專利名稱：從植物中提制科羅索酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中提取藥用活性成分的綠色化學生產(chǎn)方法，更具體涉及一種從植 物中提制科羅索酸的可工業(yè)化生產(chǎn)的方法。
技術(shù)背景科羅索酸(Corosolic acid)屬于五環(huán)三萜酸類化合物，為熊果酸(Ursolic acid)的衍生 物。與熊果酸相比，科羅索酸在2位碳上多了一個a羥基，通常又稱2oc-羥基熊果酸。由于科羅索酸結(jié)構(gòu)復雜，人工合成困難，國內(nèi)外均自中草藥或植物中提取?？屏_索酸純 品為白色結(jié)晶性粉末，熔點242 244"C，無臭，無味，可溶于熱乙醇等極性有機溶劑，微溶 于氯仿、乙醚等脂溶性溶劑，不溶于石油醚和水中。<formula>formula see original document page 3</formula>科羅索酸(Corosolic acid)的化學結(jié)構(gòu)示意圖國內(nèi)已有多個學者對植物中三萜酸及其科羅索酸進行了分離純化，但國外尚未見報道。 枇杷葉富含科羅索酸、熊果酸等三萜酸類物質(zhì)，性微寒，味苦辛，止咳平喘，清肺和胃，降 氣化痰，收載于歷版中國藥典。枇杷葉三萜酸類物質(zhì)具有消炎平喘、增強免疫、降糖、抗癌 等臨床藥理作用，是治療急性黃膽型肝炎和慢性病毒性肝炎的理想藥物，且毒副作用小。中國專利申請200710009556. 7，陳劍鋒等報道了從枇杷葉中分離制備科羅索酸的方法， 其做法是采用80 100%親水性有機溶劑水溶液，于50 80。C提取總?cè)扑?，在堿性條件下， 趁熱過濾除雜和活性炭脫色，枇杷葉提取液采用大孔吸附樹脂富集純化科羅索酸，但該方法 生產(chǎn)步驟繁瑣、活性炭脫色過程科羅索酸損失率較大，枇杷葉提取液的粘度和水溶性雜質(zhì)含 量很高，嚴重限制了大孔吸附樹脂對科羅索酸的吸附量和選擇性，導致科羅索酸總收率較小、 生產(chǎn)總成本劇高不下、制備的科羅索酸純度偏低。陳龍勝等僅考察了溶劑萃取條件對科羅索酸提取率的影響(陳龍勝等，林產(chǎn)化學與工業(yè)，2006， 26 (3)， 110)，但科羅索酸的分離純化工藝尚未成熟。大葉紫薇提取物具有降糖、降脂、抗腫瘤等功能，其降血糖的主要藥效成分為科羅索酸。縱偉等采用2次制備薄層層析分離法，從大葉紫薇葉中提取了 corosolic acid，并且采用HPLC 法對大葉紫薇葉中corosolicacid含量進行了測定(縱偉等，熱帶作物學報，2006， 27 (2)， 103)。中國專利ZL 200410064929.7，孫宏斌等報道了科羅索酸的化學合成制備方法。中藥溪黃草為民間習用草藥，用于治療濕熱瀉痢、跌打瘀腫、急性黃疸型肝炎、急性膽 囊炎等疾病。其主要成分有溪黃草甲素(rabdoserrin A)，溪黃草乙素(rabdoserrin B) ， 2 a-羥基熊果酸，熊果酸等。吳劍峰等采用HPLC法測定GAP基地不同施肥區(qū)域和不同采收期 溪黃草藥材中2a-羥基熊果酸的含量變化，(吳劍峰等，藥學進展，2004, 28 (7)， 318;吳 劍峰等，中草藥，2004， 35 (1)， 81)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種從植物中提制科羅索酸的方法。該方法不僅制備工藝簡單、分 離純化效率高、容易工業(yè)化生產(chǎn)，而且制備的科羅索酸純度高、生產(chǎn)成本低，適合工業(yè)化大規(guī) 模生產(chǎn)。本發(fā)明的植物中提制科羅索酸的方法以含有科羅索酸的植物為原料，采用5 10倍植 物干重的純水或自來水煮沸2次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液經(jīng)真空濃縮成浸膏； 濾渣加入5 10倍植物干重的30 60%乙醇或甲醇水溶液，加入溶液重量的0. 5 1. 0%的NaOH 或KOH調(diào)節(jié)溶液pH值，于30 48。C條件下提取1 3次，每次1 3小時，合并提取液，過 濾，濾液調(diào)節(jié)pH值至4.5 7.5靜置陳化，固液分離，沉淀物即為總?cè)扑岽制罚挥?0 75 。C條件下，用不低于3倍重量的85 100%乙醇或甲醇水溶液充分溶解總?cè)扑岽制罚桃悍?離去除不溶物，調(diào)整濾液體系中科羅索酸終濃度達到0. 5 2. 5 g/L、乙醇或甲醇終濃度為M 40°/。、 Na0H或K0H終濃度為0.2 0.5%后，濾液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附科羅索酸至飽和，先用不 少于3倍樹脂重量的純水或自來水洗去未被吸附的總?cè)扑釟埩袅弦汉筒簧儆?倍樹脂重量 的40 50%乙醇或甲醇水溶液洗去吸附力較科羅索酸弱的雜質(zhì)，再用不少于3倍樹脂重量的 60 70%乙醇或甲醇水溶液，在中性條件下以0.5 1.5倍樹脂重量/小時的流速洗脫科羅索 酸，調(diào)整洗脫液體系中乙醇或甲醇終濃度《5(m和pH值《7.0，緩慢冷卻至開始析出科羅索酸 結(jié)晶、4 10'C冷藏、靜置養(yǎng)晶、固液分離沉淀物即為科羅索酸。本發(fā)明的顯著優(yōu)點是一、與已有的文獻相比，本發(fā)明根據(jù)科羅索酸的水不溶性特點，巧妙地采用了水煮除雜 的方式，可預先除去大部分的蛋白質(zhì)、多糖、酚類物質(zhì)和無機鹽等水溶性雜質(zhì)，卻不影響科 羅索酸的回收率，這有助于降低后續(xù)總?cè)扑岬膲A性有機溶劑提取液的粘度和水溶性雜質(zhì)含 量，可大幅度提高大孔吸附樹脂對科羅索酸的飽和吸附量和選擇性，制備的科羅索酸純度更 高、生產(chǎn)成本更低。二、 與已有的文獻相比較，本發(fā)明創(chuàng)新性地利用了科羅索酸等三萜酸在強堿性條件下可 溶于30 60%乙醇或甲醇水溶液、而在pH值《7. 5條件下卻不溶于30 60%乙醇或甲醇水溶 液的特點，不采用工藝繁瑣和收率較低的層析分離技術(shù)和活性炭脫色技術(shù)，而直接采用酸性 條件下沉淀分離方式去除雜質(zhì)，獲得高純度的總?cè)扑岽制?，具有較大的推廣意義。三、 與已有的文獻的采用80 100%親水性有機溶劑水溶液于50 8(TC條件下提取時枇杷 葉提取液的粘度和水溶性雜質(zhì)含量很高相比，本發(fā)明獨創(chuàng)性地應用了低溫時30，60%乙醇或 甲醇水溶液對蛋白質(zhì)、多糖、精油、無機鹽等雜質(zhì)的溶解度較小，可以大幅度降低枇杷葉提 取液的粘度和水溶性雜質(zhì)含量，以及30 60%乙醇或甲醇水溶液在強堿性條件下對枇杷葉中 科羅索酸的溶解度可高達2.0 g/L，遠遠大于已有文獻的采用80 100%親水性有機溶劑水溶 液的0.5 g/L溶解度水平的特點，采用堿性的30 60%乙醇或甲醇水溶液從植物中提取科羅 索酸，更利于后續(xù)進一步的分離純化獲得高純度科羅索酸、生產(chǎn)成本更低，具有較大的推廣 性。四、 本發(fā)明充分利用大孔吸附樹脂對科羅索酸的吸附力與對蛋白質(zhì)、多糖、酚類物質(zhì)、 無機鹽等雜質(zhì)的吸附力的不同，以及在強堿性的30 60%乙醇或甲醇水溶液中科羅索酸成分 與蛋白質(zhì)、多糖、無機鹽等雜質(zhì)的溶解度差異，真正達到科羅索酸與雜質(zhì)的高效分離。五、 本發(fā)明組合采用水溶性物質(zhì)的水煮除雜、總?cè)扑岬膲A性有機溶劑提取和科羅索酸 的大孔吸附樹脂富集純化等一系列分離純化集成技術(shù)，從植物中制備高純度科羅索酸，具有 理論新穎、技術(shù)合理、操作安全、工藝簡便、經(jīng)濟可行、環(huán)境友好等優(yōu)點。
具體實施方式
含有科羅索酸的植物為原料，采用5 10倍植物干重的純水或自來水煮沸2次，每次l 小時，合并提取液，過濾，濾液經(jīng)真空濃縮成浸膏；濾渣加入5 10倍植物干重的30 60% 乙醇或甲醇水溶液，加入溶液重量的0.5 1.0。/。的NaOH或KOH調(diào)節(jié)溶液pH值，于30 48°C 條件下提取1 3次，每次1 3小時，合并提取液，過濾，濾液調(diào)節(jié)pH值至4. 5 7. 5靜置 陳化，固液分離沉淀物即為總?cè)扑岽制?；?0 75。C條件下，用不低于3倍重量的85 100% 乙醇或甲醇水溶液充分溶解總?cè)扑岽制?，固液分離去除不溶物，調(diào)整濾液體系中科羅索酸 終濃度達到0. 5 2. 5 g/L、乙醇或甲醇終濃度為30 40%、 NaOH或KOH終濃度為0. 2 0. 5% 后，濾液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附科羅索酸至飽和，先用不少于3倍樹脂重量的純水或自來水洗 去未被吸附的總?cè)扑釟埩袅弦汉筒簧儆?倍樹脂重量的40 50%乙醇或甲醇水溶液洗去吸 附力較科羅索酸弱的雜質(zhì)，再用不少于3倍樹脂重量的60 70%乙醇或甲醇水溶液，在中性 條件下以0. 5 1. 5倍樹脂重量/小時的流速洗脫科羅索酸，調(diào)整洗脫液體系中乙醇或甲醇終 濃度《50。/。和pH值《7.0，緩慢冷卻至開始析出科羅索酸結(jié)晶、4 1(TC冷藏、靜置養(yǎng)晶、固液分離沉淀物即為科羅索酸。上述總?cè)扑崾切芄犷惢衔锘螨R墩果酸類化合物中的一種或幾種化合物。 上述含有科羅索酸的植物是枇杷葉、大葉紫薇葉、溪黃草、番石榴葉的一種或幾種。 上述浸膏可用于進一步制備具有化痰、止咳、平喘、消炎、抗病毒或降血糖作用的口服藥劑。本發(fā)明理化參數(shù)測定方法如下總?cè)扑?、科羅索酸、熊果酸、山楂酸和齊墩果酸的含量采用高效液相色譜儀測定。測 定條件Agilent 1100型高效液相色譜儀(DAD 二極管陣列檢測器)，Waters Nova-Pak ds色 譜柱(①3. 9X150 mm， 5 Mm)，流動相為甲醇-1%醋酸水溶液(88:12) (V/V)，流速1. 0 mL/min， 柱溫34t:，進樣量20 ixL，檢測波長分別為220 nm。熊果酸和齊墩果酸標準品(純度99%， 中國藥品生物制品檢定所)，科羅索酸和山楂酸標準品(純度95%，美國Sigma公司)。本發(fā)明制備方法的實施例陳述如下實施例1將鮮枇杷葉水洗、干燥(風干、烘干或曬干均可)、粉碎、過20 30目篩得粉末，將4.9 kg枇杷葉粉末放入提取罐中，采用10倍枇杷葉干重的純水煮沸2次，每次1小時，合并提 取液，過濾，濾液經(jīng)真空濃縮成浸膏；濾渣加入10倍枇杷葉干重的30%乙醇水溶液，加入溶 液重量的1.0。/。的NaOH調(diào)節(jié)溶液pH值，于48。C條件下提取3小時，過濾，濾液調(diào)節(jié)pH值至 7.5靜置陳化，固液分離，沉淀物即為總?cè)扑岽制?，其中科羅索酸的提取率可達96.3%;于 65。C條件下，用3倍重量的95%乙醇溶液充分溶解總?cè)扑岽制?，固液分離去除不溶物，調(diào) 整濾液體系中科羅索酸終濃度達到2.0 g/L、乙醇終濃度為35%、 NaOH終濃度為0.3°/。后，濾 液經(jīng)HZ818大孔吸附樹脂吸附科羅索酸至飽和，先用4倍樹脂體積量的純水洗去未被吸附的 總?cè)扑釟埩袅弦汉?倍樹脂體積量的50%乙醇水溶液洗去吸附力較科羅索酸弱的雜質(zhì)，再 用4倍樹脂體積量的70%乙醇水溶液、在中性條件下以1倍樹脂體積量/小時的流速洗脫^f羅 索酸；用稀鹽酸水溶液調(diào)整洗脫液體系中乙醇濃度達42y。和pH值為6.0，緩慢冷卻至開始析 出科羅索酸結(jié)晶、4 1(TC冷藏、靜置養(yǎng)晶、過濾，固液分離沉淀物即為科羅索酸。 實施例2將5.3 kg大葉紫薇葉粉末放入提取罐中，加入5倍大葉紫薇葉干重的自來水煮沸2次， 每次1小時，合并提取液，過濾，濾液經(jīng)真空濃縮成浸膏；濾渣加入10倍大葉紫薇葉干重的 60%甲醇水溶液，加入溶液重量的0. 5%的KOH調(diào)節(jié)溶液pH值，于3(TC條件下提取3次，每次 l小時，合并提取液，過濾，濾液調(diào)節(jié)pH值至4.5靜置陳化，固液分離，沉淀物即為總?cè)?酸粗品，其中科羅索酸的提取率可達91.9%;于5(TC條件下，用6倍重量的100%甲醇充分溶解總?cè)扑岽制?，固液分離去除不溶物，調(diào)整濾液體系中科羅索酸終濃度達到2.5 g/L、甲 醇終濃度為40%、 K0H終濃度為0.2%后，濾液經(jīng)HZ801大孔吸附樹脂吸附科羅索酸至飽和， 先用3倍樹脂體積量的自來水洗去未被吸附的總?cè)扑釟埩袅弦汉?倍樹脂體積量的45%甲 醇水溶液洗去吸附力較科羅索酸弱的雜質(zhì)，再用3倍樹脂體積量的60%甲醇水溶液，在中性 條件下以0. 5倍樹脂體積量/小時的流速洗脫科羅索酸；用稀鹽酸水溶液調(diào)整洗脫液體系中甲 醇濃度達38y。和pH值為5.0，緩慢冷卻至開始析出科羅索酸結(jié)晶、4 1(TC冷藏、靜置養(yǎng)晶、 過濾，固液分離沉淀物即為科羅索酸。 實施例3將6.1kg溪黃草粉末放入提取罐中，加入8倍溪黃草干重的自來水煮沸2次，每次l小 時，合并提取液，過濾，濾液經(jīng)真空濃縮成浸膏；濾渣加入5倍溪黃草干重的35%甲醇水溶 液，加入溶液重量的0.8y。的NaOH調(diào)節(jié)溶液pH值，于50"C條件下提取2次，每次2小時，合 并提取液，過濾，濾液調(diào)節(jié)pH值至6.5靜置陳化，固液分離，沉淀物即為總?cè)扑岽制?，?中科羅索酸的提取率可達95. 1%;于50'C條件下，用8倍重量的90%甲醇充分溶解總?cè)扑?粗品，固液分離去除不溶物，調(diào)整濾液體系中科羅索酸終濃度達到1.6g/L、甲醇終濃度為 38%、 KOH終濃度為0. 3%后，濾液經(jīng)HZ806大孔吸附樹脂吸附科羅索酸至飽和，先用3倍樹脂 體積量的自來水洗去未被吸附的總?cè)扑釟埩袅弦汉?倍樹脂體積量的40%甲醇水溶液洗去 吸附力較科羅索酸弱的雜質(zhì)，再用5倍樹脂體積量的65%甲醇水溶液，在中性條件下以1.5 倍樹脂體積量/小時的流速洗脫科羅索酸；用稀鹽酸水溶液調(diào)整洗脫液體系中甲醇濃度達50% 和pH值為6.5，緩慢冷卻至開始析出科羅索酸結(jié)晶、4 1(TC冷藏、靜置養(yǎng)晶、過濾，固液 分離沉淀物即為科羅索酸。 實施例4將6.5kg番石榴葉粉末放入提取罐中，加入6倍番石榴葉干重的自來水煮沸2次，每次 l小時，合并提取液，過濾，濾液經(jīng)真空濃縮成浸膏；濾渣加入8倍番石榴葉干重的40%乙醇 水溶液，加入溶液重量的0. 5%的NaOH調(diào)節(jié)溶液pH值，于45。C條件下提取2次，每次2小時， 合并提取液，過濾，濾液調(diào)節(jié)pH值至5.5靜置陳化，固液分離沉淀物即為總?cè)扑岽制罚?中科羅索酸的提取率可達93. 2%;于75'C條件下，用5倍重量的85%乙醇溶液充分溶解總?cè)?萜酸粗品，固液分離去除不溶物，調(diào)整濾液體系中科羅索酸終濃度達到0.5 g/L、乙醇終濃 度為38%、 NaOH終濃度為0.5%后，濾液經(jīng)D101大孔吸附樹脂吸附科羅索酸至飽和，先用5 倍樹脂體積量的純水洗去未被吸附的總?cè)扑釟埩袅弦汉?倍樹脂體積量的48%乙醇水溶液 洗去吸附力較科羅索酸弱的雜質(zhì)，再用6倍樹脂體積量的68%乙醇水溶液、在中性條件下以 0. 8倍樹脂體積量/小時的流速洗脫科羅索酸；用稀鹽酸水溶液調(diào)整洗脫液體系中乙醇濃度達45呢和pH值為7.0，緩慢冷卻至開始析出科羅索酸結(jié)晶、4 1(TC冷藏、靜置養(yǎng)晶、過濾，固 液分離沉淀物即為科羅索酸。以上實施例旨在進一步舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。
權(quán)利要求
1. 一種從植物中提制科羅索酸的方法，其特征在于以含有科羅索酸的植物為原料，采用5～10倍植物干重的純水或自來水煮沸2次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液經(jīng)真空濃縮成浸膏；濾渣加入5～10倍植物干重的30～60％乙醇或甲醇水溶液，加入溶液重量的0.5～1.0％的NaOH或KOH調(diào)節(jié)溶液pH值，于30～48℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液調(diào)節(jié)pH值至4.5～7.5靜置陳化，固液分離，沉淀物即為總?cè)扑岽制?；?0～75℃條件下，用不低于3倍重量的85～100％乙醇或甲醇水溶液充分溶解總?cè)扑岽制?，固液分離去除不溶物，調(diào)整濾液體系中科羅索酸終濃度達到0.5～2.5g/L、乙醇或甲醇終濃度為30～40％、NaOH或KOH終濃度為0.2～0.5％后，濾液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附科羅索酸至飽和，先用不少于3倍樹脂重量的純水或自來水洗去未被吸附的總?cè)扑釟埩袅弦汉筒簧儆?倍樹脂重量的40～50％乙醇或甲醇水溶液洗去吸附力較科羅索酸弱的雜質(zhì)，再用不少于3倍樹脂重量的60～70％乙醇或甲醇水溶液，在中性條件下以0.5～1.5倍樹脂重量/小時的流速洗脫科羅索酸，調(diào)整洗脫液體系中乙醇或甲醇終濃度≤50％和pH值≤7.0，緩慢冷卻至開始析出科羅索酸結(jié)晶、4～10℃冷藏、靜置養(yǎng)晶、固液分離沉淀物即為科羅索酸。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從植物中提制科羅索酸的方法，其特征在于所述總?cè)扑崾切?果酸類化合物或齊墩果酸類化合物中的一種或幾種化合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從植物中提制的科羅索酸的方法，其特征在于所述浸膏用于進 一步制備具有化痰、止咳、平喘、消炎、抗病毒或降血糖作用的口服藥劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種從植物中提制科羅索酸(corosolic acid)的方法，包括水溶性物質(zhì)的水煮除雜、總?cè)扑岬膲A性有機溶劑提取和科羅索酸的大孔吸附樹脂富集純化步驟。以含有科羅索酸的植物為原料，純水煮沸去除水溶性物質(zhì)；濾渣采用堿性的30～60％乙醇或甲醇水溶液提取總?cè)扑?、在pH 4.5～7.5條件下沉淀分離制得總?cè)扑岽制罚豢側(cè)扑岽制方?jīng)85～100％乙醇或甲醇充分溶解并去除不溶物，濾液經(jīng)大孔吸附樹脂的吸附與洗脫，調(diào)整科羅索酸洗脫液中乙醇或甲醇終濃度≤50％和pH值≤7.0，在此條件下沉淀分離制得科羅索酸。本發(fā)明制備工藝簡單、分離純化效率高、容易工業(yè)化生產(chǎn)、生產(chǎn)成本低，具有較大推廣性。
文檔編號C07J63/00GK101274953SQ20081007106
公開日2008年10月1日 申請日期2008年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月19日
發(fā)明者陳劍鋒 申請人:福州大學