專利名稱：一種紅花籽中苯丙烯酰5-羥色胺化合物的富集純化方法
一種紅花籽中苯丙烯酰5-羥色胺化合物的富集純化方法技術(shù)領(lǐng)域一種紅花籽中活性物質(zhì)苯丙烯酰5-羥色胺化合物的富集純化方法，屬于紅 花籽的綜合開發(fā)利用技術(shù)領(lǐng)域。
技術(shù)背景苯丙烯酰5-羥色胺化合物(Phenylpropanoid Amides of 5-Hydroxytryptamine analogues)是一組由5-羥色胺的氨基與苯丙烯酸類發(fā)生酰胺化反應(yīng)的產(chǎn)物，從 屬于羥基肉桂酸酰胺類(Hydroxycinnamic acid amide, HCAA)化合物。紅花籽 中含有0.5%左右的苯丙烯酰5-羥色胺化合物，目前己發(fā)現(xiàn)了7-8種，含量最多 的是iV-阿魏酰5-羥色胺和7V-(p-香豆酰)5-羥色胺，他們具有較強(qiáng)清除自由基和抗 脂質(zhì)過氧化作用、抗腫瘤活性、抗炎抑菌作用、抑制黑色素的生成等功能活性， 可用于食品、藥品、化妝品、工程樹脂等領(lǐng)域。關(guān)于從紅花籽粕中分離純化苯 丙烯酰5-羥色胺化合物，日本、韓國有了一定的研究，多采用多步硅膠、凝膠 柱層析和高效液相制備色譜進(jìn)行純化，但成本昂貴，僅適合于實(shí)驗(yàn)室樣品的少 量制備；國內(nèi)這方面的研究較少，僅有采用XDA-1樹脂柱純化富集iV-阿魏酰 5-羥色胺和AKp-香豆酰)5-羥色胺的報(bào)道。紅花籽粕中W-阿魏酰5-羥色胺和AKp-香豆酰)5-羥色胺的結(jié)構(gòu)式如下。1:R=0CH.2:R=H1、 iV-阿魏酰5-羥色胺2、 iV- (p-香豆酰)5-羥色胺發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種紅花籽中W-阿魏酰5-羥色胺和iV-(p-香豆酰)5-羥 色胺的富集純化方法，采用D818弱堿性陰離子交換柱層析分離純化紅花籽中 W-阿魏酰5-羥色胺和AK^-香豆酰)5-羥色胺屬于開創(chuàng)性研究。本發(fā)明的技術(shù)方案 一種紅花籽中苯丙烯酰5-羥色胺化合物的富集純化方 法，以含有7V-阿魏酰5-羥色胺和iV-(p-香豆酰)5-羥色胺的紅花籽粕乙醇提取物為 原料，采用D818弱堿性大孔陰離子交換樹脂柱層析，上樣液的pH值為8-9，3上樣流速為1.5mL/min，上樣液中的7V-阿魏酰5-羥色胺濃度為30-50 (ig/mL和 AKp-香豆酰)5-羥色胺的濃度為25-4(Hig/mL，通過樹脂柱吸附后，用pH8-9、 1.5 倍柱體積的堿液淋洗樹脂柱后，再用調(diào)節(jié)pH3.2、 3倍柱體積的80%乙醇進(jìn)行洗 脫，流速為lmL/min，收集乙醇洗脫流出液，再進(jìn)行減壓蒸發(fā)除去乙醇，留下 的浸膏中iV-阿魏酰5-羥色胺和7V-(p-香豆酰)5-羥色胺得以純化富集。采用靜態(tài)吸附與解吸方法，選取合適的陰離子交換樹脂，在此基礎(chǔ)上，采 用柱層析法，分離純化富集7V-阿魏酰5-羥色胺和7V-(p-香豆酰)5-羥色胺。一、 弱堿性陰離子交換樹脂的選取大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂為多胺基弱堿性離子交換樹脂，具有 交換容量大，體積變化小，機(jī)械強(qiáng)度高，化學(xué)穩(wěn)定性好，抗污染，抗氧化性能 優(yōu)越，交換速度快等特點(diǎn)。對(duì)D818和D815兩種大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交 換樹脂進(jìn)行靜態(tài)吸附試驗(yàn)，結(jié)果表明D818對(duì)7V-阿魏酰5-羥色胺和7V-(^-香豆 酰)5-羥色胺有較高的吸附率和解吸率。因而選擇D818大孔弱堿性丙烯酸系陰離 子交換樹脂作為填料，利用柱層析法純化富集7V-阿魏酰5-羥色胺和7V-(p-香豆 酰)5-羥色胺。二、 pH對(duì)吸附效果的影響7V-阿魏酰5-羥色胺和AKp-香豆酰)5-羥色胺的結(jié)構(gòu)中具有酚羥基，雖從結(jié)構(gòu) 上看屬于生物堿，但實(shí)際上呈弱酸性，在堿性條件下，7V-阿魏酰5-羥色胺和7V-(/7-香豆酰)5-羥色胺主要以負(fù)離子形式存在，在陰離子交換樹脂上被吸附。在進(jìn)行 陰離子交換樹脂吸附時(shí)，分別用稀酸、稀堿將原料液的pH值分別調(diào)至6.2、 6.9、 8.0、 8.6禾n 9.1，過濾后將濾液加入到D818樹脂中，進(jìn)行靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。結(jié)果 顯示在上樣液pH值為8-9時(shí)，樹脂對(duì)iV-阿魏酰5-羥色胺和7V-(p-香豆酰)5-羥色 胺的吸附量較大，因此選擇pH值為8-9。三、 上樣液濃度對(duì)吸附效果的影響對(duì)于離子交換柱采用低濃度范圍內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將浸提液中的iV-阿魏酰5-羥 色胺和A4p-香豆酰)5-羥色胺配制成不同濃度的上樣液，pH值均為9.1，進(jìn)行 D818樹脂層析柱的動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。上樣液中iV-阿魏酰5-羥色胺的濃度分別為 25、 30、 35、 40、 50、 60pg/mL，對(duì)應(yīng)的AKP-香豆酰)5-羥色胺的濃度分別為20、 25、 29、 33、 40、 49pg/mL。結(jié)果表明，低濃度范圍內(nèi)樹脂吸附率相差不大，但 是上樣液濃度增大，出現(xiàn)層析柱泄漏早，樣品的處理量小的情況；上樣液濃度 太小會(huì)延長上樣時(shí)間，降低工作效率。綜合上述因素，選取7V-阿魏酰5-羥色胺 (FS)和AKp-香豆酰)5-羥色胺(CS)的濃度分別以30-50 (ig/mL、 25-40(ig/mL 為宜。四、 上樣液流速對(duì)吸附效果的影響吸附流速影響到溶質(zhì)向樹脂表面的擴(kuò)散，從而決定了吸附效果。為了進(jìn)行有效的交換，離子交換過程中必須使固液兩相有充分的接觸時(shí)間，如果流速太 快，溶質(zhì)分子來不及擴(kuò)散到樹脂內(nèi)表面，就會(huì)發(fā)生泄漏，造成樣品的流失；但 上柱流速過慢，導(dǎo)致操作時(shí)間成本增加。取iV-阿魏酰5-羥色胺和7V-(p-香豆酰)5-羥色胺濃度分別為38.64和32.2(^g/mL 的上樣液，分別取流速為0.6、 1.0、 1.5、 2.5和4.0mL/min通過柱體積為30mL的 D818樹脂柱，收集流出液。結(jié)果表明在流速0.6-1.5mL/min之間泄漏率變化不大， 且流速越小泄漏率也小，流速在2.5mL/min以上后導(dǎo)致穿透點(diǎn)提前，會(huì)使樹脂的 穿透交換容量降低，從而降低離子交換柱的柱效率。此時(shí)由于隨流速增加，液 膜阻力降低，AT-阿魏酰5-羥色胺和iV-(p-香豆酰)5-羥色胺未能充分進(jìn)行膜擴(kuò)散和 內(nèi)擴(kuò)散實(shí)現(xiàn)交換就流出樹脂床層?？紤]到吸附時(shí)間和泄漏率，最終選取吸附流 速為1.5ml/min。五、洗脫流速的選擇陰離子交換樹脂在堿性條件下吸附后一般用酸液或者酸性醇溶液進(jìn)行洗 脫，本實(shí)驗(yàn)選用乙醇酸液作為洗脫劑。取AT-阿魏酰5-羥色胺和iy-(p-香豆酰)5-羥色胺濃度分別為38.64和32.20|ig/mL的上樣液，以1.5mL/min的流速通過柱 體積為30mL的D818樹脂柱吸附后，先用pH8-9堿液淋洗1.5BV后，再用3BV 的pH3.2的80%乙醇解吸，分別調(diào)節(jié)解吸流速為0.6、 1.0、 1.5、 2.0和3.0mL/min， 測定洗脫液中7V-阿魏酰5-羥色胺和AKp-香豆酰)5-羥色胺的含量，計(jì)算解吸率。結(jié)果表明，在洗脫流速大于2mL/min時(shí)，解吸率下降。這是由于流速太快， 接觸時(shí)間短，未能充分解吸，這樣會(huì)增加洗脫劑用量，從而增加了操作成本； 流速太慢，雖然解吸效果好，但操作周期加長，增加了操作時(shí)間成本。所以最 終選擇洗脫速率為1 .OmL/min。本發(fā)明的有益效果采用靜態(tài)吸附與解吸方法，選取合適的陰離子交換樹 脂，在此基礎(chǔ)上，采用柱層析法，分離純化富集V-阿魏酰5-羥色胺和iV-(p-香豆 酰)5-羥色胺。本發(fā)明采用陰離子交換樹脂柱層析法純化富集iV-阿魏酰5-羥色胺 和7V-(p-香豆酰)5-羥色胺，屬于開創(chuàng)性研究。采用D818樹脂柱層析法純化富集AT-阿魏酰5-羥色胺和iV-(p-香豆酰)5-羥色 胺，收集乙醇洗脫流出液，再進(jìn)行減壓蒸發(fā)除去乙醇，留下的浸膏中7V-阿魏酰 5-羥色胺和AK^-香豆酰)5-羥色胺得以純化富集，可以實(shí)現(xiàn)兩者的含量從粗提物 中的3.82%、 2.58%提高到23.6%、 19.4%，分別是粗提物中的6.2和7.5倍，該 富集方法易擴(kuò)大規(guī)模，大量富集AA-阿魏酰5-羥色胺和AKp-香豆酰)5-羥色胺。本發(fā)明對(duì)紅花籽等植物的綜合利用具有重要的實(shí)際意義，同時(shí)也為iV-阿魏 酰5-羥色胺和iV-(p-香豆酰)5-羥色胺的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。
具體實(shí)施方式
取30g常規(guī)預(yù)處理后的D818樹脂濕法裝柱(O20x300 mm)，用pH 8.5堿液平衡，取7V-阿魏酰5-羥色胺和iV-(p-香豆酰)5-羥色胺濃度分別為38.64和 32.20嗎/mL的樣液，控制流速1.5mL/min，吸附上樣1000mL，先用pH 8.5堿液 洗滌柱床1.5BV,再用pH 3.2的80%乙醇在流速lmL/min下進(jìn)行洗脫，收集流 出液，減壓蒸餾，得到富含7V-阿魏酰5-羥色胺和AKp-香豆酰)5-羥色胺的浸膏。 分析表明，W-阿魏酰5-羥色胺和AK^-香豆酰)5-羥色胺洗脫率分別為86.3%、 87.8%，兩者在浸膏中的含量分別為23.6%、 19.4%，分別是粗提物中的6.2和 7.5倍。
權(quán)利要求
1、一種紅花籽中苯丙烯酰5-羥色胺化合物的富集純化方法，其特征是以含有N-阿魏酰5-羥色胺和N-(-香豆酰)5-羥色胺的紅花籽粕乙醇提取物為原料，采用D818弱堿性大孔陰離子交換樹脂柱層析，上樣液的pH值為8-9，上樣流速為1.5mL/min，上樣液中的N-阿魏酰5-羥色胺濃度為30-50μg/mL和N-(p-香豆酰)5-羥色胺的濃度為25-40μg/mL，通過樹脂柱吸附后，用pH8-9、1.5倍柱體積的堿液淋洗樹脂柱后，再用調(diào)節(jié)pH3.2、3倍柱體積的80％乙醇進(jìn)行洗脫，流速為1mL/min，收集乙醇洗脫流出液，再進(jìn)行減壓蒸發(fā)除去乙醇，留下的浸膏中N-阿魏酰5-羥色胺和N-(p-香豆酰)5-羥色胺得以純化富集。
全文摘要
一種紅花籽中苯丙烯酰5-羥色胺化合物的富集純化方法，屬于紅花籽的綜合開發(fā)利用技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以含有N-阿魏酰5-羥色胺和N-(p-香豆酰)5-羥色胺的紅花籽粕乙醇提取物為原料，采用靜態(tài)吸附與解吸方法選取合適的陰離子交換樹脂，在此基礎(chǔ)上，采用D818樹脂柱層析法富集純化N-阿魏酰5-羥色胺和N-(p-香豆酰)5-羥色胺，浸膏中其含量分別從粗提物中的3.82％、2.58％提高到23.6％、19.4％，分別是粗提物中的6.2和7.5倍。本發(fā)明采用D818離子交換層析富集純化紅花籽粕中N-阿魏酰5-羥色胺和N-(p-香豆酰)5-羥色胺，方法簡便合理，易于工業(yè)化，為N-阿魏酰5-羥色胺和N-(p-香豆酰)5-羥色胺的進(jìn)一步純化奠定了基礎(chǔ)，有利于紅花籽的綜合利用。
文檔編號(hào)C07D209/00GK101323585SQ200810123250
公開日2008年12月17日 申請(qǐng)日期2008年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月12日
發(fā)明者劉元法, 良 單, 易曉霆, 王興國, 金青哲 申請(qǐng)人:江南大學(xué)