專利名稱：一種艾滋病疫苗及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用生物工程技術(shù)制備的疫苗及其制備方法與應(yīng)用，特別是涉及一種艾滋病疫苗及其制備方法與應(yīng)用。
艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合征，是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的一種免疫性疾病。由于其傳播迅速、疾病死亡率極高，且目前尚無(wú)特效治療，更無(wú)疫苗可以預(yù)防，因而有“世紀(jì)瘟疫”之稱。
現(xiàn)有的用于臨床的抗艾滋病藥物僅能推遲發(fā)病期和延長(zhǎng)病人的生命，并且價(jià)格昂貴，毒性大。本發(fā)明的發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，多表位的表位多肽能夠誘導(dǎo)高滴度的、預(yù)先定義的、多中和表位特異性的中和抗體，該理論對(duì)研究制造艾滋病疫苗具有指導(dǎo)意義。同時(shí)，國(guó)外抗艾滋病藥物臨床研究結(jié)果證明，針對(duì)HIV-1膜蛋白gp160上的幾個(gè)特定中和表位的中和抗體(單克隆抗體)在被動(dòng)免疫治療中的組合使用能抑制HIV-1病毒的粘膜傳染以及母嬰傳播，并能清除血液中的HIV-1病毒(Nature Medicine 1999，5204；Nature Medicine 2000，6200；Nature Medicine 1999，5211)，這表明幾種中和抗體的組合使用是一種有效的艾滋病免疫治療戰(zhàn)略。
本發(fā)明的目的是提供一種有效的艾滋病疫苗。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備上述艾滋病疫苗的方法。
本發(fā)明的再一目的是提供上述艾滋病疫苗在生產(chǎn)治療艾滋病的藥物中的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下設(shè)計(jì)方案一種艾滋病疫苗，它基本上包括至少一個(gè)耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物的表位多肽，所述表位多肽含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其變異表位中的至少一個(gè)表位，或者含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其變異表位中的至少一個(gè)且又至少一次重復(fù)的表位。
所述人免疫缺陷病毒膜蛋白為gp160。
所述中和表位及其變異表位的氨基酸殘基序列可以選自GPGRAFYGPGQTFYGPGQAWYELDKWAELEKWAELNKWAELDEWARILAVERYLKD
為了誘導(dǎo)強(qiáng)免疫應(yīng)答，所述疫苗中還包括可接受的藥用佐劑。
一種制備艾滋病疫苗的方法，基本上包括以下步驟(1)、人工合成至少一條分別含有人免疫缺陷病毒膜蛋白的至少一個(gè)中和表位及其變異表位或者至少一次重復(fù)的至少一個(gè)中和表位及其變異表位的表位多肽；(2)、將上述表位多肽分別耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物；(3)、將上述耦聯(lián)物配以可接受的佐劑制備成艾滋病疫苗。
具體地說(shuō)，上述該制備艾滋病疫苗的方法中人免疫缺陷病毒膜蛋白為gp160，并且其中的中和表位及其變異表位的氨基酸殘基序列可選自GPGRAFYGPGQTFYGPGQAWYELDKWAELEKWAELNKWAELDEWARILAVERYLKD一種治療艾滋病的藥物，由上述艾滋病疫苗為主要活性成分，配以藥用佐劑組成。
根據(jù)本發(fā)明的發(fā)明人最先提出的表位疫苗的理論(Immunology Today，20588-589，1999年12月；Immunobiology，201323-331，1999年12月；Scand.J.Immunology.2000年，51497-501；Int.Arch.Allergy Immunology，2000年，12180-84)，本發(fā)明的艾滋病疫苗是一種能刺激人體對(duì)艾滋病病毒產(chǎn)生多方位抗體的多聯(lián)疫苗，即使在艾滋病病毒產(chǎn)生變異的情況下，注射了該疫苗的人體內(nèi)也會(huì)有相應(yīng)的抗體來(lái)殺滅入侵的病毒，產(chǎn)生的抗體量為10-240毫克/毫升血清。同時(shí)該疫苗的有效成分是耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物的包含有人免疫缺陷病毒膜蛋白gp160上的中和表位或變異表位的表位多肽，這些表位多肽不具有艾滋病病毒的遺傳活性，沒有復(fù)性并誘發(fā)艾滋病的可能。
研究表明，抗艾滋病病毒的抗體在艾滋病治療中能降低病毒的載量，延緩疾病的進(jìn)行。本發(fā)明創(chuàng)造性地將HIV-1的多聯(lián)—表位疫苗、多表位—表位疫苗和抗變異—表位疫苗用于艾滋病的治療，不但無(wú)毒性，而且在提高艾滋病的免疫治療效果的同時(shí)，還可降低艾滋病治療成本。
根據(jù)本發(fā)明，可以按照艾滋病病毒的變異情況，很快生產(chǎn)出其相應(yīng)類型的疫苗，不需進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的試驗(yàn)，降低生產(chǎn)成本。該技術(shù)將對(duì)世界預(yù)防醫(yī)學(xué)研究產(chǎn)生重大影響，并將帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
下面結(jié)合非限制性具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例一制備以HIV-1 gp160主要中和表位為基礎(chǔ)的艾滋病單表位—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160中1個(gè)主要中和表位為基礎(chǔ)的1條表位多肽。其序列為C-GPGRAFYGGPGRAFYGGPGRAFY2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinimide ester)將上述表位多肽與載體蛋白BSA耦聯(lián)；3.將耦聯(lián)物配以鋁佐劑制備成HIV-1單表位—表位疫苗。
實(shí)施例二制備以HIV-1 gp160主要中和表位為基礎(chǔ)的艾滋病單表位—多聯(lián)—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160主要中和表位為基礎(chǔ)的3條表位多肽。這3條表位多肽的序列為C-ELDKWAG ELDKWAG ELDKWAG ELDKWAC-GPGRAFYGGPGRAFYGGPGRAFYC-RILAVERYLKDGRILAVERYLKD2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinimide ester)分別將上述表位多肽與載體蛋白BSA耦聯(lián)；3.將3種耦聯(lián)物混合后配以鋁佐劑制備成HIV-1多聯(lián)—表位疫苗，其中，各種耦聯(lián)物的加入量由適用人群的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理得出的各位點(diǎn)的變異機(jī)率進(jìn)行調(diào)整。
實(shí)施例三制備以HIV-1 gp160主要中和表位為基礎(chǔ)的艾滋病多表位—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160主要中和表位為基礎(chǔ)的1條多表位—表位多肽，其序列為CGELDKWAGGPGRAFYG ELDKWAGGPGRAFY2.利用戊二醛將上述多表位—表位多肽與載體蛋白牛血清白蛋白耦聯(lián)；3.將上述耦聯(lián)物配以鋁佐劑制備成HIV-1多表位—表位疫苗。
實(shí)施例四制備以HIV-1 gp160主要中和表位為基礎(chǔ)的艾滋病多聯(lián)—多表位—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160主要中和表位為基礎(chǔ)的3條多表位—表位多肽。這3條多表位—表位多肽的序列為CELDKWAGGPGRAFYG ELDKWAGGPGRAFYCGPGRAFYGELDKWAGRILAVERYLKD
CGPGRAFYGRILAVERYLKDGGPGRAFY2.利用戊二醛將上述3條多表位—表位多肽分別與載體蛋白牛血清白蛋白耦聯(lián)；3.將3種耦聯(lián)物分別配以鋁佐劑制備成HIV-1多表位—表位疫苗，其中，各種耦聯(lián)物的加入量由適用人群的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理得出的各位點(diǎn)的變異機(jī)率進(jìn)行調(diào)整。
實(shí)施例五制備以HIV-1 gp160主要中和表位及變異中和表位為基礎(chǔ)的艾滋病抗變異—多聯(lián)—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160主要中和表位及變異中和表位為基礎(chǔ)的變異表位—表位多肽，這些變異表位—表位多肽的序列為CELDKWAGELDKWAGELDKWAGELDKWACELEKWAGELEKWAGELEKWAGELEKWACELDEWAGELDEWAGELDEWAGELDEWACELNKWAGELNKWAGELNKWAGELNKWACGPGQTFYGGPGQTFYGGPGQTFYCGPGQAWYGGPGQAWYGGPGQAWYCGPGQAWYGELNKWAGGPGQAWYGELNKWA2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinmide ester)將這些變異表位—表位多肽分別與載體蛋白BSA耦聯(lián)；3.將上述耦聯(lián)物混合后配以鋁佐劑制備成HIV-1抗變異—表位疫苗，其中，各種耦聯(lián)物的加入量由適用人群的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理得出的各位點(diǎn)的變異機(jī)率進(jìn)行調(diào)整。
上述各實(shí)施例中的抗艾滋病疫苗可以作為制備治療艾滋病藥物的基本活性成分，在將上述各實(shí)施例的疫苗用作治療艾滋病的藥物時(shí)，可以根據(jù)情況配以適當(dāng)?shù)淖魟?，具體用量可根據(jù)不同人的情況來(lái)進(jìn)行調(diào)整。
權(quán)利要求
1.一種艾滋病疫苗，它基本上包括至少一個(gè)耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物的表位多肽，所述表位多肽含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其變異表位中的至少一個(gè)表位，或者含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其變異表位中的至少一個(gè)且又至少一次重復(fù)的表位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種艾滋病疫苗，其特征在于所述人免疫缺陷病毒膜蛋白為gp160。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種艾滋病疫苗，其特征在于所述中和表位及其變異表位的氨基酸殘基序列選自GPGRAFYGPGQTFYGPGQAWYELDKWAELEKWAELNKWAELDEWARILAVERYLKD
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種艾滋病疫苗，其特征在于所述疫苗中還包括可接受的藥用佐劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種艾滋病疫苗，其特征在于所述疫苗中還包括可接受的藥用佐劑。
6.一種制備艾滋病疫苗的方法，基本上包括以下步驟(1)、人工合成至少一條分別含有人免疫缺陷病毒膜蛋白的至少一個(gè)中和表位及其變異表位或者至少一次重復(fù)的至少一個(gè)中和表位及其變異表位的表位多肽；(2)、將上述表位多肽分別耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物；(3)、將上述耦聯(lián)物配以可接受的佐劑制備成艾滋病疫苗。
7.根據(jù)權(quán)利要求6一種制備艾滋病疫苗的方法，其特征在于所述人免疫缺陷病毒膜蛋白為gp160。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7一種制備艾滋病疫苗的方法，其特征在于所述中和表位及其變異表位的氨基酸殘基序列選自GPGRAFYGPGQTFYGPGQAWYELDKWAELEKWAELNKWAELDEWARILAVERYLKD
9.一種治療艾滋病的藥物，由權(quán)利要求1或2中的任何一種物質(zhì)為主要活性成分，配以藥用佐劑組成。
10.一種治療艾滋病的藥物，由權(quán)利要求3中的任何一種物質(zhì)為主要活性成分，配以藥用佐劑組成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種艾滋病疫苗,它的制備方法及其應(yīng)用,本發(fā)明的疫苗基本上包括至少一個(gè)耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物的表位多肽,該表位多肽含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其變異表位中的至少一個(gè)表位,或者含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其變異表位中的至少一個(gè)且做至少一次重復(fù)的表位。它的制備方法基本上包括以下步驟:(1)人工合成多肽;(2)將上述多肽耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上;(3)配以佐劑制備成疫苗。該疫苗可以用來(lái)作為治療艾滋病的藥物。
文檔編號(hào)C07K14/16GK1339320SQ0012348
公開日2002年3月13日 申請(qǐng)日期2000年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月18日
發(fā)明者陳應(yīng)華, 丁健, 陸韻 申請(qǐng)人:清華大學(xué)