專利名稱：脂肪醇的堿性酯及它們作為抗炎藥或免疫調(diào)節(jié)劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脂肪醇的堿性酯(BASIC ESTERS)及它們作為抗炎藥和免疫調(diào)節(jié)劑的用途，特別是用于治療免疫性炎癥，以及作為抗原佐劑的用途，其中所述抗原包括細(xì)胞反應(yīng)和體液反應(yīng)。簡(jiǎn)寫(xiě)AA佐劑關(guān)節(jié)炎；CFA完全弗氏佐劑；DTH遲發(fā)型超敏反應(yīng)；EAE實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎；GA格拉默乙酸鹽(glatiramer acetate)；IFA不完全弗氏佐劑；IV靜脈內(nèi)；MBP髓鞘堿性蛋白；MS多發(fā)性硬化；MSCH小鼠脊髓勻漿；OA油醇；PBS磷酸緩沖鹽溶液；SC皮下。
背景技術(shù)：
1.炎癥炎癥通常分為三個(gè)階段急性炎癥、免疫應(yīng)答和慢性炎癥。急性炎癥是對(duì)組織損傷的最初反應(yīng)，通過(guò)釋放組胺、血清素、緩激肽、前列腺素和白細(xì)胞三烯介導(dǎo)。當(dāng)免疫活性細(xì)胞在外來(lái)生物或急性或慢性炎癥反應(yīng)期間釋放的抗原物質(zhì)作用下激活時(shí)，出現(xiàn)免疫反應(yīng)，其通常在急性炎癥階段之后。宿主免疫反應(yīng)的結(jié)果可能是有益的，因?yàn)樗谷肭稚锉煌淌苫蛑泻?。但是，如果免疫反?yīng)導(dǎo)致慢性炎癥而沒(méi)有消除潛在的損傷過(guò)程，如同類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中出現(xiàn)的情況，那么結(jié)果可能是有害的。
炎癥患者的治療使組織損傷進(jìn)程減緩或終止以及疼痛減輕，疼痛是炎癥患者的癥狀和持續(xù)主訴。
抗炎藥通常分為甾體類或糖皮質(zhì)激素抗炎藥和非甾體類抗炎藥(NSAID)。糖皮質(zhì)激素是強(qiáng)抗炎藥物，但是與慢性皮質(zhì)類甾醇治療有關(guān)的高毒性抑制了它的應(yīng)用，只是用于某些急性炎癥性病癥。因此，非甾體類抗炎藥在慢性病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療中起主要的作用。
非甾體類抗炎藥包括氨基芳基羧酸、芳基乙酸、芳基丁酸、芳基羧酸、芳基丙酸、吡唑、吡唑酮、水楊酸的衍生物和一些不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的其它衍生物，包括抗關(guān)節(jié)炎/抗風(fēng)濕特效藥。
非常希望能夠提供新的非甾體類抗炎藥，其能夠作為目前抗炎藥的代用品。
2.疫苗和佐劑淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的中央細(xì)胞，負(fù)責(zé)獲得性免疫以及多樣性、特異性、記憶和自我/非自我識(shí)別的免疫性質(zhì)。成熟B細(xì)胞與其它淋巴細(xì)胞的區(qū)別在于它們的合成以及用作抗原受體的膜結(jié)合免疫球蛋白(抗體)分子的展示?？乖统墒煸糂細(xì)胞上的膜結(jié)合抗體之間的相互作用導(dǎo)致相應(yīng)特異性的B細(xì)胞克隆激活和分化，由此生成缺乏膜結(jié)合抗體但是分泌具有相同抗原結(jié)合特異性抗體分子的B細(xì)胞克隆。
如同B淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞也具有抗原膜受體。但是，與B細(xì)胞上的膜結(jié)合抗體不同的是，T細(xì)胞受體(TCR)不識(shí)別游離抗原。相反，TCR僅識(shí)別與主要組織相容性復(fù)合體(MHC)內(nèi)的基因編碼的自體分子結(jié)合的抗原。為了使大部分T細(xì)胞能夠被識(shí)別，抗原必須與MHC分子一起展示在抗原遞呈細(xì)胞(APC)或病毒感染細(xì)胞、癌細(xì)胞的表面上及移植。
如B細(xì)胞一樣，T細(xì)胞表達(dá)不同的膜分子。所有的T細(xì)胞亞群都表達(dá)TCR，一種包括CD3的多肽復(fù)合物，大多數(shù)T細(xì)胞都可以通過(guò)兩種膜分子(CD4和CD8)中的一種或另一種的存在進(jìn)行區(qū)分。表達(dá)膜糖蛋白分子CD4的T細(xì)胞局限于識(shí)別與結(jié)合II類MHC分子的抗原，而表達(dá)CD8(一種二聚體膜糖蛋白)的T細(xì)胞局限于識(shí)別與I類MHC分子結(jié)合的抗原。
通常，CD4和CD8的表達(dá)同樣定義了T淋巴細(xì)胞的兩個(gè)主要亞群。CD4+T細(xì)胞通常起T輔助(TH)細(xì)胞的作用并且是II類限制性的；CD8+T細(xì)胞通常起T細(xì)胞毒性(Tc)細(xì)胞的作用并且是I類限制性的。
TH細(xì)胞通過(guò)抗原遞呈細(xì)胞上的抗原II類MHC復(fù)合體的識(shí)別進(jìn)行激活。激活后，TH細(xì)胞開(kāi)始分裂并產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞的克隆，每個(gè)對(duì)相同的抗原II類MHC復(fù)合體來(lái)說(shuō)都是特異性的。這些TH細(xì)胞分泌各種細(xì)胞因子，其在B細(xì)胞、T細(xì)胞、以及其它參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞的激活中起關(guān)鍵作用。
TH細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子模式的改變可以改變與其它白細(xì)胞發(fā)育的免疫反應(yīng)的類型。依據(jù)TH細(xì)胞激活時(shí)分泌的特征細(xì)胞因子，可以將TH細(xì)胞分為兩組TH1反應(yīng)生成一種細(xì)胞因子分布，其支持炎癥并主要激活某些T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，而TH2反應(yīng)主要激活B細(xì)胞和依賴于抗體的免疫反應(yīng)。因此，TH1細(xì)胞分泌誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖的IL-2和介導(dǎo)組織炎癥的細(xì)胞因子例如IFN-r。相反，TH2細(xì)胞分泌IL-4和IL-10，其中IL-4激活B細(xì)胞以分泌某些IgG同種型的抗體并抑制TH1炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，而IL-10抑制由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的炎性細(xì)胞因子，并因此間接地減少TH1細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，并通過(guò)下調(diào)II類MHC表達(dá)對(duì)抗原遞呈細(xì)胞起作用。
自體免疫源于免疫系統(tǒng)對(duì)自體組分的不適宜反應(yīng)，導(dǎo)致T細(xì)胞或B細(xì)胞的自體反應(yīng)性克隆激活，生成針對(duì)內(nèi)源性抗原的體液或細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)，隨后對(duì)細(xì)胞、組織和器官造成損傷。有時(shí)，損傷是由抗體引起的，例如自身免疫性疾病艾迪生氏病、自身免疫性貧血(例如自身免疫性溶血性貧血和惡性貧血)、橋本氏甲狀腺炎和硬皮病。
許多自身免疫性疾病例如胰島素依賴性糖尿病(IDDM或I型糖尿病)、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性甲狀腺炎的特點(diǎn)在于通過(guò)由內(nèi)源性抗原激活的T細(xì)胞介導(dǎo)的組織破壞。這些自身抗原的免疫反應(yīng)通過(guò)自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的持續(xù)激活得以維持。
自身免疫疾病可以分為器官特異性自身免疫疾病和全身性自身免疫疾病，在器官特異性自身免疫疾病中，免疫反應(yīng)針對(duì)單一器官或腺體獨(dú)有的靶抗原，這樣表現(xiàn)基本上局限于該器官，而在全身性自身免疫疾病中，免疫反應(yīng)針對(duì)廣泛范圍的靶抗原并涉及許多器官和組織。器官特異性自身免疫疾病的例子包括胰島素依賴性糖尿病、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、甲狀腺炎和重癥肌無(wú)力，全身性自身免疫疾病的例子包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡和硬皮病。
TH1細(xì)胞促進(jìn)了器官特異性自身免疫疾病的發(fā)病。例如，強(qiáng)有力的證據(jù)表明在小鼠中，實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是由免疫抗原例如髓鞘堿性蛋白(MBP)或蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP)特異性的CD4+TH1細(xì)胞引起的。該病可通過(guò)高M(jìn)BP或PLP免疫動(dòng)物的T細(xì)胞或這些動(dòng)物的克隆T細(xì)胞系由一只動(dòng)物傳給另一只動(dòng)物。TH1型反應(yīng)似乎還涉及其它的T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或病癥，例如接觸性皮炎。
大多數(shù)器官特異性自身免疫疾病是由自身反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞引起的。這些T細(xì)胞的分析表明TH1/TH2平衡可能對(duì)是否發(fā)生自體免疫產(chǎn)生作用。TH1細(xì)胞涉及自體免疫的形成，而在一些情況中，TH2細(xì)胞不僅預(yù)防該疾病的誘導(dǎo)，而且防止既有疾病的進(jìn)一步發(fā)展，并在異體移植耐受性的誘導(dǎo)和維持中起保護(hù)作用。
現(xiàn)已發(fā)開(kāi)了幾種治療自身免疫疾病的方法。各種自身抗原的鑒定和測(cè)序引起了調(diào)節(jié)自身免疫T細(xì)胞活性的新方法的產(chǎn)生?，F(xiàn)已提出，涉及自身免疫性疾病發(fā)病的全抗原或源自其序列的肽用于治療自身免疫疾病。
適合對(duì)自身免疫性疾病進(jìn)行免疫特異性治療的合成肽由涉及自身免疫性疾病發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別。這些肽的序列由涉及該疾病的抗原序列內(nèi)的病原性序列組成，或者可以是其類似物，在序列中，一個(gè)或多個(gè)天然氨基酸殘基被不同的氨基酸殘基取代，特別是所謂的″變異肽″，其在病原性天然副本(即，接觸TCR的部位)的抗原表位中含有單個(gè)的氨基酸取代，但是在抗原限制位(即，接觸MHC的部位)中沒(méi)有變異。
每種自身免疫性疾病將會(huì)有完美的肽供其治療，這些肽從與該疾病有關(guān)的抗原的序列中直接獲得，或者是一種變異肽或其另一種類似物。因此，一種疾病如多發(fā)性硬化(MS)，其包括與自身抗原例如髓鞘堿性蛋白(MBP)、髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白(MOG)和蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP)反應(yīng)的T細(xì)胞，需要MBP、MOG或PLP的肽或其類似物來(lái)對(duì)它進(jìn)行治療；重癥肌無(wú)力可以用一種來(lái)自乙酰膽堿受體的肽進(jìn)行治療；甲狀腺炎可以用一種來(lái)自甲狀腺球蛋白的肽進(jìn)行治療；1型糖尿病可以用一種谷氨酸脫羧酶(GAD)的肽或一種來(lái)自胰島素序列的肽進(jìn)行治療；系統(tǒng)性紅斑狼瘡可以用一種來(lái)自蛋白質(zhì)P53的肽進(jìn)行治療；以及傳染性神經(jīng)元炎可以用一種來(lái)自髓鞘抗原P2的肽進(jìn)行治療。
最近幾年，已經(jīng)提出用來(lái)源于與自身免疫性疾病有關(guān)的病原性自身抗原的肽或其類似物用于治療該疾病。例如，已經(jīng)描述了來(lái)源于人MBP序列(US 5,817,629；US 6,252,040)及其類似物(US 5948764；US6,329,499)的肽用于治療多發(fā)性硬化；現(xiàn)已提出人GAD和胰島素的65kD同工型的肽類似物用于治療糖尿病(分別為US 5,945,401和US6,197,926)；以及現(xiàn)已描述了一種自身抗原或其片段用于治療眼色素層視網(wǎng)膜炎(US 5,961,977)。上面所引用的全部專利在此引入作為參考，就象完成公開(kāi)一樣。
對(duì)于各種自身免疫疾病的每一種，希望給予相關(guān)肽的助劑，其將激活抗炎TH2表型的T細(xì)胞。預(yù)期這樣可以阻礙自身免疫過(guò)程。還有不涉及自身免疫性疾病治療的情況，其中激活具有TH2表型的特異性T細(xì)胞是有用的。但是，涉及自身抗原的治療必須用不誘導(dǎo)TH1型免疫的佐劑進(jìn)行，TH1型免疫可能激活所治療患者的危險(xiǎn)的TH1自體免疫。因此，需要鑒別能夠誘導(dǎo)非炎性TH2型T細(xì)胞的特異性抗原組合的佐劑。
佐劑，依據(jù)它們的性質(zhì)，是非特異性的免疫調(diào)節(jié)劑。適合于該目的的佐劑是一種非特異性的免疫調(diào)節(jié)劑，其能夠與抗原或其它分子組合成治療性接種疫苗，以便誘導(dǎo)所需的抗炎性表型的特異性T細(xì)胞的激活。
當(dāng)皮下(SC)給予小鼠時(shí)，適合對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)疾病或病癥例如自身免疫疾病進(jìn)行治療的幾種肽被證明是有效的，在一種油賦形劑中，例如被稱為不完全弗氏佐劑(IFA)的礦物油乳劑。但是，IFA和完全弗氏佐劑(CFA；含各種數(shù)量的分枝桿菌滅活生物的礦物油制劑)不允許用于人類，因?yàn)榈V物油在體內(nèi)不能降解。
非常希望發(fā)現(xiàn)用于肽治療的有效賦形劑，該賦形劑是可降解的并且作為一種起載體作用的佐劑，或者用于儲(chǔ)存或免疫增效劑/增強(qiáng)劑。
3.本領(lǐng)域相關(guān)的參考文獻(xiàn)已經(jīng)描述了一些脂肪醇和脂肪酸酯作為溶劑或乳化劑用于藥物組合物。例如，鯨蠟醇可作為乳化劑和硬化劑用于藥物組合物(The MerckIndex，2001，13th edition，pp.347-8，#2037)，油醇可以用作藥物載體(The Merck Index，2001，13th edition，p.1222，#6900)，以及油酸的烷基酯可以用作藥物溶劑(The Merck Index，2001，13th edition，p.6899，#6898)。
高級(jí)脂肪族伯醇的混合物，主要從蜂蠟中分離得到，據(jù)稱具有中等抗炎活性。這種混合物的組成還沒(méi)有公開(kāi)(Rodriguez等人，1998)。
已經(jīng)研究了長(zhǎng)鏈醇煙酸酯例如十八烷基和(Z)-9-十八烯-1-基煙酸酯的質(zhì)譜，以解釋長(zhǎng)鏈醇的結(jié)構(gòu)(Vetter和Meister，1981)。但是沒(méi)有生物學(xué)活性被賦予所述的化合物。
已經(jīng)測(cè)試了具有C6-C16飽和醇(例如癸基、十一烷基、十四烷基和十六烷基醇)的4-氨甲基-苯甲酸的(PAMBA)的酯的抗纖維蛋白溶解活性，發(fā)現(xiàn)所述的酯沒(méi)有活性(Markwardt等人，1966)。短鏈醇的PAMBA酯發(fā)現(xiàn)能夠降低體外培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，其中己基酯是更有效的(Beyer and Pilgrim，1991)。
已經(jīng)描述了烷基N，N-二取代的氨基酸，例如烷基N，N-二甲氨基乙酸酯其中所述烷基是辛基、癸基、十二烷基或十四烷基，以及癸基(4-甲基-1-哌嗪基)乙酸酯用作吲哚美辛以及其它可能藥物的經(jīng)皮滲透增強(qiáng)劑(Wong等人，1989；US 4,980,378)。
US 6,291,423描述了在基因治療中使用的絡(luò)合物，其包含一種治療活性物質(zhì)和一種陽(yáng)離子型脂質(zhì)(例如1位和4位被甲基和油氧基羰基甲基取代的季哌嗪鎓化合物)。
JP 2000-302650描述了供毛發(fā)用品使用的N，N-二甲基-氨基乙酸長(zhǎng)鏈鏈烷醇酯，例如十四烷基、十六烷基和十八烷醇和鏈烯醇的酯。但是沒(méi)有具體公開(kāi)油烯基酯。
已經(jīng)制備了具有長(zhǎng)鏈醇例如癸基、月桂基、肉豆蔻基、棕櫚基、硬脂?；陀拖┗嫉奶鸩藟A[(羧甲基)三甲基氫氧化銨內(nèi)鹽]酯，并研究了它們的藥效性質(zhì)(Metayer和Jacob，1952)，或者測(cè)試了它們作為殺生劑在冷卻水處理中的活性(Rucka等人，1983)。
N-羧甲基-哌啶、-哌嗪和-嗎啉化合物的月桂基、肉豆蔻基和鯨蠟基酯的季銨鹽被描述成殺菌劑(Smith等人，1951)。
已經(jīng)提出將氨基酸(例如甘氨酸、苯基甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、賴氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸)的硬脂酰酯和肽的硬脂酰酯用作細(xì)菌性和病毒性人體疫苗的佐劑(Penney等人，1985，1993；Nixon-George等人，1990)。
已經(jīng)描述了將DL-ω-苯基-氨基酸的C4-C10鏈烷醇酯，例如DL-2-苯基甘氨酸辛酯或DL-2-苯基甘氨酸癸酯或DL-2-(4-二甲氨基苯基)甘氨酸辛酯用作抗炎藥、抗組胺藥、解痙藥、抗氧化劑和抗炎藥(Schulz等人，1982；Schewe等人，1991；Kontogiorgis等人，2001)。
US 3,821,403描述了氨基酸的高級(jí)烷基酯，例如甘氨酸、苯基甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸和苯丙氨酸的月桂基、肉豆蔻基、鯨蠟基和硬脂?；?，以及它們的N-低級(jí)烷基衍生物用作植物病害管理(Misato等人，1974)。
發(fā)明概述現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明，某些用作抗炎免疫調(diào)節(jié)劑的長(zhǎng)鏈脂肪醇與含至少一個(gè)堿基的羧酸的酯，以及與涉及細(xì)胞和體液反應(yīng)的特異性抗原結(jié)合的佐劑可以用于治療炎癥，特別是免疫性炎癥，其中所述的佐劑用作載體、儲(chǔ)存或免疫增效劑/增強(qiáng)劑。
一方面，本發(fā)明涉及通式I化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C12-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，在制備用于治療炎癥的藥物組合物中的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及通式Ia的佐劑 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)非環(huán)狀氨基的殘基或-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外，在制備一種進(jìn)一步包含抗原的治療劑中的用途。
在各種類型的癌癥例如黑色素瘤中，以及在感染性疾病例如細(xì)菌和病毒感染中，與通式Ia的佐劑一起使用的抗原可以是一種涉及自身免疫疾病的抗原。含這樣一種抗原和本發(fā)明佐劑的治療劑可以特別用于激活T細(xì)胞，以便治療自身免疫疾病和優(yōu)選需要TH2型免疫反應(yīng)的T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫作用。
上式中的一些化合物，其將在下文中定義，是新的并構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1表示N，N-二甲基-氨基乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(化合物1)對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)的影響。在免疫的當(dāng)天(第0天，三角形)或在第14天，AA起病后(第+14天，圓)，通過(guò)靜脈注射(IV)給予路易鼠化合物1。
圖2表明化合物1對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的作用。在免疫的當(dāng)天(第0天，圓)通過(guò)靜脈注射給予DA大鼠化合物1。
3表明化合物1對(duì)皮膚同種移植存活率的影響。在移植的當(dāng)天(第0天，圓)通過(guò)靜脈注射給予小鼠化合物1。
圖4表明在BALB/c小鼠中，用各種濃度(1、2或4mg)的(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽(化合物3)治療后遲發(fā)型超敏(DTH)反應(yīng)的抑制。
圖5表明各種濃度(0.5、1、2或4mg)的化合物5、9和11對(duì)小鼠中DTH的影響。地塞米松(2mg)用作陽(yáng)性對(duì)照，(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸乙酯HCl(0.5、1、2或4mg)作為陰性對(duì)照。
圖6表明皮下(SC)給予各種濃度(10、50、100、200mg)的化合物3對(duì)大鼠中AA的影響。用油醇(OA，100mg)作比較。
圖7表明皮下(SC)給予各種濃度(10、50、100、200mg)的化合物3對(duì)大鼠中EAE的影響。用油醇(OA，100mg)作比較。
圖8表明經(jīng)口給予各種濃度(0.2、1、2、10、20mg)的化合物3對(duì)大鼠中EAE的影響。用油醇(OA，10mg)作比較。
圖9表明經(jīng)口給予哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽(化合物9，100mg/kg)對(duì)大鼠中EAE的影響。
圖10表明化合物3在EAE誘導(dǎo)的小鼠中促進(jìn)格拉默乙酸鹽(GA)的免疫作用。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明按照一方面，本發(fā)明提供通式I的化合物
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C12-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，在制備用于治療炎癥的藥物組合物中的用途。
在本發(fā)明此方面的一種實(shí)施方案中，在所述的式I的抗炎化合物中，殘基A選自由下面組成的基團(tuán)(i) 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；(ii)被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；以及(iii) 其中R9是H、低級(jí)烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X不存在。
另一方面，本發(fā)明提供通式Ia的佐劑
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)非環(huán)狀氨基的殘基或-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外，在制備一種進(jìn)一步包含抗原的治療劑中的用途。
在本發(fā)明此方面的一種實(shí)施方案中，在所述式Ia的佐劑中，殘基A選自由下面組成的基團(tuán)(i) 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)R4和R5不是H或C1-C6烷基，以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；(ii)被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；以及(iii)
其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X不存在。
另一方面，本發(fā)明涉及下面通式的新化合物R1-O-CO-A其中(i)R1是C20-C24烷基或C10-C24鏈烯基，以及A是下式的殘基 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；或者(ii)R1是C18烷基以及A是下式的殘基 其中R2是H；R3是一對(duì)電子；以及R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；或者(iii)R1是C12-C16烷基以及A是下式的殘基
其中R2是未取代的芳基，或芳基或芳烷基其中芳基部分被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；或者(iv)R1是C10烷基以及A是下式的殘基 其中R2是C1-C6烷基；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；或者(v)R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基以及A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，但是其中R1是C10-C16烷基并且A是被-CH2-NH2取代的苯基的化合物除外；或者(vi)R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基，以及A是下式的基團(tuán) 其中R9是C1-C6烷基或吲哚基(C1-C6)烷基以及X-是抗衡離子；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
為了清楚起見(jiàn)，在本文說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中的所有式中的記號(hào)*表示與R1-O-CO-基團(tuán)的-CO-連接的位置。
根據(jù)本發(fā)明，對(duì)于式Ia的佐劑，R1是C10-C24烷基或鏈烯基，對(duì)于用于治療炎癥的式Ia的化合物，R1是C12-C24烷基或C10-C24鏈烯基。在兩種情況中，R1優(yōu)選是C12-C20，更優(yōu)選C16-C18，最優(yōu)選C18烷基或鏈烯基。烷基可以是直鏈或分枝的并且優(yōu)選選自十二烷基、十四烷基、十六烷基和十八烷基，這樣基團(tuán)R1-O-分別源自于飽和脂肪醇十二烷醇、十四烷醇、十六烷醇(亦稱棕櫚醇)和十八烷醇。鏈烯基可以具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵并優(yōu)選選自十六烯基、十八烯基、十八二烯基和十八三烯基，這樣基團(tuán)R1-O-源自于不飽和的脂肪醇棕櫚烯醇，或者優(yōu)選源自于C18-具有一個(gè)或多個(gè)以反式優(yōu)選以順式雙鍵的不飽和脂肪醇，例如，但不局限于，油醇(順-9-十八烯醇)、亞油烯醇(順-9，12-十八烯二醇)、γ-亞麻醇(順-6，9，12-十八烯三醇)和亞麻醇(順-9，12，15-十八烯三醇)。在一種最優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是順-9-十八烯基，也稱為十八碳-(Z)-9-烯基或油基。
殘基A可以包括非環(huán)狀或環(huán)狀的伯、仲或叔氨基或季銨基。當(dāng)所述氨基是非環(huán)狀時(shí)，所得化合物是氨基酸的酯。
因此，在一種實(shí)施方案中，在包含在本發(fā)明的藥物組合物或治療組合物中的化合物中或者在本發(fā)明的一些新化合物中，A是下式的基團(tuán) 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，具有如上文和權(quán)利要求中所定義的限制條件。例如，對(duì)于式Ia的佐劑和新的化合物，當(dāng)R1是十八烷基(硬脂酰)時(shí)，R4和R5不能是H或C1-C6烷基；對(duì)于該新的化合物，其中R1是C12-C16烷基，R2不能是H、C1-C6烷基或未取代的芳烷基，或者其中R1是C10烷基，R2不能是H、芳基或芳烷基。
在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，R2是H。如在此所使用的，C1-C6烷基是指具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如但不局限于，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基和己基。在此使用的″芳基″單獨(dú)地或作為″芳烷基″的一個(gè)部分是指C6-C10芳族碳環(huán)基團(tuán)例如苯基和萘基。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，芳基是苯基。術(shù)語(yǔ)″芳烷基″中的烷基同樣是指C1-C6烷基。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，芳烷基是芐基。在優(yōu)選實(shí)施方案中，苯基和芐基是未取代的或被羥基取代，例如p-羥基芐基。
上述式中的某些化合物其中R3是一對(duì)電子以及R4和R5是H是氨基酸的酯，例如甘氨酸(R2是H)、丙氨酸(R2是甲基)、纈氨酸(R2是異丙基)、亮氨酸(R2是異丁基)、異亮氨酸(R2是仲丁基)、苯基甘氨酸(R2是苯基)、苯丙氨酸(R2是芐基)、酪氨酸(R2是p-羥基芐基)的酯。
根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，R4和R5與它們相連的氮原子一起形成任選被氧原子或氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)，例如吡咯烷、氮，并且優(yōu)選是6-元環(huán)，更優(yōu)選是哌啶、哌嗪或嗎啉。哌嗪環(huán)可以在4位被C1-C6烷基取代，優(yōu)選被甲基取代。
在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，R2是H或苯基，R3是H、一對(duì)電子或甲基，R4和R5每個(gè)是H或甲基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在氮原子的位置上任選被甲基取代的嗎啉或哌嗪環(huán)。依據(jù)這種實(shí)施方案，用作抗炎化合物和佐劑的化合物的例子是在此稱為化合物1、3、4、7、9、11的新酯1.N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯3.(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽4.(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽7.4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物9.哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽11.α-氨基-α-苯基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，A是被CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R8是H以及R6和R7每個(gè)是H或C1-C6烷基，優(yōu)選甲基。依據(jù)這種實(shí)施方案的化合物的例子是4-二甲氨基甲基苯甲酸的新的酯，在此稱為化合物5和10，這兩種化合物都是作為抗炎藥和佐劑。
5.4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl10.4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl。
在本發(fā)明的還有另一種實(shí)施方案中，A是吡啶基 其中R9是一對(duì)電子以及X-不存在，或者R9是甲基或吲哚乙基以及X-是選自氯化物、溴化物、碘化物和甲苯磺酸鹽的抗衡離子。這些化合物是煙酸的酯。依據(jù)這種實(shí)施方案的化合物的例子是在此稱為化合物2、6a、6b、6c和8，兩個(gè)都作為抗炎藥和佐劑，其中化合物6a、6b、6c和8是新的化合物2.煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；6a.1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；6b.1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；6c.1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽；和8.1-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物；本發(fā)明的酯通常是晶狀的、不吸濕的和水溶性的，并且比起始的飽和或順-不飽和醇更容易提純和配制成口服和腸胃外制劑。
本發(fā)明還考慮式I和Ia化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，酸加成鹽和非環(huán)狀或環(huán)狀季銨鹽，或與抗衡離子形成的吡啶鎓鹽。所述化合物的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽包括堿與無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸等等形成的鹽，以及堿與有機(jī)酸例如脂肪族單-和二羧酸、苯基-取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸、鏈烷二酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸等等形成的鹽。因此，這些鹽包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、一氫磷酸鹽、二氫磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、辛酸鹽、異丁酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽(甲苯磺酸鹽)、苯乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽等等。
所述堿性化合物的酸加成鹽通過(guò)如下制備游離堿與足量的所需酸接觸，以常規(guī)方式生成鹽。游離堿形式通過(guò)如下進(jìn)行再生所述鹽與堿進(jìn)行接觸，然后以常規(guī)方式分離游離堿。游離堿形式與它們的各種鹽在某些物理性質(zhì)上有些不同，例如在極性溶劑中的溶解度，但是對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō)，所述鹽在其它方面與它們的游離堿是相同的。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，通式I的化合物可以通過(guò)長(zhǎng)鏈脂肪醇例如油醇與合適的氨基酸反應(yīng)進(jìn)行制備。因此，油醇與N，N-二甲基甘氨酸反應(yīng)，得到在此稱為化合物1的化合物。在另一種實(shí)施方案中，長(zhǎng)鏈脂肪醇與煙酸的鹵化物反應(yīng)，例如油醇與煙酰氯反應(yīng)得到在此稱為化合物2的化合物。
在另一種實(shí)施方案中，長(zhǎng)鏈脂肪醇與鹵甲基乙酸氯化物反應(yīng)，然后所得酯與合適的胺反應(yīng)。例如，油醇與氯乙酰氯反應(yīng)，所得氯乙酸油酯與哌嗪或與N-甲基-嗎啉反應(yīng)，得到游離堿，然后將游離堿轉(zhuǎn)化為鹽，例如化合物3或化合物7。類似地，十八烷醇與氯乙酰氯反應(yīng)，所得硬脂酰氯乙酸酯與4-甲基-哌嗪反應(yīng)，得到游離堿，然后將游離堿轉(zhuǎn)化為鹽，例如化合物4。
本發(fā)明的其它方法在下面的實(shí)施例中進(jìn)行描述，并且可以用于制備式I的類似化合物。油醇和活化氨基酸間的反應(yīng)可以在很寬范圍的有機(jī)溶劑中進(jìn)行，包括極性溶劑例如乙腈和氯仿，以及非極性溶劑例如己烷，在寬的溫度范圍內(nèi)，例如從環(huán)境溫度到回流溫度，以及在1-2小時(shí)到1-2天的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)。
季吡啶鎓鹽可以如上所述進(jìn)行制備，或者使用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的烷基化試劑例如鹵代烷、磺酸烷基酯和鹵代烷基吲哚，對(duì)油基煙酸鹽進(jìn)行烷基化。鹵代乙酸油酯與胺的反應(yīng)可以在寬范圍的有機(jī)溶劑中，包括極性溶劑例如乙腈和非極性溶劑例如己烷，在寬范圍的溫度下例如從環(huán)境溫度到回流溫度，以及在1-2小時(shí)到1-2天的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。將獲得的油狀或低熔點(diǎn)游離堿經(jīng)合適的后處理和提純后，轉(zhuǎn)變?yōu)樗帉W(xué)上可接受的鹽。后者通常是高熔點(diǎn)的和水溶性固體。
應(yīng)該注意，對(duì)于本發(fā)明酯的制備其中R1是順-鏈烯基，起始順-不飽和醇例如油醇可以以一種基本上純的順-不飽和形式使用，也就是說(shuō)，反應(yīng)物含有至少約80％的順式。例如，商業(yè)油醇約為85％的純度，大部分雜質(zhì)由反式類似物組成(elaidyl alcohol)先天和獲得性免疫系統(tǒng)都參與調(diào)節(jié)每種類型的炎癥，炎癥是在過(guò)程例如傷口愈合、結(jié)締組織重建、血管生成、器官再生、神經(jīng)保護(hù)中以及在自身免疫、變應(yīng)性、移植排斥和感染中觀察到的獲得性免疫反應(yīng)中的一個(gè)關(guān)鍵因素。因此，調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)的抗炎藥(例如在此所述的那些)將對(duì)各種病癥有用。
可以用本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑進(jìn)行治療的炎性疾病、障礙或病癥包括，但不局限于，免疫性慢性或急性炎性疾病、障礙或病癥(選自自身免疫性疾病)，嚴(yán)重變態(tài)反應(yīng)，哮喘，或與疾病、障礙或病癥有關(guān)的炎癥(選自移植排斥)，慢性退行性疾病例如阿爾茨海默氏病，以及可以用于神經(jīng)保護(hù)、器官再生、以及用于皮膚慢性潰瘍或精神分裂癥的治療。
可以根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療的自身免疫疾病的例子是多發(fā)性硬化或人關(guān)節(jié)炎病癥，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、帶有瑞特氏綜合征的反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎以及其它由免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎癥。還考慮了其它自身免疫疾病，并按照所涉及的器官和組織列于下文中。
因此，本發(fā)明涉及免疫性介導(dǎo)炎性疾病、障礙或病癥的治療，所述疾病、障礙或病癥選自重癥肌無(wú)力、格-巴二氏綜合癥或神經(jīng)系統(tǒng)的其它炎性疾??；牛皮癬、尋常性天皰瘡或其它皮膚疾?。幌到y(tǒng)性紅斑狼瘡、腎小球腎炎或其它腎臟疾病；動(dòng)脈粥樣硬化或其它血管炎癥；自身免疫性肝炎、炎性腸病例如克羅恩氏病、胰腺炎或其它胃腸系統(tǒng)疾病；I型糖尿病(胰島素依賴性糖尿病或IDDM)、自身免疫性甲狀腺炎(橋本氏甲狀腺炎)或其它內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的免疫介導(dǎo)炎性疾病、障礙或病癥是牛皮癬。
一種用于測(cè)試本發(fā)明藥物抗炎活性的模型是佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)，它是一種用在完全弗氏佐劑(CFA)中的結(jié)核分枝桿菌免疫某些品系的大鼠的實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)病。這些大鼠出現(xiàn)一種特征與人類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相似的關(guān)節(jié)炎，因此用作人關(guān)節(jié)炎病癥(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、瑞特氏綜合征的反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎以及其它似乎由免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎癥)的動(dòng)物模型。佐劑關(guān)節(jié)炎還作為免疫介導(dǎo)炎癥(一般包括細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)、移植排斥和變態(tài)反應(yīng))的模型。例如，可以抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療包括免疫抑制劑(例如皮質(zhì)類甾醇、環(huán)孢菌素A、咪唑硫嘌呤)以及其它廣泛用于治療自身免疫疾病的免疫抑制劑。因此，由一種治療劑抑制佐劑關(guān)節(jié)炎表明該藥物是潛在有效的廣譜抗炎藥。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種治療炎癥的藥物組合物，包含藥學(xué)上可接受的載體和上文所述的通式I的化合物。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以是固體、半固體或液體形式，并且可以進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的填充劑、載體或稀釋劑以及其它惰性成份和賦形劑。所述的組合物可以通過(guò)任何合適的途徑給予，例如，但不局限于，口服、局部或腸胃外(例如通過(guò)皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)注射)，或任何其它合適的途徑。由于許多化合物是油性的，他們優(yōu)選通過(guò)胃腸外給藥，更優(yōu)選通過(guò)皮下給藥。如果連續(xù)給藥，那么本發(fā)明的化合物通常分別每天注射1-4次，或者例如使用微型泵連續(xù)皮下輸注給藥。劑量將取決于患者的狀況和疾病的嚴(yán)重程度，并且由主治醫(yī)師視情況而確定。
對(duì)于腸胃外給藥，通過(guò)化合物以純度、單位劑量可注射形式(溶液、懸浮液或乳液)與藥學(xué)上可接受的載體進(jìn)行混合，可以對(duì)化合物進(jìn)行配制，所述的藥學(xué)上可接受的載體在所使用的劑量和濃度下對(duì)接受者是無(wú)毒的并且與制劑中的其它組分相容。通常，通過(guò)將化合物均勻地和緊密地與液體載體或精細(xì)粉碎固體載體或兩者接觸，制備所述制劑。然后，如有必要，將產(chǎn)品制成所需的制劑。優(yōu)選地，載體是腸胃外載體，更優(yōu)選是一種與接受者血液等滲的溶液。這樣的載體溶媒的例子包括水、鹽水、林格溶液和葡萄糖溶液。還可以使用非水賦形劑例如不揮發(fā)油以及脂質(zhì)體。這些制劑可以通過(guò)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的常規(guī)方法進(jìn)行制備，例如描述在Remington′s Pharmaceutical Science″，A.R.Gennaro，ed.，17th edition，1985，Mack Publishing Company，Easton，PA，USA。
另一方面，本發(fā)明涉及一種治療炎癥特別是免疫性介導(dǎo)炎癥的方法，其包括給予需要的患者有效量的如上文所定義的式I的化合物。
另一方面，本發(fā)明涉及治療組合物，包括上文式Ia的佐劑和抗原?？乖梢允翘岣唧w液反應(yīng)的抗原例如毒素、細(xì)菌或病毒抗原，或者優(yōu)選是提高細(xì)胞反應(yīng)的抗原例如肽。
所述治療劑可以包含一種可用于治療自身免疫性疾病、神經(jīng)變性疾病例如阿爾茨海默氏病或帕金森病、癌癥例如黑色素瘤、或傳染病包括細(xì)菌和病毒感染的抗原。
在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的治療組合物用于治療T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥，并且包含一種被炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，所述的炎性T細(xì)胞與T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥的發(fā)病有關(guān)。
在一種更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的治療劑包含一種被炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，所述的炎性T細(xì)胞與T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥有關(guān)的發(fā)病有關(guān)，并且所述的制劑造成個(gè)體的T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)從TH1轉(zhuǎn)移到TH2。
本發(fā)明的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑形成脂質(zhì)乳液，當(dāng)作為疫苗佐劑與被治療疾病、障礙或病癥所涉及的T細(xì)胞能與之反應(yīng)的抗原物質(zhì)一起使用時(shí)，用來(lái)介導(dǎo)治療前TH1T細(xì)胞反應(yīng)向治療后TH2T細(xì)胞反應(yīng)的轉(zhuǎn)移。此發(fā)現(xiàn)表明，這樣的脂質(zhì)乳液是致耐受性的生物活性載體，其可以用于治療任何TH1介導(dǎo)疾病或病癥的疫苗中。在這樣的疫苗中，抗原提供療效的免疫特異性，而本發(fā)明的生物活性載體提供生物學(xué)結(jié)果，即TH1→TH2轉(zhuǎn)移。由于本發(fā)明的所述生物活性載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移，一系列自身反應(yīng)性疾病、障礙和病癥可以通過(guò)使用一種可誘導(dǎo)T細(xì)胞細(xì)胞因子轉(zhuǎn)移的抗原/載體組合加以治療。
在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方案中，該治療劑包含抗原和治療由TH1細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫疾病的式Ia的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑佐劑。此類疾病的例子包括，但不局限于，自身免疫疾病例如多發(fā)性硬化、I型糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性甲狀腺炎。
用于這種制劑的抗原是一種與所述自身免疫疾病發(fā)病有關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，并可以是參與所述疾病進(jìn)程的完整蛋白、所述蛋白序列衍生的肽、在病源性自身抗原肽表位中具有單個(gè)氨基酸取代的變異肽或與所述疾病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的任何其它肽。
因此，對(duì)于多發(fā)性硬化(MS)的治療，所述可以是MBP、MOG或PLP，或US 5,817,629中所述的人MBP序列衍生的肽，例如肽MBP(75-95)、MBP(86-95)和MBP(82-98)，或US 5,948,764和6,239,499中所述的其類似物，或MOG肽或PLP肽及其類似物，所有這些專利在此引入作為參考，似乎如在此完全公開(kāi)的那樣。所述抗原還可以是格拉默乙酸鹽，共聚物1或Cop1的乙酸鹽的通用名稱，一種由四種氨基酸組成的無(wú)規(guī)共聚物酪氨酸-谷氨酸-丙氨酸-賴氨酸，其與MBP在功能上可交叉反應(yīng)并能夠在抗原呈遞中與MHCII類上的MBP競(jìng)爭(zhēng)。一些國(guó)家已經(jīng)批準(zhǔn)將格拉默乙酸鹽用于治療MS，其商標(biāo)名為COPAXONE(Teva Pharmaceuticals Ltd.，Petah Tikva，Israel的商標(biāo))。
對(duì)于I型糖尿病(IDDM)的治療，所述肽可以來(lái)源于谷氨酸脫羧酶(GAD)或如US 5,945,401中所述的GAD肽類似物，或胰島素肽類似物例如包含天然胰島素B鏈序列殘基9-23的肽，其在12、13、15和/或16位變異，并且如US 6,197,926中所述的進(jìn)一步變異，所有這些專利在此引入作為參考，似乎如在此完全公開(kāi)的那樣。
對(duì)于其它自身免疫疾病的治療，所述肽來(lái)源于與疾病有關(guān)的抗原序列或其肽類似物。因此，對(duì)于自身免疫性甲狀腺炎的治療，所述肽來(lái)源于甲狀腺球蛋白序列；對(duì)于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，所述自身抗原可以源自于膠原蛋白II或分枝桿菌例如結(jié)核分枝桿菌，例如稱為hsp60的60kDa熱激蛋白，其構(gòu)成在佐劑關(guān)節(jié)炎中由T淋巴細(xì)胞識(shí)別的分枝桿菌抗原表位或相應(yīng)的人HSP60或其肽；對(duì)于重癥肌無(wú)力的治療，所述肽源自于乙酰膽堿受體序列或如US 6,066,621中所述的其類似物，在此引入作為參考，好象在此完全公開(kāi)一樣；對(duì)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療，所述肽可以來(lái)源于蛋白質(zhì)P53序列；以及對(duì)于格-巴二氏綜合癥的治療，所述肽可以來(lái)源于髓鞘抗原P2的序列。
所述抗原還可以是一種非肽抗原。可根據(jù)本發(fā)明使用的非肽抗原的例子包括，但不局限于，治療磷脂綜合癥的磷脂、治療動(dòng)脈粥樣硬化的膽固醇、以及治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的DNA分子。
所述抗原是否為肽并不重要。因此，例如，引起皮膚過(guò)敏及炎癥例如接觸性皮炎的TH1介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)，可以通過(guò)含刺激性抗原和本發(fā)明的引起細(xì)胞因子反應(yīng)從TH1型轉(zhuǎn)移到TH2型的生物活性載體/佐劑的疫苗進(jìn)行治療。因此，雖然患者繼續(xù)維持針對(duì)抗原的高水平抗體，但造成皮膚發(fā)炎的炎癥性T細(xì)胞反應(yīng)受到抑制。
因此，本發(fā)明的致耐受性生物活性載體/佐劑可以在需要對(duì)T細(xì)胞攻擊的抗原產(chǎn)生耐受性的任何時(shí)候使用，即當(dāng)疫苗被用于限制T細(xì)胞介導(dǎo)的病癥，特別是TH1-細(xì)胞介導(dǎo)的病癥的任何時(shí)候。如果可以確定在移植排斥或移植物抗宿主疾病中是何種抗原激活該反應(yīng)，那么給予這樣的抗原和本發(fā)明的載體就可以指望促使從不希望的炎癥性TH1反應(yīng)向更為希望的TH2反應(yīng)轉(zhuǎn)移，不管在這種情況下能與T細(xì)胞反應(yīng)的抗原數(shù)目總體上的復(fù)雜性。
在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述治療劑引起IL-2或IFN-γT細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)的減少和IL-4或IL-10T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)的增加。
為了測(cè)定肽激活后T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，在一種體外激活測(cè)定法中檢測(cè)患者外周血中的淋巴細(xì)胞。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法從肝素化全血中分離外周血淋巴細(xì)胞，與濃度為5-50μg/ml的測(cè)試肽一起進(jìn)行培養(yǎng)。在不同時(shí)間點(diǎn)收集培養(yǎng)T細(xì)胞的上清液，按照ELISA或生物測(cè)定法測(cè)試各種細(xì)胞因子的活性。
根據(jù)本發(fā)明的完全意想不到的發(fā)現(xiàn)，某些長(zhǎng)鏈脂肪醇與含一種堿基的羧酸所形成的酯可以有效地用作T細(xì)胞激活佐劑。類似地，同樣意想不到地發(fā)現(xiàn)，這些制劑是致耐受性的生物有效抗炎免疫調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明的治療劑(含有抗原和在此所述的式Ia的免疫調(diào)節(jié)劑)的優(yōu)點(diǎn)在于治療可以限于誘導(dǎo)保護(hù)性TH2免疫反應(yīng)所需的相對(duì)較短的接觸，這樣誘導(dǎo)的特異性TH2免疫自身將積極抑制疾病。如果沒(méi)有所述抗原，那么不得不長(zhǎng)期給予所述免疫調(diào)節(jié)劑以便持續(xù)抑制炎癥，并且一旦停止治療，預(yù)計(jì)疾病將會(huì)復(fù)發(fā)。在一些疾病中，持續(xù)給予單獨(dú)的抗炎藥的長(zhǎng)期作用可能是不希望的。因此，通過(guò)將本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑和特異性抗原組合在一起誘導(dǎo)對(duì)炎癥過(guò)程的積極和特異性調(diào)節(jié)是有利的。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種治療T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥的方法，其包括給予需要的個(gè)體有效量的一種治療劑，所述的治療劑包含被與所述T細(xì)胞介導(dǎo)疾病、障礙或病癥的發(fā)病有關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，以及上文的通式Ia的佐劑。
現(xiàn)在通過(guò)下列非限制性實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行闡述。
實(shí)施例在實(shí)施例中，下列化合物通過(guò)它們的粗體數(shù)字標(biāo)明1.N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；2.煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；3.(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽；4.(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽；5.4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl6a.1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；6b.1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；6c.1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽酯；以及7.4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物；8.1-[(2-(1 H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物；9.哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽；10.4-N，N-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl11.α-氨基-α-苯基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽。
實(shí)施例1N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(化合物1)的合成將N，N-二甲基甘氨酸(1.60g，15.4mmol)懸浮在干燥并不含酒精的氯仿(20ml)中，接著加入PCl5(3.80g，17.3mmol)。將所述的黃色懸浮液在55-60℃下攪拌1小時(shí)，冷卻到30℃，加入油醇(5.70ml，4.85g，18.0mmol)。將所述的黃色溶液加熱到63-65℃，并在此溫度下攪拌3-4小時(shí)。將該溶液冷卻到室溫，濾掉少量不溶性物質(zhì)。向?yàn)V液中加入水，然后將混合物的pH值調(diào)節(jié)到8。分離有機(jī)相，用5％NaHCO3和鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。黃色油狀殘余物(5.07g)與乙醚一起研磨，然后過(guò)濾所得懸浮物。將濾液蒸發(fā)至干，得到3.18g粗產(chǎn)物，其用柱層析(正己烷接著乙酸乙酯)提純，得到標(biāo)題化合物，在此是指化合物1，是一淺黃色液體(2.6g，7.36mmol，41％)。
計(jì)算值C，74.73；H，12.26；N，3.96.實(shí)測(cè)值C，67.88；H，11.69；N，3.13。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)(ppm)δ0.88(t，3H，Me)，1.27-1.29(m，22H，11CH2)，1.57-1.67(m，2H，CH2，)，2.00(bd，4H，2CH2)，2.37(s，6H，NMe2)，3.18(s，2H，CH2)，4.13(t，2H COOCH2)，5.31-5.39(m，2H，CH＝CH).
IR1755cm-1(CO).
實(shí)施例2煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(化合物2)的合成將煙酰氯鹽酸鹽(17.8g，0.1mol)和油醇(26.85g，0.1mol)加入到己烷(250ml)中。在10分鐘內(nèi)，將吡啶(15.8g，0.2mol)加入到攪拌下的混合物中，然后反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。過(guò)濾除去鹽酸吡啶并用己烷洗滌。用水萃取合并的濾液，在MgSO4干燥，接著蒸發(fā)至干。殘余物用乙腈蒸煮兩次，干燥粘性殘余物，得到澄清的水樣液體，其冷卻時(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)榉试順?21.1g，56.5mmol，56.5％)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)(ppm)δ0.90(t，3H，Me)，1.30-1.50(m，22H，11CH2)，1.75-1.85(m，2H，CH2，)，2.00(bd，4H，2CH2)，4.35(t，2H，COOCH2)，5.31-5.39(m，2H，CH＝CH)，7.41(dd，1H)，8.30(dt，1H)，8.77(dd，1H)，9.25(d，1H).
實(shí)施例3(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯L-酒石酸鹽(化合物3)的合成3a)氯乙酸十八碳-9-(Z)-烯基酯將油醇(147.9g，0.55mol)溶于正己烷(300ml)中，接著在10分鐘內(nèi)，向其中滴加氯乙酰氯(56.5g，0.50mol)。在室溫下，將該澄清的反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)。通過(guò)向反應(yīng)混合物中鼓入氮?dú)?，除去其中的痕量HCl氣體。無(wú)需進(jìn)一步提純，將此粗標(biāo)題產(chǎn)物的己烷溶液直接用于下一步反應(yīng)。
3b)4-甲基-哌嗪-1-基-乙酸十八碳-9-(Z)-烯基酯(游離堿)將正己烷加入到上面實(shí)施例3a中獲得的己烷溶液中(使最終容積為500ml)，接著加入1-甲基-哌嗪(103.6g，1.03mol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌36小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾除去1-甲基-哌嗪HCl，然后用正己烷洗滌。用水和鹽水萃取合并的有機(jī)濾液，干燥并在減壓下蒸發(fā)，得到一種淺黃色油。當(dāng)冷卻到-20℃時(shí)，后者轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N白色固體。
3c)4-甲基-哌嗪-1-基-乙酸十八碳-9-(Z)-烯基酯L-酒石酸鹽將上面實(shí)施例3b的游離堿溶于甲醇(150ml)中，然后加入(L)-(+)-酒石酸(75g，0.5mol)在甲醇(400ml)中的溶液。在室溫下攪拌60分鐘后，溶液通過(guò)一個(gè)20μ過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，然后蒸發(fā)至干。首先用乙腈蒸煮粘性殘余物，然后用丙酮處理24小時(shí)。潷析除去溶劑，固體用丙酮處理兩次。所得懸浮液在真空下干燥(由于濕的酒石酸鹽的吸濕性，取消過(guò)濾)。將干燥產(chǎn)物攪勻并過(guò)篩(500μ)，得到197.3g標(biāo)題化合物3，是淺黃色粉末(35mmol，64％)，mp 69-72℃。
計(jì)算值C，62.34；H，9.74；N，5.01.實(shí)測(cè)值C，60.33；H，9.71；N，4.91。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)ppmδ0.85(t，3H，Me)，1.18-1.24(bs，22H，11CH2，)，1.54(bs，2H，CH2)，1.96(bs，4H，2CH2)，2.56(s，3H，N-Me)，2.69(s，4H，2CH2)，2.90(s，4H，2CH2)，3.26(s，2H，N-CH2COO)，4.0(t，2H，CH2OCO)，4.18，(s，1.5H，酒石酸鹽CH)，5.29(t，2H，CH＝CH).
IR(cm-1)1616，1739(C＝O).
實(shí)施例4(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯L-酒石酸鹽(化合物4)的合成將硬脂醇(27.2g，100mmol)溶于苯(150ml)中，接著在10分鐘內(nèi)，向其中滴加氯乙酰氯(8.0ml，100mmol)。在室溫下，將該澄清的反應(yīng)混合物攪拌48小時(shí)。通過(guò)鼓入氮?dú)獬ズ哿康腍Cl。加入1-甲基-哌嗪(28.0ml，250mmol)，然后反應(yīng)混合物在室溫下攪拌36小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾除去1-甲基-哌嗪HCl，然后用正己烷洗滌。合并濾液和洗液，接著依次用水和鹽水萃取，干燥并蒸發(fā)至干，得到游離堿(38.8g)。將后者溶于乙醇中并與(L)-(+)-酒石酸(14.18g)在乙醇(150ml)中的溶液混和，攪拌60分鐘，然后在室溫下保持3天。過(guò)濾收集所得固體，干燥，得到46.5g(83mmol，83％)標(biāo)題化合物4，是一種白色固體，mp88-89℃。
計(jì)算值C，62.11；H，0.07；N，5.00.實(shí)測(cè)值C，61.02；H，10.39；N，5.01。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)ppmδ0.85(t，3H，Me)，1.18-1.30(bs，30H，15CH2，)，1.54(m，2H，CH2)，1.96(bs，4H，2CH2)，2.56(s，3H，N-Me)，2.69(s，4H，2CH2)，2.90(s，4H，2CH2)，3.26(s，2H，N-CH2COO)，4.02(t，2H，CH2OCO)，4.18，(s，1.5H，酒石酸鹽CH)，IR1742cm-1(C＝O).
實(shí)施例54-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl(化合物5)的合成5a)4-二甲氨基甲基-苯甲酸HCl在攪拌下，加熱4-氨甲基-苯甲酸(92.5g，0.61mol)在98％甲酸(127ml，3.36mol)中的懸浮液至完全溶解，然后加入37％的甲醛(114ml，1.53mol)。加熱所述的溶液，并在回流溫度下保持10小時(shí)。冷卻后，加入20％的HCl(130ml)，然后將溶液蒸發(fā)至干。無(wú)需進(jìn)一步提純，將由此獲得的白色粉末(131.5g，0.61mol，～100％)直接用于下一步反應(yīng)中。
5b)4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl將亞硫酰氯(28.6ml，0.39mol)加入到攪拌下的4-二甲氨基甲基-苯甲酸HCl(65.0g，0.3mol)在乙腈(300ml)中的懸浮液中，回流1h，然后蒸發(fā)至干。將該淺黃色固體殘?jiān)鼞腋≡谝译?300ml)中，加入油醇(99.5ml，0.31mol)，然后將混合物回流2h。將混合物冷卻，過(guò)濾收集粗鹽，依次用乙腈(500ml)和丙酮(300ml)洗滌，干燥，得到105g(0.225mol，75％)標(biāo)題化合物5，是一種稍微淺黃色固體，mp191-3℃。
計(jì)算值C，72.15；H，10.38；N，3.00.實(shí)測(cè)值C，71.32；H，10.68；N，3.15。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)ppmδ0.88(t，3H，Me)，1.25-1.33(bs，22H，11CH2，)，1.75(m，2H， CH2)，2.01(m，4H，2CH2)，2.83(s，6H，NMe2)，4.30(t，2H，CH2OCO)，4.39，(s，2H，PhCH2)，5.32-5.37(t，2H，CH＝CH)，7.83(d，2H)，8.10(d，2H).
實(shí)施例6化合物6a、6b和6c的合成6a)1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物(化合物6a)的合成將煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯，通過(guò)實(shí)施例2中所述的方法制備，(3.74g，10mmol)和碘甲烷(3.12g；22mmol)溶于硝基甲烷(5ml)和甲醇(2.5ml)的混合物中。反應(yīng)混合物在室溫下保持3天，然后在真空中蒸發(fā)至干。殘余物在己烷(20ml)中蒸煮，潷析除去己烷，干燥殘余物，得到標(biāo)題化合物，是一種黃色-橙色粘性固體(4.95g，9.6mmol，96％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)(ppm)δ0.85(t，3H，Me)，1.20-1.50(m，22H，11CH2)，1.70-1.80(m，2H，CH2，)，1.96(bd，4H，2CH2)，4.36(t，2H，COOCH2)，4.42(s，3H，N-Me)，5.27-5.39(m，2H，CH＝CH)，8.25(dd，1H)，8.95(dt，1H)，9.20(dd，1H)，9.55(d，1H).
6a)1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物(化合物6b)的合成將1-甲基-吡啶鎓-3-羧酸酯鹽酸鹽(1.74g，10mmol)加入到亞硫酰氯(7ml)中。反應(yīng)混合物在68-70℃下攪拌1.5小時(shí)，然后在真空中蒸發(fā)至干。向殘余物中加入己烷(25ml)和油醇(2.69g，10mmol)，混合物在43℃下攪拌3天，然后在減壓下蒸發(fā)至干，得到4.1g(9.66mmol，96％)粘性固體。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)(ppm)δ0.85(t，3H，Me)，1.20-1.50(m，22H，11CH2)，1.70-1.80(m，2H，CH2，)，1.95(bd，4H，2CH2)，4.38(t，2H，COOCH2)，4.42(s，3H，N-Me)，5.27-5.40(m，2H，CH＝CH)，8.25(dd，1H)，8.95(dt，1H)，9.20(dd，1H)，9.55(d，1H).
6c)1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽(化合物6c)的合成將煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯，通過(guò)實(shí)施例2中所述的方法制備，(3.74g，10mmol)溶于硝基甲烷(5ml)和甲醇(2.5ml)的混合物中。加入4-苯磺酸甲酯(1.86g，10mmol)在硝基甲烷(2ml)和甲醇(1ml)的混合物中的溶液，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4天。將所述的澄清溶液在減壓下蒸發(fā)至干，得到5.2g(9.3mmol，93％)澄清粘性固體。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)(ppm)δ0.85(t，3H，Me)，1.20-1.50(m，22H，11CH2)，1.70-1.80(m，2H，CH2，)，1.96(bd，4H，2CH2)，2.25(s，3H，tolyl Me)，4.36(t，2H，COOCH2)，4.42(s，3H，N-Me)，5.27-5.39(m，2H，CH＝CH)，7.10(d，2H，Ph)，7.45(d，2H，Ph)，8.25(dd，1H)，8.95(dt，1H)，9.20(dd，1H)，9.55(d，1H).
實(shí)施例74-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物(化合物7)的合成將氯乙酸十八碳-9-(Z)-烯基酯(17.2g，50mmol)和N-甲基嗎啉(6.6ml，60mmol)在乙腈(100ml)中回流18小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，然后蒸發(fā)至干。加入丙酮，過(guò)濾收集析出的粘性殘余物，用丙酮洗滌并干燥，得到標(biāo)題化合物7，是一種稍微粘性的和吸濕性的淺黃色固體，mp 129-131℃(4.11g，9.2mmol，18％)。
計(jì)算值C，67.31；H，10.84；N，3.14.實(shí)測(cè)值C，65.58；H，11.35；N，3.48。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)(ppm)δ0.88(t，3H，Me)，1.15-1.50(m，22H，11CH2)，1.65-1.80(m，2H，CH2，)，2.0(bd，4H，2CH2)，3.78(s，3H，N-Me)，4.08-4.36(m，10H，COOCH2，4CH2嗎啉)，5.28(s，2H，COCH2N)，5.27-5.39(m，2H，CH＝CH).
實(shí)施例81-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物(化合物8)的合成將3-(2-溴乙基)吲哚(1.12g，5mmol)在甲醇(10ml)中的溶液加入到煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(1.87g，5mmol)在甲醇(5ml)中的溶液中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后在減壓下蒸發(fā)至干，得到標(biāo)題化合物8，是一種粘性固體(2.7g，4.5mmol，90.3％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)(ppm)δ0.85(t，3H，Me)，1.20-1.50(m，22H，11CH2)，1.70-1.80(m，2H，CH2，)，1.90-2.05(bd，4H，2CH2)，3.4(2H，CH2)，4.31(t，2H，CH2OCO)，4.95(t，2H，CH2)，5.30-5.39(m，2H，CH＝CH)，6.30-7.60(m，5H，吲哚芳基)，8.10-9.50(4H，pyr)，11.0(br s，1H，NH).
實(shí)施例9哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽(化合物9)的合成向哌嗪(10.77g，125mmol)在乙腈(200ml)中的溶液中加入粗氯乙酸油酯(從25mmol氯乙酰氯制備)在乙腈(30ml)中的溶液。混合物回流1.5小時(shí)，冷卻到室溫并蒸發(fā)至干。向殘余物中加入水和乙酸乙酯，分離相。有機(jī)相用等體積的水洗滌，在硫酸鈉中干燥，接著蒸發(fā)至干。將油狀殘余物溶于少量甲醇中，加入在MeOH中的L-酒石酸(7.50g，2當(dāng)量)。將所述粗鹽的溶液蒸發(fā)至干，固體殘?jiān)靡译嫣幚恚^(guò)濾，用乙腈洗滌，然后用丙酮洗滌。將所述固體溶于MeOH(400ml)中，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。殘余物用EtOAc處理，過(guò)濾，用EtOAc洗滌，然后用丙酮洗滌，干燥，得到標(biāo)題化合物9，是一種白色、非吸濕性粉末，mp 130-132℃(10.45g，15mmol，60％)。
計(jì)算值C，55.32；H，8.42；N，4.03.實(shí)測(cè)值C，53.67；H，8.66；N，4.14。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)ppmδ0.85(t，3H，Me)，1.18-1.34(bs，22H，11CH2，)，1.54(bs，2H，CH2)，1.97(bs，4H，2CH2)，2.73(s，4H，2CH2)，3.06(s，4H，2CH2)，3.30(s，2H，N-CH2COO)，4.03(t，2H，CH2OCO)，4.22，(s，1.5H，酒石酸鹽CH)，5.33(t，2H，CH＝CH).
實(shí)施例104-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl(化合物10)的合成除用elaidyl醇代替油醇外，由4-二甲氨基甲基-苯甲酸HCl(1.0g，4.6mmol)，通過(guò)實(shí)施例5b中所述的方法制備標(biāo)題化合物10(1.0g，2.1mmol，46％)，mp194-6℃。
計(jì)算值C，72.14；H，10.37；N，3.00.實(shí)測(cè)值C，71.36；H，11.01；N，3.19。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)ppmδ0.88(t，3H，Me)，1.25-1.33(bs，22H，11CH2)，1.75(m，2H，CH2)，1.96(m，4H，2CH2)，2.83(s，6H，NMe2)，4.30(t，2H，CH2OCO)，4.39，(s，2H，PhCH2)，5.38(t，2H，CH＝CH)，7.83(d，2H)，8.10(d，2H).
實(shí)施例11氨基苯乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl(化合物11)的合成向N-叔丁氧羰基苯基甘氨酸(2.51g，10mmol)在乙腈(50ml)中的溶液中分批加入1，1′-羰二咪唑(3.24g，20mmol)。所述溶液在室溫下攪拌1小時(shí)，加入油醇(3.15ml，2.68g，10mmol)，然后將反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯(150ml)中，依次用5％NaHCO3、5％檸檬酸和水洗滌，在MgSO4中干燥并蒸發(fā)至干。將殘余物溶于在乙酸乙酯(100ml)中的1％HCl中，所述溶液在室溫下保留6小時(shí)，然后蒸發(fā)至干。由此獲得的殘余物用乙醚/正己烷結(jié)晶，得到灰白色固體(1.6g，3.65mmol，36.5％)，mp 101-103℃。
計(jì)算值C，71.28；H，10.12；N，3.10.實(shí)測(cè)值C，70.87；H，10.33；N，3.47。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)(ppm)δ0.85(t，3H，Me)，120-1.50(m，22H，11CH2)，1.70-1.80(m，2H，CH2，)，1.96(bd，4H，2CH2)，4.15(m，2H，COOCH2)，5.25(s，1H，PhCHNH2)，5.27-5.39(m，2H，CH＝CH)，7.40-7.60(m，5H，Ph)，9.20(br s，3H，N+H3).
實(shí)施例12二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(化合物1)對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)的影響通過(guò)用0.1ml含1mg滅活結(jié)核分枝桿菌(Difco)的不完全弗氏佐劑(IFA，含乳化劑的礦物油；Sigma)在近交8-9周齡萊維品系雌性大鼠(每組8只大鼠，從Harlan-Olac處獲得)的尾根處進(jìn)行接種，誘導(dǎo)AA。觀察到12-14天后肢體出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎，如文獻(xiàn)(Holoshitz等人，1983)所述，對(duì)四肢的炎癥嚴(yán)重程度以0-4進(jìn)行評(píng)分，求和得到0-16的評(píng)分。通常在接種后約26天觀察到關(guān)節(jié)炎的發(fā)病高峰。
一組大鼠在接種的當(dāng)天用0.5ml鹽水中的40mg化合物1進(jìn)行靜脈注射(IV)治療(三角形)；另一組大鼠在AA起病后的第14天用相同數(shù)量的化合物1進(jìn)行靜脈注射(IV)治療(圓)；以及第三組大鼠用鹽水治療(正方形)。通過(guò)紅色程度和每一肢體的腫脹程度，以0-4進(jìn)行評(píng)分，求和得到0-16的AA評(píng)分。圖1所示的結(jié)果是平均結(jié)果+標(biāo)準(zhǔn)偏差。如圖1中所示，化合物1可以防止大鼠由AA引起的炎癥。
實(shí)施例13二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(化合物1)的抗炎作用-抗EAE保護(hù)EAE是通過(guò)用在完全弗氏佐劑(CFA)中的髓鞘堿性蛋白(MBP)(在路易鼠中)或用在不完全弗氏佐劑(IFA)中的大鼠脊髓的乳濁液(在DA大鼠中)接種某些品系的大鼠誘發(fā)的一種實(shí)驗(yàn)性自身免疫性疾病。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性疾病作為人自身免疫性疾病多發(fā)性硬化的模型。接種后約12天大鼠出現(xiàn)EAE，其特征在于由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥引起的不同程度的麻痹。在某些品系如路易鼠中，麻痹可以持續(xù)高達(dá)6-7天，除非大鼠在急性麻痹的高峰期死亡，它們通常痊愈。在其他品系的大鼠如DA大鼠中，麻痹可以是慢性的和忽重忽輕的。
為了誘導(dǎo)和臨床評(píng)估EAE，將從DA大鼠獲得的脊髓冷凍，融化，在免疫接種前用刮刀徹底切碎。以一次皮下注射(剛好在皮膚下)將200μl乳液免疫接種到尾部背側(cè)，所述乳液由1∶1的IFA(Difco，Detroit，MI，USA)和抗原(體積/體重，即100μl IFA/100mg全脊髓)制備。IFA用20mg/ml的結(jié)核分枝桿菌株37RA(Difco)(＝完全弗氏佐劑，CFA)補(bǔ)足。所述乳液通過(guò)用氣密封玻璃注射器和1.2mm直徑針頭研磨制備。對(duì)大鼠定期稱重，并檢查其臨床EAE癥狀。使用4級(jí)評(píng)分評(píng)價(jià)臨床嚴(yán)重程度0，無(wú)麻痹；1，尾無(wú)力(懸垂)；2，后肢麻痹；3，后肢和前肢麻痹；4，嚴(yán)重的全身麻痹(Lorentzen等人，1995)。
用0.1mlIFA(含100mg全均質(zhì)DA脊髓)免疫接種大鼠(每組5或7只DA品系的雌性大鼠，8-9周齡)的每個(gè)后足墊，每只大鼠總共200mg。在免疫接種的當(dāng)天，通過(guò)靜脈注射(IV)用0.5ml鹽水中的40mg化合物1或0.5ml鹽水(對(duì)照)給大鼠進(jìn)行處理。如上所述按照0-4的嚴(yán)重性評(píng)分對(duì)所述大鼠的EAE進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果以平均分+標(biāo)準(zhǔn)誤差的形式表示在圖2中。圖2中的結(jié)果表明，與未經(jīng)治療的對(duì)照組(正方形)大鼠相比，化合物1(圓)可以在很大程度上阻止麻痹。
實(shí)施例14二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(化合物1)對(duì)皮膚同種異體移植存活率的作用基本上如(Birk等人，1999)所述那樣進(jìn)行皮膚移植。因此，給小鼠剃毛，由處死供體背側(cè)切下1cm2皮膚切片，用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)清洗。由麻醉受體(戊巴比妥6mg/ml，0.25ml/小鼠)切下2片各1cm2的背部皮膚，準(zhǔn)備用于異體移植。以每個(gè)受體兩塊供體的異體移植移植到受體的背部移植區(qū)域。將氰丙烯酸丁酯(B.Braun Melsungen AG，Melsungen，Germany)敷在移植部位周圍。將Nobecutan(ASTR，AstraTech，Glos G15，UK)噴在移植部位上。
在該實(shí)驗(yàn)中，用1cm2完整厚度的來(lái)自C57BL/6的8周齡的雌性小鼠的皮膚移植物移植8周齡BALB/c雌性小鼠的組。在移植的當(dāng)天，用鹽水或用含10mg化合物1的100μl鹽水靜脈注射治療一組受體小鼠。記錄排斥發(fā)生日。如圖3中所示，小鼠用化合物1(圓)治療的移植皮膚要比未經(jīng)治療的對(duì)照組(正方形)小鼠的移植皮膚存活更長(zhǎng)時(shí)間。
實(shí)施例15二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(化合物1)作為MBP肽的佐劑在治療EAE中的用途已經(jīng)表明化合物1是一種有效的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑，現(xiàn)在感興趣的是它作為佐劑與一種抗原一起用于治療所述的T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，其中該抗原被與T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病例如自身免疫性疾病的發(fā)病有關(guān)的炎性T細(xì)胞所識(shí)別。選擇EAE作為MS的模型，選擇MBP肽作為抗原。
通過(guò)用CFA(Sigma)中的25μg幾內(nèi)亞MBP(總計(jì)50μg)注射每只腳墊，在7-9周齡雌性路易鼠中誘發(fā)EAE。免疫接種后約12天出現(xiàn)EAE，其特征在于由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥引起的不同程度的麻痹。如上面實(shí)施例13所述，使用4級(jí)評(píng)分對(duì)大鼠麻痹進(jìn)行評(píng)分。
EAE由識(shí)別MBP分子限定的決定簇的T細(xì)胞引起。路易鼠中的主MBP決定簇由包含MBP序列71-90的肽組成(在下文中稱為p71-90肽)。
為了測(cè)試給予致腦炎的MBPp71-90肽和作為佐劑的化合物1是否也可以抑制EAE的形成，在MBP免疫接種的當(dāng)天(第0天)和5天后(第5天)或MBP免疫接種前第14天和第7天，皮下注射在5mg化合物1中或在鹽水中乳化的p71-90肽對(duì)每組5-8只的路易鼠進(jìn)行治療，或者用僅僅在鹽水中(沒(méi)有肽)的化合物1對(duì)每組5-8只的路易鼠進(jìn)行治療。通過(guò)測(cè)定發(fā)病率和疾病的嚴(yán)重程度，用p71-90/化合物1治療對(duì)EAE的作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。與對(duì)照治療相比，用鹽水中的p71-90肽進(jìn)行治療或用化合物1和鹽水沒(méi)有肽進(jìn)行治療，引起了最大程度的麻痹降低，這表明相關(guān)的肽例如與化合物1在一種乳濁液中的p71-90MBP肽能夠調(diào)節(jié)大鼠中的EAE。
實(shí)施例16
二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯(化合物1)作為重組hsp60的佐劑在治療AA中的用途通過(guò)在7-9周齡的雌性路易鼠的尾根部免疫接種如上面實(shí)施例12所述的含1mg滅活結(jié)核分枝桿菌的IFA(Sigma；0.1ml的10mg/ml)，在該路易鼠中誘發(fā)AA。關(guān)節(jié)炎癥的程度按0-16進(jìn)行評(píng)分。
為了治療AA，將7-9周齡的每組5-8只雌性路易鼠，誘導(dǎo)AA后，在AA誘導(dǎo)的當(dāng)天(第0天)和7天后(第+7天)或在第-14天和-7天，用100μg重組hsp60(由佐劑關(guān)節(jié)炎中的T淋巴細(xì)胞識(shí)別的分枝桿菌抗原表位，在PBS中或在化合物1(5mg)中乳化的)進(jìn)行治療，或者用單獨(dú)在鹽水中的化合物1進(jìn)行治療。如實(shí)施例12所述測(cè)定對(duì)關(guān)節(jié)炎癥的治療作用。
實(shí)施例17(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽(化合物3)抑制DTH皮膚反應(yīng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)，一種由被某些TH細(xì)胞當(dāng)它們遇到某些類型的抗原時(shí)分泌的細(xì)胞因子誘導(dǎo)的局部炎性反應(yīng)，是一種確定的皮膚炎癥的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br> 作為第一步，在8周齡雌性BALB/c小鼠的皮膚中誘導(dǎo)DTH反應(yīng)。通過(guò)向小鼠剃毛后的腹部局部施用200μl 2％的噁唑酮(4-乙氧基亞甲基-2-苯基-2-噁唑啉-5-酮；Sigma，St.Louis，MO)在丙酮/橄欖油(4∶1，體積/體積)中的溶液，對(duì)小鼠進(jìn)行致敏。致敏后第6天，通過(guò)局部施用20μl 0.5％的噁唑酮溶液，對(duì)每只小鼠的一只耳朵進(jìn)行激發(fā)。激發(fā)后30分鐘，向每只小鼠的已激發(fā)耳朵施加20μl各種劑量(1、2和4mg)的化合物3(對(duì)照組未治療的耳朵或用PBS治療的耳朵)，進(jìn)行治療。24小時(shí)后，使用小鼠耳朵-腫脹試驗(yàn)測(cè)定炎癥的程度，測(cè)定用化合物3進(jìn)行誘導(dǎo)治療的抑制百分?jǐn)?shù)。結(jié)果表示在圖4中。用1mg和2mg化合物3進(jìn)行的治療抑制了DTH反應(yīng)(分別是12.5％和8％)。
實(shí)施例18化合物5、9和11抑制DTH皮膚反應(yīng)如實(shí)施例17一樣對(duì)小鼠進(jìn)行DTH誘導(dǎo)。激發(fā)后30分鐘，以0.5、1、2和4mg在40μl中的劑量施加化合物5、9和11，對(duì)小鼠進(jìn)行治療。此外，給予地塞米松(2mg/40μl)作為陽(yáng)性對(duì)照。一組DTH誘導(dǎo)的小鼠還用(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸乙酯HCl進(jìn)行治療(陰性對(duì)照)。
測(cè)試化合物和地塞米松的結(jié)果表明在DTH模型中，在降低炎癥方面能起到積極的效果。陰性對(duì)照，一種乙酯，沒(méi)有顯示任何積極效果。結(jié)果表示在圖5中。
實(shí)施例19化合物3對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)的作用如上面實(shí)施例12所述，在8周齡雌性路易鼠中誘發(fā)AA。在誘導(dǎo)疾病前第-7天，大鼠組用各種數(shù)量的化合物3(10、50、100或200mg)通過(guò)SC進(jìn)行治療。如圖6中所示，化合物3可以防止大鼠抗AA。
實(shí)施例20SC和經(jīng)口給予化合物3對(duì)EAE的作用如上面實(shí)施例15所述用在CFA中的豚鼠MBP對(duì)8周齡雌性路易鼠誘發(fā)EAE。
在一種實(shí)驗(yàn)中，在誘導(dǎo)疾病前的第7天，大鼠組(每組7只動(dòng)物)用各種數(shù)量的化合物3(10、50、100或200mg)通過(guò)SC在背部進(jìn)行治療。如上所述按照0-4的嚴(yán)重性評(píng)分對(duì)所述大鼠的EAE進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果表示在圖7中。
在另一種實(shí)驗(yàn)中，從EAE誘導(dǎo)當(dāng)天開(kāi)始，大鼠組(每組7只動(dòng)物)用各種數(shù)量的化合物3(0.2、1、2、10或20mg)經(jīng)口天天進(jìn)行治療。如上所述按照0-4的嚴(yán)重性評(píng)分對(duì)所述大鼠的EAE進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果表示在表1和圖8中。
在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，從EAE誘導(dǎo)的當(dāng)天開(kāi)始，化合物3經(jīng)口隔日給予，發(fā)現(xiàn)同樣有效(沒(méi)有表示出)。
上面實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明當(dāng)皮下或口服給藥時(shí)，化合物3可以防止大鼠抗EAE。
表1
實(shí)施例21經(jīng)口給予化合物9對(duì)EAE的作用如上面實(shí)施例15所述用在CFA中的豚鼠MBP對(duì)8周齡雌性路易鼠誘發(fā)EAE。
大鼠用化合物9(100mg/Kg)經(jīng)口治療。如上所述按照0-4的嚴(yán)重性評(píng)分對(duì)所述大鼠的EAE進(jìn)行評(píng)分。表2和圖9中的結(jié)果表明當(dāng)口服給藥時(shí)，化合物9可以防止大鼠抗EAE。
表2
實(shí)施例22化合物3促進(jìn)格拉默乙酸鹽(GA)的免疫作用格拉默乙酸鹽(GA)是一種用于治療多發(fā)性硬化的免疫調(diào)節(jié)劑(COPAXONE，Teva Pharmaceuticals Ltd.，Israel的商標(biāo))。GA具有某些明確的免疫作用，這些免疫作用可以在體外和體內(nèi)證明形成GA特異性T細(xì)胞以及降低EAE的臨床癥狀嚴(yán)重度。雖然這些作用被認(rèn)為是GA給予的，但是與某些添加劑一起給藥可以促進(jìn)它的作用。在本實(shí)施例中，測(cè)試用GA和作為佐劑的化合物3一起免疫接種對(duì)EAE結(jié)果和對(duì)特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的作用。
材料格拉默乙酸鹽(GA)由Teva Pharmaceuticals Ltd.，Israel提供；冷凍干燥的小鼠脊髓勻漿(MSCH)從ICR小鼠中由Biological Lab，Netanya，Israel制備；IFA，結(jié)核分枝桿菌從Difco處購(gòu)買；CFA，百日咳毒素(PTX)，PBS，2-巰基乙醇，concavalin A(Con A)來(lái)自Sigma；苔酚藍(lán)來(lái)自BDH；來(lái)自Beit-Haemek，Israel的DCCM1(確定的細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì))和RPMI 1640介質(zhì)；L-谷氨酰胺2mM×100，MEM(最低基礎(chǔ)培養(yǎng)基)-非必要的氨基酸×100，以及丙酮酸鈉1mM×100，所有都是無(wú)菌的，來(lái)自Bio-Lab，Israel。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在CSJL/F1小鼠中測(cè)試EAE，在C57BL/J6小鼠中測(cè)試免疫反應(yīng)。從Harlan Animal Breeding Center，Jerusalem，Israel處獲得健康的無(wú)特異病原體的、雌性CSJLF/1小鼠和雄性C57BL/J6小鼠。開(kāi)始研究時(shí)的小鼠為9周齡，體重為20g±15％。
A.EAE的測(cè)試方案(i)如下所示，將小鼠分成4個(gè)測(cè)試組
(ii)免疫接種在EAE誘導(dǎo)前第11天，通過(guò)SC在側(cè)腹以100μL/小鼠的體積劑量給藥(在右和左側(cè)腹，50μL/側(cè)腹)，用GA在IFA中的乳液對(duì)小鼠進(jìn)行免疫接種(組1)，用GA在化合物3中的溶液對(duì)小鼠進(jìn)行免疫接種(組2)，用在PBS中的化合物3對(duì)小鼠進(jìn)行免疫接種(組3)，或單獨(dú)用PBS對(duì)小鼠進(jìn)行免疫接種(組4)。
(iii)在IFA中制備GA乳液為了給組1進(jìn)行免疫接種，將在PBS中的GA溶液(100mg/mL)與IFA按照1∶2進(jìn)行稀釋，得到最終濃度為50mg/mL，并按5.0mg/小鼠GA進(jìn)行注射(0.1ml)。將GA+IFA混合物轉(zhuǎn)移到一個(gè)與第二注射器通過(guò)路厄氏鎖連接的注射器(2.5mL)中，通過(guò)將材料在約10分鐘的時(shí)間從一個(gè)注射器轉(zhuǎn)移到另一注射器，進(jìn)行充分混合直到所述材料被充分乳化為止。
(iv)用化合物3制備GA溶液為了對(duì)組2進(jìn)行免疫接種，將在PBS中的GA溶液(100mg/mL)用化合物3在PBS中的溶液(10mg/mL)中進(jìn)行稀釋，得到最終GA濃度為50mg/mL的溶液，然后以5.0mg/小鼠GA的劑量給藥。為了給對(duì)照組3進(jìn)行免疫接種，將等體積的化合物3(10mg/mL)和PBS(賦形劑)進(jìn)行混合。在化合物3+GA免疫接種組2和化合物3免疫接種對(duì)照組3中的化合物3的最終濃度是5mg/mL(0.5mg/小鼠的劑量水平，相當(dāng)于25mg/kg)。
(v)EAE誘導(dǎo)向小鼠的足墊注射由MSCH和商業(yè)上含結(jié)核分枝桿菌H37Ra的CFA組成的致腦炎劑以及通過(guò)靜脈注射百日咳毒素IV，誘導(dǎo)EAE。
(vi)臨床觀察和評(píng)分免疫接種后，每天觀察小鼠的異常臨床癥狀和行為。在免疫接種前對(duì)小鼠進(jìn)行稱重，免疫接種后，每周一次稱量體重直到研究結(jié)束為止。EAE誘導(dǎo)后十天，檢查小鼠的EAE臨床癥狀并進(jìn)行評(píng)分。觀察EAE的臨床癥狀，并在EAE誘導(dǎo)后第9天，根據(jù)下列五個(gè)評(píng)分等級(jí)開(kāi)始評(píng)分直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束為止，以評(píng)價(jià)臨床嚴(yán)重程度0，行為正常；1，體重減輕；2，尾無(wú)力；3，后腿張力減退并且無(wú)力；4，后腿麻痹；4，嚴(yán)重的全身麻痹；5，呼吸受損和/或驚厥和/或全身麻痹或死亡。所有評(píng)分在1以上的大鼠都被認(rèn)為是有病的。
(vii)結(jié)果分析死亡率的計(jì)算測(cè)定每組中有病的和死亡的動(dòng)物的數(shù)目，如下計(jì)算發(fā)病率和死亡率 有效性百分比的計(jì)算根據(jù)死亡率如下計(jì)算有效性百分比 計(jì)算平均病程和發(fā)病時(shí)間計(jì)算以天數(shù)表示的平均病程和發(fā)病時(shí)間。
計(jì)算平均最高評(píng)分和抑制百分比總結(jié)了在測(cè)試組中10只小鼠中每一只的最高評(píng)分。
如下計(jì)算該組的平均最高評(píng)分(MMS)∑每只小鼠的最高得分/每組中小鼠的數(shù)目。
如下計(jì)算抑制百分比
抑制百分比＝1-(治療組的MMS/對(duì)照組的MMS)×100計(jì)算平均組得分和抑制百分比總結(jié)了在測(cè)試組中10只小鼠中每一只的得分。
如下計(jì)算該組的平均組得分(GMS)∑每只小鼠的得分/每組中小鼠的數(shù)目。
如下計(jì)算抑制百分比抑制百分比＝1-(治療組的GMS/對(duì)照組的GMS)×100B.免疫追蹤的測(cè)試方案(i)如下所示，將小鼠分成6個(gè)測(cè)試組
(ii)免疫接種在收集脾臟前10天，對(duì)小鼠進(jìn)行免疫接種。GA在CFA中的乳液以及PBS和GA與化合物3的溶液以100μL/小鼠的體積劑量通過(guò)SC給予小鼠的側(cè)腹。
(iii)在CFA中制備GA乳液將在PBS中的GA溶液(最終GA濃度為1.5mg/mL，劑量為75μg/小鼠)在CFA中進(jìn)行稀釋，得到最終濃度為0.75mg/mL的溶液，以75μg/小鼠GA的劑量給藥。將GA+CFA混合物轉(zhuǎn)移到一個(gè)與第二注射器通過(guò)路厄氏鎖連接的注射器(2.5mL)中，通過(guò)將材料在約10分鐘的時(shí)間從一個(gè)注射器轉(zhuǎn)移到另一注射器，進(jìn)行充分混合直到所述材料被充分乳化為止。
(iv)用化合物3制備GA溶液將化合物3溶于PBS中，得到10mg/mL，以500μg/小鼠給藥，然后以1∶10稀釋至1mg/mL，以50μg/小鼠給藥。將GA(20mg管形瓶)溶于PBS中，得到20mg/mL溶液，然后在PBS中進(jìn)一步稀釋，得到最終GA濃度為1.5mg/mL的溶液，以75μg/小鼠的劑量給藥。對(duì)于對(duì)照組，將相等體積的化合物3和GA或PBS混合。
(v)安全性評(píng)估為了測(cè)試新制劑的安全性，免疫接種后每天，對(duì)觀察到異常臨床癥狀和行為的小鼠進(jìn)行追蹤研究。小鼠根據(jù)下列等級(jí)進(jìn)行評(píng)分0-行為正常；1-輕微中毒跡象(豎毛)；2-中等中毒跡象(部分眼瞼閉合、弓起背部、活動(dòng)減退、表情淡漠)；3-嚴(yán)重中毒跡象(運(yùn)動(dòng)失調(diào)、驚厥、喘息式呼吸、麻痹、不省人事)；4-死亡。在免疫接種前對(duì)小鼠進(jìn)行稱重，以及研究結(jié)束的當(dāng)天對(duì)小鼠稱重。出于人道原因，該研究在觀察5天后結(jié)束，由于在所有組中都100％發(fā)生嚴(yán)重的疾病。稱量脾臟的重量，并計(jì)算脾臟/體重的比值。
(vi)細(xì)胞培養(yǎng)收集脾臟，并將其按每組放到無(wú)菌RPMI介質(zhì)中。提取細(xì)胞，將其再懸浮到富含DCCM1的介質(zhì)中，并進(jìn)行計(jì)數(shù)。然后用介質(zhì)作為基準(zhǔn)，兩種濃度的GA作為活化劑，25μg/ml和5μg/ml，以及Con A作為陽(yáng)性對(duì)照，在37℃、5％CO2下培養(yǎng)細(xì)胞。收集上清液，測(cè)試細(xì)胞因子分泌的水平。
(vii)使用ELISA對(duì)脾臟原代培養(yǎng)中的細(xì)胞因子分泌進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞在體外被激活，并使用商業(yè)試劑盒根據(jù)供應(yīng)商的指示，檢測(cè)IL-2分泌水平。
C.結(jié)果(i)EAE結(jié)果死亡率、平均最高得分、組平均得分、平均發(fā)病時(shí)間和平均病程表示在表3中。在用GA(5mg/小鼠)+化合物3免疫接種的組中，顯示EAE病征得到抑制。發(fā)現(xiàn)死亡率減少60％，MMS減少16％，GMS減少23.7％。對(duì)于抑制EAE癥狀，用GA+化合物3治療的組要比用化合物3沒(méi)有GA治療的組或用GA+IFA(另一種添加劑)治療的組更優(yōu)。
(ii)免疫追蹤結(jié)果從免疫接種小鼠的脾臟細(xì)胞中分泌的IL-2表示在表4和圖10中。在用化合物3(沒(méi)有GA)以50和500μg/小鼠的劑量免疫接種的組中，脾臟細(xì)胞的IL-2分泌沒(méi)有隨GA提高。Con A(一種非特異性活化劑)在所有組中增加了IL-2的水平?；衔?對(duì)非特異性Con-A激活沒(méi)有影響。
在用GA(75μg/小鼠)+化合物3(50μg/小鼠的劑量)免疫接種的組中，脾臟細(xì)胞的IL-2分泌隨GA提高。在那些小鼠的脾臟細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的IL-2水平要比單獨(dú)用GA免疫接種的小鼠高。
用GA(75μg/小鼠)+化合物3(500g/小鼠)同樣引起脾臟細(xì)胞的IL-2分泌隨GA增加(雖然在程度商要比在脾臟細(xì)胞(從單獨(dú)用GA免疫接種的小鼠中采集的)中發(fā)現(xiàn)的IL-2少)。
安全性追蹤表明沒(méi)有異常行為或臨床癥狀。所有得分是0。
化合物3和GA 75μg/小鼠+化合物3兩種劑量都對(duì)小鼠體重沒(méi)有副作用。所有小鼠顯示類似的正常的重量增加，10天內(nèi)每只小鼠的體重約增加1.5g。
脾臟重量與小鼠總體重的比值在所有組中都類似。
D.結(jié)論在此給出的數(shù)據(jù)表明在EAE模型中，向GA中加入化合物3促進(jìn)了它的有益作用(特別是在存活率方面)以及促進(jìn)了它的免疫作用(脾臟細(xì)胞對(duì)GA的細(xì)胞反應(yīng))。
用化合物3在有或者沒(méi)有GA存在下的治療表明沒(méi)有毒理學(xué)異常跡象。因此，SC注射化合物3沒(méi)有可檢測(cè)的急性炎性作用或毒性作用。此外，用化合物3在有或者沒(méi)有GA存在下的治療表明沒(méi)有免疫抑制跡象。
表3
inh.*＝抑制表4
參考文獻(xiàn)Beyer S.and Pilgrim H.1991，Die Hemmung der Endothelzellproliferationdurch Ester der 4-Aminomethylbenzoesaure(PAMBA)，Pharmazie 46597-599.
Birk et al.，1999.The 60kDa heat shock protein modulates allograft rejection.Proc.Nat.Acad. Science USA.965159-63.
Holoshitz，Y.et al.，1983.Lines of T lymphocytes mediate or vaccinateagainst autoimmune arthritis，Science 21956.
Kontogiorgis C.A.，Hadjipavlou-Litinia D.J.，and Schulz E.，2001，Antioxidant activity of DLω-phenyl-amino acid octyl esters with anti-inflammatoryactivity.Arzneim-Forsch./Drug Res，.51(I)485-488.
Lorentzen J.C. et al.，1995.Protracted，relapsing and demyelinatingexperimental autoimmune encephalomyelitis in DA rats immunized with syngeneicspinal cord and incomplete Freund′s adjuvant，J.Neuroimmunology.63193-205.
Markwardt F.，Neuland P.，and Klocking H.-P. 1966，Uber dicantifibrinolytische Wirkung von Estern der 4-Aminomethylbenzoesaure(PAMBA)Pharmazie 21(6)345-348.
Metayer MM. M. et Jacob J.，1952，Preparation et propriétéspharmacodynamiques de quelques esters de la bétaine，Ann.Pharm.Francaise，10435-440.
Nixon-George A.，Moran T.，Dionne G.，Penney C.L.，et al.1990，Theadjuvant effect of stearyl tyrosine on a recombinant subunit hepatitis B surfaceantigen.The Journal of Immunology，144(12)4798-4802.
Penney C.L.，Shah P.，and Landi S.，1985，A simple method for thesynthesis of long-chain alkyl esters of amino acids，J.Org.Chem.501457-1459.
Penney C.L.，Ethier D.，Dionne G.，Nixon-George A.，Zaghouani H.，et al.，1993，F(xiàn)urther studies on the adjuvanticity of stearyl tyrosine and ester analogues，Vaccine 11(11)1129-1134.
Rodriguez，M.D.，Gomez，R.，Sanchez，M and H.Garcia.1998，J. Appl.Toxicol.18313-6.
Rucka M.，Oswiecimska M.，Witek S.1983，New biocides for cooling watertreatmentQuaternary ammonium salts derivatives of glycine esters.EnvironmentProtection Engineering，9(3)25-31.
Schewe Ch.，Schulz E.，Vietinghoff G.，Sprung W.D.，Kobow M.，Loose S.，and Schewe T.，1991，On the mode of action of antiphlogistically active DL-ω-phenyl amino acid esters，Biomed.Bioctim.Acta，50(2)189-198.
Schulz E.，Sprung WD，Kroning G.and Lauge，P.1982，Pharmacologicalproperties of D，L-2-phenylglycine alkyl esters with special consideration of theiranti-inflammatory activity，Agents Actions Suppl，AAS 10119-128.
Smith D.R.，Maienthal M.and Eifert R.L.，1951，Quaternary ammoniumsalts of heterocyclic bases，JACS，732964-2965.
The Merck Index，13th Edition，2001，Merck & Co.Inc.，Rahway，N.J.，U.S.A.
Vetter W.and Meister W.，1981，Nicotinates as derivatives for the massspectrometric investigation of long chain alcohols，Organic Mass Spectrometry，16(3)118-122.
Wong O.，Huntington J.，Nishihata T.，and Rytting J.H.，1989，New alkylN，N-dialkyl-substituted amino acetates as transdermal penetration enhancers，Pharmaceutical Research，6(4)286-295.
權(quán)利要求
1.通式I化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C12-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，在制備用于治療炎癥的藥物組合物中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中R1是C12-C20烷基或鏈烯基。
3.權(quán)利要求2的用途，其中R1是C16-C18烷基或鏈烯基。
4.權(quán)利要求3的用途，其中R1是十六烷基、十八烷基、十六烯基、十八烯基、順-9-十八烯基、反-9-十八烯基、順-9，12-十八二烯基、順-6，9，12-十八三烯基或順-9，12，15-十八三烯基。
5.權(quán)利要求4的用途，其中R1是順-9-十八烯基。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的用途，其中在所述的通式I化合物中，殘余物A選自下面的基團(tuán) 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；(ii)被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；以及 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X不存在。
7.權(quán)利要求6的用途，其中殘基A是下式 其中R2是H；直鏈或分枝的C1-C6烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基和己基；苯基、芐基或p-羥基芐基；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；所述的環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪和4-甲基哌嗪。
8.權(quán)利要求7的用途，其中R2是H或苯基，R3是H、甲基或一對(duì)電子，R4和R5每個(gè)是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在氮原子的4位位置上任選被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述的化合物選自N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽；4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物；α-氨基-α-苯基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽；以及哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽。
10.權(quán)利要求6的用途，其中殘基A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
11.權(quán)利要求10的用途，其中A是被CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R8是H以及R6和R7每個(gè)是甲基。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述的化合物是4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl或4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl。
13.權(quán)利要求6的用途，其中A是基團(tuán) 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X-不存在。
14.權(quán)利要求13的用途，其中R9是一對(duì)電子以及X-不存在，或者R9是甲基或吲哚乙基以及X-是選自氯化物、溴化物、碘化物和甲苯磺酸鹽的抗衡離子。
15.權(quán)利要求14的用途，其中所述的化合物選自煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽；和1-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物。
16.權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)的用途，其中所述的藥物組合物用于治療免疫介導(dǎo)的炎癥。
17.權(quán)利要求16的用途，其中所述的藥物組合物用于治療免疫介導(dǎo)的慢性或急性炎性疾病、障礙或病癥。
18.權(quán)利要求17的用途，其中所述的藥物組合物用于治療自身免疫性疾病、嚴(yán)重的變態(tài)反應(yīng)、哮喘、或與一種選自移植排斥、慢性退行性疾病例如阿爾茨海默氏病、神經(jīng)保護(hù)、器官再生、皮膚慢性潰瘍或精神分裂癥有關(guān)的疾病、障礙或病癥的炎癥。
19.權(quán)利要求18的用途，其中所述的自身免疫性疾病是多發(fā)性硬化或人關(guān)節(jié)炎病癥。
20.權(quán)利要求19的用途，其中所述的人關(guān)節(jié)炎病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、帶有瑞特氏綜合征的反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎或由免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的其它關(guān)節(jié)炎癥。
21.權(quán)利要求17的用途，其中所述的免疫介導(dǎo)的炎性疾病、障礙或病癥是重癥肌無(wú)力、格-巴二氏綜合癥或神經(jīng)系統(tǒng)的其它炎性疾?。慌Ｆぐ_、尋常性天皰瘡或其它皮膚疾?。幌到y(tǒng)性紅斑狼瘡、腎小球腎炎或其它腎臟疾病；動(dòng)脈粥樣硬化或其它血管炎癥；自身免疫性肝炎、炎性腸病、胰腺炎或其它胃腸系統(tǒng)疾??；I型糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎或其它內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。
22.權(quán)利要求21的用途，其中所述的免疫性炎性疾病或障礙是牛皮癬。
23.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中所述的藥物組合物是口服、局部、真皮內(nèi)或腸胃外給藥。
24.權(quán)利要求23的用途，其中所述的藥物組合物是皮下、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)給藥。
25.一種治療炎癥的藥物組合物，包含藥學(xué)上可接受的載體和通式I的化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C12-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)。
26.權(quán)利要求25的藥物組合物，其中R1是C12-C20烷基或鏈烯基。
27.權(quán)利要求26的藥物組合物，其中R1是C16-C18烷基或鏈烯基。
28.權(quán)利要求27的藥物組合物，其中R1是十六烷基、十八烷基、十六烯基、十八烯基、順-9-十八烯基、反-9-十八烯基、順-9，12-十八二烯基、順-6，9，12-十八三烯基或順-9，12，15-十八三烯基。
29.權(quán)利要求28的藥物組合物，其中R1是順-9-十八烯基或反-9-十八烯基。
30.權(quán)利要求25-29任一項(xiàng)的藥物組合物，其中在所述的通式I的化合物中，殘基A選自下面的基團(tuán) 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；(ii)被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；以及 其中R9是H、低級(jí)烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X不存在。
31.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中殘基A具有下式 其中R2是H；直鏈或分枝的C1-C6烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基和己基；苯基、芐基或p-羥基芐基；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；所述的環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪和4-甲基哌嗪。
32.權(quán)利要求31的藥物組合物，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，R4和R5每個(gè)是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在氮原子的1或4位上任選被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)。
33.權(quán)利要求32的藥物組合物，其中所述的化合物選自N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽；4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物；α-氨基-α-苯基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽；以及哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽。
34.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中殘基A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
35.權(quán)利要求34的藥物組合物，其中A是被CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R8是H以及R6和R7每個(gè)是甲基。
36.權(quán)利要求35的藥物組合物，其中所述的化合物是4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl或4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl。
37.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中A是基團(tuán) 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X-不存在。
38.權(quán)利要求37的藥物組合物，其中R9是一對(duì)電子以及X-不存在，或者R9是甲基或吲哚乙基以及X-是選自氯化物、溴化物、碘化物和甲苯磺酸鹽的抗衡離子。
39.權(quán)利要求38的藥物組合物，其中所述的化合物選自煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽；和1-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物。
40.權(quán)利要求25-39任一項(xiàng)的藥物組合物，用于治療免疫性炎癥。
41.權(quán)利要求40的藥物組合物，用于治療免疫性慢性或急性炎性疾病、障礙或病癥。
42.權(quán)利要求41的藥物組合物，用于治療自身免疫性疾病、嚴(yán)重的變態(tài)反應(yīng)、哮喘、或與一種選自移植排斥、慢性退行性疾病例如阿爾茨海默氏病、神經(jīng)保護(hù)、器官再生、皮膚慢性潰瘍或精神分裂癥有關(guān)的疾病、障礙或病癥的炎癥。
43.權(quán)利要求42的藥物組合物，其中所述的自身免疫性疾病是多發(fā)性硬化或人關(guān)節(jié)炎病癥。
44.權(quán)利要求43的藥物組合物，其中所述的人關(guān)節(jié)炎病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、帶有瑞特氏綜合征的反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎或由免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的其它關(guān)節(jié)炎癥。
45.權(quán)利要求40的藥物組合物，其中所述的免疫性炎性疾病、障礙或病癥是重癥肌無(wú)力、格-巴二氏綜合癥或神經(jīng)系統(tǒng)的其它炎性疾??；牛皮癬、尋常性天皰瘡或其它皮膚疾??；系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎小球腎炎或其它腎臟疾??；動(dòng)脈粥樣硬化或其它血管炎癥；自身免疫性肝炎、炎性腸病、胰腺炎或其它胃腸系統(tǒng)疾?。籌型糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎或其它內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。
46.權(quán)利要求45的藥物組合物，其中所述的免疫性炎性疾病或障礙是牛皮癬。
47.權(quán)利要求25-46任一項(xiàng)的藥物組合物，其是口服、局部、真皮內(nèi)或腸胃外給藥。
48.權(quán)利要求47的藥物組合物，其皮下、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)給藥。
49.一種治療炎癥的方法，其包括給予需要的個(gè)體有效量的通式I的化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C12-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)。
50.權(quán)利要求49的方法，其中R1是C12-C20烷基或鏈烯基。
51.權(quán)利要求50的方法，其中R1是C16-C18烷基或鏈烯基。
52.權(quán)利要求51的方法，其中R1是十六烷基、十八烷基、十六烯基、十八烯基、順-9-十八烯基、反-9-十八烯基、順-9，12-十八二烯基、順-6，9，12-十八三烯基或順-9，12，15-十八三烯基。
53.權(quán)利要求52的方法，其中R1是順-9-十八烯基或反-9-十八烯基。
54.權(quán)利要求49-53任一項(xiàng)的方法，其中在所述的通式I化合物中，殘余物A選自下面的基團(tuán) 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；(ii)被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；以及 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X不存在。
55.權(quán)利要求54的方法，其中殘基A是下式 其中R2是H；直鏈或分枝的C1-C6烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基和己基；苯基、芐基或p-羥基芐基；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；所述的環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪和4-甲基哌嗪。
56.權(quán)利要求55的方法，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，R4和R5每個(gè)是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在氮原子的1或4位上任選被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)。
57.權(quán)利要求56的方法，其中所述的化合物選自N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽；4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物；α-氨基-α-苯基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽；以及哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽。
58.權(quán)利要求54的方法，其中殘基A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
59.權(quán)利要求58的方法，其中A是被CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R8是H以及R6和R7每個(gè)是甲基。
60.權(quán)利要求59的方法，其中所述的化合物是4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl或4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl。
61.權(quán)利要求54的方法，其中A是基團(tuán) 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X-不存在。
62.權(quán)利要求61的方法，其中R9是一對(duì)電子以及X-不存在，或者R9是甲基或吲哚乙基以及X-是選自氯化物、溴化物、碘化物和甲苯磺酸鹽的抗衡離子。
63.權(quán)利要求62的方法，其中所述的化合物選自煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽；和1-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物。
64.權(quán)利要求49-63任一項(xiàng)的方法，用于治療免疫性炎癥。
65.權(quán)利要求64的方法，用于治療免疫性慢性或急性炎性疾病、障礙或病癥。
66.權(quán)利要求65的方法，用于治療自身免疫性疾病、嚴(yán)重的變態(tài)反應(yīng)、哮喘、或與一種選自移植排斥、慢性退行性疾病例如阿爾茨海默氏病、神經(jīng)保護(hù)、器官再生、皮膚慢性潰瘍或精神分裂癥有關(guān)的疾病、障礙或病癥的炎癥。
67.權(quán)利要求66的方法，其中所述的自身免疫性疾病障礙或病癥是多發(fā)性硬化或人關(guān)節(jié)炎病癥。
68.權(quán)利要求67的方法，其中所述的人關(guān)節(jié)炎病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、帶有瑞特氏綜合征的反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎或由免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的其它關(guān)節(jié)炎癥。
69.權(quán)利要求65的方法，其中所述的免疫性炎性疾病、障礙或病癥是重癥肌無(wú)力、格-巴二氏綜合癥或神經(jīng)系統(tǒng)的其它炎性疾??；牛皮癬、尋常性天皰瘡或其它皮膚疾病；系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎小球腎炎或其它腎臟疾?。粍?dòng)脈粥樣硬化或其它血管炎癥；自身免疫性肝炎、炎性腸病、胰腺炎或其它胃腸系統(tǒng)疾病；I型糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎或其它內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。
70.權(quán)利要求69的方法，其中所述的免疫性炎性疾病或障礙是牛皮癬。
71.權(quán)利要求49-70任一項(xiàng)的方法，其中所述的化合物是口服、局部、真皮內(nèi)或腸胃外途徑給藥。
72.權(quán)利要求71的方法，其中所述的化合物是皮下、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)給藥。
73.通式Ia的佐劑 或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其中R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)非環(huán)狀氨基的殘基或-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外，在制備一種進(jìn)一步包含抗原的治療劑中的用途。
74.權(quán)利要求73的用途，其中R1是C12-C20烷基或鏈烯基。
75.權(quán)利要求74的用途，其中R1是C16-C18烷基或鏈烯基。
76.權(quán)利要求75的用途，其中R1是十六烷基、十八烷基、十六烯基、十八烯基、順-9-十八烯基、反-9-十八烯基、順-9，12-十八二烯基、順-6，9，12-十八三烯基或順-9，12，15-十八三烯基。
77.權(quán)利要求76的用途，其中R1是順-9-十八烯基或反-9-十八烯基。
78.權(quán)利要求73-77任一項(xiàng)的用途，其中在所述的通式I的化合物中，殘基A選自下面的基團(tuán) 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；(ii)被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；以及 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X不存在。
79.權(quán)利要求78的用途，其中殘基A是下式 其中R2是H；直鏈或分枝的C1-C6烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基和己基；苯基、芐基或p-羥基芐基；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；所述的環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪和4-甲基哌嗪，條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)，R4和R5不是H或C1-C6烷基。
80.權(quán)利要求79的用途，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，R4和R5每個(gè)是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在氮原子的位置上任選被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)，條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)，R4和R5不是H或C1-C6烷基。
81.權(quán)利要求80的用途，其中所述的化合物選自N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽；4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物；α-氨基-α-苯基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽；以及哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽。
82.權(quán)利要求73的用途，其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)環(huán)狀氨基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外。
83.權(quán)利要求82的用途，其中殘基A具有式 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
84.權(quán)利要求83的用途，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，以及R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在1或4位的氮原子上被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)。
85.權(quán)利要求84的用途，其中所述的化合物是(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽。
86.權(quán)利要求78的用途，其中A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
87.權(quán)利要求86的用途，其中A是被CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R8是H以及R6和R7每個(gè)是甲基。
88.權(quán)利要求87的用途，其中所述的化合物是4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl或4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl。
89.權(quán)利要求78的用途，其中A是基團(tuán) 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X-不存在。
90.權(quán)利要求89的用途，其中R9是一對(duì)電子以及X-不存在，或者R9是甲基或吲哚乙基以及X-是選自氯化物、溴化物、碘化物和甲苯磺酸鹽的抗衡離子。
91.權(quán)利要求90的用途，其中所述的化合物選自煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽；以及1-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物。
92.權(quán)利要求73-91任一項(xiàng)佐劑的用途，其中所述的佐劑與提高體液反應(yīng)的抗原一起給藥。
93.權(quán)利要求73-91任一項(xiàng)佐劑的用途，其中所述的佐劑與提高細(xì)胞反應(yīng)的抗原一起給藥。
94.權(quán)利要求93治療T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥的用途，其中所述的抗原是一種被炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，所述的炎性T細(xì)胞與T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥的發(fā)病有關(guān)。
95.權(quán)利要求93的用途，其中所述的治療劑造成個(gè)體的T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)從TH1轉(zhuǎn)移到TH2。
96.權(quán)利要求95的用途，其中所述的治療劑造成IL-2或IFN-γT細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)的減少和IL-4或IL-10T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)的增加。
97.權(quán)利要求94-96任一項(xiàng)的用途，其中所述的T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥是一種自身免疫性疾病以及所述的抗原是一種肽。
98.權(quán)利要求97的用途，其中所述的自身免疫性疾病是一種器官特異性自身免疫性疾病。
99.權(quán)利要求98的用途，其中所述的器官特異性自身免疫性疾病是I型糖尿病、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或自身免疫性甲狀腺炎。
100.權(quán)利要求99用于治療多發(fā)性硬化的用途，其中所述的抗原是一種被涉及多發(fā)性硬化發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別的并且來(lái)源于髓鞘堿性蛋白(MBP)序列的肽或其類似物。
101.權(quán)利要求99用于治療多發(fā)性硬化的用途，其中所述的抗原是一種被涉及多發(fā)性硬化發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別的共聚物。
102.權(quán)利要求101的用途，其中所述的抗原是格拉默乙酸鹽。
103.權(quán)利要求73-91任一項(xiàng)的用途，其中所述的治療劑包含所述的佐劑和一種用于治療自身免疫性疾病、神經(jīng)變性疾病例如阿爾茨海默氏病或帕金森病、癌癥例如黑色素瘤、或傳染病例如細(xì)菌或病毒感染的抗原。
104.一種包含一種抗原和一種通式Ia的佐劑或其藥學(xué)上可接受的鹽的治療劑 其中R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)非環(huán)狀氨基的殘基或-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外。
105.權(quán)利要求104的治療劑，其中R1是C12-C20烷基或鏈烯基。
106.權(quán)利要求105的治療劑，其中R1是C16-C18烷基或鏈烯基。
107.權(quán)利要求106的治療劑，其中R1是十六烷基、十八烷基、十六烯基、十八烯基、順-9-十八烯基、反-9-十八烯基、順-9，12-十八二烯基、順-6，9，12-十八三烯基或順-9，12，15-十八三烯基。
108.權(quán)利要求107的治療劑，其中R1是順-9-十八烯基或反-9-十八烯基。
109.權(quán)利要求104-108任一項(xiàng)的治療劑，其中在所述的式Ia的佐劑中，殘基A選自 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)，條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)，R4和R5不是H或C1-C6烷基；R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；(ii)被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；以及 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是一種抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X不存在。
110.權(quán)利要求109的治療劑，其中殘基A具有下式 其中R2是H；直鏈或分枝的C1-C6烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基和己基；苯基、芐基或p-羥基芐基；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；所述的環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪和4-甲基哌嗪，條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)，R4和R5不是H或C1-C6烷基。
111.權(quán)利要求110的治療劑，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，R4和R5每個(gè)是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在1或4位的氮原子上任選被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)，條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)，R4和R5不是H或C1-C6烷基。
112.權(quán)利要求111的治療劑，其中所述的佐劑選自N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽；4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物；α-氨基-α-苯基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽；以及哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽。
113.權(quán)利要求104的治療劑，其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)環(huán)狀氨基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外。
114.權(quán)利要求113的治療劑，其中殘基A具有式 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
115.權(quán)利要求114的治療劑，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在4位氮原子上任選被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)。
116.權(quán)利要求115的治療劑，其中所述的佐劑是(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽。
117.權(quán)利要求109的治療劑，其中A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
118.權(quán)利要求117的治療劑，其中A是被CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R8是H以及R6和R7每個(gè)是甲基。
119.權(quán)利要求118的治療劑，其中所述的佐劑是4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl或4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl。
120.權(quán)利要求109的治療劑，其中A是基團(tuán) 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X-不存在。
121.權(quán)利要求120的治療劑，其中R9是一對(duì)電子以及X-不存在，或者R9是甲基或吲哚乙基以及X-是選自氯化物、溴化物、碘化物和甲苯磺酸鹽的抗衡離子。
122.權(quán)利要求121的治療劑，其中所述的佐劑選自煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽；以及1-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物。
123.權(quán)利要求104-122任一項(xiàng)的治療劑，包含所述的佐劑和提高體液反應(yīng)的抗原。
124.權(quán)利要求104-122任一項(xiàng)的治療劑，包含所述的佐劑和提高細(xì)胞反應(yīng)的抗原。
125.權(quán)利要求124的用于治療T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥的治療劑，其中所述的抗原是一種被炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，所述的炎性T細(xì)胞與T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥的發(fā)病有關(guān)。
126.權(quán)利要求125的治療劑，其中所述的治療劑造成個(gè)體的T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)從TH1轉(zhuǎn)移到TH2。
127.權(quán)利要求126的治療劑，其中所述的治療劑造成IL-2或IFN-γT細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)的減少和IL-4或IL-10T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)的增加。
128.權(quán)利要求125-127任一項(xiàng)的所述治療劑，其中所述的T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病是一種自身免疫性疾病以及所述的抗原是一種肽。
129.權(quán)利要求128的治療劑，其中所述的自身免疫性疾病是一種器官特異性自身免疫性疾病。
130.權(quán)利要求129的所述治療劑，其中所述的器官特異性自身免疫性疾病是I型糖尿病、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或自身免疫性甲狀腺炎。
131.權(quán)利要求130的用于治療多發(fā)性硬化的治療劑，其中所述的抗原是一種被涉及多發(fā)性硬化發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別的并且來(lái)源于髓鞘堿性蛋白(MBP)序列的肽或其類似物。
132.權(quán)利要求130的用于治療多發(fā)性硬化的治療劑，其中所述的抗原是一種被涉及多發(fā)性硬化發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別的共聚物。
133.權(quán)利要求132的治療劑，其中所述的抗原是格拉默乙酸鹽。
134.權(quán)利要求104-122任一項(xiàng)的治療劑，其中所述的抗原用于治療自身免疫性疾病、神經(jīng)變性疾病例如阿爾茨海默氏病或帕金森病、癌癥例如黑色素瘤、或傳染病例如細(xì)菌或病毒感染。
135.一種治療T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、障礙或病癥的方法，其包括給予需要的個(gè)體有效量的一種治療劑，所述的治療劑包含被與所述T細(xì)胞介導(dǎo)疾病、障礙或病癥的發(fā)病有關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，以及通式Ia的佐劑 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)非環(huán)狀氨基的殘基或-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外。
136.一種在患有T細(xì)胞介導(dǎo)疾病、障礙或病癥的個(gè)體中引起T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)從TH1轉(zhuǎn)移到TH2的方法，其包括給予需要的所述個(gè)體有效量的一種治療劑，所述的治療劑包含被與所述T細(xì)胞介導(dǎo)疾病、障礙或病癥的發(fā)病有關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，以及通式Ia的佐劑或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基，A是含至少一個(gè)非環(huán)狀或環(huán)狀氨基的殘基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)非環(huán)狀氨基的殘基或-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外。
137.權(quán)利要求136的方法，其中所述的治療劑造成IL-2或IFN-γT細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)的減少和IL-4或IL-10T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)的增加。
138.權(quán)利要求135或136的方法，其中R1是C12-C20烷基或鏈烯基。
139.權(quán)利要求138的方法，其中R1是C16-C18烷基或鏈烯基。
140.權(quán)利要求139的方法，其中R1是十六烷基、十八烷基、十六烯基、十八烯基、順-9-十八烯基、反-9-十八烯基、順-9，12-十八二烯基、順-6，9，12-十八三烯基或順-9，12，15-十八三烯基。
141.權(quán)利要求140的方法，其中R1是順-9-十八烯基或反-9-十八烯基。
142.權(quán)利要求135-141任一項(xiàng)的方法，其中在式Ia的所述化合物中，殘基A選自 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)，條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)，R4和R5不是H或C1-C6烷基；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；(ii)被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；以及 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X不存在。
143.權(quán)利要求142的方法，其中殘基A具有下式 其中R2是H；直鏈或分枝的C1-C6烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基和己基；苯基、芐基或p-羥基芐基；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；所述的環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪和4-甲基哌嗪，條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)，R4和R5不是H或C1-C6烷基。
144.權(quán)利要求143的方法，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，R4和R5每個(gè)是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在1或4位的氮原子上任選被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)，條件是當(dāng)R1是十八烷基時(shí)，R4和R5不是H或C1-C6烷基。
145.權(quán)利要求144的方法，其中所述的佐劑選自N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽；4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物；α-氨基-α-苯基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽；以及哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽。
146.權(quán)利要求135或136的方法，其中R1是C18烷基以及A是含至少一個(gè)環(huán)狀氨基和/或至少一個(gè)含叔或季氮原子的雜芳香族環(huán)，但是其中-CO-A是脯氨酸殘基的化合物除外。
147.權(quán)利要求146的方法，其中殘基A具有式 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
148.權(quán)利要求147的方法，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在4位氮原子上任選被甲基取代的嗎啉環(huán)或哌嗪環(huán)。
149.權(quán)利要求148的方法，其中所述的佐劑是(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽。
150.權(quán)利要求142的方法，其中A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。
151.權(quán)利要求150的方法，其中A是被CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R8是H以及R6和R7每個(gè)是甲基。
152.權(quán)利要求151的方法，其中所述的佐劑是4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl或4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl。
153.權(quán)利要求142的方法，其中A是基團(tuán) 其中R9是H、C1-C6烷基或吲哚基(C1-C4)烷基，以及X-是抗衡離子，或者R9是一對(duì)電子并且X-不存在。
154.權(quán)利要求153的方法，其中R9是一對(duì)電子以及X-不存在，或者R9是甲基或吲哚乙基以及X-是選自氯化物、溴化物、碘化物和甲苯磺酸鹽的抗衡離子。
155.權(quán)利要求154的方法，其中所述的佐劑選自煙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽；以及1-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物。
156.權(quán)利要求135-155任一項(xiàng)的方法，其中所述的抗原在所述個(gè)體中提高體液反應(yīng)。
157.權(quán)利要求135-155任一項(xiàng)的方法，其中所述的抗原在所述個(gè)體中提高細(xì)胞反應(yīng)。
158.權(quán)利要求135-155任一項(xiàng)的方法，其中所述的T細(xì)胞介導(dǎo)疾病是一種自身免疫性疾病并且所述的抗原是一種肽。
159.權(quán)利要求158的方法，其中所述的自身免疫性疾病是一種器官特異性自身免疫性疾病。
160.權(quán)利要求159的方法，其中所述的器官特異性自身免疫性疾病是I型糖尿病、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或自身免疫性甲狀腺炎。
161.權(quán)利要求160的治療多發(fā)性硬化的方法，其中所述的抗原是一種被涉及多發(fā)性硬化發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別的并且來(lái)源于髓鞘堿性蛋白(MBP)序列的肽或其類似物。
162.權(quán)利要求160的治療多發(fā)性硬化的方法，其中所述的抗原是一種被涉及多發(fā)性硬化發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別的共聚物。
163.權(quán)利要求162的方法，其中所述的抗原是格拉默乙酸鹽。
164.權(quán)利要求135或136的方法，其中所述的治療劑包含所述的佐劑和一種用于治療自身免疫性疾病、神經(jīng)變性疾病例如阿爾茨海默氏病或帕金森病、癌癥例如黑色素瘤、或傳染病例如細(xì)菌或病毒感染的抗原。
165.一種通式的化合物R1-O-CO-A其中(i)R1是C20-C24烷基或C10-C24鏈烯基，以及A是下式的殘基 其中R2是H、C1-C6烷基、芳基、或芳烷基，其中任何芳基部分可以未取代的或被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；或者(ii)R1是C18烷基以及A是下式的殘基 其中R2是H；R3是一對(duì)電子；以及R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；或者(iii)R1是C12-C16烷基以及A是下式的殘基 其中R2是未取代的芳基，或芳基或芳烷基其中芳基部分被硝基、氰基、鹵素、羥基、NR6R7或CR8R8NR6R7取代；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；或者(iv)R1是C10烷基以及A是下式的殘基 其中R2是C1-C6烷基；R3是H、一對(duì)電子或C1-C6烷基；R4和R5每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或者R4和R5與它們相連的氮原子一起形成一個(gè)任選被氧原子或任選被C1-C6烷基取代的氮原子間斷的5-7元飽和環(huán)；以及R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基；或者(v)R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基以及A是被NR6R7或CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，但是其中R1是C10-C16烷基并且A是被-CH2-NH2取代的苯基的化合物除外；或者(vi)R1是C10-C24烷基或C10-C24鏈烯基，以及A是下式的基團(tuán) 其中R9是C1-C6烷基或吲哚基(C1-C6)烷基以及X-是抗衡離子；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
166.權(quán)利要求165(i)、(v)或(vi)的化合物，其中R1是C12-C18鏈烯基。
167.權(quán)利要求166的化合物，其中R1是C16-C18鏈烯基。
168.權(quán)利要求167的化合物，其中R1是順-9-十八烯基或反-9-十八烯基。
169.權(quán)利要求168的化合物，其中R2是H或苯基，R3是H或一對(duì)電子，以及R4和R5是甲基或與它們相連的氮原子一起形成在4位氮原子上任選被甲基取代的嗎啉代或哌嗪環(huán)。
170.權(quán)利要求169的化合物，選自N，N-二甲氨基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯；(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸鹽；4-甲基-4-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基甲基-嗎啉-4-鎓氯化物；哌嗪-1-基-乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯酒石酸氫鹽。
171.權(quán)利要求165(ii)的化合物，其中R1是十八烷基以及R4和R5與它們相連的氮原子一起形成在4位氮原子上任選被甲基取代的嗎啉代或哌嗪環(huán)。
172.權(quán)利要求171的化合物，其是(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙酸十八烷基酯酒石酸鹽。
173.權(quán)利要求165(vi)的化合物，其中R1是C12-C20烷基或C12-C20鏈烯基，A是被CR8R8NR6R7取代的苯基，其中R8是H以及R6和R7每個(gè)是H或C1-C6烷基。
174.權(quán)利要求173的化合物，其中R1是C16-C18鏈烯基。
175.權(quán)利要求174的化合物，其中R1是順-9-十八烯基或反-9-十八烯基。
176.權(quán)利要求175的化合物，其是4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl或4-二甲氨基甲基-苯甲酸十八碳-(E)-9-烯基酯HCl。
177.權(quán)利要求165(vi)的化合物，其中R1是C12-C20烷基或C12-C20鏈烯基。
178.權(quán)利要求177的化合物，其中R1是C16-C18烷基或鏈烯基。
179.權(quán)利要求178的化合物，其中R1是順-9-十八烯基或反-9-十八烯基。
180.權(quán)利要求179的化合物，選自1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓碘化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓氯化物；1-甲基-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓甲苯磺酸鹽；和1-[(2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-十八碳-(Z)-9-烯氧羰基-吡啶鎓溴化物。
181.權(quán)利要求165(i)的化合物，其中R1是順-9-十八烯基，R2是苯基，R3是一對(duì)電子，以及R4和R5每個(gè)是H。
182.權(quán)利要求181的化合物，其是α-氨基-α-苯乙酸十八碳-(Z)-9-烯基酯HCl鹽。
183.一種藥物組合物，包含權(quán)利要求165-182任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體。
184.權(quán)利要求183的藥物組合物用于治療炎癥。
185.一種治療組合物，包含一種抗原和一種權(quán)利要求165-182任一項(xiàng)的佐劑。
全文摘要
下面通式的脂肪醇的堿性酯R1－O－CO－A，或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C
文檔編號(hào)C07C229/00GK1703394SQ200380101149
公開(kāi)日2005年11月30日 申請(qǐng)日期2003年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月10日
發(fā)明者M·欣茨基, I·R·科肯, R·馬加里特, Y·赫滋格, J·斯特林, G·托斯, I·米斯科滋, F·蘭塔, T·塔馬斯 申請(qǐng)人:耶達(dá)研究及發(fā)展有限公司