專利名稱：：由于和功能域抗體綴合而具有提高的血清半衰期的plad功能域肽的制作方法由于和功能域抗體綴合而具有提高的血清半衰期的PLAD功能域肽相關(guān)申請本申請是2005年11月10日提交的國際申請PCT/GB2005/004319的部分繼續(xù)，其指定了美國；而且是2005年5月31日提交的國際申請PCT/GB2005/002163的部分繼續(xù)，其指定了美國，其要求2004年12月2日提交的美國臨時專利申請60/632,361的利益，在此將上述申請的全部教導(dǎo)引入作為參考。
背景技術(shù)：
：許多藥物具有能用于治療和/或診斷目的的活性，但由于給藥時，它們迅速地從機(jī)體排除，因此具有有限的價值。例如，許多具有治療用途活性的多肽通過腎臟迅速地從循環(huán)中清除。因此，為了獲得想要的治療效果，必須給藥大劑量。需要改良的治療與診斷劑，其具有改良的藥學(xué)動力學(xué)特性。能結(jié)合血清白蛋白的多肽是本領(lǐng)域已知的。(參見，例如，EP0486525Bl(CemuBioteknikAB);US6，267，964Bl(Nygren等);WO04/001064A2(Dyax，Corp.);WO02/076489Al(Dyax，Corp.);WO01/45746(Ge腦tech，Inc.))。發(fā)明概述本發(fā)明涉及包含PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的藥物組合物、融合體與綴合物。一個方面，本發(fā)明是一種藥物融合體，其包括X，與Y，部分，其中X，是PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體；Y，是具有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。在一些實施方案中，多肽結(jié)合部分特異性結(jié)合血清白蛋白。例如，多肽結(jié)合部分可以是抗體的抗原結(jié)合片段，該抗體能特異性結(jié)合血清白蛋白。PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體優(yōu)選包括至少大約10個連續(xù)氨基酸的區(qū)域，其與選自TNRR1、TNFR2、FAS、LT卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40與DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列中的氨基酸相同。例如，PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LT卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40與DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。在另一個例子中，所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自SEQIDNO:87、SEQIDNO:88、SEQIDNO:89、SEQIDNO:90、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96和SEQIDNO:97的氨基酸序列具有至少大約卯％的氨基酸序列同一性。在一些實施方案中，藥物融合體包括X，與Y，部分，其中X，是PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體；Y，是特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)。在這些實施方案中，X，可位于Y，的氨基端，或Y，可位于X，的氨基端。優(yōu)選地，重鏈可變區(qū)與輕鏈可變區(qū)特異性結(jié)合人血清白蛋白。在某些實施方案中，Y，包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25與SEQIDNO:26的氨基酸序列。在其他的實施方案中，Y，包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22與SEQIDNO:23的氨基酸序列。PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體優(yōu)選包括至少大約10個連續(xù)氨基酸的區(qū)域，所述氨基酸與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LT|3R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40與DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列中的氨基酸相同。例如，PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自TNFRl、TNFR2、FAS、LTpR、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40與DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。在另一個例子中，所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自SEQIDNO:87、SEQIDNO:88、SEQIDNO:89、SEQIDNO:90、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96和SEQIDNO:97的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。其他的方面中，本發(fā)明是一種藥物綴合物，其包括特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)，和與所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)或免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)共價鍵合的PLAD功能域，或PLAD功能域的功能性變體。在一些實施方案中，PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體與所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)或免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)通過連接體部分共價鍵合。在某些實施方案中，特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)，包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22與SEQIDNO:23的氨基酸序列。PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體優(yōu)選包括至少大約10個連續(xù)氨基酸的區(qū)域，所述氨基酸與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LTpR、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40與DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列中的氨基酸相同。例如，PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自TNFRl、TNFR2、FAS、LT卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40與DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。在另一個例子中，所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自SEQIDNO:87、SEQIDNO:88、SEQIDNO:89、SEQIDNO:90、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96和SEQIDNO:97的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。本發(fā)明還涉及一種編碼本發(fā)明的藥物融合體的分離的或重組的核酸與核酸構(gòu)建體。本發(fā)明還涉及一種包含本發(fā)明的重組核酸的宿主細(xì)胞，而且涉及一種生產(chǎn)藥物融合體的方法，其包括在適于所述重組核酸表達(dá)的條件下保持宿主細(xì)胞，借此生產(chǎn)藥物融合體。本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包括本發(fā)明的藥物融合體或藥物綴合物與生理學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明還涉及一種治療患有炎性疾病的個體的方法，包括對所述個體給藥治療有效量的本發(fā)明的藥物綴合物或藥物融合體。在特定的實施方案中，炎性疾病是關(guān)節(jié)炎。本發(fā)明還涉及藥物綴合物或藥物融合體在治療，診斷或預(yù)防中的應(yīng)用，和涉及使用本發(fā)明的藥物綴合物或藥物融合體用于制造治療炎性疾病，如這里公開的疾病的藥物(例如關(guān)節(jié)炎)。本發(fā)明還涉及包括PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的藥物組合物，該PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體與具有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分連接，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，與所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體相比，其中所述的藥物組合物具有較長的體內(nèi)血清半衰期，而且具有所述PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的至少大約90%的活性。本發(fā)明涉及包括PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體與能延長體內(nèi)血清半衰期的多肽的綴合物或融合蛋白。例如，血清白蛋白，白蛋白片段或白蛋白變體，或者新的Fc受體。在綴合物中，PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體與能延長體內(nèi)血清半衰期的多肽，可以如這里所述的直接或間接并且共價或非共價地綴合結(jié)合。在融合蛋白中，PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體與能延長體內(nèi)血清半衰期的多肽，能以單拷貝或多拷貝并以任何所需的方向存在。附圖簡述圖1A是通過結(jié)合小鼠血清白蛋白(MSA)選擇的三個V,s的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列來自于指定為MSA16，其也稱為DOM7m-16(SEQIDNO:1)，MSA12，其也稱為DOM7m畫12(SEQIDNO:2)，以及MSA26，其也稱為DOM7m畫26(SEQIDNO:3)的VKS。圖IB是通過結(jié)合老鼠血清白蛋白(RSA)選擇的六個VKS的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列來自于指定為DOM7r-l(SEQIDNO:4)、DOM7r國3(SEQIDNO:5)、DOM7r陽4(SEQIDNO:6)、DOM7r-5(SEQIDNO:7)、DOM7r畫7(SEQIDNO:8)以及DOM7r-8(SEQIDNO:9)的VKS。圖1C是通過結(jié)合人血清白蛋白(HSA)選擇的六個VKS的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列是來自于指定為DOM7h-2(SEQIDNO:10)、DOM7h誦3(SEQIDNO:11)、DOM7h畫4(SEQIDNO:12)、DOM7h-6(SEQIDNO:13)、DOM7h-l(SEQIDNO:14)以及DOM7h-7(SEQIDNO:15)的VkS。圖ID是通過結(jié)合人血清白蛋白與共有序列(SEQIDNO:23)選擇的七個VHS的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列是來自于指定為DOM7h畫22(SEQIDNO:16)、DOM7h畫23(SEQIDNO:17)、DOM7h畫24(SEQIDNO:18)、DOM7h國25(SEQIDNO:19)、DOM7h誦26(SEQIDNO:20)、DOM7h-21(SEQIDNO:21)以及DOM7h誦27(SEQIDNO:22)的VHS。圖IE是通過結(jié)合人血清白蛋白與老鼠血清白蛋白選擇的三個VKS的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列是來自于指定為DOM7h-8(SEQIDNO:24)、DOM7r-13(SEQIDNO:25)和DOM7r-14(SEQIDNO:26)的VkS。圖2A和2B是分別用于表達(dá)MSA16IL-lra(也稱為DOM7m-16/IL-lra)和IL-lraMSA16(也稱為IL畫lra/DOM7m隱16)融合體的載體的圖譜。圖2C-2D示例了編碼IL-lraMSA16融合體(也稱為IL-lra/DOM7m-16)的核苷酸序列(SEQIDNO:27)以及該融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:28)。圖2E-2F示例了編碼MSA16IL-lra融合體(也稱為DOM7m-16/IL-lra)的核普酸序列(SEQIDNO:29)以及該融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:30)。圖2G-2H示例了編碼不與血清白蛋白結(jié)合的DummylL-lra融合體的核苷酸序列(SEQIDNO:31)以及該融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:32)。圖3A示例了IL-1誘導(dǎo)了通過Hela細(xì)胞產(chǎn)生IL-8，而且示例了在ELISA分析中檢測到IL-8的機(jī)制。圖3B的圖表顯示了，通過MRC-5細(xì)胞，IL-lra(，標(biāo)記的"R&D")，MSA16IL-lra(■)與IL-lraMSA16(▲)每個都抑制IL-1誘導(dǎo)的IL-8的分泌。觀察到的抑制是IL-lra，MSAl6IL-lra和IL-lraMSA16劑量依賴的。圖4A-4C的圖表顯示了，通過培養(yǎng)的MRC-5細(xì)胞，在分析中IL國lra()與MSA16IL-lra(■)都抑制了IL-1誘導(dǎo)的IL-8的分泌，其包括沒有小鼠血清白蛋白(4A)，5%小鼠血清白蛋白(4B)或100/。小鼠血清白蛋白(4C)。觀察到的抑制在所有測試條件下都是IL-lra和MSA16IL-1ra劑量依賴的。圖5是ELISA結(jié)果的圖示，其證實了MSA16ILl-ra融合體與IL-lraMSA16融合體都結(jié)合血清白蛋白，但是虛構(gòu)的ILl-ra融合體不結(jié)合血清白蛋白。圖6A-6C的sensograms與表格顯示了，與人血清白蛋白(HAS)結(jié)合的克隆DOM7h-l(6A)，與HAS結(jié)合的DOM7h-7(6B)，以及與老鼠血清白蛋白(RSA)結(jié)合的DOM7r-l(6C)的BIACORE親和性數(shù)據(jù)。圖7的表格顯示了DOM7h畫l、D0M7r誦l、DOM7h國2、DOM7r-3、DOM7h-7、DOM7h-8、DOM7r-8、DOM7r畫13、DOM7M4、DOM7m畫16、DOM7h-22、DOM7h-23、DOM7h-26、DOM7r國16、DOM7m-26、DOM7r-27以及DOM7R-31對它們結(jié)合的血清白蛋白的親和性。DOM7h-8也結(jié)合豬血清白蛋白，而且親和性(KD)為60nM。圖8A圖示了編碼人白細(xì)胞間介素1受體拮抗劑(IL-lra)的核酸的核苷酸序列(SEQIDNO:33)，該人白細(xì)胞間介素1受體拮抗劑(IL-lra)在GenBank以登錄號NM_173842保存。該核酸的開放閱讀框從第65位開始。圖8B示例了由圖8A中所示的核酸(SEQIDNO:33)編碼的人IL-lra的氨基酸序列(SEQEDNO:34)。該成熟蛋白由152個氨基酸殘基組成(SEQIDNO:34的26-177位氨基酸殘基)。圖9顯示了單次靜脈(i.v.)注射(劑量為大約1.5mg/kg)到CD1林雄性動物中后，小鼠血清中結(jié)合dAb/HA抗原表位標(biāo)簽融合蛋白的MSA的濃度(ng/mL)隨時間(天)變化的曲線圖。使用山羊抗-HA(Abeam，UK)捕獲和蛋白質(zhì)L-HRP(Invitrogen，USA)檢測試劑，通過ELISA來測定血清濃度。在存在lx小鼠血清以確保與測試樣品的可比性時，建立已知濃度的結(jié)合dAb/HA融合體的MSA的標(biāo)準(zhǔn)曲線。用一個區(qū)室模型(WinNonlinSoftware,PharsightCorp.，USA)進(jìn)行模擬，顯示結(jié)合dAb/HA抗原表位標(biāo)簽融合蛋白的MSA具有29.1小時的末期tl/2，與559hr>g/mL曲線下的面積。圖IO示例了通過結(jié)合老鼠血清白蛋白(RSA)選擇的V^的氨基酸序列。示例的序列來自于指定為DOM7r-15(SEQIDNO:37)、DOM7r-16(SEQIDNO:38)、DOM7r-17(SEQIDNO:39)、DOM7r-18(SEQIDNO:40)、DOM7r國19(SEQIDNO:41)的VKS。圖11A-11B示例了結(jié)合老鼠血清白蛋白(RSA)的V朋的氨基酸序列。示例的序列是來自于指定為DOM7r-20(SEQIDNO:42)、DOM7r-21(SEQIDNO:43)、DOM7r畫22(SEQIDNO:44)、DOM7r-23(SEQIDNO:45)、DOM7r-24(SEQIDNO:46)、DOM7r-25(SEQIDNO:47)、DOM7r誦26(SEQIDNO:48)、DOM7r畫27(SEQIDNO:49)、DOM7r-28(SEQIDNO:50)、DOM7r-29(SEQIDNO:51)、DOM7r腸30(SEQIDNO:52)、DOM7r誦31(SEQIDNO:53)、DOM7r-32(SEQIDNO:54)以及DOM7r國33(SEQIDNO:55)的VHS。圖12顯示了單次靜脈(i.v.)注射(劑量為大約1.5mg/kg)到CD1林雄性動物中后，D0M7m-16、DOM7m-26或不結(jié)合MSA的對照dAb的濃度隨時間變化的曲線圖，其中D0M7m-16，DOM7m-26或不結(jié)合MSA的對照dAb每個都含有HA抗原表位標(biāo)簽。使用山羊抗-HA(Abeam，UK)捕獲和蛋白質(zhì)L-HRP(Invitrogen,USA)檢測試劑，通過ELISA來測定血清濃度。在存在lx小鼠血清以確保與測試樣品的可比性時，建立已知濃度的結(jié)合dAb/HA融合體的MSA的標(biāo)準(zhǔn)曲線。用一個區(qū)室模型(WinNonlinSoftware,PharsightCorp"USA)進(jìn)行模擬，顯示對照dAb具有20分鐘的末期tl/2p，而DOM7m-16，DOM7m-26在血清中持續(xù)的顯著更長。圖13的圖表顯示了，在小鼠膠原質(zhì)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型中，DOM7m-16/IL-lra治療關(guān)節(jié)炎比IL國lra或ENBREL(entarec印t;ImmunexCorporation)更有效。誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎，而且從第21天開始，用0.4mg/Kg(類固醇)的地塞米松、1mg/Kg的(IL-lra/抗-SAlmg/kg)或10mg/Kg(IL-lra/抗-SA10mg/kg)的DOM7m-16/IL陽lra、1mg/Kg或10mg/Kg的IL-lra、5mg/Kg的ENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)或鹽處理小鼠。結(jié)果顯示，在該研究中DOM7m-16/IL誦lrat匕IL-lra或ENBREL(entarecept;imm[upsilonnexCorporation)更有效。對IL-lra的應(yīng)答是劑量依賴的，如所預(yù)期的，對DOM7m-16/IL-lra的應(yīng)答也是劑量依賴的。用1mg/Kg的DOM7m-16/IL-lra處理的平均分?jǐn)?shù)始終如一地4氐于用10mg/kg的IL-lra處理獲得的平均分?jǐn)?shù)。該結(jié)果表明，在該研究中用DOJVHm-16/IL國lra處理比IL國lra有效10倍。圖14A-14G示例了皂草素多肽的氨基酸序列，圖14A示例了以Swissprot登錄號P27559保藏的皂草素-2前體的氨基酸序列(SEQ1DNO:56)。信號肽是SEQIDNO:56的1-24位氨基酸。圖14B示例了以Swissprot登錄號P27560保藏的皂草素-3的氨基酸序列(SBQIDNO:57)。圖14C示例了以Swissprot登錄號P27561保藏的皂草素-4前體的氨基酸序列(SEQIDNO:58)。信號肽為SEQIDNO:58的第1-24位氨基酸。圖14D示例了以Swissprot登錄號Q41389保藏的皂草素-5的氨基酸序列(SEQIDNO:59)。圖14E示例了以Swissprot登錄號P20656保藏的皂草素-6前體的氨基酸序列(SEQIDNO:60)。信號肽為SEQIDNO:60的笫1-24位氨基酸，而且可能的前肽propeptide為SEQIDNO:60的第278-299位氨基酸。成熟多肽為SEQIDNO:60的第25-277位氨基酸(SEQIDNO:61)。圖14F示例了以Swissprot登錄號Q41391保藏的皂草素-7的氨基酸序列(SEQIDNO:62)。圖14G示例了包括急草素-6的幾個變體和同工型的共有氨基酸序列(SEQIDNO:63)。圖15示例了WO2004/041862中所述的結(jié)合小鼠血清白蛋白的幾個Cfl附e/,V/K冊的氨基酸序列。序列A(SEQIDNO:68)、序列B(SEQIDNO:69)、序列C(SEQIDNO:70)、序列D(SEQIDNO:71)、序列E(SEQIDNO:72)、序列F(SEQIDNO.73)、序列G(SEQIDNO:74)、序列H(SEQIDNO:75)、序列I(SEQIDNO:76)、序列J(SEQIDNO:77)、序列K(SEQIDNO:78)、序列L(SEQIDNO:79)、序列M(SEQIDNO:80)、序列N(SEQIDNO:81)、序列O(SEQIDNO:82)、序列P(SEQIDNO:83)、序列Q(SEQIDNO:84)。發(fā)明詳述在該說明書中，已經(jīng)以能撰寫清楚和簡明的說明書的方式描述了實施方案，但是它的目的是，而且應(yīng)當(dāng)理解，實施方案可以進(jìn)行各種組合或分開，而不背離本發(fā)明。具有與本發(fā)明的任何一個實施方案相同的結(jié)構(gòu)式的已知組合物本身被明確地放棄。相反，新的組合物，已知組合物的新組合，已知組合物的新用途或者包括已知組合物的新的方法都不被放棄。如這里使用的，"藥物"指任何化合物(例如，小的有機(jī)分子，核酸，多肽)，其給藥給個體以通過結(jié)合和/或改變個體中的生物學(xué)靶分子的功能，而產(chǎn)生有利的治療或診斷效果。靶分子可以是由個體的基因組編碼的內(nèi)源耙分子(例如，由個體的基因組編碼的酶，受體，生長因子，細(xì)胞因子)，或者由病原體的基因組編碼的外源靶分子(例如，由病毒，細(xì)菌，真菌，線蟲類或其它的病原體編碼的酶)。如這里使用的，"藥物組合物"指包括與多肽結(jié)合部分共價或非共價鍵合的藥物的組合物，其中多肽結(jié)合部分含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)。藥物組合物可以是綴合物，其中藥物與多肽結(jié)合部分共價或非共價鍵合。藥物可與多肽結(jié)合部分直接或間接地共價或非共價鍵合(例如，通過合適的連接體和/或互補結(jié)合伴體(例如，生物素和抗生物素蛋白)的非共價鍵合)。當(dāng)應(yīng)用互補結(jié)合伴體時，一個結(jié)合伴體可直接與藥物共價鍵合或通過合適的連接體部分與藥物結(jié)合，而且互補結(jié)合伴體可與多肽結(jié)合部分直接共價鍵合或通過合適的連接體部分與多肽結(jié)合。當(dāng)藥物時多肽或肽時，藥物組合物可以是融合蛋白，其中多肽或肽藥物與多肽結(jié)合部分是連續(xù)多肽鏈的離散部分(moieties部分)。如這里使用的"綴合物"指包括抗體的抗原結(jié)合片段的組合物，該抗體結(jié)合與藥物結(jié)合的血清白蛋白。這種綴合物包括"藥物綴合物"，其包括抗體的抗原結(jié)合片段，該抗體結(jié)合與藥物共價鍵合的血清白蛋白，以及"非共價藥物綴合物"，其包括抗體的抗原結(jié)合片段，該抗體結(jié)合與藥物非共價鍵合的血清白蛋白。如這里使用的，"藥物綴合物"指包括抗體的抗原結(jié)合片段的組合物，該抗體結(jié)合與藥物共價鍵合的血清白蛋白。藥物可直接或通過合適的連接體部分間接與抗原結(jié)合片段共價鍵合。藥物可在任何合適的位置與抗原結(jié)合片段結(jié)合，例如，氨基-末端，羧基端或通過合適的氨基酸側(cè)鏈(例如，賴氨酸的S氨基)。如這里使用的，"非共價藥物綴合物"指包括抗體的抗原結(jié)合片段的組合物，該抗體結(jié)合與藥物非共價鍵合的血清白蛋白。藥物可直接(例如，靜電作用、疏水作用)或間接(例如，通過互補結(jié)合伴體(例如，生物素和抗生物素蛋白)的非共價鍵合，其中一個伴體與藥物共價鍵合，而且互補結(jié)合伴體與抗原結(jié)合片段共價鍵合)與抗原結(jié)合片段非共價鍵合。當(dāng)使用互補結(jié)合伴體時，一個結(jié)合伴體可直接或通過合適的連接體部分與藥物共價鍵合，而且互補結(jié)合伴體可直接或通過合適的連接體部分與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合部分共價鍵合。如這里使用的，"藥物融合體"指融合蛋白，其包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段和多肽藥物。結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段和多肽藥物以一個連續(xù)多肽鏈的離散部分(moieties部分)存在。如這里使用的術(shù)語"藥物基礎(chǔ)"指基于用于分析，測定或確定活性的藥物(或藥物部分)的量標(biāo)準(zhǔn)化的藥物組合物和藥物的活性。一般，本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的分子量比它們包含的藥物的分子量大。因此，按重量計算，等量的藥物組合物和藥物，將包含不同分子或摩爾基礎(chǔ)量的藥物。例如，如果本發(fā)明的藥物組合物的分子量是它包含的藥物的分子量的兩倍，可以使用2嗎的藥物組合物和ljig藥物，根據(jù)"藥物基礎(chǔ)"來測定活性，因為這些量將包含相同量的藥物(與游離藥物或藥物組合物的部分)。使用適當(dāng)?shù)挠嬎?，例如，通過根據(jù)每個靶結(jié)合位點基礎(chǔ)表示活性，或?qū)τ诿杆幬锔鶕?jù)每個活性位點基礎(chǔ)，可以對活性進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，并以"藥物基礎(chǔ)"表示。如這里使用的"白細(xì)胞間介素1受體拮抗劑"(IL-lra)指天然存在的或內(nèi)源的哺乳動物IL-lra蛋白，以及具有與天然存在的或內(nèi)源的相應(yīng)哺乳動物IL-lra蛋白相同的氨基酸序列的蛋白質(zhì)(例如，重組蛋白、合成蛋白(也即，使用合成有機(jī)化學(xué)方法產(chǎn)生的))。因此，如這里限定的，該術(shù)語包括IL-lra的成熟蛋白，多態(tài)或等位基因變體，以及其它的同工型(例如，通過選擇性剪接或其它的細(xì)胞方法產(chǎn)生的)，以及前述的修飾或非修飾形式(例如，脂質(zhì)化、糖基化、PEG化)。天然存在的或內(nèi)源IL-lra包括野生型蛋白，如天然存在于哺乳動物(例如，人或非人的靈長類動物)中的成熟IL-lra，多態(tài)或等位基因變體以及其它同工型。這種蛋白質(zhì)例如可從天然產(chǎn)生IL-lra的來源重新獲得或分離。這些蛋白質(zhì)，和具有與天然存在的或內(nèi)源的相應(yīng)IL-lra相同的氨基酸序列的IL-lra蛋白，以相應(yīng)的哺乳動物的名稱稱呼。例如，當(dāng)相應(yīng)的哺乳動物是人時，該蛋白質(zhì)指定為人IL-lra。IL-lra的"功能性變體"包括可使用合適的方法(例如，突變(例如，化學(xué)突變，輻射突變)，重組DNA技術(shù))產(chǎn)生的功能性片段，功能性突變蛋白，和/或功能性融合蛋白。"功能性變體"拮抗白細(xì)胞間介素-l型l受體。一般，相對于成熟IL-lra，IL-lra的片段或部分包括具有氨基酸(也即一個或多個氨基酸)缺失和/或添加(也即，一個或多個缺失和/或添加)的那些IL-lra(如N-端、C-端或內(nèi)部缺失)。相對于成熟IL-lra，其中只缺失連續(xù)氨基酸或其中只缺失非連續(xù)氨基酸的片段或部分也是預(yù)見的。人IL-lra的功能性變體可與成熟的152個氨基酸形式的人IL-lra具有至少大約80%,或至少大約85%，或至少大約90%，或至少大約95%,或至少大約96%，或至少大約97%，或至少大約98%,或至少大約99%的氨基酸序列同一性，并拮抗人白細(xì)胞間介素-1型1受體。(參見，Eisenberg等，Nature343:341-346(1990).)變體可包括一個或多個添加的氨基酸(例如，包括153或154或多個氨基酸)。例如，變體IL-lra的氨基酸序列包括氨基端的曱硫氨酸殘基，后面是SEQIDNO:33的26到177殘基。(KINERET(anakinra)，AmgenInc.)。如這里使用的"皂草素"指由植物肥皂草(^/7omrn'fl^/"7r"http://s)產(chǎn)生的單鏈核糖體非活性多肽家族。(Stirpe，F(xiàn).，等，Biochem.JJl6:617-625(1983)，Bagga，S.等，J.Biol.Chem.278:4813-4820(2003).).皂草素多肽以長度和/或氨基酸序列不同的幾種形式存在。(參見，例如，Id.和Barthelemy，I，等，J.Biol.Chem.268:6541-6548(1993).)。皂草素-6是最有活性的皂草素形式。(Bagga，S.等，J.BioI.Chem.278:4813-4820(2003))。已經(jīng)描述了至少4種天然存在的皂草素-6的同工型，其中成熟多肽(SEQIDNO:61)的第48位氨基酸是Asp或GIu，成熟多肽(SEQIDNO:61)的第91位氨基酸是Arg或Lys。(Barthelemy,I.等，J.Biol.Chem.268:6541-6548(1993).)其它形式的皂草素-6包括多肽，其中成熟多肽(SEQIDNO:61)的第99位氨基酸是Ser或Leu;成熟多肽(SEQIDNO:61)的笫134位氨基酸是Gln或Lys;成熟多肽(SEQIDNO:61)的笫147位氨基酸是Ser或Leu;成熟多肽(SEQIDNO:61)的第149位氨基酸是Ser或Phe;成熟多肽(SEQIDNO:61)的笫162位氨基酸是Asp或Asn;成熟多肽(SEQIDNO:61)的第177位氨基酸是Ala或Val;成熟多肽(SEQIDNO:61)的第188位氨基酸是lie或Thr;成熟多肽(SEQIDNO:61)的第196位氨基酸是Asn或Asp;成熟多肽(SEQIDNO:61)的笫198位氨基酸是Glu或Asp;成熟多肽(SEQIDNO:61)的第231位氨基酸是Asn或Ser;成熟多肽(SEQIDNO:61)的第233位氨基酸是Lys或Arg。包括這些同工型和變體的共有序列如圖14G所示(SEQIDNO:63)。因此，術(shù)語"皂草素"包括前體蛋白、成熟蛋白、天然蛋白、多肽或等位基因變體，和其它的同工型(例如，通過選擇性剪接或其它的細(xì)胞方法產(chǎn)生的)，以及前述的修飾或非修飾形式(例如，脂質(zhì)化、糖基化、PEG化)，包括天然存在的，合成的或重組產(chǎn)生的多肽。天然存在的或內(nèi)源皂草素包括野生型蛋白如成熟皂草素(例如，成熟皂草素-6)，天然存在于肥皂草中多態(tài)或等位基因變體和其它的同工型。這些蛋白質(zhì)可使用任何合適的方法從肥皂草重新獲得或分離。皂草素的"功能性變體"包括可使用合適的方法(例如，突變(例如，化學(xué)突變，輻射突變)，重組DNA技術(shù))產(chǎn)生的功能性片段，功能性突變蛋白，和/或功能性融合蛋白。一般，相對于成熟皂草素，皂草素(例如，皂草素-5)的片段或部分包括具有氨基酸缺失和/或添加(也即，一個或多個氨基酸缺失和/或添加)的那些皂草素(如N-端，C-端或內(nèi)部缺失)。相對于成熟皂草素，其中只缺失連續(xù)的氨基酸，或其中只缺失非連續(xù)的氨基酸的片段或部分也是預(yù)見的。可以制備皂草素的各種功能性變體。例如，已經(jīng)制備了含有氨基-末端延伸的皂草素-6的融合蛋白，而且顯示在兔網(wǎng)狀細(xì)胞溶解產(chǎn)物分析中保持全部的核糖體抑制活性。(Barthelemy，L等，J，BiolChem.268:6541-6548(1993).)。變體或皂草素-6是一個活性位點殘基，Tyr72，TyrUO,Glul76，Arg179或Trp208(SEQIDNO:61的笫72、120、176、179或208位氨基酸)被丙氨酸取代，而且其在離體分析中細(xì)胞毒性降低。(Bagga，S.等，J，BiolChan.278:4813-4820(2003).)。因此，如果需要制備皂草素另外的功能性變體，應(yīng)該避免活性位點殘基的突變，置換，取代，缺失或修飾。優(yōu)選地，含有比天然存在的成熟多肽少的氨基酸的皂草素的功能性變體，至少包括活性位點。例如，皂草素-6的變體，其含有比天然存在的成熟皂草素-6少的氨基酸，包括成熟皂草素-6的活性位點殘基(Tyr72、Tyrl20、Glul76、Arg179和Trp208(SEQIDNO:61的第72、120、176、179和208位氨基酸))，而且長度為至少大約137個氨基酸，長度為至少大約150個氨基酸，長度為至少大約175個氨基酸，長度為至少大約200個氨基酸，長度為至少大約225個氨基酸，或長度為至少大約250個氨基酸。皂草素的"功能性變體"具有核糖體滅活活性(例如，rRNAN-糖苷酶活性)和/或細(xì)胞毒性。這種活性可使用任何合適的方法分析，如胞系^任何熟知細(xì)胞毒素分析。(參見，例如，Bagga，;.4，J.BiolChem.278:4813畫4820(2003)和Barthelemy,I，等，J.BiolChem.268:6541-6548(1993).)在一些實施方案中，皂草素的功能性變體與成熟皂草素-6(SEQIDNO:61)具有至少大約80%，或至少大約85%，或至少大約90%，或至少大約91%,或至少大約92n/，或至少大約93%,或至少大約94%,或至少大約95%,或至少大約96%,或至少大約97°/，或至少大約98%，或至少大約99%的氨基酸序列同一性。本發(fā)明涉及包括藥物和藥物結(jié)合部分的藥物組合物，該多肽結(jié)合部分含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)。如這里關(guān)于藥物組合物詳細(xì)所述的，該藥物組合物包括特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，藥物與多肽結(jié)合部分可彼此共價或非共價鍵合。在一些實施方案中，藥物組合物是包括多肽藥物與多肽結(jié)合部分的融合蛋白，該多肽結(jié)合部分含有一個能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的抗原結(jié)合部分。在其它的實施方案中，藥物組合物包括與多肽結(jié)合部分共價或非共價鍵合的藥物，該多肽結(jié)合部分含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的抗原結(jié)合位點。通常，增加體內(nèi)血清半衰期的多肽是體內(nèi)天然存在，而且抗降解，或抵抗被從生物體(例如人類)除去不想要的材料的內(nèi)源機(jī)制除去的多肽。例如，增加體內(nèi)血清半衰期的多肽可選自來自于細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白質(zhì)，血液中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)，血液腦障礙物或神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)，定位于腎，肝臟，肺，心臟，皮膚或骨的蛋白質(zhì)，應(yīng)激蛋白，疾病特異性蛋白質(zhì)，或Fc轉(zhuǎn)運相關(guān)的蛋白質(zhì)。增加體內(nèi)血清半衰期的合適的多肽包括，例如，鐵傳遞蛋白受體特異性配體-神經(jīng)藥劑融合蛋白(參見美國專利號5，977，307，其教導(dǎo)引入這里作為參考)，腦毛狀內(nèi)皮細(xì)胞受體，鐵傳遞蛋白，鐵傳遞蛋白受體(例如，可溶的鐵傳遞蛋白受體)，胰島素，胰島素樣生長因子1(IGF1)受體，胰島素樣生長因子2(IGF2)受體，胰島素受體，血液凝結(jié)因子Xal-抗胰蛋白酶和HNFl-a。增加體內(nèi)血清半衰期的合適的多肽還包括a-l糖蛋白類(a-酸性糖蛋白；AAG)，a-l抗胰凝乳蛋白酶(ACT)、a-l微球蛋白(HC蛋白；AM)、抗凝血酶III(ATIII)、栽脂蛋白A-l(ApoA-I)、載脂蛋白B(ApoB)、血漿銅藍(lán)蛋白(Cp)、補體成分C3(C3)、補體成分C4(C4)、CI酯酶抑制劑(CIINH)、C-反應(yīng)性蛋白(CRP)、鐵蛋白(FER)、血液結(jié)合素(HPX)、脂蛋白(a)(Lp(a))、甘露糖結(jié)合蛋白(MBP)、肌球素(Myo)、前白蛋白(甲狀腺素運載蛋白；PAL)、維生素A結(jié)合蛋白(RBP)以及類風(fēng)濕因子(RF)。來自細(xì)胞外基質(zhì)的合適的蛋白質(zhì)包括，例如，膠原質(zhì)、層粘連蛋白、整聯(lián)蛋白和纖連蛋白。膠原質(zhì)是細(xì)胞外基質(zhì)的主要蛋白質(zhì)。目前已知大約15種膠原質(zhì)分子，其發(fā)現(xiàn)于機(jī)體的不同部分，例如，I型膠原質(zhì)(占機(jī)體膠原質(zhì)的90%)發(fā)現(xiàn)于骨、皮膚、腱、韌帶、角膜、內(nèi)臟，或II型膠原質(zhì)發(fā)現(xiàn)于軟骨，脊推盤，脊索和眼睛的玻璃狀液。來自血液的合適的蛋白質(zhì)包括，例如，血漿蛋白質(zhì)(例如，纖維蛋白、a-2巨球蛋白、血清白蛋白、纖維蛋白原(例如，纖維蛋白原A、纖維蛋白原B)，血清淀粉樣蛋白A、結(jié)合珠蛋白、抑制蛋白、遍在蛋白質(zhì)、子宮球蛋白和P-2-微球蛋白，酶和酶抑制劑(例如，血漿酶原，溶解酵素，半胱氨酸蛋白酶抑制劑C，a-l-抗胰蛋白酶和胰腺胰蛋白酶抑制劑)，免疫系統(tǒng)的蛋白質(zhì)，如免疫球蛋白(例如，IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、免疫球蛋白輕鏈(k/X))、轉(zhuǎn)運蛋白(例如，微生素A結(jié)合蛋白，a-l微球蛋白)，防御素(例如，P-防御素1，嗜中性粒細(xì)胞防御素1，嗜中性粒細(xì)胞防御素2和嗜中性粒細(xì)胞防御素3)，等等。在血液腦障礙物或神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)的合適的蛋白質(zhì)包括，例如，黑腎上腺皮質(zhì)激素受體，髓磷脂，抗壞血酸轉(zhuǎn)運蛋白，等等。增加體內(nèi)血清半衰期的合適的多肽還包括定位于腎的蛋白質(zhì)(例如，聚胱氨酸，IV型膠原質(zhì)，有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運蛋白Kl，埃曼氏抗原)，定位于肝臟的蛋白質(zhì)(例如，乙醇脫氫酶，G250)，定位于肺的蛋白質(zhì)(例如，分泌成分，其結(jié)合IgA)，定位于心臟的蛋白質(zhì)(例如，HSP27，其與擴(kuò)張心臟病相關(guān))，定位于皮膚的蛋白質(zhì)(例如，角蛋白)，骨特異性蛋白如成形素蛋白(BMP),其是證明具有成骨活性的轉(zhuǎn)化生長因子P超家族蛋白的亞型(例如，BMP-2，BMP-4，BMP-5，BMP國6、BMP-7、BMP-8)，腫瘤特異性蛋白(例如，滋養(yǎng)層抗原，herceptin受體，雌激素受體，組織蛋白酶(例如，組織蛋白酶B，其可發(fā)現(xiàn)于肝臟和脾)。合適的疾病特異性蛋白質(zhì)包括，例如，僅僅在激活的T細(xì)胞上表達(dá)的抗原，包括LAG-3(淋巴細(xì)胞活化基因)、骨保護(hù)素配體(OPGL;參見，Nature402，304—309(1999))、OX40(TNF受體家族的成員，表達(dá)于激活的T細(xì)胞上，而且特別地在人T細(xì)胞白血病病毒I型(HTLV-I)產(chǎn)生細(xì)胞中上調(diào)；參見Immunol.165(1):263-70(2000))。合適的疾病特異性蛋白質(zhì)還包括，例如，金屬蛋白酶(與關(guān)節(jié)炎/癌癥相關(guān))包括果蠅CG6512、人paraplegin、人FtsH、人AFG3L2、鼠的ftsH和血管生成生長因子，包括酸性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF-1)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF-2)、血管內(nèi)皮生長因子/血管通透因子(VEGF/VPF)轉(zhuǎn)化生長因子-a(TGFa)、肺瘤壞死因子-a(TNF-a)、血管生成素、白細(xì)胞介素-3(IL-3)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)，血小板衍生內(nèi)皮生長因子(PD-ECGF)、胎盤生長因子(P1GF)、midkine血小板衍生生長因子-BB(PDGF)以及fractalkine。增加體內(nèi)血清半衰期的合適的多肽還包括應(yīng)激蛋白如熱激蛋白(HSP)。HSP通常發(fā)現(xiàn)于細(xì)胞內(nèi)。當(dāng)于細(xì)胞外發(fā)現(xiàn)它們時，它是細(xì)胞已經(jīng)死亡而且溢出它的內(nèi)含物的指示。當(dāng)由于外傷，疾病或損傷時，這種未編程的細(xì)胞死亡(壞死)發(fā)生，細(xì)胞外的HSP引發(fā)來自免疫系統(tǒng)的應(yīng)答。結(jié)合細(xì)胞外的HSP可導(dǎo)致本發(fā)明的組合物定位于疾病位點。與Fc轉(zhuǎn)運相關(guān)的合適的蛋白質(zhì)包括，例如，Brambell受體(亦稱FcRB)。這種Fc受體具有兩個作用，二者都可能用于傳遞。作用是(1)把IgG從母親跨越胎盤轉(zhuǎn)運到幼兒(2)保護(hù)IgG以免降解從而延長它的血清半衰期。人們認(rèn)為該受體重復(fù)利用來自核內(nèi)體的IgG。(參見，Holliger等，NatBiotechnol15(7):632-6(1997))。用于本發(fā)明的合適的白蛋白，白蛋白片段或白蛋白變體描述于WO2005/077042A2，其以其全部內(nèi)容引入這里作為參考。特別地，下列白蛋白，白蛋白片段或白蛋白變體可用于本發(fā)明SEQTDNO:1(如WO2005/077042A2中所描述的，該序列明確地引入本說明書作為參考)；白蛋白片段或變體包括或由WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸1-387組成；白蛋白，或其片段或變體，包括選自下列的氨基酸序列(a)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸54到61;(b)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸76到89;(c)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸92到100;(d)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸170到176;(e)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸247到252;(f)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸266到277;(g)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸280到288;(h)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸362到368;(i)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸439到447;(j)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸462到475;(k)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸478到486;以及(l)WO2005/077042A2中SEQIDNO:1的氨基酸560到566。用于本發(fā)明的TNFR1結(jié)合配體的合適的白蛋白，片段和類似物的另外的例子描述于WO03/076567A2,其以其全部內(nèi)容引入這里作為參考。特別地，下列白蛋白，白蛋白片段或白蛋白變體可用于本發(fā)明如WO03/076567A2中描述的人血清白蛋白，例如，圖3中(該序列信息明確地引入本說明書作為參考)；由585個氨基酸的單個非糖基化的多肽鏈組成的人血清白蛋白(HA)，其式分子量為66,500(參見，Meloun，etal，F(xiàn)EBSLetters58:136(1975);Behrens，etal，F(xiàn)ed.Proc.34:59\(1975);Lawn,etal，NucleicAcidsResearchP:6102-6114(1981);Minghetti，etal"J.Biol.Chem.261:61Al(1986));Weitkamp，etal，Ann.Hum.Genet.37:219(1973)中所描述的白蛋白的多態(tài)變體或類似物或片段；EP322094中所述描述的白蛋白片段或變體，例如，HA(l-373"HA(1國388)，HA(1畫389)，HA(l-369)，和HA(1-419)以及1-369與1-419之間的片段；EP399666中所描述的白蛋白片段或變體，例如，HA(I-177)和HA(l-200)以及HA(I-X)之間的片段，其中X是從178到199的任何數(shù)。本發(fā)明的藥物組合物可包括含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的任何多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。優(yōu)選地，多肽結(jié)合部分包括至少31，至少大約40，至少大約50，至少大約60，至少大約70，至少大約80個氨基酸，至少大約90個氨基酸，至少大約IOO個氨基酸或至少大約110個氨基酸作為一個單獨的分子實體。優(yōu)選地，多肽結(jié)合部分結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，該多肽的KD為至少大約大約5mMKD(KD=Koff(kd)/Kon(ka))。在一些實施方案中，多肽結(jié)合部分結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，該多肽的KD為大約IO到大約100nM，或大約100nM到大約500nM，或大約500nM到大約5mM，如通過表面胞質(zhì)基因共振所測定的(例如，使用BIACORE儀器)。在特定的實施方案中，多肽結(jié)合部分結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，該多肽的KD為大約50nM，或大約70nM，或大約100納米，或大約150nM或大約200nM。優(yōu)選地，含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，不是原核生物的或細(xì)菌多肽或肽。優(yōu)選地，多肽結(jié)合部分是真核生物的，哺乳動物或人多肽或肽。在某些實施方案中，含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，是折疊蛋白功能域。在其他的實施方案中，多肽結(jié)合部分以分子量為至少大約4Kda，至少大約4.5Kda，至少大約5KDa，至少大約5.5KDa，至少大約6KDa，至少大約6.5KDa，至少大約7KDa，至少大約7.5KDa或至少大約8KDa，作為一個單獨的分子實體。含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的合適的多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，可以使用任何合適的方法進(jìn)行鑒定，如通過在合適的附著分析中篩選天然存在或非天然存在的多肽。如這里所描述的，優(yōu)選的多肽結(jié)合部分，其具有用于增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的抗原結(jié)合位點，是能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段。不過，能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的其他多肽的抗體的抗原結(jié)合片段，可用于本發(fā)明。如果需要，結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段的一個或多個互補決定區(qū)(CDR)，可以制成保留抗體或抗原結(jié)合片段的抗原結(jié)合特異性的非免疫球蛋白結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的藥物組合物可包括這種非免疫球蛋白結(jié)合部分。這種非免疫球蛋白結(jié)合部分可使用任何合適的方法制備，例如天然的細(xì)菌受體如SpA已經(jīng)用作支架用于嫁接CDR，以產(chǎn)生特異性結(jié)合抗原表位的多肽結(jié)合部分。美國專利申請?zhí)?,831,012中描述了這種方法的細(xì)節(jié)，其教導(dǎo)引入這里作為參考。其他合適的支架包括那些基于纖粘連蛋白和親和體。WO98/58965中詳細(xì)描述了合適的方法。其它合適的支架包括lipocallin和CTLA4，如vandenBeuken等，J.Mol.Biol.310:591-601(2001)中所述，以及支架如WO00/69907(MedicalResearchCouncil)中所描述的那些支架，其基于例如細(xì)菌GroEL或其他的伴倡多肽的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包括能特異性結(jié)合血清白蛋白的非免疫球蛋白結(jié)合部分，其中非免疫球蛋白結(jié)合部分包括這里所述的VH，Vk或Vhh的一個，兩個或三個cdr，和一個合適的支架。在某些實施方案中，非免疫球蛋白結(jié)合部分包括這里所述的vH，Vk或Vhh的CDR3，而不是CDR1或CDR2，和一個合適的支架。在其他的實施方案中，非免疫球蛋白結(jié)合部分包括這里所述的VH，VK或V冊的CDR1和CDR2，而不是CDR3，和一個合適的支架。在其他的實施方案中，非免疫球蛋白結(jié)合部分包括這里所述的VH，Vk或Vhh的CDRVk，CDR2和CDR3，和一個合適的支架。在其他的實施方案中，藥物組合物僅僅包括這里所述的VH，Vk或Vhh的CDR3，和藥物。本發(fā)明的藥物組合物可使用合適的方法制備，如這里描述的用于制備藥物融合體，藥物綴合物和非共價藥物綴合物的方法。另外，本發(fā)明的藥物組合物具有這里詳細(xì)描述的關(guān)于藥物融合體，藥物綴合物和非共價藥物綴合物的優(yōu)點和用途。本發(fā)明提供了藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，與單獨的藥物(非綴合的藥物，非融合的藥物)相比較，其具有提高的藥物動力學(xué)特性(例如，增加血清半衰期)及其他的優(yōu)點。藥物綴合物，非共價的藥物綴合物和藥物融合體包括，能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，和一種或多種想要的藥物。如這里所述，本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物，藥物融合體)，相較于單獨的藥物，具有顯著延長的體內(nèi)血清半衰期和/或增加的AUC。而且，藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)中藥物的活性通?；旧蠜]有改變。但是，與單獨的藥物相比，藥物組合物的活性的一些改變是可接受的，而且通常被藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的提高的藥物動力學(xué)特性所補償。例如，藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以低于單獨的藥物的親和性結(jié)合藥物靶，但是與單獨的藥物相比較，由于藥物組合物提高的藥物動力學(xué)特性(例如，延長的體內(nèi)血清半衰期，較大的AUC)，而具有大約相等的或較高的功效。此外，可以給藥較低量的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物和藥物融合體)，而達(dá)到想要的治療或診斷效果。藥物組合物的活性優(yōu)選與單獨的藥物有至多大約100，或至多大約50，或至多大約IO，或至多大約5，或至多大約4，或至多大約3，或至多大約2分之一不同。例如，藥物可具有1nM的KD，Ki或中和劑量50(ND50),而藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)可具有大約2nM，或大約3nM，或大約4nM，或大約5nM,或大約10nM的KD，Ki或ND50。優(yōu)選地，與藥物的活性相比較，藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的活性，基本上沒有降低。在某些實施方案中，相對于藥物的活性，藥物組合物的活性降低至多大約10%，至多大約9%，至多大約8%，至多大約7%，至多大約6%，至多大約5。/。，至多大約4%，至多大約3%，至多大約2%，至多大約1%，或基本上沒有變化。替換地陳述，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)保留至少大約90%，至少大約91°/。，至少大約92"/。，至少大約93%,至少大約94%，至少大約95%，至少大約96%,至少大約97%,至少大約98%，至少大約99%的藥物活性，或基本上與藥物相同的活性。優(yōu)選地，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)和藥物的活性基于"藥物基礎(chǔ)"進(jìn)行測定和/或比較。如這里描述和顯示的，本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)具有比單獨的藥物更高的活性(例如，體內(nèi)活性)。例如，如實施例6中所示，當(dāng)這些試劑按體重計以相同的劑量(10mg/Kg或1mg/Kg)給藥時，在小鼠模型中DOM7m-16/IL-lra治療關(guān)節(jié)炎比IL-lra更有效。DOM7m-16/IL-lra是更有效的，盡管它的分子量是IL-lra的分子量的大約兩倍。因此，接受DOM7m-16/IL-lra的小鼠只接受大約一半的接受IL-lra的小鼠的IL-lra(作為DOM7m-16/IL1-ra中的部分)。在某些實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)具有比藥物更高的活性(例如，體內(nèi)活性)，藥物組合物可具有至少大約100%，至少大約150%,至少大約200%,至少大約250%，至少大約300%，至少大約350%，至少大約400%，至少大約450%,或至少大約500%的藥物活性。優(yōu)選地，藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)和藥物的活性基于"藥物基礎(chǔ)"進(jìn)行測定和/或比較。藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)和藥物的活性使用合適的體外或或體內(nèi)系統(tǒng)進(jìn)行測定。在某些實施方案中，如體內(nèi)所測定的，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)具有比它包含的藥物更高的活性。在其他的實施方案中，如體外所測定的，藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)具有比它包含的藥物更高的活性。藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，其包括能特異性結(jié)合血清白蛋白的功能抗體(dAb)，提供了另外的優(yōu)點。功能抗體是很穩(wěn)定的，比抗體及抗體其他抗原結(jié)合片段小，通過在大腸桿菌或酵母(例如，巴斯德畢赤氏酵母)中表達(dá)可以高產(chǎn)量生產(chǎn)，而且如這里所述的，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，可以很容易地選自人來源的文庫或任何想要的物種。因此，包含結(jié)合血清白蛋白的dAb的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，可以比通常在哺乳動物細(xì)胞中生產(chǎn)的治療劑(例如，人，人化或嵌合的抗體)更容易地生產(chǎn)，而且可以使用非免疫原性的dAb(例如，人dAb可用于藥物融合體或藥物綴合物，用于治療或診斷人類的疾病)。當(dāng)藥物是包含結(jié)合血清白蛋白的多肽結(jié)合部分(例如，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段)的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的部分時，藥物的免疫原性可能被降低。因此，在包含結(jié)合血清白蛋白的多肽結(jié)合部分的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的上下文中，藥物可具有較低的免疫原性(比單獨的藥物)或基本上是非免疫原性的。因此，這種藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以隨時間重復(fù)地給藥給個體，而功效損失最小，由于個體的免疫系統(tǒng)分解了抗藥物抗體。另外，這里描述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可具有比單獨的藥物增加的安全外形和較少的副作用。例如，作為能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的血清白蛋白結(jié)合活性的結(jié)果，藥物融合體和綴合物(藥物綴合物，非共價藥物綴合物)在血管循環(huán)中具有增加的停留時間。另外，綴合物和藥物融合體在全身給藥(例如，血管內(nèi)給藥)之后基本上不能通過血腦屏障，并在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中積累。因此，與單獨的藥物相比，可給藥綴合物(藥物綴合物，非共價藥物綴合物)和藥物融合體，其包含具有神經(jīng)學(xué)毒性或不需要的影響精神的作用的藥物，而具有更高的安全和降低的副作用。類似地，綴合物(藥物綴合物，非共價藥物綴合物)和藥物融合體可具有比單獨的藥物對特定的器官(例如，腎或肝臟)降低的毒性。這里描述的綴合物和藥物融合體還可以用于螯合藥物或靶，該藥物或靶在血管循環(huán)中結(jié)合藥物(例如，毒素)，從而降低藥物或靶對組織的作用(例如，抑制毒素的作用)。用于體內(nèi)半衰期的藥物動力學(xué)分析和測定的合適的方法是本領(lǐng)域熟知的。這些方法描述于，例如，Kenneth,A等ChemicalStabilityofPharmaceuticals:AHandbookforPharmacists，與Peters等，Pharmacokinetcanalysis:APracticalApproach(1996)中。也參考文獻(xiàn)"Pharmacokinetics"，MGibaldi&DPerron,MarcelDekker出版，2ndRev.edition(1982)，其描述了藥物動力學(xué)參數(shù)如ta與tp半衰期(t1/2a，t1/2(3)，以及曲線下的面積(AUC)。半衰期(t1/2a，t1/2p)和AUC可根據(jù)綴合物或融合體的血清濃度對時間的曲線來測定?？墒褂肳inNonlin分析程序包(可獲自PharsightCorp.,MountainView,CA94040，USA),例如，用于制作曲線。第一階段(a階段)，藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)主要分散在患者中，并有一些排出。當(dāng)藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)已經(jīng)分散，而且血清濃度隨著藥物組合物從患者中的清除而降低時，第二階段(p階段)是最后階段。ta半衰期是第一階段的半衰期，tp半衰期是第二階段的半衰期。本發(fā)明提供了一種藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，或包含本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的組合物，其ta半衰期在15分鐘范圍內(nèi)或更長。在一個實施方案中，該范圍的下端是30分鐘，45分鐘，l小時，2小時，3小時，4小時，5小時，6小時，7小時，8小時，9小時，10小時，11小時或12小時。此外，或者可替換地，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)或本發(fā)明的組合物，其ta半衰期高達(dá)并包括12小時。在一個實施方案中，該范圍的上端是ll，10，9，8，7，6或5小時。一個合適范圍的例子是1到6小時，2到5小時或3到4小時。有利地，本發(fā)明提供了藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，其t(J半衰期在2.5小時內(nèi)或更長。在一個實施方案中，該范圍的下端是3小時，4小時，5小時，6小時，7小時，8小時，9小時，10小時，11小時，或12小時。在一些實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的tp半衰期高達(dá)并包括21天。在一個實施方案中，該范圍的上端是12小時，24小時，2天，3天，5天，10天，15天或20天。在特定的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的tp半衰期為12到60小時。在另外的實施方案中，它為12到48小時。仍然在另外的實施方案中，它為12到26小時。上述標(biāo)準(zhǔn)以外，或者可替換地，本發(fā)明提供了藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，其AUC值(曲線下面的面積)為0.01mg.min/mL或更多，或者1mg.min/mL或更多。在一個實施方案中，該范圍的下端是O.Ol，0.1，1，5,10，15，20，30，100，200或者300mg.min/mL。在特定的實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的AUC高達(dá)600mg.min/mL。在一個實施方案中，該范圍的上端是500，400，300，200，150，100，75或者50mg.min/mL。在其它的實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的AUC在選自下列的范圍內(nèi)15到150mg.min/mL，15到100mg.min/mL，1575mg.min/mL，15多J50mg.min/mL，0.0150mg.min/mL，0.1到50mg,min/mL，1到50mg.min/mL，5到50mg.min/mL，以及10到50mg.min/mL。本發(fā)明涉及藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物，藥物融合體)，其包括藥物和含有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。在藥物組合物的優(yōu)選實施方案中，含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，能特異性結(jié)合血清白蛋白。在一些實施方案中，藥物組合物包括與含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分共價鍵合的藥物，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。在這些實施方案中，藥物可與多肽結(jié)合功能域在任何合適的位置共價鍵合，如氨基端，羧基端或者通過合適的氨基酸側(cè)鏈(例如，賴氨酸的e氨基)。在其他的實施方案中，藥物組合物包括與含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分非共價鍵合的藥物，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。在這些實施方案中，藥物可直接(例如，通過靜電相互作用，疏水作用)或者間接地(例如，通過互補結(jié)合伴侶(例如，生物素和抗生物素蛋白)的非共價鍵合，其中一個伴倡與藥物共價鍵合，互補結(jié)合伴侶與抗原結(jié)合片段共價鍵合)與抗原結(jié)合片段非共價鍵合。當(dāng)使用互補結(jié)合伴侶時，一個結(jié)合伴侶可直接或通過合適的連接體部分與藥物共價鍵合，而互補結(jié)合伴侶可直接或者通過合適的連接體部分與多肽結(jié)合功能域共價鍵合。在其他的實施方案中，藥物組合物是融合蛋白，其包括含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分與多肽藥物，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。融合蛋白質(zhì)包括連續(xù)的多肽鏈，所述的鏈包括多肽結(jié)合部分作為第一部分，該多肽結(jié)合部分含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)，和多肽藥物作為第二部分，其作為多肽鏈的獨立部件(部分)存在。笫一和第二部分可通過肽鍵彼此直接連接，或者通過合適的氨基酸，或肽或多肽連接體連接。另外的部分(例如，第三，笫四)和/或連接體序列的存在視情況而定。相對于第二部分(也即，多肽藥物)，笫一部分可位于N-末端，C-末端或內(nèi)部。在某些實施方案中，融合蛋白包括一個或多個含有能特異性結(jié)合增強(qiáng)體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，和一個或多個多肽藥物部分。在這些實施方案中，融合蛋白可包括l到大約10(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10)個多肽藥物部分，它們可以是相同的或不同的，和1到大約20(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11,12，13，14，15，16，17，1819或20)個含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，它們可以是相同的或不同的。含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，與多肽藥物部分，可存在于任何預(yù)定位置。例如，從氨基端到羧基端，這些部分可以下列順序存在一個或多個多肽結(jié)合部分，一個或多個多肽藥物部分，一個或多個多肽結(jié)合部分。在另一個例子中，從氨基端到羧基端，這些部分可以下列順序存在一個或多個多肽結(jié)合部分，一個或多個多肽藥物部分，一個或多個多肽結(jié)合部分，一個或多個多肽藥物部分，一個或多個多肽結(jié)合部分。如這里說描述的，多肽結(jié)合部分與多肽藥物部分可通過肽鍵彼此直接連接，或通過合適的氨基酸，或肽或多肽連接體連接。在某些實施方案中，融合蛋白是具有下式的連續(xù)的多肽鏈(氨基端到羧基端)a-(P)n2畫b畫(X)nl畫c畫(Q)n3-d或a陽(Q)n3國b畫(X)nl-c-(P)n2國d其中X是多肽藥物；P與Q是每個獨立地多肽結(jié)合部分，其包含能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點；a，b，c與d每個獨立地缺乏，或者是1到大約100個氨基酸殘基；nl，n2與n3分別表示X，P或Q部分存在的數(shù)目；nl是1到大約10;n2是0到大約10;而且n3是0到大約10，附帶條件是n2與n3不都是0;而且附帶條件是當(dāng)nl和n2都是l，而且n3是0時，X不含有抗體鏈或抗體鏈的片段。在一些實施方案中，n2是1，2，3，4，5或6，而且n3是零。在其他的實施方案中，n3是l，2，3，4，5或6，而且n2是零。在其他的實施方案中，nl，n2和n3都是l。在某些實施方案中，X不含有抗體鏈或抗體鏈的片段。在優(yōu)選的實施方案中，P和Q每個獨立地是能特異性結(jié)合血清白蛋白的多肽結(jié)合部分。在尤其優(yōu)選是實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)包括含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，其中該多肽結(jié)合功能域是能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還涉及一種用于增加藥物的體內(nèi)血清半衰期的方法，包括使藥物與含有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分連接，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，借此產(chǎn)生相對于藥物，具有較長的體內(nèi)血清半衰期的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)。在一些實施方案中，該方法用于增加藥物的體內(nèi)血清半衰期，而基本上不降低藥物的活性，包括使藥物與含有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分連接，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，借此產(chǎn)生相對于所述藥物，具有較長的體內(nèi)血清半衰期，并具有至少大約90%的所述藥物的活性的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)。在其他的實施方案中，該方法用于增加藥物的體內(nèi)血清半衰期，并降低藥物的免疫原性，包括使藥物與含有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分連接，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，借此產(chǎn)生相對于所述藥物，具有較長的體內(nèi)血清半衰期，和免疫原性低于所述藥物的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。在其他的實施方案中，該方法用于降低藥物的免疫原性，而基本上不降低藥物的活性，包括使藥物與含有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分連接，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合收針體內(nèi)血清半衰期的多肽，借此產(chǎn)生免疫原性低于所述藥物，并具有至少大約90%的所述藥物的活性的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。在其他的實施方案中，該方法用于增加藥物的體內(nèi)血清半衰期，并降低藥物的免疫原性，而基本上不降低藥物的活性，包括使藥物與含有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分連接，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，借此產(chǎn)生相對于所述藥物，具有較長的體內(nèi)血清半衰期，免疫原性低于所述藥物，并具有至少大約90%的所述藥物的活性的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。如這里所述，藥物與具有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，可通過共價鍵(例如，肽鍵)或非共價鍵連接，而使用或不使用連接體。在一些實施方案中，藥物與含有能特異性結(jié)合增強(qiáng)體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，通過共價鍵連接。例如，產(chǎn)生的藥物組合物是藥物綴合物或藥物融合體。在其他的實施方案中，藥物與含有能特異性結(jié)合增強(qiáng)體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，通過非共價鍵連接，而且該藥物組合物是非共價藥物綴合物。使用該方法生產(chǎn)的藥物組合物可具有比藥物更高的活性(例如，體內(nèi)活性)。在一些實施方案中，該方法用于生產(chǎn)具有比單獨的藥物更高的活性(例如，體內(nèi)活性)的藥物組合物，包括使藥物與含有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分連接，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，借此產(chǎn)生相對于藥物，具有更高活性的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。在這些實施方案中，優(yōu)選地，如這里所述，藥物組合物的活性高于藥物的活性。在優(yōu)選的實施方案中，多肽結(jié)合部分特異性結(jié)合血清白蛋白。在尤其優(yōu)選的實施方案中，多肽結(jié)合部分是抗體的抗原結(jié)合片段，該抗體能特異性結(jié)合血清白蛋白。在某些實施方案中，該方法包括從一種或多種多肽選擇所述多肽結(jié)合部分(例如，能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段)，其中選擇的多肽結(jié)合部分以至少大約5mM的KD結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。本發(fā)明還涉及具有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分用于制備藥物的用途，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，該藥物包括藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，其中藥物與所述多肽結(jié)合部分連接，用于增加藥物的體內(nèi)血清半衰期。在一些實施方案中，用于制備藥物的用途，該藥物包括藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，其中該藥物與所述多肽結(jié)合部分連接，用于增加藥物的體內(nèi)血清半衰期，而不降低藥物的活性超過大約10%。在其他的實施方案中，用于制備藥物的用途，該藥物包括藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，其中該藥物與所述多肽結(jié)合部分連接，用于增加藥物的體內(nèi)血清半衰期，并降低藥物的免疫原性。在其他的實施方案中，用于制備藥物的用途，一藥物包括藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，其中一藥物與所述多肽結(jié)合部分連接，用于降低藥物的免疫原性，而不降低藥物的活性超過大約10%。在其他的實施方案中，用于制備藥物的用途，該藥物包括藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，其中該藥物與所述多肽結(jié)合部分連接，用于增加藥物的體內(nèi)血清半衰期，并降低藥物的免疫原性，而不降低藥物的活性超過大約10%。如這里所述，藥物組合物包括藥物與具有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，它們通過共價鍵(例如，肽鍵)或非共價鍵連接，而使用或不使用連接體。在一些實施方案中，藥物與具有能特異性結(jié)合增強(qiáng)體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，通過共價鍵連接。例如，藥物組合物是藥物綴合物或藥物融合體。在其他的實施方案中，藥物與具有能特異性結(jié)合增強(qiáng)體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，通過非共價鍵連接，而且該藥物組合物是非共價藥物綴合物。在某些實施方案中，用于制備藥物的用途，該藥物包括藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，其中該藥物與所述多肽結(jié)合部分連接，用于增加所述藥物的活性(例如，體內(nèi)活性)。在這些實施方案中，優(yōu)選地，如這里所述，藥物組合物的活性高于藥物的活性。在優(yōu)選的實施方案中，多肽結(jié)合部分特異性結(jié)合血清白蛋白。在尤其優(yōu)選的實施方案中，多肽結(jié)合部分是抗體的抗原結(jié)合片段，該抗體能特異性結(jié)合血清白蛋白。結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段本發(fā)明的藥物綴合物，非共價的藥物綴合物和藥物融合體包括，結(jié)合血清白蛋白的抗體的(也即，一個或多個)抗原結(jié)合片段?？乖Y(jié)合片段可特異性結(jié)合動物的血清白蛋白，將對該動物給藥藥物綴合物或藥物融合體。優(yōu)選地，抗原結(jié)合片段能特異性結(jié)合人血清白蛋白。然而，獸醫(yī)應(yīng)用是期待的，而且抗原結(jié)合片段能特異性結(jié)合來自預(yù)定動物的血清白蛋白，例如來自狗、貓、馬、母牛、小雞、綿羊、豬、山羊、鹿、貂等等的血清白蛋白。在一些實施方案中，抗原結(jié)合片段能特異性結(jié)合來自超過一個物種的血清白蛋白。例如，如這里所述的，已經(jīng)生產(chǎn)了能特異性結(jié)合鼠血清白蛋白與小鼠血清白蛋白的人dAb，以及能特異性結(jié)合鼠，小鼠與人血清白蛋白的dAb。(表1和圖7)這些dAb提供了允許使用相同的藥物綴合物或藥物融合體進(jìn)行臨床前的與臨床研究的優(yōu)點，并避免了使用合適的替代品藥物融合體或藥物綴合物進(jìn)行臨床前的研究的需要。適合用于本發(fā)明的抗原結(jié)合片段包括，例如，F(xiàn)ab片段，F(xiàn)ab，片段，F(xiàn)(ab，)2片段，F(xiàn)v片段(包括單鏈Fv(scFv)和二硫鍵連接的Fv)、單鏈可變區(qū)和dAbs(VH，VJ。這些抗原結(jié)合片段可使用任何合適的方法生產(chǎn)，如通過使用胃蛋白酶，木瓜蛋白酶或其他的具有需要的裂解特異性的蛋白酶對抗體進(jìn)行蛋白水解，或使用重組技術(shù)。例如，F(xiàn)v片段可通過用合適的蛋白酶消化抗體，或使用重組DNA技術(shù)制備。例如，可制備編碼輕鏈可變區(qū)與重鏈可變區(qū)的核酸，該輕鏈可變區(qū)與重鏈可變區(qū)通過合適的肽連接體，如2個到大約20個氨基乙酰殘基鏈連接?？墒褂萌魏魏线m的技術(shù)(例如，轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)化，感染)把核酸引入到合適的宿主(例如，大腸桿菌)中，而且該宿主在適于表達(dá)單鏈Fv片段的條件下保持?？墒褂每贵w基因制備抗體的各種抗原結(jié)合片段，其中已經(jīng)引入一個或多個終止密碼子到天然終止位點的上游。例如，可通過在編碼重鏈絞鏈區(qū)的序列的3'端引入翻譯終止密碼子，來設(shè)計編碼免疫球蛋白重鏈的F(ab，)2部分的表達(dá)構(gòu)建體。本發(fā)明的藥物綴合物，非共價藥物綴合物和藥物融合體，可包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的各個重鏈與輕鏈，或結(jié)合血清白蛋白的各個鏈的部分(例如，羊個Vh、Vk或VJ。結(jié)合想要的血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的抗體及其抗原結(jié)合片段，可選自天然或人造抗體或在合適的宿主中針對合適的免疫原產(chǎn)生的抗體的合適的集合。例如，可通過用血清白蛋白(例如，分離的或純化的人血清白蛋白)或血清白蛋白的肽(例如，包括至少大約8，9，10，11，12，15，20，25，30，33，35，37，或40個氨基酸殘基的肽)，免疫合適的宿主(例如，小鼠，人抗體轉(zhuǎn)基因小鼠，鼠，兔，小雞，山羊，非人靈長類動物(例如，猴))，來生產(chǎn)抗體。結(jié)合血清白蛋白的抗體和抗原結(jié)合片段，還可以選自重組抗體或抗原結(jié)合片段的文庫，如噬菌體展示文庫。這種文庫可包括含有天然或人工氨基酸序列的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段。例如，文庫可包括含有人工CDR(例如，隨機(jī)氨基酸序列)和人構(gòu)架區(qū)的Fab片段。(參見，例如，美國專利號6,300,064(Knappik，etat)。)在其他的例子中，文庫包括scFv片段或dAb(單鏈VH，單鏈V,或單鏈VJ，其序列有一個或多個CDR不同。(參見，例如，WO99/20749(Tomlinson和Winter)、WO03/002609A2(Winter等)、WO2004/003019A2(Winter等))結(jié)合血清白蛋白的合適的抗體及其抗原結(jié)合片段包括，例如，人抗體及其抗原結(jié)合片段，人化抗體及其抗原結(jié)合片段，嵌合抗體及其抗原結(jié)合片段，嚙齒動物(例如，小鼠，鼠)抗體及其抗原結(jié)合片段，和Camelid抗體及其抗原結(jié)合片段。在某些實施方案中，藥物綴合物，非共價藥物綴合物和藥物融合體包括結(jié)合血清白蛋白的CamelidVHH，CamelidV冊是免疫球蛋白單鏈可變區(qū)多肽，其來源于天然缺乏輕鏈的重鏈抗體。這種抗體存在于Camelid物種中，包括駱駝，美洲駝，羊駝，單峰駱駝和大羊駝。VHH分子比IgG分子小大約IO倍，而且如同單個多肽，是很穩(wěn)定的，并且能抵抗極端pH和溫度條件。結(jié)合血清白蛋白的合適的CamelidVHH包括WO2004/041862(AblytocN.V.)和這里(附圖15和SEQIDNOS:73-84)描述的那些CamelidVHH。在某些實施方案中，CamelidVHH結(jié)合人血清白蛋白，而且包括與SEQIDNO:68、SEQIDNO:69、SEQIDNO:70、SEQIDNO:71、SEQIDNO:72、SEQIDNO:73、SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQIDNO:76、SEQIDNO:77、SEQIDNO:78、SEQIDNO:79、SEQIDNO:80、SEQIDNO:81、SEQIDNO:82、EQIDNO:83或SEQIDNO:84具有至少大約80%，或至少大約85%，或至少大約90%，或至少大約95%,或至少大約96%，或至少大約97%,或至少大約98%，或至少大約99°/。的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。氨基酸序列同一性優(yōu)選使用合適的序列比對算法和缺省參數(shù)進(jìn)行確定，如BLASTP(Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.Sd.VSAS7(6):2264-2268(1990))。免疫抗原的制備，多克隆和單克隆抗體生產(chǎn)可以使用任何合適的技術(shù)進(jìn)行。已經(jīng)描述了各種方法。(參見，例如，Kohler等，Nature,256:495-497(1975)和Eur.J.Immunol.6:511-519(1976);Milstein等，Nature266:550-552(1977);Koprowski等，U.S.專利No.4，172，124;Harlow,E.和D.Lane,1988，Antibodies:ALaboratoryManual,(ColdSpringHarborLaboratory:ColdSpringHarbor,NY);CurrentProtocolsInMolecularBiology,Vol.2(Supplement27,Summer'94)，A訓(xùn)bel，F(xiàn).M.等編輯(JohnWiley&Sons:NewYork,NY)，Chapter11，(1991)。)。一般，想要單克隆抗體時，通過融合來自無限增殖細(xì)胞系(例如，骨髓瘤細(xì)胞系如SP2/0，P3X"Ag8.653或異源骨髓瘤)的合適細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞來生產(chǎn)雜交瘤。抗體產(chǎn)生細(xì)胞可以獲自人，人-抗體轉(zhuǎn)基因動物或用目的抗原免疫的其他合適動物的外周血或，優(yōu)選脾或淋巴結(jié)。生產(chǎn)人來源的抗體(例如，人抗體)的細(xì)胞，可以使用合適的方法生產(chǎn)，例如，融合人抗體產(chǎn)生細(xì)胞和異源骨髓瘤或trioma，或用EpsteinBarr病毒感染的激活人B細(xì)胞的無限增殖。(參見，例如，U.S.專利No.6,197,582(Trakht);Niedbala等，Hybridoma,17:299-304(1998);Zanella等，JImmunolMethods,156:205-215(1992);Gustafsson等，HumAntibodiesHybridomas，2:26-32(1991)。)。融合的或無限增殖的抗體產(chǎn)生細(xì)胞(雜交瘤)，可使用選擇培養(yǎng)條件分離，并通過有限稀釋進(jìn)行克隆。生產(chǎn)具有想要的特異性的抗體的細(xì)胞，可使用合適的分析進(jìn)行鑒定(例如，ELISA)。抗體還可以從人，人-抗體轉(zhuǎn)基因動物或用目的抗原免疫的其他合適的動物的分離的抗原特異性抗體產(chǎn)生細(xì)胞直接制備(例如，合成或克隆)(參見，例如，美國專利號5,627,052(Schrader))。將藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體給藥給人時，結(jié)合血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的抗體或其抗原結(jié)合片段可以是人，人化的或嵌合抗體或這種抗體的抗原結(jié)合片段。性的，并提供了眾所周知的優(yōu)點。例如，包含人，人化的或嵌合抗體的藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體，可重復(fù)地給藥給人而較少或不損失功效(相較于其他的完全免疫原性抗體)，由于結(jié)合藥物綴合物或藥物融合體的人抗體的分解。當(dāng)藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體計劃用于獸醫(yī)給藥時，可使用類似的抗體或抗原結(jié)合片段。例如，來自鼠或人抗體的CDR可以嫁接到來自想要的動物如馬或母牛的構(gòu)架區(qū)。人抗體和編碼人抗體的核酸，可以獲自例如人或人-抗體轉(zhuǎn)基因動物。人-抗體轉(zhuǎn)基因動物(例如，小鼠)是能產(chǎn)生人抗體的基因庫的動物，如XENOMOUSE(Abgenix，F(xiàn)remont,CA)，HUMAB畫MOUSE，KIRINTCMOUSE或KM-MOUSE(MEDAREX，Princeton,NJ)。通常，人-抗體轉(zhuǎn)基因動物的基因組已經(jīng)改變成包括轉(zhuǎn)基因，該轉(zhuǎn)基因包括來自可進(jìn)行功能性重排的人免疫球蛋白基因座的DNA。可破壞或刪除人-抗體轉(zhuǎn)基因動物中的內(nèi)源免疫球蛋白基因座，以消除動物產(chǎn)生內(nèi)源基因編碼的抗體的能力。用于生產(chǎn)人-抗體轉(zhuǎn)基因動物的合適的方法是本領(lǐng)域熟知的。(參見，例如，美國專利號5，939,598和6,075,181(Kucherlapati等)，美國專利號5，569，825、5,545,806、5,625,126、5,633,425、5,661,016和5,789,650(Lonberg等)，Jakobovits等，Proc.NatlAcad.ScLUSA,90:2551-2555(1993)，Jakobovits等，Nature,362:255-258(1993)，Jakobovits等WO98/50433，Jakobovits等WO98/24893，Lonberg等WO98/24884，Lonberg等WO97/13852，Lonberg等WO94/25585，Lonberg等EP0814259A2，Lonberg等GB2272440A，Lonberg等，Nature368:856-859(1994)，Lonberg等，IntRevImmunol13(1):65-93(1995)，Kucherlapati等WO96/34096，Kucherlapati等EP0463151Bl，Kucherlapati等EP0710719Al，Surani等美國專利號5,545,807，Bruggemann等WO90/04036，Bruggemann等EP0438474Bl，Taylor等，Int.Immunol.6(4)579-591(1994)，Taylor等，NucleicAcidsResearch20(23):6287-6295(1992)，Green等，NatureGenetics7:13-21(1994),Mendez等，NatureGenetics15:146-156(1997)，Tuaillon等，ProcNatlAcadSciUSA90(8):3720-3724(1993)以及Fishwild等，NatBiotechnol14(7):845-851(1996)，前述每個的教導(dǎo)以其全部內(nèi)容引入這里作為參考。。人-抗體轉(zhuǎn)基因動物可以用合適的抗原(例如，人血清白蛋白)進(jìn)行免疫，可使用常規(guī)方法分離和融合抗體產(chǎn)生細(xì)胞以形成雜交瘤。生產(chǎn)具有想要的特性(例如，特異性，親和性)的人抗體的雜交瘤，可使用任何合適的分析(例如，ELISA)進(jìn)行鑒定，而且如果需要，使用合適的培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行選擇和亞克隆?？梢允褂萌魏魏线m的方法制備人化的抗體及其他CDR嫁接的抗體。CDR嫁接的抗體的CDR，可以源自于結(jié)合血清白蛋白的合適的抗體(稱為供體抗體)。合適的CDR的其它來源包括天然的和人造血清白蛋白特異性抗體，其獲自人或非人類的來源，如嚙齒動物(例如，小鼠，鼠，兔)，小雞，豬，山羊，非人靈長類動物(例如，猴)或文庫。人化抗體的構(gòu)架區(qū)優(yōu)選是人來源的，而且可源自于與供體抗體的抗原結(jié)合區(qū)的類似或等價區(qū)(例如，重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū))具有序列相似性的任何人抗體可變區(qū)。人來源的構(gòu)架區(qū)的其它來源包括人可變區(qū)共有序列。(參見，例如，Kettleborough，CA.等，ProteinEngineerings773-783(1991);Carter等，WO94/04679;Kabat,E.A.，等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices，U.S.GovernmentPrintingOffice(1991))。其它類型的CDR嫁接的抗體，可包括合適來源的構(gòu)架區(qū)，如由來自馬，母牛，狗，貓等等的種系抗體基因部分編碼的構(gòu)架區(qū)。人來源的構(gòu)架區(qū)可包括氨基酸取代或置換，如"回復(fù)突變"，其用來自供體抗體相應(yīng)位置的殘基置換人或動物來源的構(gòu)架區(qū)中的氨基酸殘基?？梢赃M(jìn)行構(gòu)架區(qū)中的一個或多個突變，包括一個或多個氨基酸的缺失，插入和取代。變體可通過各種合適的方法產(chǎn)生，包括非人類供體或受體人鏈的誘變。(參見，例如，美國專利號5,693,762(Queen等)和5,859,205(Adair等)，其以其全部教導(dǎo)引入這里作為參考。)抗體，抗體鏈(例如，重鏈，輕鏈)或其片段或部分的恒定區(qū)，如果存在，可源自于任何合適的來源。例如，人，人化和某些嵌合抗體，抗體鏈(例如，重鏈，輕鏈)或其片段或部分的恒定區(qū)，如果存在，可以是人來源的，而且可源自于任何合適的人抗體或抗體鏈。例38如，人來源的恒定區(qū)或其部分可源自于人k或k輕鏈，和/或人y(例如，yl、y2、y3、y4)，n,a(例如，al，a2)，S或s重鏈，包括等位變體。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段(例如，人來源的抗體，人抗體)，可包括氨基酸取代或置換，其改變或修整了作用(例如，效應(yīng)子功能)。例如，人來源的恒定區(qū)(例如，yl恒定區(qū)，恒定區(qū))可以設(shè)計成降低補體激活和/或Fc受體結(jié)合。(參見，例如，美國專利號5，648，260(Winter等)，5，624，82KWinter等)和5，834，597(Tso等)，其以其全部教導(dǎo)引入這里作為參考)。優(yōu)選地，包括這種氨基酸取代或置換的人來源的恒定區(qū)的氨基酸序列，與人來源的未改變的恒定區(qū)的氨基酸序列全長具有至少大約95%同一性，更優(yōu)選與人來源的未改變的恒定區(qū)的氨基酸序列全長具有至少大約99%同一性。人化抗體，CDR嫁接抗體，人化或CDR嫁接抗體的抗原結(jié)合片段，可使用任何合適的方法制備。幾個這種方法是本領(lǐng)域熟知的。(參見，例如美國專利號5，225，539(Winter),美國專利號5，530，101(Queen等)。)。人化或CDR嫁接抗體(例如，CDR，骨架，恒定區(qū))的部分，可獲自或直接來源于合適的抗體(例如，通過一部分的從頭合成)，或者可生產(chǎn)和表達(dá)編碼具有想要特性(例如，結(jié)合血清白蛋白)的抗體或其鏈的核酸。為了制備鏈的部分，可以在想要的位置引入一個或多個終止密碼子。例如，可使用PCR誘變方法以改變存在的DNA序列，來構(gòu)建編碼人化或CDR嫁接可變區(qū)的核酸(例如，DNA)序列。(參見，例如，Kamman，M.，等，Nucl.AcidsRes.17:5404(1989)。)。編碼新CDR的PCR引物可與預(yù)先人化的可變區(qū)的DNA模板雜交，該預(yù)先人化的可變區(qū)基于相同的或很相似的人可變區(qū)(Sato，K.，等，CancerResearch53:851-856(1993))。如果相似的DNA序列不能有效用作模板，可以從合成寡核苷酸來構(gòu)建包括編碼可變區(qū)序列的序列的核酸(參見，例如，Kolbinger，F(xiàn)"ProteinEngineering8:971-980(1993))。還可以把編碼信號肽的序列整合到該核酸中(例如，合成，插入到載體中)?？梢允褂脕碜允荏w抗體的天然信號肽序列，來自另一個抗體的信號肽序列或其他的合適序列(參見，例如，kettleborough，C.A.，ProteinEngineeringA:112-783(1991))。使用這些方法或其他的合適方法，可以很容易地生產(chǎn)變體。在一個實施方案中，可以對克隆的可變區(qū)進(jìn)行突變，并選擇編碼具有想要的特異性的變體的序列(例如，來自噬菌體文庫；參見，例如，美國專利號5,514,548(Krebber等)和WO93/06213(Hoogenboom等))。結(jié)合血清白蛋白的抗體或抗原結(jié)合片段，可以是嵌合抗體或嵌合抗體的抗原結(jié)合片段。嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段包括來自一個物種(例如，小鼠)的可變區(qū)，和來自另一個物種(例如，人)的恒定區(qū)的至少一部分。嵌合抗體和嵌合抗體的抗原結(jié)合片段可以使用任何合適的方法制備。幾種合適的方法是本領(lǐng)域熟知的。(參見，例如，美國專利號4，816，567(Cabilly等)，美國專利號5,116，946(Capon等)。)。一種用于獲得結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的優(yōu)選方法，包括從全部基因庫抗原結(jié)合片段選擇能特異性結(jié)合想要的血清白蛋白的抗原結(jié)合片段(例如，scFvs,dAb)。例如，如這里所描述的，結(jié)合血清白蛋白的dAb可選自合適的噬菌體展示文庫。已經(jīng)描述了許多合適的噬菌體顯示文庫和選擇方法(例如，單價展示和多價展示系統(tǒng))。(參見，例如，Griffiths等，美國專利號6，555，313Bl(引入這里作為參考)；Johnson等，美國專利號5j33，743(引入這里作為參考)；McCafferty等，美國專利號5,969,108(引入這里作為參考)；Mulligan-Kehoe，美國專利號5，702，892(引入這里作為參考)；Winter,G.等；Annu.Rev.Immunol.72:433-455(1994);Soumillion，P.等，ApplBiochem.Biotechnol47(2-3):175-189(1994);Castagnoli，L.等，Comb.Chem.HighThroughputScreen,4(2):121-133(2001);WO99/20749(Tomlinson和Winter);WO03/002609A2(Winter等)；WO2004/003019A2(Winter等)。)。噬菌體文庫中展示的多肽可以展示在任何合適的噬菌體上，如絲狀噬菌體(例如，fd、M13、Fl)，裂解性噬菌體(例如，T4、T7、30，或RNA噬菌體(例如，MS2)，例如，并選擇其與血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的結(jié)合。通常，顯示基因庫多肽的噬菌體文庫與合適的噬菌體外殼蛋白用作融合蛋白。這種文庫可以使用任何合適的方法生產(chǎn)，如引入編碼顯示抗體或其抗原結(jié)合片段的噬菌體載體的或噬菌粒載體文庫到合適的宿主細(xì)菌中，并培養(yǎng)得到的細(xì)菌，來生產(chǎn)噬菌體(例如，如果需要，使用合適的輔助噬菌體或補體質(zhì)粒)。噬菌體的文庫可以使用任何合適的方法從這種培養(yǎng)物中重新獲得，如沉淀和離心。文庫可包括含有任何想要量的氨基酸序列多樣性的基因庫抗體或其抗原結(jié)合片段。例如，基因庫可包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其氨基酸序列相應(yīng)于來自想要的有機(jī)體的天然存在的抗體，和/或可包括隨機(jī)或隨機(jī)化的氨基酸序列(例如，CDR序列)的一個或多個區(qū)域。這種基因庫或文庫中的抗體或其抗原結(jié)合片段，可包括隨機(jī)或隨機(jī)化的氨基酸序列的限定區(qū)域，和常見氨基酸序列的限定區(qū)域。在某些實施方案中，基因庫中全部或基本上全部多肽是想要類型的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，人Vh或人VJ。例如，基因庫中每個多肽可包括VH，Vl或Fv(例如，單鏈Fv)?？墒褂萌魏魏线m的方法，把氨基酸序列差異引入到抗體或其抗原結(jié)合片段的任何想要的區(qū)域。例如，使用任何合適的誘變方法(例如，低保真PCR，寡核苷酸介導(dǎo)的或位點定向誘變，使用NNK密碼子的多樣化)或任何其他的合適方法，制備編碼多樣化的抗體或其抗原結(jié)合片段的核酸的文庫，可把氨基酸序列差異引入到目標(biāo)區(qū)域，如抗體可變區(qū)的互補決定區(qū)。如果需要，待多樣化的抗體或其抗原結(jié)合片段的區(qū)域，可以隨機(jī)化。合適的噬菌體展示文庫可用于選擇結(jié)合血清白蛋白并具有其他的有益特性的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段。例如，可選擇當(dāng)展開時能抵抗聚集的抗體或抗原結(jié)合片段。聚集受多肽濃度的影響，而且認(rèn)為在部分折疊或展開中間物的很多情況下出現(xiàn)。促成部分折疊中間物的因素和條件，如高溫和高多肽濃度，促進(jìn)不可逆的聚集。(Fink，A.L.，F(xiàn)olding&Design3:R1-R23(1998).)。例如，以濃縮形式儲存純化的多肽，如凍干制品，經(jīng)常導(dǎo)致至少部分多肽的不可逆聚集。并且，通過在生物系統(tǒng)如大腸桿菌中表達(dá)來生產(chǎn)多肽，常常導(dǎo)致含有聚集多肽的包涵體的形成。從包涵體回收活性多肽可能是很困難的，而且需要增加另外的步驟如再折疊步驟到生物生產(chǎn)系統(tǒng)中?？梢詮暮线m的噬菌體展示文庫選擇，當(dāng)加熱時，抵抗聚集和可逆展開的抗體和抗原結(jié)合片段。通常，包括展示的抗體或其抗原結(jié)合片段的基因庫的噬菌體展示文庫被加熱到某個溫度(Ts)，該溫度時至少部分展示的抗體或其抗原結(jié)合片段是展開的，然后冷卻到某個溫度(Tc)，其中Ts>Tc，從而至少部分抗體或其抗原結(jié)合片段已經(jīng)再折疊，而且部分多肽已經(jīng)聚集。然后，在溫度(Tr)時回收可逆展開并結(jié)合血清白蛋白的抗體或其抗原結(jié)合片段?；厥盏目赡嬲归_的抗體或其抗原結(jié)合片段具有解鏈溫度(Tm)，而且優(yōu)選地，基因庫被加熱到Ts，冷卻到Tc,在Tr時分離可逆展開的抗體或其抗原結(jié)合片段，以便Ts>Tm>Tc，而且Ts>Tm>Tr。通常，在選擇之前，噬菌體展示文庫被加熱到大約801C，并冷卻到大約室溫或大約40TC。能可逆展開并抵抗聚集的抗體或其抗原結(jié)合片段，還可以通過用能可逆展開的殘基置換某些氨基酸殘基進(jìn)行設(shè)計或基因工程操作。(參見，WO2004/101790(Jespers等)，和美國臨時專利申請?zhí)?0/470,340(2003年5月14日提交)和60/554,021(2004年3月17日提交)詳細(xì)論述了用于選擇和設(shè)計或基因操作能可逆展開的抗體或其抗原結(jié)合片段的方法。WO2004/101790和前述的兩個美國臨時專利申請的教導(dǎo)引入這里作為參考)?？赡嬲归_和抵抗聚集的抗體或其抗原結(jié)合片段提供了幾個優(yōu)點。例如，由于它們對聚集的抗性，通過使用合適的生物生產(chǎn)系統(tǒng)如大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)，能可逆展開的抗體或其抗原結(jié)合片段，可以很容易地高產(chǎn)量生產(chǎn)為可溶蛋白。此外，能可逆展開的抗體或其抗原結(jié)合片段，可以高于常規(guī)多肽的濃度配制和/或儲存，而較少聚集和損失活性。DOM7h-26(SEQIDNO:20)是能可逆展幵的人Vh。優(yōu)選地，結(jié)合血清白蛋白的抗體或其抗原結(jié)合片段包括可變區(qū)(VH、VK、VX)，其中一個或多個構(gòu)架區(qū)(FR)包含(a)人構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列，(b)人構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列的至少8個連續(xù)的氨基酸，或(c)由人種系抗體基因部分編碼的氨基酸序列，其中所述的構(gòu)架區(qū)如Kabat所定義。在某些實施方案中，一個或多個構(gòu)架區(qū)的氨同，或者相對于由人種系抗體基因部分編碼的所述對應(yīng)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列，一個或多個所述構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列共同地包含高達(dá)5個氨基酸的差異。在其他的實施方案中，F(xiàn)R1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列與由人種系抗體基因部分編碼的對應(yīng)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列相同，或者相對于由所述的人種系抗體基因部分編碼的對應(yīng)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列，F(xiàn)R1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列共同地包括高達(dá)10個氨基酸的差異。在其他的實施方案中，所述的FR1，F(xiàn)R2和FR3的氨基酸序列，與由所述的人種系抗體基因部分編碼的對應(yīng)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列相同。在特定的實施方案中，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，包括基于人種系序列的免疫球蛋白可變區(qū)(例如，VH，VJ，而且如果需要，可具有一個或多個多樣化區(qū)域，如互補決定區(qū)。用于Vh的合適的人種系序列包括，例如，由Vh基因片段DP4、DP7、DP8、DP9、DPIO、DP31、DP33、DP45、DP46、DP47、DP49、DP50、DP51、DP53、DP54、DP65、DP66、DP67、DP68和DP69,以及JH片段JH1、JH2、JH3、JH4、JH4b、JH5和JH6編碼的序列。用于VL的合適的人種系序列包括，例如，由Vk基因片段DPK1、DPK2、DPK3、DFK4、DPK5、DPK6、DPK7、DPK8、DPK9、DPKIO、DPK12、DPK13、DPK15、DPK16、DPKI8、DPK19、DPJC20、DPK21、DPK22、DPK23、DPK24、DPK25、DPK26和DPK28，以及由Jk片段Jk1、Jk2、Jk3、Jk4和JK5編碼的序列。在某些實施方案中，藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體不包括結(jié)合血清白蛋白的小鼠，鼠和/或兔抗體，或者這種抗體的抗原結(jié)合片段?？乖Y(jié)合片段可以任何想要的親和性，結(jié)合速率(onrate)和解離速率(offrate),結(jié)合血清白蛋白?？梢赃x擇親和性(KD)，結(jié)合速率(K^或ka)和解離速率(K^或kd),以獲得特定藥物想要的血清半衰期。例如，獲得藥物最大的血清半衰期是需要的，該藥物中和慢性炎癥性紊亂的炎癥介質(zhì)(例如，結(jié)合并中和炎性細(xì)胞因子的dAb)，而較短的半衰期可能是具有一些毒性的藥物所需要的(例如，化療劑)。一般，對血清白蛋白的快速結(jié)合速率和快速或中速解離速率是優(yōu)選的。包括具有這些特性的抗原結(jié)合片段的藥物綴合物和藥物融合體，在給藥后將迅速地結(jié)合血清白蛋白，并迅速地解離和重新結(jié)合血清白蛋白。這些特性將降低藥物的快速清除(例如，通過腎)，但是仍然提供高效的傳遞并到達(dá)藥物靶。結(jié)合血清白蛋白的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)，一般以大約lnM到大約500jiM的KD結(jié)合。在一些實施方案中，抗原結(jié)合片段以大約10到大約100nM，或大約100nM到大約500nM，或大約500nM到大約5mM的KD(KD=K。ff(kd)/K。n(ka))結(jié)合血清白蛋白，如通過表面胞質(zhì)基因共振所測定的(例如，使用BIACORE儀器)。在特定的實施方案中，藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體包括以大約50nM，或大約70nM，或大約100nM，或大約150nM或大約200nM的KD結(jié)合血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的抗體的抗原結(jié)合片段。這里所述的藥物綴合物，非共價藥物綴合物和藥物融合體的提高的藥物動力學(xué)特性(例如，延長的tl/2p，增加的AUC)，可能與結(jié)合血清白蛋白的抗原結(jié)合片段的親和性有關(guān)。因此，具有提高的藥物動力學(xué)特性的藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體，一般可使用以高親和性(例如，大約500nM或較少，大約250nM或較少，大約100nM或較少，大約50nM或較少，大約10nM或較少，或大約lnM或較少，或大約100pM或較少的KD)結(jié)合血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的抗原結(jié)合片段制備。優(yōu)選地，與結(jié)合血清白蛋白的抗原結(jié)合片段共軛或融合的藥物，以比抗原結(jié)合片段對血清白蛋白更強(qiáng)的親和性(KD)，和/或比抗原結(jié)合片段對血清白蛋白更快的Koff(kd)與它的靶(藥物靶)結(jié)合，如通過表面胞質(zhì)基因共振所測定的(例如，使用BIACORE儀器)。例如，藥物可能以比結(jié)合SA的抗原結(jié)合片段對SA高大約1到大約100000,或大約100到大約100000，或大約1000到大約100000,或大約10000到大約100000的親和性與它的靶結(jié)合。例如，結(jié)合SA的抗體的抗原結(jié)合片段，可以大約lOjiM的親和性結(jié)合，而藥物以大約100pM的親和性結(jié)合它的耙。在特定的實施方案中，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段是結(jié)合人血清白蛋白的dAb。例如，具有選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、EQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列的VKdAb，或具有選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列的VHdAb。在其他的實施方案中，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段是結(jié)合人血清白蛋白，并包括任何上述氨基酸序列的CDR的dAb。在其它的實施方案中，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段是dAb，其結(jié)合人血清白蛋白，并包括與SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22或SEQIDNO:23具有至少大約80%，或至少大約85%，或至少大約90%，或至少大約95%，或至少大約96%,或至少大約97%,或至少大約98°/。，或至少大約99%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。氨基酸序列同一性優(yōu)選使用合適的序列比對算法和缺省參數(shù)進(jìn)行確定，如BLASTP(Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.ScLUSAS7(6):2264-2268(1990))。藥物本發(fā)明的某些藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物)可包括任何藥物(例如，小的有機(jī)分子，核酸，多肽)，其可給藥給個體以產(chǎn)生有益的治療或診斷作用，例如，通過結(jié)合個體中的生物學(xué)靶分子和/或改變個體中生物學(xué)靶分子的作用。本發(fā)明的其他的藥物組合物(例如，藥物融合體)可包括多肽或肽藥物。在藥物融合體的優(yōu)選實施方案中，藥物不包括抗體鏈或抗體鏈的片段(例如，vH、VK、VJ。TNFR1是包含結(jié)合配體的胞外區(qū)，和缺乏內(nèi)在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性但是與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)功能域的跨膜受體。TNFR1與結(jié)合的TNF的復(fù)合物包含3條TNFR1鏈和3條TNF鏈。(Banner等，Cell,73(3)431-445(1993).)。TNF配體以三聚體存在，其通過3條TNFR1鏈結(jié)合。(Id.)3條TNFR1鏈在受體-配體復(fù)合物中一起緊緊地成簇，而且這種成簇對TNFR1介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是必要的。實際上，結(jié)合TNFR1的多價試劑，如抗-TNFRl抗體，在缺乏TNF時可誘導(dǎo)TNFR1成簇和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，而且通常用作TNFR1拮抗劑。(參見，例如，Belka等，EMBO，J4(6):1156-1165(1995);Mandik-Nayak等，J.Immunol,767:1920-1928(2001)。)。因此，結(jié)合TNFR1的多價試劑，一般不是TNFR1的有效拮抗劑，即使它們阻斷TNFa對TNFR1的結(jié)合。TNFR1及其他TNF受體超家族成員的胞外區(qū)包含一個稱為前配體結(jié)合裝配功能域或PLAD功能域的區(qū)域(SEQIDNO:85(人TNFR1)的1-53位氨基酸；SEQIDNO:86(小鼠TNFR1))的1-53位氨基酸(美國政府，WO01/58953;美國專利申請公開號2003/0108992Al，Deng等，NatureMedicine,doi:10.1038/腿1304(2005))。人(智人)TNFR1的胞外區(qū)具有下列氨基酸序列l(wèi)vphlgdreksdsvcpqgoihpq,K!ctkchkgtylyndckjgq:dtdcregbsgsftasenhlkhascskcrkemgqvelssctvdiu>rvcqcrknqybhywsbnlfqcfncslclnatvhlscqekqnrvctchaofflrenecvscsnckkslectklclpqienvkotedsgtt(seqidno;85).鼠的(小家鼠)TNFR1的胞外區(qū)具有下列氨基酸序列LVPSLGDREKRDSLCPQOKyVHSKNNSICCTKC!HKGTVLVSDCPSP。RDTVCRECBKGTFTASQNYLRQCLSCKTCRKEMSQ糊PCqADKDTVCaCKENQ]PQRYLSETHFqcvdcspcfngtvtipcketqntvcnchagkflresecvpcshckknebcmsxclpHlanvtnpqd8gta(SEQIDNO:86)。來自特定受體的PLAD功能域在體內(nèi)彼此結(jié)合，而且在存在天然的配體時可預(yù)防受體激活。例如，TNFR1的PLAD功能域在體內(nèi)將結(jié)合TNFR1的另一個PLAD功能域(例如，在細(xì)胞表面表達(dá)的TNFR1)，并抑制受體成簇，以及緊接著結(jié)合天然配體隨后的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。TNF受體超家族是本領(lǐng)域公認(rèn)的蛋白質(zhì)組，其包括TNFRl(p55、CD120a、p60、TNF受體超家族成員1A、TNFRSF1A)、TNFR2(p75、p80、CD120b、TNF受體超家族成員1B、TNFRSFIB)、TNFRSHB〉,CD(TNFRSF3,L諷TOFR2-RP,TNFR哉TNFCRTNF-R-恥OX40(TNTFRSF4,ACT35,TXGP1L),.CD40(TNPRSF5,p50,Bp50),F朋(CD95,TN7RSF6,APCH,APTI),DcR3CTNPRSFi5B),CD27(TOPRSF7，Tp55,S152),CD30CTNFRSF8,KM,DISI"B),CD137(TNPRS界,4-lBB，EA),TRAILR-1(TNFRSF10A,DR4,Ap。2),TRAIL-R2(TNFRSF10B,DR5,KILLER,TRICKZ/^TRICKB〉，TRAILR3(TNFK5F10C'DcRl,LIT,TRID〉,TRAILR4(TNTRSPIOD,DcR2,TRUNDD),RANK(TNFRSFl1A),OPG(TNFRSF11B,OCIF,TR1),DR3CTNFRSia2,TRAMP,WSL-l，LARD,WSLLRDDR3,TR3，APO-3),DR3L(TNFRSF12L)'TAC1(TNFRSF13B》,BAFFRCTNFRSF13C),HVEM(TNFRSF14,ATAR;TR2,LIGHTSHVEA〉,NG孤(TKPRSP16)，BCMA(TNFRSF17，BCM)，AITR(TNFRSFIS'。,,TNJRSF1$,FIJ14993(TNFRSF19L,BBLT),DR6(TNFRSF21),SOBa(TNJRSF22,TdJQtM,281002汰06Rik),mSOB(THFRS1F23,Tnfthl),。本領(lǐng)域已知的幾個PLAD功能域，以及其他PLAD功能域和PLAD功能域的功能性變體，可以使用任何合適的方法很容易地分離和制備，如WO01/58953;美國專利申請公開號2003/0108992Al;Deng等，NatureMedicine,doi:10，1038/腿1304(2005)中描述的方法。許多用于制備多肽，蛋白片段，和肽變體的合適的方法，以及合適的結(jié)合分析，如這里描述的TNFR1受體結(jié)合分析時本領(lǐng)域熟知和常規(guī)的。示例性的PLAD功能域如表8所示表8<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>在一些實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括PLAD功能域，如TNFR1、TNFR2、FAS、LT卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、0X40、DR4或其它TNF受體超家族成員的PLAD，或PLAD功能域的功能性變體。PLAD功能域的功能性變體可以是，例如，TNFR1、TNFR2、FAS、LT(3R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40或DR4的PLAD功能域，其中一個或多個氨基酸已經(jīng)被刪除，插入或替換，但是保持與TNFR1、TNFR2、FAS、T卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40或DR4的相應(yīng)PLAD結(jié)合能力。功能性變體PLAD功能域的氨基酸序列包括至少大約10個連續(xù)氨基酸，至少大約15個連續(xù)氨基酸，至少大約20個連續(xù)氨基酸，至少大約25個連續(xù)氨基酸，至少大約30個連續(xù)氨基酸，至少大約35個連續(xù)氨基酸，或至少大約40個連續(xù)氨基酸的區(qū)域，該氨基酸與相應(yīng)PLAD(例如，TNFR1、TNFR2、FAS、LTpR、CD40、CD30、CD27、HVEM、0X40、DR4的PLAD)的氨基酸序列中的氨基酸相同。而且，或者可選擇地，功能性變體PLAD功能域的氨基酸序列與對應(yīng)PLAD(例如，TNFR1、TNFR2、FAS、LTPR、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40或DR4的PLAD)的氨基酸序列具有至少大約80%，至少大約85%，至少大約90%,至少大約91%，至少大約92%，至少大約93%,至少大約94%,至少大約95%,至少大約96%，至少大約97%,至少大約98%,至少大約99%的同一性。在特定的實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括PLAD功能域(例如，TNFR1、TNFR2、FAS、LT卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40或DR4的PLAD)或功能性PLAD變體，以及結(jié)合血清白蛋白或新的Fc受體的dAb。Domantis有限公司于2005年5月31日提交的國際申請?zhí)朠CT/GB2005/002163中，描述了可用于本發(fā)明的另外的合適的藥物，包括多肽藥物。合適藥物的描述公開于該申請的第45頁到50頁和表8中。這些藥物可用于本發(fā)明，例如，制備藥物組合物，融合體或綴合物，其包括PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體，具有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，和另一個多肽藥物。國際申請?zhí)朠CT/GB2005/002163的教導(dǎo)引入這里作為參考，尤其是那些涉及用于本發(fā)明的合適藥物的教導(dǎo)。藥物融合體本發(fā)明的藥物融合體是包括連續(xù)多肽鏈的融合蛋白，所述的鏈包含結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段作為第一部分，與多肽藥物的笫二部分連接。笫一和第二部分可通過肽鍵彼此直接連接，或者通過合適的氨基酸，或肽或多肽連接體連接。另外的部分(例如，笫三，第四)和/或連接體序列的存在視情況而定。相對于第二部分(也即，多肽藥物)，第一部分可位于N-末端，C-末端或內(nèi)部。在某些實施方案中，每個部分可存在超過1個拷貝。例如藥物融合體可包括兩個或多個第一部分，每個都含有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，結(jié)合人血清白蛋白的VH，和結(jié)合人血清白蛋白的VL,或結(jié)合人血清白蛋白的兩個或多個Vh或VJ。在一些實施方案中，藥物融合體是具有下式的連續(xù)多肽鏈a-(X)nl-b-(Y)n2-C-(Z)3-d或a-(Z)n3-b-(Y)n2-C-(X)nl-d;其中X是能特異性結(jié)合第一靶的多肽藥物；Y是特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的單鏈抗原結(jié)合片段；Z是能特異性結(jié)合第二靶的多肽藥物；a，b，c和d每個獨立地缺乏，或者是1到大約100個氨基酸殘基；nl是l到大約10;n2是l到大約10;和n3是0到大約10，附帶條件是當(dāng)nl和n2都是l，而且n3是0時，X不包括抗體鏈或抗體鏈的片段。在一個實施方案中，X和Z都不含有抗體鏈或抗體鏈的片段。在一個實施方案中，nl是l，n3是l，n2是2，3，4，5，6，7，8或9。優(yōu)選地，Y是特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(VJ。更優(yōu)選地，Y是結(jié)合人血清白蛋白的dAb(例如，VH，Vk或Vx)。在一個特定的實施方案中，X或Z是人IL-lra或人IL-lra的功能性變體。在某些實施方案中，Y包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。在其它的實施方案中，Y包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。在其他的實施方案中，藥物融合體包括X，與Y，部分，其中X，是多肽藥物，附帶條件是X，不包含抗體鏈或抗體鏈的片段；和Y，是特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的單鏈抗原結(jié)合片段。優(yōu)選地，Y，是特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(VJ。更優(yōu)選地，Y，是結(jié)合人血清白蛋白的dAb(例如，VH，Vk或VJ。X，可位于Y，的氨基端，或Y，可位于X，的氨基端。在一些實施方案中，X，與Y，被氨基酸，或被含有2到大約100個氨基酸的肽或多肽連接體隔開。在一個特定的實施方案中，X，是人IL-lra或人IL-lra的功能性變體。在某些實施方案中，Y，包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。在其他的實施方案中，Y，包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。在特定的實施方案中，藥物融合體包括結(jié)合血清白蛋白的dAb，與人IL-lra(例如，SEQIDNO:28)。優(yōu)選地，dAb結(jié)合人血清白蛋白并包括人構(gòu)架區(qū)。在其他的實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括人IL-lra的功能性變體，其與成熟的152個氨基酸形式的人IL-lra具有至少大約80%，或至少大約85%，或至少大約90%,或至少大約95%，或至少大約96°/，或至少大約97%,或至少大約98%，或至少大約99%的氨基酸序列同一性，并拮抗人白細(xì)胞介素-1型1受體。(參見，Eisenberg等，Nature343:341-346(1990))。變體可包含一個或多個另外的氨基酸(例如，包含153或154個或更多個氨基酸)。本發(fā)明的藥物融合體可使用任何合適的方法生產(chǎn)。例如，一些實施方案是通過把編碼藥物融合體的核酸插入到合適的表達(dá)載體中來生產(chǎn)。然后把得到的構(gòu)建體引入到合適的宿主細(xì)胞中用于表達(dá)。緊接著表達(dá)之后，可使用任何合適的方法，從細(xì)胞溶解產(chǎn)物或優(yōu)選地從培養(yǎng)基或周質(zhì)分離或純化融合蛋白。(參見，例如，CurrentProtocolsinMolecularBiology(Ausubel，F(xiàn).M.等，編輯，Vol.2，Suppl.26，pp.16.4.1-16.7.8(簡))。合適的表達(dá)栽體可以含有多個成分，例如，復(fù)制起點、選擇標(biāo)記基因、一個或多個表達(dá)控制元素，如轉(zhuǎn)錄控制元素(例如，啟動子、增強(qiáng)子、終止子)和/或一個或多個翻譯信號、信號序列或前導(dǎo)序列等。表達(dá)控制元素和信號序列，如果存在，可以通過載體或其他來源來提供。例如，克隆的編碼抗體鏈的核酸的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯控制序列可以用來指導(dǎo)表達(dá)。啟動子為所需宿主細(xì)胞中的表達(dá)作準(zhǔn)備。啟動子可以是組成型或誘導(dǎo)型。例如，啟動子可以可操作地連接編碼抗體、抗體鏈或其一部分的核酸，使得其指導(dǎo)核酸的轉(zhuǎn)錄。各種用于原核生物(例如，用于E.coli的lac、tac、T3、T7啟動子)和真核生物宿主(例如，猿病毒40早期或晚期啟動子、魯斯氏肉瘤病毒長末端重復(fù)啟動子、巨細(xì)胞病毒啟動子、腺病毒晚期啟動子)的合適啟動子是可獲得的。此外，表達(dá)載體通常包括選擇標(biāo)記用于攜帶載體的宿主細(xì)胞的選擇，且在可復(fù)制表達(dá)載體的情況中，包括復(fù)制起點。編碼給予抗生素或抗藥性產(chǎn)物的基因是常用的選擇標(biāo)記并可以用于原核生物(例如，內(nèi)酰胺酶基因(氨卡青霉素抗性)、用于四環(huán)霉素抗性的T^基因)和真核生物細(xì)胞(例如，新霉素(G418或geneticin)、gpt(霉酚酸)、氨芐青霉素或潮霉素抗性基因)。二氫葉酸鹽還原酶標(biāo)記基因允許在各種宿主中使用氨曱喋呤的選擇。編碼宿主營養(yǎng)缺陷標(biāo)記基因產(chǎn)物的基因(例如，￡T/2、t//L43、好/5*3)通常用作酵母中的選擇標(biāo)記。還考慮了使用病毒(例如，桿狀病毒)或噬菌體載體，以及能夠整合至宿主細(xì)胞中的載體，如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。用于在哺乳動物細(xì)胞和原核生物細(xì)胞(Eco//)、昆蟲細(xì)胞(果蠅S2細(xì)胞、Sf9)和酵母(甲醇畢赤酵母(///1C/^W0//C")、/7"5/0,/s、酉良酒酵母(S.CWW、/"e))中的合適表達(dá)載體是本領(lǐng)域公知的。提供了表達(dá)藥物融合體的重組宿主細(xì)胞和制備在此所述的藥物融合體的方法。重組宿主細(xì)胞包括編碼藥物融合體重組核酸。可以通過編碼蛋白質(zhì)的重組核酸在合適宿主細(xì)胞中的表達(dá)來產(chǎn)生藥物融合體，或使用其他合適的方法。例如，可以將在此所述的表達(dá)構(gòu)建體引入合適的宿主細(xì)胞中，并在適于構(gòu)建體表達(dá)的條件下培養(yǎng)所得到的細(xì)胞(例如，在培養(yǎng)物、動物中)。合適的宿主細(xì)胞可以是原核生物的，包括細(xì)菌細(xì)胞，如大腸桿菌、枯草芽胞桿菌和或其他合適的細(xì)菌，真核生物的，如真菌或酵母細(xì)胞(例如，尸/c/l/fl/7flW0/7'S、曲霉菌種、釀酒酵母、酉良酒酵母、粟酒裂殖酵母(5^/r,'^sflcc/rfl/Y附j(luò)^M/;0附6e)、鏈孢霉(A^Mra印0n1cm^fl))，或其他低等真核細(xì)胞，和高等真核生物的細(xì)胞，如來自昆蟲(例如，Sf9昆蟲細(xì)胞(WO94/26087(O'Connor))或哺乳動物(例如，COS細(xì)胞，如COS-l(ATCC登錄號No.CRL-1650)和COS-7(ATCC登錄號No.CRL-1651)、CHO(例如，ATCC登錄號No.CRL-9096)、293(ATCC登錄號No.CRL-1573)、HeLa(ATCC登錄號No.CCL國2)、CV1(ATCC登錄號No.CCL-70)、WOP(Dailey等，/Wn/.54:739國749(1985))、3T3、293T(Pear等，TVfl".Jcflrf.5W.f/^.A9。8392-8396(1993))、NSO細(xì)胞、SP2/0、HuT78細(xì)胞等的那些(參見，例如，Ausubel，F(xiàn).M.等，編輯，C"/re^/V^oco/s/wMo/ecw/fl/*所o/ogy，GreenePublishingAssociatesandJohnWiley&SonsInc.，(1993))。本發(fā)明還包括生產(chǎn)藥物融合體的方法，包括在適于藥物融合體表達(dá)的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的重組宿主細(xì)胞。如果需要，該方法可以進(jìn)一步包括分離或回收藥物融合體的步驟。在另一個實施方案中，將藥物融合體的成分(例如，結(jié)合人血清白蛋白和IL-lra的dAb)化學(xué)裝配來形成連續(xù)的多肽鏈。綴合物另一個方面中，本發(fā)明提供了包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的綴合物，該片段結(jié)合藥物。這樣的綴合物包括"藥物綴合物"，其包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，該片段與藥物共價鍵合，和"非共價藥物綴合物"，其包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，該片段與藥物非共價鍵合。優(yōu)選，綴合物足夠穩(wěn)定使得結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段和藥物在體內(nèi)條件下(例如，給藥于人時)彼此保持實質(zhì)性的結(jié)合(共價或非共價)。優(yōu)選，在體內(nèi)條件下不高于約20%、不高于約15%、不高于約10°/。、不高于約9%、不高于約8%、不高于約7%、不高于約6%、不高于約5%、不高于約4%、不高于約3°/。、不高于約2%、不高于約1%或基本上沒有綴合物分解或分裂來釋放藥物和抗原結(jié)合片段。例如，通過在血清(例如，人血清)中371C孵育藥物綴合物或非共價藥物綴合物24小時來方便地評定"體內(nèi)"條件下的穩(wěn)定性。該方法的一個實施例中，將等量的藥物綴合物和未綴合的藥物稀釋至兩個不同瓶子的血清中。將每個瓶子的一半內(nèi)含物立即在-201C冷凍，并將另一半在371C孵育24小時。然后使用任何合適的方法如SDS-PAGE和/或蛋白質(zhì)印跡來分析全部的四種樣品?？梢允褂媒Y(jié)合藥物的抗體來探測蛋白質(zhì)印跡。如果不存在分解，藥物綴合物泳道中的所有藥物將跑到藥物綴合物的大小處。許多合適的方法可以用來測定"體內(nèi)"條件下的穩(wěn)定性，例如，使用合適的分析方法來分析如上所述制得的樣品，如色譜法(例如，凝膠過濾、離子交換和反相)、ELISA、質(zhì)譜等。藥物綴合物另一方面中，本發(fā)明提供了藥物綴合物，該綴合物包括具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段，和共價鍵合所述抗原結(jié)合片段的藥物，附加條件是藥物綴合物不是單個連續(xù)的多肽鏈。一些實施方案中，藥物綴合物包括具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH)，或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(Vl)，和共價鍵合所述Vh或Vl的葯物，前提條件是藥物綴合物不是單個連續(xù)多肽鏈。優(yōu)選藥物綴合物包括單個結(jié)合血清白蛋白的Vh或羊個結(jié)合血清白蛋白的Vl。特定的實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的VKdAb并包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。其他實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的VHdAb并包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。藥物綴合物可以包括任何所需的藥物并可以使用任何合適的方法制得。例如，藥物可以通過合適的連接部分在一個或多個位置如氨基端、羧基端或通過氨基酸側(cè)鏈直接或間接結(jié)合抗體的抗原結(jié)合片段，抗體結(jié)合血清白蛋白。一實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的dAb和多肽藥物(例如，人IL-lra或人IL-lra的功能變體)，且多肽藥物(例如，人IL-lra或人IL-lra的功能變體)的氨基端直接地或通過合適的連接體部分結(jié)合dAb的羧基端。另一個實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的dAb和促胰島素藥物(例如，GLP-1或GLP-1類似物)，且促胰島素藥物的氨基端是游離的(即，在綴合物中不是連接的或結(jié)合的)和羧基端直接或通過合適的連接體部分結(jié)合dAb的氨基端。其他實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的dAb和兩個或多個共價鍵合dAb的不同藥物。例如，第一個藥物可以共價鍵合(直接或間接)dAb的羧基端和第二個藥物可以共價鍵合(直接或間接)或通過側(cè)鏈氨基(例如，賴氨酸的s氨基)結(jié)合氨基端。優(yōu)選的實施方案中，促胰島素藥物(例如，GLP-1或GLP-1類似物)的氨基端是游離的?？梢允褂眠x擇性結(jié)合的公知方法來制得這樣的藥物綴合物。(參見，例如，Hermanson，G.T.5/ocwy'"gfl"recte々Mes，AcademicPress:SanDiego，CA(1996"?？梢允褂酶鞣N用于綴合藥物和具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段的方法。將根據(jù)待綴合的藥物來選擇特定的方法。如果需要，可以使用含有末端官能團(tuán)的連接體來連接抗原結(jié)合片段和藥物。通常，通過將含有反應(yīng)性官能團(tuán)(或修飾來含有反應(yīng)性官能團(tuán))的藥物與連接體反應(yīng)或直接與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段反應(yīng)來實現(xiàn)綴合。通過使含有(或修飾來含有)可以在合適條件下與第二個化學(xué)基團(tuán)反應(yīng)因此形成共價鍵的化學(xué)部分或官能團(tuán)的藥物反應(yīng)來形成共價鍵。如果需要，可以使用任何合適的方法將合適的反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)添加至抗原結(jié)合片段或連接體。(參見，例如，Hermanson，G.T.JJ/tfcwj'Mg^，AcademicPress:SanDiego，CA(1996).)。許多合適的反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)組合是本領(lǐng)域已知的，例如，胺基可以與親電子基團(tuán)如甲苯磺酸鹽、甲磺酰酯、鹵素(氯、溴、氟、碘)、N-羥基湖泊酰酯(NHS)等反應(yīng)。硫醇可以與馬來酰亞胺、吲哚乙酰基、丙烯酰基、吡啶二硫化物、5-硫醇-2-硝基苯曱酸硫醇(TNB-硫醇)等反應(yīng)。醛官能團(tuán)可以結(jié)合含有胺或酰肼的分子，疊氮基可以與三價含磷基團(tuán)反應(yīng)來形成氨基磷酸酯或磷酰亞胺鍵。將活性基團(tuán)引入分子中的合適方法是本領(lǐng)域已知的(參見，例如，Hermanson，G.T.說》cw/Mgfl^7fec/m/《Mes，AcademicPress:SanDiego，CA(1996))。一些實施方案中，通過兩個硫醇反應(yīng)來形成二硫鍵將具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段結(jié)合藥物。其他實施方案中，通過異硫氰酸鹽基團(tuán)和伯胺反應(yīng)來產(chǎn)生異硫脲鍵將具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段結(jié)合藥物。合適的連接體部分可以是直鏈或支鏈的，并包括，例如，四乙二醇、C2C12乙烯、國NH國(CH2)p-NH國或國(CH2)p畫NH-(其中p是一至十二)、-CH2-0-CH2-CH2.0-CH2-CH2-0-CH-NH-、包括1至約100個(優(yōu)選l至約12)氨基酸的多肽鏈等。非共價藥物綴合物一些非共價鍵(例如，氫鍵、范德華相互作用)可以產(chǎn)生穩(wěn)定的、高度特異性的分子間連接。例如，在互補結(jié)合伴侶之間通過多個非共價鍵獲得的分子識別相互作用成為許多重要生物相互作用的基礎(chǔ)，如酶與底物的結(jié)合、抗體對抗原的識別、配體與其受體的結(jié)合以及蛋白質(zhì)和肽的三維結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。因此，可以使用這樣的弱非共價相互作用(例如，氫鍵、范德華相互租用、靜電相互租用、疏水性相互租用等)來將藥物結(jié)合具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段。優(yōu)選，連接抗原結(jié)合片段和藥物的非共價鍵是足夠強(qiáng)的，使得抗原結(jié)合片段和藥物在體內(nèi)條件(例如，給藥于人時)下彼此保持實質(zhì)性的結(jié)合。通常，連接抗原結(jié)合片段和藥物的非共價鍵具有至少約1(TM"的強(qiáng)度。優(yōu)選的實施方案中，非共價鍵的強(qiáng)度為至少約IO"M-\至少約10"M1、至少約10"M1、至少約10"M"或至少約10"M1。已知生物素和抗生物素蛋白之間以及生物素和抗生蛋白鏈菌素之間的相互作用在許多條件下是非常有效和穩(wěn)定的，并且如在此所述的，生物素和抗生物素蛋白之間或生物素和抗生蛋白鏈菌素之間的非共價鍵可以用來制備本發(fā)明的非共價藥物綴合物?？梢栽诰哂醒灏椎鞍滋禺愋缘目贵w的抗原結(jié)合片段和藥物之間直接形成非共價鍵，或可以在合適的互補結(jié)合伴侶之間形成(例如，生物素和抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素)，其中一個伴侶與藥物共價鍵合，互補的結(jié)合伴倡與抗原結(jié)合片段共價鍵合。使用互補結(jié)合伴侶時，結(jié)合伴侶之一可以直接或通過合適的連接體部分與藥物共價鍵合，互補結(jié)合伴侶可以直接或通過合適的連接體部分與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段共價鍵合?；パa結(jié)合伴倡是成對的選擇性彼此結(jié)合的分子。許多互補結(jié)合伴侶是本領(lǐng)域已知的，例如，抗體(或其抗原結(jié)合片段)與其同源的抗原或抗原決定部位，酶與其底物，以及受體與其配體。優(yōu)選的互補結(jié)合伴侶是生物素和抗生物素蛋白，以及生物素和抗生蛋白鏈菌素?？梢匀缟纤鐾瓿苫パa結(jié)合對的成員與具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗原結(jié)合片段或藥物的直接或間接共價鍵合，例如，通過將含有反應(yīng)性官能團(tuán)(或修飾來含有反應(yīng)性官能團(tuán))的互補結(jié)合伴侶與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段反應(yīng)，使用或沒用連接體。將根據(jù)待綴合的化合物(例如，藥物、互補結(jié)合伴侶、結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段)來選擇特定的方法。如果需要，可以使用含有末端反應(yīng)性官能團(tuán)的連接體(例如，同型雙功能連接體、雜雙功能連接體)來連接抗原結(jié)合片段和/或藥物與互補結(jié)合伴倡。一實施方案中，可以使用含有兩個不同反應(yīng)部分的雜雙功能連接體?？梢赃x擇雜雙功能連接體，使得反應(yīng)部分之一與具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段或藥物反應(yīng)，且另一個反應(yīng)部分與互補結(jié)合伴倡反應(yīng)。可以使用任何合適的連接體(例如，雜雙功能連接體)并且許多這樣的連接體是本領(lǐng)域已知的并是商業(yè)來源可獲得的(例如，PierceBiotechnology,Inc.,IL)。組合物以及治療和診斷方法提供了含有本發(fā)明藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的組合物，包括藥物或生理組合物(例如，用于人和/或牲畜給藥)。藥物或生理組合物包括一種或多種藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，和藥物學(xué)上或生理學(xué)上可接受的載體。通常，這些載體包括水或醇/水溶液、乳濁液或懸浮液，包括鹽水和/或緩沖介質(zhì)。非腸道載體包括氯化鈉溶液、Ringer's葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉和乳酸鹽化Ringer，s。合適的生理學(xué)上可接受的佐劑，如果需要將多肽復(fù)合物保持于懸浮液中，可以選自增稠劑，如羧曱基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、明膠和藻朊酸鹽。靜脈內(nèi)載體包括流體以及營養(yǎng)補充劑和電解質(zhì)補充劑，如基于Ringer's葡萄糖的那些。防腐劑和其他佐劑，如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體，也可以存在(Mack(1982)/em/"g^w、P/m/7M"ceM"cfl/5Wewc^s,第16版)。組合物可以包括所需量的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。例如，組合物可以包括約5%至約99%重量的藥物綴合物、非共價藥物綴合物或藥物融合體。特定的實施方案中，組合物可以包括約10%至約99%、或約20%至約99%、或約30%至約99%或約40%至約99%、或約50%至約99%、或約60°/0至約99%、或約70%至約99%、或約80%至約99%、或約90%至約99%、或約95%至約99°/重量的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。在一個實施例中，組合物是冷凍干燥的(凍干)。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)通常在預(yù)防、抑制或治療以下病癥中發(fā)現(xiàn)用途，這些病癥為炎癥狀態(tài)(例如，急性和/或慢性炎癥疾病)，如慢性梗塞性肺病(例如，慢性支氣管炎、慢性梗塞性支氣管炎、氣腫)、過敏性超敏、癌癥、細(xì)菌或病毒感染、肺炎，如細(xì)菌性肺炎(例如，葡萄球菌肺炎)、自體免疫失調(diào)(其包括，但不限于，I型糖尿病、多發(fā)性硬化、關(guān)節(jié)炎(例如，骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、狼瘡關(guān)節(jié)炎、脊柱關(guān)節(jié)病(例如，強(qiáng)直性脊柱炎))、全身性紅斑狼瘡、炎性腸病(例如，節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎)、Behcet's綜合癥和重癥肌無力)、子宮內(nèi)膜異位、牛皮褲、腹部粘附(例如，腹部手術(shù)后)、哮喘和膿毒性休克。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以用于預(yù)防、抑制或治療疼痛，如慢性或急性外傷疼痛、慢性或急性神經(jīng)痛、急性或慢性肌肉骨骼疼、慢性或急性癌癥疼痛等。還可以給藥在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)用于診斷目的。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)還適用于防止、抑制或治療肺炎、慢性阻塞性呼吸道疾病(例如，慢性支氣管炎、慢性阻塞性支氣管炎、肺氣腫)、哞喘(例如，類固醇抗性哞喘)、肺炎(例如，細(xì)菌性肺炎，如葡萄球菌肺炎)、過敏性肺炎、嗜曙紅細(xì)胞增多的肺滲透、環(huán)境性肺病、肺炎、支氣管擴(kuò)張、嚢性纖維化、間質(zhì)性肺炎、原發(fā)性肺動脈高血壓、肺動脈栓塞癥、胸膜疾病、縱隔疾病、膈膜疾病、肺換氣不足、換氣過度、睡眠窒息、急性呼吸窘迫綜合征、間皮瘤、肉瘤、移植排斥、移植對宿主疾病、肺癌、過敏性鼻炎、過敏癥、石棉沉著病、曲霉腫、支氣管擴(kuò)張、慢性支氣管炎、肺氣腫、嗜酸細(xì)胞性肺炎、特發(fā)性肺纖維化、入侵性肺炎球菌疾病(IPD)、流感、非結(jié)核分枝桿菌、胸膜積液、塵肺病、pneumocytosis、肺炎、肺放線菌病、肺部的肺泡蛋白癥、肺炭疽、肺水腫、肺栓、肺炎、肺組織細(xì)胞增多病X(嗜酸粒細(xì)胞肉芽腫)、肺動脈高血壓、肺諾卡氏菌病、肺結(jié)核、肺靜脈閉塞病、類風(fēng)濕性肺病、結(jié)節(jié)病、Wegener's肉芽腫病和非小細(xì)胞肺癌。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)還適用于防止、抑制和治療流感、RSV-相關(guān)呼吸道疾病和病毒性肺(呼吸道)疾病。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)還適用于防止、抑制或治療骨關(guān)節(jié)炎或炎性關(guān)節(jié)炎。"炎性關(guān)節(jié)炎"指的是那些其中免疫系統(tǒng)引起或惡化關(guān)節(jié)中炎癥的關(guān)節(jié)疾病，并包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和脊柱關(guān)節(jié)病，如關(guān)節(jié)強(qiáng)硬性脊柱炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、Reiter's綜合癥、牛皮褲關(guān)節(jié)炎、腸炎性關(guān)節(jié)病、腸炎性脊柱炎、幼年-突發(fā)性脊柱關(guān)節(jié)病和未分化的脊柱關(guān)節(jié)病。通常由滑液組織和/或滑液的白細(xì)胞滲透來表征炎性關(guān)節(jié)炎。使用在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以預(yù)防、抑制或治療的癌癥包括淋巴瘤(例如，B細(xì)胞淋巴瘤、急性骨髓淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤)、骨髓瘤(例如，多發(fā)性骨髓瘤)、肺癌(例如，小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌)、結(jié)直腸癌、頭頸部癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌、白血病(例如，急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病)、腺癌、腎癌、造血癌(例如，骨髓發(fā)育不良綜合癥、骨髓增生性失調(diào)(例如，真性紅血球增多癥、基礎(chǔ)(或原發(fā)性)血小板增多癥、先天性骨髓纖維化)等。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)還適用于預(yù)防、抑制或治療子宮內(nèi)膜異位、纖維化、不育癥、早產(chǎn)、勃起障礙、骨質(zhì)疏松、糖尿病(例如，II型糖尿病)、生長失調(diào)、HIV感染、呼吸窘迫綜合征、腫瘤和尿床。在本發(fā)明的應(yīng)用中，術(shù)語"防止"涉及在疾病誘導(dǎo)之前給藥保護(hù)性的組合物。"抑制"指的是誘導(dǎo)事件之后但在疾病臨床顯現(xiàn)之前給藥組合物。"治療"涉及在疾病癥狀變得明顯之后給藥保護(hù)性的組合物?？梢杂糜诤Y選藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物、藥物融合體)在保護(hù)或治療疾病中有效性的動物模型系統(tǒng)是可獲得的。用于測試易感大鼠中全身性紅斑狼瘡(SLE)的方法是本領(lǐng)域已知的(Knight等，(1978)，丄iV/e丄，147:1653;Reinersten等(1978)iVew/Merf.，299:515)。通過用來自另一個物種的可溶性AchR蛋白誘導(dǎo)疾病在S幾/J雌性小鼠中測試重癥肌無力(MG)(Lindstrom等，(1988)jrfv.J附/mim/.，42:233)。通過注射II型膠原在小鼠易感林系中誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(Stuart等(1984)Jww.及ev./wmwm/.42:233)。已經(jīng)描述了通過注射分枝桿菌熱擊蛋白在易感大鼠中謙導(dǎo)adjuvantarthitis的模型(VanEden等，(1988)，淑m"，331:171)?？梢栽谄渲型ㄟ^關(guān)節(jié)內(nèi)注射膠原酶誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的鼠模型中測定治療骨關(guān)節(jié)炎的有效性(Blom，A.B.等，Os&卯W/in'他CaW//flge12:627-635(2004)。按照所述的通過給藥甲狀腺球蛋白在小鼠中誘導(dǎo)曱狀腺炎(Maron等，(1980)義五jc/7.M^/.152:1115)。胰島素依賴型糖尿病(IDDM)自然地產(chǎn)生或可以在特定的小鼠林系中誘導(dǎo)，如Kanasawa等，(1984)D/由油g/"，27:113所述的那些。小鼠和大鼠中的EAE作為人MS的模型。在該模型中，通過給藥髓磷脂堿性蛋白來誘導(dǎo)脫髓鞘疾病(參見Paterson(l986)7kx^0oA:</附附冊o戸"o/ogy，Mischer等，編輯，Crune和Stratton，NewYork,pp.179-213;McFarlin等(1973)5We臟，179:478:和Satoh等(1987)丄/附附Mwo/.，138:179)。本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以用作分開給藥的組合物或結(jié)合其他藥劑。這些可以包括各種免疫治療藥物，如cylcosporine、氨曱喋呤、阿霉素或順鉑、免疫毒素等。例如，給藥藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)來防止、抑制或治療肺炎或呼吸道疾病時，可以結(jié)合磷酸二酯酶抑制劑(例如，磷酸二酯酶4的抑制劑)、支氣管擴(kuò)張劑(例如，卩2-激動劑、抗膽堿藥、茶堿)、短效P-激動劑(例如，舒喘寧、舒喘靈、班布特羅、非諾特羅、isoetherine、異丙腎上腺素、左沙丁胺醇、metaproterenol、p比布特羅、特布他林和tornlate)、長效P-激動劑(例如，福莫特羅和沙美特羅)、短效抗膽堿能藥(例如，溴化異丙托品和溴化oxitropium)、長效抗膽堿能藥(例如，tiotropium)、茶堿(例如，短效制劑、長效制劑、吸入的類固醇(例如，倍氯米松、beclomatasone、布地縮松、氟尼縮松、丙酸氟替卡松和強(qiáng)的松)、結(jié)合的短效P-激動劑和抗膽堿能藥(例如，舒喘寧/舒喘靈/ipratopium，和非諾特羅/ipratopium)、結(jié)合的長效p-激動劑和吸入的類固醇(例如，舒喘靈/氟替卡松，和福莫特羅/布地縮松)和粘液溶解劑(例如，厄多司坦、乙酰半胱氨酸、bromheksin、羧甲半胱氨酸、guiafenesin和碘化甘油)給藥。例如，給藥藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)來防止、抑制和治療關(guān)節(jié)炎(例如，炎性關(guān)節(jié)炎(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎))時，可以結(jié)合緩解疾病的抗風(fēng)濕藥(例如，氨甲喋呤、羥基氯喹、柳氮磺胺吡啶、來氟米特、咪唑硫嘌呤、D-青霉胺、金(口服或肌內(nèi))、二曱胺四環(huán)素、葡萄球菌蛋白質(zhì)A)、非甾族抗炎劑(例如，COX-2選擇性NSAIDS，如羅非昔布)、水楊酸鹽、糖皮質(zhì)激素(例如，潑尼松)和止痛藥來給藥。藥物組合物可以包括各種細(xì)胞毒素或其他藥劑的"混合物"。結(jié)合本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，或包括不同藥物的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物組合物、藥物融合體)的藥物組合物的組合。依照任何合適的技術(shù)將藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)給藥于任何個體或患者。各種給藥途徑是可能的，包括，例如，口服、飲食、局部、經(jīng)皮、直腸、非腸道(例如，靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)注射)和吸入(例如，支氣管內(nèi)、鼻內(nèi)或口服吸入、鼻內(nèi)滴液)給藥途徑，取決于藥物組合物和待治療的疾病或病癥。給藥可以是所示的局部的或全身的。優(yōu)選的給藥模式可以根據(jù)選定的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)和待治療的病癥(例如，疾病)而改變。給藥的劑量和頻率將取決于患者的年齡、性別和狀況，其他藥物的同時給藥，臨床醫(yī)師考慮的conterindication和其他參數(shù)。給藥藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的治療有效量。治療有效量是在給藥的條件下足以獲得所需治療效果的含量。在此限定的術(shù)語"患者"或"個體"包括動物，如哺乳動物，包括但不限于，靈長類(例如，人)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔子、豚鼠、大鼠、小鼠或其他牛、綿羊、馬、犬、貓、嚙齒動物或鼠科種。藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以作為中性化合物或作為鹽來給藥?？梢垣@得含有胺或其他堿基的化合物(例如，藥物組合物、藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的鹽，例如，通過與合適的有機(jī)或無機(jī)酸反應(yīng)，如氯化氫、溴化氫、乙酸、高氯酸等。具有季胺基團(tuán)的化合物還含有反陽離子，如氯、溴、碘、醋酸鹽、高氯酸鹽。可以通過與合適的堿反應(yīng)來制備含有羧酸或其他酸官能團(tuán)的化合物的鹽，堿例如為，氫氧化堿。酸性官能團(tuán)的鹽含有反陽離子，如鈉、鉀等。本發(fā)明還提供了用于將藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)給藥于患者(例如，病人)的藥盒，該藥盒包括藥物組合物(例如，藥物組合物、非共價藥物組合物、藥物融合體)、藥物傳送裝置和任選的使用說明書。可以以制劑如凍干制劑來提供藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。特定實施方案中，藥物傳送裝置選自注射器、吸入器、鼻內(nèi)或眼睛給藥裝置(例如，mister，眼睛或鼻滴管)和無針注射裝置。可以將本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)凍干，用于存儲和在使用前在合適載體中重建。可以使用任何合適的凍干方法(例如，噴霧干燥、濾餅干燥)和/或重建技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到凍干和重建將導(dǎo)致不同程度的抗體活性損失(例如，對于常規(guī)免疫球蛋白，IgM抗體易于具有比IgG抗體更高的活性損失)，并認(rèn)識到可以調(diào)節(jié)使用水平來補償。特定的實施方案中，本發(fā)明提供了含有如在此所述的凍干(冷凍干燥)藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的組合物。優(yōu)選，凍干(冷凍干燥)藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)在水合時，其活性損失不超過約20%、或不超過約25%、或不超過約30%、或不超過約35°/。、或不超過約40%、或不超過約45%、或不超過約50%(例如，對于血清白蛋白的結(jié)合活性)?；钚允窃趦龈芍爱a(chǎn)生藥物組合物效果需要的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的含量。例如，獲得并維持所需血清濃度一段所需時間需要的藥物綴合物或藥物融合體的含量?？梢栽趦龈汕笆褂萌魏魏线m的方法來測定藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的活性，并可以使用相同方法在復(fù)水后測量活性來測定損失的活性量?？梢越o藥含有藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)或其混合物的組合物用于預(yù)防性和/或治療性處理。特定的治療應(yīng)用中，將給藥條件下足以獲得所需治療或預(yù)防效果的含量定義為"治療有效量或劑量"，這些效果如選定細(xì)胞群的至少部分抑制、遏制、調(diào)節(jié)、殺滅或一些其它可測量參數(shù)。獲得該劑量需要的含量將取決于疾病的嚴(yán)重程度和病人自身免疫系統(tǒng)和一般健康的一般狀態(tài)，但通常為約10嗎/kg至約80mg/kg，或約0.005至5.0mg藥物綴合物或藥物融合體每公斤體重，更常使用0.05至2.0mg/kg/劑的劑量。例如，可以每天(例如，每天高達(dá)四次給藥)、每兩天、每三天、每周兩次、每周一次、每兩周一次、一月一次或每兩月一次給藥本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物融合體、藥物綴合物、非共價藥物綴合物)，以劑量，例如，約10jig/kg至約80mg/kg、約100jig/kg至約80mg/kg、約lmg/kg至約80mg/kg、約lmg/kg至約70mg/kg、約lmg/kg至約60mg/kg、約lmg/kg至約50mg/kg、約lmg/kg至約40mg/kg、約lmg/kg至約30mg/kg、約lmg/kg至約20mg/kg、約lmg/kg至約10mg/kg、約10jig/kg至約10mg/kg、約10pg/kg至約5mg/kg、約10pg/kg至約2.5mg/kg、約lmg/kg、約2mg/kg、約3mg/kg、約4mg/kg、約5mg/kg、約6mg/kg、約7mg/kg、約8mg/kg、約9mg/kg或約10mg/kg。對于預(yù)防性應(yīng)用，含有藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)或其混合物的組合物也可以以相似或略4氐的劑量給藥。含有根據(jù)本發(fā)明藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的組合物可以用于預(yù)防性和治療性環(huán)境中來幫助緩解、滅活、殺滅或去除哺乳動物中選擇的靶細(xì)胞群。實施例白細(xì)胞間介素1受體拮抗劑(ILl-ra)是通過竟?fàn)幮砸种艻L-1結(jié)合白細(xì)胞間介素1受體(IL-1R1)而阻斷IL-1生物活性的拮抗劑。應(yīng)答炎癥刺激物誘導(dǎo)了IL-1并介導(dǎo)了各種生物應(yīng)答，包括炎癥和免疫應(yīng)答。IL-1具有各種活性，包括軟骨降解和骨吸收的刺激。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人中，局部產(chǎn)生的IL-1的含量升高了且天然產(chǎn)生的ILl-ra的水平不足以竟?fàn)庍@些異常升高的含量。存在幾種可用于RA的處理，包括疾病改變抗風(fēng)濕病藥物(DMARDS)，如氨曱喋呤，和生物制劑如KINERET(anakinra、Amgen)。KINERET(anakinra、Amgen)是人白細(xì)胞間介素-1受體拮抗劑的重組、非糖基化形式，由153個氨基酸構(gòu)成并具有17.3千道爾頓的分子量。(KINERET(anakinra、Amgen)的氨基酸序列對應(yīng)于天然產(chǎn)生IL-lra中的152個氨基酸和另外的N-端蛋氨酸)。KINERET(anakinra、Amgen)適用于降低具有一種或多種DMARD無效的18歲年齡或更大患者中中度至嚴(yán)重類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的信號和癥狀。劑量是單次使用每日皮下注射lOOmg藥物。^1/2是4-6小時且71%病人在14-28天內(nèi)產(chǎn)生注射部位反應(yīng)。在此我們證明了連接治療多肽和血清-白蛋白結(jié)合dAb形成化合物，其(i)具有與治療多肽單獨相似的活性和(ii)還結(jié)合血清白蛋白。此外，本發(fā)明提供了形成長血清半衰期形式治療多肽的方法。例如，我們已經(jīng)將血清白蛋白結(jié)合dAb結(jié)合ILl-ra，這形成了血清半衰期長于ILl-ra單獨的化合物。實施例l結(jié)合小鼠、大鼠和人血清白蛋白的結(jié)構(gòu)域抗體的選擇該實施例說明了制備對準(zhǔn)血清白蛋白的單結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)的方法。描述了對準(zhǔn)小鼠血清白蛋白(MSA)、人血清白蛋白(HSA)和大鼠血清白蛋白(RSA)的dAb的選擇。按照WO2004/003019A2中所述的來選擇對準(zhǔn)小鼠血清白蛋白的dAb。使用了三個人噬菌體展示抗體文庫。每個文庫基于VH(V3-23/DP47和JH4b)或VK(ol2/o2/DPK9和JK1)的單個人框架，Vh和Vk具有在互樸性決定片段(CDR1、CDR2和CDR3)中引入的NNK密碼子編碼的側(cè)鏈多樣性。文庫1(VH)多樣性位置在H30、H31、H33、H35、H50、H52、H52a、H53、H55、H56、H58、H95、H97、H98文庫大小6.2xl09文庫2(VH):多樣性位置在H30、H31、H33、H35、H50、H52、H52a、H53、H55、H56、H58、H95、H97、H98、H99、HIOO、H100A、HIOOB。文庫大小4.3xl09文庫3(VK)多樣性位置在L30、L31、L32、L34、L50、L53、L91、L93、L94、L96文庫大小2xl09已經(jīng)預(yù)選了Vh和Vk文庠，用于各自結(jié)合種屬配體蛋白A和蛋白L，使得選定文庫中的大部分克隆是功能性的。以上所示的文庫大小對應(yīng)于預(yù)選后的大小。使用各自分開的文庫對血清白蛋白進(jìn)行兩輪選擇。對于每次選擇，將抗原以4mLPBS中l(wèi)OOjig/ml的濃度涂覆在免疫管(nunc)上。在第一輪的選擇中，將三個文庫中的每一個對HSA(Sigma)或MSA(Sigma)分開涂布。在第二輪選擇中，將來自六個第一輪選擇中每一個的噬菌體對(i)相同抗原再次(例如，笫一輪MSA、第2輪MSA)和(ii)對互換的抗原(例如，笫1輪MSA，第2輪HSA)涂布，形成總共12輪選擇。在每種情況中，第二輪選擇后，測試48個克隆與HSA和MSA的結(jié)合。按照對于scFv片段所述的產(chǎn)生可溶性dAb片段，Harrison等，Af^/iorfs五wz;^附o/.1996;267:83-109，并遵'瞎、才示準(zhǔn)ELISA方案(Hoogenboom等，(1991)iVMc/d及d，19:4133)，除了將2%吐溫PBS用作阻斷緩沖劑并用蛋白質(zhì)L-HRP(Sigma)(用于VKS)和蛋白質(zhì)A-HRP(AmershamPharmaciaBiotech)(用于VHS)來檢測結(jié)合的dAb。以ELISA不溶性形式測試給予表示結(jié)合MSA、HSA或兩者的高出背景信號的dAb，只結(jié)合塑料但全部是血清白蛋白特異性的。然后將克隆測序(參見表l),揭示已經(jīng)鑒定出21個獨特的dAb序列。選定的VKdAb克隆之間的最小相似性(在氨基酸水平)是86.25%((69/80)xl00;所有多樣化殘基不同時的結(jié)果，例如，克隆24和34)。選定的VHdAb之間的最小相似性是94y。((127/136)xl00)。接著，測試血清白蛋白結(jié)合dAb從溶液中捕獲生物素化抗原的能力。遵照ELISA方案(如上)，除了用ljig/ml蛋白L(用于Vk克隆)和ljig/ml蛋白A(用于Vh克隆)覆蓋ELISA平板。按照方案從溶液捕獲可溶性dAb，并用生物素化MSA或HSA和抗生蛋白鏈菌素HRP來檢測。已經(jīng)根據(jù)制造商的說明制備了生物素化MSA和HSA，目的是獲得每個血清白蛋白分子平均2個生物素。在ELISA中鑒定了二十四個從溶液中捕獲生物素化MSA的克隆。這些中的兩個克隆(以下的克隆2和38)還捕獲了生物素化的HSA。接著，測試dAb結(jié)合涂覆于CM5Biacore芯片上MSA的能力。在Biacore上發(fā)現(xiàn)八個結(jié)合MSA的克隆。對于抗MSA-aAb，按照之前所述的選擇對準(zhǔn)人血清白蛋白和大鼠血清白蛋白的dAb，除了以下對方案的改變合成Vu結(jié)構(gòu)域的噬菌體文庫是文庫4G，其是基于包括DP47種系基因和JH4片段的人VH3。通過誘變引入以下特定位置的多樣性(使用NNK密碼子；根據(jù)Kabat編號)，CDR1:30、31、33、35;CDR2:50、52、52a、53、55、56;和CDR3:4-12個多樣化殘基例如，4GH11中H95、H96、H97和H98，以及4GH19中H95、H96、H97、H98、H99、H100、H100a、H100b、H100c、H100d、H100e和H100f。最后三個CRR3殘基是FDY，因此CDR3長度在7-15個殘基之間改變。文庫包括>1xl(T單個克隆。已經(jīng)預(yù)選VH和VK文庫的子集用于各自結(jié)合種屬配體蛋白A和蛋白L，使得未選擇文庫中的大部分克隆是功能性的。以上所示文庫的大小對應(yīng)于預(yù)選后的大小。使用分開的VH和Vk文庫的子集對大鼠和人血清白蛋白進(jìn)行兩輪選擇。對于每次選擇，將抗原(i)以4mlPBS中100ng/ml的濃度涂覆于免疫管(nunc)上，或(ii)生物素化，然后用于可溶性選擇，接著在抗生蛋白鏈菌素珠子(第1輪中)和neutravidin珠子(笫2輪中)上的捕獲。(參見表1用于分離每個克隆的選擇策略的詳細(xì)內(nèi)容)。在每種情況中，在第二輪選擇后.測試24個噬菌體克隆與HSA或RSA的結(jié)合。如果選擇之一中顯著比例的克隆在噬菌體ELISA中是陽性的，然后將該選擇的DNA克隆至表達(dá)載體中，用于生產(chǎn)可溶性dAb，并挑選單個克隆。按照對于scFV片段所述的生產(chǎn)可溶性dAb片段，Harrison等(MethodsEnzymol.1996;267:83-109)，并遵照標(biāo)準(zhǔn)ELISA方案(Hoogenboom等，(1991)NucleicAcidsRes"19:4133)，除了將2%吐溫PBS用作阻斷緩沖劑并用抗-myc-HRP檢測結(jié)合的dAb。然后對于結(jié)合MSA、RSA或HSA篩選ELISA中的陽性克隆，使用BIACORE表面等離子共振裝置(BiacoreAB)。進(jìn)一步分析結(jié)合MSA、RSA或HSA的dAb。然后將克隆測序并鑒定出獨特的dAb序列。表l.結(jié)合血清白蛋白的dAb的選擇方案<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>然后進(jìn)一步分析BIACORE芯片(BiacoreAB)上結(jié)合血清白蛋白的dAb來獲得關(guān)于親和性的信息。使用覆蓋血清白蛋白的CM5芯片(羧甲基化的葡聚糖基質(zhì))進(jìn)行分析。流動細(xì)胞1是未涂覆的、阻斷的陰性對照，流動細(xì)胞2覆蓋HSA，流動細(xì)胞3覆蓋RSA，流動細(xì)胞4覆蓋MSA。將血清白蛋白固定于醋酸鹽緩沖劑pH5.5中，使用BIACORE覆蓋wizard,將其編程來瞄準(zhǔn)覆蓋材料的500共振單位(RU)。在大腸桿菌的周質(zhì)中以200mL-500mL規(guī)模表達(dá)每種目標(biāo)dAb并使用用于Vh的蛋白A-流線型親和樹脂(Amersham，UK)和用于Vk的蛋白L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)分批吸收從上清液中純化，接著用pH2.2的甘氨酸洗脫并緩沖交換至PBS。通過稀釋至BIACOREHBS-EP緩沖劑中來制備各種濃度的dAb(5nM至5fiM的范圍)并流動通過BIACORE芯片。通過使結(jié)合速率和解離速率曲線適合KD范圍內(nèi)dAb濃度產(chǎn)生的痕跡從BIACORE痕跡計算親和性(KD)。鑒定具有不同血清白蛋白親和性的dAb。10-100nM范圍內(nèi)包括的是DOM7h-8對HSA、DOM7h畫2對HSA和DOM7r-l對RSA的親和性。100nM至500nM范圍內(nèi)包括的是DOM7h-7對HSA、DOM7h-8對RSA和DOM7h-26對HSA的親和性。500nM至5fiM范圍內(nèi)包括的是DOM7h-23對HSA和DOM7h-l對HSA的親和性。圖6A-6C中包括了實例痕跡。實施例2.格式化抗血清白蛋白抗體作為與IL-1受體拮抗劑(IL-lra)的融合體該實施例描述了制備包括IL-lra和結(jié)合血清白蛋白的dAb的融合蛋白的方法。形成兩個融合體，一個具有IL-lra的dAbN-端(MSA16IL1-ra)和一個具有IL-1ra的dAbC-端(ILl-raMSA16)。融合體的次序和載體顯示于圖2C和2D中。還產(chǎn)生了沒有結(jié)合MSA的對照融合體，其序列顯示于圖2E中。KINERET(anakina、Amgen)具有4-6小時的短半衰期，推薦的劑量方案要求每日注射。該方案在71%的情況中在14-28天內(nèi)導(dǎo)致注射部位反應(yīng)。因此，具有較長血清半衰期的人IL-lra形式將是有益的并可以提高效率和降低給藥頻率。這些對于藥物學(xué)都是理想的特征?？寺『喍灾凑找韵略斒龅脑O(shè)計兩個多克隆位點(MCS)并插入具有T7啟動子的表達(dá)栽體中。設(shè)計限制位點用于ILl-ra、dAb、GAS前導(dǎo)和連接體的插入。一個(MCS1+3)編碼具有IL-lra的dAbN端的蛋白，另一個(MCS2+4)編碼具有ILlra的dAbC-端的蛋白。用于dAbIL-1ra融合體的克隆位點1+3Ndel、填充物、Sall、Notl、填充物、Xhol、BamHIgcgcatatgttagtgcgtcgacgtcaaaaggccatagcgggcggccgctgcaggtctcgagtgcgatggatcc(SEQIDNO:35)。用于ILl-radAb融合體的克隆位點2+4Ndel、填充劑、StUI、Sacl、填充劑、Sall、Notl、TAATAABamHIgcgcatatgttaagcgaggccttctggagagagctcaggagtgtcgacggacatccagatgacccaggcggccgctaataaggatccaatgc(SEQIDNO:36)然后通過使用合適的限制酶消化MCS和連接編碼前導(dǎo)的退火引物將GAS前導(dǎo)插入每個載體中。接著，以相似的方式插入編碼連接體的連接體DNA。通過PCR(使用設(shè)計來添加所需限制位點的引物)從cDNA克隆獲得編碼IL-lra的DNA并插入TOPO克隆載體。通過核酸測序證實正確序列后，從TOPO載體切除編碼IL-lra的DNA并連接含有前導(dǎo)和連接體的載體。最后，從dAb表達(dá)載體切除編碼dAb的DNA并通過插入片段(通過凝膠過濾純化的)和載體的SalI/Notl消化插入栽體。表達(dá)和純化在大腸桿菌的周質(zhì)中表達(dá)MSA16ILl-ra、ILl-raMSA16和偽IL-lra并使用蛋白L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)的分批吸收接著用pH2，2甘氨酸洗脫從上清液中純化。然后通過SDS-PAGE凝膠電泳接著庫馬西染色分析純化的dAb。對于蛋白質(zhì)之一(IL-lraMSA16)，>90%的蛋白質(zhì)是預(yù)期大小的并因此分析活性而不需要進(jìn)一步的純化。另一種蛋白(MSA16ILl-ra和偽IL-lra)受到較小條帶的污染并因此在pH9的RESOURSEQ離子交換柱上通過FPLC離子交換色譜來進(jìn)一步純化。使用0-500mMNaCl的線性鹽梯度來洗脫蛋白質(zhì)。通過SDS-PAGE凝膠電泳分析后，合并含有預(yù)期大小蛋白質(zhì)的級分，產(chǎn)生>卯％純度的合并部分。將該蛋白質(zhì)用于進(jìn)一步的分析。實施例3.dAbILl-ra融合體體外活性的測定MRC-5IL-8測定測試MSA16IL-lra融合體中和通過MRC-5細(xì)胞中的IL-l(ATCC登錄號No.CCL-171;美國典型培養(yǎng)收集中心，Manassas，VA)誘導(dǎo)IL國8分泌的能力。該方法改編自Akeson，L.等(1996)JournalofBiologicalChemistry271，30517-30523，其描述了HUVEC中通過1L畫1誘導(dǎo)IL-8，使用MRC-5來替代HUVEC細(xì)胞系。簡而言之，用dAbIL-lra融合蛋白質(zhì)或IL-lra對照，和IL-l(100pg/mL)將涂布于微量滴定平板中的MRC-5細(xì)胞孵育過夜。孵育后，將上清液從細(xì)胞中吸出并通過夾層ELISA(R&DSystems)來測量IL-8濃度。融合蛋白中IL-lra的活性導(dǎo)致IL-8分泌的降低。將MSA16IL1-ra融合體的活性和IL-lraMSA16的活性引起的IL-8分泌降低與使用IL-lra對照(重組人IL-lra，R&D系統(tǒng))所觀察到的降低相比較。測定每種測試蛋白的中和劑量50(ND5。)并列于表2中。表2蛋白質(zhì)鼎soIL誦lra0.5nMMSA16IL國lra2nMIL-lraMSA168nM結(jié)果證明了IL-lra作為具有抗血清白蛋白dAb的融合構(gòu)建體的一部分保留了活性。進(jìn)一步研究MSA16IL-lra蛋白來測定其藥物動力學(xué)(PK研究)。血清白蛋白、抗IL-lra夾層ELISA測三種dAb/IL-lra融合體結(jié)合血清白蛋白的能力并同時通過單克隆抗-ILra抗體來檢測。測試的融合體是MSA16IL-lra、IL-lraMSA16和偽IL-lra。簡而言之，用10jig/ml的小鼠血清白蛋白覆蓋ELISA平板過夜，用0.05%吐溫PBS洗滌5x，然后用4%MarvelPBS阻斷1小時。阻斷后，用0.05"/0吐溫PBS將平板洗滌5x，然后用稀釋于4%MPBS中的dAb、IL-lra融合體各自孵育1小時。以l^M濃度和7個連續(xù)4-倍稀釋度(即降至60pM)來孵育每種融合體。孵育后，用0.05%吐溫PBS洗滌5x，然后用制造商推薦的稀釋于4%MPBS中的兔子多克隆抗體(ab-2573)對人IL-1受體拮抗劑(Abcam，UK)的稀釋度孵育1小時。該孵育后，用0.05%吐溫PBS將平板洗滌5x，然后用稀釋于4%MPBS中的1/2000稀釋度的二抗(抗兔子IgG-HRP)孵育lh。用二抗孵育后，用0.05°/吐溫PBS將平板洗滌3x和PBS洗滌2x，然后用每孔50jdTMB微孔過氧化物酶底物(KPL，MA)發(fā)展并用每孔50nlHCl來停止反應(yīng)。在450nM處閱讀吸收值。在夾層ELISA中以1jiM濃度在高于2x背景水平來檢測MSA16IL-lra和IL-lraMSA16蛋白質(zhì)。在降至3.9nM的稀釋度在2x背景或更高來檢測MSA16IL-lra，而僅在降至500nM的2x背景來檢測IL-lraMSA16蛋白質(zhì)。顯示出MSA16IL-lra融合體與血清白蛋白的結(jié)合對于血清白蛋白是特異性的，因為對照構(gòu)建體(偽IL-lra)沒有結(jié)合血清白蛋白。實施例4.小鼠PK研究中藥物融合體血清半衰期的測定A.小鼠中MSA結(jié)合dAb/HA抗原決定部位標(biāo)記融合蛋白的血清半衰期的測定在大腸桿菌的周質(zhì)中表達(dá)MSA結(jié)合dAb/HA抗原決定部位標(biāo)記融合蛋白并使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)的分批吸收接著用pH2.2的甘氨酸洗脫來純化。在單次靜脈內(nèi)(i.v.)注射約1.5mg/kg至CD1柱系雄性動物后在小鼠中測定融合蛋白的血清半衰期。使用山羊抗-HA(Abcam,UK)捕獲和用4°/。Marvel阻斷的蛋白質(zhì)L-HRP(Invitrogen，USA)檢測通過ELISA來檢測血清水平。用0.05"/。吐溫-20PBS洗滌。在lx小鼠血清存在下設(shè)定已知濃度MSA結(jié)合dAb/HA融合體的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確保與測試樣品的相容性。用1區(qū)隔模型的模型化(WinNonlinSoftware,PharsightCorp"USA)顯示出MSA結(jié)合dAb/HA抗原決定部位標(biāo)記融合蛋白具有29.1小時的終止期tl/2和559hr.ng/ml的曲線下面積。這證明了超過短為僅有幾分鐘的HA抗原決定部位標(biāo)記肽單獨的預(yù)定半衰期內(nèi)的極大提高。該使用HA抗原決定部位標(biāo)記作為藥物模型的研究結(jié)果，證明了將藥物制為具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物時，可以延長藥物的體內(nèi)血清半衰期。還測定了小鼠中抗-MSAdAbDOM7m-16和DOM7m-26，和沒有結(jié)合MSA的對照dAb的體內(nèi)半衰期。再者，含有HA抗原決定部位標(biāo)記的DOM7m-16、DOM7m-26和對照dAb，作為藥物(例如，肽藥物)模型。該研究中，沒有結(jié)合MSA的對照dAb，具有20分鐘的體內(nèi)半衰期，而DOM7m-16和DOM7m-26的體內(nèi)半衰期明顯延長。(圖12)在進(jìn)一步的研究中發(fā)現(xiàn)DOMm-16在小鼠中具有29.5小時的體內(nèi)半衰期。另一個研究中，評價了小鼠中含有HA抗原決定部位標(biāo)記的DOM7h-8的體內(nèi)半衰期(tl/2P)。用2個區(qū)隔模型(WinNonlinSoftware,PharsightCorp"USA)的模型化顯示出DOM7h-8具有29.1小時的tl/2p。這些使用HA抗原決定部位標(biāo)記作為藥物(例如，肽藥物)模型研究中的每一個結(jié)果證明了將藥物制為具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物時，藥物的體內(nèi)血清半衰期顯著延長。B.小鼠中MSA結(jié)合dAb/IL-lra融合蛋白的血清半衰期的測定在大腸桿菌的周質(zhì)中表達(dá)MSA結(jié)合dAb/IL-lra融合蛋白(MSA16IL-lra)并使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)的分批吸收接著用pH2.2的甘氨酸洗脫來純化。在單次i.v.注射約1.5mg/kg至CD1柱系雄性動物后測定了小鼠中MSA16IL-lra(DOM7m-16/IL-lra)、具有沒有結(jié)合MSA的dAb的IL-lra融合體(偽dAb/IL-lra)和融合HA抗原決定部位標(biāo)記物的抗-MSAdAb(DOM7m-16HA標(biāo)記物)的體內(nèi)半衰期。通過IL-lra夾層ELISA(R&DSystems,USA)分析血清水平。在lx小鼠血清存在下設(shè)定已知濃度dAb/IL-lra融合體的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確保與測試樣品的相容性。使用WinNonlin藥物動力學(xué)軟件(PharsightCorp.,USA)來進(jìn)行模型化。預(yù)期與非MSA結(jié)合dAb與IL-lra的融合體的對照相比較時，與抗-MSAdAb的IL-lra融合體將顯著提高血清半衰期。預(yù)測對照非MSA結(jié)合dAb/IL-lra融合體具有短的半衰期。研究的結(jié)果列于表3中，并顯示出具有抗MSAdAb的IL-lra融合體(DOM7m-16/IL-lra)具有比具有沒有結(jié)合MSA的dAb的IL-lra融合體(偽dAb/IL-lra)長約10倍的血清半衰期。結(jié)果還揭示了與偽/IL-lra(AUC:1.5hr小g/ml)相比較，對于DOM7m-16/IL-lra存在>200倍的濃度時間曲線下面積的提高(增加)(AUC:267hr.ng/ml)。表3試劑血清半衰期DOM7m-16/IL-lra4.3小時偽/IL國lra0.4小時DOM7m-16HA標(biāo)記物29小時這些研究的結(jié)果證明了將藥物制為具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物時，藥物的體內(nèi)血清半衰期顯著延長。實施例5.大鼠中RSA結(jié)合dAb/HA抗原決定部位標(biāo)記融合蛋白的血清半衰期的測定在大腸桿菌的周質(zhì)中表達(dá)具有C-端HA的抗大鼠血清白蛋白dAb，并使用用于VkdAb的蛋白質(zhì)L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)的分批吸收和用于VHdAb的蛋白質(zhì)A親和樹脂的分批吸收，接著用pH2.2的甘氨酸洗脫來純化。為了測定血清半衰期，將一組4只大鼠給予單次i.v.注射1.5mg/KgDOM7r-27、DOM7r-31、DOM7r-16、DOM7r-3或結(jié)合無關(guān)抗原的對照dAb(HEL4)。通過在7天時間段內(nèi)從尾巴連續(xù)抽血來獲得血清樣品并使用覆蓋于ELISA平板上的山羊抗-HA(Abeam,CambridgeUK)的夾層ELISA，接著用蛋白A-HRP(用于VHdAb)或蛋白L-HRP(用于VkdAb)檢測來分析。在lx大鼠血清存在下設(shè)定已知濃度dAb的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確保與測試樣品的相容性。使用2個區(qū)隔模型的模型化(使用WinNonlin藥物動力學(xué)軟件(PharsightCorp.,USA)的模型化來計算tl/2卩和曲線下面積(AUC)(表4)。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>該使用HA抗原決定部位標(biāo)記作為藥物模型的大鼠研究的結(jié)果，證明了將藥物制為具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物時，藥物的體內(nèi)血清半衰期顯著延長。人體中半衰期的預(yù)測可以4吏用類比法(allometricscaling)從動物獲得的半衰期數(shù)據(jù)來計算人體中dAb、藥物融合體或藥物綴合物的體內(nèi)半衰期。將3種動物中測定的體內(nèi)半衰期的對數(shù)對動物體重的對數(shù)作曲線。通過繪制的點畫一條直線，并將直線的斜率和y-截距用于計算人體內(nèi)的體內(nèi)半衰期，使用公式logY=log(a)+blog(W)，其中Y是人體內(nèi)的體內(nèi)半衰期，log(a)是y-截距，b是斜率，W是人的體重。使用體重約35克(例如，小鼠)、約260克(例如，大鼠)和約2710克的動物中獲得的體內(nèi)半衰期數(shù)據(jù)來產(chǎn)生直線。對于該計算，可以考慮人的體重為70,000克?；谠谛∈蠛痛笫笾蝎@得的半衰期值，預(yù)計結(jié)合人血清白蛋白的dAbs例如DOM7h-8具有約5.5小時-約40小時的tl/2p,以及在人中約150hr.|ug/mL-約2500hr.|ug/mL的AUC。實施例6.膠原誘導(dǎo)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)炎模型小鼠中抗-SAdAb/IL-lra藥物融合體的功效測定了融合DOM7m-16/IL-lra和IL-lra在公認(rèn)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型中(DBA/1小鼠中的II型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA))的功效。在整個研究中，將小鼠飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)2型籠子的測試設(shè)備中，圏養(yǎng)于20-24"C的HEPA-過濾的Scantainer中，使用12-小時亮12-小時暗的循環(huán)周期。隨意提供食物(Harlan-Teklad通用膳食201M和UV滅菌的水。在開始研究前將小鼠放入測試設(shè)備中至少7天來確保合適的適應(yīng)(acclimitization)。將7-8周大的DBA/1小鼠(從TaconicM和B獲得，Domholtveg，Denmark)注射一次以1:1比例乳化直至乳濁液穩(wěn)定的Arthrogen-CIA佐劑和Arthrogen-CIA膠原(兩者都是MDbiosceiences)的乳濁液。認(rèn)為將一滴乳濁液加入一燒杯水中形成固體塊時，乳濁液是穩(wěn)定的。然后給小鼠注射乳濁液。乳濁液注射二十一天后，從研究中除去20只關(guān)節(jié)炎疾病最嚴(yán)重的動物，將剩余的小鼠分成10只動物一組(每組含有5只雄性和5只雌性)。如表5中所示的處理小鼠，所有處理以計算的濃度來傳送，使得給藥10ml/Kg。表5組處理1IL-lra,lmg/Kg(腹膜內(nèi)(ip.)快速濃注)2IL-lra,10mg/Kg(ip.快速濃注)3DOM7m-16/IL-lra,lmg/Kg(ip.快速濃注)4DOM7m-16/IL-lra,10mg/Kg(ip.快速濃注)5ENBREL(entarecept;ImmunexCorporation),5mg/Kg(ip.快速濃注)6鹽水(陰性對照)，10ml/Kg(ip.快速濃注)7地塞米松(陽性對照)，0.4mg/Kg(皮下注射)從第21天至第49天每周記錄關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度的臨床評分3次。在第49天將小鼠安樂死。如果存在12或更高的關(guān)節(jié)炎分值或具有嚴(yán)重的活動問題，將個別小鼠提前安樂死。對于臨床評分，根據(jù)以下的標(biāo)準(zhǔn)將每肢評分并將全部四肢的分值相加來產(chǎn)生該小鼠的總分。該方法對于每只小鼠得到0至16的分值。評分標(biāo)準(zhǔn)為0=正常；1=輕度但的腳踝或腰有一定的紅腫，或限于個別足趾的明顯紅腫，與受影響足趾的數(shù)目無關(guān)；2=腳踝和腰的中度紅腫；3=整個爪包括足趾的嚴(yán)重紅腫；4=涉及多個關(guān)節(jié)的最大發(fā)炎肢。使用來自個體小鼠的臨床分值計算每個處理天每個處理組的組平均關(guān)節(jié)炎分值。將出于倫理原因從研究中退出的任何動物定位于最大16的分值。將組平均關(guān)節(jié)炎分值對時間作圖(圖13)。使用Wilcoxon測試進(jìn)行笫49天的組平均關(guān)節(jié)炎分值的統(tǒng)計學(xué)分析。該統(tǒng)計學(xué)分析揭示了與鹽水對照組(組6)相比較時，用DOM7m-16/IL-lra(lmg/Kg或10mg/Kg(組3和4)處理的兩個組在第49天已經(jīng)顯著提高了關(guān)節(jié)炎分值(各自為p〈:r/。和p〈o.osn/o顯著水平)。相反，用lmg/KgIL-lra的處理(組1)在第49天沒有導(dǎo)致顯著提高關(guān)節(jié)炎分值，而用10mg/KglL-lra的處理(組2)在P〈5。/c)的顯著水平導(dǎo)致顯著提高。用ENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)的處理(組5)在第49天在P〈10。/o的顯著水平導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎分值顯著提高。與使用5mg/KgENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)的標(biāo)準(zhǔn)處理(組5)相比較時，用10mg/Kg劑量DOM7m-16/IL-lra的處理(組4)，在第49天提高關(guān)節(jié)炎分值中是有效的(在P<0.5%水平的顯著性)。此外，用較低lmg/Kg劑量DOM7m-16/IL-lra的處理(組3)在笫49天提高關(guān)節(jié)炎分值中比用相同劑量IL-lra單獨處理(組l)(在P〈10。/o水平的顯著性)更有效。研究的結(jié)果表明在該研究中特定劑量的DOM7m-16/IL-lra比IL-lra或ENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)更有效。對IL國lra的應(yīng)答是劑量依賴性的，和預(yù)期的一樣，對DOM7m-16/IL-lra的應(yīng)答也是劑量依賴性的。用lmg/KgDOM7m-16/IL-lra治療的平均分值顯著低于用10mg/kgIL-lra治療獲得的平均分值。這些圖示的結(jié)果(圖13)表明在該研究中用DOM7m-16/IL-lra的處理約比IL-lra有效IO倍。即使DOM7-16/IL-lra融合蛋白含有約一半數(shù)量的IL-1受體結(jié)合抗原決定部位，觀察到DOM7m-16/IL-lra這種上等的功效，如重量基的IL-lra(例如，lmg的DOM7m-16/IL-lra(MW-31.2kD)含有約一半數(shù)量的IL-1受體結(jié)合抗原決定部位作為lmg的IL-lra(MW-17.1kD)。該研究的結(jié)果證明了結(jié)合血清白蛋白的dAb可以連接IL-lra(對于RA臨床上證明有效的療法)且所得到的藥物融合體具有長的血清半衰期特征(dAb給予的)和IL-1受體結(jié)合特征(IL-lra給予的)。由于藥物融合體的血清停留時間，治療CIA有效的DOM7-16/IL-lra的劑量相對于IL-lra顯著降低。該研究的結(jié)果證明了除了延長的半衰期和提高的AUC的益處，以具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物制備的藥物是提供超過藥物單獨優(yōu)勢的高度有效的治療劑。例如，如在小鼠CIA模型中證明的，較低劑量的藥物融合體是有效的并與IL-lra單獨相比較，抑制了關(guān)節(jié)炎癥和由IL-1引起的關(guān)節(jié)損傷更長的時間段，并提供了更大的對抗疾病進(jìn)程的保護(hù)。實施例7.抗SAdAb/Saporin非共價藥物綴合物核糖體-滅活蛋白Saporin(抗癌藥物)對變性劑和蛋白酶是高度穩(wěn)定的并已經(jīng)用作T淋巴細(xì)胞的靶向毒素。通過生物素-抗生蛋白鏈菌素連接結(jié)合Saporin和DOM7h-8來制備非共價藥物綴合物。用該非共價藥物綴合物獲得的結(jié)果證明了與藥物結(jié)合時DOM7h-8保留了血清白蛋白結(jié)合特征。通過在HB2151細(xì)胞中重組核酸的表達(dá)來制備各種稱為DOM7h-8cys的DOM7h-8變體，其中位置108(SEQIDNO:24的氨基酸108)的C-端精氨酸由半胱氨酸殘基替代。使細(xì)胞生長并在通過離心回收上清液之前在過夜表達(dá)自體資導(dǎo)TBreadymix(MerckKGa，Germany)中30TC誘導(dǎo)72小時。使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖上的親和性捕獲從上清液中純化DOM7h-8cys。然后用10柱體積2xPBS洗滌樹脂并用0.1MpH2的甘氨酸洗脫DOM7h-8cys。用0.2x體積的TrispH8中和洗脫的DOM7h-8cys并濃縮至lmg/ml(使用CENTRICON20ml濃縮器(MilliporeCorp.，MA)。使用NAP5脫鹽柱(CEHealthcare/AmershamBiosciences,NJ)將濃縮的DOM7h-8cys緩沖交換至PBS并測定濃度。然后使用EZ-LINK磺-NHS-LC-生物素(PierceBiotechnologyInc.,IL)將dAb生物素化(通過伯胺)。將生物素化dAb與抗生蛋白鏈菌素-saporin以1:1的摩爾比混合。為了證實形成了dAb/saporin復(fù)合物，使用夾層ELISA來檢測完整的復(fù)合物。以每孔lOOjil體積的10|ig/ml將人血清白蛋白(HAS)覆蓋在ELISA平板(Nunc,NY)的一半孔上過夜。在過夜孵育后，用PBS、0.05%吐溫洗滌平板3次，然后用2%PBS將整個平板阻斷。阻斷后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBS中至0.5nM的DOM7h-8/saporin非共價綴合物孵育1小時。作為相同ELISA平板上的對照，將0.5iM未結(jié)合的saporin和0.5jiM未結(jié)合的DOM7h8在2%吐溫PBS中孵育。另外的對照是在沒有覆蓋HAS并用2%吐溫阻斷的ELISA平板的孔上孵育的相同三種稀釋的蛋白質(zhì)。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBS中1/2000稀釋度的山羊抗-saporin多克隆抗體(AdvancedTherapeuticSystems)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05o/o吐溫將平板洗滌3次，然后用檢測二抗(1/2000的抗山羊IgHRP綴合物)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，用PBS洗滌一次，在紙上輕叩干燥。用lOOjil3，3，，5，5，-四甲基聯(lián)苯胺作為底物來發(fā)展ELISA,并用50nl1M鹽酸停止反應(yīng)。通過比較綴合物和任一個未綴合部分的OD600來證實DOM7h-8和saporin的非共價綴合物的存在。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table>該研究的結(jié)果證明了藥物可以綴合結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，且綴合的抗原結(jié)合片段保持血清白蛋白結(jié)合活性。此外，由于生物素-抗生蛋白鏈菌素的穩(wěn)定性和強(qiáng)度，結(jié)果顯示出可以制備共價鍵合的和非共價鍵合的綴合物保持結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的結(jié)合血清白蛋白活性。實施例8.抗-SAdAb/熒光素綴合物熒光素異硫氰酸鹽(FITC)可以與蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑基、酪氨?；螋驶宦?lián)。其具有389Da的分子量，這在大小上與許多小分子藥物是相容的。用該綴合物獲得的結(jié)果證明了抗-sadAb結(jié)合小化學(xué)部分時保持了血清白蛋白結(jié)合特征，并表示小分子藥物可以綴合抗國SAdAb。按照實施例7中所述的制備濃縮的DOM7h-8cys。使用NAP5脫鹽柱(CEHealthcare/AmershamBiosciences,NJ)將濃縮的dAb緩沖交換至50mMpH8硼酸鹽中(結(jié)合緩沖劑)，然后使用2mlCENTRICO濃縮器濃縮至2.3mg/ml(MilliporeCorp.,MA)。根據(jù)制造商的說明將FITC(PierceBiotechnologyInc.)稀釋于二曱基曱酰胺(DMF)中至10mg/ml，然后與dAb在結(jié)合緩沖劑中以24:1FITC:dAb的摩爾比混合。使反應(yīng)進(jìn)行30分鐘。在這點上，使用PBS預(yù)先平衡的PD10脫鹽柱(GEHealthcare/AmershamBioscinces,NJ)從反應(yīng)中除去過量的未反應(yīng)FITC，并用PBS洗脫DOM7h-8cys/FITC綴合物。為了證實FITC/dAb結(jié)合反應(yīng)是成功的，使用夾層ELISA來檢測結(jié)合的dAb。以每孔lOOjil體積的10pg/ml將人血清白蛋白(HAS)覆蓋在ELISA平板(Nunc,NY)的一半孔上過夜。過夜孵育后，用PBS、0.05%吐溫將整個平板洗滌3次，然后用2%吐溫PBS將全部孔阻斷2小時。阻斷后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBS中至ljiM的DOM7h-8cys/FITC孵育1小時。作為相同ELISA平板上的對照，在2%吐溫PBS中孵育1jiM的對照FITC結(jié)合的抗體和ljiM的未結(jié)合的DOM7h-8。另外的對照是未覆蓋HAS并用2%吐溫阻斷的ELISA平板的孔上孵育的相同三種稀釋的蛋白質(zhì)。孵育后，用PBS、0.05°/吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBS中的l/500稀釋度的大鼠FITC抗體(Serotec)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBSzhong的檢測二抗(1/5000抗大鼠IgHRP綴合物)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，用PBS洗滌一次，在紙上扣干。用lOOfil3，3，，5，5，-四甲基聯(lián)苯胺作為底物來il1M鹽酸停止反應(yīng)。通過比較綴合物和任一個未綴合部分的OD600來證實DOM7h-8和saporin的非共價綴合物的存在。表7DOM7h-8/FITCDOM7h-8單獨綴合FITC的抗體(陰性對照)OD600(覆蓋HAS的平板)0.3800.0420.049OD600(用2%吐溫PBS阻斷的平板)0.0410.0410.045實施例9.抗-SAdAb/肽綴合物許多肽具有治療效果。將具有N或C-端半胱氨酸的模型肽結(jié)合抗血清白蛋白dAb。在這種情況中，使用四種不同的肽肽1YPYDVPDYAKKKKKKC(SEQIDNO:64);肽2CKKKKKKYPYDVPDYA(SEQIDNO:65);肽3HHHHHHKKKKKKC(SEQIDNO:66)和肽4:CKKKKKKHHHHHH(SEQIDNO:67)。肽1和2包括血球凝集素標(biāo)記(HA標(biāo)記)的序列，肽3和4包括His標(biāo)記的序列。按照實施例7中所述的制備濃縮的DOM7h-8cys。用5mM二硫蘇糖醇還原濃縮的dAb,然后使用NAP5脫鹽柱(GEHealthcare/AmershamBiosciences,NJ)將緩沖交換至結(jié)合緩沖劑(20mMBisTrispH6.5，5mMEDTA，10%甘油)。寸吏用終濃度為5mM二硫代二吡啶阻斷半胱氨酸(來防止dAb與其自身二聚)，將其加入dAb溶液形成DMSO中l(wèi)OOmM二硫代二吡啶的儲液。使dAb和二硫代二吡啶來結(jié)合20-30分鐘。然后使用PD10脫鹽柱來除去未反應(yīng)的二硫代二吡啶，并將dAb洗脫于結(jié)合緩沖劑(20mMBisTrispH6.5，5mMEDTA，10%甘油)中。然后將所得到的蛋白質(zhì)冷凍直至需要。將肽1-4以200nM的濃度分別溶解于水中，使用5mMDTT來還原，然后使用NAP5脫鹽柱(GEHealthcare/AmershamBiosciences,NJ)來脫鹽。然后以20:1的比例將每種肽加入還原和阻斷的dAb的溶液中，用于產(chǎn)生肽-dAb結(jié)合。為了證實肽、dAb結(jié)合反應(yīng)的成功，使用夾層ELISA來檢測抗-SAdAb/肽綴合物。以每孔lOOpl體積的10[ig/ml將人血清白蛋白涂覆于ELISA平板(Nunc,NY)上過夜。過夜孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用4%MarvelPBS阻斷2小時。阻斷后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于4%MarvelPBS中至ljiM的DOM7h-8/肽孵育1小時。作為相同ELISA平板上的對照，在4。/。MPBS中孵育20pM未結(jié)合的肽和lfiM未結(jié)合的DOM"7h-8。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用1/2000稀釋度的用于肽1和2的山羊抗HA抗體(Abcam)，和稀釋于4%MarvelPBS中的1/2000稀釋度的NiNTA-HRP(用于肽3和4)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，并稀釋于4%MPBS中1/2000的抗山羊HRP二抗將含有山羊抗HA抗體的孔孵育lh(其他孔阻斷l(xiāng)h)。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，用PBS洗滌一次，然后在紙上扣干。用100fil3，3，，S，S，-四甲基聯(lián)苯胺作為底物來發(fā)展ELISA，并用1M鹽酸停止反應(yīng)。通過比較綴合物和任一個未綴合部分的OD600來證實DOM7h-8/肽綴合物的綴合物的存在。實施例10該預(yù)測實施例描述了用于生產(chǎn)、純化和表征蛋白融合體的核實合適方法，該融合體包括人PLAD功能域和結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白可變區(qū)。將產(chǎn)生融合蛋白質(zhì)，其中將人TNFR1(PLAD功能域)的配體結(jié)合前聚集域與結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白可變區(qū)(DOM7h-8)融合(產(chǎn)生PLAD-DOM7h-8)，或其中將PLAD與結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白可變區(qū)的C-端相融合(產(chǎn)生DOM7h-8-PLAD)。PLAD的氨基酸序列源自從人文庫分離的cDNA序列，并且是SEQIDNO:85的氨基酸殘基1-51。DOM7h-8的氨基酸序列是SEQIDNO:24。將在三種不同的表達(dá)生物體中表達(dá)這些蛋白質(zhì)大腸桿菌(五c/iw/c似fl"http://)、曱醇酵母(尸/cA/fl/7flW0r&)和哺乳動物細(xì)胞如HEK293細(xì)胞，在各種體外測定和體內(nèi)研究中純化和測試的。以下核苷酸序列編碼SEQIDNO:85的氨基酸殘基1-51:cctc八cctaggggac;agqgagaagagagata。tototgtccccaaggaaaatatatccaccctcaaaataattcoatttgctgtaccaagtqccacaaax3oaacctaotgtacaatgactqtccag0cccgc3ggcaggatacggactgcagg(seqidno!9s〉以下核苷酸序列編碼DOM7h-8:gacatccagatoaccc人gtctcc八tcctccctgtctgcatctotaggagacc。TGTCACCATCACTTGCCOCK3CAAGTCA(3A(3CATTAOCAGCT八tttaaattggtatcagcagaaaccago。aaagcccctaagctcctgatctatcggaattcccctttgcaaa(3TGQGGTCCCATCACGTTTC入gtggcagtwatCraQGACA。ATTTCAC丁CTCACCATCAGCAOTCTGCAACCTGAA。ATTTTGCrACGTACTACTGTCAACAGACOrATAGQGT0CCTCCTACGTTCGGCCAagqgaccaaggtgoaaatcaaacgg(seq]dno:99)融合基因構(gòu)建、克隆和表達(dá)通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)產(chǎn)生融合基因產(chǎn)物，其中在兩個分開的反應(yīng)中擴(kuò)增兩個基因，是用含有重疊序列的一對引物。還使用重疊序列來引入各種長度的多肽連接序列和組合物(例如，彈性的六氨基酸肽，如Thr-Val-Ala-Ala-Pro-Ser(SEQIDNO:100)。通過稱為SOE-PCR("重疊延伸拼接PCR")的方法將這樣形成的兩種PCR產(chǎn)物融合在一起，其中將兩個模板混合在一起(1:1比例)并在引物不存在下接受幾輪PCR擴(kuò)增。然后將新形成的融合的PCR產(chǎn)物進(jìn)一步通過PCR擴(kuò)增，使用包括至少完整融合基因的一對外部引物。用反應(yīng)位點特異性的限制性內(nèi)切酶消化基因融合產(chǎn)物、純化并隨后連接用于表達(dá)系統(tǒng)的合適載體的多個克隆位點，與載體中任何所需的氨基端分泌和加工序列融合。表9中給出了用于每個反應(yīng)來產(chǎn)生融合基因的引物，融合基因編碼具有編碼6氨基酸連接體(ThrValAlaAlaProSer(SEQIDNO:100))的插入DNA片段的融合蛋白。表io種給出了引物的序列。將使用的載體是用于五."/Z的pUC119:在框內(nèi)作為氨基-端前導(dǎo)序列來克隆酵母錨定的表面蛋白分泌信號(GAS)以瞄準(zhǔn)融合產(chǎn)物對周質(zhì)(半胱氨酸氧化形成二硫鍵的合適環(huán)境)的表達(dá)。通過E.coli信號肽酶除去前導(dǎo)序列來留下PLAD-DOM7h-8或DOM7h-8-PLAD融合產(chǎn)物的天然氨基端。通過P^啟動子來驅(qū)動該系統(tǒng)中的表達(dá)并通過將0.05至lmM終濃度的異丙基-硫代-(3-半乳糖苷(IPTG)加入指數(shù)生長培養(yǎng)物中來誘導(dǎo)表達(dá)。用于哺乳動物細(xì)胞(如HEK293T細(xì)胞)中表達(dá)的pDOM32:克隆PLAD-DOM7h-8(或DOM7h-8-PLAD)，使得融合產(chǎn)物在框內(nèi)具有V-J2-C分泌信號序列。通過HEK-293細(xì)胞中pDOM32的CMV啟動子在組成型上驅(qū)動表達(dá)。分泌時，除去信號肽來產(chǎn)生完整融合蛋白，在氨基端不具有另外的氨基酸。用于五.co//的pET23:PLAD國DOM7h-8(或DOM7h國8-PLAD)作為可溶性蛋白在五.co//細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，在IPTG誘導(dǎo)時沒有使用任何前導(dǎo)。蛋白質(zhì)在融合產(chǎn)物的N-端具有另外的氨基端曱硫氨酸殘基。通過將0.05至lmM終濃度的異丙基-硫代-P-半乳糖苷(IPTG)加入指數(shù)生長培養(yǎng)物中來誘導(dǎo)該系統(tǒng)中的表達(dá)。用于甲醇酵母中表達(dá)的pPICZa:在框內(nèi)克隆PLAD-DOM7h-8(或DOM7h-8-PLAD)，使用酵母a交配型因子前導(dǎo)序列來指導(dǎo)分泌至培養(yǎng)上清液。在分泌時通過Kex2和Stel3蛋白酶除去前導(dǎo)序列來留下蛋白質(zhì)，在氨基-端不具有另外的氨基酸。通過將100%曱醇加入培養(yǎng)基中(0.5%至2.5%終體積)來誘導(dǎo)該系統(tǒng)中的表達(dá)。使用5Vi//和7VW/將重組融合基因克隆至pUC119的多克隆位點中，使用5flw好/和好/wrf///克隆至pDOM32中，和使用ATi0/和iVW/克隆至pPICZa中。首先將含有插入片段的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至五.co//細(xì)胞中。然后除去質(zhì)粒并將目標(biāo)基因測序來證實正確基因序列的存在。然后大量制備質(zhì)粒并用于轉(zhuǎn)化至合適的細(xì)胞中用于蛋白質(zhì)表達(dá)。用于使用pUC119載體表達(dá)的合適細(xì)胞選自以下TG1、TB1、HB2151、XL-lBlue、DH5、UT5600、W3110等。用于使用pDOM32栽體表達(dá)的合適細(xì)胞選自以下HEK293T細(xì)胞、NS1、COS、CHO等。用于使用pET23載體表達(dá)的合適細(xì)胞選自一下BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、PL21(DE3)pLysE、BL21Tuner、Origami、Rosetta等。用于使用pPICZa載體表達(dá)的合適細(xì)胞選自以下KM71H、X33。使用基于pUC119-、pDOM32-和pPICZa的表達(dá)，在培養(yǎng)物上清液中分泌融合產(chǎn)物。因此，表達(dá)后，將培養(yǎng)物離心來沉淀細(xì)胞。收集上清液，過濾來除去剩余細(xì)胞并直接處理用于純化。使用基于pET-23的表達(dá)，將融合產(chǎn)物作為包含體累積至周質(zhì)中。根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備包含體，包括細(xì)胞裂解步驟和幾次洗滌步驟來清洗包含體。通過加入高濃度的變性劑(例如，脲、鹽酸胍)和還原劑(例如，DTT、p-巰基乙醇、TCEP)。根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行融合產(chǎn)物的再折疊，通過在緩沖劑中使用遞減含量的變性劑的緩慢滲析，或通過再折疊緩沖劑中的快速滲析?？梢詫⑻砑觿┤鏛-精氨酸、甘油、蛋白酶抑制劑如PMSF和氧化-還原劑如GSH和GSSG加入再折疊緩沖劑中來提高再折疊產(chǎn)量。融合蛋白的純化在尸e/^Wf印^coccfl/蛋白質(zhì)L瓊脂糖柱上親和純化融合蛋白質(zhì)。這利用了PLAD-DOM7h-8(或DOM7h-8-PLAD)融合蛋白的免疫球蛋白可變區(qū)成分和蛋白質(zhì)L之間的特異性高親和性相互作用。通常，將樣品裝載于中性PH的蛋白質(zhì)L柱上。然后在中性pH用高鹽洗滌柱子，通過加入低pH緩沖劑來洗脫樣品。收集洗脫的樣品并中和pH。通過陽離子-或陰離子-交換、大小排阻色譜、疏水性相互作用色譜或其他合適方法來除去任何剩余污染物。通過氨基端測序和MALDI-質(zhì)譜分析來證實純化融合蛋白質(zhì)的同一性，使得獲得的序列和質(zhì)量與基于DNA序列預(yù)測的那些。融合蛋白質(zhì)的活性然后測定具有任何連接體的融合產(chǎn)物的生物活性。PIAD話遂用純化的PLAD陽DOM7h國8(或DOM7h畫8-PLAD)融合蛋白預(yù)先孵育人MRC-5細(xì)胞，使得PLAD功能域可以在細(xì)胞表面上形成與TNFR1的抑制復(fù)合物。然后用人TNF-a處理細(xì)胞，并在37TC孵育。然后使用IL-8ELISA測量應(yīng)答TNF刺激分泌MRC-5的IL-8含量。通過劑量應(yīng)答性的IL-8分泌抑制來表示融合蛋白質(zhì)的PLAD活性。戎j&^-f對于PLAD-DOM7h-8(或DOM7h-8-PLAD)融合蛋白對血清白蛋白親和性的分析，將CM-5BIAcore芯片在pH5.5結(jié)合約500共振單位的白蛋白并通過將稀釋于BIAcoreHBS-EP緩沖劑中的純化融合蛋白質(zhì)以5nM至5jiM流過BIAcore芯片來產(chǎn)生結(jié)合曲線。通過將on-rate和off-rate曲線式和美中融合蛋白1^范圍內(nèi)產(chǎn)生的痕跡來計算親和性(KD)，并與融合伴侶(作為分開的分子實體)不存在下的DOM7h-8的親和性相比較(Kd:人血清白蛋白為70nM)。秀參^力夢^^&:將幾組4只一組的大鼠給予靜脈內(nèi)快速濃注1.5mg/kg融合蛋白或結(jié)合血清白蛋白的對照免疫球蛋白可變區(qū)(兩者都用^H-NSP放射性標(biāo)記)，并在7天的時間段內(nèi)從尾靜脈獲得血清樣品用于放射活性分析。使用WinNonlin軟件將血清濃度vs時間缺陷適合1或2區(qū)室模型。對于融合蛋白期望的末期半衰期是15小時的階數(shù)，只要PLAD部分沒有影響結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白可變區(qū)的末期半衰期。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table>表10<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>盡管已經(jīng)參照其優(yōu)選實施方案特別地顯示并描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解其中可以形成各種形式上和詳細(xì)內(nèi)容的改變，而沒有脫離所附權(quán)利要求包括的本發(fā)明的范圍。權(quán)利要求1.一種藥物融合體，其包括X’和Y’部分，其中X’是PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體；且Y’是具有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分。2.權(quán)利要求1的藥物融合體，其中所述多肽結(jié)合部分特異性結(jié)合血清白蛋白。3.權(quán)利要求1的藥物融合體，其中所述多肽結(jié)合部分是特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段。4.權(quán)利要求1-3中任何一項的藥物融合體，其中所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體包括一個至少大約10個連續(xù)氨基酸的區(qū)域，所述氨基酸與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LT|3R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40和DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列中的氨基酸相同。5.權(quán)利要求4的藥物融合體，其中PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LT卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40和DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。6.權(quán)利要求5的藥物融合體，其中所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自SEQIDNO:87、SEQIDNO:88、SEQIDNO:89、SEQIDNO:90、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNQ:95、SEQIDNO:96和SEQIDNO:97的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。7.—種藥物融合體，其包括X，和Y，部分，其中X，是PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體；且Y，是特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)。8.權(quán)利要求7的藥物融合體，其中X，位于Y，的氨基端。9.權(quán)利要求7的藥物融合體，其中Y，位于X，的氨基端。10.權(quán)利要求7-9中任何一項的藥物融合體，其中重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)能特異性結(jié)合人血清白蛋白。11.權(quán)利要求10的藥物融合體，其中Y，包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。12.權(quán)利要求10的藥物融合體，其中Y，包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。13.權(quán)利要求7-12中任意一項的藥物融合體，其中所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體包括一個至少大約10個連續(xù)氨基酸的區(qū)域，所述氨基酸與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LT(3R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40和DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列中的氨基酸相同。14.權(quán)利要求13的藥物融合體，其中PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LT|3R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40和DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。15.權(quán)利要求14的藥物融合體，其中所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自SEQIDNO:87、SEQIDNO:88、SEQIDNO:89、SEQIDNO:90、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96和SEQIDNO:97的氨基酸序列具有至少大約卯％的氨基酸序列同一性。16.—種藥物綴合物，其包括特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)，和與所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)或免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)共價鍵合的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體。17.權(quán)利要求16的藥物綴合物，其中PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體與所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)或免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)通過連接體部分共價鍵合。18.權(quán)利要求16或17的藥物綴合物，其中特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)，包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQEDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。19.權(quán)利要求16-18中任意一項的藥物綴合物，其中所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體包括一個至少大約10個連續(xù)氨基酸的區(qū)域，所述氨基酸與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LT卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40和DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列中的氨基酸相同。20.權(quán)利要求19的藥物綴合物，其中PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自TNFR1、TNFR2、FAS、LT卩R、CD40、CD30、CD27、HVEM、OX40和DR4的PLAD功能域的PLAD功能域的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。21.權(quán)利要求20的藥物綴合物，其中所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的氨基酸序列與選自SEQIDNO:87、SEQIDNO:88、SEQIDNO:89、SEQIDNO:卯、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96和SEQIDNO:97的氨基酸序列具有至少大約90%的氨基酸序列同一性。22.—種分離的或重組的核酸，其編碼權(quán)利要求1-15中任意一項的藥物融合體。23.—種核酸構(gòu)建體，其包括權(quán)利要求22的重組核酸。24.—種宿主細(xì)胞，其包括權(quán)利要求22的重組核酸或權(quán)利要求23的構(gòu)建體。25.—種生產(chǎn)藥物融合體的方法，所述包括在適于表達(dá)所述的重組核酸的條件下保持權(quán)利要求24的宿主細(xì)胞，借此生產(chǎn)藥物融合體。26.—種藥物組合物，其包括權(quán)利要求1-21中任意一項的藥物融合體或藥物綴合物與生理學(xué)上可接受的載體。27.—種治療患有炎性疾病的個體的方法，所述方法包括對所述個體給藥治療有效量的權(quán)利要求1-21中任意一項的藥物綴合物或藥物融合體。28.權(quán)利要求27的方法，其中所述炎性疾病是關(guān)節(jié)炎。29.用于治療、診斷或預(yù)防的權(quán)利要求1-21中任意一項的藥物綴合物或藥物融合體。30.權(quán)利要求1-21中任意一項的藥物綴合物或藥物融合體在制備用于治療炎性疾病的藥物中的用途。31.權(quán)利要求30的用途，其中所述炎性疾病是關(guān)節(jié)炎。32.權(quán)利要求1-21中任意一項的藥物綴合物或藥物融合體在制備用于治療肺炎癥或呼吸道疾病的藥物中的用途。33.—種藥物組合物，其包括與多肽結(jié)合部分鍵合的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體，該多肽結(jié)合部分具有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點，其中相對于所述的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體，所述藥物組合物具有較長的體內(nèi)血清半衰期，而且具有所述PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的至少大約90%的活性。34.—種藥物融合體，其包括第一部分和第二部分，其中笫一部分是PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體，笫二部分是延長體內(nèi)血清半衰期的多肽。35.—種藥物綴合物，其包括與延長體內(nèi)血清半衰期的多肽綴合的PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體。全文摘要提供了含有PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的藥物組合物，融合體和綴合物。含有PLAD功能域或PLAD功能域的功能性變體的藥物融合體和綴合物與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段綴合連接。與未綴合的或未融合的治療或診斷劑相比，藥物組合物，融合體和綴合物具有較長的體內(nèi)半衰期。文檔編號C07K16/46GK101111522SQ200580047682公開日2008年1月23日申請日期2005年12月1日優(yōu)先權(quán)日2004年12月2日發(fā)明者I·M·湯林森申請人:杜門蒂斯有限公司