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      膜微粒的制備及其在預(yù)防和治療電離輻射導(dǎo)致的造血系統(tǒng)損傷和促進(jìn)紅系細(xì)胞分化中的應(yīng)用的制作方法

      文檔序號(hào):12097114閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種制備膜微粒的方法,其包括采用聚乙二醇即PEG處理細(xì)胞培養(yǎng)物上清。

      2.一種制備膜微粒的方法,所述方法包括以下步驟:

      a)收集細(xì)胞培養(yǎng)物上清;

      b)將所述培養(yǎng)物上清離心;

      c)收集并用聚乙二醇即PEG處理步驟b)中經(jīng)離心的上清;

      d)離心步驟c)所獲得的上清,并棄去經(jīng)離心的上清,保留沉淀;

      e)用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸沉淀,獲得膜微粒。

      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其中所述細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞或成纖維細(xì)胞或造血細(xì)胞。

      4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法,其在步驟a)之前進(jìn)一步包括誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡以釋放膜微粒的步驟。

      5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其中該誘導(dǎo)步驟包括在低氧低營(yíng)養(yǎng)條件下培養(yǎng)所述間充質(zhì)干細(xì)胞或成纖維細(xì)胞或造血細(xì)胞。

      6.根據(jù)權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述的方法,其中在步驟b)和d)中各自獨(dú)立地采用轉(zhuǎn)速小于或等于10,000rpm的低速離心機(jī)進(jìn)行離心。

      7.根據(jù)權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)所述的方法,其中步驟b)和d)中各自獨(dú)立地以2,000rpm至10,000rpm、2,500rpm至8,000rpm、2,600rpm至7,000rpm、2,700rpm至6,000rpm、2,800rpm至5,000rpm、2,900rpm至4,000rpm、或3,000rpm至3,500rpm的速度離心。

      8.根據(jù)權(quán)利要求2-7任一項(xiàng)所述的方法,其中步驟b)中在約4℃離心5-15分鐘,和/或在步驟d)中在約4℃離心25-35分鐘。

      9.根據(jù)權(quán)利要求2-8任一項(xiàng)所述的方法,其中所述PEG的分子量范圍為2000-8000。

      10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中所述PEG選自由下列組成的組:PEG8000、PEG7000、PEG6000、PEG5000、PEG4000、PEG3000和PEG2000。

      11.根據(jù)權(quán)利要求2-10任一項(xiàng)所述的方法,其中在步驟c)中,以2:1至6:1的PEG/血清體積比加入PEG。

      12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法,其中PEG/血清體積比為6:1、5:1、4:1、3:1或2:1。

      13.根據(jù)權(quán)利要求2-12任一項(xiàng)所述的方法,其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞為臍帶、臍帶血、骨髓、胎盤(pán)組織、脂肪組織或牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞、或其組合。

      14.膜微粒在制備用于預(yù)防或治療電離輻射導(dǎo)致的造血系統(tǒng)損傷的藥物中的用途。

      15.膜微粒在制備促進(jìn)造血細(xì)胞紅系分化的藥物中的用途。

      16.膜微粒在促進(jìn)造血細(xì)胞紅系分化中的非治療用途。

      17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的用途,其中所述膜微粒獲自骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞、或成纖維細(xì)胞。

      18.根據(jù)權(quán)利要求15或16所述的用途,其中所述膜微粒獲自造血細(xì)胞或TF-1細(xì)胞。

      19.根據(jù)權(quán)利要求14-18任一項(xiàng)所述的用途,其中所述膜微粒是經(jīng)PEG處理的膜微粒。

      20.根據(jù)權(quán)利要求14-19任一項(xiàng)所述的用途,其中所述膜微粒是通過(guò)權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的方法制備的。

      21.根據(jù)權(quán)利要求14或17所述的用途,其中所述造血損傷選自由下列組成的組:骨髓造血干細(xì)胞耗竭;外周血白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板和/或血紅蛋白水平低下;以及造血組織損傷。

      22.根據(jù)權(quán)利要求14-21任一項(xiàng)所述的用途,其中所述膜微粒以治療或預(yù)防有效量或促進(jìn)分化有效量施用。

      23.根據(jù)權(quán)利要求14-22任一項(xiàng)所述的用途,其中所述膜微粒與另外的治療劑聯(lián)合應(yīng)用。

      24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途,其中所述治療劑選自激素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、非細(xì)胞因子藥物、輻射防護(hù)劑和/或抗氧化劑。

      25.膜微粒,其根據(jù)權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所述的方法獲得。

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