專利名稱：檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法
檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于酒精濃度檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法。
背景技術(shù)：
許多行業(yè)都需要對(duì)乙醇含量進(jìn)行定性或定量檢測分析，比如各國對(duì)機(jī)動(dòng)車駕駛員血液酒精含量均有嚴(yán)格要求。在我國，駕駛員血液酒精濃度達(dá)到0.2mg/ml即為酒后駕車，當(dāng)酒精濃度達(dá)到0.8mg/ml則視為醉酒駕車。近些年，酒后駕車釀慘禍的悲劇屢見不鮮。盡管交通執(zhí)法部門已經(jīng)加大了執(zhí)法力度與懲處力度，但始終有駕駛員鋌而走險(xiǎn)；此外，也有部分駕駛員因其不能準(zhǔn)確判斷出自身的酒精含量而違法駕駛，這給其他道路交通參與者帶來極大的安全隱患。因此，研制一種能便捷、準(zhǔn)確檢測體內(nèi)酒精含量的手段極具現(xiàn)實(shí)意義。
通過直接對(duì)人體血液酒精濃度進(jìn)行抽樣分析檢測能準(zhǔn)確得到酒精濃度值，但該檢測方法耗時(shí)長、費(fèi)用高，且需在實(shí)驗(yàn)室用專業(yè)儀器進(jìn)行分析測試，不具有便捷性、廉價(jià)性。目前，交警部門執(zhí)法檢查時(shí)常用呼氣酒精檢測儀來檢測推算出血液酒精濃度值，因?yàn)槿梭w內(nèi)血液酒精濃度(mg/ml)=呼出氣體中酒精濃度(mg/ml) X2200。呼氣式檢測方法檢測時(shí)間短，具有便攜性，但由于呼出氣體中酒精濃度遠(yuǎn)低于血液酒精濃度，導(dǎo)致其誤差大，準(zhǔn)確性不好。據(jù)實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)報(bào)道證明:唾液酒精濃度(mg/ml)=血液酒精濃度(mg/ml) X 1.07，且體重、性別和年齡等因素對(duì)唾液/血液中酒精濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系無顯著影響，這兩種體液內(nèi)酒精濃度值具有良好的一致性。因此，在人體酒精濃度檢測時(shí)，除血檢和呼氣式檢測以外，還可以考慮對(duì)唾液中酒精濃度進(jìn)行檢測，換算出血液酒精濃度值。
目前，已有幾種酶膜可檢測唾液中酒精濃度。如:申請(qǐng)?zhí)枮?00410041987的專利申請(qǐng)，用酚蘭作為顯色劑，將濾紙用乙醇脫氫酶與輔酶NAD+配制的混合酶液浸透后，使乙醇脫氫酶及輔酶NAD+物理吸附在濾紙上。檢測時(shí)將濾紙與唾液接觸，唾液中的乙醇與濾紙上吸附的乙醇脫氫酶及輔酶NAD+作用，生成乙醛和酶氧化底物，酶氧化底物與酚蘭指示劑作用生成藍(lán)色或紅色的產(chǎn)物，根據(jù)顏色變化可推算酒精濃度；申請(qǐng)?zhí)枮?00510013235的專利申請(qǐng)，利用四甲基聯(lián)苯胺作為顯色劑，利用被濾紙吸附的乙醇氧化酶氧化乙醇生成過氧化氫使顯色劑褪色，利用褪色程度判斷樣品酒精含量。
上述的便攜式檢測體系中使用了乙 醇脫氫酶和乙醇氧化酶，制備原理均是利用物理吸附將酶固定在濾紙上。這種制備方法操作簡單，但由于濾紙質(zhì)密，酶只是物理吸附在濾紙表面，導(dǎo)致其熱穩(wěn)定性以及酸堿穩(wěn)定性差，使得檢測誤差大，檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。同時(shí)由于濾紙表面質(zhì)密，比表面積較小，吸附的酶量少且易脫落，使其檢測靈敏度低，也使其檢測誤差大。并且，乙醇氧化酶由八個(gè)亞基組成，在固定化和使用過程中酶的任一亞基脫落，均會(huì)造成酶活性不同程度的喪失，增大檢測誤差；而將八個(gè)亞基均固定在基底載體上將破壞酶的空間結(jié)構(gòu)、增加酶對(duì)底物作用時(shí)的空間位阻，從而影響酶的活性，又降低其檢測靈敏度和精確度。因此，目前的固定化乙醇氧化酶檢測體系均未能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、靈敏、多次重復(fù)使用等要求。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，該法制備出的固定化酶納米纖維膜能簡單、便捷的檢測出唾液中的酒精濃度，其檢測靈敏度高，檢測結(jié)果準(zhǔn)確，循環(huán)使用次數(shù)多。
本發(fā)明實(shí)現(xiàn)其發(fā)明目的所采用的第一種技術(shù)方案是，一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是:
A、用靜電紡絲法制備出表面帶氨基或羥基的納米纖維膜；
B、將A步的納米纖維膜接枝端羧基聚乙二醇，得到接枝有聚合物的納米纖維膜；
C、將B步的接枝有聚合物的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中6-8小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜；
D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入陽離子聚合物溶液中1-3小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜；
E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中3-5分鐘，取出、晾干，SP得。
本發(fā)明實(shí)現(xiàn)其發(fā)明目的所采用的第二種技術(shù)方案是，2、一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是:
A、用靜電紡絲法制備出表面帶酸酐基或醛基的納米纖維膜；
B、將A步的納米纖維膜接枝聚乙烯亞胺、得到接枝有聚合物的納米纖維膜；
C、將B步得到的接枝有聚合物的納米纖維膜浸入戊二醛溶液中1-2小時(shí)、取出，得到表面帶有醛基的納米纖維膜；再將表面帶有醛基的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液6-8小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜；
D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入陽離子聚合物溶液1-3小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜；
E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中3-5分鐘，取出、晾干，SP得。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
一、采用納米纖維膜用作固定化酶的載體，相比于濾紙具有更高的孔隙率和更大的孔徑，比表面積更高，能更高效、更大量的固定乙醇氧化酶，從而明顯提高其檢測靈敏度和精度。
二、通過納米纖維膜上的氨基或`羥基與端羧基聚乙二醇上的羧基，或者通過納米纖維膜上的酸酐基、醛基與聚乙烯亞胺的氨基共價(jià)結(jié)合，將聚合物共價(jià)接枝在納米纖維膜表面。再通過端羧基聚乙二醇上的端羧基或者聚乙烯亞胺上氨基轉(zhuǎn)化成的醛基與乙醇氧化酶的氨基共價(jià)結(jié)合，將乙醇氧化酶通過聚合物共價(jià)接枝在納米纖維膜上；較之物理吸附的乙醇氧化酶其結(jié)合強(qiáng)度高、固定量多，提高了其檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度，也可有效增加其循環(huán)使用次數(shù)。
三、水溶性聚合物聚乙二醇和聚乙烯亞胺作為手臂通過功能基團(tuán)與乙醇氧化酶共價(jià)結(jié)合，可減少乙醇氧化酶對(duì)底物乙醇分子作用時(shí)的空間位阻，也提高了其檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度。
四、采用了多位點(diǎn)固定、化學(xué)鍵合和電荷間物理作用相結(jié)合的方法。乙醇氧化酶先通過聚合物共價(jià)接枝在納米纖維膜上，再通過陽離子聚合物的靜電作用，使乙醇氧化酶的八個(gè)亞基固定。從而使得本發(fā)明的乙醇氧化酶八個(gè)亞基多位點(diǎn)“懸空”固定，即能保持乙醇氧化酶的空間結(jié)構(gòu)和活性，又能使得乙醇氧化酶的亞基不易脫落，增加其循環(huán)使用次數(shù)，各次檢測的一致性和可靠性高。
五、使用時(shí)將其與唾液接觸，唾液中的乙醇與乙醇氧化酶作用生成過氧化氫使顯色劑(靛藍(lán))褪色，利用褪色程度即可得出唾液中的酒精含量，同時(shí)利用血液中的酒精含量與唾液中的酒精含量成一定比例，可較準(zhǔn)確得到血液中的酒精含量。使用后，將其用水清洗后，再重新浸入靛藍(lán)溶液3-5分鐘即可再次使用。其檢測簡單、便捷、可多次使用，便于推廣。
上述A步中的納米纖維膜的纖維直徑為300納米到1.5微米，表面帶的氨基或羥基的密度為2-3.5nmol/cm2。
上述A步中的納米纖維膜的纖維直徑為300納米到1.5微米，表面帶的酸酐基或醛基的密度為2-3.5nmol/cm2。
上述B步的接枝有聚合物的納米纖維膜中聚合物的接枝密度為0.2-0.7nmol/cm2。
上述C步的多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜上乙醇氧化酶的接枝量為70_180mg/g。
上述D步中的陽離子聚合物為聚乙烯亞胺、聚賴氨酸、聚組氨酸或殼聚糖。
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。


圖1是本發(fā)明實(shí)施例一的方法制得的固定化酶納米纖維膜對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)色卡，色卡下方是相應(yīng)的乙醇濃度(mg/ml)。
圖2是本發(fā)明實(shí)施例一的方法制得的固定化酶納米纖維膜重復(fù)使用性結(jié)果。圖中橫坐標(biāo)為使用次數(shù)，縱坐標(biāo)為納米纖維膜檢測乙醇后的褪色程度。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例一
一種檢測唾液·中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是:
A、利用靜電紡絲裝置制備出表面帶有氨基的聚苯乙烯納米纖維膜，氨基密度為2.0nmol/cm2(即每平方厘米的納米纖維膜含有氨基的量為2.0納摩爾)。
B、將A步的納米纖維膜浸入端羧基聚乙二醇溶液中I小時(shí)后取出晾干，得到接枝有端羧基聚乙二醇聚合物的納米纖維膜，接枝密度為0.4nmol/cm2 (即每平方厘米的納米纖維膜上接枝0.4納摩爾的端羧基聚乙二醇聚合物)；
C、將B步的接枝有聚合物的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中6小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜，納米纖維膜上乙醇氧化酶的接枝量為70mg/g(即每克納米纖維膜上接枝70毫克乙醇氧化酶)；
D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入聚乙烯亞胺溶液中2小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜；
E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中4分鐘，取出、晾干，SP得。
圖1是本例方法的納米纖維膜對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)色卡，色卡下方是相應(yīng)的乙醇濃度(mg/ml)。其做法是將固定化纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中4分鐘后，再放入含已知乙醇濃度的人工唾液中，I分鐘后取出，纖維膜顏色即為該酒精濃度的標(biāo)準(zhǔn)色，一系列酒精濃度的標(biāo)準(zhǔn)色構(gòu)成標(biāo)準(zhǔn)色卡。
從圖1可以看出，實(shí)施例1的纖維膜能方便、快捷的檢測出濃度范圍為0-1.0mg/ml的乙醇濃度。
圖2是本例方法制得的固定化酶納米纖維膜重復(fù)使用結(jié)果。圖中橫坐標(biāo)為使用次數(shù)，縱坐標(biāo)為納米纖維膜檢測乙醇后的褪色程度，其含義是每次測試前后纖維膜顏色基數(shù)之差與測試前顏色基數(shù)的比值(以百分比表示)，其中顏色基數(shù)通過Image-PiO Plus軟件處理纖維膜照片獲得。
圖中左邊的一組為用納米纖維膜對(duì)0.2mg/ml乙醇進(jìn)行檢測清洗后、浸入靛藍(lán)溶液4分鐘、再進(jìn)行下次檢測；一共重復(fù)9次檢測得到的褪色程度；最左邊的直方圖為標(biāo)準(zhǔn)色卡中0.2mg/ml乙醇的褪色程度。從該組直方圖可以看出，用本例的納米纖維膜循環(huán)使用，前8次檢測得到的褪色程度差別很小、一致性好，僅是第9次檢測得到的顏色基數(shù)略為偏大(檢出乙醇濃度略為偏 低)。
圖中右邊的一組為用納米纖維膜對(duì)0.8mg/ml乙醇進(jìn)行檢測清洗后、浸入靛藍(lán)溶液4分鐘、再進(jìn)行下次檢測；一共重復(fù)9次檢測得到的褪色程度；該組最左邊的直方圖為標(biāo)準(zhǔn)色卡中0.8mg/ml乙醇的褪色程度。從該組直方圖可以看出，用本例的納米纖維膜循環(huán)使用，前8次檢測得到的褪色程度差別很小、一致性好，僅是第9次檢測得到的顏色基數(shù)略為偏大(檢出乙醇濃度略為偏低)。
圖2說明，本例的納米纖維膜至少可以重復(fù)使用8次。
實(shí)施例二
一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是:
A、利用靜電紡絲裝置制備出表面帶有氨基的聚苯乙烯納米纖維膜，氨基密度為3.0nmol/cm2 ；
B、將A步的納米纖維膜浸入端羧基聚乙二醇溶液中3小時(shí)后取出晾干，得到接枝有端羧基聚乙二醇聚合物的納米纖維膜，接枝密度為0.2nmol/cm2 ；
C、將B步的接枝有聚合物的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中7小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜，納米纖維膜上乙醇氧化酶的接枝量為IOOmg/g ;
D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入聚賴氨酸溶液中3小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜；
E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中3分鐘，取出、晾干，SP得。
實(shí)施例三
一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是:
A、利用靜電紡絲裝置制備出表面帶有羥基的聚苯乙烯納米纖維膜，羥基密度為3.5nmol/cm2 ；
B、將A步的納米纖維膜浸入端羧基聚乙二醇溶液中3小時(shí)后取出晾干，得到接枝有端羧基聚乙二醇聚合物的納米纖維膜，接枝密度為0.7nmol/cm2 ；
C、將B步的接枝有聚合物的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中8小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜；納米纖維膜上乙醇氧化酶的接枝量為180mg/g ;
D、將接枝乙醇氧化酶 的納米纖維膜浸入聚組氨酸溶液中I小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜；
E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中5分鐘，取出、晾干，SP得。
實(shí)施例四
本例與實(shí)施例三基本相同，不同的是所述D步中的陽離子聚合物為殼聚糖。
實(shí)施例五
一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是:
A、利用靜電紡絲裝置制備出表面帶有酸酐基的聚苯乙烯-馬來酸酐共聚物納米纖維膜，酸酐基密度為2.0nmol/cm2 ；
B、將A步的納米纖維膜浸入聚乙烯亞胺溶液中2小時(shí)得到接枝有聚合物的納米纖維膜，接枝密度為0.2nmol/cm2。
C、將接枝有聚合物的納米纖維膜浸入戊二醛溶液中2小時(shí)、取出，得到表面帶有醛基的納米纖維膜，再將表面帶有醛基的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中8小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜，納米纖維膜上乙醇氧化酶的接枝量為70mg/g ；
D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入聚乙烯亞胺溶液中2小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜；
E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中5分鐘，取出、晾干，SP得。
實(shí)施例六
—種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是:
A、利用靜電紡絲裝置制備出表面帶有酸酐基的聚苯乙烯-馬來酸酐共聚物納米纖維膜，酸酐基密度為2.5nmol/cm2 ；
B、將A步的納米纖維膜浸入聚乙烯亞胺溶液中2小時(shí)得到接枝有聚合物的納米纖維膜，接枝密度為0.25nmol/cm2 ；
C、將接枝有聚合物的納米纖維膜浸入戊二醛溶液中I小時(shí)、取出，得到表面帶有醛基的納米纖維膜，再將表面帶有醛基的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中6小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜。納米纖維膜上乙醇氧化酶的接枝量為125mg/g。
D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入殼聚糖溶液I小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜；
E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液4分鐘，取出、晾干，即得。
實(shí)施例七
一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是:
A、利用靜電紡絲裝置制備出表面帶有醛基的聚苯乙烯納米纖維膜，醛基密度為3.5nmol/cm2 ；
B、將A步的納米纖維膜浸入聚乙烯亞胺溶液中I小時(shí)，得到接枝有聚合物的納米纖維膜，接枝密度為0.7nmol/cm2 ；
C、將接枝有聚合物的納米纖維膜浸入戊二醛溶液中1.5小時(shí)、取出，得到表面帶有醛基的納米纖維膜，再將表面帶有醛基的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中7小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜。納米纖維膜上乙醇氧化酶的接枝量為180mg/g ；
D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入聚賴氨酸溶液中3小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞甲基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜；
E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中3分鐘，取出、晾干，SP得。
實(shí)施例八
本例與 實(shí)施例七基本相同，不同的是所述D步中的陽離子聚合物為聚組氨酸。
權(quán)利要求
1.一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是: A、用靜電紡絲法制備出表面帶氨基或羥基的納米纖維膜； B、將A步的納米纖維膜接枝端羧基聚乙二醇，得到接枝有聚合物的納米纖維膜； C、將B步的接枝有聚合物的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中6-8小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜； D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入陽離子聚合物溶液1-3小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜； E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液中3-5分鐘，取出、晾干，即得。
2.一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其步驟是: A、用靜電紡絲法制備出表面帶酸酐基或醛基的納米纖維膜； B、將A步的納米纖維膜接枝聚乙烯亞胺、得到接枝有聚合物的納米纖維膜； C、將B步得到的接枝有聚合物的納米纖維膜浸入戊二醛溶液中1-2小時(shí)、取出，得到表面帶有醛基的納米纖維膜；再將表面帶有醛基的納米纖維膜浸入乙醇氧化酶溶液中6-8小時(shí)、取出，得到多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜； D、將接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜浸入陽離子聚合物溶液1-3小時(shí)、固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，取出得到乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜； E、將乙醇氧化酶亞基固定的納米纖維膜浸入靛藍(lán)溶液3-5分鐘，取出、晾干，即得。
3.如權(quán)利 要求1所述的一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其特征在于，所述A步中的納米纖維膜的纖維直徑為300納米到1.5微米，表面帶的氨基或羥基的密度為2-3.5nmol/cm2。
4.如權(quán)利要求2所述的一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其特征在于，所述A步中的納米纖維膜的纖維直徑為300納米到1.5微米，表面帶的酸酐基或醛基的密度為2-3.5nmol/cm2。
5.如權(quán)利要求1或2所述的一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其特征在于:所述B步的接枝有聚合物的納米纖維膜中聚合物的接枝密度為0.2-0.7nmol/cm2。
6.如權(quán)利要求1或2所述的一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其特征在于:所述C步的多位點(diǎn)共價(jià)接枝乙醇氧化酶的納米纖維膜上乙醇氧化酶的接枝量為 70-180mg/g。
7.如權(quán)利要求1或2所述的一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，其特征在于:所述D步中的陽離子聚合物為聚乙烯亞胺、聚賴氨酸、聚組氨酸或殼聚糖。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測唾液中酒精含量的固定化酶納米纖維膜的制備方法，該制備方法通過聚乙二醇或聚乙烯亞胺等聚合物作為手臂分子多位點(diǎn)共價(jià)結(jié)合乙醇氧化酶，進(jìn)一步通過聚乙烯亞胺、聚賴氨酸、聚組氨酸或殼聚糖等通過電荷間物理作用固定乙醇氧化酶的多個(gè)亞基，再吸附上靛藍(lán)作為顯色底物的原理而制備。檢測時(shí)，樣品中的乙醇被乙醇氧化酶氧化后產(chǎn)生過氧化氫，過氧化氫使靛藍(lán)褪色，靛藍(lán)的褪色程度與標(biāo)準(zhǔn)色卡對(duì)照可以方便計(jì)算出樣品中的乙醇濃度。該制備方法靈敏度高、操作簡便、價(jià)格低廉并且可以多次重復(fù)使用，可方便地用于執(zhí)法部門查處酒后駕車，為執(zhí)法過程提供可靠的證據(jù)。
文檔編號(hào)D06M15/53GK103232987SQ201310152829
公開日2013年8月7日 申請(qǐng)日期2013年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月27日
發(fā)明者李孝紅, 劉清杰, 趙龍, 嚴(yán)仕力 申請(qǐng)人:西南交通大學(xué)