專利名稱：一種高含量的異殺鼠酮的柱層析制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及化學工程技術領域，尤其涉及一種高含量的異殺鼠酮的柱層析 制備方法。
背景技術：
異殺鼠酮(2-特戊?！?，3-茚二酮，Valone，分子式C14H1403，分子量: 230.26)是一種新穎的茚滿二酮類抗凝血類鼠藥，由合成而得的異殺鼠酮粗產(chǎn) 品一般只含有異殺鼠酮65.0~95.0%，需要進一步純化分離才能獲得含量較高的 異殺鼠酮，由于原料中殺鼠酮和異殺鼠酮這對位置異構體化學性質相似， 一般 情況下較難分離，僅靠重結晶方法難以生產(chǎn)出高純度的異殺鼠酮產(chǎn)品，無法滿 足藥理研究和質量控制對高含量異殺鼠酮的需求。目前，國內尚無高含量的異 殺鼠酮(純度>99.0%)生產(chǎn)。異殺鼠酮的化學結構式為
O

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種高含量的異殺鼠酮的柱 層析制備方法，本發(fā)明通過優(yōu)選吸附劑，不需要對原料進行任何處理，直接進 行層析分離，就能夠去除包括位置異構體在內的各種雜質。
本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是 一種高含量的異殺鼠酮的柱
層析制備方法，包括以下步驟
1)將異殺鼠酮的工業(yè)粗產(chǎn)品，用體積比為50:50 99:1的低級酯和低級醇 混合溶劑溶解后，通入裝填有吸附劑的層析柱中，溫度為20~80°0 ，流速控制在0.5~5倍柱床體積/小時；
2) 用1 6倍柱床體積的低級醇，在20-80 。C溫度范圍內，以在0.5 5倍
柱床體積/小時的流速洗脫雜質；
3) 用1 6倍柱床體積的體積比為60:40 80:20的低級酯和低級醇混合溶液，
在20~80°C溫度范圍內，以0.5~5倍柱床體積/小時的流速洗脫雜質；
4) 用1 6倍柱床體積的體積比為80:20-99:1的低級酯和低級醇混合溶液， 在20 8(TC溫度范圍內，以0.5 5倍柱床體積/小時的流速沖洗吸附柱，將得到 的洗脫液旋轉蒸發(fā)或者烘干，得高含量的異殺鼠酮。
進一步地，所述低級酯為乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酯丁酯；所述低級醇為 甲醇、乙醇或異丙醇；所述吸附劑為硅膠，其目數(shù)為60 100目、100~160目、 160~200目和200 300目中的一種。
本發(fā)明具有的有益的效果是本發(fā)明不需對原料進行任何的預處理，直接 用層析分離方法進行分離純化，所得產(chǎn)品含量高(異殺鼠酮含量>99.0%)，收 率高，純度高，易于產(chǎn)業(yè)化。


圖1為異殺鼠酮和殺鼠酮的標準溶液液相色譜圖；流動相為甲醇/醋酸銨-醋酸緩沖液(5 mmol/L, pH=5.5) =(70:30, v/v)的HPLC圖；圖中，1號峰為殺 鼠酮的色譜峰，2號峰為異殺鼠酮的色譜峰，殺鼠酮的色譜峰在6.2min左右， 異殺鼠酮的色譜峰在7.0 min左右。
圖2為由實施例2得到的異殺鼠酮產(chǎn)品的液相色譜圖；流動相為甲醇/醋酸 銨-醋酸緩沖液(5 mmol/L, pH=5.5) =(70:30， v/v)的HPLC圖；圖中，1號峰為 異殺鼠酮的色譜峰，其保留時間在7.0min左右。
圖3為由實施例2得到的異殺鼠酮產(chǎn)品的甲醇溶液(1.0 mg/L)以直接進 樣方式獲得的一級質譜圖。.
圖4為由實施例2得到的異殺鼠酮產(chǎn)品的甲醇溶液(1.0 mg/L)以直接進 樣方式獲得準分子離子m/z 229后，然后以m/z 229為母離子進行碎裂的二級 質譜圖。
具體實施例方式
本發(fā)明以工業(yè)合成生產(chǎn)的異殺鼠酮粗產(chǎn)品為原料制備高含量的異殺鼠酮， 其中粗產(chǎn)品中異殺鼠酮的含量為65.0~95.0%，通過裝填有60 300目硅膠的吸附柱進行層析分離，采用體積比為60:40 99:1的低級酯和低級醇混合溶劑進行 淋洗和洗脫，分段收集，合并含量大于98.0%的收集液，干燥后，直接得到含 量>99.0 %的高含量異殺鼠酮；
本發(fā)明高含量的異殺鼠酮的柱層析制備方法，包括以下步驟
1) 將異殺鼠酮的工業(yè)粗產(chǎn)品，用體積比為50:50 99:1的低級酯和低級醇 混合溶劑溶解后，通入裝填有吸附劑的層析柱中，溫度為20 80'C ，流速控制 在0.5~5倍柱床體積/小時；
2) 用1 6倍柱床體積的低級醇，在20 80。C溫度范圍內，以在0.5 5倍 柱床體積/小時的流速洗脫雜質；
3) 用1 6倍柱床體積的體積比為60:40~80:20的低級酯和低級醇混合溶液， 在20 80'C溫度范圍內，以0.5 5倍柱床體積/小時的流速洗脫雜質；
4) 用1~6倍柱床體積的體積比為80:20~99:1的低級酯和低級醇混合溶液， 在20~80°C溫度范圍內，以0.5~5倍柱床體積/小時的流速沖洗吸附柱，將得到 的洗脫液旋轉蒸發(fā)或者烘干，得高含量的異殺鼠酮。
所述的低級酯為乙酸乙酯、乙酸丙酯和乙酯丁酯中的一種；所述的低級醇 為甲醇、乙醇和異丙醇中的一種；所述的吸附劑為硅膠，其目數(shù)為60 100目、 100-160目、160~200目和200~300目中的一種。
以下實施例用于進一步理解本發(fā)明，但不限于本實施的范圍。 實施例1
層析柱尺寸巾28 x 500 mm。內裝60-100目的硅膠約80 g。異殺鼠酮原 料用乙酸丙酯/甲醇(60:40， v/v)溶解，其濃度為10.0 mg/mL，上樣體積為1000 mL，上樣及洗脫溫度均為80'C。先用360 mL甲醇淋洗，再用1200 mL的乙 酸丙酯/甲斷80:20， v/v)淋洗層析柱；最后用800 mL乙酸丙酯/甲醇(95:5， v/v) 洗脫，流速為8.0 mL/min，收集層析柱洗脫液，分段收集流份，進行紫外在線 監(jiān)測，合并收集含量為99%以上的洗脫液，真空干燥后得異殺鼠酮產(chǎn)品8.31g， HPLC分析結果表明，產(chǎn)品中異殺鼠酮含量99.3%,收率83.1%。
實施例2
層析柱尺寸巾28 x 500 mm。內裝160-200目的硅膠約60 g。異殺鼠酮原 料用乙酸丙酯/乙醇(60:40， v/v)溶解，其原料濃度為10.0mg/mL，上樣體積 為1000 mL，上樣及洗脫溫度均為80°C。先用350 mL乙醇淋洗，再用1100 mL 乙酸乙酯/乙醇(80:20， v/v)淋洗層析柱;最后用800 mL乙酸乙酯/乙醇(95:5， v/v) 洗脫，流速為8.0mL/min，收集層析柱洗脫液，分段收集流份，進行紫外在線監(jiān)測，合并收集含量為99。/。以上的洗脫液，真空干燥后得異殺鼠酮產(chǎn)品8.72g， HPLC分析結果表明，產(chǎn)品中異殺鼠酮含量99.1。/。，收率87.2%。
實施例3
層析柱尺寸O20 x400 mm。內裝160-200目的硅膠約40 g。異殺鼠酮原 料用乙酸丁酯/異丙醇(60:40， v/v)溶解，其原料濃度為10.0mg/mL，上樣體 積為1000 mL，上樣及洗脫溫度均為80°〇。先用320 mL異丙醇淋洗，再用1000 mL乙酸丁酯/異丙醇(80:20， v/v)淋洗層析柱；最后用750 mL乙酸丁酯/異丙醇 (95:5， v/v)洗脫，流速為8.0mL/min，收集層析柱洗脫液，分段收集流份，進行 紫外在線監(jiān)測，合并收集含量為99%以上的洗脫液，真空干燥后得異殺鼠酮產(chǎn) 品8.83g， HPLC分析結果表明，產(chǎn)品中異殺鼠酮含量99.5%，收率88.3%。
實施例4
層析柱尺寸O20x400mm。內裝200 300目的硅膠約40g。異殺鼠酮原 料用乙酸丁酯/甲醇(60:40， v/v)溶解，其原料濃度為10.0mg/mL，上樣體積 為1000 mL，上樣及洗脫溫度均為80aC。先用350 mL甲醇淋洗，再用1100 mL 乙酸丁酯/甲醇(80:20， v/v)淋洗層析柱;最后用800 mL乙酸丁酯/甲醇(95:5， v/v) 洗脫，流速為8.0 mL/min，收集層析柱洗脫液，分段收集流份，進行紫外在線 監(jiān)測，合并收集含量為99。/。以上的洗脫液，真空干燥后得異殺鼠酮產(chǎn)品8.76g， HPLC分析結果表明，產(chǎn)品中異殺鼠酮含量99.5%，收率87.6。/0。
上述實施例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明進行限制，在本發(fā)明的 精神和權利要求的保護范圍內，對本發(fā)明作出的任何修改和改變，都落入本發(fā) 明的保護范圍。
權利要求
1. 一種高含量的異殺鼠酮的柱層析制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)將異殺鼠酮的工業(yè)粗產(chǎn)品，用體積比為50:50～99:1的低級酯和低級醇混合溶劑溶解后，通入裝填有吸附劑的層析柱中，溫度為20～80℃，流速控制在0.5～5倍柱床體積/小時。2)用1～6倍柱床體積的低級醇，在20～80℃溫度范圍內，以在0.5～5倍柱床體積/小時的流速洗脫雜質。3)用1～6倍柱床體積的體積比為60:40～80:20的低級酯和低級醇混合溶液，在20～80℃溫度范圍內，以0.5～5倍柱床體積/小時的流速洗脫雜質。4)用1～6倍柱床體積的體積比為80:20～99:1的低級酯和低級醇混合溶液，在20～80℃溫度范圍內，以0.5～5倍柱床體積/小時的流速沖洗吸附柱，將得到的洗脫液旋轉蒸發(fā)或者烘干，得高含量的異殺鼠酮。
2. 根據(jù)權利要求1所述的柱層析制備方法，其特征在于，所述低級酯為乙酸乙酯、 乙酸丙酯或乙酯丁酯。
3. 根據(jù)權利要求1所述的柱層析制備方法，其特征在于，所述低級醇為甲醇、乙 醇或異丙醇。
4. 根據(jù)權利要求1所述的柱層析制備方法，其特征在于，所述吸附劑為硅膠，其 目數(shù)為60 100目、1Q0 160目、160~200目和200~300目中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高含量的異殺鼠酮的柱層析制備方法。以異殺鼠酮的工業(yè)粗產(chǎn)品為原料制備高含量的異殺鼠酮，粗產(chǎn)品中異殺鼠酮的含量為65.0～95.0％，經(jīng)溶解、柱層析、濃縮和干燥后得到含量大于99.0％的異殺鼠酮。本發(fā)明的方法工藝流程簡單、生產(chǎn)成本低，易于產(chǎn)業(yè)化。采用本發(fā)明方法制備的產(chǎn)品純度高、收率高。
文檔編號C07C45/00GK101434526SQ200810163440
公開日2009年5月20日 申請日期2008年12月22日 優(yōu)先權日2008年12月22日
發(fā)明者金米聰, 陳曉紅 申請人:寧波市疾病預防控制中心