專利名稱：吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽、包括上述物質(zhì)的組合物、及上述物質(zhì)的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種吡啶類衍生物、包括該吡啶類衍生物的組合物、該吡啶類衍 生物的用途。
背景技術(shù)：
根據(jù)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)理來開發(fā)新一代高效、特異、低毒性的抗腫瘤新藥是科 學(xué)家和制藥公司一直在努力的目標(biāo)。由于腫瘤發(fā)病的過程很長、并且有許多細(xì)胞內(nèi) 的生理和病理過程在其間起作用，因此對(duì)大部分腫瘤發(fā)生的細(xì)胞分子機(jī)理迄今仍然 不是很清楚。人類慢性髓性白血病(CML)發(fā)生的分子機(jī)理的研究已經(jīng)取得重大突破， CML的發(fā)生是因?yàn)榘籽〖?xì)胞的第9號(hào)和第22號(hào)染色體部(分)交換后形成的BCR/ABL 融合基因，結(jié)果使得融合基因中ABL酪氨酸蛋白激酶的活性被持續(xù)活化而使細(xì)胞處于 異常的分裂狀態(tài)并且不發(fā)生衰亡(Biochimica et Biophysica Acta 2001， 1551:M11-M18)。根據(jù)上述機(jī)理，1996年Druker等人發(fā)現(xiàn)tyrosine kinrse酶的抑制劑STI571可以 有效地抑制調(diào)控費(fèi)城染色體之前腫瘤基因BCR/ABL融合基因。STI571的作用機(jī)(理) 在于占據(jù)TK酶的口袋，使酶與BCR/ABL作用的磷酸酶無法活化，造成BCR/ABL與其介 質(zhì)無法被產(chǎn)生磷酸化作用，因此抑制了癌細(xì)胞增生信號(hào)的傳遞，從而起到治療白血 病的效果。近年來，又有許多針對(duì)其它蛋白激酶的藥物被成功地用于腫瘤的治療中，例如 能夠有效治療晚期肺癌的埃羅替尼(Erlotinib)就是一種人類表皮生長因子l型受 體/表皮生長因子受體(HERl/EGFR)酪氨酸激酶抑制劑；而對(duì)晚期肝癌和腎癌有著較 好治療作用的索拉菲尼(Sorafenib)是一種對(duì)存在于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)的多種激酶 有著抑制作用的化學(xué)分子。因此，尋找和研發(fā)能夠抑制和腫瘤相關(guān)激酶的靶向性藥物是二十一世紀(jì)腫瘤藥物研發(fā)的一個(gè)趨勢(shì)，也為人類治療腫瘤提供一種新的手段。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種新的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的 鹽。為此，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案它為具有以下通式(1)的吡啶類衍生物或其 藥理上可接受的鹽-其中Rt, R2, R3， R4從下列基團(tuán)中選擇-H，含l-6碳的低鏈烷基，鹵素，NHRs,N(R6)2; 具有-OH, COR6,-CN或-(2(^出取代的上述低鏈烷基； 環(huán)烷基；具有-OH取代的環(huán)垸基； R6是含l-6碳的低鏈垸基 R5是-CH2-R7或-O-R R7是含N的飽和雜環(huán)或具有下列基團(tuán)取代的含N的飽和雜環(huán):Rs, ORs, NHR8, N(Rs)2R8是H或含l-6碳的低鏈烷基；Het從下列雜環(huán)中選擇在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明的通式(1)優(yōu)選為以下通式(2)的:其中，R9是H或含1-6碳的低鏈垸基。再更進(jìn)一步地，在通式(3)中優(yōu)選為4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)->1-{ 4-甲基-3-(4- (3-吡啶基)吡啶-2-基氨基}苯基}苯甲酰胺，即NRJ3，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為,CH3本發(fā)明另一個(gè)所要解決的技術(shù)問題是提供一種抗腫瘤藥物組合物，它含有治療 有效量的以上所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽和任選的藥理上可接受的 輔劑。本發(fā)明再一個(gè)所要解決的技術(shù)問題是提供另一種抗腫瘤藥物組合物，它含有治 療有效量的以上所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽和任選的含有一種或多 種治療有效量的其他已知抗腫瘤藥物。本發(fā)明還有一個(gè)所要解決的技術(shù)問題是提供上述吡啶類衍生物或其藥理上可接 受的鹽在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明再還有一個(gè)所要解決的技術(shù)問題是提供上述吡啶類衍生物或其藥理上可 接受的鹽在制備治療白血病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的發(fā)明人，對(duì)很多化合物進(jìn)行 了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了具有上述通式的化合物，尤其是NRJ3具有抑制白血病細(xì)胞的作 用。上述白血病可以是人慢性髓性白血病或人淋巴細(xì)胞白血病或其他白血病。本發(fā)明的吡啶類衍生物和(或)其藥理上可接受的鹽可經(jīng)口服或不經(jīng)過口給藥， 給藥量因藥物的不同而各有不同， 一般為5 — 5000毫克每天。經(jīng)口服時(shí)，可與藥學(xué)可接受的輔劑混合，將其制成片劑，包衣片，糖衣片，硬 膠囊、軟膠囊，溶液劑，乳劑或混懸劑。不經(jīng)過口給藥時(shí)，它們可以通過直腸給藥， 比如栓劑，或腸道外給藥，比如注射劑。本發(fā)明涉及的由吡啶類衍生物和(或)其相應(yīng)的藥理上可接受的鹽所組成的藥物 制劑，可以通過常規(guī)工藝制備而成，例如常規(guī)的混合，裝膠囊，溶解，制粒，乳化， 壓片，包衣或凍干處理。這些藥物制劑可以與無治療活性的有機(jī)或無機(jī)輔料組成藥 物制劑，其中乳糖，淀粉或其衍生物，滑石粉，酸或其鹽，都可以用作片劑，包衣 片，糖衣片及硬膠囊的輔料。軟膠囊的合適輔料包括植物油，蠟及脂肪，但軟膠囊 一般不添加輔料。溶液劑和糖漿劑的合適輔料為水，多羥基化合物，蔗糖，及葡萄 糖等。注射劑的合適輔料可以是水，酒精，多羥基化合物，甘油，植物油，磷脂和 表面活性劑。栓劑的合適輔料為植物油，蠟，脂肪，半液體多羥基化合物。該藥物制劑的制備還可以包含防腐劑，促溶劑，穩(wěn)定劑，增濕劑，增乳劑，甜 味劑，增色劑，調(diào)味劑、鹽(用以改變藥劑的滲透壓)，緩沖劑，包衣劑或抗氧化 劑。該藥劑還可以包含其他活性物質(zhì)，包括不同于NRJ3的附加活性成分，特別是其 他抗腫瘤劑。


圖1為本發(fā)明所提供的NRJ3的化學(xué)合成路線示意圖。圖2為本發(fā)明所提供的NRJ3作用于不同白血病細(xì)胞48小時(shí)后對(duì)細(xì)胞增值影響 的柱形圖。圖3為本發(fā)明所提供的NRJ3作用于人慢性髓性白血病細(xì)胞(CML)和正常人外 周血細(xì)胞(N0R) 48小時(shí)后對(duì)兩種細(xì)胞影響的柱形圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 吡啶類衍生物NRJ3的制備方法，如圖1所示。 1) 、 2-{ (4-氯)-吡啶基-2-亞胺基)-l-甲基-4-硝基苯(3) 往2， 4- 二氯吡啶1 (2. 00g, 13. 5國o1 ) , 2-甲基-5-硝基苯胺2 (2, 26g, 14. 9隱rao1 )，醋酸鈀(II) (121. Omg), BINAP(336mg)和叔丁醇鉀 (2. 26g,20.25畫o1)的混合物中加入甲苯(120ml)，加熱至70 。C，通氬氣保護(hù)， 保溫反應(yīng)23小時(shí)，降溫，過濾，濾液濃縮至干，殘留物硅膠柱層析，得粗品2.3g， 用少量冷乙醚洗滌得黃色目標(biāo)物(l. 2g， 34%)， MP. 130-133。C。'H-醒R (CDC1:,) S: 2. 38 (3H， s)， 6.40 (1H， br)， 6.74 (1H' d)， 6.85 (1H, dd)， 7,38 (1H' d), 7.90 (1H, dd), 8. 15 (1H' d)， 8. 57 (1H， d) 2) 、 1_甲基-4-硝基-2-{ 4- (3-吡啶基)吡啶-2-亞胺基}-苯的合成(4)往2-{ (4-氯)-吡啶基-2-亞胺基)-l-甲基-4-硝基苯3 (264mg，l誦o1)加 入脫氣處理的四氫呋喃水(1: 1， 20ml)的混合液，再加入3-吡啶硼酸 (271mg'1. l證ol )，碳酸鉀(470mg， 3. 4鵬o1 )禾B四(三苯基膦)鈀(0) (173mg,0. 15腿o1)，反應(yīng)物加熱至80"C，氬氣做保護(hù)氣，反應(yīng)44小時(shí)。降至室溫， 反應(yīng)物中加入適量的乙酸乙酯，有機(jī)層分離，水層用乙酸乙酯提取三次，合并有機(jī) 層，分別用適量的水和飽和食鹽水洗滌，分液后有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，有機(jī)層 濃縮至干，殘留物硅膠柱層析，得粗品247mg,用氯仿/甲醇重結(jié)晶得橘黃色晶體 (143mg, 46, 7%) MP., 170-173。C. 'H-NMR (CDC13) S: 2.43 (3H, s), 6.49 (1H， br)， 6.99 (1H, s), 7.07 (1H, dd), 7.41 (2H， m), 7.87 (2H, m)， 8.37 (1H, d)， 8.68 (1H， dd), 8.69 (1H, s)， 8.86 (1H， d).3) 、 4-甲基-3-(4- (3-吡啶基)吡啶-2-亞胺基}-苯胺(5)往卜甲基-4-硝基-2- ( 4-(3-吡啶基)卩比啶-2-亞胺基)-苯4(126mg, 0. 41mmo1) 加入濃鹽酸(lml)，加熱至60"C攪拌，加入二水合氯化亞錫(465mg, 2. 06mmo1) 的lml濃鹽酸溶液中，然后溫度慢慢升高至IOO"C，攪拌反應(yīng)40分鐘，冷卻至室溫， 加入適量的水，再加入10%的氫氧化鈉溶液將溶液中和至中性，混合物用乙酸乙酯 提取三次，合并有機(jī)層，分別用適量的水和飽和食鹽水洗滌，分液后有機(jī)層用無水 硫酸鈉干燥，有機(jī)層濃縮至干，得粗品用少量氯仿洗滌得淺黃色目標(biāo)物(93mg,82%) Mp. ， 183-186 "C. 'H-國R (CDC1:,)S: 2.19 (3H, s)， 3.60 (2H， br) ， 6.37 (1H， br), 6.47 (1H, dd)， 6.82 (1H， s), 6.88 (1H, d), 6.91 (1H, dd)' 7.04 (1H, d)， 7.37 (1H， dd)， 7.83 (1H, dt), 8.26 (1H， d), 8.64 (1H, dd), 8.81 (1H, d).4) 、 N1 (3,4') 二吡啶基-2'-基-N1-4-(氯甲基-苯基)-4-甲基-苯-1, 3-二胺(6)將(O. 45g， 2. 38mmo1)4-氯甲基-苯甲酰氯的THF5ml溶液加入(0. 55g， 2腸1) 4-甲基-3- ( 4- (3-吡啶基)吡啶_2-亞胺基}-苯胺4的THF10ml溶液中，室溫?cái)嚢?反應(yīng)1小時(shí)，加入適量乙酸乙酯，在加入適量飽和食鹽水結(jié)束反應(yīng)，靜置分層，會(huì) 有類白色固體析出，過濾，再用飽和食鹽水洗滌，分液，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥 后濃縮至干得到淺黃色固體，用少量的乙酸乙酯洗滌，得目標(biāo)物(O. 35+0. 14g， 58. 8%)5) 、 4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-{4-甲基-3-{4- (3-吡啶基)吡啶-2-基 氨基}苯基)苯甲酰胺(7)在(O. 31g， 3. l誦ol)甲基哌嗪的乙腈溶液中，加入(O. 27g，0. 63mmol)的N3(3， 4') 二吡啶基-2'-基-N'-4-(氯甲基-苯基)-4-甲基-苯-1,3-二胺6的二氯甲浣溶液， 懸濁液反應(yīng)回流過夜，冷卻至室溫，加入氯仿溶解，用適量的水和飽和食鹽水洗滌， 有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，，濃縮后加入適量丙酮，過濾得目標(biāo)物(0. 18g， 58% )。 API-Es m/z 527. 2(M++C1) ;m/z 493. 1 (nT+H)實(shí)施例2、 K562和U937細(xì)胞的培養(yǎng)K562和U937屬于建代的人體白血病細(xì)胞株，可選用合適的培養(yǎng)條件在體外培 養(yǎng)，如含有胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液(R. Ian Freshnev. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique; Wiley, John & Sons, Incorporated,2000)。當(dāng)不同濃 度的NRJ3作用于細(xì)胞一定時(shí)間后，可以用MTT法來檢測(cè)細(xì)胞的生長情況(Pieters R, Loonen AH, Huismans DR， Broekema GJ， Dirven MW, Heyenbrok MW， Hahlen K， Veerman AJ. In vitro drug sensitivity of cells from children with leukemia using the MTT assay with improved culture conditions. Blood. 1990 Dec 1;76(11) :2327-36.)。實(shí)施例3、正常人和慢性白血病患者外周血白血細(xì)胞的分離和原代培養(yǎng) 正常人和慢性白血病患者外周血白血細(xì)胞的分離可以用密度梯度離心的方法 來分離后，可用合適的培養(yǎng)條件在體外培養(yǎng)，如含有胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液。實(shí)施例4 NRJ3的生物學(xué)作用1、 NRJ3對(duì)培養(yǎng)的白血病細(xì)胞株的作用，參照?qǐng)D2:為了觀察NRJ3對(duì)白血病細(xì) 胞的作用，我們選用了 BCR-ABL陽性的K562細(xì)胞和陰性的U937細(xì)胞。結(jié)果表明， 用不同濃度的NRJ3作用于K562細(xì)胞48小時(shí)后，對(duì)細(xì)胞的生長有抑制作用，抑制作 用與藥物的濃度成正比。而同樣濃度的NRJ3對(duì)BCL-ABL陰性細(xì)胞U937卻沒有抑制 作用。從圖2中可以得知，NRJ3對(duì)K562細(xì)胞的抑制作用在5uM時(shí)開始出現(xiàn)，到40uM 時(shí)達(dá)到飽和，在此濃度范圍內(nèi)抑制作用和濃度呈正相關(guān)。在圖2中橫坐標(biāo)代表NRJ3的濃度，縱坐標(biāo)代表不同濃度的NRJ3作用細(xì)胞48 小時(shí)后的光吸收值(0D)，每一個(gè)數(shù)值代表三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)孔的平均值。其中K562 細(xì)胞為BCR/ABL陽性而U937為陰性。2、 NRJ3對(duì)慢性白血病人和正常人外周血細(xì)胞的作用，參照?qǐng)D3:為了驗(yàn)證NRJ3 對(duì)BCL-ABL白血病的治療作用，我們觀察了其對(duì)BCR-ABL陽性白血病患者外周血白 細(xì)胞(含31%的白血病細(xì)胞)的直接抑制作用，并用相同數(shù)量的正常人的外周血白細(xì)胞作對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)NRJ3對(duì)白血病患者外周血白細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用，此 抑制作用與濃度成正比，而相同濃度的NRJ3對(duì)正常人外周血的白細(xì)胞幾乎沒有抑制 作用。在圖3中橫坐標(biāo)代表NRJ3的濃度，縱坐標(biāo)代表不同濃度的NRJ3作用細(xì)胞48 小時(shí)后的光吸收值(0D)，每一個(gè)數(shù)值代表三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)孔的平均值。
權(quán)利要求
1、具有以下通式(1)的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽其中R1，R2，R3，R4從下列基團(tuán)中選擇-H，含1-6碳的低鏈烷基，鹵素，NHR6，N(R6)2；具有-OH，COR6，-CN或-CONH2取代的上述低鏈烷基；環(huán)烷基；具有-OH取代的環(huán)烷基；R6是含1-6碳的低鏈烷基R5是-CH2-R7或-O-R7R7是含N的飽和雜環(huán)或具有下列基團(tuán)取代的含N的飽和雜環(huán)R8，OR8，NHR8，N(R8)2R8是H或含1-6碳的低鏈烷基；Het從下列雜環(huán)中選擇
2、如權(quán)利要求l所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽，其特征在于它具有以下通式(2):<formula>formula see original document page 3</formula>(2)其中Ri， R2, R3, R4從下列基團(tuán)中選擇-H，含l-6碳的低鏈垸基，鹵氣NHR6, N(R6)2;具有-OH, COR6,-CN或-CONH2取代的上述低鏈垸基；環(huán)垸基；具有-OH取代的環(huán)烷基；R6是含l-6碳的低鏈垸基Rs是-CH2-R7或-O-R7R7是含N的飽和雜環(huán)或具有下列基團(tuán)取代的含N的飽和雜環(huán) Rs, ORs， NHRs, N(Rs)2 Rs是H或含l-6碳的低鏈烷基。
3、如權(quán)利要求2所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽，其特征在于它具 有以下通式(3):(3)其中Rt, R2， R3, R4從下列基團(tuán)中選擇 -H，含l-6碳的低鏈垸基，鹵素,NHR6,N(R6)2; 具有-OH, COR6,-CN或-CONH2取代的上述低鏈烷基; 環(huán)烷基；具有-OH取代的環(huán)垸基；R6是含l-6碳的低鏈烷基 R9是H或含l-6碳的低鏈垸基。
4、如權(quán)利要求3所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽，其特征在于它為 4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-忭{ 4-甲基-3- ( 4- (3-吡啶基)口比啶-2-基氨基}苯基}苯 甲酰胺，即NRJ3，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為,CH3
5、 一種抗腫瘤藥物組合物，其特征在于它含有治療有效量的權(quán)利要求l、 2、 3 或4所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽和任選的藥理上可接受的輔劑。
6、 一種抗腫瘤藥物組合物，其特征在于它含有治療有效量的權(quán)利要求l、 2、 3 或4所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽和任選的含有一種或多種治療有效 量的其他已知抗腫瘤藥物。
7、 權(quán)利要求1、 2、 3或4所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽在制備治 療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
8、 權(quán)利要求1、 2、 3或4所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽在制備治 療白血病的藥物中的應(yīng)用。
9、 權(quán)利要求1、 2、 3或4所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽在制備治 療人慢性髓性白血病的藥物中的應(yīng)用。
10、 權(quán)利要求l、 2、 3或4所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽在制備 治療人淋巴細(xì)胞白血病以及其他白血病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種具有以下通式(1)的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽。本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤藥物組合物，它含有治療有效量的以上所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽和任選的藥理上可接受的輔劑。本發(fā)明還提供另一種抗腫瘤藥物組合物，它含有治療有效量的以上所述的吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽和任選的含有一種或多種治療有效量的其他已知抗腫瘤藥物。本發(fā)明還提供了上述吡啶類衍生物或其藥理上可接受的鹽在制備治療腫瘤，比如治療白血病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07D213/00GK101215259SQ200810059220
公開日2008年7月9日 申請(qǐng)日期2008年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月8日
發(fā)明者丁佳逸, 劉永剛, 胡秀波, 閆遠(yuǎn)海, 陳鴻翔, 松 韓, 馬彥軍 申請(qǐng)人:杭州新瑞佳生物醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司