專利名稱：英語音標符號系統(tǒng)的制作方法
專利說明異黃酮類前藥、其組合物和涉及它們的治療方法 發(fā)明領域 本發(fā)明涉及化合物、制劑、飲料、食物、方法和治療用途，涉及、含有、包含、包括和/或制備特定的異黃烯(isoflavene)前藥及其類似物。特別地，本發(fā)明涉及異黃酮類及其衍生物的磷酸酯、包含其的藥物及其治療用途。 背景 異黃酮及其許多衍生物具有非常廣泛的重要生物學特性，其中包括雌激素作用。異黃酮如染料木素和黃豆苷元表現(xiàn)出具有調節(jié)或降低體內的雌激素類固醇水平的作用。最近，異黃烯特別是脫氫雌馬酚表現(xiàn)出具有強效的化學治療特性。在一些生物活性領域，甚至有些矛盾，例如，一些異黃酮類為雌激素受體激動劑，而另一些為雌激素受體拮抗劑。人們相信降低體內雌激素類固醇水平和較低的癌癥發(fā)病率如乳腺癌和許多其它疾病和病癥之間有很大關系。
但是，異黃酮類在動物中的生物活性在異黃酮家族的譜系中并不是一成不變的(conserved)，因此無法預測，特別是涉及到生物利用度時。因此，基本異黃酮類分子的每種特定的結構改變在動物中會產(chǎn)生從無效到有效的高度個體化的生物學特性。此外，人們認為一些生物活性分子的綴合物如一些生物活性雌激素類固醇的磷酸酯，會在很大程度上失去活性。
現(xiàn)在迫切需要鑒別新型的、改良的、更好的和/或可選擇的藥用組合物和藥物來治療、改善和預防疾病、病癥和機能紊亂。另外也需要提供新型的異黃酮類化合物和衍生物來改善制劑、生物利用度和這些化合物的傳遞。還需要內科醫(yī)生和普通大眾可用的新型和與眾不同的療法來與大量各種類型的影響人類健康的疾病和機能紊亂作斗爭。
因此，需要提供治療學上有益的可表現(xiàn)出改善的、可替代的或至少可比得上已知異黃酮類化合物的生物活性和生物利用特性的新型異黃酮類化合物及其衍生物。 發(fā)明概述 本發(fā)明的發(fā)明者驚訝地發(fā)現(xiàn)，異黃酮類化合物的磷酸酯表現(xiàn)出良好的水溶性和生物利用度，并顯示出有益的生物學特性。特別地，當給予磷酸酯時，其會展現(xiàn)出廣泛的治療活性，包括調節(jié)(address)體內雌激素水平的能力。
雖然不想被理論限制，發(fā)明者相信異黃烯前藥及其衍生物，特別是本發(fā)明的異黃酮類磷酸酯會導致雌激素類固醇供應減少，降低雌激素相關性疾病和病癥的風險或嚴重性。發(fā)明者還認為本發(fā)明的異黃酮類磷酸酯會提供哺乳動物分子靶范圍的調節(jié)。典型地，這些分子靶與信號傳導過程緊密相關，所述信號傳導過程為關鍵的細胞過程的基礎，如細胞生長、分化、遷移和死亡。因此可以預見，這些令人驚訝的生化作用對包括人類在內的動物的健康具有廣泛和重要的意義。本文描述了本發(fā)明的這些和其它優(yōu)選的目標化合物。
因此，本發(fā)明的一個方面提供了具通式I的異黃酮類磷酸酯化合物或其藥學可接受鹽
其中 R1、R2和Z獨立為M2PO4-、氫、羥基、OR9、OC(O)R10、OS(O)R10、CHO、C(O)R10、COOH、CO2R10、CONR3R4、烷基、鹵代烷基、芳烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷氧基芳基、巰基(thio)、烷硫基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基或鹵素，或 R2如前定義，R1和Z與連接它們的碳原子一起形成選自下述基團的五元環(huán)，
R1如前定義，R2和Z與連接它們的碳原子一起形成選自下述基團的五元環(huán)
W為R1，A和B與連接它們的碳原子一起形成選自下述基團的六元環(huán)
其中 R3為氫、烷基、芳基、芳烷基、氨基酸、C(O)R11或CO2R12，其中R11為氫、烷基、芳基、芳烷基或氨基酸，R12為氫、烷基、鹵代烷基、芳基、雜芳基或芳烷基， R4為氫、烷基或芳基， 或R3和R4與連接它們的氮原子一起形成吡咯烷基或哌啶基， R5為M2PO4-、氫、其中R11如前定義的COR11或其中R12如前定義的CO2R12， R6為M2PO4-、氫、羥基、烷基、芳基、氨基、巰基、NR3R4、其中R11如前定義的COR11、其中R12如前定義的CO2R12或CONR3R4， R7為氫、其中R11如前定義的COR11、烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基或其中每個R13獨立為氫、烷基或芳基的Si(R13)3， R8為M2PO4-、氫、羥基、烷氧基或烷基， R9為烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、其中R11如前定義的C(O)R11或其中R13如前定義的Si(R13)3， R10為氫、烷基、鹵代烷基、氨基、芳基、芳烷基、氨基酸、烷基氨基或二烷基氨基， 圖形″″代表單鍵或雙鍵， M獨立為氫、直鏈或支鏈烷基、烯基、炔基、烷氧基烷基、烷硫基烷基或氨基烷基、取代或非取代的環(huán)烷基、芳基、芳烷基或烷基芳基，以及取代的環(huán)烷基，其中至少一個環(huán)包含一個或多個在該至少一個環(huán)上的氮、硫、氧、磷或硅雜原子； T獨立為氫、烷基或芳基， X為O、NR4或S，優(yōu)選為O，和 Y為
其中 R14、R15和R16獨立為M2PO4-、氫、羥基、OR9、OC(O)R10、OS(O)R10、CHO、C(O)R10、COOH、CO2R10、CONR3R4、烷基、鹵代烷基、芳烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷氧基芳基、巰基、烷硫基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基或鹵素，和 其中如果存在R1、R2、R5、R6、R8、R14、R15、R16、Z、W或A，至少一個獨立為M2PO4-。
在一個優(yōu)選的實施方案中，磷酸酯部分可為相應的鹽-O-PO(OM)2，其中M為氫或藥學可接受的抗衡離子，更優(yōu)選為Na+、K+、Li+、Mg++或NH3+，更優(yōu)選為Na+。
發(fā)明者意外地發(fā)現(xiàn)具通式I的化合物
其中 R1、R2、W、A、B和Z如上定義，所述化合物在治療、預防、改善、防御和/或防止下列疾病和紊亂(為了方便在下文中提到時稱為“治療學適應癥”)中具有特別的用途和作用 (a)身體上所有組織中所有形式的癌癥(惡變前的、良性的和惡性的)。在這方面，所述化合物可單獨作為抗癌療法使用，或與其它形式的包括但不限于放療和化療的抗癌療法聯(lián)合使用； (b)與身體任何組織中的異?；蜻^度性質的(prolonged nature)炎癥反應相關的疾病和紊亂，包括但不限于類風濕性關節(jié)炎、腱炎、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、節(jié)段性回腸炎、硬化性膽管炎； (c)丘疹結節(jié)的皮膚病損，包括但不限于肉樣瘤病、血管肉瘤、卡波濟肉瘤(Kaposi′s sarcome)、Fabry′s??； (d)丘疹鱗屑性皮膚病損，包括但不限于銀屑病、博溫(氏)病(Bowen′s Disease)和萊特(氏)病(Reiter′s Disease)； (e)以退化性變化為特征的皮膚光化性損傷，包括但不限于日光性角化病、光過敏病和皺紋； (f)與影響體內任何組織的異常血管發(fā)生相關的疾病，包括但不限于血管瘤和毛細血管擴張； (g)骨髓增生性疾病，包括但不限于巨幼紅細胞病、骨髓增生異常綜合征、真性紅細胞增多癥、血小板增多癥和骨髓纖維化； (h)以異常免疫應答為特征的自身免疫疾病，包括但不限于多發(fā)性硬化、1型糖尿病、全身性紅斑狼瘡和膽汁性肝硬變； (i)以神經(jīng)系統(tǒng)結構退化性變化為特征的神經(jīng)變性疾病和病癥，包括但不限于帕金森病、阿爾茨海默癥、肌肉萎縮癥、Lou-Gehrig病、運動神經(jīng)元??； (j)與血管壁退行性變化相關的疾病和病癥，包括但不限于動脈粥樣硬化、粉瘤、冠心病、中風、心肌梗塞、高血壓性血管疾病、惡性高血壓、血栓閉塞性脈管炎、纖維肌性發(fā)育異常； (k)與異常免疫應答相關的疾病和病癥，包括但不限于皮肌炎和硬皮?。? (l)與眼睛退行性變化相關的疾病和病癥，包括但不限于白內障、黃斑變性、視網(wǎng)膜萎縮。
特別地，異黃烯化合物還被令人驚訝地發(fā)現(xiàn)對生殖激素如雌激素和雄激素的產(chǎn)生和功能具有強效的作用。因此，這些化合物可用于治療和預防下列病癥和疾病 (a)與雌激素/雄激素失衡相關的女性病癥，包括但不限于周期性乳腺痛、痤瘡、痛經(jīng)、子宮平滑肌瘤、子宮內膜異位、卵巢囊腫、月經(jīng)前期綜合征、急性更年期綜合征、骨質疏松癥、老年性癡呆、不育癥；和 (b)與雌激素/雄激素失衡相關的男性病癥，包括但不限于良性前列腺肥大、不育癥、男子女性型乳房、遺傳性禿發(fā)癥各種其它形式的禿發(fā)癥。
因此，根據(jù)本發(fā)明的另一發(fā)面提供了治療、預防、改善、防御和/或防止一種或多種治療學適應癥的方法，所述方法包括給予患者治療有效量的如上定義的一種或多種式I的化合物。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物在生產(chǎn)用于治療、改善、防御、預防和/或防止一種或多種治療學適應癥的藥物的中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物在治療、改善、防御、預防和/或防止一種或多種治療學適應癥中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了治療、預防、改善、防御和/或治療一種或多種治療學適應癥的藥物，所述藥物包括單獨的一種或多種式I的化合物或其與一種或多種載體或賦形劑的混合物。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了治療用組合物，所述組合物包括一種或多種式I化合物和一種或多種藥用載體和/或賦形劑。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了其中包含一種或多種式I化合物的飲料或食物。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了包含一種或多種微生物菌株的微生物培養(yǎng)物或食物，所述微生物產(chǎn)生一種或多種式I的化合物。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種或多種產(chǎn)生一種或多種式I化合物的微生物。優(yōu)選的微生物為純化的培養(yǎng)物，其可與一種或多種其它產(chǎn)生式I化合物的培養(yǎng)物混合和/或一起給予。
在本說明書和下面的權利要求中，除非本文需要，否則，單詞“包括”及其變化形式如“包含”或“含有”應被理解為包括所述的整體或步驟或整體或步驟的組，而不是排除其它任何整體或步驟或整體或步驟的組。 附圖簡述

圖1描述了腹腔注射大劑量的在PBS中制備的DHE二磷酸酯后小鼠血清中游離和總脫氫雌馬酚的濃度的藥代動力學數(shù)據(jù)的比較，其中所注射的在PBS中制備的DHE二磷酸酯劑量為25mg/kg。
圖2a和2b描述了腹腔注射大劑量的不同方法制備的脫氫雌馬酚后小鼠血清中游離和總脫氫雌馬酚濃度的藥代動力學數(shù)據(jù)的比較。DHE二磷酸酯制劑在PBS中制備，劑量為25mg/kg。DHE PEG:PBS制劑在1∶1 PEG:PBS中制備，劑量為50mg/kg。DHE-HPBCD制劑在20％HPBCD(HPBCD在PBS中制備)中制備，劑量為50mg/kg(未顯示總DHE水平)。 發(fā)明詳述 術語“異黃酮類”一般是指在吡喃環(huán)上連有苯基的稠環(huán)苯并吡喃分子，以1，2-二苯基丙烷系統(tǒng)為基礎。因此，在本文中通常稱為異黃酮、異黃烯、異黃烷、異黃烷酮、異黃烷醇(isoflavanols)等類型的化合物通常是指異黃酮類、異黃酮類化合物或異黃酮代謝物或其衍生物。
本發(fā)明優(yōu)選的異黃酮類化合物為異黃烷-4-酮、異黃烯、異黃烷-4-醇和異黃烷，它們一般為基本異黃酮類的氫化產(chǎn)物，這些化合物可任選被取代。
術語“烷基”包括1-10個碳原子優(yōu)選1-6個碳原子的直鏈、支鏈和環(huán)狀(如5碳或更多)的飽和烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、環(huán)戊基等。所述烷基更優(yōu)選為甲基、乙基、丙基或異丙基。所述烷基可任選被一個或多個氟、氯、溴、碘、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、C1-C4-烷基氨基-羰基、二(C1-C4-烷基)-氨基-羰基、羥基、C1-C4-烷氧基、甲酰氧基、C1-C4-烷基-羰基氧基、C1-C4-烷硫基、C3-C6-環(huán)烷基或苯基取代。
術語“烯基”包括2-10個碳原子優(yōu)選2-6個碳原子的直鏈、支鏈和環(huán)狀(如5碳或更多)并具有至少一個雙鍵的烴，如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基等。所述烯基更優(yōu)選為乙烯基、1-丙烯基或2-丙烯基。所述烯基可任選被一個或多個氟、氯、溴、碘、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、C1-C4-烷基氨基-羰基、二(C1-C4-烷基)-氨基-羰基、羥基、C1-C4-烷氧基、甲酰氧基、C1-C4-烷基-羰基氧基、C1-C4-烷硫基、C3-C6-環(huán)烷基或苯基取代。
術語“炔基”包括2-10個碳原子優(yōu)選2-6個碳原子的直鏈和支鏈并具有至少一個三鍵的烴，如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基等。所述炔基更優(yōu)選為乙炔基、1-丙炔基和2-丙炔基。所述炔基可任選被一個或多個氟、氯、溴、碘、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、C1-C4-烷基氨基-羰基、二(C1-C4-烷基)-氨基-羰基、羥基、C1-C4-烷氧基、甲酰氧基、C1-C4-烷基-羰基氧基、C1-C4-烷硫基、C3-C6-環(huán)烷基或苯基取代。
所述“芳基”包括苯基、聯(lián)苯基和萘基，它們可任選被一個或多個C1-C4-烷基、羥基、C1-C4-烷氧基、羰基、C1-C4-烷氧基羰基、C1-C4-烷基羰基氧基或鹵素取代。
術語“雜芳基”包括五元和六元環(huán)，所述環(huán)包括至少一個環(huán)上的氧、硫或氮，所述環(huán)可任選與其它芳基或雜芳基環(huán)稠合，所述芳基或雜芳基環(huán)包括但不限于呋喃基、吡啶基、嘧啶基、噻吩基、咪唑基、四唑基、吡嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、喹啉基、isopuinolyl、嘌呤基、嗎啉基、唑基、噻唑基、吡咯基、黃嘌呤基、嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、尿嘧啶和異唑基。所述雜芳基可任選被一個或多個氟、氯、溴、碘、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、C1-C4-烷基氨基-羰基、二(C1-C4-烷基)-氨基-羰基、羥基、C1-C4-烷氧基、甲酰氧基、C1-C4-烷基-羰基氧基、C1-C4-烷硫基、C3-C6-環(huán)烷基或苯基取代。所述雜芳基可按照需要被部分或全部氫化。
術語“鹵素”包括氟、氯、溴和碘，優(yōu)選氟和氯，更優(yōu)選氟?！胞u代烷基”的例子包括單鹵代、二鹵代和直到全鹵代的烷基。優(yōu)選的鹵代烷基為三氟甲基和五氟乙基。
術語“藥學可接受鹽”是指可與藥物一起給藥的帶有電荷的有機或無機部分，如在鹽中作為抗衡陽離子或抗衡陰離子。本領域中技術人員知道的包括M部分的藥學可接受陽離子包括但不限于鈉、鉀、鈣、鋅和季胺。本領域中技術人員知道的藥學可接受陰離子包括但不限于氯化物、乙酸鹽、檸檬酸鹽、碳酸氫鹽和碳酸鹽。
術語“藥學可接受衍生物”或“前藥”是指活性化合物的衍生物，其在給予受者后可直接或間接提供母體化合物或代謝物，或本身顯示出活性。
本文所用的術語“治療”、“預防”或“防止”、“改善”等應被認為是它們的廣義。特別地，術語“治療”不必指動物被治療至完全恢復。因此，術語“治療”包括癥狀或特定病癥的嚴重性的改善或預防或在其它方面降低特定病癥發(fā)展的風險。
本發(fā)明特別涉及具通式II的化合物及其用途
其中 R1、R2、R5、R6、R14、R15、W和Z如上定義，圖形“”表示單鍵或雙鍵，和 更優(yōu)選其中圖形“”表示雙鍵。
在另一方面，本發(fā)明特別涉及具通式III的化合物及其用途
其中 R1、R2、R5、R6、R14、R15、W和Z如上定義。
在另一方面，本發(fā)明特別涉及具通式IV的化合物及其用途
其中 R1、R2、R5、R6、R14、R15、W和Z如上定義。
本發(fā)明的特別優(yōu)選的化合物為如下的異黃酮類化合物 異黃酮類-O-PO(OM)2 其中M獨立為氫或抗衡陽離子，和 其中異黃烯化合物或衍生物為單-、二-或全-磷酸化的，它們可得自下面的含羥基的異黃烷酮、異黃烯、異黃烷醇和異黃烷化合物，和下面的衍生物1-22


其中 R2、R16、W和Z獨立為H、OH、Cl、Br、Me或Ome，和 R14為H、Ome、Me、Cl或Br。
在最優(yōu)選的實施方案中異黃酮類化合物或衍生物為二氫黃豆苷元、二氫染料木素(dihydrogenestein)、四氫黃豆苷元、脫氫雌馬酚或雌馬酚的新型單-、二-或全磷酸酯，最優(yōu)選為脫氫雌馬酚的磷酸酯。
本發(fā)明的化合物在治療與雌激素作用、雄性作用、血管擴張(vasodilatory)和痙攣作用、炎癥作用和氧化作用相關或由這些作用引起的疾病方面具有特別的應用。
根據(jù)本發(fā)明，一種或多種式I化合物治療時所需的量取決于許多因素，包括特定的用法、所用特定化合物的性質、被治療的病癥、給藥方式和患者的情況。式I的化合物可用常規(guī)使用的方式和量給藥。例如參見Goodman和Gilman，治療法的藥理學基礎(ThePharmacological Basis of Therapeutics)，1299(第7版，1985)。所用的特定劑量取決于被治療的病癥、患者的情況、給藥途徑和其它上述眾所周知的因素。一般來說，每個患者的日劑量可在0.1mg-2g范圍內；典型地為0.5mg-1g；優(yōu)選50mg-200mg。給藥間隔可為單劑量每天或兩天一次至根據(jù)需要在一周至許多月至許多年的療程中給予一天兩次或三次，這取決于被治療和減輕的病癥的嚴重性。還需要了解，對于特定的患者，要根據(jù)該患者的個體需要和專業(yè)判斷管理或指導組合物的給藥，隨時調整特定的給藥方案。
典型地，本文描述的治療治療學適應癥的藥用組合物是通過將本發(fā)明化合物(方便起見，下面提到時稱為“活性化合物”)與一種或多種本領域中眾所周知的藥學或獸醫(yī)學可接受載體和/或賦形劑混合制得。
當然，所述載體必須與制劑中其它成份相容，且對患者必須無害。所述載體或賦形劑可為固體或液體，或兩者都有，優(yōu)選以單位劑量與所述化合物按配方制造，如片劑，其可包含0.5％-59％重量百分比的活性化合物，或高至100％的活性化合物。在本發(fā)明的制劑中可混有一種或多種活性化合物，其可由藥學上眾所周知的任何技術制備，所述技術基本上都是由將任選包括一種或多種助劑的各成份混合組成。
雖然在任何給定的情況下，最合適的給藥途徑取決于被治療病癥的嚴重性和所用特定活性化合物的性質，但是本發(fā)明的制劑包括適合口服、直腸給藥、眼部給藥、口腔給藥(如舌下給藥)、胃腸外給藥(如皮下給藥、肌內給藥、真皮給藥或靜脈給藥)和經(jīng)皮給藥的制劑。
適于口服的制劑可以離散單元形式存在，如膠囊、囊劑、錠劑或片劑，每個都包含預定量的活性化合物；散劑或顆粒劑；水或非水液體溶液劑或混懸劑；或水包油或油包水型乳劑。這樣的制劑可用藥學上合適的方法制備，所述方法包括使活性化合物和合適的載體(如上所述，其可包含一種或多種助劑)結合的步驟。一般而言，本發(fā)明的制劑是通過將活性化合物和液體或細碎的固體載體或兩者均勻而緊密地混合，然后，如果需要的話，將所得混合物成型得到單位劑型而制得的。例如，片劑可通過將含有任選與一種或多種助劑混合的活性成份的粉末或顆粒壓片或用模具成型制得。壓制的片劑可用合適的機器，由自由流動的化合物如任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑和/或表面活性/分散劑混合的粉末或顆粒壓片制得。模制的片劑可用合適的機器，由惰性液體粘合劑濕潤的粉末狀化合物由成型制得。
適合口腔(舌下)給藥的制劑包括在調味基質中含有活性化合物的錠劑(lozenges)，所述調味基質通常為蔗糖和阿拉伯膠或西黃芪樹膠；和在惰性基質中含有活性化合物的軟錠劑(pastilles)，所述惰性基質如明膠和丙三醇或蔗糖和阿拉伯膠。
適于胃腸外給藥的本發(fā)明的組合物包括活性化合物的無菌水制劑，所述制劑優(yōu)選與目標受者血液等滲的。雖然皮下注射、肌肉注射或皮內注射給藥也可產(chǎn)生效果，但這些制劑優(yōu)選靜脈給藥。這樣的制劑可方便地通過將活性化合物與水或甘氨酸緩沖液混合，并使所得溶液無菌并與血液等滲。根據(jù)本發(fā)明，注射劑一般包含0.1％-60％w/v的活性化合物，以0.1ml/min/kg的速率給藥。
適于直腸或陰道給藥的制劑優(yōu)選為單位劑量的栓劑。這些制劑可通過將活性化合物與一種或多種常規(guī)的固體載體如可可脂混合，然后將所得混合物成型制得。
適于皮膚局部給藥的制劑或組合物優(yōu)選為軟膏、乳劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣溶劑或油劑?？捎玫妮d體包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇類及兩種或多種這些物質的組合?；钚曰衔锏臐舛纫话銥?.1％-0.5％w/w，如0.5％-2％w/w。這樣的組合物的實例包括化妝用皮膚乳劑。
適于經(jīng)皮給藥的制劑可為適合與受者的表皮在較長的時期內保持緊密接觸離散的貼劑。這樣的貼劑適當?shù)匕钚曰衔锏娜芜x緩沖水溶液，如所述活性化合物的濃度為0.1M-0.2M的緩沖水溶液。
適合經(jīng)皮給藥的制劑還可通過離子電滲透法遞藥(例如，參見Pharmaceutical Research 3(6)，(1986))，典型地，采用活性化合物的任選緩沖水溶液形式。合適的制劑包含檸檬酸鹽或bis/tris緩沖液(pH6)或乙醇/水，并包含0.1M-0.2M的活性成份。
適合吸入給藥的制劑可以溶液、混懸液或乳液形式的噴霧組合物遞藥。吸入噴霧組合物還可包含藥學可接受噴射劑，如二氧化碳或氧化亞氮。
活性化合物可以食物形式提供，如加入、混合入、涂抹、結合或其它方式加入到食物中。所用的術語食物為其廣義，包括液體制劑，如包括奶制品的飲料和其它食物，如健康棒(health bars)、點心等。含有本發(fā)明化合物的食物制劑很容易根據(jù)標準慣例制備。
本發(fā)明的化合物具有強效的抗氧化劑活性，因此，在以下方面發(fā)現(xiàn)了其廣泛的用途，藥學和獸醫(yī)學應用、化妝品如防止皮膚老化的皮膚乳劑、屏蔽陽光、食物、健康飲料、洗發(fā)香波等。
令人驚訝地發(fā)現(xiàn)式I的化合物與維生素E在防止脂質、蛋白質和其它生物分子氧化方面具有相互促進的作用。
因此本發(fā)明的另一方面提供了一種組合物，所述組合物包含一種或多種式I化合物、維生素E和任選藥學、獸醫(yī)學或化妝品可接受載體和/或賦形劑。
治療方法、用途和組合物可給予人類或動物，如寵物和家養(yǎng)動物(如狗和貓)、禽類(如小雞、火雞、鴨子)、家畜(如牛、綿羊、豬和山羊)，用于水產(chǎn)養(yǎng)殖等。
異黃酮類前藥和衍生物還可與其它不損害所需作用的活性物質或可補充所需作用的物質聯(lián)合給藥，如抗生素、抗真菌藥、抗炎藥或抗病毒化合物。
活性藥物可包含兩種或更多以組合形式或協(xié)同作用混合物形式存在的(in combination或synergistic mixture)異黃酮或其衍生物?；钚曰衔镞€可與下列藥物一起給藥降脂類藥物如普羅布考和煙酸；血小板聚集抑制劑如阿司匹林；抗凝血藥如香豆素；鈣通道阻滯劑如維拉帕米、地爾硫卓和硝苯地平；血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑如卡托普利和依那普利；和β-阻滯劑如心得安、特布他林和拉貝洛爾。所述化合物還可與非甾體類抗炎藥聯(lián)合給藥，如布洛芬、吲哚美辛、阿司匹林、非諾洛芬、甲芬那酸、氯芬那酸和舒林酸。所述化合物還可與皮質激素一起給藥。
聯(lián)合給藥可以是同時的或相繼的。同時給藥可能會受在同一單位劑型或在相同或相似的時間給藥的個體或離散劑型中的化合物的影響。相繼給藥可以任何需要的次序進行，典型地，當給予第二種或后來的活性成份時需要第一種或開始的活性成份正在發(fā)生生理效應，特別是需要累積或協(xié)同效應的情況。
異黃酮化合物為合成式I的異黃酮類化合物的合適的起始原料，這些異黃酮起始原料可通過本領域技術人員知道的標準方法制得。例如，在國際專利申請WO 98/08503和WO 00/49009中可找到合適的方法，通過引用將它們全部結合到本文中?？稍诒景l(fā)明化合物的合成中適當應用化學官能團保護、脫保護、合成元和其它本領域技術人員知道的技術?？捎萌魏伪绢I域技術人員知道的合適的方法對羥基取代的異黃酮衍生得到本發(fā)明的綴合物。
異黃酮起始原料也可從植物資源以濃縮物或提取物形式得到。此外，本領域技術人員很容易鑒別合適的植物物種，但是，例如，包括豆科植物的特別有用的植物。更優(yōu)選地，所述異黃酮提取物可從鷹嘴豆、扁豆、大豆、紅三葉草或地三葉種屬等中獲得。
異黃酮類的水溶性對它們配制成藥物、食物、化妝品非常重要，它們中的許多都是以水為基礎的系統(tǒng)。低溶解度在口服產(chǎn)品中也常常會妨礙有效的生物利用度。低溶解度在注射給藥制劑中是特別嚴重的障礙，因為注射劑通常是以水性介質遞藥。本發(fā)明的異黃酮類磷酸酯比未修飾的化合物具有較高的生物利用度，特別是水溶性有所增加，同時還基本保持了這些未修飾化合物的活性特征。異黃酮類磷酸酯是具有極性(可溶性(solubilising))離去基團的有用的前藥，其在生理條件下可容易地被水解產(chǎn)生相應的異黃酮類化合物。
在優(yōu)選的實施方案中，異黃酮類的醇官能團被磷酸基團酯化得到磷酸酯。一般地，該酯化的異黃酮類可被胃腸道消化和吸收液、其它酸和各種酶水解，得到起始的異黃酮類。
所述磷酸酯優(yōu)選為(OH)2PO2基團，由于兩個極性基團的存在，其是良好的增溶劑并具有高度的生物相容性。當M2PO4-基團中M不為氫時，通?；衔锏娜芙舛容^小并因此不是特別有利。例如，其中M為烷基時，優(yōu)選選擇較小的非極性基團。
還考慮到用酯化異黃酮的金屬鹽復合物，特別是Li+、Na+、K+、Mg++和銨鹽，包括NH4+和低分子量的單-或多烷基銨抗衡離子。
下面的實施例不應被看作是對本發(fā)明的限制。 實施例 本發(fā)明的異黃酮類磷酸酯可通過本領域中技術人員知道的標準化學方法用有效的起始原料和直接的合成方法制得。本發(fā)明主題的幾個實施方案可以以這種方式制備并以此為特征。這些實施例全在具有至少一個M2PO4-基團式I化合物的前化合物范圍內。這些新型的磷酸酯都為水溶性的，且在體內很容易水解，但在體外在正常pH條件下，在室溫或體溫下一般在水溶液中相當穩(wěn)定，固體更穩(wěn)定。
實施例1 脫氫雌馬酚磷酸酯 將脫氫雌馬酚(120mg，0.5mmole)和氨基亞磷酸二叔丁基酯(di-butyl phosphoramidite)(330ul，1.0mmole)的DMF(1ml)溶液在氬氣中攪拌下滴加1H-四唑(210mg的0.5ml DMF溶液；3.0mmole)。將該溶液冷至-20℃，然后滴加間氯過氧苯甲酸(260mg的0.5ml二氯甲烷溶液，1.5mmole)。升至室溫后，將該混合物用3倍乙酸乙酯稀釋，然后用10％焦亞硫酸鈉和10％碳酸氫鈉洗滌。
將包含脫氫磷酸雌馬酚的丁基酯的乙酸乙酯溶液用1M HCl洗滌，用硫酸鈉干燥。真空除去溶劑后，將殘留物用30％TFA的乙酸溶液在室溫下處理90分鐘。真空除去溶劑，殘留物用乙醇吸收，用氫氧化鈉中和至pH5.5。真空除去溶劑得到脫氫磷酸雌馬酚的鈉鹽混合物，130mg。
對磷酸酯混合物的分析表明混合物中存在4′-磷酸酯、7-磷酸酯和4′，7-二磷酸酯衍生物。對本發(fā)明化合物的酯化得到磷酸酯混合物，其可通過標準技術被分離為單體成份，所述標準技術包括分步結晶法、柱層析法和HPLC。
由上述方法制備的異黃酮類磷酸酯包括
同樣，二氫黃豆苷元、四氫黃豆苷元和雌馬酚的磷酸酯的合成可得到下述化合物及其藥學可接受鹽。

實施例2 脫氫雌馬酚-7-磷酸酯 將脫氫雌馬酚側鏈苯基4′-位的羥基保護，按照實施例1的方法反應，得到相應的7-磷酸酯衍生物。任何合適的保護基團都可使用，包括MOM或MEM醚和芐基醚。磷酸化作用后，這些基團可任選被除去。其中所用的保護基團可按照此處提到的任何方法在合成異黃酮類起始原料時結合上，或者可利用目標羥基上或其附近的合成元(synthons)、化學反應性、極性、電子情況(electronic considerations)或立體條件在稍后的時間接上保護基團。
通過這些方法，可合成此處多描述的化合物1-22的單-、二-和全-磷酸化衍生物。因此制得其亞磷酸和藥學可接受鹽。用質子或碳磁共振光譜、IR和/或質譜來鑒定合成的化合物。實施例3 本發(fā)明的異黃酮類磷酸酯的生物利用度通過用各種酶和生物介質對脫氫雌馬酚磷酸酯體外水解作用檢測。通過HPLC檢測游離脫氫雌馬酚的量來確定結果。所用血清和介質包括人血清、人全血、大鼠全血、堿性磷酸酶型VII-S(牛腸內粘液)和堿性磷酸酶型XXIV(人類胎盤)。
從酯得出的生物利用度和轉換率取決于許多因素，這些因素包括磷酸酯和其上的取代的性質、介質、存在的酶、溫度和pH。通過控制這些不同的參數(shù)，我們發(fā)現(xiàn)，通過改變酯類前藥的半衰期可得到一定程度的調節(jié)或控制，更好地匹配所需的生物利用度比率。
實施例4 酯化的異黃酮類在生物介質如胃腸液和血液中容易轉換為游離異黃酮類。在其中，胃腸液經(jīng)常含有酶和足夠高的pH來水解酯鍵，血液通常含有酶，如可水解磷酸酯鍵的磷酸酯酶。
藥代動力學實驗 用脫氫雌馬酚(DHE)-二磷酸酯的PBS溶液通過腹腔注射(i.p.)和口服遞藥模式分別進行兩組PK實驗。每個時間點分配3只動物，共計5個時間點(15分鐘、30分鐘、1小時、4小時和24小時)(每項實驗15只小鼠)。
該實驗的目的是為了確定腹腔內注射和口服遞藥的PK曲線是否有可比性。
實驗設計-腹腔注射給藥 1.將雌性裸鼠保持異黃酮自由飲食(free diet)至少一周，除去血漿中的背景異黃酮水平。
2.實驗之前一天，每個時間點指定3只小鼠并用獨特的標識符標記。將每只小鼠稱重，以確保每次腹腔注射所需的DHE-二磷酸酯的密度(density)達到每只小鼠50mg/kg劑量。
按配方制造稍微過量的DHE-二磷酸酯并相應調整粉末的質量。剩余的溶液在-20℃保存，用做QA分析。
3.在每只小鼠下腹部右側或左側四分之一處注射，確保注射針頭不在血管內或腸袢(loop of bowel)中。一旦給予DHE-二磷酸酯，將小鼠置于籠子中，直到每個時間點(15分鐘、30分鐘、1小時、4小時、24小時)。
4.用頸脫位法處死每只小鼠，然后按照SOP BD-009用20號針頭通過胸腔收集血液。
5.使血液凝結，然后用bench-top mini-microfuge在室溫下將其以最高速度離心3分鐘。
6.將血清吸入適當標記的微量離心管并在-20℃保存至被分析。動物血清與載體對照和按配方制造的DHE-二磷酸酯與200ul等分的載體和按配方制造的DHE-二磷酸酯一起在-20℃保存用做分析。
實驗設計-口服給藥 1.將雌性BALB/c小鼠保持異黃酮自由飲食至少一周，除去血漿中的背景異黃酮水平。
2.實驗之前一天，每個時間點指定3只小鼠并用獨特的標識符標記。將每只小鼠稱重，以確保給予動物所需的DHE-二磷酸酯的密度為50mg/kg劑量。
3.限制并管飼每只小鼠適當體積的按配方制造的DHE-二磷酸酯，達到50mg/kg的劑量。一旦給予DHE-二磷酸酯，將小鼠置于籠子中，直到每個時間點(15分鐘、30分鐘、1小時、4小時、24小時)。對照動物管飼200μl 1％CMC對照物。對照動物在15分鐘、30分鐘、1小時、4小時、24小時時間點被處死。
4.在指定的時間點，用頸脫位法處死每只小鼠，然后按照SOPBD-009用20號針頭通過胸腔收集血液。
5.使血液凝結，然后用bench-top mini-microfuge在室溫下將其以最高速度離心3分鐘。
6.將血清吸入適當標記的微量離心管并在-20℃保存至被分析。動物血清與載體對照和按配方制造的DHE-二磷酸酯與200ul等分的載體和按配方制造的DHE-二磷酸酯一起在-20℃保存用做分析。
7.在零時間點將剩余的3只動物用載體制劑管飼，在30分鐘時處死。血清與其它樣品一起保存。
結果 當給予小鼠25mg/kg劑量時，腹腔注射后15分鐘，DHE-二磷酸酯代謝為游離形式的DHE，其在血液中的血清濃度平均為98.6μM。給藥1小時后，藥物以62μM/hr的速率迅速排泄，血清水平降至12μM。給藥15分鐘后，DHE總濃度(結合的+游離的)達到120μM，給藥1小時后，藥物排泄(120μM/hr)達到30.85的血清濃度。(表1和圖1)。
表1二磷酸酯游離量與總量的比較 對取自腹腔注射DHE-二磷酸酯和DHE-PEG:PBS制劑的小鼠的血清中游離和總脫氫雌馬酚濃度的比較顯示給藥15分鐘后，要使血清中藥物的游離形式達到大約相等的濃度(分別為74.4μM和62μM)，與DHE-PEG:PBS(50mg/kg)相比，只需一半劑量的DHE-二磷酸酯(25mg/kg)(表1、表2和圖2a)。有趣的是，觀察到的DHE-二磷酸酯和DHE-PEG:PBS制劑的游離總的比率為大約5倍的差異，注射DHE-PEG:PBS制劑15分鐘后的大鼠血漿中的總DHE多于注射DHE-二磷酸酯制劑后的總DHE(120.8μM苯氧代二醇(phenoxodiol)，511.6μM脫氫雌馬酚)。血漿中游離脫氫雌馬酚的濃度為給予小鼠脫氫雌馬酚的HPBCD制劑15分鐘后所達到的血漿中游離脫氫雌馬酚的濃度的約1/1.8(DHE-二磷酸酯)和1/2.2(DHE-PEG:PBS)(50mg/kg)(圖2b；表3)。
表2.PEG:PBS游離量與總量的比較 表3游離DHE HPBCD制劑 酯化異黃酮類的用途包括任何現(xiàn)在已知的或后來發(fā)現(xiàn)的用途，包括上面列出的或在文獻中描述的異黃酮類或其衍生物的用途。酯化異黃酮類被發(fā)現(xiàn)可用于治療骨質疏松癥和絕經(jīng)后女性雌激素缺乏的其它癥狀。本發(fā)明的化合物也可用于防止骨質疏松癥和骨質疏松癥引起的隨后的骨折，其為老年人發(fā)病率和死亡率的重要因素。另外，酯化異黃酮的預防應用可提供防UV保護，在其它方面改善一般皮膚健康，刺激免疫系統(tǒng)，降低不希望的氧化作用(即，提供抗氧化劑的好處)。重要地，本發(fā)明的化合物可用于治療癌癥，包括乳腺癌、卵巢癌和前列腺(prostrate)癌。
本發(fā)明的異黃酮類磷酸酯相當出人意料地在被治療的受試者中表現(xiàn)出一些有益的和/或顯著的活性。這些比較表明本發(fā)明的綴合的異黃酮類化合物具有特定的作用和功效，特別是上述化合物1-34的綴合物。
與上面描述和示例的異黃酮類配對物相比，染料木素磷酸酯具有較差的藥代動力學性質和曲線。
因此，已經(jīng)公開了酯化的異黃酮類化合物特定的實施方案和申請。但是，本領域中技術人員應明白除了已經(jīng)描述的之外還有更多的修飾可能也不偏離本發(fā)明的概念。因此，除了附加的權利要求的精神之外，本發(fā)明不應被限制。
本領域中技術人員會理解此處描述的本發(fā)明易于進行上述特定描述之外的變更和改動。不言而喻，本發(fā)明包括所有這樣的變更和改動。本發(fā)明還包括本說明書中單獨或一起提到或表明的所有步驟、特征、組合物和化合物，以及任何和所有任意兩種或更多所述步驟或特征的組合。
本說明書中引用的任何先有技術不是，也不應被認為是對先有技術為本領域中普通知識的一部分的確認或任何形式的暗示。
權利要求
1.一種異黃酮類磷酸酯化合物或其藥學可接受鹽，其具通式I
其中R1、R2和Z獨立為M2PO4-、氫、羥基、OR9、OC(O)R10、OS(O)R10、CHO、C(O)R10、COOH、CO2R10、CONR3R4、烷基、鹵代烷基、芳烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷氧基芳基、巰基、烷硫基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基或鹵素，或
R2如前定義，R1和Z與連接它們的碳原子一起形成選自下述基團的五元環(huán)，
R1如前定義，R2和Z與連接它們的碳原子一起形成選自下述基團的五元環(huán)
W為R1，A和B與連接它們的碳原子一起形成選自下述基團之一的六元環(huán)
其中
R3為氫；烷基；芳基；芳烷基；氨基酸；其中R11為氫、烷基、芳基、芳烷基或氨基酸的C(O)R11；或其中R12為氫、烷基、鹵代烷基、芳基、雜芳基或芳烷基的CO2R12；
R4為氫、烷基或芳基，
或R3和R4與連接它們的氮原子一起形成吡咯烷基或哌啶基，
R5為M2PO4-、氫、其中R11如前定義的C(O)R11或其中R12如前定義的CO2R12，
R6為M2PO4-、氫、羥基、烷基、芳基、氨基、巰基、NR3R4、其中R11如前定義的COR11、其中R12如前定義的CO2R12或CONR3R4，
R7為氫、其中R11如前定義的COR11、烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基或Si(R13)3其中每個R13獨立為氫、烷基或芳基，
R8為M2PO4-、氫、羥基、烷氧基或烷基，
R9為烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、其中R11如前定義的COR11或其中R13如前定義的Si(R13)3，
R10為氫、烷基、鹵代烷基、氨基、芳基、芳烷基、氨基酸、烷基氨基或二烷基氨基，
圖形″″代表單鍵或雙鍵，
M獨立為氫、直鏈或支鏈烷基、烯基、炔基、烷氧基烷基、烷硫基烷基或氨基烷基、取代或非取代的環(huán)烷基、芳基、芳烷基或烷基芳基，以及取代的環(huán)烷基，其中至少一個環(huán)包含一個或多個在該至少一個環(huán)上的氮、硫、氧、磷或硅雜原子；
T獨立為氫、烷基或芳基，
X為O、NR4或S，優(yōu)選為O，和
Y為
其中R14、R15和R16獨立為M2PO4-、氫、羥基、OR9、OC(O)R10、OS(O)R10、CHO、C(O)R10、COOH、CO2R10、CON3R4、烷基、鹵代烷基、芳烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷氧基芳基、巰基、烷硫基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基或鹵素，和
其中如果存在R1、R2、R5、R6、R8、R14、R15、R16、Z、W或A，至少一個獨立為MPO4-。
2.權利要求1的異黃酮類磷酸酯，其具通式II
其中R1、R2、R5、R6、R14、R15、W和Z如權利要求1所定義，和
圖形″″代表單鍵或雙鍵。
3.權利要求2的異黃酮類磷酸酯，其中圖形″″代表雙鍵。
4.權利要求1的異黃酮類磷酸酯，其具通式III
其中R1、R2、R5、R6、R14、R15、W和Z如權利要求1所定義。
5.權利要求1的異黃酮類磷酸酯，其具通式IV
其中R1、R2、R5、R6、R14、R15、W和Z如權利要求1所定義。
6.權利要求1-5中任一項的異黃酮類化合物，其中磷酸酯部分以相應的鹽M2PO4-形式存在，其中M為藥學可接受陽離子。
7.權利要求6的異黃酮類化合物，其中相應的鹽M2PO4-為NaO(HO)P(O)O-。
8.一種異黃酮類化合物或其藥學可接受鹽，選自
9.一種治療、預防、改善、防御和/或防止一種或多種如上述定義的治療學適應癥的方法，所述方法包括給予患者治療有效量的一種或多種式I的化合物。
10.一種或多種式I化合物在生產(chǎn)用于治療、改善、防御、預防和/或防止一種或多種如上述定義的治療學適應癥的藥物中的用途。
11.一種治療、預防、改善、防御和/或治療一種或多種如上述定義的治療學適應癥的藥物，所述藥物包含單獨的一種或多種式I的化合物或還包含一種或多種載體或賦形劑。
12.一種治療、預防、改善、防御和/或防止患者雌激素/雄激素平衡異常相關病癥的方法，所述方法包括單獨給予一種或多種式I的化合物或將其與一種或多種載體或賦形劑一起給予的步驟。
13.權利要求12的方法，其中所述患者為女性。
14.權利要求12的方法，其中所述患者為男性。
15.一種或多種式I化合物在生產(chǎn)用于治療、改善、防御、預防和/或防止患者雌激素/雄激素平衡異常相關病癥的藥物中的用途。
16.一種治療用組合物，所述組合物包含一種或多種式I的化合物及其一種或多種藥用載體和/或賦形劑。
17.一種飲料或食物，其中包含一種或多種式I的化合物。
18.一種組合物，所述組合物包含一種或多種式I的化合物、維生素E和任選藥學、獸醫(yī)學或化妝品可接受載體和/或賦形劑。
19.磷酸酯部分的用途，所述用途為提高或改善異黃烷-4-酮、異黃烯、異黃烷-4-醇或異黃烷化合物或其藥學可接受鹽的生物利用度。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種英語音標符號系統(tǒng)及其方法，包括有母音音標符號及子音音標符號，母音音標符號分成全音符號及半音符號兩類全音符號代表全音的母音，即可以代表音節(jié)的音；半音符號代表半音的母音，即不足夠代表音節(jié)的音，半音符號與尾隨的子音符號結合后而可代表音節(jié)的音；母音音標符號以系統(tǒng)的方式排列后，而成為母音音標符號表以部分子音音標符號與半音符號拼音為單位，并排列成為適合于有聲音誦讀的子音音標符號表。本發(fā)明可以避免學習者以為長音及短音僅是長音短不同而造成的發(fā)音偏差，另外本音標符號的設計適合用于文章中單字本體直接的標音。
文檔編號G09B19/06GK1902671SQ2004800403
公開日2007年1月24日 申請日期2004年10月23日 優(yōu)先權日2003年11月24日
發(fā)明者蘇國瑞 申請人:蘇國瑞