫平衡的G-25S印hadex柱上脫鹽。在含有4.5mg/mL β -酪蛋白、5mM2_亞氨基四氫噻吩、2mM EDTA, 0.05%吐溫20、和
0.05M硼酸鈉緩沖液(pH8.0)的2mL反應(yīng)中制備經(jīng)巰基活化的β -酪蛋白。使該反應(yīng)在室溫進(jìn)行I小時(shí)，然后在經(jīng)0.05Μ磷酸鈉緩沖液(ρΗ7.0)、2mM EDTA、和0.05%吐溫20平衡的G-25Sephadex柱上脫鹽。該物質(zhì)用于制備后立即進(jìn)行的偶聯(lián)反應(yīng)。在含有0.37mg/mL經(jīng)馬來酰亞胺活化的BFP、1.57mg/mL經(jīng)巰基活化的β -酪蛋白、2mM EDTA,0.05%吐溫20、和0.05M磷酸鈉緩沖液(ρΗ7.0)的3.825mL反應(yīng)中制備β-酪蛋白/BFP偶聯(lián)物。使該反應(yīng)在室溫反應(yīng)I小時(shí)，然后通過添加在去離子水中新鮮制備的
0.038mL0.1M N-甲基馬來酰亞胺溶液來淬滅任何剩余的巰基。通過離心濃縮器(IOkDa截?cái)?將偶聯(lián)物濃縮至1.5mL，然后施加到含有0.05%吐溫20的磷酸鹽緩沖液平衡的HiLoad Superdex20016/600柱(GE醫(yī)療保健公司(GEHealthcare))上。以1.1mL/分鐘洗脫該柱,收集1.5mL組分并通過突光(320nm激發(fā),445nm發(fā)射)和總蛋白濃度(二辛可寧酸試驗(yàn))對(duì)其進(jìn)行分析。由于β-酪蛋白和BFP都含有多個(gè)活化基團(tuán)，反應(yīng)中形成各種大小的偶聯(lián)物。不同大小的偶聯(lián)物示例是β -酪蛋白-BFP、β -酪蛋白-BFP-β -酪蛋白、β -酪蛋白-BFP-β -酪蛋白-BFP等。Superdex200柱基于分子大小從偶聯(lián)物中分離較小的原料。然而，該柱也部分分離反應(yīng)中產(chǎn)生的不同大小的偶聯(lián)物。所述柱產(chǎn)物收集在兩個(gè)庫中:先從柱上洗脫較的較高分子量產(chǎn)物和在較高分子量產(chǎn)物之后但在未反應(yīng)的原料前洗脫的較低分子量產(chǎn)物。通過分子過濾將兩個(gè)產(chǎn)物庫濃縮后，較低分子量庫(0.28mg/mL BFP含量)相較高分子量庫(0.36mg/mL BFP含量)顯示與牙齒結(jié)合更高。在下述實(shí)施例中使用更高結(jié)合的低分子量組分。

將β -酪蛋白磷酸肽巰基化，與經(jīng)馬來酰亞胺活化的BFP連接,在Superdex200柱上純化，并根據(jù)所述濃縮β -酪蛋白。β -酪蛋白磷酸肽-BFP的較高分子量組分的濃度為
0.38mg/mL,較低分子量組分的濃度為0.48mg/mL。在含有1.lmg/mL經(jīng)馬來酰亞胺活化的BFP、1.lmg/mL富酪蛋白(l_25)C、2mMEDTA,0.05%吐溫20、和0.05M磷酸鈉緩沖液(pH7.0)的1.4mL反應(yīng)中制備典型的富酪蛋白(1-25)C/BFP偶聯(lián)物。富酪蛋白(1-25) C含有游離的巰基，不需要活化。雖然每個(gè)富酪蛋白分子只有一個(gè)活化的基團(tuán)，但多個(gè)富酪蛋白分子能結(jié)合單個(gè)活化的BFP，產(chǎn)生了產(chǎn)物分布。產(chǎn)物在Superdex200柱上部分互相分離，得到較高分子量組分(0.22mg/mL BFP含量)和較低分子量組分(036mg/mL BFP含量)。在下述結(jié)合/提取實(shí)施例中使用所述較高分子量組分。實(shí)施例3對(duì)牙齒施加含有偶聯(lián)物的BFP多肽將β -酪蛋白/BFP偶聯(lián)物(約0.09mg/mL)、β -酪蛋白-PP/BFP偶聯(lián)物(約
0.24mg/mL)和富酪蛋白(1_25)C/BFP偶聯(lián)物(約0.05mg/mL)與未涂覆的牙齒或涂覆唾液的牙齒一起孵育約I小時(shí)。孵育I小時(shí)后，清洗該牙齒，先用0.4% EDTA再用2% SDS從牙齒上提取結(jié)合的蛋白。通過熒光試驗(yàn)(表I)測(cè)定各提取溶劑中所提取的蛋白量。表1.
權(quán)利要求
1.一種改變牙齒外觀的方法，所述方法包括對(duì)牙齒施加熒光發(fā)射多肽，其中所述熒光發(fā)射多肽發(fā)射的熒光改變所述牙齒的外觀。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述牙齒是人的牙齒。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括改變所述牙齒外觀從而所述牙齒看上去更白。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光發(fā)射多肽是BFP多肽。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光發(fā)射多肽與一種分子偶聯(lián)，所述分子具有與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述分子是多肽。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述分子是酪蛋白多肽。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述分子是富酪蛋白多肽。
9.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述分子是具有與釉質(zhì)、羥基磷灰石或獲得性牙齒膜相互作用或與之結(jié)合能力的分子。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光發(fā)射多肽是融合多肽，所述融合多肽包含酪蛋白多肽的氨基酸序列。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光發(fā)射多肽是融合多肽，所述融合多肽包含富酪蛋白多肽的氨基酸序列。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光發(fā)射多肽存在牙膏中，且所述應(yīng)用步驟包括向所述牙齒應(yīng)用所述牙膏。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光發(fā)射多肽是聚合物的一個(gè)單位，所述聚合物包含兩個(gè)或多個(gè)熒光發(fā)射多肽。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述聚合物與酪蛋白多肽結(jié)合以形成復(fù)合物，其中將所述復(fù)合物施用于所述牙齒。
15.一種包含熒光發(fā)射多肽和酪蛋白多肽的組合物。
16.一種包含熒光發(fā)射多肽和富酪蛋白多肽的組合物。
17.—種嵌合多肽,所述嵌合多肽包含突光發(fā)射多肽的20或更多個(gè)殘基長度的氨基酸序列以及酪蛋白多肽的20或更多個(gè)殘基長度的氨基酸序列。
18.如權(quán)利要求17所述的嵌合多肽,其特征在于,所述嵌合多肽包含全長突光發(fā)射多肽或其片段，所述片段與所述全長熒光發(fā)射多肽至少約90%相同，其中所述嵌合多肽包含全長酪蛋白多肽或其片段，所述片段與所述全長酪蛋白多肽至少約80 %相同，其中所述嵌合多肽包含發(fā)射熒光的能力和與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。
19.一種嵌合多肽,所述嵌合多肽包含突光發(fā)射多肽的20或更多個(gè)殘基長度的氨基酸序列以及富酪蛋白多肽的20或更多個(gè)殘基長度的氨基酸序列。
20.如權(quán)利要求19所述的嵌合多肽,其特征在于，所述嵌合多肽包含全長突光發(fā)射多肽或其片段，所述片段與所述全長熒光發(fā)射多肽至少約90%相同，其中所述嵌合多肽包含全長富酪蛋白多肽或其片段，所述片段與所述全長富酪蛋白多肽至少約80%相同，其中所述嵌合多肽包含發(fā)射熒光的能力和與牙齒或牙齒組分相互作用或與之結(jié)合的能力。
全文摘要
本文提供了用于提供牙齒潔白外觀的方法和材料。例如，提供了方法和材料用于將一種或多種熒光發(fā)射多肽(例如藍(lán)色熒光蛋白(BFP))接觸牙齒以提供牙齒更白外觀。
文檔編號(hào)A61Q11/00GK103179940SQ201180051197
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2011年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月24日
發(fā)明者S·J·布里奇曼, R·S·布羅迪, T·J·祖潘西奇 申請(qǐng)人:安全白有限公司