專利名稱：人癌來源的Ig輕鏈可變區(qū)序列和CDR3序列以及它們的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及Ig輕鏈可變區(qū)核苷酸序列和該輕鏈可變區(qū)的CDR3核苷酸序列，尤其是癌細(xì)胞來源的Ig分子輕鏈可變區(qū)及其CDR3區(qū)的cDNA序列，還涉及這些序列在癌癥治療藥劑上的用途。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的免疫學(xué)理論認(rèn)為免疫球蛋白基因僅在B淋巴細(xì)胞發(fā)育過程中進(jìn)行選擇性重排，故免疫球蛋白是B淋巴細(xì)胞的特征性產(chǎn)物。但1996年，邱曉彥等通過免疫組化、Western Blot等發(fā)現(xiàn)在多種上皮性惡性腫瘤細(xì)胞的胞漿中存在與免疫球蛋白抗原性相同且分子結(jié)構(gòu)相似的蛋白分子，而其它正常上皮細(xì)胞均為陰性反應(yīng)(中國免疫學(xué)雜志；1996，5296)；隨后邱曉彥等又分別從蛋白水平和mRNA水平證實(shí)Ig分子在非B細(xì)胞來源的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)；并且發(fā)現(xiàn)應(yīng)用Ig特異的反義寡核苷酸以及抗Ig抗體都可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制其生長(CANCER RESEARCH 63，6488-6495，October 1，2003)。2000年汪泱等用免疫組化方法對(duì)多種腫瘤組織用抗人IgG、IgA、IgD及IgM抗體進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示多數(shù)的腫瘤細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，其中以IgG、IgA及IgD陽性率最高(中國腫瘤臨床，28(3)169，2001)；繼之黎明等用Western blot方法發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤傳代細(xì)胞中存在著IgA分子(中華腫瘤雜志，2001，23(6)451-453)；楊少波等的免疫組化結(jié)果提示胃癌細(xì)胞中可能同時(shí)存在兩種免疫球蛋白輕鏈表達(dá)(中華腫瘤雜志，2002，24(5)465-466.)。以上結(jié)果提示，就Ig分子來源和功能來看，已經(jīng)不再是目前免疫學(xué)理論所界定的即其來源僅限于B淋巴細(xì)胞/漿細(xì)胞和其功能僅限于B細(xì)胞發(fā)育及介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。Ig分子同樣在非B淋巴細(xì)胞性腫瘤細(xì)胞表達(dá)，且在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要作用。
在我們研究非B淋巴細(xì)胞性腫瘤細(xì)胞來源的輕鏈結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，多種不同類型的腫瘤所表達(dá)的輕鏈可變區(qū)序列極其相似，特別是CDR3序列，并且這種輕鏈在正常組織中不表達(dá)或弱表達(dá)。這一結(jié)果提示，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的Ig輕鏈可作為多種腫瘤共有的靶分子在腫瘤的生物治療中具有很好的應(yīng)用前景；并且，作為腫瘤來源的Ig分子的標(biāo)記，在腫瘤的特異性診斷過程中具有潛在的應(yīng)用前景。
目前已有Ig基因作為靶分子用于免疫系統(tǒng)腫瘤的基因治療研究，例如用于bcl/BCR陽性淋巴瘤的治療研究，即研究人員將bcl/BCR融合蛋白中的IgM分子作為靶點(diǎn)，用與IgM恒定區(qū)互補(bǔ)的反義寡核苷酸抑制bcl/BCR陽性淋巴瘤在SICD小鼠體內(nèi)的生長，并觀察到了腫瘤細(xì)胞明顯的凋亡(Clinical CancerResearch Vol.7，400-406，F(xiàn)ebruary 2001)。但是用Ig基因，特別是輕鏈作為靶分子用于非免疫系統(tǒng)腫瘤的基因治療研究及腫瘤特異性診斷的研究還沒有相應(yīng)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，人腫瘤細(xì)胞所表達(dá)的Ig可變區(qū)序列與B細(xì)胞來源的有所不同。免疫球蛋白是由兩條重鏈和兩條輕鏈組成的，其中輕鏈又存在κ和λ兩種類型，在B淋巴細(xì)胞編碼Ig過程中，κ鏈的使用頻率往往較高。并且κ鏈也同重鏈一樣，在Ig分子中存在多樣性，這是因?yàn)棣舒溁虼嬖?0個(gè)V片段，這些片段可隨機(jī)與5個(gè)J片斷重組形成完整的κ鏈可變區(qū)編碼序列，故不同的B淋巴細(xì)胞表達(dá)的κ鏈呈現(xiàn)不同的Vκ與Vj組合，同樣，由部分Vκ片段與部分Vj片斷編碼的高變區(qū)(CDR3區(qū)，抗體的特異性主要由該區(qū)決定的)也不相同(醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教材，第四版，人民衛(wèi)生出版社，2004年8月)。然而，我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同類型腫瘤細(xì)胞之間有著完全相同或極為相似的輕鏈可變區(qū)序列，即呈現(xiàn)出Vκ4-1/J3組合特異性序列；并且Vκ4-1/J3組合中的CDR3序列在腫瘤細(xì)胞來源的Ig輕鏈可變區(qū)中具有極高的保守性，它和B淋巴細(xì)胞來源的CDR3相比具有特異性，表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞之間的不同。
本發(fā)明在前期研究的基礎(chǔ)上，利用非免疫系統(tǒng)來源的腫瘤特異性的輕鏈可變區(qū)Vκ4-1/J3組合序列作為靶點(diǎn)，探討了針對(duì)該序列的反義序列、抗體等在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡作用，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的方案能有效提高腫瘤基因治療中的靶向性。
因此，本發(fā)明的目的在于提供一種癌細(xì)胞來源的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)Vκ4-1/J3組合序列，具有SEQ ID NO1所示的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的另一目的在于提供免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)Vκ4-1/J3組合序列中的CDR3序列，具有SEQ ID NO2所示的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種癌細(xì)胞來源的Vκ4-1/J3組合序列在制備誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥劑上的用途。
所述的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥劑優(yōu)選為，包含Vκ4-1/J3反義序列的藥劑；更優(yōu)選Vκ4-1/J3的反義序列為針對(duì)CDR3的反義序列。由于CDR3是Vκ4-1/J3組合序列中高度保守的區(qū)域，因此本發(fā)明證明了針對(duì)CDR3的反義序列能誘導(dǎo)各種腫瘤細(xì)胞的凋亡。本發(fā)明上述的“針對(duì)CDR3的反義序列”可以是僅僅針對(duì)CDR3區(qū)域的反義序列，也可以是其它包含CDR3區(qū)域的反義序列。通過設(shè)計(jì)Vκ4-1/J3組合序列中其它保守片段的反義序列同樣也能阻斷輕鏈可變區(qū)Vκ4-1/J3的功能，從而實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥劑還可以優(yōu)選為，包含Vκ4-1/J3組合序列的抗體的藥劑；進(jìn)一步優(yōu)選該抗體與核素偶聯(lián)。
本發(fā)明所述的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥劑可以用來各種腫瘤細(xì)胞的凋亡，例如肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、大腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞等等。
本發(fā)明的方案在提高腫瘤基因治療的靶向性方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。


圖1A為癌來源的Vκ4-1/J3核苷酸共有序列；該癌來源的Vκ4-1/J3核苷酸序列為去掉5’及3’端引物的序列，這一序列在肺癌、大腸癌及乳腺癌細(xì)胞中都存在；圖1B為癌來源的Vκ4-1/J3序列中共有的CDR3核苷酸序列；圖2A為CDR3的反義序列抑制HT-29細(xì)胞Ig的κ鏈的表達(dá)；其中CON為對(duì)照組。
圖2B為CDR3的反義寡核苷酸誘導(dǎo)腫瘤HT-29細(xì)胞的凋亡；其中CON為對(duì)照組。
圖3A為Vκ4-1/J3核苷酸序列特異的抗體檢測(cè)正常人血清中含有Vκ4-1/J3的輕鏈表達(dá)；圖3B為Vκ4-1/J3核苷酸序列特異的抗體檢測(cè)腫瘤患者血清中含有Vκ4-1/J3的輕鏈表達(dá)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1.Ig的Vκ鏈的RT-PCR擴(kuò)增1、細(xì)胞培養(yǎng)和從腫瘤細(xì)胞系中提取總RNAHT-29(大腸癌細(xì)胞系)細(xì)胞于含有10％FBS、青霉素(100U/ml)和鏈霉素(100ug/ml)的RPMI DMEM培養(yǎng)基，37℃，5％CO2，飽和濕度條件下培養(yǎng)。
利用GIBCO-BRL公司的TRIZOLTM試劑。取HT-29 5×106，離心后收集，加入1ml TrizolTM試劑，反復(fù)吹打破碎細(xì)胞，室溫靜置5分鐘后，加入0.2ml氯仿，充分混勻，4℃ 12000rpm 15分鐘，收集上清用異丙醇沉淀，70％乙醇洗一次，室溫干燥后，總RNA重懸于DEPC處理的H2O中，分光光度計(jì)(Beckman 640)定量后用于cDNA第一鏈的合成。cDNA第一鏈的合成按照Gibico公司SUPERSCRIPTTM說明書進(jìn)行。合成cDNA后直接用于PCR反應(yīng)。
2、從癌組織中提取總RNA激光顯微切割及RT-PCR取新鮮的大腸癌、乳腺癌及肺癌組織進(jìn)行冰凍切片，70％乙醇固定5分鐘后，在光學(xué)顯微鏡引導(dǎo)下，對(duì)癌巢中的癌細(xì)胞進(jìn)行激光顯微切割。按照RNeasy Mini Kit(Qiagen，Hilden，Germany)使用說明提取這些分離的癌細(xì)胞總RNA，進(jìn)一步再按Sensiscript RT Kit(Qiagen)使用說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA。接著分別取1μl的cDNA進(jìn)行PCR。所用PCR引物Vκ15’-GACATCGAGCTCACCCAGTCTCC-3’；Vκ25’-GAAATTGAGCTCACGCAGTCTCCA-3’Cκ15’-GCACCATCTGTCTTCATCTTCCC-3’。
其中Vκ1和Vκ2做為上游引物，Cκ1為下游引物，進(jìn)行沉降PCR，PCR條件95℃5分鐘；95℃30秒，58℃30秒和72℃30秒，共2個(gè)循環(huán)；95℃5分鐘；95℃30秒，56℃30秒和72℃30秒，共2個(gè)循環(huán)；95℃5分鐘；95℃30秒，54℃30秒和72℃30秒，共2個(gè)循環(huán)；95℃5分鐘；95℃30秒，52℃30秒和72℃30秒，共2個(gè)循環(huán)；95℃5分鐘；95℃30秒，50℃30秒和72℃30秒，共20個(gè)循環(huán)；72℃7分鐘。PCR產(chǎn)物用1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。PCR產(chǎn)物回收、純化，分別克隆到pGEM T-Easy Vector上，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α，PCR鑒定選取陽性克隆，測(cè)定核苷酸序列。
結(jié)果顯示，分別來自乳腺癌(3例)、大腸癌(兩例)、肺癌(1例)及一個(gè)大腸癌細(xì)胞系(HT-29)的35個(gè)克隆的Vκ/Jκ基因片段都呈現(xiàn)Vκ4-1/J3的重組方式，與檢測(cè)的兩例正常人外周血Vκ/Jκ基因片段呈現(xiàn)的多樣性形成明顯的對(duì)比。并且有意思的是這35個(gè)Vκ/Jκ基因片段與胚系的Vκ4-1相比已經(jīng)發(fā)生了明顯的高頻體細(xì)胞突變，而這35個(gè)不同腫瘤類型來源的Vκ/Jκ片段相互比較發(fā)現(xiàn)，它們之間的同源性能夠達(dá)到95％-100％(圖1A)，特別是CDR3區(qū)達(dá)到100％(圖1B)。說明這些腫瘤來源的Vκ4-1/J3序列可結(jié)合相同或極其相似的表位，同時(shí)也提示，這一共同的Vκ4-1/J3序列可作為不同腫瘤共有的靶點(diǎn)，在腫瘤的治療和診斷中具有重要的實(shí)用意義。
實(shí)施例2.Vκ4-1/J3在多種腫瘤組織中表達(dá)用Vκ4-1/J3反義cRNA做為探針，對(duì)含有22種腫瘤及相關(guān)正常組織的組織芯片(67例)進(jìn)行原位雜交檢測(cè)首先將含有正義及反義Vκ4-1/J3序列的Teasy載體(promega公司產(chǎn)品)分別用SalI或NcoI進(jìn)行酶切，然后分別用T7或SP6 RNA聚合酶體外合成DIG-標(biāo)記的正義或反義cRNA探針。進(jìn)一步對(duì)組織芯片脫蠟和水化，然后用0.2M HCl作用10分鐘，再用蛋白酶K(10μg/ml in 10mM Tris，pH 8.0 and 1mM EDTA)在37℃作用20分鐘，用4％多聚甲醛后固定10分鐘，芯片進(jìn)一步脫水、空氣干燥。芯片在42℃孵育2h進(jìn)行預(yù)雜交，然后各芯片用20μl的雜交液(含100ng探針)在42℃孵育18h。然后用含有50％甲酰胺的2×SSC在37℃條件下洗3分鐘，再用2×SSC在37℃條件下洗15分鐘，用0.1×SSC在37℃條件下洗15分鐘。芯片用堿性磷酸酶標(biāo)記的抗DIG抗體(Boehringer Mannheim)在37℃條件下孵育1小時(shí)，PBS洗后用NBT/BCIP顯色。其中正義探針和不含探針的雜交液做為陰性對(duì)照。
結(jié)果顯示，98％的惡性腫瘤細(xì)胞及60％的癌旁正常組織顯示陽性反應(yīng)，而無惡性病變個(gè)體的正常細(xì)胞幾乎為陰性反應(yīng)(陽性率低于5％)(表1)。
表1原位雜交結(jié)果顯示Vκ4-1/J3在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)

實(shí)施例3.Vκ4-1/J3核苷酸序列特異的反義寡核苷酸誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡由于Vκ4-1/J3組合序列中的CDR3序列在不同的腫瘤中高度保守，因此發(fā)明人首先分別合成了一段針對(duì)CDR3的正義及反義序列TAT TAT AGTACT CCT TTC ACT(正義序列)及ATA ATA TCA TGA GGA AAG TGA(反義序列)，該序列可適用于所有癌細(xì)胞來源的Vκ4-1序列。培養(yǎng)HT-29細(xì)胞，用電穿孔法分別將正義及反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染(130V，20ms，脈沖數(shù)為1)至細(xì)胞內(nèi)，電轉(zhuǎn)后室溫孵育15min，加至適當(dāng)體積含10％FBS的完全DMEM，鋪至24孔板，每組3復(fù)孔，CO2培養(yǎng)箱內(nèi)37℃培養(yǎng)。分別在12小時(shí)、24小時(shí)及48小時(shí)分別進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)Ig的κ鏈基因的表達(dá)水平及細(xì)胞凋亡檢測(cè)。細(xì)胞內(nèi)Ig的κ鏈基因的表達(dá)水平檢測(cè)方法轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收獲細(xì)胞，PBS洗，充分重懸細(xì)胞，預(yù)冷的70％乙醇固定過夜。PBS洗細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)至每份2×105，加入兔抗人Igκ鏈抗體(sigma公司產(chǎn)品)(1∶100)，室溫孵育30分鐘后，PBS洗兩次，再加羊抗兔IgG-FITC(DAKO公司)，4℃，避光30min。PBS洗，制成單細(xì)胞懸液，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法按AnnenixV&PI雙染凋亡檢測(cè)試劑盒(購自北京寶賽生物公司)說明操作，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
結(jié)果顯示，針對(duì)CDR3的反義序列能夠有效抑制HT-29細(xì)胞Ig的κ鏈的表達(dá)與空白對(duì)照組及正義序列對(duì)照組比較其Igκ表達(dá)水平下降28-32％(見圖2A)。進(jìn)一步于轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞，F(xiàn)CM檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和各對(duì)照組的凋亡率，結(jié)果顯示CDR3的反義序列能夠有效誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞的凋亡(見圖2B)，隨著時(shí)間的推移，凋亡細(xì)胞從以Annexin-V單染的早期凋亡細(xì)胞為主逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橐訟nnexinV和PI雙染的中晚期凋亡細(xì)胞為主，最后進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)橐訮I單染的死亡細(xì)胞為主。
采用相同的實(shí)驗(yàn)方法，將上述CDR3反義序列轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞，肺癌細(xì)胞，子宮頸癌細(xì)胞系也得到了類似的結(jié)果。
實(shí)施例4.Vκ4-1/J3核苷酸序列特異的抗體誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡Vκ4-1/J3重組蛋白100ug(由寶賽公司完成)和福氏完全佐劑混勻后，皮內(nèi)多點(diǎn)免疫雞，共進(jìn)行四次免疫(1次/月)后，取血后分離免疫血清進(jìn)行抗體滴度測(cè)定，ELISA結(jié)果顯示，抗體滴度達(dá)1∶5000，經(jīng)鹽析法純化IgG得到雞抗人Igκ鏈的抗體，以正常雞IgG做為對(duì)照，進(jìn)行抗體誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡實(shí)驗(yàn)。用24孔培養(yǎng)板培養(yǎng)幾種腫瘤細(xì)胞(肺癌細(xì)胞系，A549；子宮頸癌細(xì)胞系，HeLaS3及HT-29)待對(duì)數(shù)生長期時(shí)，分別按100μg/ml的濃度加入雞抗人Igκ抗體及正常雞IgG，分別在36小時(shí)和48小時(shí)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。按AnnenixV&PI雙染凋亡檢測(cè)試劑盒(購自北京寶賽生物公司)說明操作，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
結(jié)果顯示，雞抗人Igκ抗體與正常雞IgG相比，能有效地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，腫瘤細(xì)胞凋亡率可達(dá)到50％以上(表2)。
表2.雞抗人Vκ4-1/J3抗體誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡百分比分析

說明36h及72h下列所對(duì)應(yīng)的百分比數(shù)為該時(shí)間點(diǎn)的凋亡率。
實(shí)施例5.Vκ4-1/J3核苷酸序列特異的抗體檢測(cè)腫瘤患者血清中含有Vκ4-1/J3重組方式的輕鏈?zhǔn)紫扔每谷薎gκ多克隆抗體(1∶1000，用pH7.4、0.01M的PBS稀釋，SIGMA產(chǎn)品)包被ELISA檢測(cè)板，4℃過夜；0.01M的PBS洗三遍后，用封閉液封閉30分鐘(封閉液為0.01M的PBS中含0.25％BSA，0.05％Tween-20)；吸出封閉液后分別加入倍比稀釋(從1∶20開始)的肺癌及正常人血清，每稀釋度設(shè)4個(gè)復(fù)孔，室溫下1小時(shí)，PBS洗后，將上述4復(fù)孔中分為兩組，其中一組加入1∶1000稀釋的抗人Vκ4-1/J3重組方式的輕鏈抗體(該抗體由實(shí)施例4制得)，另一組加入1∶1000稀釋的雞IgG(兩種IgG均用封閉液稀釋)，室溫下1小時(shí)，PBS洗三遍后，各孔加入兔抗雞IgG-HRP(1∶1000稀釋)，室溫下1小時(shí)，PBS洗三遍后，OPD(鄰苯二胺)顯色。
我們初步檢測(cè)了肺癌及正常人血清各10例，正常人未檢測(cè)到陽性(附圖3A)；其中肺癌均為小細(xì)胞性肺癌，其陽性率可達(dá)5/10(附圖3B)。
FPI05260-sequence listingSEQUENCE LISTING<110>北京大學(xué)<120>人癌來源的Ig輕鏈可變區(qū)序列和CDR3序列以及它們的用途<130>FPI05260<160>2<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>318<212>DNA<213>Homo sapiens<400>1ccagactccc tggttgtgtc tctgggcgag agggcctcca tcaactgcaa gtccagtcag 60aatgtttcac tcggctccaa caataagaac tacttagctt ggtaccagca ccaaccagga 120cagcctccta cgctgctcat ttactgggca tctacccggg aatccggggt ccctgaccga 180ttcagtggca gcgggtctgg gacgatttca ctctcaccat caacagcctg caggctgaag 240atgtggcggt ttattactgt cagcaatatt atgatacccc gctcactttc ggccctggga 300ccaaagtgga aatcaaac318<210>2<211>30<212>DNA<213>Homo sapiens<400>2caatattatg ataccccgct cactttcggc30
權(quán)利要求
1.一種癌細(xì)胞來源的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)VK4-1/J3組合序列，具有SEQID NO1所示的結(jié)構(gòu)。
2.一種權(quán)利要求1所述的VK4-1/J3組合序列中的CDR3序列片段，具有SEQID NO2所示的結(jié)構(gòu)。
3.一種權(quán)利要求1所述的VK4-1/J3組合序列在制備誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥劑上的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述的藥劑是包含VK4-1/J3反義序列的藥劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中所述的反義序列是針對(duì)CDR3的反義序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述的藥劑包含VK4-1/J3組合序列的抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-6任一項(xiàng)所述的用途，其中所述的腫瘤細(xì)胞為肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、大腸癌細(xì)胞和肺癌細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人癌細(xì)胞來源的Ig分子輕鏈可變區(qū)及其CDR3區(qū)的cDNA序列。并進(jìn)一步公開了這些序列在癌癥治療藥劑上的用途。本發(fā)明的方案在提高腫瘤基因治療的靶向性方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C07K16/42GK1940069SQ20051010783
公開日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2005年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月30日
發(fā)明者鄭杰, 邱曉彥, 黃晶, 朱小輝, 柳世慶 申請(qǐng)人:北京大學(xué)